CN109207404B - 暹罗芽孢杆菌yj15及其应用 - Google Patents

暹罗芽孢杆菌yj15及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种暹罗芽孢杆菌YJ15及其在生物防治越橘灰霉病中的应用。本发明所述暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)菌株YJ15属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种保藏号CGMCC No.15952。将培养的暹罗芽孢杆菌YJ15接种于LB液体培养基中，培养制得发酵种子液，再将发酵种子液接种于发酵培养液中，以培养得到的发酵液或发酵液上清液得到生物菌剂。以本发明制备的生物菌剂防治越橘灰霉病，获得了与多菌灵效果相当的良好防效。

Description

暹罗芽孢杆菌YJ15及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及农业作物病害生物防治用微生物，特别是涉及一种用于防治越橘灰霉病的暹罗芽孢杆菌。
背景技术
越橘灰霉病由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)侵染所致，是越橘生产中的一种重要病害。越橘灰霉病具有发病普遍、危害严重、病害扩展迅速且危害部位多等特点。尤其在设施栽培条件下，灰霉病的发生更加严重，发病率可达30%以上，对越橘的产量和果实品质造成严重影响。
1924年，灰霉病首次在美国新泽西州种植的越橘上发现。目前，加拿大、韩国、智利等国家均有越橘灰霉病发生危害的报道。2012年，陈长卿等[陈长卿, 张博, 杨丽娜, 高洁. 越橘灰霉病病原菌鉴定及其生物学特性研究. 吉林农业大学学报, 2012. 34(5):511-516.]首次在吉林农业大学越橘种植基地发现灰霉病菌，可危害果实和叶片。之后在贵州[金义兰, 蒋选利, 黄胜先, 王正文, 侯彪, 李佳林. 贵州省蓝莓病害种类调查与鉴定. 中国果树, 2015. 4: 80-82.]、辽宁[戴启东, 李广旭, 杨华, 张广仁, 姜树成. 蓝莓采后病害的病原鉴定及发生规律研究. 果树学报, 2016. 33(10): 1299-1306.]相继发现越橘灰霉病。
另外，秦士维等[秦士维, 夏秀英, 安利佳. 蓝莓果实潜伏侵染病原真菌的分离与鉴定. 北方园艺, 2017. 18: 41-48.]研究表明，灰霉病菌也存在于健康的越橘果实中，是一种重要的潜伏侵染病原菌。
化学农药是防治越橘灰霉病的有效措施，然而灰霉病菌繁殖速度快、遗传变异大、适合度高，对化学农药极易产生抗药性。
与化学防治相比，生物防治方法无残留、不污染环境、病菌不易产生抗药性，是防治病害的理想方法。但目前尚未见到利用拮抗细菌防治越橘灰霉病的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一株暹罗芽孢杆菌，以及该暹罗芽孢杆菌在越橘灰霉病生物防治上的应用。
本发明从购买自山西省太原市果品市场的品种为蓝丰的贮藏期越橘果实中分离筛选内生细菌，筛选出一株编号为YJ15的灰霉病菌拮抗菌株。通过对所获得菌株进行形态特征、生理生化特性及16S rRNA序列测定及系统发育分析，初步确定了其分类地位；同时对该菌株的培养方法、对越橘灰霉病的防效进行了深入研究，为防治越橘灰霉病提供了新的生物防治资源，为进一步利用该拮抗菌株防治越橘灰霉病奠定了基础。
本发明所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)菌株YJ15已于2018年6月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。菌种保藏号CGMCC No.15952。
在NA培养基上培养本发明所述暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)菌株YJ15，菌落近圆形，边缘整齐，不透明，乳白色，菌落生长后期中间有褶皱。革兰氏染色为蓝紫色，为革兰氏阳性菌。透射电镜下观察，菌体为杆状，大小(1.15～1.54)μm×(0.58～0.74)μm。菌株在30～40℃可以生长；pH5.7和6.8均可生长；2～5%NaCl可生长。能产生吲哚；可利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇和D-木糖；接触酶、V-P试验、葡萄糖氧化发酵、明胶液化、硝酸盐还原、丙二酸利用、卵黄卵磷脂酶、硫化氢呈阳性，运动性、水解淀粉、柠檬酸利用、甲基红、(NH4)2HPO4、脂酶、厌氧生长呈阴性。根据形态特征及生理生化试验结果，初步鉴定菌株YJ15属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。
测定出菌株YJ15的16S rRNA全序列(1451bp)，提交至GenBank数据库，获得登录号为MH118032。同源性比对结果表明：菌株YJ15与Bacillus siamensis JS15E(KX129844)的相似性为100%，与Bacillus siamensis JL8(KX660755)的相似性为99%。系统发育分析表明菌株YJ15与Bacillus siamensis JS15E(KX129844)聚于同一分支。
经上述微生物学分类与鉴定，确定本发明获得的菌株属于暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)。
进而，本发明提供了所述暹罗芽孢杆菌YJ15的培养方法，是将暹罗芽孢杆菌YJ15接种于NA固体培养基上，于28℃下培养24～48h。
其中，所述NA固体培养基的成分为：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，琼脂粉15g，pH7.0。
更进一步地，本发明还提供了一种暹罗芽孢杆菌YJ15生物菌剂的制备方法，具体是将培养得到的暹罗芽孢杆菌YJ15接种于LB液体培养基中，28～32℃下摇床震荡培养15～20h，制得发酵种子液；再将所述发酵种子液接种于发酵培养液中，pH7.0～8.0条件下，28～32℃摇床震荡培养15～20h，培养所得的发酵液或发酵液的上清液即为所述生物菌剂。
其中，所述发酵种子液培养用LB液体培养基的成分为：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
所述发酵培养液的组成为：葡萄糖20.0g，酵母粉36.0g，FeSO4 1.5g，甘油1.0g，K2HPO4 1.5g，蒸馏水1000mL。
进一步地，所述发酵培养液中发酵种子液的接种量优选为2%。
本发明还提供了所述暹罗芽孢杆菌YJ15在用于越橘灰霉病生物防治中的应用。
进而，本发明也提供了利用所述暹罗芽孢杆菌YJ15制备的生物菌剂在防治越橘灰霉病中的应用。
本发明所述的应用是指对生长期的越橘作物进行喷雾处理。
本发明从越橘果实中分离内生细菌，筛选出灰霉病菌的拮抗菌株，完成了菌株的形态及分子鉴定，优化发酵条件，并对越橘灰霉病的防效进行研究，为防治越橘灰霉病提供了新的生防资源，为进一步利用该拮抗菌株防治越橘灰霉病奠定了基础。
使用本发明暹罗芽孢杆菌YJ15或其生物菌剂防治越橘灰霉病，不仅获得了良好的防治效果，并且对越橘果实无药害，对环境无污染，具有良好的生物农药开发前景。
附图说明
图1是暹罗芽孢杆菌YJ15对灰葡萄孢的拮抗作用，A：对照；B：YJ15菌株。
图2是暹罗芽孢杆菌YJ15的菌体形态特征，A：正常视野下；B：光学显微镜下；C：透射电镜下。
图3是基于16S rRNA构建的暹罗芽孢杆菌YJ15的系统发育树图。
具体实施方式
下述实施例仅为本发明的优选技术方案，并不用于对本发明进行任何限制。对于本领域技术人员而言，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
以下给出本发明实施例中使用到的各种培养基的具体组成。
牛肉膏蛋白胨培养基(NA培养基)：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，琼脂粉15g，pH7.0。
LB液体培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖10g，琼脂16g，蒸馏水1000ml。
发酵培养液：葡萄糖20.0g，酵母粉36.0g，FeSO4 1.5g，甘油1.0g，K2HPO4 1.5g，蒸馏水1000mL。
若未特别指明，实施例中所使用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：暹罗芽孢杆菌YJ15的分离及筛选。
越橘果实来自于山西省太原市小店区，品种为蓝丰，在4℃条件下贮藏。
用自来水清洗越橘果实表面，再用无菌水冲洗1次。将干净的越橘果实依次用70%乙醇浸泡3min，2% NaClO浸泡5min，70%乙醇浸泡30s，最后用无菌水淋洗5次，无菌吸水纸吸干残留水分。
将表面消毒的越橘果实放入灭菌研钵中，加入少量石英砂和10mL无菌水，充分研磨后，取200μL至NA培养基，涂布均匀，于28℃恒温培养2d，分离获得内生细菌菌株。
根据菌落的形状、颜色、大小、边缘、突起、透明度等特征，挑取单菌落，继续进行划线纯化培养。
将得到的细菌菌株转入装有20mL LB液体培养基的50mL三角瓶中，于28℃、220r/min条件下培养10h，获得细菌发酵液。
参照番茄灰霉病拮抗细菌筛选方法[王伟, 李术娜, 李红亚, 郝志敏, 王全, 王树香, 朱宝成. 番茄灰霉病拮抗细菌的筛选与X-75菌株鉴定. 园艺学报, 2010. 37(2):307-312.]，将长满PDA平板的灰霉病菌与1mL无菌水混合，用接种针将孢子刮下，制成105spores/mL的菌悬液，与10mL PDA培养基混合，倒入培养皿中，制成含灰霉病菌平板。
在平板上均匀打孔，分别注入50μL上述细菌发酵液，在25℃条件下培养3d，根据出现的抑菌圈大小，筛选出一株编号为YJ15的灰霉病菌拮抗菌株。
将获得的具有拮抗作用的菌株保存。
实施例2：暹罗芽孢杆菌YJ15的形态特征及生理生化特性。
将实施例1筛选得到的拮抗细菌菌株接种于NA培养基上，28℃条件下培养48h。根据细菌菌株生长的菌落形态特征，包括大小、光泽、隆起、形状、透明度、均匀度、边缘等，以及革兰氏染色反应和透射电镜观察菌体形态特征，菌株生理生化特性等，参照《常见细菌系统鉴定手册》[东秀珠, 蔡妙英. 2001. 北京: 科学出版社.]进行鉴定。
图2是暹罗芽孢杆菌YJ15在NA培养基上28℃培养48h后的菌体形态特征结果。菌株YJ15在NA培养基上菌落近圆形，边缘整齐，不透明，乳白色，菌落生长后期中间有褶皱(图2A)。革兰氏染色为蓝紫色，为革兰氏阳性菌(图2B)。透射电镜下观察，菌体为杆状，大小为(1.15～1.54)μm ×(0.58～0.74)μm(图2C)。
具体生理生化试验结果见表1。菌株YJ15在30～40℃可以生长，pH 5.7和6.8均可以生长，2～5% NaCl可以生长。能产生吲哚，可利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇和D-木糖。接触酶、V-P试验、葡萄糖氧化发酵、明胶液化、硝酸盐还原、丙二酸利用、卵黄卵磷脂酶、硫化氢呈阳性，运动性、水解淀粉、柠檬酸利用、甲基红、(NH4)2HPO4、脂酶、厌氧生长呈阴性。根据形态特征及生理生化试验结果，初步鉴定菌株YJ15属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。
Figure 670666DEST_PATH_IMAGE001
实施例3：暹罗芽孢杆菌YJ15的分子鉴定。
将菌株YJ15接种于LB液体培养基，于28℃，180r/min条件下振荡培养10h。采用BioFlux BSC12S1细菌基因组DNA提取试剂盒(杭州博日科技有限公司)提取出拮抗细菌的DNA。
16S rRNA基因序列分析采用25µL PCR反应体系：10×PCR Buffer 2.5µL，dNTP(10mM) 2µL，MgCl2 1µL，浓度10mM的通用引物27F和1492r 各1µL，模板DNA 1µL，Taq DNA聚合酶 0.5µL，ddH2O 补足至25µL。
PCR反应条件为：95℃预变性5min，34个循环(94℃ 45s，45℃ 1min，72℃ 90s)，72℃ 10min。PCR扩增产物纯化后测序。
PCR反应条件为：95℃预变性 5min，34个循环(94℃ 45s，45℃ 1min，72℃ 90s)，72℃ 10min。PCR扩增产物纯化后测序。
将序列在NCBI数据库中进行Blast比对，并下载相关序列，使用MEGA 5.0软件构建系统发育树。
将菌株YJ15的16S rRNA全序列(1451bp)提交至GenBank数据库，获得登录号为MH118032。同源性比对结果表明：菌株YJ15与Bacillus siamensis JS15E(KX129844)的相似性为100%，与Bacillus siamensis JL8(KX660755)的相似性为99%。系统发育分析表明菌株YJ15与Bacillus siamensis JS15E(KX129844)聚于同一分支(图3)。
实施例4：暹罗芽孢杆菌YJ15生物菌剂的制备。
将暹罗芽孢杆菌YJ15接种于NA培养基上，28℃下培养24～48h。
将上述培养得到的暹罗芽孢杆菌YJ15活化菌株接种于LB液体培养基中，28℃下摇床中180r/min震荡培养15h，制备得到发酵种子液。
取1mL发酵种子液，按照2%的接种量接种于发酵培养液中，在30～32℃和pH=7.5条件下，置于摇床上以150～180r/min的转速震荡培养15h，收集培养所得发酵液，即得到暹罗芽孢杆菌YJ15生物菌剂。
实施例5：暹罗芽孢杆菌YJ15生物菌剂对越橘灰霉病的防效试验。
选用健康的越橘果实，以2% NaClO浸泡处理2min，无菌水冲洗3次后晾干。
用灭菌接种针在果实表面制造约3mm(深)×2mm(宽)的伤口，向伤口中滴加以下处理液：1）YJ15生物菌剂(108CFU/mL)；2）多菌灵对照药剂(1000μg/mL)；3）无菌水空白对照。各处理设3次重复，每处理10个果实，处理液接种量均为20μL。
4h后，接种10μL灰霉病菌孢子液(105spores/mL)。之后将果实晾干，置于25℃，95%相对湿度下，48和72h后统计病害发病率及病斑直径，并计算防效。
防效(%)=(对照组病斑面积-处理组病斑面积)/对照组病斑面积×100。
以防治灰霉病的常用药剂多菌灵为对照组，进行拮抗菌株YJ15对越橘灰霉病的防效试验，试验结果见表2。
Figure 360404DEST_PATH_IMAGE002
处理48h和72h后，空白对照组发病率分别为83.33%和100.00%，YJ15生物菌剂处理组发病率分别为53.33%和86.67%，而多菌灵处理组发病率分别为60.00%和83.33%。处理48h和72h后，空白对照组的病斑直径分别为6.33mm和12.27mm，YJ15生物菌剂处理组的病斑直径分别为3.70mm和4.03mm，而多菌灵处理组的病斑直径分别为3.30mm和3.90mm。
经计算，处理48h和72h后，YJ15生物菌剂的防效分别为41.55%和67.40%，多菌灵的防效分别为47.87%和68.22%。差异显著性分析结果表明，YJ15生物菌剂和多菌灵对越橘灰霉病的防效差异不显著。
综上所述，暹罗芽孢杆菌YJ15生物菌剂对越橘灰霉病防效较好，与对照药剂多菌灵防效相当。
实施例6：暹罗芽孢杆菌YJ15的抑菌谱。
暹罗芽孢杆菌抑菌谱测定方法采用琼脂平板扩散法。测试菌种包括尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)，拟盘多毛孢(Pestalotiopsis paeoniicola)，链格孢(Alternaria alternata)，毁灭柱孢(Cylindrocarpon destructans)，藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)，半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)，粉红单端孢(Trichothecium roseum)，层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)9种常见的植物病原真菌。
将暹罗芽孢杆菌菌株YJ15接种于LB液体培养基，28℃下220r/min振荡培养10h。4℃下10000r/min离心，上清液以微孔滤膜过滤除菌得到菌株YJ15的无菌发酵液。
将PDA培养基熔化，降温至40～45℃，加入上述无菌发酵液，分别制成含1%、3%、5%、7%、9%无菌发酵液的混合培养基，充分混匀后倒入无菌培养皿制成含有抑菌成分的培养基。以不加无菌发酵液的PDA培养基作为空白对照。
将培养5d后的9种供试植物病原真菌制成直径6mm的菌饼，菌丝面朝下放置于上述各培养基平板中央，于25℃条件下培养5d后，测量病原真菌的生长菌落直径，与空白对照进行比较，计算各浓度无菌发酵液对9种供试植物病原真菌的抑菌率。
试验设3次重复，菌落直径测量采用十字交叉法。抑菌率(%)=[(空白对照菌落直径–处理菌落直径)/(空白对照菌落直径–6)]×100。计算结果列于表3中。
Figure 58233DEST_PATH_IMAGE003
根据表3列出的暹罗芽孢杆菌YJ15抑菌谱测定结果表明，菌株YJ5抑菌谱广，不同浓度无菌发酵液对9种测试植物病原真菌均有抑制作用。且随着发酵液浓度增大，对病原真菌的抑菌率增高。其中发酵液浓度9%时，对粉红单端孢(Trichothecium roseum)抑菌率最高，为92.39%，对藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)抑菌率最低，为43.42%，对其他病原真菌的抑菌率在50.00～91.14%之间。

Claims (10)

1.一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)菌株YJ15，保藏号：CGMCC No.15952。
2.一种权利要求1所述暹罗芽孢杆菌YJ15的培养方法，是将暹罗芽孢杆菌YJ15接种于NA固体培养基上，于28℃下培养24～48h。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征是所述NA固体培养基的成分为：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，琼脂粉15g，pH7.0。
4.权利要求1所述暹罗芽孢杆菌在生物防治越橘灰霉病中的应用。
5.一种防治越橘灰霉病的生物菌剂，所述菌剂中含有保藏号为CGMCC No.15952的暹罗芽孢杆菌菌株YJ15。
6.一种防治越橘灰霉病的生物菌剂，是保藏号为CGMCC No.15952的暹罗芽孢杆菌菌株YJ15的发酵液或发酵液的上清液。
7.权利要求6所述防治越橘灰霉病的生物菌剂的制备方法，是将培养得到的暹罗芽孢杆菌YJ15接种于LB液体培养基中，28～32℃下摇床震荡培养15～20h，制得发酵种子液；再将所述发酵种子液接种于发酵培养液中，pH7.0～8.0条件下，28～32℃摇床震荡培养15～20h，培养所得的发酵液或发酵液的上清液即为所述生物菌剂。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是所述LB液体培养基的成分为：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是所述发酵培养液的组成为：葡萄糖20.0g，酵母粉36.0g，FeSO4 1.5g，甘油1.0g，K2HPO4 1.5g，蒸馏水1000mL。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是所述发酵培养液中发酵种子液的接种量为2%。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109777755A (zh) * 2019-01-31 2019-05-21 自然资源部第三海洋研究所 一株暹罗芽孢杆菌dh35及其发酵上清液的应用
CN111944714B (zh) * 2020-07-27 2021-04-27 天津农学院 一种红掌内生暹罗芽孢杆菌hzy-54及其应用
CN111690578B (zh) * 2020-07-31 2021-11-23 山东佐田氏生物科技有限公司 一株耐盐碱暹罗芽孢杆菌及其活菌制剂的生产方法与应用
CN112646745B (zh) * 2020-12-28 2022-04-12 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 一种暹罗芽孢杆菌、菌剂及其应用
CN113789280B (zh) * 2021-09-18 2023-02-17 北京科技大学 一种降解尿酸的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用
CN114891670B (zh) * 2022-04-28 2023-09-19 岭南师范学院 一株具有广谱抑菌性的暹罗芽孢杆菌ZJh及其应用
CN114940958B (zh) * 2022-05-23 2023-06-27 贵州大学 一株暹罗芽孢杆菌、制备的微生物菌剂及其应用
CN117016569B (zh) * 2023-10-08 2023-12-19 云南省农业科学院农业环境资源研究所 一种防治植物叶部真菌病害的微生物组合物及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104342394A (zh) * 2014-10-31 2015-02-11 中国农业科学院农产品加工研究所 一株暹罗芽孢杆菌及其在防治禾谷镰刀菌方面的应用
CN105505834A (zh) * 2016-01-25 2016-04-20 北京市辐射中心 一株防治梨轮纹病和软腐病的暹罗芽孢杆菌及其应用
CN107034158A (zh) * 2017-04-27 2017-08-11 中国科学院微生物研究所 暹罗芽孢杆菌b‑3及其应用
CN108034618A (zh) * 2018-01-24 2018-05-15 吉林省农业科学院 暹罗芽孢杆菌菌株及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104342394A (zh) * 2014-10-31 2015-02-11 中国农业科学院农产品加工研究所 一株暹罗芽孢杆菌及其在防治禾谷镰刀菌方面的应用
CN105505834A (zh) * 2016-01-25 2016-04-20 北京市辐射中心 一株防治梨轮纹病和软腐病的暹罗芽孢杆菌及其应用
CN107034158A (zh) * 2017-04-27 2017-08-11 中国科学院微生物研究所 暹罗芽孢杆菌b‑3及其应用
CN108034618A (zh) * 2018-01-24 2018-05-15 吉林省农业科学院 暹罗芽孢杆菌菌株及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Genomics-guided discovery and structure identification of cyclic lipopeptides from the Bacillus siamensis JFL15;Ben-Hong Xu等;《PLoS One》;20180831;第13卷(第8期);第e0202893页 *
KX129844.1;GenBank;《GenBank》;20160601;全文 *

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