CN102060893A

CN102060893A - 从油橄榄叶中同步制备橄榄苦苷和橄榄总黄酮的工艺方法

Info

Publication number: CN102060893A
Application number: CN2009101175888A
Authority: CN
Inventors: 邸多隆; 李辰; 王晓飞
Original assignee: Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS
Current assignee: Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS
Priority date: 2009-11-13
Filing date: 2009-11-13
Publication date: 2011-05-18

Abstract

本发明公开了一种从油橄榄叶中同步制备橄榄苦苷和橄榄总黄酮的工艺方法。本发明以油橄榄叶为原料，经回流或多效提取、大孔吸附树脂串联吸附、梯度解吸附，解吸液回收有机溶剂后，喷雾干燥，分别得到高含量的橄榄苦苷和橄榄总黄酮提取物产品。本发明的特点在于可同步制备出高含量的橄榄苦苷和橄榄总黄酮提取物，生产成本低廉，绿色环保，工艺路线简单。

Description

从油橄榄叶中同步制备橄榄苦苷和橄榄总黄酮的工艺方法

技术领域

本发明属于天然产物化学领域，涉及一种从油橄榄叶中同步制备高含量橄榄苦苷和橄榄总黄酮提取物的工艺方法。

背景技术

油橄榄(Olea europaea L.)为木犀科木犀榄属阔叶植物，又名洋橄榄、齐敦果，我国分布有15种，主要分布在甘肃、云南、四川、贵州等地。橄榄苦苷和橄榄总黄酮是油橄榄叶中最主要的活性成分之一，具有抗氧化、抗菌等功效，其提取物在功能食品和药物中得到广泛应用。

油橄榄叶中主要活性成分为多酚化合物，主要包括裂环烯醚萜类和黄酮类。橄榄苦苷(oleuropein)是裂环烯醚萜类中最具有代表性的化合物，它除具有抗氧化活性能力外，还具有降血压、抗菌等作用。从油橄榄叶中分离得到的黄酮类化合物(flavonoids)有20余种，最具代表性的是木樨草苷、芹菜苷，具有抗氧化、降血脂、镇痛、抗心律失常等生理活性，由于其无法由人体直接合成，只能从外界摄入，使得从植物中提取分离纯度高、活性强的天然黄酮类化合物受到越来越多的关注。研究表明：每100g油橄榄叶中，含抗氧化成分6000～9000mg，而橄榄果中的含量为1000～4000mg，橄榄油中仅有2～50mg，橄榄苦苷和黄酮等多酚类化合物在油橄榄叶中的含量明显高于果实和果油。

近年来，国内外学者对橄榄苦苷和黄酮的不同提取纯化方法进行了有益探索。其提取方法除微波辅助提取法、超声波提取法、超临界CO₂萃取法、微波提取法和索式提取法等常规提取方法外，还有丝纤蛋白吸附法、聚酰胺柱层析法、大孔吸附树脂法等。但上述方法存在制得提取物中橄榄苦苷和黄酮含量较低、提取率不高、生产成本较高、生产周期较长等不足。目前，国外已开发出标准油橄榄叶提取物，其橄榄苦苷含量为15～30％，黄酮含量为5％左右。国内产品中橄榄苦苷和黄酮等多酚含量较低，如橄榄苦苷含量仅为3～5％，明显低于国外要求的标准提取物含量。

发明内容

针对上述现有技术中存在的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种从油橄榄叶中同步制备高含量橄榄苦苷(20-90％)和总黄酮(5-30％)提取物的工艺。

本发明技术方案如下：

本发明以油橄榄叶为原料，经回流或多效提取、大孔吸附树脂串联吸附、梯度解吸附，解吸液回收有机溶剂后，喷雾干燥，分别得到高含量的橄榄苦苷和橄榄总黄酮提取物产品。

本发明采用回流提取或多效提取法，以一种或不同比例的两种混合溶剂为提取液，从油橄榄叶中提取有效成分。将提取液静置沉降或过滤后，回收提取液中有机溶剂，残液中加入水混匀得到中间产物I；中间产物I经串联大孔吸附树脂柱/塔分离纯化后，回收解吸液中有机溶剂，残液中加入适量水混匀得到中间产物II；将中间产物II再上串联大孔吸附树脂柱/塔进行二次吸附，以一定比例的一种或几种混合溶剂解吸附，分别收集解吸液，回收解吸液溶剂后，残液经浓缩和喷雾干燥即得提取物浸膏III和浸膏IV。

一种从油橄榄叶中同步制备橄榄苦苷和橄榄总黄酮的工艺方法，其特征在于该方法步骤如下：

A提取：将干燥的油橄榄叶，加入8～20倍量(mL/g)溶剂，经回流或多效提取2～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，提取液经静置沉降或过滤后，清液减压浓缩或薄膜蒸发回收溶剂，残液中加入水，使其浓度为每升相当于油橄榄叶0.06～0.40Kg，充分混匀，即得中间产物I，上串联大孔吸附树脂柱或塔进行一次吸附和解吸附；

B树脂柱或塔一次分离纯化：将中间产物I上串联大孔吸附树脂柱或树脂塔进行一次吸附；吸附完毕后，树脂柱用4～15BV水洗脱以除去水溶性杂质；弃去洗脱液，在树脂柱上再加入8～20BV的混合溶剂进行解吸附，合并解吸液；经静置沉降或过滤后，清液减压浓缩或薄膜蒸发回收有机溶剂，残液中加入适量水，使其浓度为每升相当于油橄榄叶0.06～0.20Kg，充分混匀，即得中间产物II，上串联大孔吸附树脂柱或树脂塔进行二次吸附和解吸附；

C树脂柱或塔二次分离纯化：将中间产物II上串联大孔吸附树脂柱或树脂塔进行二次吸附；吸附完毕后，用4～15BV水洗脱以除去水溶性杂质；弃去水解吸液，在树脂柱上加入不同比例的混合溶剂进行梯度解吸附，分别收集不同比例混合溶剂解吸得到的解吸液，经静置沉降或过滤后，清液减压浓缩或薄膜蒸发回收溶剂，残液进行浓缩和喷雾干燥，可制得橄榄总黄酮提取物浸膏III(总黄酮含量5％～30％)和橄榄苦苷提取物浸膏IV(橄榄苦苷含量20～90％)。

在提取步骤中，溶剂为水、乙醇以及丙酮中的一种，或两种或三种任意比例的组合。

在提取步骤中，优选的溶剂为乙醇水溶液。

在提取步骤中，大孔吸附树脂柱或塔的内径与柱高比为1∶10～15。

在B和C步骤中，串联树脂柱由两根或三根树脂柱(I柱、II柱、III柱)串联而成。

所述的大孔吸附树脂柱在使用前，先用乙醇浸泡，再用乙醇洗至洗涤液中加3倍体积的水无白色浑浊出现，再用水洗。

在B和C步骤中，一次吸附和二次吸附的流速为3～30BV/h，流出串联树脂柱或树脂塔的吸附残液可再循环吸附1～2次后弃去。

在B和C步骤中，提取液上柱吸附后再以水解吸的流速为3～30BV/h。

在B和C步骤中，一次解吸附和二次解吸附的流速为3～30BV/h。

在B步骤中，一次解吸液由水和乙醇或水和丙酮组成。

在C步骤中，二次解吸液为乙醇、丙酮、乙酸甲酯以及乙酸乙酯中的一种，或两种以上的任意比例组合。

在C步骤中，大孔吸附树脂与油橄榄叶的质量比为0.5～2∶1。

本发明的大孔吸附树脂可再生使用，当吸附能力下降至新树脂70％时可考虑废弃，一般可再生使用10次以上。

所述的从油橄榄叶同步得到的橄榄苦苷提取物产品(浸膏IV)中橄榄苦苷含量20～90％，总浸膏得率大于8％；橄榄总黄酮提取物产品(浸膏III)中总黄酮含量5％～30％，总浸膏得率大于3％。

本发明与已有方法技术相比，其特点在于可同步制备出高含量的橄榄苦苷和橄榄总黄酮提取物，生产成本低廉，绿色环保，工艺路线简单。

橄榄苦苷提取物产品中橄榄苦苷含量用高效液相色谱法(HPLC)测定；橄榄总黄酮提取物产品中总黄酮含量用紫外分光光度计法(UV)测定。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明，但实施例仅用于说明，并不能限制本发明的范围。

实施例1：

称取阴干的油橄榄叶20g，置500mL圆底烧瓶中，加入60％甲醇240mL，于水浴常压回流提取1h，倾出提取液。料渣中再加入60％甲醇200mL，常压回流提取1h，倾出提取液，料渣弃去。合并两次提取液，过滤。滤液减压浓缩回收甲醇后，加水并定容至250mL，使其浓度为每升相当于油橄榄叶0.08Kg，充分混匀，即得中间产物I。

称取聚丙烯酸酯类大孔吸附树脂2份，每份7g，湿法分别装入两根内径1.0cm、柱高12cm(径高比1∶12)的玻璃柱中(1BV＝4mL)，两柱串联(I柱、II柱)。向I柱、II柱中分别加入95％乙醇浸泡24h后，以95％乙醇洗至加入3倍体积的水后洗涤液无白色混浊出现，再用水洗至无醇味备用，回收乙醇。取中间产物I 100mL上I柱，以15BV/h的流速吸附1次，流出液进II柱再吸附1次，弃去吸附残液。向吸附后的I柱、II柱中分别加入10BV的水，以20BV/h的流速进行水洗除杂，弃去水解吸液。然后向水洗后的I柱、II柱中分别加入12BV的50％乙醇溶液，以15BV/h的流速进行解吸，解吸液回收乙醇，残液中加入适量水，使其浓度为每升相当于油橄榄叶0.06Kg，充分混匀，即得中间产物II。取中间产物II加入上述串联树脂柱中进行二次吸附，以丙酮和乙醇混合溶剂进行梯度解吸，分别收集解吸液，经静置沉降或过滤后，清液减压浓缩或薄膜蒸发回收有机溶剂，残液进行浓缩和喷雾干燥，由丙酮-乙醇(7∶1，v/v)混合溶剂解吸附制得浸膏III(总黄酮含量21％)，由丙酮-乙醇(20∶1，v/v)混合溶剂解吸附制得浸膏IV(橄榄苦苷含量90％)。从油橄榄叶到浸膏III和浸膏IV的总浸膏得率分别为4.2％和10.5％。

实施例2：

称取阴干的油橄榄叶1Kg，置多效提取罐中，加入50％乙醇10L提取1.5h，倾出提取液。料渣中再加入50％乙醇8L提取1.5h，倾出提取液，料渣弃去。合并两次提取液，过滤。滤液经薄膜蒸发回收乙醇后，加水定容至5L，使其浓度为每升相当于油橄榄叶0.2Kg，充分混匀，即得中间产物I。

称取聚丙烯酸酯类大孔吸附树脂2份，每份0.8Kg，湿法分别装入两根内径5.0cm、柱高50cm(径高比1∶10)的树脂柱中(1BV＝0.98L)，两柱串联(I柱、II柱)。向I柱、II柱中分别加入95％乙醇浸泡24h后，以95％乙醇洗至加入3倍体积的水后洗涤液无白色混浊出现，再用水洗至无醇味备用，回收乙醇。取中间产物I4L上I柱，以20BV/h的流速吸附，流出液上II柱再吸附，循环吸附2次，弃去吸附残液。向吸附后的I柱、II柱中分别加入10BV的水，再以25BV/h的流速进行水洗除杂，弃去水解吸液。然后向水洗后的I柱、II柱中分别加入14BV的60％丙酮溶液，以20BV/h的流速进行解吸，解吸液回收丙酮。残液中加入适量水，使其浓度为每升相当于油橄榄叶0.1Kg，充分混匀，即得中间产物II。取中间产物II加入上述串联树脂柱中进行二次吸附，以丙酮和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度解吸，分别收集解吸液，经静置沉降或过滤后，清液减压浓缩或薄膜蒸发回收有机溶剂，残液进行浓缩和喷雾干燥，由丙酮和乙酸乙酯(8∶1，v/v)混合溶剂解吸附制得浸膏III(总黄酮含量24％)，由丙酮和乙酸乙酯(18∶1，v/v)混合溶剂解吸附制得浸膏IV(橄榄苦苷含量88％)。从油橄榄叶到浸膏III和浸膏IV的总浸膏得率分别为3.5％和11.4％。

Claims

1.一种从油橄榄叶中同步制备橄榄苦苷和橄榄总黄酮的工艺方法，其特征在于该方法步骤如下：

C树脂柱或塔二次分离纯化：将中间产物II上串联大孔吸附树脂柱或树脂塔进行二次吸附；吸附完毕后，用4～15BV水洗脱以除去水溶性杂质；弃去水解吸液，在树脂柱上加入不同比例的混合溶剂进行梯度解吸附，分别收集不同比例混合溶剂解吸得到的解吸液，经静置沉降或过滤后，清液减压浓缩或薄膜蒸发回收溶剂，残液进行浓缩和喷雾干燥，可制得橄榄总黄酮提取物浸膏III和橄榄苦苷提取物浸膏IV。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在提取步骤中，溶剂为水、乙醇以及丙酮中的一种，或两种或三种任意比例的组合。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于溶剂为乙醇水溶液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在提取步骤中，大孔吸附树脂柱或塔的内径与柱高比为1∶10～15。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在B和C步骤中，串联树脂柱由两根或三根树脂柱串联而成。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在B和C步骤中，一次吸附和二次吸附的流速为3～30BV/h，流出串联树脂柱或树脂塔的吸附残液可再循环吸附1～2次后弃去。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在B和C步骤中，提取液上柱吸附后再以水解吸的流速为3～30BV/h。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在B和C步骤中，一次解吸附和二次解吸附的流速为3～30BV/h。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在B步骤中，一次解吸液由水和乙醇或水和丙酮组成。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在C步骤中，二次解吸液为乙醇、丙酮、乙酸甲酯以及乙酸乙酯中的一种，或两种以上的任意比例组合。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在C步骤中，大孔吸附树脂与油橄榄叶的质量比为0.5～2∶1。