CN110295124B - 一种作物枯萎病生防芽孢杆菌及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种枯萎病生防芽孢杆菌，保藏于中国典型培养物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC M2017359，命名为FJAT‑42192；且所述菌株的16srRNA序列如SEQ No.1所示；该芽孢杆菌应用于作物枯萎病的防治中。该芽孢杆菌菌株对枯萎病的致病菌具有较强的抑制作用，对镰刀真菌及青枯雷尔氏菌的抑制效果尤为明显；将该菌株应用于微生物菌剂中，可有效地对作物枯萎病致病菌进行抑制，同时，利用微生物进行防治，可显著降低农药化肥对环境的污染及致病菌抗药性的产生。
Description
技术领域
本发明涉及生防细菌技术领域，更具体地说是涉及一种作物枯萎病生防芽孢杆菌及应用。
背景技术
枯萎病(blight)亦称疫病，是由真菌或细菌引致的植物病害，发病突然，症状包括严重的点斑、凋萎或叶、花、果、茎或整株植物的死亡，生长迅速的幼嫩组织常被侵袭，大多数重要经济作物均受一种或多种疫病感染。疫病可影响花、叶、芽包、幼苗、小枝、茎(藤)及顶梢，是一种毁灭性的病害，可造成作物的大幅减产，作物轻则减产10％～30％，重则减产50％以上甚至绝收，对农业生产造成了巨大的经济损失。枯萎病防治主要采用农业措施(栽培措施、作物轮作、品种抗性选择等)和化学药剂，化学农药剂是控制植物病害最有效的手段，但化学药品的过度使用对环境及人类健康造成了严重的威胁。
芽孢杆菌能产生多种活性代谢产物，这些代谢产物能够抑制农作物病害发生并促进作物生长；同时，芽孢杆菌可以产生抗逆性强的芽孢，从而使得利用芽孢杆菌菌剂来进行病虫害防治成为农业发展的一个趋势。
因此，如何提供一种作物枯萎病生防芽孢杆菌并将其应用于枯萎病的防治中是本领域技术人员亟需解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种作物枯萎病生防芽孢杆菌，该芽孢杆菌菌株对枯萎病的致病菌具有较强的抑制作用，对镰刀真菌及青枯雷尔氏菌的抑制效果尤为明显；将该菌株应用于微生物菌剂中，可有效地对作物枯萎病致病菌进行抑制，同时，利用微生物进行防治，可显著降低农药化肥对环境的污染及致病菌抗药性的产生。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种枯萎病生防芽孢杆菌，保藏于中国典型培养物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC M 2017359，命名为FJAT-42192；且所述菌株的16srRNA序列如SEQ NO.1所示。
以上技术方案达到的技术效果是：申请人从福建渔溪土壤中利用快速筛选方法获得对作物细菌病原菌青枯雷尔氏菌和真菌病病原菌镰刀菌皆具有较好抑制作用的菌株，进一步通过点接法和琼脂扩散法进行复筛确定抑菌活性最高的菌株FJAT-42192。分别在含有青枯雷尔氏病原菌的LB固体培养基和含有镰刀菌的PDA固体培养基平板上，发现FJAT-42192的菌体和发酵液上清滤液对这两种病原菌生长皆具有较强的抑制作用。此外，还发现该菌株对不同种寄主来源的镰刀菌生长亦具有较强的抑制作用。
作为本发明优选的技术方案，所述芽孢杆菌菌株可产生伊枯草菌素、丰原素和表面活性素三种脂肽。
以上技术方案达到的技术效果是：芽孢杆菌产生的脂肽可以显著抑制青枯病的发生，有效降低作物青枯病的发病指数和发病率。
一种枯萎病生防芽孢杆菌FJAT-42192在防治作物枯萎病中的应用。
以上技术方案达到的技术效果是：将筛选的得到的菌株FJAT-42192制备成发酵液或固体菌剂，施入土壤中，可有效降低作物枯萎病尤其是青枯病的发病率。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种作物枯萎病生防芽孢杆菌及应用，菌株FJAT-42192对枯萎病致病菌有较强的抑制作用，利用其对枯萎病的致病菌进行防治，避免了农药化肥的滥用对环境造成的污染及致病菌抗药性的产生，提高了枯萎病的防治效果，降低了枯萎病的发病率和发病指数。
附图说明
图1-1为实施例1分离得到的菌株对镰刀菌的抑菌效果图；其中，A为采用点接法，菌株10-1-7对镰刀菌的抑菌效果图；B为采用琼脂扩散法，菌株IV-1-1、IV-1-2、IV-1-3及10-1-7的抑菌效果图；10-1-7即为菌株FJAT-42192；
图1-2为实施例1分离得到的菌株对青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum91的抑菌效果图；其中，A为采用点接法时，菌株10-1-7对Ralstonia solanacearum91的抑菌效果图；B为采用琼脂扩散法时，菌株IV-1-1、IV-1-2、IV-1-3及10-1-7的抑菌效果图；10-1-7即为菌株FJAT-42192；
图2为菌株FJAT-42192的菌落图；
图3-1为菌株FJAT-42192的镜检图；
图3-2为菌株FJAT-42192的透射电镜图；
图4为菌株FJAT-42192的系统进化图；
图5(左)为接种无菌水的番茄的生长状况示意图；
图5(右)为接种FJAT-42192发酵液的生长状况示意图；
图6附图为对抗菌物质Iturin、Fengycin及Surfactin进行检测时的总离子流图；
图7附图为对抗菌物质类型进行检测的电泳结果图，其中Lane M:molecularmarker、Lane 1:Surfactin、Lane 2:Iturin、Lane 3:Fengycin；
图8-A1为接种了Ralstonia solanacearum91，且未接种脂肽溶液的平板示意图；
图8-B1为接种了Fusarium oxysporum FJAT-9250，且未接种脂肽溶液的平板示意图；
图8-C1为接种了Fusarium oxysporum FJAT-3015，且未接种脂肽溶液的平板示意图；
图9-A2为接种了Ralstonia solanacearum91及脂肽溶液的平板示意图；
图9-B2为接种了Fusarium oxysporum FJAT-9250及脂肽溶液的平板示意图；
图9-C2为接种了Fusarium oxysporum FJAT-3015及脂肽溶液的平板示意图；
图10-A为青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum91细胞在透射电镜下正常细胞的示意图；
图10-B图9-A2抑菌圈边上青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum91细胞的示意图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的芽孢杆菌分类学命名为FJAT-42192，于2017年6月22日保藏于中国典型培养物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CCTCC)，地址为武汉市珞珈山武汉大学，经检验，结果为存活，保藏编号为CCTCC M2017359。
该芽孢杆菌菌株从土壤中分离，通过表型和分子特征鉴定为甲基营养型芽孢杆菌菌株(Bacillus methylotrophicus FJAT-42192)，能够抑制作物枯萎病致病菌，如青枯雷尔氏菌、镰刀菌等，可广泛应用于农业生产中抗病原菌领域。本发明中，病原菌：青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum91、青枯雷尔氏菌Fusarium oxysporum FJAT-3015及镰刀菌Fusarium oxysporum FJAT-9250为福建省农业科学院农业生物资源所分离并保存的植物细菌和真菌性病原菌靶标。
以下根据申请人的试验及实施例对芽孢杆菌菌株FJAT-42192进行详细论述：
实施例1菌株的分离
芽孢杆菌菌株FJAT-42192的筛选方法具体包括如下步骤：
(1)取土壤样品10.0g，加入至90mL无菌水，震荡30min混匀后，吸取1mL进行梯度稀释，选用稀释度为10-1，10-2，10-3；
(2)将步骤(1)获得的稀释液涂布于分别含有青枯雷尔氏菌和镰刀菌的培养基固体平板上，于30℃恒温培养箱培养72h；
(3)将步骤(2)筛选获得的产透明抑菌圈的菌落，用接种环挑取少许采用连续划线法接种于LB培养基平板上，置于30℃恒温培养箱培养48h，重复上述工作直至获得纯菌株。
实施例2菌株活性测定
(1)生防菌株的准备：将实施例1中获得的有抑菌效果的菌株采用划线法接种于LB培养基固体平板上，置于30℃恒温培养箱培养48h。挑取活化好的菌株单菌落接种至LB液体培养基，30℃震荡培养48h后，离心取上清液，然后用0.22μm无菌滤膜过滤除残余菌体，获得菌体的上清液。
(2)分别以青枯雷尔氏菌和镰刀菌为指示菌，采用点接法和琼脂扩散法进行生防菌株的复筛。点接法即用牙签挑取菌落少许点接于含有相应病原指示菌的培养基平板上；琼脂扩散法：用7mm打孔器分别在含有青枯雷尔氏菌和镰刀菌的平板中间打孔，然后吸取步骤(1)中得到的菌体的上清液100μL加至孔中，获得生防菌抑菌图，参见图1-1和图1-2，图1-1为菌株FJAT-42192对镰刀菌抑菌效果图；图1-2为菌株FJAT-42192对青枯雷尔氏菌的抑菌效果图。
(3)分别在发生枯萎病的罗汉果叶片、柠檬叶片上分离镰刀菌，并将分离得到的不同宿主来源的镰刀菌接种于LB固体培养基上，然后挑选步骤(2)中抑菌效果最强的菌株10-1-7，分别以点接法和琼脂扩散法在接种不同来源的镰刀菌的三个培养基上进行生防试验，结果表明，三个培养基上，不同的试验方法下，均有不同程度的透明圈形成。芽孢杆菌菌株对不同宿主来源的镰刀菌的预防效果见表一；
表一 菌株10-1-7对不同宿主来源镰刀菌的抑菌作用
表一结果表明，菌株FJAT-42192对不同宿主来源的镰刀菌株FJAT-3015、FJAT-9230及FJAT-30260具有抑制作用。++表明抑制作用明显，+表明有抑制作用。
实施例3生防菌株10-1-7的分类鉴定
菌落形态特征：挑取实施例2步骤(2)中图1-2-A得到的菌株10-1-7，以接种环划线接种于LB固体培养基上，并置于30℃恒温培养箱培养48h。如图2所示，菌落呈圆形、奶油色、突起、边缘规则。
细胞和芽孢形态特征：挑取上述培养获得的单菌落进行涂片，并以碱性品红染色2min后镜检，如图3-1所示，发现芽孢位于细胞中间，为椭圆形；通过透射电镜观察细胞为杆状，如图3-2所示。
生理生化特性鉴定：利用法国生化鉴定系统API 50 CH B和APE 20 E对菌株10-1-7的生物学特性进行测定，发现，菌株10-1-7能利用葡萄糖、果糖、甘露糖、淀粉、麦芽糖和七叶灵进行发酵产酸，V-P反应和明胶水解为阳性，硝酸还原反应为阴性，且不能产生吲哚和H2S，结果见表二；
表二生防菌株FJAT-42192的生理生化特性
注：+示有作用或有反应；-示无作用或无反应。
实施例4生防菌株10-1-7基因组DNA提取
1)取实施例2步骤(2)图1-2-A得到的菌株10-1-7，将其接种于200ml的LB液体培养基中，于30℃环境下振荡培养24h，得到菌株的悬浮液；取1mL的菌株悬液在8000r/min下离心2min。弃去上清液以后，用400μL STE Buffer(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)冲洗细胞两次。然后在8000r/min下离心2min，弃去上清。
2)以200μL的TE Buffer(10mM Tris-HCl,1mM EDTA，pH 8.0)悬浮细胞沉淀，然后用100μL的Tris-saturated phenol(pH 8.0)加到离心管中，涡旋混合60s。
3)4℃下13000r/min离心5min以从有机相中分离出水相，然后取160μL上清液转移到1.5mL EP管中。
4)加40μL TE Buffer到步骤3)中的EP管，然后用100μL氯仿混合，在4℃，13000r/min下离心5min，重复两到三遍；
5)取160μL步骤4)所得上清液到干净的1.5mL EP管中，再加40μLTE和5μL的RNase(10mg/ml)并在37℃下放置10min，以分解RNA。
6)接着将100μL的氯仿加到离心管中，混合后，在4℃下13000g离心5min。
7)再将100μL的上清液转移到干净的1.5mL EP管中，得到基因组DNA。
实施例5PCR扩增反应体系
(1)PCR反应体系(25μL)：2.5μL 10×Buffer、0.5μL 10mM dNTP、引物各1μL、0.3μL(5U/μL)的Taq酶和1μL基因组DNA。
(2)PCR反应程序：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸90s，35个循环，最后72℃延伸10min。
(3)PCR产物的检测：取2μL PCR产物，点样于1.5％的琼脂糖凝胶中，以100bpMarker作为标准分子量，在100V电压下，电泳40min，以EB对样品进行染色，用凝胶成像系统观察结果。PCR产物送至上海铂尚生物技术有限公司进行测序。
其中，引物序列F为5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，如SEQ ID No.8所示；
R为5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'，如SEQ ID No.9所示。
实施例6基于16S rRNA基因的鉴定及系统发育
将该菌株16S rRNA基因序列上传至韩国Ez Taxon数据库进行比对分析，初步判断得出10-1-7菌株的分类地位为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。选择相关参考菌株序列，经Clustal X对齐后，利用软件Mega 6.0采用邻接法和Jukes-Cantor模型构建系统发育树，得出该菌株的分类地位，参见图4。
实施例6生防菌株FJAT-42192的应用
挑取实施例2中步骤(2)图1-2-A所得生防菌FJAT-42192单菌落接种至100mL液体LB培养基，30℃170rpm培养24h。通过分光光度计，将菌液OD600值稀释调至1；按1％的接种量将从青枯病发病作物叶片上分离得到的病原菌青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum91)接种至100mL LB液体培养基，30℃，170rpm震荡培养48h，同样将菌液OD600值稀释调至为1。
通过番茄苗盆栽实验验证该生防菌株的抑菌活性，设置三个重复，每个重复设置4盆，每盆4株番茄苗(植株繁育2周时间)。将番茄苗栽培至直径大小为20cm的盆中，并浇足够的水。2d后，采用灌根法，每盆番茄苗接种80mL已稀释好的青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum91)液。接种青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum91)液2d后，将盆栽苗分为2组，1组为处理组，接种80mL已稀释好的生防菌液；1组为对照组，接种80mL无菌水。持续25d，每5d记录一次番茄苗的发病状况，一直将盆栽番茄苗放置于人工气候室进行培养，条件为28℃、湿度为75％。结果如图5所示；计算发病率，发病率＝发病枯萎植株数量/植株量×100。实验结果发现，生防菌株FJAT-42192能有效地降低番茄青枯病的发病率，见表三；
表三 生防菌株FJAT-42192盆栽番茄苗青枯病的生物防治效果
由表三可知：生防菌株FJAT-42192能有效地降低番茄青枯病的发病率，所以，申请人推测，菌株FJAT-42192可能会产生某种抗菌物质来达到抗菌的效果。
实施例7生防菌株发酵液中抗菌物质的提取
挑取实施例2步骤(2)图中FJAT-42192单菌落至100mL的pH为7的LB液体培养基中，于170rpm、30℃振荡培养24h。然后取1％接种剂量接种至100mLpH为7的LB液体培养基，于170rpm、30℃振荡培养48h，然后在4℃、12000rpm下离心10min，获得上清液。然后向上清液中添加2mol/L盐酸溶液，致其pH为2，然后于4℃环境下放置16h后，4℃、1200rpm离心10min。将沉淀物放置在-20℃下，真空冷冻成干粉，最后用1mL甲醇溶解干粉，获得干粉溶液；以22μL的无菌滤膜过滤干粉溶液，取滤液获得抗菌物质的溶液。
实施例8抗菌物质溶液的液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(LC-QTOF-MS/MS)检测
液相色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(2.1×150mm，1.8-Micron)，流速为0.3mL/min；流动相A为0.1％甲酸水；流动相B为甲醇；洗脱程序0，60％B；60min，100％B；65min，60％B。
质谱条件：ESI(+/–)、干燥气温度350℃、干燥气流速8L/min、雾化气压力(nebulizer)30psig、Fragmentor 175 V、Collision Energy 100 V、Skimmer 65V、扫描方式auto MS/MS；离子扫描范围：100–3000m/z。
实施例9抗菌物质surfactin,iturin and fengycin基因PCR检测
利用细菌基因组DNA提取试剂盒(购买于上海Generay生物技术公司)按照实施例4的方法提取FJAT-42192 DNA，并对DNA进行PCR扩增检测。PCR反应体系(10μL)：1μL 10×Buffer、0.2μL 10mM dNTP、引物各0.5μL、0.3μL(5U/μL)的Taq酶和2μL基因组DNA。PCR反应程序：95℃3min、94℃1min、56℃1min、70℃、1min、70℃5min，30个循环。PCR结束后，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察条带判断是否含有表面活性素surfactin,伊枯草菌素iturinand丰原素fengycin的合成基因，抗菌物质合成基因引物如表四所示；
表四 抗菌物质基因引物检测
SrfAF的引物序列如SEQ ID No.2所示；SrfAR引物序列如SEQ ID No.3所示；ItuAF的引物序列如SEQ ID No.4所示；ItuAR的引物序列如SEQ ID No.5所示；FenAF的引物序列如SEQ ID No.6所示；FenAR的引物序列如SEQ ID No.7所示。
实施例8和实施例9的实验结果如下：
抗菌物质的鉴定
通过LC-QTOF-MS/MS对甲基营养型芽胞杆菌FJAT-42192的抗菌物质成分进行检测，总离子流图如图6所示。其中，保留时间为8-20min的为Iturin类脂肽，保留时间为20-40min的为fengycin类脂肽，保留时间在40-53min之间的为surfactin类脂肽。
甲基营养型芽胞杆菌FJAT-42192的抗菌物质Iturin类的主要峰为[M+Na]+at m/z1065-1079-1093，fengycin([M+H]+at m/z 1463.9-1477.9和m/z1492.9-1506，fengycin类的为[M+Na]+at 1463m/z(Rt＝28.3min)，1477m/z(29.8min)，1492m/z(Rt＝31.3min)和1506m/z(Rt＝32.3min)，surfactin的为[M+Na]1016m/z(Rt＝44.3min)，1030m/z(Rt＝46min)，1044m/z(Rt＝48.1min),1058m/z(Rt＝50.2min)。
结合离子图和相关文献分析，甲基营养型芽胞杆菌FJAT-42192的抗菌物质成分鉴定Iturin类脂肽由C14–C16 iturin A化合物组成；Fengycin类脂肽由C16 fengycin A、C16fengycin B2和C16–C17 fengycin B化合物组成；Surfactin类脂肽由C12–C15 surfactinA组成。
提取Bacillus methylotrophicus FJAT-42192的基因组DNA，利用Surfactin,iturin和fengycin的引物，通过PCR检测验证该生防菌株的抗菌物质类型。如图7所示，由电泳图结果，确认FJAT-32192产生的抗菌物质为Surfactin,iturin和fengycin。
实施例10抗菌物质对青枯雷尔氏菌和枯萎病病原菌镰刀菌的抑制作用
取实施例7中提取到的甲基营养型芽孢杆菌FJAT-42192抗菌物质Iturin、Fengycin及Surfactin，并以1ml甲醇溶解，得到脂肽溶液同时，将病原菌Ralstoniasolanacearum 91,Fusarium oxysporum FJAT-3015 and Fusarium oxysporum FJAT-9250分别接种至6个LB固体培养基中，于30℃下培养48h，得到平板1-6；其中平板1-3涂布脂肽溶液，平板4-6为空白对照；结果如图8和图9所示；图8为空白对照组，图9为接种了脂肽溶液的平板。
实施例11抗菌物质对青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum 91,细胞的影响
挑取实施例10中图9-A2抑菌圈边上的青枯雷尔氏菌细胞，进行透射电镜观察(图10)，与正常细胞(左图10-A)相比，图10-B病原菌的细胞严重被破坏。因此，表明生防菌株抗菌物质抑制了病原菌生长。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 福建省农业科学院农业生物资源研究所
<120> 一种作物枯萎病生防芽孢杆菌及应用
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1418
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgcagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt agcggcggac gggtgagtaa 60
cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg aaaccggggc taataccgga 120
tggttgtttg aaccgcatgg ttcagacata aaaggtggct tcggctacca cttacagatg 180
gacccgcggc gcattagcta gttggtgagg taacggctca ccaaggcgac gatgcgtagc 240
cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag 300
gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac ggagcaacgc cgcgtgagtg 360
atgaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag aacaagtgcc gttcaaatag 420
ggcggcacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg 480
gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc gtaaagggct cgcaggcggt 540
ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggga 600
acttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt 660
ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tggtctgtaa ctgacgctga ggagcgaaag 720
cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa 780
gtgttagggg gtttccgccc cttagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg 840
agtacggtcg caagactgaa actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc 900
atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctctgacaat 960
cctagagata ggacgtcccc ttcgggggca gagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag 1020
ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttga tcttagttgc 1080
cagcattcag ttgggcactc taaggtgact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat 1140
gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggacagaac 1200
aaagggcagc gaaaccgcga ggttaagcca atcccacaaa tctgttctca gttcggatcg 1260
cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc 1320
ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgtaacac 1380
aagtcggtga ggtaaccttt aggagccagc cgccgaag 1418
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
acacagatat caggcaagc 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
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<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ccgctatcaa tgaatgtttg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ggttaccttg ttacgactt 19
Claims (2)
1.一种作物枯萎病生防芽孢杆菌，其特征在于，保藏于中国典型培养物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2017359，命名为甲基营养型芽孢杆菌FJAT-42192Bacillus methylotrophicus FJAT-42192；且所述菌株的16S rRNA序列如SEQ ID No.1所示；
所述芽孢杆菌菌株可产生伊枯草菌素、丰原素和表面活性素三种脂肽；
所述伊枯草菌素类的质谱峰为[M+Na]+atm/z 1065，1079，1093；
所述丰原素类的质谱峰为[M+Na]+atm/z 1463，1477，1492，1506；
所述表面活性素的质谱峰为[M+Na]+atm/z 1016，1030，1044，1058。
2.根据权利要求1所述的一种作物枯萎病生防芽孢杆菌在防治作物枯萎病中的应用。
Priority Applications (1)
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Applications Claiming Priority (1)
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