CN103735619B - 一种从丹参药材中制备高含量丹酚酸b的丹参浸膏的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从丹参药材中制备高含量丹酚酸B的丹参浸膏的方法：取丹参药材，先加入70℃～100℃的热水，加热回流提取1.5小时～2.5小时，第一次提取的滤渣中再加入的室温的水，加热回流提取2～3次，每次回流提取时间为1.5小时～2.5小时，合并所有的提取液，过滤，得到滤液；滤液于40℃～70℃减压浓缩至1.15～1.35密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏。本发明的有益效果主要体现在：在丹参药材第一次加水提取时加入高温的热水，使得丹参药材中能够水解丹酚酸B的酶得到灭活，能够提取出更多的丹酚酸B的量，充分有效地利用了丹参药材。

Description

一种从丹参药材中制备高含量丹酚酸B的丹参浸膏的方法

（一）技术领域

本发明涉及一种从中药丹参药材中制备高含量丹酚酸B的丹参浸膏的方法。

（二）背景技术

中药丹参具有活血祛瘀、凉血消痈、清心除烦的功效。现代药理研究表明，丹参能扩张冠状动脉、增加血流量、抗心肌缺血、改善微循环、降低心肌耗氧量、改善心功能、降血压、降血脂、抗凝血、抗血栓、抗氧化、保肝等诸多功效。随着对丹参研究的深入，发现丹参中酚酸类成分才是主要的活性成分，而丹酚酸B在丹参酚酸类成分中所占的比例最大。因此最大程度地从丹参药材中提取出丹酚酸B的量才是真正有效地利用了丹参。

从目前公开的文献来看，对于丹参药材一般采用水提取或者一定体积浓度的乙醇水溶液提取，可能采用一定体积浓度的乙醇水溶液提取丹酚酸B的效果优于采用水提取的方法。但对于大生产来说，采用水提取的方法成本更为低廉，且在安全生产方面也比采用乙醇水溶液提取更为安全。对于一些处方中含有丹参的已上市中成药产品来说，大多都是采用水提取的工艺。并且对于目前想要采用经典名方开发成中药六类新药的品种来说，也必须采用水提取的工艺，原因是古代经典名方的原剂型都是汤剂，都是采用加水煎煮的方法。所以采用水提取的方法从丹参药材中提取最大量的丹酚酸B是一个值得探究的课题。

（三）发明内容

申请人在丹参药材炮制成饮片的过程中发现，原丹参药材中丹酚酸B的含量较高，以丹参药材干燥品计含量有7%左右，但炮制成饮片后丹酚酸B的含量只有1%。通过一系列实验以及数据分析后申请人基本得出结论，丹参药材中含有某种酶类物质，在某些温度范围以及有水的条件下会快速水解丹酚酸B。而药材在炮制成饮片的过程中需要加水闷润，所以导致丹酚酸B快速水解，这也是有些文献报道的大多丹参饮片中的丹酚酸B含量偏低的原因。

目前对于丹参药材采用水提取的方法一般加入的水为室温的水，大概在10℃—30℃的范围内。但丹参药材在此温度范围内且有水的条件下一些酶类物质会快速地水解丹酚酸B，特别在车间大生产中，从加入室温的水开始，一直到加热至96℃—100℃，时间较长，至少在1小时以上，因此期间有大量的丹酚酸B被水解。如果第一煎采用加入一定温度的热水，则可以使得能水解丹酚酸B的酶类灭活，最终所提取出的丹酚酸B的量将大于采用第一煎加入室温的水提取的方法。而第二煎或者第三煎则可以采用加入室温的水，因为第一煎在煮沸的过程中那些能水解丹酚酸B的酶类已经全部灭活。

本发明针对丹参采用水提取方法中第一煎加入室温的水这一工艺的缺陷和不足，提供一种更加合理有效的提取工艺，即第一煎加入一定温度的热水来提取丹参。

本发明采用的技术方案是：

一种从丹参药材中制备高含量丹酚酸B的丹参浸膏的方法，所述方法为：取丹参药材，先加入质量为丹参的质量6～10倍的70℃～100℃的热水，加热回流提取1.5小时～2.5小时，分离第一次提取液和第一次提取的滤渣后，第一次提取的滤渣中再加入质量为丹参的质量6～10倍的室温的水，加热回流提取2～3次，每次回流提取时间为1.5小时～2.5小时，合并所有的提取液，过滤，得到滤液；滤液于40℃～70℃减压浓缩至1.15～1.35密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏。

所述方法中，先加入质量为丹参的质量6～10倍的70℃～100℃的热水进行提取，优选加入质量为丹参的质量8倍的80℃～100℃的热水提取，回流提取的时间优选为2小时。

所述方法中，再加入质量为丹参的质量6～10倍的室温的水提取2～3次，优选加入质量为丹参的质量8倍的室温的水提取2次，每次的提取时间优选为1.5小时。

所述方法中，提取时间指的是回流提取的时间，即加热至回流后开始计算，而不包括回流前加热的时间。

所述方法中，滤液优选于50℃～60℃减压浓缩。

进一步，本发明所述方法优选按以下步骤进行：

取丹参药材，先加入质量为丹参的质量8倍的80℃～100℃的热水，加热回流提取2小时，分离第一次提取液和第一次提取的滤渣后，第一次提取的滤渣中再加入质量为丹参的质量8倍的室温的水，加热回流提取2次，每次回流提取时间为1.5小时，合并所有的提取液，过滤，得到滤液；滤液于50℃～60℃减压浓缩至1.15～1.35密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏。

本发明所述方法中，每一次提取后，都需要将回流提取后的混合液过滤，所得滤渣再加水进行下一次提取，所得清液为提取液，最后将所有提取后的提取液合并。这是本领域技术人员公知的提取操作方法。

与目前对丹参药材水提取采用加入室温的水的方法相比，本发明的优势在于第一煎加入高温的热水，使得在丹参药材中能分解丹酚酸B的酶灭活。最终能够提取出更多的丹酚酸B，所得丹参浸膏中丹酚酸B较高，比第一煎加入室温的水提取相比，丹参浸膏中丹酚酸B含量提高了16%。

（四）附图说明

图1为实施例1中丹参药材第一煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图2为实施例1中丹参药材第二煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图3为实施例1中丹参药材第三煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图4为实施例2中丹参药材第一煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B

图5为实施例2中丹参药材第二煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图6为实施例2中丹参药材第三煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图7为实施例3中丹参药材第一煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图8为实施例3中丹参药材第二煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图9为实施例3中丹参药材第三煎水提取液中丹酚酸B的含量色谱图，峰a为丹酚酸B。

图10为丹酚酸B对照品溶液色谱图，峰a为丹酚酸B。

（五）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

丹酚酸B的含量测定方法：高效液相色谱法测定。

仪器名称：安捷伦1100高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱：ZORBAX SB-C18

流动相：5%(v/v)冰乙酸溶液—乙腈（82：18，v/v）

流速：1.0ml/min

检测波长：285nm

柱温：25℃

对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品（111562-201009，含量以96%计算）2.3mg至25ml容量瓶中，加入蒸馏水至刻度，超声溶解，含量以96%计算，得含丹酚酸B88.32ug/ml的对照品溶液。

供试品溶液的制备：取丹参药材水提取液用滤纸过滤，精密吸取滤液1ml至25ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，0.45um微孔滤膜过滤。

对照品溶液和供试品溶液各进样20ul，测定。将供试品溶液和对照品溶液的色谱峰的峰面积进行对比，根据对照品溶液的浓度，计算供试品溶液中丹酚酸B的含量。

实施例1：

取丹参药材50g，加入400g的80℃的水于沸腾的水浴中回流提取1次，提取时间为2小时，再加入400g的室温的水于沸腾水浴中回流提取2次，每次1.5小时。每次提取后，混合液过滤，分别得到滤液跟滤渣，滤液即为每煎的水提取液。分别测定3煎水提取液中的丹酚酸B的含量。其中第一煎水提取液中丹酚酸B的量为1377.54mg，第二煎水提取液中丹酚酸B的量为573.19mg，第三煎水提取液中丹酚酸B的量为194.16mg，三煎水提取液中丹酚酸B共2144.89mg。

实施例2：

取丹参药材50g，加入400g的90℃的水于沸腾的水浴中回流提取1次，提取时间为2小时，再加入400g的室温的水于沸腾水浴中回流提取2次，每次1.5小时。分别测定3煎水提取液中的丹酚酸B的含量。其中第一煎水提取液中丹酚酸B的量为1372.00mg，第二煎水提取液中丹酚酸B的量为603.16mg，第三煎水提取液中丹酚酸B的量为170.10mg，三煎水提取液中丹酚酸B共2145.26mg。

实施例3：

取丹参药材50g，加入400g的100℃的水于沸腾的水浴中回流提取1次，提取时间为2小时，再加入400g的室温的水于沸腾水浴中回流提取2次，每次1.5小时。分别测定3煎水提取液中的丹酚酸B的含量。其中第一煎水提取液中丹酚酸B的量为1449.68mg，第二煎水提取液中丹酚酸B的量为524.13mg，第三煎水提取液中丹酚酸B的量为196.06mg，三煎水提取液中丹酚酸B共2169.87mg。将三煎水的提取液合并，过滤，滤液于55℃减压浓缩至1.15密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏100ml。以丹参药材干燥品计，丹酚酸B的含量为4.90%。

对比例1：

取丹参药材50g，加入400g的20℃的水于沸腾的水浴中回流提取1次，提取时间为2小时，再加入400g的室温的水于沸腾水浴中回流提取2次，每次1.5小时。分别测定3煎水提取液中的丹酚酸B的含量。其中第一煎水提取液中丹酚酸B的量为1187.26mg，第二煎水提取液中丹酚酸B的量为529.80mg，第三煎水提取液中丹酚酸B的量为158.65mg，三煎水提取液中丹酚酸B共1875.72mg。将三煎水的提取液合并，过滤，滤液于55℃减压浓缩至1.15密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏100ml，以丹参药材干燥品计，丹酚酸B的含量为4.24%。

对比例2

称取丹参药材50g于圆底烧瓶中，分别加入400ml不同温度的水，水温分别为100℃、90℃、80℃、70℃、60℃、50℃、40℃、30℃、20℃，于沸腾水浴中回流提取2小时，得第一煎药液。第二煎和第三煎分别加入400ml室温的水，于沸腾水浴回流提取1.5小时。分别计算三煎提取液中丹酚酸B的量。结果见下表1：

表1

由此可见，丹参药材在第一煎加入80℃—100℃的热水提取时提取的效果最佳，得到的丹酚酸B的量最多。

对比例2

将丹参药材粉碎，取0.2g丹参药材粉末，加50ml蒸馏水用不同温度的水超声提取20分钟，用高效液相法提取液中测定丹酚酸B的含量，进样前采用常规的0.45um的滤膜过滤。并将提取液连续进样，考察稳定性。结果见下表2：

表2

由此可见加入的水温越高，所超声提取得到的丹酚酸B的含量越高，而且更稳定。而加入较低温度的水超声提取所得的丹酚酸B不仅含量低，而且会随时间延长而不断下降。申请人基本可以判定影响丹酚酸B含量的应该是某些酶类物质，高温会使这些酶类灭活，而低温条件下这些酶类物质在有水的条件下会不断水解丹酚酸B。

上批实验供试品在进样测定之前采用常规的0.45um的滤膜过滤，之后申请人在进样前采用能过滤一部分微生物的0.22um的滤膜过滤，所得供试品中按照上面同样实验方法进行测试，丹酚酸B的含量以及稳定性如下表3：

表3

由此可见采用0.22um滤膜过滤的供试品中丹酚酸B的含量比采用0.45um过滤的供试品要高，而且更具备稳定性，虽有下降，但下降幅度不大，说明采用0.22um滤膜过滤的供试品溶液中的能分解丹酚酸B的酶类物质较少。

以上的实验以及数据基本可以证实我们的结论：丹参药材中含有某种酶类物质，在某些温度范围以及有水的条件下会快速水解丹酚酸B。

进一步申请人进行相关的实验，丹参药材加入8倍量水浸泡，水温分别采用20℃、30℃、40℃、50℃、60℃，放置于同样水温的水浴锅内，放置时间为5小时，不同时间段取样测定丹酚酸B的含量，均有不同程度的下降，某些温度条件下丹酚酸B几乎完全被水解。

Claims (4)

1.一种从丹参药材中制备高含量丹酚酸B的丹参浸膏的方法，其特征在于所述方法为：取丹参药材，先加入质量为丹参的质量6～10倍的70℃～100℃的热水，加热回流提取1.5小时～2.5小时，分离第一次提取液和第一次提取的滤渣后，第一次提取的滤渣中再加入质量为丹参的质量6～10倍的室温的水，加热回流提取2～3次，每次回流提取时间为1.5小时～2.5小时，合并所有的提取液，过滤，得到滤液；滤液于40℃～70℃减压浓缩至1.15～1.35密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述丹参药材先加入质量为丹参的质量8倍的80℃～100℃的热水提取，回流提取的时间为2小时；再加入质量为丹参的质量8倍的室温的水提取2次，每次的提取时间为1.5小时。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述滤液于50℃～60℃减压浓缩至1.15～1.35密度。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法按以下步骤进行：

取丹参药材，先加入质量为丹参的质量8倍的80℃～100℃的热水，加热回流提取2小时，分离第一次提取液和第一次提取的滤渣后，第一次提取的滤渣中再加入质量为丹参的质量8倍的室温的水，加热回流提取2次，每次回流提取时间为1.5小时，合并所有的提取液，过滤，得到滤液；滤液于50℃～60℃减压浓缩至1.15～1.35密度，制得高含量丹酚酸B的丹参浸膏。