CN102351928A

CN102351928A - 一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法

Info

Publication number: CN102351928A
Application number: CN2011102436844A
Authority: CN
Inventors: 王珂; 赵大龙; 陈明霞; 王振辉
Original assignee: BEIJING COLLAB PHARMA Co Ltd
Current assignee: BEIJING COLLAB PHARMA Co Ltd
Priority date: 2011-08-23
Filing date: 2011-08-23
Publication date: 2012-02-15
Anticipated expiration: 2031-08-23
Also published as: CN102351928B

Abstract

本发明涉及天然药物技术领域。具体涉及一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法。本发明所述方法采用溶剂提取，经色谱方法或色谱法和溶剂萃取法相结合的方法精制，得到车前子提取物；所制得的车前子提取物中环烯醚萜类成分质量百分含量在50％以上，方法简单，具有工业应用前景。

Description

一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法

技术领域

本发明涉及天然药物技术领域。具体涉及一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法。

背景技术

车前子是我国传统药材之一，始见于《诗经》，药用始载于《神农本草经》并被列为药中上品，又名：当道、牛遗、蛤蟆衣。此外，还有称车前菜、牛舌草、车轮菜、猪耳草等。车前子为车前科植物平车前(Plantago depressa Willd.)，又称小粒车前或车前(Plantago asiatica Linn.)，又称大粒车前的干燥种子，在全国各地均有分布，资源广泛。具有利水通淋、渗湿止泻、清肝明目、清热化痰的作用。车前子中含大量粘液质(多糖类化合物)及车前子酸、胆碱、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白质、微量元素等。含有黄酮类化合物：主要有木犀草素、高车前苷、车前苷等。三萜类化合物：主要有熊果酸、齐墩果酸等。挥发油：主要有2，6-二叔丁基对甲酚和3-叔丁基-4-羟基茴香醚等。环烯醚苷类化合物如：桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸等；苯乙醇苷类化合物：毛蕊花糖苷等。

其中最具有开发前景的活性成分的就是环烯醚苷类化合物，包含京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷等。

现代研究表明，环烯醚萜类化合物具有防治高血压、提神、抗疲劳、增强免疫功能、抗肌肉骨骼老化、防癌抗癌、利肝保胆、预防性功能低下、增强记忆等优异功效。目前含京尼平及其衍生物的环烯醚萜类化合物的来源主要是从栀子和杜仲中提取得到。车前子与栀子、杜仲相比，对生长环境要求低，全国各地均有分布，来源广泛，价格低廉，药材中含量较高，从车前子提取环烯醚萜类活性具有更广阔的市场前景。但车前子成分复杂，很多化合物结构和性质相近，因此，从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的提取分离较为困难。目前尚未有报道从车前子中提取环烯醚萜类成分的方法。

发明内容

本发明提供了一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法，以及制备的富含环烯醚萜类的车前子提取物，车前子提取物中环烯醚萜类活性成分质量百分含量在50％以上。

本发明提供的从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法，包括以下步骤：

步骤1：将车前子粉碎，用第一极性溶剂提取1-4次或回流提取或超声提取或冷浸或渗漉提取，抽滤出提取液；提取液离心或抽滤，分离出上清液；所述第一极性溶剂是0-100％C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂；

步骤2：将上清液用色谱法或色谱法和溶剂萃取法相结合的方法进行精制，上清液过色谱后用洗脱溶剂洗脱，收集富含环烯醚萜类活性成分的流份，浓缩干燥，得车前子提取物，所述车前子提取物中环烯醚萜类化合物的质量百分含量为52％-88％；其中所述色谱为大孔吸附树脂色谱、聚酰胺色谱、正相硅胶或反相硅胶色谱或其组合。

作为优选，所述第一极性溶剂为50-95％C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂。

更优选地，所述C1-C6烷基醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇或它们组成的混合溶剂。

作为优选，所述洗脱溶剂为水、C1-C6烷基醇、卤代烃、醚类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或其两种以上组成的混合溶剂。

更优选地，所述洗脱溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯，或者所述洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、水两者以上组成的混合溶剂。

作为优选，步骤1所述用第一极性溶剂提取为每次加4-20BV的第一极性溶剂在0℃至溶剂回流的温度下提取。

作为优选，步骤1提取液在分离上清前进行浓缩处理，优选浓缩为至提取液与车前子原料的体积质量比以ml/g计为0.1-1∶10-1。

作为优选，步骤1所述用第一极性溶剂提取温度范围为室温至溶剂回流的温度。

作为优选，所述含酸或碱的上述溶剂中所述酸或碱为强酸、强碱或弱酸、弱碱，优选为0.5％HCL、1％醋酸、0.5％NaOH、或1％的Na₂CO₃。

本发明所述从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法，根据对提取物环烯醚萜类活性成分含量的不同要求，可在色谱法前或后，与溶剂萃取法结合进行精制。溶剂萃取法所用萃取溶剂选自卤代烃、醚类溶剂、酯类溶剂或其两者以上组成的混合溶剂。更优选地，其中所述萃取溶剂为乙酸乙酯、氯仿、正丁醇。二氯甲烷、三氯甲烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁醚、乙酸乙酯、甲酸乙酯或其两者以上的混合物，更优选为其中优选为乙酸乙酯或氯仿或正丁醇。

本发明所述方法制备的车前子提取物，其中环烯醚萜类活性成分质量百分含量在50％以上，优选为52％-88％，更优选在75％以上，环烯醚萜类活性成分主要成分为京尼平苷酸(Geniposidic acid)，其结构如下所示：

本发明提供的制备方法中，富含环烯醚萜类活性成分的流份通过薄层层析(TLC)、紫外(UV)、高压液相色谱(HPLC)等方法进行检测，优选用HPLC进行检测。本发明得到的车前子提取物中环烯醚萜类活性成分总含量是通过紫外(UV)方法检测的。按照上述方法得到的车前子提取物中环烯醚萜类化合物总含量为50％以上。

本发明提供的一种制备环烯醚萜类活性成分的方法，通过独特的提取、精制工艺可以得到富含环烯醚萜类成分的车前子提取物，其中大孔吸附树脂法精制适合于工业化生产。制得的车前子提取物具有高含量环烯醚萜类化合物，其质量百分含量在50％以上，优选质量百分含量为52％-88％，具有良好的应用前景。

具体实施方式

本发明公开了一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入70％乙醇，超声(频率80KHz)提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到经预处理过的HP-20型大孔树脂柱中，用水、5％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类的洗脱液(水洗和5％乙醇洗脱部分)，合并，浓缩至稠膏，真空干燥，得到车前子总环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为52％。

实施例2：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g用70％乙醇加热回流提取，每次以4倍的液固比加入70％乙醇(含0.5％HCl)，第一次回流2h，第二次和第三次回流1h。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述滤液以1BV/h的流速加入到预处理过的HP-20型大孔树脂柱中，用水、5％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类的水洗和5％乙醇部分，合并浓缩至一定体积，用正丁醇萃取，回收正丁醇，浓缩至浸膏，真空干燥，得到车前子总环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为65％。

实施例3：

(1)提取：将车前子用水蒸气软化，烘干，粉碎，过筛，称取处埋后的车前子粉末1000g，采用水煎提取，以40倍的液固比加入去离子水，每次提取2h，重复处理3次，将提取液过滤，合并，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：以2BV/h的流速将上述滤液加入到预处理过的聚酰胺的柱中，再将从聚酰胺柱流出的母液和水洗液以1BV/h的流速加入到预处理过的HP-20型大孔吸附树脂，用水、5％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类的水洗和5％乙醇洗脱部分，合并，减压浓缩、真空干燥得到车前子总环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为56.7％。

实施例4：

(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入60％乙醇室温浸提4次，每次24h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述待上柱滤液以2BV/h的流速加入到预处理过的ADS-8柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用10％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集水洗部分和10％洗脱部分，合并，浓缩至一定体积，用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，真空干燥即得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为60.2％。

实施例5：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用60％乙醇(含0.5％NaOH)加热回流提取4次，每次以10倍的液固比加入60％乙醇(含0.5％NaOH)，第一次回流2h，后三次回流1h。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：以2BV/h的流速将上述滤液加入到预处理过的聚酰胺的柱中，再将从聚酰胺柱流出的母液和水洗液用正丁醇萃取，回收溶媒正丁醇，浓缩膏与硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，乙酸乙酯-甲醇梯度(20∶1-1∶1)洗脱，收集富含的环烯醚萜类流份(乙酸乙酯-甲醇为3∶1)，合并，减压浓缩，真空干燥即得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为82％。

实施例6：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入60％甲醇，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取4次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述待上柱滤液以3BV/h的流速加入到乙醇处理过的聚酰胺柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集水洗部分和5％洗脱部分，合并，浓缩至一定体积，用甲酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，真空干燥即得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为58％。

实施例7：

(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入95％乙醇室温浸提2次，每次24h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏。

(2)精制：浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色谱柱，氯仿-甲醇(10∶1)洗脱后，再用氯仿-甲醇(5∶1)洗脱，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类化合物的流份(氯仿-甲醇比为5∶1部分)，合并，减压浓缩，干燥得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为72％。

实施例8：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入丙酮，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取2次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将浓缩液通过聚酰胺柱，流出液和第一倍水洗液用正丁醇萃取，回收溶剂得正丁醇萃取物；萃取物过反相硅胶(C-18)柱，水和10％乙醇溶液洗脱后，再用50％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类化合物的10％流份，合并，减压浓缩，干燥得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为88％。

实施例9：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用70％异丙醇加热回流提取，以20倍的液固比加入70％异丙醇，回流提取1次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至800ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将浓缩液通过反相硅胶(C-18)柱，水和10％乙醇溶液洗脱后，再用50％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类化合物的10％流份，合并，减压浓缩，干燥得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为72％。

实施例10：

(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入50％丙酮室温浸提3次，每次24h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏。

(2)精制：浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色谱柱，氯仿-95％乙醇(10∶1)洗脱后，再用氯仿-95％乙醇(5∶1)洗脱，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类化合物的流份(氯仿-95％乙醇比为5∶1部分)，合并，减压浓缩，干燥得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为65％。

实施例11：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用50％乙醇加热回流提取，以10倍的液固比加入50％乙醇，回流提取3次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述待上柱滤液以0.5BV/h的流速加入到乙醇处理过的D101柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集水洗部分和5％洗脱部分，合并，浓缩至一定体积，用甲酸乙酯萃取，减压回收甲酸乙酯，真空干燥即得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为62％。

实施例12：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入50％乙醇(含1％醋酸)，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色谱柱，乙酸乙酯-95％乙醇(10∶1)洗脱后，再用乙酸乙酯-95％乙醇(3∶1)洗脱，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类化合物的流份(氯仿-95％乙醇比为3∶1部分)，合并，减压浓缩，干燥得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为68％。

实施例13：

(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入20倍去离子水(含0.5％HCL)室温浸提3次，每次24h。合并提取液，浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到乙醇处理过的HPD-100柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和75％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集水洗部分和5％洗脱部分，合并，浓缩至一定体积，用二氯甲烷萃取，减压回收二氯甲烷，真空干燥即得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为61％。

实施例14：

(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用水煎提取，以40倍的液固比加入去离子水，每次提取1h，重复处理3次，将提取液过滤，合并，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：以2BV/h的流速将上述滤液加入到预处理过的聚酰胺的柱中，再将从聚酰胺柱流出的母液和水洗液以1BV/h的流速加入到乙醇处理过的AB-8型大孔吸附树脂，用水、10％、30％和70％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类的10％乙醇洗脱部分，合并，减压浓缩、真空干燥得到车前子总环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为65％。

实施例15：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用去离子水超声波提取，以20倍的液固比加入去离子水，在温度30℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：上述滤液用甲酸乙酯萃取，回收溶剂得甲酸乙酯提取物。将甲酸乙酯提取物用水溶解，滤过，将滤液以0.5BV/h的流速通过反相硅胶柱(C-18)，用水和10％醇溶液洗脱后，再用50％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含京尼平苷酸的10％流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为75％。

实施例16：

(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入20倍的30％乙醇(含1％Na₂CO₃)室温浸提2次，每次24h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述待上柱滤液以0.5BV/h的流速加入到乙醇处理过的D101柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集水洗部分和5％洗脱部分，合并，浓缩至一定体积，用乙醚萃取，减压回收乙醚，真空干燥即得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为58％。

实施例17：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用30％乙醇加热回流提取，以15倍的液固比加入30％乙醇，回流提取3次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：以2BV/h的流速将上述滤液加入到预处理过的聚酰胺的柱中，再将从聚酰胺柱流出的母液和水洗液用正丁醇萃取，回收溶媒正丁醇，浓缩膏与硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，甲酸乙酯-95％乙醇(9∶1)洗脱后，再用甲酸乙酯-95％乙醇(4∶1)梯度洗脱，收集富含的环烯醚萜类(甲酸乙酯-95％乙醇为4∶1)流份，合并，减压浓缩，真空干燥即得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为79％。

实施例18：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以15倍的液固比加入30％乙醇，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到经预处理过的AB-8型大孔树脂柱中，用水、10％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类的洗脱液(10％乙醇洗脱部分)，浓缩至稠膏，真空干燥，得到车前子总环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为58％。

实施例19：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用45％乙醇加热回流提取，以15倍的液固比加入45％乙醇，回流提取3次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：以1BV/h的流速将上述滤液加入到预处理过的HP-20的柱中，用水、10％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，再将从HP-20柱流出的水洗液和10％乙醇部分浓缩至一定体积用正丁醇萃取，回收溶媒正丁醇，浓缩膏与硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，乙酸乙酯-甲醇(9∶1)洗脱后，再用乙酸乙酯-甲醇(3∶1)梯度洗脱，收集富含的环烯醚萜类(乙酸乙酯-甲醇为3∶1)流份，合并，减压浓缩，真空干燥即得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为82％。

实施例20：

(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以15倍的液固比加入45％乙醇，在温度30℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。

(2)精制：以2BV/h的流速将上述滤液加入到预处理过的聚酰胺的柱中，再将从聚酰胺柱流出的母液和水洗液用正丁醇萃取，回收溶媒正丁醇，将正丁醇提取物用水溶解，滤过，滤液以0.5BV/h的流速通过反相硅胶柱(C-18)，用水和10％甲醇溶液洗脱后，再用50％浓度的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含环烯醚萜类的10％甲醇流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子环烯醚萜类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中环烯醚萜类化合物含量为80％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种从车前子中提取环烯醚萜类活性成分的方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一极性溶剂为50-95％C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述C1-C6烷基醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇或它们组成的混合溶剂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为水、C1-C6烷基醇、卤代烃、醚类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或其两种以上组成的混合溶剂。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或甲酸乙酯。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、水两者以上组成的混合溶剂。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述用第一极性溶剂提取为每次加4-20BV的第一极性溶剂在0℃至溶剂回流的温度下提取。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1提取液在分离上清前进行浓缩处理，优选浓缩为至提取液与车前子原料的体积质量比以ml/g计为0.1-1∶10-1。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述用第一极性溶剂提取温度范围为室温至溶剂回流的温度。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含酸或碱的上述溶剂中所述酸或碱为强酸、强碱或弱酸、弱碱，优选为0.5％HCL、1％醋酸、0.5％NaOH、或1％的Na₂CO₃。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中溶剂萃取法所用萃取溶剂选自卤代烃、醚类溶剂、酯类溶剂或其两者以上组成的混合溶剂。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，其中所述萃取溶剂为乙酸乙酯、氯仿、正丁醇。二氯甲烷、三氯甲烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁醚、乙酸乙酯、甲酸乙酯或其两者以上的混合物。