CN104232509A - 一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1及其应用。所述菌株从红树林植物木榄(Bruguiera gymnorrhiza)体内分离得到,为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Bg-1,该菌株于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCC No.9073。该菌株可分泌产生吲哚乙酸以及抗菌蛋白,具有溶磷、促进植物生长以及防治病害的作用,可用于促进植物生长和防治病害,在农业生产上可应用于促进农作物生长、提高农作物产量和多种病原菌的防治。
Description
技术领域
本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1及其应用,属于农业生物技术领域,具有促进植物生长、防治植物病害的作用,以及其在农业生产上的应用。
背景技术
植物内生菌是指一生或一生中的某个阶段能进入活体植物组织内,能够在植物细胞间隙或细胞内定殖,正常情况下不引起寄主植物组织结构发生明显变化,并与寄主植物建立和谐联合关系的一类微生物。研究结果表明,几乎所有的健康植物体内均含有大量的内生微生物。这些内生菌不仅将宿主植物作为其栖息场所,而且对宿主植物具有促生、防病、固氮等生物学作用,同时内生菌还是将外源基因导入植物体内的良好载体;同时内生菌由于能进入植物体内定殖,可以受到植物体的保护,免受外部环境因子的影响。因此,普遍认为植物内生菌是植物病虫害生物防治制剂及生物肥料研制不可多得的天然资源菌。
红树林是生长在陆地过渡到海洋地区、可海陆两栖的特殊森林类群,在海岸防护、净化沿海环境、维护沿海湿地生物多样性、保护海岸生态环境等方面具有重大作用,是鸟类、鱼虾蟹贝类等生物的栖息地,也是海洋微生物生长繁衍的温床。研究结果表明,红树林植物体内、体外还有大量共生、附(内)生的海洋微生物,且由于生境特殊,这些红树林共生、附(内)生的菌株也具有其独特性,已从这些微生物中分离到大量具有抗菌、抗肿瘤等生物学活性的新型化合物。如中国发明专利CN102181370A公开了一种南海红树林内生真菌BL321,其所产部分新型化合物具有明显抗肿瘤活性。何红等在《微生物学通报》发表的《红树林内生细菌的分离及拮抗菌筛选》论文证明,红树林植物体内含有大量的海洋细菌,其中约有40%以上的菌株对植物多种病原菌具有较强拮抗作用,60%以上的菌株对植物具有促进生长作用。因此,红树林植物内生细菌具有重要的研究价值和广阔的应用前景。
发明内容
本发明提出了一株对植物具有促进生长、防病作用的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,能够在植物体内定殖,对植物具有促进生长、防病的作用。
本发明的技术方案是这样实现的:
一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株Bg-1,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期:2014年4月18日,保藏号为CGMCC No.9073。
进一步,所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1为从木榄体内分离得到的解淀粉芽孢杆菌菌株。
进一步,所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1具有分泌吲哚乙酸、分泌抑制植物病原菌的抗菌蛋白的作用。
进一步,所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1能进入植物体内定殖、传导。
进一步,所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在促进植物生长、防病上的应用。
进一步,所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在农业生产上的应用。
进一步,所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在促进辣椒生长以及防治辣椒青枯病菌、辣椒疫霉菌、辣椒炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、芒果炭疽病菌和水稻纹枯病菌上的应用。
进一步,所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在香蕉枯萎病的防治的应用包括以下步骤:取所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1菌株PBY培养基28℃下的菌株培养液,于香蕉移栽时浇灌于香蕉苗根部,每30天浇灌菌株培养液一次,连续浇灌4-5次。
进一步,所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在促进辣椒生长上的应用包括以下步骤:取本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1菌株在PBY培养基28℃下培养的菌株培养液,浇灌于辣椒苗根部。
进一步,所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在辣椒青枯病的防治上的应用包括以下步骤:取本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在PBY培养基28℃下的菌株培养液,辣椒移栽时浇灌于辣椒苗根部,30天后再浇灌一次。
本发明的有益效果:
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,通过用利福平和拮抗病原真菌双标记进行内生定殖测定,所述菌株可在植株体内定殖,从植株体内回收分离的菌株,在含利福平培养基上出现于原始菌株相同特征和特性的菌落。本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1可分泌产生吲哚乙酸,具有溶磷的作用,对植物具有良好的生长促进作用,可用于农业生产,具有促进植物生长、提高产量的作用。本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,可分泌产生抗菌蛋白,对植物病原菌具有抑制作用,例如对辣椒青枯病菌、辣椒疫霉菌、辣椒炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、芒果炭疽病菌、水稻纹枯病菌等多种植物病原菌均有抑制作用,可用于农业生产上植物病害的防治。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1的分离和保藏
选用长势良好无病的红树林植物木榄(Bruguiera gymnorrhiza)植株,取其根、茎、叶,消毒后,加无菌海水碾碎,静置后取溶液在营养琼脂培养基(Nutrient Agar,简称NA)培养基25℃下培养48-72小时,挑选单菌落NA培养基28℃下培养24小时后,进行室内拮抗植物病原菌和促进生长的测试,筛选出具有促进植物生长、拮抗植物病原菌作用的菌株Bg-1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCC No.9073。本发明中,所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在NA培养基上菌落呈淡乳黄色,圆形,中间隆起,不透明,表面粗糙干燥,边缘有细齿,菌体为短直杆状,革兰氏染色阳性,能产生芽孢;芽孢椭圆形,中生或近中生。
NA培养基含有如下组分:牛肉浸膏0.3g,酵母膏0.1g,蛋白胨0.5g,葡萄糖1.0g,琼脂2.0g,蒸馏水1000mL,PH值7.0-7.2。
实施例2
本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1培养
将本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1接种于试管斜面上,培养基为NA培养基,25-28℃下黑暗培养24-36小时,获得试管菌种。
将试管菌种接种到PBY培养基中,28℃下恒温振荡培养24-36小时候,按1-5%接种量转接与PBY培养基中,28℃下恒温振荡培养36-48小时候的培养液即可制成菌株培养液。也可以将试管菌种转接至发酵培养基为黄豆粉培养基的发酵罐中进行发酵生产菌株培养液。
PBY培养基含有以下组分:牛肉膏0.5g,蛋白胨1.0g,NaCl0.5g,酵母膏0.5g,葡萄糖1.0g,蒸馏水1000mL,PH值7.2-7.5。
黄豆粉培养基含有以下组分:黄豆粉2.5g,淀粉1.0g,葡萄糖0.5g,KH2PO40.05g,K2HPO40.05g,CaCO30.02g。
实施例3
本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在辣椒体内及根际土壤中的定殖
通过诱导菌株Bg-1对利福平的抗性,取利福平标记的Bg-1菌株与PBY培养基中28℃下培养18-24小时,取菌株培养液浇灌于辣椒苗根部,处理后用含利福平培养基回收,结果表明,菌液处理后36天仍可从辣椒根、茎、叶及根际土壤中回收到该菌株,说明该菌株可在辣椒体内及根际土壤中定殖,定殖时间达36天以上。
实施例4
本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株在香蕉体内及根际土壤中的定殖
取抗利福平标记的Bg-1菌株于PBY培养基中28℃下培养18-24小时,取菌株培养液浇灌于香蕉苗根部,处理后用含利福平培养基回收结果表明,菌株处理后30天仍可从香蕉根及根际土壤中回收到该菌株,说明该菌株可在香蕉体内及根际土壤中定殖,定殖时间达30天以上。
实施例5
本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1对辣椒促进生长作用
取本发明所述的Bg-1菌株在PBY培养基28℃下培养的菌株培养液,浇灌于两片子叶充分展开的辣椒苗根部,以清水为对照,每个处理重复3次,处理25天取样测定结果见表1。
表1 Bg-1菌液灌根处理对辣椒促生作用测定结果
由表1可知,菌株培养液处理的辣椒株高、茎粗、鲜重等均比对照组有显著增加,说明本发明所述的Bg-1菌株培养液对辣椒具有鲜重的促进生长作用,促生机理测定表明,所述Bg-1菌株可分泌产生吲哚乙酸,具有溶磷作用。
实施例6
本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株对香蕉枯萎病的防治作用
取本发明所述的Bg-1菌株PBY培养基28℃下的菌株培养液,于香蕉移栽时浇灌于香蕉苗根部,以清水处理为对照,每个月浇灌菌株培养液一次,连续浇4-5次,对香蕉枯萎病的防治效果为45-70%以上。
实施例7
本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1对辣椒青枯病的防治作用
取本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在PBY培养基28℃下的菌株培养液,辣椒移栽时浇灌于辣椒苗根部,以清水处理为对照。30天后再浇灌菌株培养液,处理后70天测定效果。结果表明,菌株培养液对辣椒青枯病的防治效果为53.8%,辣椒增产15.0%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCCNo.9073。
2.根据权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1为从木榄体内分离得到的解淀粉芽孢杆菌菌株。
3.根据权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1具有分泌吲哚乙酸和分泌抑制植物病原菌的抗菌蛋白的作用。
4.根据权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1,其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1能进入植物体内定殖、传导。
5.权利要求1至4任一项所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在促进植物生长和防病上的应用。
6.权利要求1至4任一项所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在农业生产上的应用。
7.根据权利要求6所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株株Bg-1在农业生产上的应用,其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在促进辣椒生长以及防治辣椒青枯病菌、辣椒疫霉菌、辣椒炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、芒果炭疽病菌和水稻纹枯病菌上的应用。
8.根据权利要求7所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在农业生产上的应用,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在香蕉枯萎病的防治的应用包括以下步骤:取所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1菌株PBY培养基28℃下的菌株培养液,于香蕉移栽时浇灌于香蕉苗根部,每30天浇灌菌株培养液一次,连续浇灌4-5次。
9.根据权利要求7所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在农业生产上的应用,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在促进辣椒生长上的应用包括以下步骤:取本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1菌株在PBY培养基28℃下培养的菌株培养液,浇灌于辣椒苗根部。
10.根据权利要求7所述的一种解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在农业生产上的应用,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在辣椒青枯病的防治上的应用包括以下步骤:取本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株Bg-1在PBY培养基28℃下的菌株培养液,辣椒移栽时浇灌于辣椒苗根部,30天后再浇灌一次。
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