CN113832038B

CN113832038B - 木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）K2017-696及其应用

Info

Publication number: CN113832038B
Application number: CN202111136001.5A
Authority: CN
Inventors: 孔令安; 宋美燕; 杨俊�; 彭德良; 田栓; 黄文坤; 彭焕
Original assignee: Institute of Plant Protection of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Plant Protection of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2021-09-27
Filing date: 2021-09-27
Publication date: 2023-05-23
Anticipated expiration: 2041-09-27
Also published as: CN113832038A

Abstract

本发明涉及生物防治领域，具体涉及木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)K2017‑696及其应用。本发明提供的木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)，其保藏号为CGMCC No.22444。该菌株对大豆具有明显的促生作用，同时能够抑制引起大豆根腐病的病原真菌，具有很好的促生及生物防治效果，因此具有良好的应用前景。

Description

木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)K2017-696及其应用

技术领域

本发明涉及生物防治领域，具体涉及一株木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)K2017-696及其应用。

背景技术

大豆根腐病是造成大豆减产的主要病害之一，主要发生在大豆根部，表现为大豆根系不发达、根瘤少、地上部分矮小瘦弱、叶色淡绿、分枝和结荚明显减少，严重威胁大豆的产量和品质，直接影响农业经济效益。引起大豆根腐病的病原菌主要有镰孢菌(Fusariumspp.)、疫霉菌(Phytophthora sojae)、腐霉菌(Pythium spp.)和丝核菌(Rhizoctoniaspp.)。在田间生产中，随着化学农药长期大规模使用，农药残留、环境污染和耐药性等问题日渐突出，生物防治以其无污染、无公害、长效性等优点越来越受到广泛关注，具有广阔的发展前景，是实现生态农业的重要保障。

利用非致病性镰孢菌作为生防制剂，防治由镰孢菌所引起的多种作物枯萎病是目前生产上的有效途径。在我国，吴洵耻和马平报道利用尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)的弱毒系诱导棉花对棉花黄萎病的抗性。目前，木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)也被相继报导具有生防潜力，具有防病促生的作用。

发明内容

为满足上述领域存在的需求，本发明提供一株木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)，该菌株对大豆具有明显的促生作用，同时能够抑制病原真菌，对大豆根腐病有很好的防治效果，因此具有良好的应用前景。

本发明提供的木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)，菌株号为K2017-696，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological CultureCollection Center,CGMCC)的保藏号为CGMCC No.22444。下文简称为木贼镰刀菌K2017-696或K2017-696菌株。

K2017-696菌株具有序列表中SEQ ID NO:1所示的ITS序列。ITS(InternalTranscribed Spacer)是内转录间隔区，是位于真菌核糖体RNA(rRNA)基因转录区或对应多顺反子rRNA前体中大、小亚基rRNA之间的核酸序列。序列分析结果显示，K2017-696菌株的ITS序列与Fusarium equiseti的ITS序列的同源性为99.10％。

在马铃薯-蔗糖培养基平板上接种K2017-696菌株，26℃倒置培养5天后观察菌落形态。K2017-696菌株的菌落边缘不规则，呈淡粉色，气生菌丝发达且呈白色絮状(图1)。菌落直径为4.0～4.8cm。用灭菌水涂洗菌落表面，得到分生孢子与菌丝的混合液，过滤除去菌丝后在显微镜下观察，可见较多的大型分生孢子，孢子呈月牙形，较弯曲，中部显著膨大，顶部细胞锥状，基胞足跟明显，2～6分隔，多为3～4分隔。小型分生孢子较少，呈卵圆形或椭圆形(图2)。

木贼镰刀菌K2017-696的培养物或代谢产物也属于本发明的保护范围。所述培养物是将木贼镰刀菌K2017-696接种到培养基(固体培养基或液体培养基)中培养得到的物质，包含菌体及其代谢产物。所述代谢产物是指木贼镰刀菌K2017-696在代谢过程中产生的多种代谢产物，包括初级代谢产物和次级代谢产物。

在本发明的一些实施例中，所述培养物是将木贼镰刀菌K2017-696接种到液体培养基中培养得到的发酵液；所述代谢产物是将所述发酵液过滤除菌后所得的滤液。

本发明还提供一种产品，含有木贼镰刀菌K2017-696或木贼镰刀菌K2017-696的培养物或代谢产物。

所述产品是促进大豆生长的产品、预防或治疗大豆根腐病的产品、或抑制病原真菌的产品。在本发明的一些实施例中，所述病原真菌是致病性尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)。

所述产品可以是固体菌剂或液体菌剂。所述产品的剂型可以是粉剂型、颗粒剂型或液体剂型。所述产品可以包含载体；所述载体为固体载体或液体载体；所述固体载体可以是矿物材料，例如草炭、粘土、滑石或高岭土，也可以是生物材料，例如秸秆、稻草、花生壳、玉米粉或豆粉；所述液体载体可以是水。所述产品中可以添加表面活性剂、稳定剂或pH调节剂。

制备所述产品的方法也属于本发明的保护范围。所述方法包括培养木贼镰刀菌K2017-696并将所述木贼镰刀菌或其培养物或代谢产物作为活性成分制备所述产品。

在本发明的一些实施例中，按照如下方法培养木贼镰刀菌K2017-696：将K2017-696菌株接种到马铃薯-蔗糖固体培养基上，25～27℃培养4～6天，长出菌块；再从菌块上取菌饼，接种到YEPD液体培养基中，25～27℃振荡培养4～6天，得到发酵液。优选地，将K2017-696菌株接种到马铃薯-蔗糖固体培养基上，26℃培养5天，从长出的菌块上取3块直径为5mm菌饼，接种到60mL YEPD液体培养基中，26℃、150rpm振荡培养5天，得到发酵液。优选地，所述YEPD液体培养基含有蛋白胨10g/L、酵母提取物3g/L、葡萄糖20g/L。以上培养条件以及培养基配方有利于木贼镰刀菌K2017-696正常生长，尽可能保持菌株的活性，从而提高其促生及抑菌代谢产物的产量。

木贼镰刀菌K2017-696或其培养物或代谢产物或所述产品在促进植物生长中的应用也属于本发明的保护范围。

在本发明的一些实施例中，所述植物为大豆。

木贼镰刀菌K2017-696或其培养物或代谢产物或所述产品在抑制病原真菌中的应用也属于本发明的保护范围。

在本发明的一些实施例中，所述病原真菌包括引起大豆根腐病的致病性尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)。

实验证明，木贼镰刀菌K2017-696可以明显抑制病原真菌的生长，尤其是抑制病原真菌的菌丝生长，对于由致病性尖孢镰孢菌引起的大豆根腐病的相对防效高达91.67％。此外，发明人在研究中意外地发现，木贼镰刀菌K2017-696对大豆有明显的促生作用，可使大豆植株的根长增加32.31％，株高增加36.68％，鲜重增加86.28％。

本发明提供的木贼镰刀菌K2017-696的保藏信息如下：

参椐的生物材料(株)：K2017-696

分类命名：木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)

保藏日期：2021年06月01日

保藏编号：CGMCC No.22444

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

附图说明

图1为本发明的木贼镰刀菌K2017-696的菌落形态图；其中A为菌落正面，B为菌落反面(培养皿底面)。

图2为本发明的木贼镰刀菌K2017-696的孢子形态图；其中呈月牙形的是大型分生孢子，呈卵圆形或椭圆形的是小型分生孢子。

图3为本发明的木贼镰刀菌K2017-696对致病性尖孢镰孢菌2017-120的抑制作用的试验结果；其中A为空白对照(马铃薯-蔗糖培养基中添加无菌水)；B为木贼镰刀菌K2017-696发酵液试验(马铃薯-蔗糖培养基中含10％(v/v)的木贼镰刀菌K2017-696的无菌发酵滤液)，C为多菌灵试验(马铃薯-蔗糖培养基中含3×10⁴mg·L^-1的多菌灵)。

图4为本发明的木贼镰刀菌K2017-696对大豆的促生作用的试验结果；其中A为空白对照(浇灌清水)，B为木贼镰刀菌K2017-696固体发酵物质处理组，C为致病性尖孢镰孢菌2017-120处理组。

图5为本发明的木贼镰刀菌K2017-696对大豆根腐病的防治效果的试验结果；其中A为空白对照组(供试大豆不接种致病性尖孢镰孢菌)，B为清水处理组(供试大豆接种致病性尖孢镰孢菌后加入清水)，C为K2017-696处理组(供试大豆接种致病性尖孢镰孢菌后加入木贼镰刀菌K2017-696的发酵液)，D为多菌灵处理组(供试大豆接种致病性尖孢镰孢菌后加入多菌灵可湿性粉剂)。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明的技术方案进行详细描述。

以下实施例中的供试大豆品种为“中黄13”，由中国农业科学院作物科学研究所谷勇哲老师提供，公众可从中国农业科学院植物保护研究所获得。

以下实施例中使用的致病性尖孢镰孢菌(F.oxysporum)2017-120由南京农业大学张海峰老师提供，公众可从中国农业科学院植物保护研究所获得。

以下实施例中使用的多菌灵为有效成分50％的多菌灵可湿性粉剂，购买自北京中保绿农科技集团有限公司(200g/袋)，农药登记证号：PD85150-2。

以下实施例中使用的培养基如下：

马铃薯-蔗糖培养基(PSA培养基)：马铃薯浸粉7.0g，蔗糖20.0g，琼脂20.0g，用蒸馏水定容至1L。

蛋白胨五氯硝基苯培养基：蛋白胨15g，KH₂PO₄ 1g，MgSO4 7H₂O 0.5g，五氯硝基苯(PCNB)750mg，琼脂20g，用ddH₂O溶解并定容至1L。121℃高压蒸汽灭菌30min。

酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YEPD培养基)：蛋白胨10g、酵母提取物3g、葡萄糖20g，用ddH₂O溶解并定容至1L。

若未特别说明，以下实施例中使用的试剂均为本领域常规试剂，可商购获得或按照本领域常规方法配制而得，规格为实验室纯级即可。若未特别说明，以下实施例所使用的实验方法和条件均为本领域常规实验方法和条件，可参考相关实验手册、公知文献或厂商说明书。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义相同。

实施例1、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)K2017-696的分离、纯化和鉴定1、真菌的分离纯化

本发明的木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)K2017-696菌株是从黑龙江省哈尔滨长岭湖大豆根系土壤中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的。

分离纯化的方法如下：

称取土壤样品10g(土壤样品如有结块，尽量碾碎混匀)，倒入200ml烧杯中，加入90ml无菌水，玻璃棒充分搅拌混匀，得到土壤悬浮液。然后制备土壤悬浮液的200倍、400倍、1000倍稀释液，依次吸取200μL梯度稀释液，分别涂布于马铃薯-蔗糖培养基(PSA)平板上，将平板置于26℃恒温培养箱中，第4天开始调查记录菌落数，以菌落呈单个菌落状分布、数量在30～50之间、互不重叠为标准来确定最佳稀释倍数。结果显示，土壤悬浮液的最佳稀释倍数为400倍。

将土壤悬浮液稀释到最佳稀释倍数，用移液枪吸取200μL稀释液，接种于蛋白胨五氯硝基苯培养基平板上，用玻璃三角涂布棒涂匀，置于25℃恒温培养箱中培养，待菌落长出后，及时挑菌于PSA培养基平板上，进行分离纯化培养并保存。共获得887株待测菌株。通过平板对峙试验分别测定待测菌株对致病性镰孢菌的抑菌活性，筛选到了一株能够抑制病原真菌的菌株，命名为K2017-696菌株。

2、K2017-696菌株的形态观察

在马铃薯-蔗糖培养基平板上接种K2017-696菌株，26℃倒置培养5天后观察菌落形态。如图1所示，K2017-696菌株的菌落直径为4.0～4.8cm，菌落边缘不规则，呈淡粉色，气生菌丝发达且呈白色絮状。

用灭菌水涂洗菌落表面，得到分生孢子与菌丝的混合液，使用Miracloth(Millipore，美国)过滤除去菌丝，所得滤液即为分生孢子悬浮液。用Olympus DP80显微镜观察分生孢子形态并拍照。结果如图2所示，大型分生孢子较多，孢子呈月牙形，较弯曲，中部显著膨大，顶部细胞锥状，基胞足跟明显，2～6分隔，多为3～4分隔。小型分生孢子少，呈卵圆形或椭圆形。

3、K2017-696菌株的ITS基因序列鉴定

(1)K2017-696菌株的DNA提取

将K2017-696菌株接种到YEPD液体培养基中，25℃、160r/min摇床培养5d，发酵液经Miracloth(Millipore，美国)过滤，收集滤液，12000r/min离心10min，收集菌体，然后采用Spin柱式DNA回收试剂盒(北京天根生化科技有限公司)按照试剂盒说明书记载的操作步骤提取菌体的基因组DNA。

(2)PCR扩增ITS区

以提取的基因组DNA为模板，采用镰孢菌通用引物(F1和F2)以及镰孢菌鉴定引物(EF1和EF2)扩增K2017-696菌株的ITS(Internal Transcribed Spacer)。引物的核苷酸序列如下：

F1：ATTACTCCAGCATCCTTGC；

F2：TTTACAACTCCCAAACCCC。

EF1：ATGGGTAAGGAGGACAAGAC；

EF2：GGAAGTACCAGTGATCATGTT。

PCR反应体系(50μL)为：10×Buffer 5μL、2.5mol/L dNTP 4μL、正向引物(10μmol/L)和反向引物(10μmol/L)各1μL，Taq酶0.5μL，DNA模板2μL，用灭菌水补足至50μL。PCR试剂均购自TaKaRa公司。

PCR反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。

反应结束后，取8μL PCR产物，在1％琼脂糖凝胶内100V电泳30min，用凝胶成像仪查看DNA条带片段大小，判断DNA的质量及病原真菌基因组的条带大小。

(3)测序和比对

使用DNA回收试剂盒(天根，DP209)对琼脂糖凝胶中亮条带所对应的PCR产物进行回收和纯化，并将回收产物送中国农业科学院作物科学研究所进行测序。登陆NCBI网站(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)，将测序结果(SEQ ID NO:1)与已知真菌的ITS序列进行BLAST分析。结果显示，K2017-696菌株的ITS序列与Fusarium equiseti的ITS序列的同源性为99.10％，因此将其鉴定为木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)。

本发明分离和鉴定的木贼镰刀菌K2017-696已于2021年06月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological CultureCollection Center,CGMCC)，保藏号为CGMCC No.22444。

实施例2、木贼镰刀菌K2017-696的抑菌活性测定

采用生长速率法测定菌株发酵滤液的抑菌活性。将分离得到的菌株接种于马铃薯-蔗糖培养基上，26℃恒温光照培养箱培养5d。在超净工作台内用打孔器在菌株边缘打取直径5mm菌饼，将5块菌饼接种到125mL YEPD培养基中，放置于摇床中，26℃、150rpm振荡培养5d后，使用Miracloth(Millipore，美国)过滤发酵液，收集滤液，10000rpm离心10min，取上清液，使用0.22μm孢子过滤器过滤得到K2017-696无菌发酵滤液。

制备无菌发酵滤液培养基：取10mL无菌发酵滤液加入到90mL冷却至40℃的马铃薯-蔗糖培养基中，充分混匀后制备平板。以3×10⁴mg·L^-1多菌灵作为药剂对照，并以添加等量无菌水的马铃薯-蔗糖培养基作为空白对照，按照同样的方法制备药剂对照和空白对照的培养基。待平板培养基冷凝后，在无菌操作台上将直径5mm的致病性尖孢镰孢菌2017-120菌饼分别接种到含有K2017-696无菌发酵滤液或者多菌灵的平板中央以及空白对照平板中央，每种处理设置3个重复，置于26℃、16h光照/8h黑暗培养，培养至第5天(空白对照的菌落直径达到40mm以上时)测量菌落直径，计算相对抑菌率。相对抑菌率(％)＝100×(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)。

表1不同处理对致病性尖孢镰孢菌菌丝生长的影响

处理	菌丝生长抑制率(％)
		空白对照	0
多菌灵	53.61％
		木贼镰刀菌K2017-696无菌发酵滤液	28.36％

结果显示，木贼镰刀菌K2017-696无菌发酵滤液对供试致病性尖孢镰孢菌2017-120的菌丝生长有明显的抑制作用(图3)，抑制率为28.36％。

实施例3、木贼镰刀菌K2017-696的促生效果测定

准备大豆：用1％次氯酸钠溶液处理大豆2min，然后用无菌水冲洗干净，催芽2天，待大豆露白，选择生长一致的大豆进行实验。

木贼镰刀菌K2017-696的培养：将K2017-696菌株接种于PSA固体培养基上，于26℃恒温光照培养箱中培养5天，在超净工作台内用直径5mm打孔器在菌落边缘打取菌饼(d＝5mm)。将洗干净的高粱粒用水煮20min后，过筛，控干水分，称取125g装入250mL三角瓶内，121℃湿热灭菌30min，冷却后，向高粱粒中接入5个木贼镰刀菌K2017-696的菌饼(d＝5mm)，26℃黑暗条件下培养5天，每天摇晃一次，当高粱粒表面长满菌丝时，用于接种。

致病性尖孢镰孢菌的培养：将致病性尖孢镰孢菌2017-120接种于PSA固体培养基上，于26℃恒温光照培养箱中培养5天，在超净工作台内用直径5mm打孔器在菌落边缘打取菌饼(d＝5mm)。将洗干净的高粱粒用水煮20min后，过筛，控干水分，称取125g装入250mL三角瓶内，121℃湿热灭菌30min，冷却后，向高粱粒中接入5个致病性尖孢镰孢菌2017-120的菌饼(d＝5mm)，26℃黑暗条件下培养5天，每天摇晃一次，待高粱粒表面长满菌丝体时，用于接种。

测定促生效果：设置三个实验组，分别是木贼镰刀菌K2017-696处理组、致病性尖孢镰孢菌2017-120处理组、空白对照组。

木贼镰刀菌K2017-696处理组：在直径5cm的花盆中装入2/3体积的培养基质，均匀撒入2cm厚的长满木贼镰刀菌K2017-696菌丝的高粱粒，并覆上2cm厚的无菌蛭石后播种大豆，每盆5粒，用2cm厚的湿润松散的无菌蛭石覆盖在大豆种子表面。

致病性尖孢镰孢菌2017-120处理组：在直径5cm的花盆中装入2/3体积的培养基质，均匀撒入2cm厚的长满致病性尖孢镰孢菌2017-120菌丝的高粱粒，并覆上约2cm厚的无菌蛭石后播种大豆，每盆5粒，用2cm厚的湿润松散的无菌蛭石覆盖在大豆种子表面。

空白对照组：以不接菌的大豆作为空白对照(CK)。在直径5cm的花盆中装入2/3体积的培养基质，并覆上约2cm厚的无菌蛭石后播种大豆，每盆5粒，用2cm厚的湿润松散的无菌蛭石覆盖在大豆种子表面。

每个实验组设3次重复，试验重复3次。将所有花盆放置于28℃、14h光照/10h黑暗的培养箱中，定期浇水保持蛭石湿润，20天后调查各实验组大豆植株的根长、株高、鲜重以及发病情况。

表2菌株K2017-696固体发酵产物对大豆生长的促进作用

结果如表2和图4所示，木贼镰刀菌K2017-696的固体发酵产物对大豆具有明显的促进生长的作用。致病性尖孢镰孢菌2017-120处理组的大豆植株不能正常生长，植株的根长、株高、鲜重等农艺性状均受到严重影响；木贼镰刀菌K2017-696的固体发酵产物处理的大豆与空白对照组相比生长迅速，叶片浓密，茎部粗壮，尤其是植株长势，与空白对照组相比根长增加了32.31％，株高增加了36.68％，鲜重增加了86.28％。

实施例4、木贼镰刀菌K2017-696对大豆根腐病的防治效果测定

大豆准备：用1％次氯酸钠溶液处理大豆2min，然后用无菌水冲洗干净，催芽2天，待大豆露白，选择生长一致的大豆进行实验。

致病性尖孢镰孢菌的培养：将致病性尖孢镰孢菌2017-120接种于PSA固体培养基上，于26℃恒温光照培养箱中培养5天。将洗干净的高粱粒用水煮20min后，过筛，控干水分，称取125g装入250mL三角瓶内，121℃湿热灭菌30min，冷却后，向三角瓶中的高粱粒接入5个在PSA培养基中培养5天的致病性尖孢镰孢菌2017-120的菌饼(d＝5mm)，26℃黑暗条件下培养5天，每天摇晃一次，待高粱粒表面长满菌丝体时，用于接种。

木贼镰刀菌K2017-696发酵液的制备：将K2017-696菌株接种于PSA固体培养基上，于26℃恒温光照培养箱中培养5天。在超净工作台内用直径为5mm的打孔器在菌株边缘打取菌饼，取3块菌饼，接种至60mL YEPD培养基中。26℃、150rpm摇床培养5天后，将发酵液用Miracloth(Millipore，美国)过滤至50mL离心管中，收集滤液，用无菌水稀释至5倍。

防效测定：设置4个实验组，分别是K2017-696处理组、多菌灵处理组、清水处理组(CK^－)、空白对照组(CK⁺)。

处理组：在直径5cm的花盆中装入2/3体积的培养基质，均匀撒入2cm厚的长满致病性尖孢镰孢菌2017-120菌丝的高粱粒，并覆上约2cm厚的无菌蛭石后播种大豆，每盆5粒，用2cm厚的湿润松散的无菌蛭石覆盖在大豆种子表面。于播种大豆的当天，向K2017-696处理组的培养基质中加入木贼镰刀菌K2017-696发酵液50mL，向多菌灵处理组的培养基质中加入多菌灵3万倍稀释液50mL，向清水处理组的培养基质中加入清水50mL。

空白对照组：在直径5cm的花盆中装入2/3体积的培养基质，并覆上约2cm厚的无菌蛭石后播种大豆，每盆5粒，用2cm厚的湿润松散的无菌蛭石覆盖在大豆种子表面。

每个实验组设3个重复，整个试验重复3次，结果取平均值。将所有花盆放置于28℃、14h光照/10h黑暗的培养箱中培养，定期浇水保持蛭石湿润，30天后调查各实验组大豆植株的根长、株高和鲜重，观察大豆的根部病情并计算病情指数。评价标准：0级，未发病，根系生长正常；1级，主根和须根轻微变褐，植株正常生长；2级，主根严重变黑，甚至不能通过侵染点继续生长；须根轻微减少，能通过侵染点继续生长，植株正常生长；3级，主根严重变黑，不能通过生长点继续生长；须根大量减少，甚至没有，植株生长不良；4级，根部腐烂，植株不能正常生长，甚至整株死亡。计算方法：病情指数＝100×∑(各级发病数×相应级别)/(调查总数×最高级数)。相对防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100。

表3菌株K2017-696发酵液对大豆根腐病的防治效果

结果如表3和图5所示，K2017-696菌株的发酵液灌根对大豆根腐病具有明显的防效和促生作用，发酵液灌根后的大豆苗与空白对照组相比根系发达，生长迅速，叶片浓密，茎部粗壮，与空白对照组相比根长增加了40.08％，株高增加了46.60％，鲜重增加了41.26％，对于由致病性尖孢镰孢菌引起的根腐病的相对防效高达91.67％。

以上实施例只是本发明的部分实施例，而非全部实施例。上述实施例仅用于对本发明的技术方案进行解释和说明，而非用于限制本发明的保护范围。任何熟悉本领域技术的人员在本发明公开的技术范围内对上述实施例所做的修饰或改变，均应涵盖在本发明的保护范围内。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）K2017-696及其应用

<130> P210377-ZWB

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 676

<212> DNA

<213> 木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)

<400> 1

ctcgtctcgg cacgtcgact ctggcaagtc gaccactgtg agtactaccc tcaatgacct 60

gcttatcagc agtcatcaac cccgccatac gtggtggggt aaattcaaca tatacatttg 120

ctgacaacat tgcatagacc ggtcacttga tctaccagtg cggtggtatc gacaagcgaa 180

ccatcgagaa gttcgagaag gttggtttcc attttcctcg atcgcacgcc ctctgcccac 240

cgatccatca ttcgaatcag tctcgactga atatgcgcct gttaccccgc tcgagtacaa 300

aattttgcgg ctcaaccgca atattttggt ggggcttata ccccgctact cgagtgacag 360

gcgcttgccc tcttcccaca aaatcacttc ttgcgcatca cgtgccaatc agtcactaac 420

cacccgacaa taggaagccg ccgagctcgg taagggttcc ttcaagtacg cctgggttct 480

tgacaagctc aaggccgagc gtgagcgtgg tatcaccatt gatatcgctc tctggaagtt 540

cgagactcct cgctactatg tcaccgtcat tggtatgttg tcatcactta cactcattac 600

cttctcatgc taacatggat tccagacgct cccggtcacc gtgatttcat caagaacatg 660

atcactggta cctcca 676

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

attactccag catccttgc 19

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tttacaactc ccaaacccc 19

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

atgggtaagg aggacaagac 20

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggaagtacca gtgatcatgt t 21

Claims

1.一株木贼镰刀菌（Fusarium equiseti），其保藏号为CGMCC No. 22444。

2.权利要求1所述的木贼镰刀菌的培养物。

3.根据权利要求2所述的培养物，其特征在于，所述培养物是将权利要求1所述的木贼镰刀菌接种到液体培养基中培养得到的发酵液。

4.一种产品，其特征在于，含有权利要求1所述的木贼镰刀菌或权利要求2或3所述的培养物。

5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品是促进大豆生长的产品、预防或治疗由致病性尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）引起的大豆根腐病的产品、或抑制致病性尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）的产品。

6.制备权利要求4或5所述的产品的方法，其特征在于，包括培养权利要求1所述的木贼镰刀菌并将所述木贼镰刀菌或其培养物作为活性成分制备所述产品。

7.权利要求1所述的木贼镰刀菌或权利要求2或3所述的培养物或权利要求4或5所述的产品在促进大豆生长中的应用。

8.权利要求1所述的木贼镰刀菌或权利要求2或3所述的培养物或权利要求4或5所述的产品在抑制致病性尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）中的应用。