CN109900818A - 启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,启脾制剂包括启脾丸和启脾口服液,检查方法是采用高效液相色谱法检测启脾制剂中是否含人参茎叶专属成分人参皂苷F1,以检查启脾制剂中是否存在人参茎叶掺伪的现象。本发明的方法先进行了专属性试验,得出人参茎叶区别于人参其他部位的专属性成分,再用专属性成分作为对照品进行检测,结果区别明显;而且该方法还进行了试验条件的考察,且将启脾丸与启脾口服液中人参茎叶掺伪的检查方法统一,方法简单、精密度高、重现性好、稳定性好、回收率高、测定结果准确,为启脾制剂质量标准的建立奠定了基础。
Description
技术领域
本发明涉及中医药检测技术领域,具体是一种启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法。
背景技术
启脾丸(大蜜丸)由人参、麸炒白术、茯苓、甘草、陈皮、山药、莲子(炒)、炒山楂、六神曲(炒)、炒麦芽、泽泻等十一味药材细粉加炼蜜混合制得而成。启脾丸(水丸)由人参、麸炒白术、茯苓、甘草、陈皮、山药、莲子(炒)、炒山楂、六神曲(炒)、炒麦芽、泽泻等十一味药材细粉,过筛,混匀,用水泛丸,打光,干燥制得而成。启脾口服液由人参、麸炒白术、茯苓、甘草、陈皮、山药、炒莲子、炒山楂、炒六神曲、炒麦芽等十一味药材组成。人参用70%乙醇回流提取三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次3小时,提取液回收乙醇液,药液另取容器收集;陈皮、麸炒白术提取挥发油备用;药渣及蒸馏后的水溶液与其余茯苓等八味药合并,加水煎煮2次,第一次2小时,第二次1小时,煎液滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为1.12~1.20(85℃)的浸膏,加乙醇至含醇量达70%,搅匀,静置24小时,取上清液回收乙醇,滤过,蔗糖150g制成单糖浆,山梨酸钾1.5g用水溶解,将上述挥发油加入其中,混匀,调节pH至4.0~5.0,制成1000mL,搅匀,滤过,灭菌,分装,即得。
启脾制剂具健脾和胃之功效;临床用于脾胃虚弱、消化不良、腹胀便溏。人参茎叶为处方君药人参的枝叶,与人参药材均含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1等皂苷类成分。启脾口服液现行标准中仅有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的定量与定性测定;而启脾丸仅有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的定性鉴别,若用人参茎叶代替或掺伪人参投料均不能被鉴别出来。为考察生产单位是否存在人参茎叶代替或掺伪人参投料的情况,需要建立了启脾制剂中人参茎叶专属性强的检查方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,该方法通过高效液相色谱法检测启脾制剂中是否含人参茎叶专属性成分人参皂苷F1,以检查启脾制剂中是否存在人参茎叶掺伪的现象,建立了启脾制剂中人参茎叶专属性强的液相色谱掺伪检查方法。
一种启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,具体内容如下:
(1)色谱条件:超高效液相色谱仪,Thermo AcclaimTM RSLC C120 C18(2.1×100mm,2.2μm);以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203nm;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于10000。
(2)对照品溶液的制备:
1)启脾口服液检查所需的对照品溶液①:取人参皂苷F1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含60μg人参皂苷F1的溶液,即得。
2)启脾丸检查所需的对照品溶液②:取人参皂苷F1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含7.5μg人参皂苷F1的溶液,即得。
(3)供试品溶液的制备:
1)启脾口服液作为供试品:精密量取样品50mL,加入三氯甲烷振摇提取3次,每次30mL,弃去三氯甲烷提取液,水液加水饱和正丁醇振摇提取5次(50mL,30mL,30mL,20mL,20mL),合并正丁醇提取液,加氨试液洗涤4次,每次50mL,弃去氨试液,再加水饱和正丁醇轻轻振摇洗涤2次,每次50mL,弃去水洗液,正丁醇液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得。
2)启脾丸作为供试品:取样品10丸,剪碎,取大蜜丸5g或取水丸2g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),取续滤液,即得。
(4)测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL,注入超高效液相色谱仪,测定,即得;对照品溶液①和启脾口服液供试品溶液对应,对照品溶液②和启脾丸供试品溶液对应。
所述方法还包括在检查之前进行专属性试验,具体内容如下:
(1)检测:取人参主根样品、须根样品、启脾制剂生产单位提供的人参样品、人参茎叶样品各0.25g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,取各供试品溶液1μL,注入超高效液相色谱仪,测定;
(2)结果人参主根、须根及启脾制剂生产单位提供的人参均未检出人参皂苷F1成分,而人参茎叶检出人参皂苷F1,因此,以人参皂苷F1为人参茎叶的专属性成分,对启脾制剂进行人参茎叶掺伪的考察。
所述方法还包括实验条件的考察:(1)色谱条件考察;(2)供试品溶液制备的考察。
所述方法还包括限度的拟定,具体内容如下:
(1)启脾口服液限度的拟定:取人参3.82g、人参茎叶0.21g,混匀,取其他各味相当于制备200mL的药材,按处方工艺制成200mL掺5%人参茎叶的启脾口服液样品;精密量取50mL,按启脾口服液供试品溶液制备方法制成5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,按色谱条件进行测定,结果人参茎叶皂苷F1含量约为59μg/mL;5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液人参茎叶皂苷F1含量为5.9μg/mL,对应对照品的浓度为59μmg/mL,以5%掺伪作为启脾口服液检测低限即以人参茎叶皂苷F1对照品的浓度为限度,规定结果判断标准为:供试品色谱中,在与人参茎叶皂苷F1对照品色谱峰保留时间相应的位置上不得出现色谱峰;若出现保留时间相同的色谱峰,且该色谱峰峰面积值大于对照品溶液的峰面积值,则视为阳性检出。
(2)启脾丸限度的拟定:取人参1.92g、人参茎叶0.11g,混匀,按处方五十分之一用量称取除人参外的各味药材,混匀,按处方工艺制成掺5%人参茎叶的启脾丸样品;取5g,精密称定,按启脾丸供试品溶液制备方法制成5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,按色谱条件进行测定,结果人参茎叶皂苷F1含量为0.044mg/丸;5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,结果人参茎叶皂苷F1含量为0.044mg/丸,对应对照品的浓度为7.3μg/mL,规定结果判断标准为:供试品色谱中,在与人参茎叶皂苷F1对照品色谱峰保留时间相应的位置上不得出现色谱峰;若出现保留时间相同的色谱峰,且该色谱峰峰面积值大于对照品溶液的峰面积值,则视为阳性检出。
本发明的有益效果:
本发明的方法通过高效液相色谱法检测启脾制剂中是否含人参茎叶专属性成分人参皂苷F1,以检查启脾制剂中是否存在人参茎叶掺伪的现象,建立了启脾制剂中人参茎叶专属性强的液相色谱掺伪检查方法。在进行正式的检查之前先进行了专属性试验,得出人参茎叶区别于人参其他部位的专属性成分,再用专属性成分作为对照品进行检测,结果区别明显;而且该方法还进行了色谱条件和供试品溶液制备方法的考察,检查条件更优。本发明的方法将启脾丸与启脾口服液中人参茎叶掺伪的检查方法进行了统一,方法简单、精密度高、重现性好、稳定性好、回收率高、测定结果准确,为启脾制剂质量标准的建立奠定了基础。
附图说明
图1是启脾口服液掺5%人参茎叶样品的高效液相色谱图;
图2是启脾丸掺5%人参茎叶样品的高效液相色谱图;
图3是人参皂苷F1对照品的高效液相色谱图;
图4是启脾口服液样品(K公司,批号:20171155)的高效液相色谱图;
图5是启脾口服液样品(K公司,批号:20180313)的高效液相色谱图;
图6是启脾丸样品(C公司,批号:170801)的高效液相色谱图;
图7是启脾丸样品(I制药厂,批号:17013074)的高效液相色谱图;
图8是启脾丸样品(水丸)(G公司,批号:12170909)的高效液相色谱图;
图9是人参茎叶(上)、人参主根(中)与人参须根(产地吉林)(下)的高效液相色谱图;
图10是人参茎叶(上)、人参主根(中)与人参须根(产地吉林)(下)的高效液相色谱图(图9)的放大图;
图11是启脾丸样品(C公司,批号:171001)的高效液相色谱图;
图12是启脾口服液样品(K公司,批号:20170518)的高效液相色谱图。
具体实施方式
为了更加详细的介绍本发明,下面结合实施例,对本发明做进一步说明。
实施例,内容如下:
一种启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,采用高效液相色谱法检测启脾制剂中是否含人参茎叶专属性成分人参皂苷F1,以检查启脾制剂中是否存在人参茎叶掺伪的现象,具体内容如下:
(1)色谱条件:超高效液相色谱仪,Thermo AcclaimTM RSLC C120 C18(2.1×100mm,2.2μm);以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203nm;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于10000。
(2)对照品溶液的制备:
1)启脾口服液检查所需的对照品溶液①:取人参皂苷F1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含60μg人参皂苷F1的溶液,即得。
2)启脾丸检查所需的对照品溶液②:取人参皂苷F1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含7.5μg人参皂苷F1的溶液,即得。
(3)供试品溶液的制备:
1)启脾口服液作为供试品:精密量取样品50mL,加入三氯甲烷振摇提取3次,每次30mL,弃去三氯甲烷提取液,水液加水饱和正丁醇振摇提取5次(50mL,30mL,30mL,20mL,20mL),合并正丁醇提取液,加氨试液洗涤4次,每次50mL,弃去氨试液,再加水饱和正丁醇轻轻振摇洗涤2次,每次50mL,弃去水洗液,正丁醇液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得。
2)启脾丸作为供试品:取样品10丸,剪碎,取大蜜丸5g或取水丸2g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),取续滤液,即得。
(4)测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL,注入超高效液相色谱仪,测定,即得;对照品溶液①和启脾口服液供试品溶液对应,对照品溶液②和启脾丸供试品溶液对应。
先进行限度的拟定,再对检测结果进行判定,具体内容如下:
(1)启脾口服液限度的拟定:取人参3.82g、人参茎叶0.21g,混匀,取其他各味相当于制备200mL的药材,按处方工艺制成200mL掺5%人参茎叶的启脾口服液样品;精密量取50mL,按启脾口服液供试品溶液制备方法制成5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,按色谱条件进行测定,结果人参茎叶皂苷F1含量约为59μg/mL;5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液人参茎叶皂苷F1含量为5.9μg/mL,对应对照品的浓度为59μmg/mL,以5%掺伪作为启脾口服液检测低限即以人参茎叶皂苷F1对照品的浓度为限度,规定结果判断标准为:供试品色谱中,在与人参茎叶皂苷F1对照品色谱峰保留时间相应的位置上不得出现色谱峰;若出现保留时间相同的色谱峰,且该色谱峰峰面积值大于对照品溶液的峰面积值,则视为阳性检出。
(2)启脾丸限度的拟定:取人参1.92g、人参茎叶0.11g,混匀,按处方五十分之一用量称取除人参外的各味药材,混匀,按处方工艺制成掺5%人参茎叶的启脾丸样品;取5g,精密称定,按启脾丸供试品溶液制备方法制成5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,按色谱条件进行测定,结果人参茎叶皂苷F1含量为0.044mg/丸;5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,结果人参茎叶皂苷F1含量为0.044mg/丸,对应对照品的浓度为7.3μg/mL,规定结果判断标准为:供试品色谱中,在与人参茎叶皂苷F1对照品色谱峰保留时间相应的位置上不得出现色谱峰;若出现保留时间相同的色谱峰,且该色谱峰峰面积值大于对照品溶液的峰面积值,则视为阳性检出。
采用本发明的检查方法,对2018国家评价性抽验的样品中涉及的11家生产单位、去重批号后64批启脾丸和24批启脾口服液样品进行测定,结果64批启脾丸均未检出人参茎叶皂苷F1,表明10家生产单位不存在人参茎叶掺伪人参投料的行为;而24批启脾口服液,除3批未检出人参茎叶皂苷F1外,其余21批启脾口服液均检出与人参茎叶皂苷F1对照品色谱保留时间一致的色谱峰,但峰面积均小于对照品色谱中的峰面积,故仍判定为未检出(见表2-3,图1-8)。11家生产单位的名称均用字母代替,一个字母对应一个单位名称,同日申请的几个专利在此保持一致。
所述方法还包括在检查之前进行专属性试验,具体内容如下:
(1)检测:收集人参主根样品11批、须根样品7批、启脾制剂生产单位提供人参样品5批、人参茎叶样品10批,分别取样品各0.25g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,注入超高效液相色谱仪,测定。
(2)结果人参主根、须根及启脾制剂生产单位提供的人参均未检出人参皂苷F1成分,而人参茎叶均检出人参皂苷F1,见图9~10,因此,以人参皂苷F1为人参茎叶的专属性成分,对启脾制剂进行人参茎叶掺伪的考察。
所述方法还包括实验条件的考察及方法学验证:
(1)色谱条件考察:
分别比较了以乙腈-水流动相不同梯度与流速洗脱的效果。经摸索,确定流动相梯度如表1,在此梯度下,分离效果好,峰形对称。
在色谱柱的选择上,我们试验了ACQUITY UPLC HSST3、CORTECSTM UPLC C18、AcclaimTM RSLC C18等,结果以Thermo AcclaimTM RSLC C120 C18(2.1×100mm,2.2μm)的效果最佳,各峰之间的分离度良好。见图11-12。
(2)供试品溶液制备的考察:
启脾口服液供试品提取方法同《中国药典》2015年版一部,因此仅对启脾丸进行考察。
1)提取方法的选择:分别对超声提取、加热回流、放置过夜加热回流进行比较。
①超声提取:取样品10丸,剪碎,取约5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,超声处理30分钟(功率320W,频率40kHz),放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。
②加热回流:取样品10丸,剪碎,取约5g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。
③放置过夜加热回流:取样品10丸,剪碎,取约5g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,放置过夜,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。
结果表明,加热回流提取待测成分含量高于超声提取,但放置过夜与未放置过夜未见明显差异,故选择加热回流方式进行提取,详见表4。
2)提取溶剂的选择
分别考察了甲醇、70%甲醇、50%甲醇、无水乙醇、70%乙醇及50%乙醇六种溶剂的提取效果。
取样品10丸(袋),剪碎(粉碎),取适量(约相当于人参0.25g),精密称定6份,置锥形瓶中,精密加入上述六种溶剂50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。
测定结果显示,70%甲醇与70%乙醇提取待测成分含量较高,乙醇毒性较小,故选择70%乙醇为提取溶剂,详见表5。
3)提取溶剂用量的选择
取样品10丸,剪碎,取约5g,精密称定3份,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇20mL、50mL、100mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL、25mL、50mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。结果当70%乙醇用量为50mL、100mL时,待测成分提取较完全,故选择70%乙醇用量为50mL,详见表6。
4)提取时间的选择
分别比较了回流提取15分钟、30分钟、60分钟、90分钟的效果。
取本品10丸,剪碎,取约5g,取适量(约相当于人参0.25g),精密称定4份,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流15、30、60分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。
测定结果显示,回流提取30分钟已基本提取完全,考虑到样品含量之间的差异,故选择提取60分钟,详见表7。
综合以上研究,拟定供试品溶液的制备方法如下:
取样品10丸,剪碎,取大蜜丸约5g或水丸约2g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,加水30mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过(0.22μm滤膜),即得。
Claims (4)
1.一种启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,其特征在于,所述启脾制剂包括启脾丸和启脾口服液,检查方法是采用高效液相色谱法检测启脾制剂中是否含人参茎叶专属性成分人参皂苷F1,以检查启脾制剂中是否存在人参茎叶掺伪的现象,具体内容如下:
(1)色谱条件:超高效液相色谱仪,Thermo AcclaimTM RSLC C120 C18(2.1×100mm,2.2μm);以乙腈为流动相A,以水为流动相B,进行梯度洗脱50min;检测波长为203nm;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于10000;
(2)对照品溶液的制备:
1)启脾口服液检查所需的对照品溶液①:取人参皂苷F1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含60μg人参皂苷F1的溶液,即得;
2)启脾丸检查所需的对照品溶液②:取人参皂苷F1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含7.5μg人参皂苷F1的溶液,即得;
(3)供试品溶液的制备:
1)启脾口服液作为供试品:精密量取样品50mL,加入三氯甲烷振摇提取3次,每次30mL,弃去三氯甲烷提取液,水液加水饱和正丁醇振摇提取5次,水饱和正丁醇的加入量依次是50mL、30mL、30mL、20mL、20mL,合并正丁醇提取液,加氨试液洗涤4次,每次50mL,弃去氨试液,再加水饱和正丁醇轻轻振摇洗涤2次,每次50mL,弃去水洗液,正丁醇液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得;
2)启脾丸作为供试品:取样品10丸,剪碎,取大蜜丸5g或取水丸2g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得;
(4)测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL,注入超高效液相色谱仪,测定,即得;对照品溶液①和启脾口服液供试品溶液对应,对照品溶液②和启脾丸供试品溶液对应。
2.根据权利要求1所述启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,其特征在于,所述方法还包括在检查之前进行专属性试验,具体内容如下:
(1)检测:取人参主根样品、须根样品、启脾制剂生产单位提供的人参样品、人参茎叶样品各0.25g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇提取3次,每次50mL,合并正丁醇提取液,用氨试液50mL洗涤,弃去氨试液,再用水饱和正丁醇50mL洗涤1次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,取各供试品溶液1μL,注入超高效液相色谱仪,测定;
(2)结果人参主根、须根及启脾制剂生产单位提供的人参均未检出人参皂苷F1成分,而人参茎叶检出人参皂苷F1,因此,以人参皂苷F1为人参茎叶的专属性成分,对启脾制剂进行人参茎叶掺伪的考察。
3.根据权利要求1所述启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,其特征在于,所述方法还包括实验条件的考察:(1)色谱条件考察;(2)供试品溶液制备的考察。
4.根据权利要求1所述启脾制剂中人参茎叶掺伪的检查方法,其特征在于,所述方法还包括限度的拟定,具体内容如下:
(1)启脾口服液限度的拟定:取人参3.82g、人参茎叶0.21g,混匀,取其他各味相当于制备200mL的药材,按处方工艺制成200mL掺5%人参茎叶的启脾口服液样品;精密量取50mL,按启脾口服液供试品溶液制备方法制成5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,按色谱条件进行测定,结果人参茎叶皂苷F1含量约为59μg/mL;5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液人参茎叶皂苷F1含量为5.9μg/mL,对应对照品的浓度为59μmg/mL,以5%掺伪作为启脾口服液检测低限即以人参茎叶皂苷F1对照品的浓度为限度,规定结果判断标准为:供试品色谱中,在与人参茎叶皂苷F1对照品色谱峰保留时间相应的位置上不得出现色谱峰;若出现保留时间相同的色谱峰,且该色谱峰峰面积值大于对照品溶液的峰面积值,则视为阳性检出;
(2)启脾丸限度的拟定:取人参1.92g、人参茎叶0.11g,混匀,按处方五十分之一用量称取除人参外的各味药材,混匀,按处方工艺制成掺5%人参茎叶的启脾丸样品;取5g,精密称定,按启脾丸供试品溶液制备方法制成5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,按色谱条件进行测定,结果人参茎叶皂苷F1含量为0.044mg/丸;5%人参茎叶掺伪样品供试品溶液,结果人参茎叶皂苷F1含量为0.044mg/丸,对应对照品的浓度为7.3μg/mL,规定结果判断标准为:供试品色谱中,在与人参茎叶皂苷F1对照品色谱峰保留时间相应的位置上不得出现色谱峰;若出现保留时间相同的色谱峰,且该色谱峰峰面积值大于对照品溶液的峰面积值,则视为阳性检出。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110779993A (zh) * | 2019-09-25 | 2020-02-11 | 广东省药品检验所(广东省药品质量研究所、广东省口岸药品检验所) | 小柴胡颗粒制剂及其中草药原料中藏柴胡掺伪的检测方法 |
CN114487180A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-13 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 天王补心制剂中理枣仁的掺伪检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1869048A (zh) * | 2006-06-21 | 2006-11-29 | 海南亚洲制药有限公司 | 一种从人参叶中提取分离f组人参皂苷的方法 |
CN106706786A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-05-24 | 河北省药品检验研究院 | 一种人参叶中六种人参皂苷类成分的含量测定方法 |
-
2019
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1869048A (zh) * | 2006-06-21 | 2006-11-29 | 海南亚洲制药有限公司 | 一种从人参叶中提取分离f组人参皂苷的方法 |
CN106706786A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-05-24 | 河北省药品检验研究院 | 一种人参叶中六种人参皂苷类成分的含量测定方法 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
国家药典委员会: "《中国药典2015年版第一增补本》", 31 August 2018, 中国医药科技出版社 * |
孟凡双 等: "人参健脾丸中16种人参皂苷的质量评价", 《中南药学》 * |
张春辉 等: "HPLC-ELSD同时测定跌打丸中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量", 《中国现代应用药学》 * |
杨艳文 等: "高效液相色谱法同时测定人参制剂中20种人参皂苷方法的建立", 《食品科学》 * |
武佳 等: "人参及其四种常见伪品的HPLC定性鉴别", 《世界科学技术(中医药现代化)》 * |
沈映冰 等: "正交试验法优选小儿启脾颗粒中药材的提取工艺", 《中国药师》 * |
甄汉深 等: "《药物分析学 第二版》", 31 August 2017, 中国中医药出版社 * |
郭冲: "人参及其制剂中多种人参皂苷含量的评价", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110779993A (zh) * | 2019-09-25 | 2020-02-11 | 广东省药品检验所(广东省药品质量研究所、广东省口岸药品检验所) | 小柴胡颗粒制剂及其中草药原料中藏柴胡掺伪的检测方法 |
CN114487180A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-13 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 天王补心制剂中理枣仁的掺伪检测方法 |
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