CN105326876A - 一种菊花总黄酮的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及菊花有效成分的提取方法，具体涉及一种菊花总黄酮的提取方法，本发明以杭白菊为原料，经过干燥，粉碎，酶法-超声波首先提取，蒸馏水再次提取，浓缩两次提取液，接着石油醚中超声波萃取，最后柱层析分离，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。本发明菊花总黄酮的提取方法溶剂可回收利用，操作简单，成本低廉，本发明提取物总黄酮提取物得率≥43%，总黄酮纯度达≥82%，总黄酮提取物得率高，总黄酮纯度高，总黄酮提取物对DPPH·清除能力强，总黄酮抗氧化活性高。
Description
技术领域
本发明涉及菊花有效成分的提取方法，具体涉及一种菊花总黄酮的提取方法。
背景技术
菊花是菊科多年生草本植物的头状花序，多为茶用，也可用于药品或食品添加剂，菊花主要含黄酮类、绿原酸、挥发油等化合物，含量最多、最主要的生物活性成分是黄酮类化合物，它是以2-苯基色原酮为基本成分的衍生物的总称。从菊花中分离出的黄酮类化合物包括木樨草素、洋芹素、槲皮素、橙皮素、杨梅黄素等。毒性试验表明，菊花及其提取物安全无毒，黄酮化合物具有广泛的生物活性和药理作用，比如抗氧化、抗衰老、防癌、降血脂、降胆固醇、保护心脑血管及镇痛、调节免疫等作用。
现有的提取方法主要有：溶剂萃取法、离子沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体萃取法、超声波浸提法、微波浸提法、酶解法等。中国专利CN101167775B公开了一种菊花总黄酮提取方法，该方法是将菊花经乙醇提取后，以大孔树脂吸附法将提取液经上柱、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，获得菊花总黄酮。该发明涉及的菊花总黄酮提取方法是一种操作简便、快捷的方法。所选用的大孔树脂具有吸附量大，解吸率大的特点。中国专利CN103479704A公开了一种超声提取菊花总黄酮的方法，属于植物有效成分提取技术领域。本方法将菊花粉碎后过20目筛，加入石油醚混合均匀，充分脱色后经滤纸过滤，取滤渣挥干备用；准确称取预处理好的材料，按料液比(g/mL)1∶10-30加入40-70％的乙醇溶液，充分摇匀后浸泡1小时，在温度20-50℃下，超声频率40KHz提取20-35min，得菊花总黄酮提取物，应用于制备抗炎药物。但是，这些方法均存在耗时长、有效成分提取率低、操作复杂的缺陷，而且目标提取物总黄酮的纯度低，抗氧化活性不高，不适合推广应用。
发明内容
为克服上述缺陷，本发明的目的在于提供一种菊花总黄酮的提取方法，总黄酮提取率高，得到的总黄酮提取物抗氧化活性高。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末40～60g，加入杭白菊粉末重量的0.2%～0.5%的纤维素酶和0.1%～0.3%的果胶酶，500～1000mL40%～75%乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡20～30min，接着超声提取2～3次，每次10～30min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入400～600mL蒸馏水，加热回流2～4次，每次2～4h，过滤，浓缩至200～300mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入300～500mL石油醚，超声波萃取2～3次，每次30～50min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用柱层析分离，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
根据上述的菊花总黄酮的提取方法，步骤（1）所述的杭白菊粉末粒度为20～50目。
根据上述的菊花总黄酮的提取方法，步骤（2）所述的乙醇溶液为70%乙醇。
根据上述的菊花总黄酮的提取方法，步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
根据上述的菊花总黄酮的提取方法，步骤（4）所述的柱层析分离条件为：D101大孔吸附树脂，洗脱剂为体积浓度为70%的乙醇。
本发明的积极有益效果：
1.黄酮类化合物是胞内物质，菊花用纤维素酶和果胶酶处理后，细胞壁的水解破裂，有利于细胞内物质的溶出；而超声波是一种增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出次数，缩短提取时间，超声波提取避免了高温加热对有效成分的破坏，使成分从细胞中溶出，以增加菊花中有效成分在溶剂中的溶解，而且超声波提取速度快、时间短、收率高、无需加热；
本发明把酶法和超声波提取两种技术联用，优势互补，而且乙醇和蒸馏水两步提取，大大地提高了菊花总黄酮的提取率。本发明进一步在石油醚中超声萃取有机小分子化合物，有利于小极性化合物充分溶出，提高了总黄酮提取物中总黄酮的纯度。
2.本发明菊花总黄酮的提取方法溶剂可回收利用，操作简单，成本低廉，本发明提取物总黄酮提取物得率≥43%，总黄酮纯度达≥82%，总黄酮提取物得率高，总黄酮纯度高，总黄酮提取物对DPPH·清除能力强，总黄酮抗氧化活性高。
具体实施方式
下面结合一些具体实施方式，对本发明进一步说明。
实施例1
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎至50目，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末40g，分别加入杭白菊粉末重量的0.2%的纤维素酶和0.1%的果胶酶，500mL体积浓度为50%的乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡20min，超声提取2次，每次15min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入400mL蒸馏水，加热回流2次，每次4h，合并提取液，过滤，浓缩至200mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入300mL石油醚，超声波萃取3次，每次30min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用D101大孔吸附树脂吸附，洗脱剂为体积浓度为70%的乙醇，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
实施例2
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎至40目，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末45g，分别加入杭白菊粉末重量的0.3%的纤维素酶和0.15%的果胶酶，600mL体积浓度为60%的乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡25min，接着超声提取2次，每次30min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入420mL蒸馏水，加热回流2次，每次3h，过滤，浓缩至280mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入350mL石油醚，超声波萃取3次，每次40min，收集萃取相和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用D101大孔吸附树脂吸附，洗脱剂为体积浓度为70%的乙醇，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
实施例3
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎至40目，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末47g，分别加入杭白菊粉末重量的0.3%的纤维素酶和0.1%的果胶酶，550mL体积浓度为65%的乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡30min，接着超声提取2次，每次25min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入450mL蒸馏水，加热回流3次，每次3h，过滤，浓缩至300mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入400mL石油醚，超声波萃取3次，每次50min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用D101大孔吸附树脂吸附，洗脱剂为体积浓度为70%的乙醇，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
实施例4
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎至30目，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末50g，分别加入杭白菊粉末重量的0.25%的纤维素酶和0.16%的果胶酶，500mL体积浓度为70%的乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡30min，接着超声提取3次，每次10min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入500mL蒸馏水，加热回流3次，每次2h，过滤，浓缩至250mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入300mL石油醚，超声波萃取3次，每次30min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用D101大孔吸附树脂吸附，洗脱剂为体积浓度为70%的乙醇，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
实施例5
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎至20目，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末56g，分别加入杭白菊粉末重量的0.4%的纤维素酶、0.2%的果胶酶和0.1%蛋白酶，800mL体积浓度为40%的乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡20min，接着超声提取3次，每次10min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入600mL蒸馏水，加热回流3次，每次4h，过滤，浓缩至300mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入450mL石油醚，超声波萃取2次，每次50min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用D101大孔吸附树脂吸附，洗脱剂为体积浓度为体积浓度为70%的乙醇，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
实施例6
一种菊花总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎至50目，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末60g，分别加入杭白菊粉末重量的0.5%的纤维素酶和0.3%的果胶酶，1000mL体积浓度为75%的乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡25min，接着超声提取3次，每次20min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入550mL蒸馏水，加热回流4次，每次2h，过滤，浓缩至250mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入500mL石油醚，超声波萃取3次，每次30min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用D101大孔吸附树脂吸附，洗脱剂为体积浓度为70%的乙醇，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
称重本发明实施例1～6总黄酮提取物的重量，计算本发明总黄酮得率，结果见表1；采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定本发明实施例1～6总黄酮提取物中总黄酮含量，计算本发明实施例1～6总黄酮纯度，检测结果见表1；进一步测试本发明实施例1～6总黄酮提取物对DPPH·的清除能力实验，检测结果见下表1。
表1本发明实施例1～6提取物总黄酮性能检测结果
由表1可以得知，本发明提取物总黄酮提取物得率≥43%，总黄酮纯度达≥82%，总黄酮提取物得率高，总黄酮纯度高，本发明实施例1～6总黄酮提取物对DPPH·清除能力较对照组VC高，总黄酮抗氧化活性高。
Claims (5)
1.一种菊花总黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）以杭白菊为原料，干燥，粉碎，得到杭白菊粉末；
（2）取步骤（1）杭白菊粉末40～60g，加入杭白菊粉末重量的0.2%～0.5%的纤维素酶和0.1%～0.3%的果胶酶，500～1000mL40%～75%乙醇溶液，调节pH值为4.0～5.5，浸泡20～30min，接着超声提取2～3次，每次10～30min，过滤，浓缩至无醇味，得到提取液和药渣；
（3）在步骤（2）药渣中加入400～600mL蒸馏水，加热回流2～4次，每次2～4h，过滤，浓缩至200～300mL，得到提取液和药渣；
（4）合并步骤（2）和（3）提取液，再加入300～500mL石油醚，超声波萃取2～3次，每次30～50min，收集萃取液和水溶液；
（5）将步骤（4）水溶液采用柱层析分离，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到菊花总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的菊花总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤（1）所述的杭白菊粉末粒度为20～50目。
3.根据权利要求1所述的菊花总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤（2）所述的乙醇溶液为70%乙醇。
4.根据权利要求1所述的菊花总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤（2）或者（4）所述的超声的频率为20~30kHz，功率为300~500W。
5.根据权利要求1所述的菊花总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤（4）所述的柱层析分离条件为：D101大孔吸附树脂，洗脱剂为70%乙醇。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160217 |