CN107338202B

CN107338202B - 具有广谱抑制病原菌功能的解淀粉芽孢杆菌及其应用

Info

Publication number: CN107338202B
Application number: CN201710502272.5A
Authority: CN
Inventors: 赵洪新; 郝雅荞; 吴言; 韦璇; 沈琦; 肖成建; 王立言
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2017-06-27
Filing date: 2017-06-27
Publication date: 2020-09-11
Anticipated expiration: 2037-06-27
Also published as: CN107338202A

Abstract

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌，为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，其保藏号为：CGMCC NO.13492。该解淀粉芽孢杆菌用于抑制细菌、霉菌、植物病原菌；所述细菌为大肠杆菌、葡萄球菌、四联球菌、枯草芽孢杆菌；所述霉菌为毛霉、黑曲霉、青霉；所述植物病原菌为小麦纹枯、百合根腐、棉花枯萎、西瓜枯萎、辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐。

Description

具有广谱抑制病原菌功能的解淀粉芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及一种具有广谱抑制病原菌的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于微生物应用技术领域。

背景技术

作为在全部生活史或一定阶段生活于健康植物组织和器官内部的特殊微生物类群(真菌、放线菌或细菌)—植物内生细菌(Endophyte)，是一类次生代谢产物丰富、应用前景广阔的资源微生物(Petrini et al.1992)。研究表明，植物内生菌(Endophyte)能够产生丰富多样次生代谢产物，不但能够增强植物的抗逆性(Skylar C 2011)，而且具有药物和农药活性，是抗菌、抗肿瘤等新型先导化合物、天然药物和生物活性成分的重要资源库(Venkatachalam R2008)，是新农药研制的重要途径，是生防菌及生防菌抑制剂的重要来源，是微生物学领域的热点研究方向之一。

植物内生菌可产多种抗生素，能抑制病原体、细菌、真菌、病毒等。戴文君及其合作者从株海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis)植株中分离筛选9株内生真菌，其中5株内生真菌对葡萄球菌有较强的抑菌活性，1株对辣椒疫霉有抑制作用。倪志伟从云南美登木(Maytenus hookeri Loes)叶中分离筛选到具有抗菌活性的内生真菌(C.globosum Ly50)，在其发酵产物中分离到抗橙色青霉和抗结核分枝杆菌的化合物(倪志伟2008)。李雅也发现杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)内生真菌对植物病原真菌有抑制作用(李雅2007)。邢鲲从油菜中分离一株环状芽抱杆菌(B.circulas)yc8，诱导植物抗病性机理研究表明，其发酵液处理植物后，植物体内丙二醛(MDA)的含量减少，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)有不同程度的升高，提高了植物对病害的抵御能力(邢鲲等2010)。于汉寿发现种子含菌率比较高的苇状羊茅和多年生黑麦草，分蘖多，幼苗抗虫性明显提高(于汉寿2006)。种子含菌率比较高的鹅观草发芽率高，出苗整齐，生长快，分蘖多，但幼苗无明显的抗虫性。说明，内生菌是生防菌的重要来源，在农业上具有广阔的利用前景(Skylar et al.2011)。

近些年，对生防作用菌的开发利用，在生物防治中占有十分重要的地位。相对于化学农药而言，避免了农药残留、环境污染、抗药性等问题，而且低毒、环保、持效，及生态兼容性较好等优点。因此，寻找广谱、环境适应性强，开发潜力大、应用范围广的生防菌，是生防研究领域的热点方向之一(Da Chen等2014)。

解淀粉芽孢杆菌是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，1945年首次报道枯草芽孢杆菌能产生抗菌物质(Maget D R et al.,1945)。芽孢杆菌是自然界中广泛存在的一种非致病性含有芽孢的细菌，可产生多种多种抑菌物质，包括多肽类、脂肽类及抑菌蛋白类等，主要抑制革兰氏阳性菌(G⁺)、革兰氏阴性菌(G^-)、霉菌和酵母等真核微生物致病菌，引起了广大研究者的重视，作为天然防腐剂在食品行业中加以应用(潘恩霖2001)。王奕文从甜瓜果实表面分离到1株解淀粉芽孢杆菌，对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、链格孢(Alternaria alternata)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑曲霉(Aspegillusniger)和粉红单端孢(Trichothecium roseum)等8种病原真菌具有较强的抑制作用(王奕文等2008)。郝建安2008年分离获得的一株解淀粉芽孢杆菌NK10.BAhjaWT，对真菌作用的研究研究表明，该菌株对茄病镰刀菌(Fusarinm solani)、水稻纹枯病菌、黑曲霉、黑痘病菌(Elsinoe ampelinaShear)等多种真菌，都有一定的抑制作用，特别是对黑痘病菌(E.ampelinaShear)的抑制效果最好，抑制率达到80％以上。陈成2011年从土壤中分离得到一株产抗真菌物质的解淀粉芽孢杆菌菌株HN06，对黑曲霉(Aspergillus niger)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)和苦瓜枯萎病菌(cucurbitwilt)具有良好的抑制作用(陈成等2011)。

2007年公布的解淀粉芽孢杆菌FZB42的全基因组测序使得人们对这种具有多种次生代谢物生产能力的芽孢杆菌有了更深层次的认识，促进了解淀粉芽孢杆菌的生物利用。

碱蓬(Suaeda glauca Bunge)生长于盐渍化土壤、湖滨、河岸和沿海地带，是典型的盐碱地指示植物，也是植物耐盐基因研究的重要模式材料。特殊的生境赋予碱蓬抗盐、耐旱等，异于许多植物不同的性状，其内生菌种类，生理代谢，也呈现出多样性及与其他微生物不同的生理特征。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一株解淀粉芽孢杆菌(SG-B0)及其用途。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌(SG-B0)，为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，其保藏号为：CGMCC NO.13492。

本发明还同时提供了上述解淀粉芽孢杆菌的用途：用于抑制细菌、霉菌、植物病原菌。

作为本发明的解淀粉芽孢杆菌的用途的改进：

所述细菌为大肠杆菌(DH5α)、葡萄球菌、四联球菌、枯草芽孢杆菌；

所述霉菌为毛霉、黑曲霉、青霉；

所述植物病原菌为小麦纹枯、百合根腐、棉花枯萎、西瓜枯萎、辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐。

本发明还同时提供了一种病原菌抑制剂，该病原菌抑制剂的活性成分为解淀粉芽孢杆菌的菌株粉剂、菌体代谢物、发酵液(液体培养物离心所得的上清液)。

作为本发明的病原菌抑制剂的改进：该病原菌抑制剂对如下任一的病原菌具有抑制作用：小麦纹枯、百合根腐、棉花枯萎、西瓜枯萎、辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐。

本发明还同时提供了一种病害抑制剂，该病害抑制剂的活性成分为解淀粉芽孢杆菌菌粉、菌体代谢物、发酵液。

作为本发明的病害抑制剂的改进：该病害抑制剂对如下病害中的至少一种(即，为任一病害或其中二种以上病原菌引起的复合病害)具有抑制作用：小麦纹枯病、百合根腐病、棉花枯萎病、西瓜枯萎病、辣椒炭疽病、番茄灰霉病、苹果轮纹病、桃褐腐病。

本发明的解淀粉芽孢杆菌是从辽宁省盘锦市红海滩湿地自然保护区的碱蓬(Suaedaglauca bge)植物体内分离得到。

本发明的解淀粉芽孢杆菌的菌落特征：菌落形状隆起、不光滑、不透明、呈乳白色、菌落边缘呈树枝状、不透明(见图1)。

本发明的解淀粉芽孢杆菌菌体形态学特征：菌体为短杆状，菌体长约为2.0-2.5μm、宽约1.00-0.500μm，有芽抱、周生多跟鞭毛、革兰氏G⁺(见图2)。

该解淀粉芽孢杆菌的生长特征：在pH5～8时均可生长(见图3B)；在15～45℃时均能正常生长，最适生长温度为37℃；解淀粉芽孢杆菌生长曲线见图3A。

该解淀粉芽孢杆菌生理生化特征：菌体在含果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉为碳源的培养基中生长良好并产酸；在含山梨醇、甘露醇、半乳糖、木糖的培养基中生长良好不产酸；硝酸盐还原试验、接触酶试验、淀粉水解试验、甲基红试验结果均为阳；明胶液化实验、VP反应、硫化氢试验结果均为阴性。

该解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA基因序列如图5所示，Genbank No：KT971139(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KT971139)。

本发明的解淀粉芽孢杆菌代谢物能作为病原菌抑制剂、病害抑制剂的活性成分，从而制成各种固型、液型制剂。

本发明的解淀粉芽孢杆菌发酵液和代谢物具体可按照如下方法制备：以LB为基本培养基，在液体培养基中培养该解淀粉芽孢杆菌，得液体培养物(发酵液)；将液体培养物(发酵液)离心，将上清液过滤成不含菌体的发酵液为菌体代谢物。

本发明中的解淀粉芽孢杆菌对植物病原菌，小麦纹枯、百合根腐、棉花枯萎、西瓜枯萎、辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹，具有抑制作用；对细菌大肠杆菌(DH5α)、葡萄球菌、四联球菌、枯草解淀粉芽孢杆菌，具有抑制作用；对毛霉、黑曲霉、青霉，具有抑制作用。抑菌圈直径为8mm以上，且重复性良好，说明类解淀粉芽孢杆菌，具有广谱、高效、稳定的抗菌性能。

本发明的菌株SG-B0，保藏名称为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO.13492，保藏时间2016年12月26日。

综上所述，本发明所涉及的具有广谱抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌，是从辽宁省盘锦市红海滩碱蓬植物中分离得到；根据生物学特性观察、生理生化指标测定及16SrDNA侧序分析，确定为解淀粉芽孢杆菌；底物利用能力、最适温度，最适pH等生长条件研究表明，该菌具有较广的底物利用范围，较强环境适应能力；菌体细胞、发酵液抑菌活性实验和抑菌圈对比表明，该菌对多种霉菌、细菌都具有抑制拮抗作用，具有广谱抗菌活性的优良特征。

因此，该解淀粉芽孢杆菌是一株极具开发价值的生防菌，该菌株能开发成生防菌剂，应用于植物病原真菌防治。

附图说明

图1为解淀粉芽孢杆菌菌株的菌落形态。

图2为解淀粉芽孢杆菌在100x(油镜)光学显微镜下，菌体单染色的细胞形态和革兰氏染色。

图3解淀粉芽孢杆菌的生长曲线和最适Ph曲线；

A为生长曲线，B为最适Ph曲线。

图4为解淀粉芽孢杆菌16srDNA的PCR扩增电泳图(白色框内是目标带约1500bp)。

图5为解淀粉芽孢杆菌相似性与分类地位图(即16srDNA树状分类地位图)。

图6为解淀粉芽孢杆菌的抑菌效果图；

A为番茄灰霉培养皿的反面，B番茄灰霉培养皿的正面；C为苹果轮纹培养皿的反面，D苹果轮纹正培养皿的正面。

图7为解淀粉芽孢杆菌的抑菌效果图；

A为棉花枯萎培养皿的反面，B为棉花枯萎培养皿的正面；C为桃褐病培养皿的反面，D桃褐病培养皿的正面。

图8为解淀粉芽孢杆菌的抑菌效果图；

A：西瓜枯萎；B：辣椒炭疽；C：百合根腐；D：小麦纹枯。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、解淀粉芽孢杆菌的分离与菌株鉴定

1、植物样品采集

碱蓬(Suaeda glauca Bunge)：采集于辽宁省盘锦市红海滩湿地自然保护区。

2、菌株的分离筛选

取新鲜、无虫害的碱蓬组织，用75％酒精浸泡1min，无菌水冲洗3～4次，0.1％汞浸泡5min，无菌水冲洗3～4次。用无菌解剖刀将碱蓬组织切成5～10mm大小，分成两份，一份放到LB固体培养基上，过夜培养观察组织块附近是否有菌落出现(对照)；另外一份，组织块研磨后70℃煮30分钟，冷却后稀释，分别接种于LB固体培养基培养，直至菌落出现。用接种针挑取边缘生长良好的细菌，接种于新的固体培养基上，待新接种的内生菌长成菌落后，再挑取其边缘的内生菌划线培养，如此反复得到纯化，直到得到单菌落；命名其为SG-B0，亦，E.P.9030。

3、菌株的鉴定及生长条件测定

对该菌株进行形态学、生理生化特性和部分保守序列的分析。参考《Berge’smanual of systematic bacteriology》和《常见细菌系统鉴定手册》中描述方法进行生理生化测定和分子生物学鉴定。

结果表明，该菌落形状隆起、不光滑、不透明、呈乳白色、菌落边缘呈树枝状、不透明(见图1)；菌体为短杆状，菌体长约平均为2.2μm、宽约平均0.80μm，有芽抱、周生多跟鞭毛、革兰氏G⁺(见图2)；在pH5～8时均可生长(见图3B)；菌体在含果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉的培养基可良好生长并产酸；在含山梨醇、甘露醇、半乳糖、木糖的培养基可良好生长不产酸；硝酸盐还原试验、接触酶试验、淀粉水解试验、甲基红试验结果均为阳；明胶液化实验、VP反应、硫化氢试验结果均为阴性。

实施例2、本发明的解淀粉芽孢杆菌的标准生长曲线绘制

经测定该菌体在15～45℃都可生长，最适生长温度为37℃。在最适37℃，pH自然条件下，以常规LB培养基内含物为底物，摇床180rpm培养，取样间隔为2取一次样，进行OD600测定。取样利用Nanodrop2000微量分光光度计进行OD值测定，以OD600数值为从坐标，培养时间为横坐标，绘制菌体生长曲线如图3A。

实施例3、本发明的解淀粉芽孢杆菌的16srDNA的PCR扩增、测序及树状分类图绘制

16srDN引物序列：

27F5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’/1492R5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’菌体总DNA提取，利用TIANGEN提取试剂盒。提取步骤按试剂盒说明书。Taq采用NEB的普通PCR用酶

DNA聚合酶(货号：#M0480S)和高保真

超保真2X Master Mix(货号：#M0491V)，混合使用，确保PCR产物的真实性；

PCR反应体系组成(100ul)：

10×扩增缓冲液10uL

4种dNTP混合物1.5ul(each 10umol/L)

引物P₁(27F)1uL(浓度10pmol)

引物P₂(1492R)1uL(浓度10pmol)

模板DNA2uL(约0.1～10ng)

Taq DNA聚合酶1Ul

加ddH₂O至100ul；

PCR反应条件：

94℃4min；

94℃30sec、55℃30sec、72℃1.5min，35cycles；

72℃10min；

4℃保存。

菌株的16S rDNA PCR电泳图如图4所示，PCR产物用鼎国生物公司DNA凝胶回收试剂盒回收。将回收产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，测序结果序列如SEQ IDNo.1所示，分类树分析表明该菌株属于芽孢杆菌属，见图5。

本发明的菌株SG-B0的保藏信息如下：

保藏名称为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCCNO.13492，保藏时间2016年12月26日。

实施例4、本发明的解淀粉芽孢杆菌(CGMCC NO.13492)对细菌的抑菌谱及抑菌活性测定

供试细菌：大肠杆菌(E.coli)、变形杆菌(B.proteus)、四联球菌(B.bactorium)、葡萄球菌(S.aureus)、枯草杆菌(B.subtilis)。

牛肉膏蛋白胨液体培养液为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、水1000ml混合后，经常规的高温灭菌(于1.1个大气压，121℃下灭菌20min)而得。

牛肉膏蛋白胨培养基为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15～20g、水1000ml混合后，经常规的高温灭菌(于1.1个大气压，121℃下灭菌20min)而得。

具体操作如下：

1、菌株(CGMCC NO.13492)发酵液的获得

100mL牛肉膏蛋白胨液体培养液，灭菌后接种一环的菌株(CGMCC NO.13492)，在37℃，180rpm，进行培养48小时。液体培养物(发酵液)以8000r/min离心10min，上清液记作T。取上清液用一次性过滤器过滤成不含菌体的发酵液记作Y。

2、菌株(CGMCC NO.13492)对细菌抑菌活性测定

将5种细菌指示菌的菌悬液(浓度均分别为OD600＝0.8)分别进行以下操作：将灭菌并冷却至45℃的牛肉膏蛋白胨培养基25mL加入100uL菌液混合，倒入无菌培养皿铺平板，放置冷却。冷却后用无菌镊子放入无菌牛津杯3个，呈等三角放置。然后分别将无菌水、T液、Y液，10μL准确地完全注入到培养基上的牛津杯中，放置37℃培养，每种指示菌实验三次重复。

3、菌株(CGMCC NO.13492)对细菌抑菌圈测定

将无菌水、T液、Y液分别放在灭菌的3个空培养皿中，然后放入直径为0.6cm的无菌滤纸片浸泡5min。将浸泡过T液，Y液和无菌水的滤纸片，分别放在3个灭菌的PDA培养基的正中央，用打孔器取固定大小的指示菌，呈正三角状接种在这3个PDA培养基上，置37℃培养2-3d，每种指示菌三次重复，测定各处理菌落的直径，求出平均值并计算抑制率(％)。

4、菌株(CGMCC NO.13492)抑菌谱及抑菌活性

每天观察菌落的生长情况，两天后，其中指示菌为变形杆菌、四联杆菌的平板，牛津杯周围有较明显的抑菌圈出现。测量菌株菌落和发酵液菌落直径，求出菌体形成菌落和发酵液菌落直径的平均值，利用抑菌率公式计算了出菌体和发酵液的抑菌率。由表1可以明显比较出T的抑菌能力强于Y。相比之下，菌株(CGMCC NO.13492)菌体对葡萄球菌的生长抑制能力更强，对大肠杆菌、产气杆菌的抑菌效果不明显。

表1、菌株对细菌的抑菌效果

注：表中数据为3次重复的平均值

实施例5、解淀粉芽孢杆菌(CGMCC NO.13492)对霉菌的抑菌谱及抑菌活性测定

供试霉菌：毛霉(Mucor)、青霉(Penicillium)、黑曲霉(A.niger)。

具体操作如下：

1、菌株(CGMCC NO.13492)发酵液的获得

100mL牛肉膏蛋白胨液体培养液，灭菌后接种一环的CGMCC NO.13492菌株，在35～37℃，180rpm，进行培养48小时。发酵液以8000r/min离心10min，上清液记作T。取上清液用一次性过滤器过滤成不含菌体的发酵液记作Y。

2、菌株对霉菌抑菌圈测定

将无菌水、T液、Y液分别放在灭菌的3个空培养皿中，然后放入直径为0.6cm的无菌滤纸片浸泡5min。将浸泡过T液，Y液和无菌水的滤纸片，分别放在3个灭菌的PDA培养基的正中央，用打孔器取固定大小的指示菌，呈正三角状接种在这3个PDA培养基上，置28℃培养2～3d，每种指示菌三次重复，测定各处理菌落的直径，求出平均值并计算抑制率(％)。菌株对霉菌抑菌效果如下表2所示，对毛霉、黑曲霉有明显的抑制作用，但对青霉几乎没有抑制作用。

表2、菌株对3种霉菌的抑菌效果

注：表中数据为3次重复的平均值。

实施例6、本发明解淀粉芽孢杆菌(CGMCC NO.13492)对植物病原菌的抑菌谱及抑菌活性测定

供试植物病原指示菌：

小麦纹枯(Ceratobasidium cornigerum(Borud.Rogers)、百合根腐(Fusariumoxysporum f sp.lilii)、棉花枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)、西瓜枯萎(Fusarium oxysp orum f.sp.N iveum)、辣椒炭疽(Colletotrichum capsici(syd.)Butl.)、番茄灰霉(Botrytis cinerea Pers)、苹果轮纹(Botryospuaeria berengerianade Not.t.sp.)桃褐腐(Monilinia laxa)。

具体操作如下：

1、菌株(CGMCC NO.13492)发酵液的获得

100mL牛肉膏蛋白胨液体培养液，灭菌后接种一环的CGMCC NO.13492菌株，在37℃，180rpm，进行培养48小时。发酵液以8000r/min离心10min，上清液记作T。取上清液用一次性过滤器过滤成不含菌体的发酵液记作Y。

2、菌株对植物病原菌抑菌活性测定

将无菌水、T液、Y液分别放在灭菌的3个空培养皿中，然后放入直径为0.6cm的无菌滤纸片浸泡5min。将浸泡过T液，Y液和无菌水的滤纸片，分别放在3个灭菌的PDA培养基的正中央，用打孔器取固定大小的指示菌，呈正三角状接种在这3个PDA培养基上，置28℃培养2～3d，每种指示菌三次重复，测定各处理菌落的直径，求出平均值并计算抑制率(％)。

3、CGMCC NO.13492菌株对8种植物病原菌的抑菌效果

从表3看出，本发明的菌株的抗菌谱较广，对8种植物病原真菌均有抑制作用，植物病原真菌的菌落直径为6～30mm，但对不同的植物病原真菌的抑菌率存在差异。对棉花枯萎、西瓜枯萎、辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐菌的抑菌能力较强，抑菌率在50％以上，显著高于其他3种植物病原真菌。其中，对对辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐菌的抑菌活性最强，抑菌率达65％；而对小麦纹枯、百合根腐的抑菌作用较低，抑菌率为30％左右；对小麦纹枯菌的抑菌作用最弱，抑菌率仅20％，显著低于其他所有的植物病原真菌(见图6、7、8)。

在解淀粉芽孢杆菌(CGMCC NO.13492)菌株的作用下，供试病原真菌的菌丝形态发生很大变化。靠近菌株的植物病原真菌的菌丝较正常菌丝明显加粗，菌丝生长受到不同程度的抑制，呈现不同程度的畸形，如菌丝老化，粗细不匀，旋转折叠，菌丝顶端膨胀形成泡状体，细胞内容物外渗等。

解淀粉芽孢杆菌(CGMCC NO.13492)对辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐菌的抑制作用最明显，抑菌圈直径平均15mm以上，对棉花枯萎、西瓜枯萎、辣椒炭疽菌的抑菌圈平均在8mm以上，如表3和图6、7、8所示。说明本发明的解淀粉芽孢杆菌，具有稳定、高效、广谱的抗菌性能。

表3、菌株对8种植物病原菌的抑菌效果

注：表中数据为3次重复的平均值。

发明人在发明过程中对目前现有的许多解淀粉芽孢杆菌进行了对比实验，发现本发明的解淀粉芽孢杆菌(CGMCC NO.13492)对细菌、霉菌、植物病原菌的抑制效果最佳。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

<110> 浙江理工大学

<120> 具有广谱抑制病原菌功能的解淀粉芽孢杆菌及其应用

<160> 1

<210> 1

<211> 1352

<212> DNA

<213> 解淀粉芽孢杆菌（B.amyloliquefaciens sp.nov. HX0001）16srDNA部分序列

<400> 1

atgttagcgg cggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cctgtaagac tgggataact 60

ccgggaaacc ggggctaata ccggatggtt gtttgaaccg catggttcag acataaaagg 120

tggcttcggc taccacttac agatggaccc gcggcgcatt agctagttgg tgaggtaacg 180

gctcaccaag gcaacgatgc gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca ctgggactga 240

gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat ggacgaaagt 300

ctgacggagc aacgccgcgt gagtgatgaa ggttttcgga tcgtaaagct ctgttgttag 360

ggaagaacaa gtgccgttca aatagggcgg caccttgacg gtacctaacc agaaagccac 420

ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggaattat 480

tgggcgtaaa gggctcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaagcccc cggctcaacc 540

ggggagggtc attggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt 600

gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctctctggtc 660

tgtaactgac gctgaggagc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata ccctggtagt 720

ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agggggtttc cgccccttag tgctgcagct 780

aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca aaggaattga 840

cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta 900

ccaggtcttg acatcctctg acaatcctag agataggacg tccccttcgg gggcagagtg 960

acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 1020

gagcgcaacc cttgatctta gttgccagca ttcagttggg cactctaagg tgactgccgg 1080

tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct 1140

acacacgtgc tacaatggac agaacaaagg gcagcgaaac cgcgaggtta agccaatccc 1200

acaaatctgt tctcagttcg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag ctggaatcgc 1260

tagtaatcgc ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc 1320

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Claims

1.解淀粉芽孢杆菌，特征在于：为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，其保藏号为：CGMCC NO. 13492。

2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在制备抑菌剂中的用途，特征在于：所述抑菌剂用于抑制细菌、霉菌、植物病原菌；

所述细菌为大肠杆菌、葡萄球菌、四联球菌；

所述霉菌为毛霉、黑曲霉；

所述植物病原菌为辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐。

3.利用如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌制备而得的病原菌抑制剂，其特征在于：该病原菌抑制剂的活性成分为解淀粉芽孢杆菌的菌株粉剂。

4.根据权利要求3所述的病原菌抑制剂，其特征在于：该病原菌抑制剂对如下任一的病原菌具有抑制作用：辣椒炭疽、番茄灰霉、苹果轮纹、桃褐腐。