CN111647518A - 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法 - Google Patents
一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111647518A CN111647518A CN201911366601.3A CN201911366601A CN111647518A CN 111647518 A CN111647518 A CN 111647518A CN 201911366601 A CN201911366601 A CN 201911366601A CN 111647518 A CN111647518 A CN 111647518A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- strain
- liquid
- culture medium
- bacillus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims abstract description 38
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 claims abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 244000250392 Cardamine diphylla Species 0.000 claims description 23
- 235000001250 Cardamine diphylla Nutrition 0.000 claims description 23
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 18
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 13
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 13
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 13
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 13
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 9
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 9
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 9
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 claims description 5
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 claims description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 abstract description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 2
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 13
- 241000722363 Piper Species 0.000 description 13
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 13
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 13
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 9
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 101150013736 gyrB gene Proteins 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150012629 parE gene Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 235000002568 Capsicum frutescens Nutrition 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 3
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 239000005730 Azoxystrobin Substances 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N azoxystrobin Chemical compound CO\C=C(\C(=O)OC)C1=CC=CC=C1OC1=CC(OC=2C(=CC=CC=2)C#N)=NC=N1 WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 239000010151 yanghe Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-N 2-dehydro-D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)C(O)=O VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-N 0.000 description 1
- IZSRJDGCGRAUAR-MROZADKFSA-M 5-dehydro-D-gluconate Chemical compound OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O IZSRJDGCGRAUAR-MROZADKFSA-M 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N D-Arabitol Natural products OC[C@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-UHFFFAOYSA-N D-Erythrose Natural products OCC(O)C(O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-IUYQGCFVSA-N D-erythrose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-IUYQGCFVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-SVZMEOIVSA-N D-fucopyranose Chemical compound C[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-OEXCPVAWSA-N D-tagatose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-OEXCPVAWSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010056474 Erythrosis Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-IMJSIDKUSA-N L-arabinitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 241000283966 Pholidota <mammal> Species 0.000 description 1
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N aldehydo-L-xylose Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- 229930195726 aldehydo-L-xylose Natural products 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-STGXQOJASA-N alpha-D-lyxopyranose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-STGXQOJASA-N 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001511 capsicum annuum Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000003967 crop rotation Methods 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003958 fumigation Methods 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000010413 gardening Methods 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-ZFYZTMLRSA-N methyl alpha-D-glucopyranoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-ZFYZTMLRSA-N 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N methyl alpha-D-mannoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N 0.000 description 1
- ZBDGHWFPLXXWRD-JGWLITMVSA-N methyl beta-D-xylopyranoside Chemical compound CO[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZBDGHWFPLXXWRD-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- -1 pinsanose Chemical compound 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- CQRYARSYNCAZFO-UHFFFAOYSA-N salicyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1O CQRYARSYNCAZFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N turanose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法，由贝莱斯芽孢杆菌T1506的液体制剂制成微生物菌剂，其中贝莱斯芽孢杆菌T1506的活菌数大于21.0×108cfu/mL。制备方法包括如下步骤：(1)菌种活化；(2)种子液制备；(3)发酵培养；(4)检测发酵液中菌体和芽胞数量，待发酵液中成熟芽胞占到芽胞和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为T1506菌株的液体制剂。(5)将步骤4所得即为T1506菌株的液体制剂制成微生物制剂。本发明微生物菌剂对人、畜安全，没有环境污染；利用本发明方法防治辣椒根腐病不易产生抗药性；制备方法简单、成本低、使用简单。
Description
技术领域
本发明属于农业微生物领域，具体涉及一种用于防治辣椒根腐病的贝莱斯芽孢杆菌和含有该贝莱斯芽孢杆菌的微生物菌剂，以及它在防治辣椒根腐病上的应用。
背景技术
辣椒是我国重要的蔬菜和经济作物。辣椒根腐病是由真菌有丝分裂孢子类群链孢霉属腐皮链孢菌[Fusariumsolani(Mart.)App.etWoll.]引起的一种典型的土传病害。该病害主要危害辣椒基部和维管束，露地栽培、保护地栽培都可发病。春季多雨、梅雨期间发病严重，发病严重时常造成根系腐烂、植株枯死。辣椒在连坐过程中根腐病发生严重，轻者减产20- 30％，重着减产50％以上甚至绝产，严重影响了辣椒的产量和质量。近年来，由于种植结构的调整，合理轮作倒茬困难，严重威胁保护地辣椒的生产。因此，辣椒根腐病已成为我国辣椒生产可持续发展限制因素之一。
国内外对辣椒根腐病研究较少，土地消毒剂、熏蒸、不断换地移棚等防治方法操作麻烦且防效极有限，还限制了棚菜生产的发展。目前能够有效防治辣椒根腐病的化学药剂较少且使用混乱，不符合农业可持续发展的要求。
目前已有微生物具有抗辣椒根腐病菌的活性，芽孢杆菌(Bacilliussp)是一种受到广泛关注的生防细菌。以其分布广、易分离培养、能产生抗逆性较强的芽胞、贮藏期长和使用方便等特点，成为一种理想的生防微生物。国内外分别报道了具有生物防治作用的不同种的芽孢杆菌的生物学特征、定殖条件、抗菌物质理化特性等相关研究及其在不同作物不同部位的定殖情况，潜在的诱导植物产生抗病性及促进幼苗生长等方面的研究。因芽孢杆菌能产生内生芽胞，有极强的抗逆能力，相比其他类型的生防因子，更有利于菌剂的生产，在剂型加工环境中易存活、定殖与繁殖。因此，筛选对病原菌具有抑制作用的芽孢杆菌是防治有关植物病害的最有效方法之一。
发明内容
本发明目的在于提供一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂，具有高效、广谱杀菌活性优点，在防治辣椒根腐病上效果显著。
本发明通过以下技术方案实现：
贝莱斯芽孢杆菌T1506分类命名为：贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，己于2019年 08月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18449，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
利用上述贝莱斯芽孢杆菌T1506生产的微生物菌剂，贝莱斯芽孢杆菌T1506的活菌数大于21.0×108cfu/mL。其活性成分为贝莱斯芽孢杆菌T1506菌体和它的胞外代谢产物。
上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将低温保存的T1506菌株在LB平板培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，琼脂粉12-18g，水1000mL)上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4- 6g，氯化钠4-6g，琼脂粉12-18g，水1000mL)上25-35℃培养10-16小时，得活化的菌株；
(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mL LB液体培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，水1000mL)中，在25-35℃、摇床转速为150-220rpm的条件下培养10-16小时，得种子液；
(3)发酵培养：按照体积比为1-3％的比例将步骤(2)的种子液接入到玉米粉黄豆粉培养基(pH值为7.2)中，在温度为25-35℃、摇床转速为150-220rpm的条件下发酵培养40-50h，得发酵液；所述的玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉1.0-3.0％，黄豆粉1.0-3.0％，NaCl 0.1-1.0％，MnSO4·H2O 0.5-1.0％，其余为水；
(4)检测发酵液中菌体和芽胞数量，待发酵液中成熟芽胞占到芽胞和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为T1506菌株的液体制剂；
(5)将T1506菌株的液体制剂制成微生物菌剂，其贝莱斯芽孢杆菌T1506的活菌数大于21.0 ×108cfu/mL。
上述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基均按照常规方法制备。
上述的玉米粉黄豆粉培养基的制备方法，按照重量百分比将玉米粉、黄豆粉、NaCl和MnSO4·H2O混合，再加水，调节pH搅拌均匀即可。
上述微生物菌剂在防治辣椒根腐病上的应用，将上述所得微生物菌剂用水稀释至活菌体数为107cfu/mL，于辣椒根腐病发病前进行叶面喷雾，即可达到预防辣椒根腐病发生的目的。
本发明具有的优点和有益效果：(1)本发明为防治辣椒根腐病提供了一个高效的微生物，开辟了一个有效防治途径；(2)本发明贝莱斯芽孢杆菌T1506对辣椒根腐病的药效高，平均防效在80.0％以上，且针对性强；(3)本发明微生物菌剂对人、畜安全，没有环境污染；(4)利用本发明方法防治辣椒根腐病不易产生抗药性；(5)本发明制备方法简单、成本低、使用简单。
附图说明
图1是T1506菌株根据16S rDNA序列获得的系统发育树图；
图2是T1506菌株根据gyrB基因序列获得的系统发育树图；
图3是T1506菌株的菌落形态照片；
图4.是T1506菌株的革兰染色照片。
具体实施方式
下面以具体实施例来进一步清楚地解释本发明，但是不以任何方式构成对本发明的限制。下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法；下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为重量百分含量。
实施例1T1506微生物菌剂的制备
按照如下步骤进行：
(1)菌种活化：将低温保存的T1506菌株在LB平板培养基上活化，所述LB平板培养基各组成成分的重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，琼脂粉12-18g，水1000mL，挑取单菌落在LB斜面培养基上25-35℃培养10-16小时，所述LB斜面培养基各组成成分的重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，琼脂粉12-18g，水1000mL，得活化的菌株；
(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mL LB液体培养基中，在25-35℃、摇床转速为150-220rpm的条件下培养10-16小时，所述LB液体培养基各组成成分的重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，水1000mL，得种子液；
(3)发酵培养：按照体积比为1-3％的比例将步骤(2)的种子液接入到pH值为7.2的玉米粉黄豆粉培养基中，在温度为25-35℃、摇床转速为150-220rpm的条件下发酵培养40-50h，得发酵液；所述玉米粉黄豆粉培养基各组成成分的重量比为：玉米粉1.0-3.0％，黄豆粉1.0- 3.0％，NaCl 0.1-1.0％，MnSO4·H2O 0.5-1.0％，其余为水；
(4)检测发酵液中菌体和芽胞数量，待发酵液中成熟芽胞占到芽胞和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为T1506菌株的液体制剂。贝莱斯芽孢杆菌T1506的活菌数大于21.0×108cfu/mL。
(5)将步骤4所得即为T1506菌株的液体制剂制成微生物制剂。
实施例2贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂对辣椒根腐病的拮抗作用试验 (一)试验时间和地点：2017年8月上旬在浙江泰达作物科技有限公司微生物部门生防实验室内进行。
(二)试验方法：
(1)供试辣椒根腐病菌来源：辣椒根腐病菌菌株采自江苏省淮安市清浦区盐河镇谢碾村谢庄组大棚内辣椒病株茎基部，经浙江大学生物技术研究所分离纯化，植物病理系鉴定为腐皮镰孢菌[Fusarium solani(Mart.)App.et Woll.]，致病力测定表现为强致病力；
(2)平板对峙实验：
首先将辣椒根腐病菌在PDA平板上活化，培养3天后在菌落边缘区域，用打孔器 (6mm)打孔制成菌片，将辣椒根腐病菌菌片转接在另一个PDA平板中央，再将活化后的贝莱斯芽孢杆菌T1506点接在距指示菌菌片2.0厘米处，设空白对照(不点接T1506菌株的辣椒根腐病菌生长情况)。25℃恒温培养，待空白对照即将长满整个培养皿时，测量辣椒根腐病菌的对照生长量(菌落半径)和处理生长量(接种T1506后的抑制生长半径)，拮抗作用用抑菌率(计算公式：抑菌率(％)＝(对照生长量-处理生长量)/对照生长量×100) 表示。
(三)结果(表1)：贝莱斯芽孢杆菌T1506对辣椒根腐病菌的抑制率达90.8％；透明的抑菌带宽12.0毫米；说明贝莱斯芽孢杆菌T1506对辣椒根腐病菌具有明显的抑制作用，具有防治辣椒根腐病的生防潜力。
表1 T1506菌株对辣椒根腐病菌的拮抗作用试验结果
实施例3贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂对辣椒根腐病防治效果的对比试验
(一)试验处理：
(1)微生物菌剂：实施例1制备的T1506可湿性粉剂；用水稀释50倍。
(2)化学药剂：嘧菌酯悬浮剂(250克/升)(英国先正达有限公司)；用水稀释 500倍。
(3)空白对照：清水
(二)试验方法：2013年12月在浙江泰达作物科技有限公司人工气候室内进行。在日光温室培育辣椒苗(番茄L-402，辽宁园艺种苗公司，辽宁省农业科学院园艺研究所生产)，待辣椒生长出5片复叶，移至控温控湿培养室，选取大小一致的辣椒苗，对主根造成伤害，形成伤口，以20mL/株用量浇灌辣椒根腐病病原孢子悬浮液。然后用贝莱斯芽孢杆菌T1506可湿性粉剂灌根接种。设清水和化学药剂对照，每个处理3次重复，每个重复50株。在对照处理出现萎蔫后开始调查，每隔5天调查一次，共调查3次。按病株率计算盆栽试验结果。
病株率和防治效果计算公式：
(三)结果(表3)：活体生测结果表明，贝莱斯芽孢杆菌T1506具有显著抑制辣椒根腐病菌的发展，防治辣椒根腐病的效果达到78.22％，优于化学对照药剂的防效(65.32％)。说明贝莱斯芽孢杆菌T1506及其微生物菌剂对辣椒根腐病防治效果好。
表3贝莱斯芽孢杆菌T1506对辣椒根腐病防效的对比试验结果
| 处理 | 平均病株率(％) | 平均防效(％) |
| T1506可湿性粉剂 | 18 | 78.22 |
| 化学药剂 | 28.67 | 65.32 |
| 空白对照 | 82.67 | -- |
实施例4贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂对辣椒根腐病防治效果的对比试验
(一)试验处理：
(1)微生物菌剂：实施例1制备的T1506可湿性粉剂，用水稀释50倍。
(2)化学药剂：嘧菌酯悬浮剂(250克/升)(英国先正达有限公司)；用水稀释 500倍。
(3)空白对照：清水
(二)试验方法：在江苏省淮安市清浦区盐河镇谢碾村谢庄组大棚进行。开始试验时整个棚内辣椒茎基部和主根中度发生。每小区三行，四次重复，随机区组排列。采用背负式电动喷雾器去头灌根接种实施例1所制备的贝莱斯芽孢杆菌T1506菌剂(用水进行稀释，含菌体 107cfu/mL)；另设对照药剂和空白对照。首次施药7天后再灌根1次。每小区调查固定株数，记载病株数，记载病株率和防效。
(三)结果(见表4)：试验结果表明，采用灌根方法防治辣椒根腐病时，贝莱斯芽孢杆菌菌株菌株T1506防效高于空白对照和药剂对照，其防效达到85.9％，说明贝莱斯芽孢杆菌菌株菌株T1506对辣椒根腐病表现了较好的防治效果。
表4贝莱斯芽孢杆菌T1506对辣椒根腐病防效的对比试验结果
T1506菌株的分类鉴定：
(1)形态特征鉴定
细菌T1506革兰氏染色呈阳性，杆状，单发或成对发生，偶见短链。在TSA培养基上，细菌呈乳白色，菌落边缘稍有不规则。以上形态和革兰氏染色特征与贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)菌种的形态特征类似。具体参见图3-4中的T1506菌株的革兰氏染色和形态照片。
(2)菌株T1506的生理生化特征：
通过微生物脂肪酸快速鉴定系统(MIDI)检测菌株T1506的脂肪酸组成，可知待测菌株的主要脂肪酸为C15:0iso，C15:0anteiso，C16:0，C17:0iso和C17:0anteiso其含量分别为26.51％，42.23％，6.69％，7.25％和6.95％。具体脂肪酸的结果见表1，符合贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)的主要细胞脂肪酸特征；
API 50CH检测结果：阳性反应有和葡萄糖、果糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、七叶灵和蔗糖；弱阳性反应有D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、核糖、阿东醇、肌醇、α-甲基-D-葡萄糖甙、 N-乙酰-葡糖胺、苦杏仁甙、熊果甙、柳醇、麦芽糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、淀粉、糖原和拢牛儿糖；阴性反应有对照、甘油、赤藓糖、D-木糖、L-木糖、β-甲基-D-木糖甙、半乳糖、山梨糖、鼠李糖、卫矛醇、α-甲基-D-甘露糖甙、纤维二糖、蜜二糖、菊糖、松叁糖、木糖醇、D-松二糖、D-来苏糖、D-塔格糖、D-岩糖、L-岩糖、D-阿拉伯糖醇、L-阿拉伯糖醇、葡萄糖酸盐、2-酮基-葡萄糖酸盐和5-酮基-葡萄糖酸盐。符合芽孢杆菌(Bacillus)的生化代谢特征。
(3)菌株T1506的16S rRNA基因分析
用细菌16S rRNA基因通用27F和1492R为引物(27f 5’-GTTTGATCMTGGCTC AG- 3’；1492r 5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’)，测定16S rRNA基因序列，获得 1448bp的基因片段，通过http://www.ezbiocloud.net/eztaxon/(Kim et al.,2017)与已知模式菌进行比较，结果如下表1，与已知种Bacillus velezensis相似性为99.21％，相差11个碱基。另外菌株T1506的16S序列和系统发育分析参见图1。
表1.菌株T1506的16S序列比较分析结果
(4)菌株T1506的gyrB序列分析
用细菌gyrB基因通用UP-1和UP-2r为引物(UP-1-GAA GTC ATC ATG ACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA；UP-2r- AGCAGGATACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT)，测定gyrB保守基因序列为1185bp的基因片段，其序列与系统发育分析参见图2，可见菌株T1506与Bacillus velezensis BCRC 17467T以99％支持率聚成同一分支。
鉴定结果：
综合以上16S，gyrB保守基因，细胞革兰氏染色和菌落形态以及生理生化特征(全细胞脂肪酸和API 50CH)分析，菌株T1506被鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)。
Claims (5)
1.一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂，其特征在于：由贝莱斯芽孢杆菌T1506的液体制剂制成微生物菌剂，其中贝莱斯芽孢杆菌T1506的活菌数大于21.0×108cfu/mL。
2.根据权利要求1所述一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂为可湿性粉剂。
3.一种贝莱斯芽孢杆菌液体制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将低温保存的T1506菌株在LB平板培养基上活化，所述LB平板培养基各组成成分的重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，琼脂粉12-18g，水1000mL，挑取单菌落在LB斜面培养基上25-35℃培养10-16小时，所述LB斜面培养基各组成成分的重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，琼脂粉12-18g，水1000mL，得活化的菌株；
(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤1活化的菌株接种到100mL LB液体培养基中，在25-35℃、摇床转速为150-220rpm的条件下培养10-16小时，所述LB液体培养基各组成成分的重量比为：胰蛋白胨8-12g，酵母提取物4-6g，氯化钠4-6g，水1000mL，得种子液；
(3)发酵培养：按照体积比为1-3％的比例将步骤2的种子液接入到pH值为7.2的玉米粉黄豆粉培养基中，在温度为25-35℃、摇床转速为150-220rpm的条件下发酵培养40-50h，得发酵液；所述玉米粉黄豆粉培养基各组成成分的重量比为：玉米粉1.0-3.0％，黄豆粉1.0-3.0％，NaCl 0.1-1.0％，MnSO4·H2O 0.5-1.0％，其余为水；
(4)检测发酵液中菌体和芽胞数量，待发酵液中成熟芽胞占到芽胞和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为T1506菌株的液体制剂；
(5)将步骤4所得即为T1506菌株的液体制剂制成微生物制剂。
4.根据权利要求2所述一种贝莱斯芽孢杆菌液体制剂的制备方法，其特征在于：所述玉米粉黄豆粉培养基的制备方法，按照重量百分比将玉米粉、黄豆粉、NaCl和MnSO4·H2O混合，再加水，调节pH(具体PH值是多少)搅拌均匀即可。
5.一种贝莱斯芽孢杆菌的微生物菌剂在防治辣椒根腐病上的应用，其特征在于：将权利要求1所述微生物菌剂用水稀释至活菌体数为107cfu/mL，于辣椒根腐病发病前进行叶面喷雾。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911366601.3A CN111647518B (zh) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911366601.3A CN111647518B (zh) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111647518A true CN111647518A (zh) | 2020-09-11 |
| CN111647518B CN111647518B (zh) | 2023-11-24 |
Family
ID=72341732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911366601.3A Active CN111647518B (zh) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111647518B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112493253A (zh) * | 2020-11-14 | 2021-03-16 | 江苏海洋大学 | 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03水悬浮剂及其制备方法与用途 |
| CN112779183A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-05-11 | 浙江省农业科学院 | 番茄半边风病害防控生物有机肥、制备方法及其应用 |
| CN112920966A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-06-08 | 浙江省农业科学院 | 贝莱斯芽孢杆菌及其微生物菌剂、菌剂制备方法和应用 |
| CN113068716A (zh) * | 2021-04-06 | 2021-07-06 | 河北农业大学 | 一种促进马铃薯幼苗生长的复配剂及其应用 |
| CN113980835A (zh) * | 2021-09-23 | 2022-01-28 | 中化农业（临沂）研发中心有限公司 | 复合微生物菌剂及其在肥料中的应用 |
| CN117568212A (zh) * | 2023-11-13 | 2024-02-20 | 湖南省蔬菜研究所 | 一种含有贝莱斯芽孢杆菌xy40-1的微生物菌剂及其制备方法与应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105176895A (zh) * | 2015-11-03 | 2015-12-23 | 河北省农林科学院植物保护研究所 | 一种用于防治棉花黄萎病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN107964514A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-04-27 | 华夏春秋科技发展（北京）有限责任公司 | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在植物上的应用 |
| CN109576188A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-04-05 | 天津开发区坤禾生物技术有限公司 | 一种防治半夏根腐病菌剂及其制备方法和应用 |
-
2019
- 2019-12-26 CN CN201911366601.3A patent/CN111647518B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105176895A (zh) * | 2015-11-03 | 2015-12-23 | 河北省农林科学院植物保护研究所 | 一种用于防治棉花黄萎病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN107964514A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-04-27 | 华夏春秋科技发展（北京）有限责任公司 | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在植物上的应用 |
| CN109576188A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-04-05 | 天津开发区坤禾生物技术有限公司 | 一种防治半夏根腐病菌剂及其制备方法和应用 |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112493253A (zh) * | 2020-11-14 | 2021-03-16 | 江苏海洋大学 | 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03水悬浮剂及其制备方法与用途 |
| CN112493253B (zh) * | 2020-11-14 | 2021-06-04 | 江苏海洋大学 | 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03水悬浮剂及其制备方法与用途 |
| CN112779183A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-05-11 | 浙江省农业科学院 | 番茄半边风病害防控生物有机肥、制备方法及其应用 |
| CN112920966A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-06-08 | 浙江省农业科学院 | 贝莱斯芽孢杆菌及其微生物菌剂、菌剂制备方法和应用 |
| CN113068716A (zh) * | 2021-04-06 | 2021-07-06 | 河北农业大学 | 一种促进马铃薯幼苗生长的复配剂及其应用 |
| CN113980835A (zh) * | 2021-09-23 | 2022-01-28 | 中化农业（临沂）研发中心有限公司 | 复合微生物菌剂及其在肥料中的应用 |
| CN113980835B (zh) * | 2021-09-23 | 2022-11-22 | 中化农业（临沂）研发中心有限公司 | 复合微生物菌剂及其在肥料中的应用 |
| CN117568212A (zh) * | 2023-11-13 | 2024-02-20 | 湖南省蔬菜研究所 | 一种含有贝莱斯芽孢杆菌xy40-1的微生物菌剂及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111647518B (zh) | 2023-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111647518B (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法 | |
| CN103045515B (zh) | 一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN113717901B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治多种蔬菜病害中的应用 | |
| JP2009511012A (ja) | バチルスサブチリスｋｃｃｍ１０６３９またはｋｃｃｍ１０６４０を含む植物病害防除用組成物およびこれらを用いた植物病害防除方法 | |
| CN112899196A (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治十字花科根肿病中的应用 | |
| CN112725218B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其培养方法和应用 | |
| CN108148794A (zh) | 一种广谱抑菌活性的枯草芽孢杆菌DYr3.3及制备方法和应用 | |
| CN116083289B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌菌株4-4及其应用、产品和方法 | |
| CN115725471B (zh) | 一株沙福芽孢杆菌菌株05-2101及其应用、产品和方法 | |
| CN116162577B (zh) | 一株胶质芽孢杆菌及其应用 | |
| CN108641989B (zh) | 一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用 | |
| CN112375688B (zh) | 一种球孢白僵菌及其在生物防治玉米大斑病中的应用 | |
| CN110317747A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌jt68及其在防治茶炭疽病的应用 | |
| US20060018883A1 (en) | Microbial preparation & method for preventing and curing the bacterial wilt the plant and its use | |
| CN112094768A (zh) | 一种副地衣芽孢杆菌zf480及其应用 | |
| CN113755358A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌zj1菌株和发酵液制备及使用方法 | |
| CN115637241A (zh) | 一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03及其应用 | |
| CN107058180B (zh) | 一种高寒草地牧草内生细菌枯草芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN110106115B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌增效剂及其在制备枯草芽孢杆菌菌剂中的应用 | |
| CN106701624A (zh) | 一株拮抗枸杞根腐病的特基拉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN108102992B (zh) | 一株金橙黄微小杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用 | |
| CN115109731B (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其发酵方法与应用 | |
| CN113278541B (zh) | 一株水稻内生贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| CN109234210A (zh) | 用于拮抗草莓灰霉病的枯草芽孢杆菌及其生防菌剂的制备和应用 | |
| CN105907663B (zh) | 短小芽胞杆菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |