CN115362984B

CN115362984B - 一种小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的构建方法

Info

Publication number: CN115362984B
Application number: CN202210795799.2A
Authority: CN
Inventors: 陆华; 李方远; 张琦; 谭沛; 李小青; 陈仁; 刘芊辰
Original assignee: China Resources Sanjiu Modern Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co ltd; Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: China Resources Sanjiu Modern Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co ltd; Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2022-07-07
Filing date: 2022-07-07
Publication date: 2024-01-16
Anticipated expiration: 2042-07-07
Also published as: CN115362984A

Abstract

本发明提供了一种小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的构建方法，包括如下步骤：(1)对小鼠注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂2周，每周2次，每次0.15～0.25mL；(2)对小鼠注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂9～13周，每周2次，每次0.15～0.25mL，同时饲喂浓度为0.6～0.8g/L的高碘水；所述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为0.4～0.6mg/mL的猪甲状腺球蛋白的乳化剂。本发明方法成功制备了昆明雌鼠自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型，缩短了造模成功时间且造模成功率高，死亡率低，模型贴近正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的病理过程，且可在不同时间窗取材以较全面的反映其病理变化，为模拟正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的进一步药效学研究奠定基础。

Description

一种小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的构建方法

技术领域

本发明属于动物模型制备领域，具体涉及一种小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的构建方法。

背景技术

自身免疫性甲状腺炎(autoimmune thyroiditis,AIT)，又称桥本氏甲状腺炎(hashimoto thyroiditis，HT)，是一种常见的器官特异性自身免疫性疾病。自身免疫性甲状腺炎以甲状腺滤泡细胞破坏、慢性淋巴细胞浸润、甲状腺肿或腺体萎缩，及血清中存在高滴度的甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)为特征。目前关于自身免疫性甲状腺炎的发病原因尚未完全清楚。可能由遗传易感因素、表观遗传效应、免疫紊乱、以及各种环境触发因素(例如碘摄入过量、感染)等，更多地认为其是由易感基因和环境因素之间错综复杂的相互作用触发。其中高碘是公认的主要环境诱发因素，碘摄入过量不仅增加自身免疫性甲状腺炎的发生，还增加自身免疫性甲状腺炎发展为甲状腺功能减退的风险。目前国际上建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)小鼠模型多采用具有先天性免疫缺陷的非肥胖糖尿病小鼠(Non Obese Diabetes，NOD)近交系小鼠，通过高碘喂养诱发，模拟自身免疫性甲状腺炎免疫缺陷与高碘环境综合触发的病理过程。但这类疾病模型难以模拟正常人患自身免疫性甲状腺炎的情形，不利于进行正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的研究。

正常昆明小鼠尚未发现自身免疫性甲状腺炎的易感基因，可以模拟正常人患自身免疫性甲状腺炎。目前仅有少量文献报道了采用免疫诱导配合高碘水喂养建立昆明小鼠的实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型，例如叶登美等人报道了多点皮下及肌肉注射抗原免疫乳化剂(浓度 0.25mg·ml^-1)0.2ml/(只·周·次)，构建小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的方法，但其造模时间较长，成本较高(叶登美,王萍,陈京,董群.小鼠自身免疫性甲状腺炎模型构建[J].皖南医学院学报,2015,34(01):10-12)。

仅此，进一步探索昆明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备方法，在保证造模成功率的同时降低饲养成本，仍具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种。

本发明提供了一种小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的构建方法，包括如下步骤：

(1)对小鼠注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂2周，每周2次，每次 0.15～0.25mL；

(2)对小鼠注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂9～13周，每周2次，每次0.15～0.25mL，同时饲喂高碘水；

所述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为0.4～0.6mg/mL的猪甲状腺球蛋白的乳化剂；

所述高碘水的碘浓度为0.6～0.8g/L。

进一步地，步骤(1)和/或步骤(2)中所述每次注射甲状腺球蛋白免疫乳化剂的剂量为0.2mL。

进一步地，上述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为0.5mg/mL的猪甲状腺球蛋白的乳化剂。

更进一步地，上述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为0.8～1.2 mg/mL猪甲状腺球蛋白的PBS缓冲液与等体积的弗氏不完全佐剂制成的乳化剂。

更进一步地，上述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为1.0mg/mL 猪甲状腺球蛋白的PBS缓冲液与等体积的弗氏不完全佐剂制成的乳化剂。

进一步地，上述高碘水的碘浓度为0.64g/L。

进一步地，上述小鼠为昆明小鼠。

进一步地，上述方法还包括停止注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂，继续用高碘水饲喂3～5周，优选为4周。

本发明还提供了上述的构建方法构建的模型在药物筛选试验中的应用。

优选地，上述药物筛选试验是筛选治疗自身免疫性甲状腺炎的药物的试验。

实验结果表明，本发明采用较高剂量的抗原免疫诱导 (0.5mg·ml^-1·0.2ml·次^-1)，通过提高给药频次(2次/周)并配合高碘水喂养，成功制备了昆明雌鼠自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型，缩短了造模成功时间且造模成功率高，死亡率低，模型贴近正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的病理过程，且可在不同时间窗取材以较全面的反映其病理变化，为模拟正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的进一步药效学研究奠定基础。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为J组小鼠Elisa血清甲状腺抗体、甲功及性激素水平(注：两组之间有共同字母P＞0.05，两组之间无共同字母P＜0.05)。

图2为BIW组小鼠Elisa血清甲状腺抗体、甲功及性激素水平(注：两组之间有共同字母P＞0.05，两组之间无共同字母P＜0.05)。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

本发明所用昆明小鼠，雌性，8-9周龄，96只，体重25-30g，由成都达硕实验动物有限公司提供(许可证号：SCXK(川)2020030)，饲料由成都达硕实验动物有限公司提供。分笼饲养于成都中医药大学妇科实验室。饲养环境通风良好，温度保持在20-24℃，相对湿度40％-79％，昼夜光照。本研究通过成都中医药大学附属医院实验动物伦理委员会审核，伦理审查编号： 2021DL-002。

本发明造模用试剂配制：

将0.64g碘化钠晶体与1L纯净水混合,配成浓度为0.64g·L^-1的高碘水。将猪甲状腺球蛋白(pTg)抗原溶于磷酸盐缓冲液(PBS)中配制成1mg·ml^-1抗原溶液。将弗氏完全佐剂(CFA)和抗原溶液以1：1体积比分别吸入1个 50ml离心管中，将离心管放置在漩涡振荡器上高速震荡(约2000转/分)40 分钟，直至形成黏稠的初次免疫乳化剂，使其最终浓度达0.5mg·ml^-1，现配现用。将弗氏不完全佐剂(IFA)和抗原溶液以1:1体积比,如同初次免疫乳化剂制备方法,制备成0.5mg·ml^-1油包水的强化免疫乳化剂。

将96只昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，按小鼠体重大小编号，采用随机数字表法进行分组，分为J对照组、BIW对照组、J模型组、BIW模型组，每组24只，J模型组与BIW模型组按照取材时间窗分为J1-J7组与 BIW1-BIW7组，其中BIW3-BIW7组为本发明实施例，其余组均为对比例。

造模后取材进行检测，取材方法：

所有小鼠通过阴道涂片观察，于动情前期处死取材。取材前进行腹腔注射水合氯醛麻醉(4％)，待小鼠麻醉后，剪掉小鼠两侧胡须，通过眼眶静脉丛采血法收集血液，血液样本收集到PCR管中，4℃冰箱静置后放置于 3000rpm离心机中离心10min，用移液器小心吸取上层小鼠血清，分离得到血清、血浆，均移至标记好的冻存管中置于-80℃超低温冰箱备存待测。脱颈处死小鼠，小鼠取仰卧位固定于冰板上，消毒小鼠颈部，分离气管并剥离甲状腺，去除筋膜和结缔组织，将甲状腺组织置于4％多聚甲醛固定液中固定，用于甲状腺组织HE染色。

实施例1、本发明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备

BIW3组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续9周，停止免疫诱导。

实施例2、本发明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备

BIW4组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续11周，停止免疫诱导。

实施例3、本发明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备

BIW5组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续13周，停止免疫诱导。

实施例4、本发明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备

BIW6组：实施例3的小鼠继续高碘水喂养2周。

实施例5、本发明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备

BIW7组：实施例3的小鼠继续高碘水喂养4周。

对比例1、

J对照组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，分别于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射PBS缓冲液1次·0.2ml·周^-1，注射7周，期间采用自来水喂养。

对比例2、

BIW对照组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，分别于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射PBS缓冲液2次·0.2ml·周^-1，注射7周，期间采用自来水喂养。

对比例3、

J1组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1，持续5周，停止免疫诱导。

对比例4、

BIW1组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续5周，停止免疫诱导。

对比例5、

J2组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1和2次·0.2ml·周^-1，持续7周，停止免疫诱导。

对比例6、

BIW2组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂2次·0.2ml·周^-1，持续7周，停止免疫诱导。

对比例7、

J3组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1和2次·0.2ml·周^-1，持续9周，停止免疫诱导。

对比例8、

J4组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1和2次·0.2ml·周^-1，持续11周，停止免疫诱导。

对比例9、

J5组：昆明雌性小鼠适应性喂养1周后，于小鼠于小鼠颈部、背部、大腿内侧、腹部等皮下多点注射初次免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1，持续2周；然后分别多点皮下注射强化免疫乳化剂1次·0.2ml·周^-1和2次·0.2ml·周^-1，持续13周，停止免疫诱导。

对比例10、

J6组：对比例9的小鼠停止免疫诱导后，继续高碘水饲喂2周。

对比例11、

J7组：对比例9的小鼠停止免疫诱导后，继续高碘水饲喂4周。

上述实施例、对比例造模取材表如表1：

表1造模及分批次取材表

注：I.H：hypodermic injection,皮下注射法。J组多点皮下注射1次·周^-1，BIW组多点皮下注射2 次·周^-1

以下通过实验例证明本发明的有益效果。

实验例1、疾病模型判定

1、实验方法

1.1小鼠一般情况观察：观察各组小鼠的存活情况、精神状态、行为活动、进食情况、毛被(有无立毛、体毛蓬松、脱毛)、二便排泄等情况。每周五记录体重和肛温。实验中观察小鼠一般状态，记录其变化，若有小鼠死亡的记录其死亡原因。

1.2甲状腺组织病理学观察：运用HE染色观察小鼠甲状腺病理形态学，甲状腺组织病理评分参考Charveire分类法，甲状腺滤泡结构改变和淋巴细胞浸润强度评分如表2：

表2 Charveire分类法

1.3运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清TPOAb、TGAb、TSH、FT3、 FT4。

1.4统计学方法：计量资料用均数和标准差表示，若数据符合正态分布，方差齐，则使用ANOVA单因素方差分析中的LSD检验进行组间多重比较；若方差不齐，则用Games-Howelltest检验进行组间多重比较。所有统计检验均采用双侧检验，当P＜0.01具有显著统计学意义，P＜0.05 为差异有统计学意义，P＞0.05为无统计学意义。

2、实验结果

2.1一般情况：BIW对照组、J对照组小鼠活动正常、毛发光泽、饮食和二便正常。模型组小鼠造模进行多点皮下注射后，注射部位均出现皮下硬结，造模结束后仍未消退；BIW组第4周开始出现大便色浅偏稀，J模型组第5-6周开始出现大便色浅偏稀；在第7周时模型组小鼠在阴道涂片过程中刺激到肛周时排便变缓，大约60％小鼠出现唇周、背部等脱毛，活动度减弱；J模型组与BIW模型组分别于第9周、11周开始出现部分小鼠背部立毛。在造模过程中，无论是对比例还是实施例均有部分小鼠死亡，造模前后样本数如表3，可以看出对比例和实施例各组小鼠死亡情况没有显著差异，说明死亡原因可能由注射部位药物缓释过程中的硬结化脓感染、注射针头刺及血管引起的隐秘性腹腔皮下出血过多等客观原因导致，即是说，本发明，采用高剂量的抗原，高频次地给药注射，也不会对小鼠造成显著伤害，本发明造模方法死亡率低。

表3各组小鼠造模前后样本数(n)

2.2小鼠体重及肛温变化：

各组小鼠肛温变化：见表4、表5。

表4.J组小鼠体重、肛温统计结果

注：J模型组与J对照组比较：^*P<0.05，^**P<0.01；模型组组间比较：由于模型组组数较多，为了避免符号过多导致的混乱，仅用“Δ”加组别序号分别表示差异，即：与J1组比较：^Δ1P<0.05，^ΔΔ1P<0.01；与J2组比较：^Δ2P<0.05，^ΔΔ2P<0.01；与J3组比较：^Δ3P<0.05，^ΔΔ3P^<0.01；与J4组比较：^Δ4P<0.05，^ΔΔ4P<0.01；与J5组比较：^Δ5P<0.05，^ΔΔ5P<0.01；与J6组比较：^Δ ⁶P<0.05，^ΔΔ6P<0.01；与J7组比较：^Δ7P<0.05，^ΔΔ7P<0.01。

表5 BIW组小鼠体重统计结果

注：BIW模型组与BIW对照组比较，^*P<0.05，^**P<0.01；模型组组间比较，与BIW1组比较：^Δ1P<0.05，^ΔΔ1P<0.01；与BIW2组比较：^Δ2P<0.05，^ΔΔ2P<0.01；与BIW3组比较：^Δ3P<0.05，^ΔΔ ³P^<0.01；与BIW4 组比较：^Δ4P<0.05，^ΔΔ4P<0.01；与BIW5组比较：^Δ5P<0.05，^ΔΔ5P<0.01；与BIW6组比较：^Δ6P^<0.05，^ΔΔ6P<0.01；与BIW7组比较：^Δ7P<0.05，^ΔΔ7P<0.01。

造模前J组、BIW组各亚组的体重；J3-7组、BIW2-7组造模后的体重分别较J对照组、BIW对照组显著下降(P<0.01)；造模后的J模型组及BIW 模型组各亚组间的体重差异不具统计学意义(P＞0.05)。造模前J组、BIW 组各亚组的肛温组间无显著差异(P＞0.05)；与J对照组相比，造模后的J4、 5组肛温明显降低(P<0.05)，J6、7组肛温显著降低(P<0.01)；与BIW对照组相比，造模后的BIW2-4组肛温明显降低(P<0.05)，BIW5-7组肛温显著降低(P<0.01)；J模型组及BIW模型组随着造模时间延长，肛温有逐渐下降的趋势，但各亚组间差异不具统计学意义(P＞0.05)。

2.3甲状腺病理组织学

J组与BIW组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度、甲状腺滤泡结构改变、病理总分方差不齐，故采用Games-Howelltest检验。J模型组和BIW模型组的甲状腺HE染色结果分别见表6、表7。

表6 J组甲状腺Charveire评分统计结果

注：同前。

与J对照组相比：J1、2组的甲状腺未见明显病理改变(P＞0.05)；J3 组3/5例小鼠出现明显的甲状腺淋巴细胞浸润和滤泡结构改变，即成模率 60％，但该组各病理评分差异无统计学意义(P＞0.05)；J4-7组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度、甲状腺滤泡结构改变、病理评分总分均显著升高 (P<0.01)。J模型组组间比较：J4-7组小鼠甲状腺滤泡结构改变、病理评分总分较J1-3组显著升高(P<0.01)；J4组、J5组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度均较J1组、J2组明显增加(P<0.05)；J6、7组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度较J1组、J2组显著增加(P<0.01)且较J3组明显增加(P<0.05)。其余组间差异不具有统计学意义(P＞0.05)。

表7 BIW组甲状腺Charveire分类评分统计结果

注：同前。

与BIW对照组相比，BIW1组小鼠甲状腺未见明显病理改变(P＞0.05)； BIW2组3/6小鼠出现甲状腺出现明显的甲状腺淋巴细胞浸润和甲状腺滤泡结构改变，即成模率50％，但该组各病理评分差异无统计学意义(P＞0.05)。而本发明实施例1～5(即BIW3-7组)小鼠甲状腺滤泡结构改变、病理评分总分均显著升高(P<0.01)，BIW3组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度明显增加 (P<0.05)，BIW4-7组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度显著增加(P<0.01)。BIW模型组组间比较，BIW3-5组小鼠甲状腺滤泡结构改变、病理评分总分均较BIW1组明显升高(P<0.05)，BIW6、7组小鼠甲状腺滤泡结构改变、病理评分总分均较BIW1、2组显著升高(P<0.01)，BIW3-5组均较BIW1组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度明显升高(P<0.05)，BIW6、7组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润强度较BIW1、2组显著升高(P<0.01)。

从上述表6、表7的结果比较可以看出，相比于每周1次注射抗原造模的J组，每周两次注射抗原的BIW组更早且更明显出现甲状腺细胞浸润和滤泡结构改变。

2.4J组与BIW组血清甲状腺抗体、甲状腺功能水平：

结果符合正态分布，方差齐性，采用one-way ANOVA中的LSD检验，结果分别见表8、表9。

表8 J组小鼠血清ELisa结果

注：同前。

与J对照组相比：J4-7组TPOAb水平显著升高(P<0.01)；J4组、J6组 TGAb水平明显升高(P<0.05)，J5组、J7组TGAb水平显著升高(P<0.01)； J6组、J7组TSH水平明显升高(P<0.05)，FT3、FT4水平明显下降(P<0.05)。 J模型组组间比较：J5组、J7组TGAb水平较J2组显著升高(P<0.01)，J4 组TGAb水平较J2组明显升高(P<0.05)；J4-7组TPOAb水平较J1组、J2组显著升高(P<0.01)，J4组、J5组、J7组TPOAb水平较J3组升高(P<0.05， P<0.01，P<0.05)；J模型组组间FT3差异不具有统计学意义(P＞0.05)，J6 组、J7组FT4较J1组明显下降(P<0.05)；J6组TSH水平较J1组明显升高 (P<0.05)，J7组较J1组、J2组明显升高(P<0.01)。其余组间差异不具有统计学意义(P＞0.05)。如图1所示。

表9 BIW组小鼠血清ELisa结果

注：同前。

与BIW对照组相比：Biw3组、Biw4组TGAb水平明显升高(P<0.05)， BIW 5-7组TGAb水平显著升高(P<0.01)；Biw3-7组TPOAb浓度显著升高 (P<0.01)；BIW 6组FT3、FT4水平显著下降(P<0.01)；BIW 7组FT3、 FT4水平明显下降(P<0.05)；BIW5组TSH水平明显升高(P<0.05)；BIW6 组、BIW7组TSH水平显著升高(P<0.01)。BIW模型组组间比较：BIW 5 组TGAb水平较BIW1组、BIW 2组显升高(P<0.05)，Biw6组、Biw7组 TGAb水平较BIW1组、BIW 2组显著升高(P<0.01)；Biw4-7组TPOAb水平显著高于BIW1组、BIW2组(P<0.01)，BIW3组TPOAb水平较BIW1组、 BIW2组升高(P<0.01，P<0.05)；BIW6组FT3较BIW1组、BIW2组显著下降(P<0.01)；BIW6组、BIW7组TSH较BIW1组升高(P<0.05，P<0.01)， BIW7组TSH较BIW2组明显升高(P<0.05)。其余组间差异不具有统计学意义(P＞0.05)。如图2所示。

上述结果可以看出，采用高碘水喂养(0.64g·L-1)配合抗原免疫诱导0. 2ml/(只·次)(浓度0.5mg·ml-1)制备EAT模型时，每周2次抗原免疫诱导 (BIW组)的成模时间及出现甲状腺功能减退的时间较每周1次抗原免疫诱导(J组)更早，更有利于快速制备成功EAT模型，降低饲养成本。

综上，本发明提供了一种昆明小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的制备方法，本发明方法缩短了造模成功时间且造模成功率高，死亡率低，模型贴近正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的病理过程，且可在不同时间窗取材以较全面的反映其病理变化，为模拟正常人罹患自身免疫性甲状腺炎的进一步药效学研究奠定基础。

Claims

1.一种小鼠自身免疫性甲状腺炎模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对小鼠注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂2周，每周2次，每次0.2mL；

(2)对小鼠注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂9～13周，每周2次，每次0.2mL，同时饲喂高碘水；

所述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为0.5mg/mL的猪甲状腺球蛋白的乳化剂；

所述高碘水的碘浓度为0.64g/L；

所述小鼠为昆明小鼠。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂是含有浓度为1.0mg/mL猪甲状腺球蛋白的PBS缓冲液与等体积的弗氏不完全佐剂制成的乳化剂。

3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，它还包括停止注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂，继续用高碘水饲喂3～5周。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，停止注射猪甲状腺球蛋白免疫乳化剂后继续用高碘水饲喂4周。

5.权利要求1～4任一项所述的构建方法构建的模型在药物筛选试验中的应用。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物筛选试验是筛选治疗自身免疫性甲状腺炎的药物的试验。