CN105380997A - 一种女贞子的炮制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种女贞子的炮制方法，步骤如下：取女贞子生药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，干燥，即得。本发明还提供了所述炮制方法制备的女贞子炮制品。采用本发明方法能有效缩短药材的炮制时间，增加经济效益并提高企业生产效率；通过本发明方法炮制所得的药材含量稳定，质量优良。

Description

一种女贞子的炮制方法
技术领域
本发明涉及一种女贞子的炮制方法。
背景技术
中药炮制是中医药的重要组成部分，是中医临床用药的一大特色，是提高临床疗效的重要环节。中药必须经过炮制之后才能入药，这是中医药与其他医疗体系的显著区别。中药饮片质量与临床疗效息息相关，而炮制工艺决定了中药饮片质量。
女贞子系木樨科植物女贞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果实。始载于《神农本草经》，列为上品。其性味甘、苦、凉，具有滋补肝肾、明目乌发作用。传统认为，生女贞子长于清肝明目，滋阴润燥。多用于肝热目赤，阴虚肠燥便秘。女贞子古今文献记载多以炮制品入药。最早的炮制方法始见于宋·《疮疡》的“饭上蒸”，女贞子的传统炮制方法包括蒸制、酒制、药汁制及焙制、盐制。
九制女贞子采用的是传统的蒸制方法，经黑豆汁九蒸九晒后所得。历代医药学家认为女贞子经黑豆汁制后可缓和其寒性，治痘后病目，兼治血热病目，黑豆活血解毒，可稀痘疮，二味合制，相得益彰。由于目前对黑豆汁制女贞子的炮制方法仅有简单的方法介绍，工艺参数不够完整，无法指导实际生产，加之采用传统蒸制方法工艺繁琐，费时费力，生产周期长，消耗燃料多，并且在蒸制过程中药汁易流失，损失药效，造成了市场上该产品极度匮乏，处于濒临灭绝的境地。
因此，为了使古人的炮制工艺得到更好的传承与发展，同时满足市场需求，对九制女贞子炮制工艺进行改进，寻找一种生产工艺简便，省时省力，成本低，效率高的女贞子炮制工艺具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种女贞子的炮制方法。
本发明提供了一种女贞子的炮制方法，步骤如下：取女贞子生药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，干燥；其中高压蒸制的温度为110-120℃，时间为1-3h，次数为1-3次。
优选地，所述高压蒸制的温度为110℃，蒸制时间为1h，蒸制次数为1次。
本发明还提供了所述的炮制方法制备得到的女贞子炮制品。
其中，所述女贞子炮制品中多糖的质量百分含量不低于1.95％，特女贞苷的质量百分含量不低于1.03％。
本发明在对女贞子的炮制历史沿革及现代文献研究，以及九制女贞子常压蒸制工艺研究的基础上，为缩短炮制时间，节省人力物力资源，完善质量控制方法和标准，提高炮制品质量，引入高压蒸制取代传统蒸制，以浸出物、多糖、特女贞苷为内在评判指标，优选高压蒸制温度、时间以及次数，为规范女贞子饮片的生产加工提供参考，为研究和制定中药女贞子质量标准提供理论依据。
本发明通过高压蒸制的方法代替传统的九蒸九晒繁琐工艺，制成一种可直接泡服的女贞子饮片，使古人的炮制工艺得到更好的传承与发展，同时满足临床治疗和日常保健的需要，具有广阔的市场前景。
附图说明
图1葡萄糖吸收曲线。
图2特女贞苷对照品标准曲线。
图3特女贞苷对照品图谱。
图4女贞子药材样品HPLC图；
图中，S12：特女贞苷对照品溶液，S1～S11：阴性对照、生女贞子、一制至九制女贞子样品。
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领域技术人员根据本发明作出的各种改变和替换，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
具体实施方式
实施例1本发明高压蒸制女贞子的制备
取女贞子药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，温度为110℃，蒸制时间为1h，蒸制次数为1次，干燥，即得本发明女贞子炮制品。
实施例2本发明高压蒸制女贞子的制备
取女贞子药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，温度为110℃，蒸制时间为3h，蒸制次数为2次，干燥，即得本发明女贞子炮制品。
实施例3本发明高压蒸制女贞子的制备
取女贞子药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，温度为120℃，蒸制时间为1h，蒸制次数为3次，干燥，即得本发明女贞子炮制品。
实施例4本发明高压蒸制女贞子的制备
取女贞子药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，温度为115℃，蒸制时间为2h，蒸制次数为1次，干燥，即得本发明女贞子炮制品。
以下通过具体实验证明本发明的有益效果。
实验例1本发明高压蒸制女贞子和传统九制女贞子炮制工艺的对比
1传统九制女贞子炮制工艺的研究
1.1仪器、试药
1.1.1仪器
UV-1100紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；BP211D电子天平(感量0.01mg，德国Sartorius公司)，BS200S电子天平(感量0.001g，德国Sartorius公司)；正德牌远红外可控温电炉(功率45～2000W)；蒸锅。
1.1.2试剂与试药
D-无水葡萄糖(批号：MUST-14072601，纯度>98％)、特女贞苷(批号：MUST-14040402，纯度>98％)，购自成都曼斯特生物科技有限公司。女贞子药材样品购自成都药材市场，经成都中医药大学胡昌江教授鉴定为木樨科植物女贞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果实。
1.2九制女贞子的工艺研究
1.2.1工艺设计
参考黑豆汁制女贞子的传统制备方法：取原药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，放笼屉内，先用武火加热，待圆气后改用文火，蒸数小时后取出摊晾至外皮微干(蒸制过程注意收集药汁)，再将原汁拌入，混匀，吸尽，再蒸再晒，如此反复九次蒸至色泽黑润时，取出，摊晾至外皮微干，再将原汁拌入，吸尽，干燥。在每蒸晒一次的过程中都留下一份样品，分别定名为一制女贞子、二制女贞子、……、九制女贞子。
1.2.2浸出物测定
按《中国药典》2010年版一部测定法(附录ⅩA)项下的热浸法，对水溶性和醇溶性浸出物进行测定。(结果见表6)
1.2.3多糖的含量测定
1.2.3.1对照品溶液的制备
取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.05060g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水葡萄糖0.5060mg)。精密量取葡萄糖标准溶液1mL、5mL、10mL、15mL、20mL，分别置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度(每1mL中分别含无水葡萄糖5.06μg，25.3μg，50.6μg，75.9μg，101.2μg)。
1.2.3.2标准曲线的制备
精密量取对照品溶液1mL，分别置10mL具塞刻度试管中，在冰水浴中缓缓滴加0.2％蒽酮-硫酸溶液(取2g蒽酮加入80％浓硫酸1000mL，混合摇匀，冷却至室温)5mL，混匀，至沸水浴中加热10min，取出，置冰水浴冷却2min，自来水冷却至室温，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度(μg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线。
得到回归方程为：Y＝0.0051X+0.0694，r＝0.9995。结果表明葡萄糖在5.06-101.2μg·mL-1范围内线性关系良好。
表1葡萄糖对照品溶液不同浓度的吸光度
1.2.3.3供试液制备方法
取60℃干燥至恒重的样品细粉约0.30g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80％乙醇100mL，置水浴中加热回流1h，趁热滤过，残渣用80％热乙醇洗涤3次，每次10mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加蒸馏水85mL，置沸水浴中加热回流1h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次5mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。
1.2.3.4含量测定
精密吸取1.2.3.3项下供试液lmL，置10mL具塞干燥试管中，照1.2.3.2项下的方法，自“冰水浴中缓缓滴加0.2％蒽酮-硫酸溶液”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的含量(μg)。(结果见表1)
1.2.5九制女贞特女贞苷含量变化
1.2.5.1仪器与试药
岛津LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津)；，BP211D电子分析天平(感量0.00001g，德国Sartorius公司)，KQ-300E超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BP-61电子天平(感量0.0001g，德国Sartorius公司)。
1.2.5.2实验与结果
①色谱条件
色谱柱：ThermoC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水(40:60)，进样量：10μL；流速：1mL/min；柱温：25℃；检测波长：224nm。
②对照品溶液制备
精密称取特女贞苷对照品2.78mg，置10mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度。
③供试品溶液制备
取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
④线性范围的考察
对照品溶液分别进样2μL、4μL、6μL、8μL、10μL。以对照品峰面积值为纵坐标，对照品特女贞苷含量为横坐标，绘制标准曲线。特女贞苷回归方程和相关系数为:
Y＝2100000X-450000，r＝0.9990，薯蓣皂苷元在0.556-2.78μg范围内,其绝对进样量X(μg)与峰面积Y之间呈良好的线性关系。
⑤精密度实验
精密度实验，以特女贞苷同一浓度对照品连续6次，每次10uL记录峰面积。
表2精密度实验结果
结果：峰面积RSD为2.79％，说明仪器精密度良好。
⑥稳定性实验
样品稳定性实验，以样品提取后的溶液在0、2、4、8、12h进样测定，记录特女贞苷的峰面积，以评估样品的稳定性。
表3稳定性实验结果
结果：薯蓣皂苷元峰面积RSD为2.69％，说明样品在提取后的12h以内稳定性良好。
⑦重复性实验
取同一样品平行提取6份，注入仪器分析，记录峰面积。
表4重复性实验结果
结果：RSD为2.97％，说明样品提取方法的重现线性良好。
⑧加样回收率
加样回收试验是考察样品测定结果的准确性，称量已知含量的样品6份，加入一定量的对照品，参与提取过程，提取液注入液相色谱仪记录实验数据，计算实际测得的量减去已知样品中的量再与对照品加入的量的比值。
表5加样回收实验结果
结果：根据公式得加样回收率RSD为2.46％所得数据准确度较高。
表6生女贞～一至九制女贞的含量测定(n＝3)
结果显示：女贞蒸制后，水、醇浸出物含量均有增加，说明女贞经炮制后，药物的成分溶出增多，利于其药效的发挥，且其浸出物随蒸制时间递增。女贞子多糖和特女贞苷随着蒸制时间延长逐渐降低，说明在蒸制过程中，特女贞苷和多糖发生水解所致。
2本发明高压蒸制女贞子炮制工艺的研究
2.1仪器、试药
2.1.1仪器
UV-1100紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；BP211D电子天平(感量0.01mg，德国Sartorius公司)，BS200S电子天平(感量0.001g，德国Sartorius公司)；正德牌远红外可控温电炉(功率45～2000W)，不锈钢手提式高压灭菌锅(型号：YX-280B，执行标准：YZB-皖0037-2005)。
2.1.2试剂与试药
D-无水葡萄糖(批号：MUST-14072601，纯度>98％)、特女贞苷(批号：MUST-14040402，纯度>98％)，购自成都曼斯特生物科技有限公司。女贞子药材样品购自成都药材市场，经成都中医药大学胡昌江教授鉴定为木樨科植物女贞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果实。
2.2工艺研究
2.2.1正交实验考察
女贞子主要含有环烯醚萜苷类、三萜类、苯乙醇类、脂肪油等。环烯醚萜苷类成分有特女贞苷、女贞苷G13、女贞苷等；三萜类成分有齐墩果酸、熊果酸等；苯乙醇类成分有红景天苷。目前对女贞子的炮制工艺研究，多以特征性不强的脂溶性成分齐墩果酸和熊果酸含量为评价指标，而对其他水溶性活性成分在炮制过程中的变化关注较少，尚不能客观确切地反映女贞子炮制制前后的本质变化。本研究考虑到特女贞苷的药理作用与专属性，以特女贞苷为实验指标，按正交实验设计安排高压女贞实验(表7)，考察压制温度、时间和次数，优选高压蒸制女贞子的工艺。
表7正交实验因素及水平设计
表8实验安排
表9方差分析表
结果显示：压制时间(B)是女贞子炮制的关键因素，压制温度(A)和压制次数(C)对结果无显著影响。由表8得出影响程度大小顺序为：B>A>C。结合工业化生产节约能耗，便于操作等角度综合考虑，优选高压蒸制女贞的炮制工艺为：110℃高压蒸制，蒸制1h，蒸制一次。
本发明通过用高压蒸制代替九制女贞常压蒸制的繁琐工艺，建立了九制女贞饮片新的炮制工艺，即在110℃高压蒸制1h，压制一次。操作更简单，科学合理，使其能适用于九制女贞工业化大生产。
2.2.2本发明高压蒸制女贞子与传统九制女贞子质量对比研究
按1.2.1项下进行传统九制女贞子饮片蒸制，即取女贞子200g，加20％的黑豆熬汁，拌匀，润至透心，反复蒸制9次，即得；另取高压蒸制女贞饮片(按照实施例1制备)，对其浸出物、多糖、特女贞苷进行测定(见表10)。
表10高压女贞子和传统九制女贞子质量对比
结果显示：高压蒸制女贞的的多糖及特女贞苷含量均高于传统九制女贞，质量更好，说明高压蒸制能够更好的保留多糖和特女贞苷，以保存临床疗效。
实验例2本发明高压蒸制女贞与传统九制女贞的药理研究
1实验材料
1.1实验动物
清洁级SD大鼠，雄性，体质量200～220g，购自四川达硕动物实验中心。实验动物生产许可证号：SCXK(川)2013-24。
1.2实验样品的制备
样品1：取女贞子生药，加入10倍量水，浸泡60min，煎煮提取60min，倒出药液，残渣再加入8倍水，煎煮60min，合并两次次药液，滤过、浓缩，用药前稀释。
样品2：取传统九制女贞子(按照实验例1中1.2.1项下制备)，后续步骤同上。
样品3：取本发明高压蒸制女贞子(按照实施例1制备)，后续步骤同上。
3.2实验方法
3.2.1动物分组及模型制备
取雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、模型组、生品组、九制女贞子组和高压蒸制女贞子组，每组10只，除空白对照组外，其余组大鼠以500mg/kg甲状腺片剂量(用前配制成悬浊液5g/100mL生理盐水)灌服，每日一次，连续7d，造成肾阴虚模型。同时生品组、九制女贞子组和高压蒸制女贞子组按相应剂量分别灌胃给予样品1、样品2、样品3，正常对照组和模型组灌胃给予等剂量蒸馏水，每日1次，连续7d，容积为1mL/100g。每天记录各组饮水量和进食量，并在给药前和停药日称重。第8d取血同时取其肝，胸腺，脾，肾，睾丸称湿重。全血5000r/min离心15min，取上清液，测定血清中cAMP/cGMP、SOD、MDA水平。计算：大鼠体重以最后一日称量体重为准；器官系数＝器官重量/大鼠体重。
3.2.2统计分析
采用SPSS19.0统计软件做数据处理，计量资料以表示。采用单因素方差分析，P＜0.05时认为有统计学意义。
3.3实验结果
3.3.1大鼠一般状态变化
模型组与正常对照组比较，体质量下降、体温升高、饮水量增加、饮食量减少、大便干结、毛发疏松、粗糙无光泽，精神萎靡、躁动易惊。给药治疗后，前期也相继出现不同程度的肾阴虚症状，但随着药物干预治疗，在实验后期有逐渐恢复正常的趋势，说明女贞子生品、传统九制和高压制对大鼠的肾阴虚体征均有一定改善作用。
3.3.2对大鼠脏器指数的影响，见表11。
表11对小鼠主要脏器指数的影响(n＝10)
注：与正常组比*P<0.05，**P<0.01；与模型组比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与等剂量生品比较，#P<0.05，##P<0.01。
结果显示：与正常对照组比较，模型组大鼠各脏器指数均明显下降，说明甲状腺片使大鼠睾丸及免疫器官受到明显损伤，造模成功。给药后，与模型组相比，给药组各脏器指数均有所提高。不同剂量给药组相比，高剂量效果优于低剂量组。各个给药组相比较，高压女贞子高剂量综合效果最佳。
3.3对大鼠血清cAMP/cGMP影响，见表12。
表12对大鼠血清cAMP/cGMP影响(n＝10)
注：与正常组比*P<0.05，**P<0.01；与模型组比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与等剂量生品比较，#P<0.05，##P<0.01。
结果显示，与正常对照组比较，模型对照组血清环磷酸腺苷(cAMP)含量明显升高(P<0.01)，环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷(cAMP/cGMP)的比值也升高(P<0.05)，说明甲状腺片致肾阴虚模型大鼠体内环磷酸腺苷水平上升，致使环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷的双向调节系统失调，这与肾阴虚模型相符。与模型组比较，给药各组血清环磷酸腺苷含量和环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷降低，说明女贞子能下调环磷酸腺苷水平，使环磷酸腺苷含量相对稳定，在一定程度上调整环磷酸腺苷与环磷酸鸟苷的比例失调，且高压女贞子的效果最佳。3.4大鼠血清中SOD、MDA水平，见表13。
SOD是抗氧自由基物质，能有效地清除机体内氧自由基及其代谢产物，减少自由基堆积对细胞、组织的损害。MDA是脂质过氧化降解产物，对机体蛋白质和核酸有直接损害作用。因此，SOD可理解为中医理论的正气部分，而MDA可认为是反映邪实的指标之一。
表13各组大鼠血清SOD、MDA活性的影响(n＝10)
结果显示，与正常对照组相比较，模型组大鼠SOD活性显著降低，MDA含量明显升高(P<0.01)，说明脾肾阳虚可导致氧自由基过量聚积，脂质过氧化终产物增多。与模型组相比，给药各组血液SOD活性升高，MDA含量降低，提示女贞子可以改善大鼠抗氧化能力，清除机体内氧自由基，降低体内脂质过氧化物，尤以高压女贞高剂量的效果最佳。
综上，通过质量对比及药理研究，本发明高压蒸制女贞优于传统九蒸九晒女贞。因此，采用110℃高压蒸制1h，蒸制1次制成的女贞子可代替传统九制女贞子，这样既能缩短生产周期，节省人力物力资源，满足临床治疗和日常保健所需，适于工业化大生产，同时使传统炮制工艺也得到继承与发扬。

Claims (4)

1.一种女贞子的炮制方法，其特征在于：步骤如下：取女贞子生药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，筛去灰屑，用黑豆汁拌匀，闷润，高压蒸制，干燥；其中高压蒸制的温度为110-120℃，时间为1-3h，次数为1-3次。
2.根据权利要求1所述的炮制方法，其特征在于：所述高压蒸制的温度为110℃，蒸制时间为1h，蒸制次数为1次。
3.权利要求1或2所述的炮制方法制备得到的女贞子炮制品。
4.根据权利要求3所述的女贞子炮制品，其特征在于：所述女贞子炮制品中多糖的质量百分含量不低于1.95％，特女贞苷的质量百分含量不低于1.03％。
CN201510790842.6A 2015-11-17 2015-11-17 一种女贞子的炮制方法 Pending CN105380997A (zh)

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