CN104230793A - 调控激酶级联的组合物以及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及调控激酶级联的组合物以及方法。本发明涉及N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(KX2-391)的组合物以及调控激酶级联的一种或者多种成员的方法。

Description

调控激酶级联的组合物以及方法
本申请是国际申请日为2007年12月28日、国际申请号为PCT/US2007/026457、进入国家阶段的申请号为200780051766.0、发明名称为“调控激酶级联的组合物以及方法”的PCT申请的分案申请。
相关申请
本申请要求享有申请日为2006年12月28日的临时专利申请U.S.S.N.60/877,762的优先权，上述申请所公开的全部内容在此引入作为参考。
技术领域
本发明涉及本质上纯的N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(KX2-391)及其盐的组合物，以及合成上述物质的方法。本发明同样涉及利用这类组合物的方法。
背景技术
一个细胞将一种类型的信号或者刺激传递至另外一个细胞的任意的过程被称为信号转导。被称为信号转导的过程通常包括在所述细胞内发生的一定次序的生化反应，这些生化反应通过酶来实现并且经由第二信使进行连接。在许多转导过程中，越来越多数量的酶以及其他分子参与了由最初的刺激所引发的事件。在这类情况中，这种连串的步骤被称为“信号级联放大”或者“第二信使途径”，并且通常导致由一个小的刺激引发一种大的应答。在信号转导中所包括的一类分子是酶的激酶家族。激酶中最大的集团是蛋白激酶，其作用于特定的蛋白质并且修正所述特定蛋白质的活性。它们被广泛的用于信号的传输以及控制细胞内复杂的反应。
蛋白激酶是酶中的一个大类，它催化了γ-磷酸从ATP(三磷酸腺苷)至蛋白质以及肽中的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)侧链或者酪氨酸(Tyr)侧链上的羟基基团的转移，并且最终参与控制各种重要的细胞功能，或许最显著的控制：信号转导，分化以及扩增。据估计，在人类体内存在大约2000种不同的蛋白激酶，并且尽管它们中的每一种针对特定的蛋白/肽底物进行磷酸化，但它们都以高度保守的方式与一种同样的次级底物进行结合，所述的次级底物是ATP(三磷酸腺苷)。蛋白磷酸酶反向催化了磷酸的转移。
酪氨酸激酶是一种能够将来自于ATP的磷酸基团转移至蛋白质中的酪氨酸残基中的酶。通过激酶完成的蛋白质的磷酸化作用是信号转导中的一个重要机制，用于对酶的活性进行调节。所述的酪氨酸激酶被分为两组：它们是细胞质蛋白以及跨膜受体连接激酶。在人类中，存在32种细胞质蛋白酪氨酸激酶以及58种受体连接蛋白-酪氨酸激酶。那些作用于细胞表面酪氨酸激酶连接受体的激素以及生长因子通常是促进生长的，并且发挥刺激细胞分裂的功能(例如，胰岛素，胰岛素样生长因子1，表皮生长因子)。
多种已知的蛋白激酶或者蛋白磷酸酶的抑制剂具有多种治疗学应用。蛋白激酶或者蛋白磷酸酶抑制剂的一种有前途的潜在的治疗用途是作为抗肿瘤制剂。在已知的致癌基因产物中有大约50％是蛋白酪氨酸激酶(PTK)，并且已经表明，它们的激酶活性导致了细胞的转化。
所述的蛋白酪氨酸激酶(PTK)可以被划分为两个种类，膜受体蛋白酪氨酸激酶(例如，生长因子受体蛋白酪氨酸激酶)以及非受体蛋白酪氨酸激酶(例如，原致癌基因产物中的Src家族)。在非受体蛋白酪氨酸激酶的Src家族中具有至少9个成员，利用pp60c-src(在此之后将其简便的表示为“Src”)表示上述家族的原型蛋白酪氨酸激酶，其中有大约300个氨基酸的催化结构域是高度保守的。已经在多种人类癌症中报道了Src的过度活化，包括结肠癌，乳腺癌，肺癌，膀胱癌，以及皮肤癌，还有胃癌，多毛细胞白血病，以及成神经细胞瘤。从跨膜受体(例如，表皮生长因子受体(EGFR)以及p185HER2/Neu)至所述细胞内部的过度刺激细胞扩增信号也表现出经由Src进行反应。因此，近来建议将Src作为癌症治疗的通用靶位(universal target)，因为在许多重要的人类肿瘤类型中，肿瘤的形成、发展以及转移都涉及到过度活化(不存在变异)。
由于在各种正常细胞的信号转导途径(例如，细胞的生长，分化，存活，粘着，迁移，等等)中都涉及到激酶，激酶被认为在各种疾病以及障碍中发挥作用。因此，对于激酶信号级联的调控可能是用以治疗或者预防这类疾病以及障碍的一种重要的方式。
小规模的合成KX2-391的方法已经被公开(美国专利7,300,931)。然而，这种合成方法对于上述化合物的大量生产而言是不切实际的，并且得到的产物受到氯乙烷的污染，所述的氯乙烷是一种已知的弱烷化剂。因此，以足够高的水平存在的氯乙烷限制了KX2-391组合物的药物学效力。
因此，需要高度纯化的KX2-391组合物及其合成方法，其是安全的并且是简单的，并且所述方法以大规模、高产量的生产KX2-391，且本质上不含有氯乙烷。
发明内容
本发明所述的化合物能够有效地调控所述的激酶信号级联中的成员。某些化合物能够有效地调控激酶信号级联中的不止一个成员。本发明所述的化合物可以被用作药物制剂。本发明所述的化合物能够有效地调控激酶的规则(regulation)，其中所述的激酶是在正常的细胞信号转导途径(例如，细胞的生长，分化，存活，粘着，迁移，等等)中所涉及到的激酶，或者是在疾病或者障碍中所涉及到的激酶。
例如，由本发明所述的化合物进行调控的所述激酶级联中的成员负责疾病或者障碍的显现，所述的疾病或者障碍是例如过度增殖障碍，癌症，癌前状态，骨质疏松症，心血管疾病，免疫系统功能紊乱，II型糖尿病，肥胖，眼科疾病，黄斑水肿，慢性神经性疼痛，听力损失，以及移植排斥。
本发明所述的化合物能够有效地用于治疗由酪氨酸激酶的抑制所调控的疾病以及障碍。例如，本发明所述的化合物能够有效地治疗由Src激酶所调控的疾病以及障碍。本发明所述的化合物还能够有效地治疗由黏着斑激酶(FAK)所调控的疾病以及障碍。
例如，所述的化合物可以被有效地作为抗增殖制剂，用于对哺乳动物进行治疗，例如用于对人类以及动物进行治疗。所述的化合物可以被用来作为，例如但不局限于，抗癌症制剂，抗血管生成制剂，抗转移制剂，抗微生物制剂，抗细菌制剂，抗真菌制剂，抗寄生虫制剂和/或抗病毒制剂。本发明所述的化合物可以用于例如治疗肺癌。本发明所述的化合物同样可以用于例如治疗结肠癌。本发明所述的化合物还可以用于例如治疗乳腺癌。
本发明涉及本质上纯的N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(化合物1)，以及该化合物的盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物：
本发明涉及高度纯化的KX2-391组合物(通过高效液相色谱法测得纯度＞98.0％)及其合成方法，所述的合成方法是安全并且简单的，该方法大规模(＞100克)、高产率(＞80％)地生产KX2-391，并且仅具有有限量的氯乙烷(利用顶空气相色谱法残留溶剂分析测得＜250ppm)。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物中的化合物1具有高于98％的纯度。例如，在本发明所述的组合物中，所述化合物1的纯度为98.5％，99.0％，99.5％，99.6％，99.7％，99.8％或者99.9％。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的杂质。例如，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的下述杂质中的任意一种或是它们的组合：氯乙烷，乙醇，乙酸乙酯，庚烷，苯甲醚，以及钯。
在另外的优选实施方式中，所述的组合物含有少于250ppm的氯乙烷，该数据是通过顶空气相色谱法残留溶剂分析测得的。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的氯乙烷在大约0ppm至大约250ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于200ppm、少于200ppm、少于150ppm、少于100ppm、或者少于50ppm的氯乙烷。
本发明所述的化合物以及制剂含有少于大约100ppm的钯。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的钯在大约0ppm至大约100ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于75ppm、少于50ppm、少于30ppm、少于20ppm、少于10ppm、或者少于5ppm的钯。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的溶剂化物。
本发明同样涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的水合物。
本发明还包括本质上纯的化合物1的酸加成盐。例如，盐酸盐。所述的酸加成盐可以是，例如，二盐酸盐。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的酸加成盐。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的盐酸盐。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的二盐酸盐。
本发明同样包括化合物1的前体药物。
本发明还包括本质上纯的、化合物1的药物可接受性盐。
本发明同样涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1，或者是其溶剂化物、水合物或者盐，以及至少一种药物可接受性赋形剂。
本发明还涉及利用这种本质上纯的化合物以及组合物对所述激酶信号级联中的成员进行调控。某些化合物能够有效地调控激酶信号级联中的不止一个成员。本发明所述的化合物可以被用作药物制剂。
本发明中所述的某些化合物是非ATP竞争性激酶抑制剂。
本发明涉及化合物以及利用所述的化合物治疗细胞增殖障碍的方法。
本发明还包括预防或者治疗细胞增殖障碍的方法，所述的方法是给有需要的对象施用一种药物组合物，所述的药物组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，以及至少一种药物可接受性赋形剂。
例如，所述的细胞增殖障碍是癌前状态或者癌症。利用本发明所述的化合物治疗或者预防的所述细胞增殖障碍可以是癌症，例如，结肠癌或者肺癌。
利用本发明所述的化合物治疗或者预防的所述细胞增殖障碍可以是过度增殖障碍。
利用本发明所述的化合物治疗或者预防的所述细胞增殖障碍可以是银屑病。
例如，可以通过对酪氨酸激酶的抑制来实现对于所述增殖障碍的治疗或者预防。例如，所述的酪氨酸激酶可以是Src激酶或者是黏着斑激酶(FAK)。
本发明涉及一种治疗或者预防疾病或者障碍的方法，其中所述的疾病或者障碍受到酪氨酸激酶抑制的调控，所述的方法是施用一种药物组合物，所述的药物组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，以及至少一种药物可接受性赋形剂。例如，所述的受到酪氨酸激酶抑制的调控的疾病或者障碍是癌症，癌前状态，过度增殖障碍，或者微生物感染。
本发明所述的药物组合物可以调控激酶途径。例如，所述的激酶途径是Src激酶途径，或者是黏着斑激酶途径。
本发明所述的药物组合物可以直接对激酶进行调控。例如，所述的激酶是Src激酶，或者是黏着斑激酶。
本发明中所述的某些药物组合物是非ATP竞争性激酶抑制剂。
本发明所述的化合物还可以用于治疗或者预防微生物感染，例如细菌、真菌、寄生虫或者病毒感染。
本发明所述的化合物可以被用来作为药物。例如，本发明所述的化合物被用来作为抗增殖制剂，用于对人类和/或动物进行治疗，例如用于对人类和/或其他哺乳动物进行治疗。所述的化合物可以被用来作为，例如但不局限于，抗癌症制剂，抗血管生成制剂，抗微生物制剂，抗细菌制剂，抗真菌制剂，抗寄生虫制剂和/或抗病毒制剂。除此之外，所述的化合物可以被用于其他与细胞增殖相关的障碍例如糖尿病性视网膜病变，黄斑变性以及银屑病。抗癌症制剂包括抗转移制剂。
本发明所述的被用来作为药物制剂的化合物包含本质上纯的化合物1及其盐、溶剂化物、水合物。
在本发明的一个方面，本发明中所述的化合物，例如本发明所述的化合物被用来调控激酶级联。例如，所述的化合物被用来调控激酶级联中的成员，所述的成员负责疾病或者障碍的显现。
这样的疾病以及障碍包括癌症，骨质疏松症，心血管疾病，免疫系统功能紊乱，II型糖尿病，肥胖，以及移植排斥。
例如，本发明所述的化合物可以被用来治疗或者预防对象的细胞增殖障碍。在所述实施方式中的一个方面，所述的细胞增殖障碍是癌前状态或者癌症。在所述实施方式中的另外一个方面，所述的细胞增殖障碍是过度增殖障碍。在另外一种实施方式中，对于所述细胞增殖障碍、癌症或者过度增殖障碍的预防或者治疗是通过对激酶的抑制来实现的。在另外一种实施方式中，对于所述细胞增殖障碍、癌症或者过度增殖障碍的预防或者治疗是通过对酪氨酸激酶的抑制来实现的。在另外一种实施方式中，对于所述细胞增殖障碍、癌症或者过度增殖障碍的预防或者治疗是通过对Src激酶或者黏着斑激酶(FAK)的抑制来实现的。在另外一种实施方式中，所述的对象是哺乳动物。在一种实施方式中，所述的对象是人类。
本发明还涉及治疗或者预防对象的癌症或者增殖障碍的方法，包括施用一种有效剂量的组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。例如，本发明所述的化合物可以是激酶抑制剂。本发明所述的化合物可以是非ATP竞争性激酶抑制剂。本发明所述的化合物可以直接抑制激酶的活性，或者可以影响所述的激酶途径。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象免受听力损失或者治疗对象的听力损失的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物并不抑制ATP与所述的蛋白激酶发生结合。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。在一种实施方式中，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部的方式实现，例如，通过向耳朵内进行滴注、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在另外的实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。
在一种实施方式中，将所述的化合物在出现听力损失之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在出现听力损失之后进行施用。
在一种实施方式中，将所述化合物与一种能够引起听力损失的药物一同施用，其中所述的药物是例如顺铂或者是一种氨基糖苷类抗生素。在另外一种实施方式中，将所述的化合物与一种以多毛细胞为靶向的药物一同施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患骨质疏松症或者治疗对象的骨质疏松症的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在出现骨质疏松之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在出现骨质疏松之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患眼科疾病或者治疗对象的眼科疾病的方法，所述的眼科疾病是例如黄斑病变、视网膜病、黄斑水肿等等，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。在另外一种实施方式中，所述的化合物抑制血管内皮生长因子(VEGF)途径中的一个或者多个成员。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部(例如，通过向耳朵内进行滴注)、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在出现所述的眼科疾病之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在出现眼科疾病之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患糖尿病或者治疗对象的糖尿病的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在糖尿病的发作之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在糖尿病的发作之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患肥胖症或者治疗对象的肥胖症的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在对象发生肥胖之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在对象发生肥胖之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患脑卒中(stroke)或者治疗对象的脑卒中的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在发生脑卒中(stroke)之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在发生脑卒中(stroke)之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患动脉粥样硬化或者治疗对象的动脉粥样硬化的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种调节对象的免疫系统活性的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患慢性神经性疼痛或者治疗对象的慢性神经性疼痛的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在慢性神经性疼痛的发作之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在慢性神经性疼痛的发作之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止其患乙型肝炎或者治疗对象的乙型肝炎的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在乙型肝炎的发作之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在乙型肝炎的发作之后进行施用。
本发明的另外一个方面是一种预防或者治疗细胞增殖障碍的方法，所述的方法包括向有需要的对象施用一种组合物，所述的组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物。在一种实施方式中，所述的化合物抑制蛋白激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在另外一种实施方式中，所述的化合物并不抑制ATP与蛋白激酶发生结合。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。在另外一种实施方式中，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
本发明涉及一种治疗或者预防疾病或者障碍的方法，其中所述的疾病或者障碍受到酪氨酸激酶抑制的调控，其中所述的增殖障碍选自癌症，癌前状态，过度增殖障碍，以及微生物感染。
例如，所述的微生物感染是细菌、真菌、寄生虫或者病毒感染。在另外一个实施例中，所述的增殖障碍是一种过度增殖障碍，选自银屑病，糖尿病性视网膜病变以及视网膜黄斑变性。在某些实施例中，所述的增殖障碍是癌症。例如，所述的癌症可以是实体肿瘤，例如肺癌，乳腺癌，结肠癌，卵巢癌，脑癌，肝癌，胰腺癌，或者前列腺癌，恶性黑素瘤，或者非黑素瘤皮肤癌。在某些实施例中，所述的癌症是乳腺癌，结肠癌，或者是肺癌。在某些实施例中，所述的癌症是血液肿瘤，恶性血液病，儿童白血病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤，霍奇金氏病，淋巴细胞或皮肤原发性淋巴瘤，急性或者慢性白血病，成淋巴细胞白血病，急性髓细胞白血病，慢性髓细胞白血病，浆细胞肿瘤，淋巴肿瘤或者与AIDS(获得性免疫缺陷综合症)相关的癌症。
在某些实施例中，所述的增殖障碍是表皮囊肿，皮样囊肿，脂肪瘤，腺瘤，毛细血管瘤，皮肤血管瘤，淋巴管瘤，痣损伤(nevi lesion)，畸胎瘤，肾瘤，肌纤维瘤，成骨细胞瘤，或者发育不良性团块(dysplastic mass)。
在本发明的某些方法中，接受本发明所述化合物的治疗的所述对象是人类。
上述的说明相当宽泛的列出了本发明中更为重要的特征，其目的是为了使其后的详细说明能够被理解，并且使本发明对于该领域所作的贡献能够被更好的理解。通过与实施例进行结合考虑，关于本发明的其他目的以及特征能够从下面的详细描述中显现出来。
附图说明
附图1的图表表示的是KX2-391.2HCl lot 02BP 111F的差式扫描量热(DSC)图。
附图2的图表表示的是KX2-391.2HCl lot 02BP 111E的差式扫描量热(DSC)图。
附图3的图表表示的是KX2-391.2HCllot 02BP 111E的X射线粉末衍射(XRPD)图。
附图4的图表表示的是KX2-391.2HCl lot 02BP 111F的X射线粉末衍射(XRPD)图。
附图5表示的是KX2-391(lot 02BP096K)的核磁共振(NMR)谱。
具体实施方式
在下面随后的描述中列出了本发明所述的一种或者多种实施方式的详细内容。尽管在本发明的实践或者检验中可以使用与本发明中所描述的相类似或者等价的任意方法以及物质，但下面描述的是优选的方法以及物质。通过下面的描述，本发明所述的其他特征、目的以及优点将是显而易见的。在下述的具体说明中，除非文章中明确指示，否则所述的单数形式也包括复数。除非特别定义，这里使用到的所有的技术术语以及科技术语与发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。如产生矛盾，将以本说明书为准。这里所提及的所有的出版物、专利申请、专利、以及其他参考文献的全部内容在此引入作为参考。
由于在许多正常的细胞信号转导途径(例如，细胞的生长，分化，存活，粘着，迁移，等等)的调节中涉及到激酶，激酶被认为是在许多的疾病以及障碍中发挥着作用。因此，对于激酶信号级联的调控可能是治疗或者预防这类疾病以及障碍的一种重要的方式。这类疾病以及障碍包括，例如，癌症，骨质疏松症，心血管疾病，免疫系统功能紊乱，II型糖尿病，肥胖，以及移植排斥。
本发明所述的化合物能够有效的调控所述的激酶信号级联中的一个成员。某些化合物能够有效的调控激酶信号级联中的不止一个成员。所述的术语“调控蛋白激酶信号级联中的一个或者多个成员”指的是所述的激酶信号级联中的一个或者多个成员受到影响，使得细胞的功能发生改变。蛋白激酶信号级联中的成员包括在所述的激酶信号途径中直接或者间接涉及到的任何蛋白，包括第二信使以及上游靶位和下游靶位。
许多蛋白激酶以及磷酸酶是已知的，并且它们是治疗学的发展所针对的目标。参见，例如，Hidaka与Kobayashi，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol，1992，32：377-397；Davies等人，Biochem.J.，2000，351：95-105，上述文献在此引入作为参考。
激酶中的一个家族——蛋白酪氨酸激酶，被划分为两个大的家族：受体酪氨酸激酶，或者表示为RTK(例如，胰岛素受体激酶(IRK)，表皮生长因子受体(EGFR)，成纤维细胞生长因子受体(FGFR)，血小板衍生生长因子受体(PDGFR)，血管内皮生长因子受体(VEGFR-2或者Flk 1/KDR)，以及神经生长因子受体(NGFR))，以及非受体酪氨酸激酶，或者表示为NRTK(例如，Src家族(Src，Fyn，Yes，Blk，Yrk，Fgr，Hck，Lck，以及Lyn)，Fak，Jak，Abl以及Zap 70)。参见，例如，Parang与Sun年，Expert Opin.Ther.Patents，2005，15：1183-1207，上述文献在此引入作为参考。
由于Src激酶在各种癌症中所起到的作用，这些激酶成为许多研究的学科，这些研究涉及Src抑制剂作为癌症治疗剂的进展，包括高度转移的癌症细胞的生长。寻找Src抑制剂作为各种癌症的治疗剂，这些癌症包括，例如，结肠癌，癌症前期的结肠病变，卵巢癌，乳腺癌，上皮癌，食道癌，非小细胞肺癌，胰腺癌，以及其他癌症。参见，例如，Frame，Biochim.Biophys.Acta，2002，1602：114-130，以及Parang与Sun，Expert Opin.Ther.Patents，2005，15：1183-1207。
可以将对于其他激酶的抑制用于治疗以及调控其他类型的疾病以及障碍。例如，可以通过施用血管内皮生长因子(VEGF)受体酪氨酸激酶抑制剂来抑制或者预防各种眼部疾病。酪氨酸磷酸酶PTP-1B和/或糖原磷酸化酶的抑制剂能够为II型糖尿病或者肥胖提供治疗。p56lck能够有效的治疗免疫系统障碍。其他的靶位包括人类免疫缺陷病毒(HIV)逆转录酶，血栓素合成酶，表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFRTK)，p55fyn，等等。
本发明的化合物可以是在Src肽底物位点发生结合的Src信号抑制剂。在c-Src(527F，组成性激活及转化)转化的NIH3T3细胞以及人类结肠癌细胞(HT29)中对本发明所述的各种化合物的活性进行了研究。例如，在这些细胞系中，KX2-391表现出以一种剂量依赖的形式降低了已知Src蛋白底物的磷酸化水平，并且与生长抑制效应建立了良好的关联。因此，在某些实施方式中，本发明的化合物能够直接抑制Src，并且可以通过与所述的肽结合位点进行结合(与结合于变构位点相反)来实现这一作用。
已经完成了分子模型试验，该试验证明了本发明的化合物适合所述的模型Src底物位点(参见，例如，美国专利7,005,445以及7,070,936)。为了靶向其他激酶，模型也可以被用来重组所述的Src激酶抑制剂支架(scaffold)，这可以简单的通过利用存在于所述分子之上的另外一套侧链和/或对所述的支架本身进行修饰来完成。
尽管不希望受到理论的限制，但可以确信在细胞外的某些激酶(例如，Src)的构象与细胞内的构象存在显著的差别，因为在细胞内，许多激酶被包埋在多蛋白信号复合体中。因此，由于在分离的激酶中不能很好的形成所述的肽底物结合位点(如Src X-射线结构所示)，可以确信肽底物结合抑制剂对于分离的激酶的活性而言应当是微弱的。在分离的激酶检测中，在这一位点上发生结合要求所述的抑制剂捕获到总蛋白质中占非常少比例的蛋白质，所述占非常少比例的蛋白质在分离的酶检测中与在细胞内存在时具有同样的构象。为了能够被探测到，需要大量过量的抑制剂来消耗所述的大量的酶，其中所述的酶来自于所述检测的催化性循环。
然而，对于基于细胞的检测而言，由于可以预期能够形成所述的肽结合位点，因而不需要大量过量的抑制剂。在基于细胞的Src检测中，SH2&SH3结构域结合蛋白已经改变了所述Src的构象，因而所述的肽底物结合位点已经完全形成。因此，低浓度的所述抑制剂能够除去来自于所述催化性循环的酶，因为所有的酶都呈现出紧密结合的构象。
绝大多数的已知的激酶抑制剂都是ATP(三磷酸腺苷)竞争性的，并且在一组分离的激酶检测中表现出较差的选择性。然而，本发明中所述的许多化合物被认为是肽底物结合抑制剂。因此，针对分离的酶例如Src的传统的高生产量的化合物的筛选不会导致本发明所述化合物的发现。
近来有相当多的文献支持这样的观点：以pp60c-src(Src)为靶向，是一种具有广泛用途的癌症治疗方法，且不会产生严重的毒性。例如，那些显示出增强的EGF受体PTK信号、或者过表达所述相关的Her-2/neu受体的肿瘤，具有组成性激活的Src以及增强的肿瘤入侵性。对于这些细胞中的Src的抑制诱发生长停滞，引发细胞凋亡，并且逆翻转了转化了的表型(参见Karni等人，(1999)Oncogene18(33)：4654-4662)。已知Src活性的异常升高使得转化细胞以锚定不依赖性的形式进行生长。这显然是由于胞外基质信号以与有丝分裂信号协同的形式增强了FAK/Src途径中的Src活性，并且从而阻碍了本应正常被激活的细胞凋亡机制。因此在肿瘤细胞中进行FAK/Src的抑制能够诱发细胞凋亡，因为本应在从所述的胞外基质中被释放出来之后才被正常激活的细胞凋亡机制被引发了(参见Hisano等人，Proc.Annu.Meet.Am.Assoc.Cancer Res.38：A 1925(1997))。此外，在Src受到抑制时注意到血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达减弱，并且来自于这些Src抑制细胞系的肿瘤表现出向生成血管方向的发展的减弱(参见Ellis等人，Journal of BiologicalChemistry 273(2)：1052-1057(1998))。
例如，小鼠的Src基因的剔除仅会导致一种缺陷，即破骨细胞不能够形成皱褶缘并且因此不能进行骨的再吸收。然而，通过在这些小鼠中插入激酶缺陷性Src基因，能够挽救所述破骨细胞的骨的再吸收功能(Schwartzberg等，(1997)Genes&Development 11：2835-2844)。这表明可以在不引发仅已知的毒性的前提下在体内对Src激酶的活性进行抑制，这是因为所述的Src蛋白的存在显然足以补充并且激活存在于破骨细胞所必需的信号复合体(osteoclast essential signaling complex)中的其他PTK(这些PTK对于维持破骨细胞的功能而言是必不可少的)。
由于已经发现在越来越多的人类肿瘤中存在Src的过度活化，已经提议将Src作为癌症治疗中的“通用”靶位(Levitzki，Current Opinion in Cell Biology，8，239-244(1996)；Levitzki，Anti-Cancer Drug Design，11，175-182(1996))。Src的抑制在癌症治疗方面所产生的可能的效益是由自分泌生长因子环作用所引发的对于不受控制的细胞生长的抑制所产生的效益的四倍，是当从细胞基质中逃离后引发细胞凋亡而导致的对于转移的抑制所产生的效益的四倍，是经由降低的VEGF水平以及低毒性所形成的对于肿瘤的血管生成作用的抑制所产生的效益的四倍。
据报道，前列腺癌细胞中同时含有过表达的桩蛋白以及p130cas，并且是过度磷酸化的(参见Tremblay等人，Int.J.Cancer，68，164-171，1996中发表的文献)，其因此可以作为Src抑制剂的首要靶位。
因此，本发明涉及一类化合物，以及利用这类化合物治疗细胞增殖障碍的方法。
本发明所述的化合物可以有效的用作药物，例如，用于对人类以及动物进行治疗的治疗剂。所述的化合物可以被用作，例如但不局限于，抗癌症剂，抗血管生成剂，抗转移剂，抗微生物剂，抗细菌剂，抗真菌剂，抗寄生虫剂和/或抗病毒剂。所述的化合物可以被用于其他的细胞增殖相关性障碍，例如银屑病。
正如本发明中所述，本发明所述的化合物能够用来保护对象免受听力损失或者预防对象遭受听力损失。为了保护对象免受听力损失，可以在暴露于噪声或者施用能够诱发听力损失的药物之前施用所述的化合物。这样的药物可能包括化疗药物(例如，以毛发细胞为靶向的基于铂的药物)以及氨基糖苷类抗生素。本发明所述的化合物能够与某些癌症药物一同提供协同效应。例如，可以在原发性人类肿瘤组织检测中筛选出有希望的抑制剂，特别是寻找与其他已知的抗癌症药物具有的协同性。除此之外，所述的蛋白激酶抑制剂可以降低某些癌症药物的毒性(例如，基于铂的药物，其对于耳蜗以及肾脏具有毒性)，从而允许剂量的增加。
或者，本发明所述的化合物可以被用来治疗对象的听力损失。在这种实施方式中，在听力损失发生之后为所述的对象施用所述化合物，以降低听力损失的程度。本发明所述的化合物可能涉及到激酶级联的调控，例如，是一种激酶抑制剂，非ATP竞争性抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，Src抑制剂或者黏着斑激酶(FAK)调控剂。尽管不希望受到理论的限制，但可以确信激酶抑制剂的施用能够防止耳蜗毛发细胞的细胞凋亡，从而预防听力损失。在一种实施方式中，本发明所述化合物的施用是施用于患有听力损失的对象，目的在于防止更严重的听力损失。在另外一种实施方式中，本发明所述化合物的施用是施用于患有听力损失的对象，目的在于恢复丧失的听力。特别的，在被暴露于噪声中之后，耳蜗的毛发细胞之间紧密的细胞连接以及细胞与胞外基质间的相互作用受到撕裂和压力。这些紧密的细胞连接受到的压力(stressing)经由复杂的信号途径激发了细胞内的细胞凋亡，在上述信号途径中，酪氨酸激酶作为分子开关，与黏着斑激酶发生相互作用，从而将细胞-基质的分裂信号传感至细胞核。可以确信，激酶抑制剂的施用防止了这一级联中细胞凋亡的发生。
对于暴露于噪声中的耳蜗中发生的细胞凋亡的识别，为噪声诱发的听力损失(NIHL)的预防提供了许多种新的可能(Hu等人，2000，Acta.Otolaryngol.，120，19-24)。例如，在耳朵的圆窗处施用抗氧化药物，能够保护耳朵免受噪声诱发的听力损失(NIHL)(Hight等人，2003，Hear.Res.，179，21-32；Hu等人，Hear.Res.，113，198-206)。具体的，在南美栗鼠体内施用FDA认可的抗氧化化合物(N-L-乙酰半胱氨酸(L-NAC)以及水杨酸盐)能够减轻噪声诱发的听力损失(Kopke等人，2000，Hear.Res.，149，138-146)。此外，Harris等人近期描述了利用Src-蛋白酪氨酸激酶抑制剂预防噪声诱发的听力损失(NIHL)(Harris等人，2005，Hear.Res.，208，14-25)。因此，可以设想，施用本发明所述的调控激酶活性的化合物能够有效地治疗听力损失。
细胞粘着或者细胞压力的改变能够通过整联蛋白的激活以及蛋白酪氨酸激酶的磷酸化作用激活各种信号，其中所述的蛋白酪氨酸激酶包括Src家族酪氨酸激酶。Src的相互作用与修饰细胞骨架的信号途径发生关联，并且激活了各种蛋白激酶级联，这些蛋白激酶级联控制细胞的存活以及基因的转录(Giancotti与Ruoslahti，1999，Science，285，1028-1032)。事实上，近来的研究结果已经表明，耳蜗外毛细胞(OHC)在被暴露于强烈的噪声中之后在所述的细胞底部发生分离，经受凋亡细胞的死亡。具体的，已经认为在代谢作用诱发的以及机械作用诱发的耳蜗感官细胞的细胞凋亡的发生中均涉及到所述的Src蛋白酪氨酸激酶信号级联。在一项最近的研究中，Src抑制剂为免受4小时、106dB的4kHz的倍频带噪声的影响提供了防护，这表明在被暴露于噪声中之后，耳蜗外毛细胞中的Src蛋白酪氨酸激酶可能被激活了(Harris等人，2005，Hear.Res.，208，14-25)。因此，本发明所述的能够调控Src活性的化合物能够有效地用于治疗听力损失。
本发明涉及一种预防对象患骨质疏松症或者治疗对象骨质疏松症的方法。这一方法包括向对象施用有效剂量的本发明所述的化合物，从而预防或者治疗骨质疏松症。为了预防骨质疏松症，可以在发展成骨质疏松症之前施用所述的化合物。或者，可以将所述的化合物用来治疗对象的骨质疏松症。在这种实施方式中，在骨质疏松症发生之后向所述的对象施用所述化合物，用以减轻骨质疏松症的程度。
本发明中所述的化合物可以是，例如，非ATP(三磷酸腺苷)竞争性抑制剂。本发明所述的化合物可以调控激酶信号级联，这取决于所选择的具体的侧链以及支架的修饰。本发明所述的化合物可以是一种激酶抑制剂。例如，所述化合物可以是一种蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂。所述的富含脯氨酸的酪氨酸激酶(PYK2：也被称为细胞粘着激酶β，相关黏着斑酪氨酸激酶，或者钙依赖性酪氨酸激酶)与黏着斑激酶(FAK)属于非受体蛋白酪氨酸激酶中截然不同的家族的成员，它们是由各种胞外刺激来调节的(Avraham等人，2000，Cell Signal.，12，123-133；Schlaepfer等人，1999，Prog.Biophys.Mol.Biol.，71，435-478)。本发明所述的化合物可以是一种Src抑制剂。已经证明，Src的缺陷与大鼠的骨质疏松症相关，这是由于破骨细胞的功能缺失导致的(Soriano等人，1991，Cell，64，693-702)。或者，本发明所述的化合物能够调控白细胞介素-1受体相关性激酶M(IRAK-M)的表达。缺乏白细胞介素-1受体相关性激酶M的小鼠发展成为严重的骨质疏松症，这与破骨细胞的加速分化、破骨细胞的半衰期的增大、以及它们的活化相关(Hongmei等人，2005，J.Exp.Med.，201，1169-1177)。
多核破骨细胞来自于单核噬菌细胞的融合，并且在骨的形成以及重塑中起到重要的作用，这种作用是通过骨的再吸收来实现的。破骨细胞是多核的、末端分化的细胞，能够降解矿化的基质。在正常的骨组织中，在由造骨细胞引起的骨的形成与由破骨细胞引发的骨的再吸收之间存在一种平衡。当这种动态的并且高度规则的过程中的平衡被破坏时，骨的再吸收会超过骨的形成，从而导致定量的骨损失。由于破骨细胞对于骨的形成以及重塑是必不可少的，增加其数量和/或活性会导致与全身的骨损失相关的疾病的产生(例如，骨质疏松症)，也会导致其他与局部的骨损失相关的疾病的产生(例如，风湿性关节炎，牙周疾病)。
破骨细胞以及造骨细胞均支配涉及蛋白激酶的众多的细胞信号途径。破骨细胞的活化是由骨的粘着、细胞骨架的重新排列、封闭带(sealing zone)的形成、以及极性波缘膜的形成所引发的。可以确信，蛋白酪氨酸激酶2(PYK2)参与了信号从所述的细胞表面至所述的细胞骨架的传递，因为在破骨细胞中由粘着所引发的信号使其发生了酪氨酸的磷酸化以及活化(Duong等人，1998，J.Clin.Invest，102，881-892)。近来的证据已经表明，蛋白酪氨酸激酶2(PYK2)蛋白水平的降低导致了对于体外破骨细胞的形成以及骨的再吸收的抑制(Duong等人，2001，J.Biol.Chem.，276，7484-7492)。因此，对于PYK2或者其他蛋白酪氨酸激酶的抑制可能通过减少破骨细胞的形成以及骨的再吸收，从而降低骨质疏松的程度。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明所述的化合物将能够调控激酶(例如，蛋白酪氨酸激酶)的活性并且因此导致对于破骨细胞的形成和/或骨的再吸收的抑制，从而治疗骨质疏松症。
Src酪氨酸激酶作为用于骨疾病的有希望的治疗靶向，其作用已经被Src剔除小鼠的研究以及体外细胞试验所证实，这表明Src在破骨细胞(阳性)以及造骨细胞(阴性)中起到调节的作用。在破骨细胞中，Src在运动性、极性、存活性、活化(皱褶缘的形成)以及粘着中起到关键的作用，这种作用是通过介导各种信号转导途径，特别是细胞因子以及整联蛋白信号来实现的(Parang与Sun，2005，Expert Opin.Ther.Patents，15，1183-1207)。此外，小鼠的Src基因的靶向破坏诱发了骨质疏松症，并且在其他的组织或者细胞中不表现出任何明显的形态学异常或者功能异常，其中所述的骨质疏松症是一种以骨的再吸收减少为特征的障碍(Soriano等人，1991，Cell，64，693-702)。所述的骨质疏松性显型src-/-小鼠是细胞自治的，并且其成因是成熟破骨细胞的缺失，成熟破骨细胞通常表达高水平的Src蛋白(Horne等人，1991，Cell，119，1003-1013)。通过限制Src酪氨酸激酶的有效性，Src抑制剂被认为能够减轻骨的分解并且促进骨的形成，其中所述的Src酪氨酸激酶能够激发破骨细胞的活性并且抑制造骨细胞。由于破骨细胞通常表达高水平的Src，对于Src激酶活性的抑制对于骨质疏松症的治疗而言可能是有效的(Missbach等人，1999，Bone，24，437-449)。因此，本发明中所述的能够调控所述Src活性的所述PTK抑制剂能够有效地用于治疗骨质疏松症。
正如本发明中所述，本发明中所述的化合物可以被用来保护对象避免患上肥胖症或者预防对象患肥胖症。为了保护对象避免患上肥胖症，可以在肥胖症形成之前向对象施用所述的化合物。或者，所述的化合物可以被用来治疗对象的肥胖症。本发明所述的化合物可能涉及到激酶信号级联的调控，例如，是一种激酶抑制剂，非ATP竞争性抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂，或者蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂。
肥胖症与糖尿病以及在胰岛素应答组织中出现的胰岛素抗性的增强有关联，其中所述的胰岛素应答组织是例如骨骼肌，肝脏，以及白色脂肪组织(Klaman等人，2000，Mol.Cell.Biol.，20，5479-5489)。胰岛素在葡萄糖稳态、脂质代谢、以及能量平衡的调节中起到至关重要的作用。胰岛素信号是由于胰岛素与所述的胰岛素受体(IR)发生结合而引发的，所述的胰岛素受体是一种受体酪氨酸激酶。胰岛素的结合唤起了磷酸化事件的级联，其开始于所述的胰岛素受体(IR)在多发性(multiple)酪氨酰残基上的自动磷酸化作用。自动磷酸化作用增强了胰岛素受体(IR)的激酶活性并且激发了下游的信号事件。蛋白酪氨酸激酶的刺激效应以及蛋白酪氨酸磷酸酶的抑制效应很大程度上限定了所述胰岛素的作用。适当的胰岛素信号将血糖浓度的大幅度波动降低到最小，并且确保将足够的葡萄糖运送至细胞。由于胰岛素的刺激导致了多发性酪氨酰磷酸化事件的发生，因而增强一种或者多种蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)的活性能够导致胰岛素抗性的产生，其可以导致肥胖症。事实上，已经报道在包括肥胖症在内的几种胰岛素抗性状态中存在增强的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活性(Ahmad等人，1997，Metabolism，46，1140-1145)。因此，尽管不希望受到理论的限制，但施用本发明所述的化合物能够调控激酶(例如，蛋白酪氨酸磷酸酶)的活性，从而治疗对象的肥胖症。
胰岛素信号开始于经由酪氨酸的磷酸化作用而发生的胰岛素受体(IR)的活化，并且在由葡萄糖转运蛋白GLUT4将葡萄糖吸收至细胞中时达到顶点(Saltiel与Kahn，2001，Nature，414，799-806)。随后必须对上述活化的胰岛素受体进行灭活，并且返回到基态，可以确信这一过程中涉及到蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)(Ahmad等人，1997，J.Biol.Chem.，270，20503-20508)。对小鼠体内编码PTP-1B的基因进行破坏，会导致胰岛素敏感并且增加对由膳食诱发的肥胖症的抗性(Elchebly等人，1999，Science，283，1544-1548；Klaman等人，2000，Mol.Cell.Biol.，20，5479-5489)。PTP-1B缺陷型小鼠的肥胖程度减轻的原因是脂肪细胞群的显著减少，但脂肪细胞数量不减少(Klaman等人，2000，Mol.Cell.Biol.，20，5479-5489)。此外，PTP-1B缺陷型小鼠的消瘦伴随着基础代谢率以及总能量消耗的增加，而解耦联蛋白mRNA的表达没有发生显著的改变。PTP-1B基因的破坏证明，改变PTP-1B的活性能够调控体内的胰岛素信号以及由膳食诱发的肥胖症。因此，尽管不希望受到理论的限制，但施用本发明所述的能够调控胰岛素信号(例如，PTP-1B活性)的化合物，能够有效地治疗对象的肥胖症。
正如本发明中所述，本发明中的所述化合物能够被用来保护对象避免患上糖尿病或者预防对象患糖尿病。为了保护对象避免患上糖尿病，可以在糖尿病形成之前向对象施用所述的化合物。或者，所述的化合物可以被用来治疗对象的糖尿病。本发明所述的化合物可能涉及到激酶信号级联的调控，例如，是一种激酶抑制剂，非ATP竞争性抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)抑制剂，或者含SH2结构域的II型肌醇5’磷酸酶(SHIP 2)抑制剂。
II型糖尿病(T2DM)是一种能量代谢调节异常障碍。能量代谢很大程度上受到激素胰岛素的控制，激素胰岛素是一种有效的合成代谢试剂，其促进蛋白质、碳水化合物以及脂质的合成以及存储，并且抑制它们的分解以及释放回所述的循环当中。胰岛素的作用是在其与酪氨酸激酶受体发生结合时被激发的，其导致了自动磷酸化作用并且增强了所述激酶的催化活性(Patti等人，1998，J.Basic Clin.Physiol.Pharmacol.，9，89-109)。酪氨酸的磷酸化作用导致胰岛素受体底物(IRS)蛋白与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的p85调节亚基发生相互作用，从而导致所述酶的活化并且使其靶向一个特异的亚细胞位置，这取决于所述细胞的类型。所述的酶生成脂质产物3，4，5-三磷酸磷脂酰肌醇(PtdIns(3，4，5)P3)，其调节许多蛋白质的定位以及活性(Kido等人，2001，J.Clin.Endocrinol.Metab.86，972-979)。PI3K在胰岛素刺激的葡萄糖吸收以及存储、脂解作用的抑制以及肝脏基因表达的调节方面起到至关重要的作用(Saltiel等人，2001，Nature，414，799-806)。显性干扰型PI3K的过表达能够阻止葡萄糖的吸收以及谷氨酸转运蛋白4即GLUT4向质膜的转移(Quon等人，1995，Mol.Cell.Biol.，15，5403-5411)。因此，施用本发明所述的能够调控激酶(例如，磷脂酰肌醇3-激酶)活性、并且因此导致葡萄糖吸收的增加的化合物，能够有效地治疗糖尿病。
PTEN是许多细胞类型中的PI3K信号的主要调节剂，并且由于其对于PI3K途径的抗细胞凋亡、增殖性以及肥大性活性具有对抗性，因而具有肿瘤抑制剂的功能(Goberdhan等人，2003，Hum.Mol.Genet.，12，R239-R248)。尽管不希望受到理论的限制，但可以确信PTEN通过PtdIns(3，4，5)P3分子的去磷酸化作用削弱了所述的PI3K途径，将这种重要的脂质第二信使降解为PtdIns(4，5)P2。在最近的一项研究中，利用小干扰RNA(siRNA)减少50％的内源性PTEN蛋白增强了PtdIns(3，4，5)P3水平的胰岛素依赖性增加，并且增强了葡萄糖的吸收(Tang等人，2005，J.Biol.Chem.，280，22523-22529)。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明所述的能够调控PTEN的活性、并且因此导致葡萄糖吸收的增加的化合物，能够有效地治疗糖尿病。
PtdIns(3，4，5)P3水平同样受到含SRC同源(SH2)结构域的II型肌醇5’磷酸酶(SHIP)蛋白家族——SHIP 1以及SHIP2的控制(Lazar与Saltiel，2006，Nature Reviews，5，333-342中发表的文献)。SHIP 2在骨骼肌中进行表达，在其他胰岛素敏感性组织中催化PtdIns(3，4，5)P3转化成PtdIns(4，5)P2(Pesesse等人，1997，Biochem Biophys.Res.Commun.，239，697-700；Backers等人，2003，Ady.Enzyme Regul.，43，15-28中发表的文献；Chi等人，2004，J.Biol.Chem.，279，44987-44995中发表的文献；Sleeman等人，2005，Nature Med.，11，199-205中发表的文献)。SHIP 2的过表达显著的降低了PtdIns(3，4，5)P3水平，这与被提议的SHIP 2对于PI3K下游效应物质的活化的削弱相一致(参见Ishihara等人，1999，Biochem.Biophys.Res.Commun.，260，265-272)。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明所述的能够调控SHIP 2的活性、并且因此导致葡萄糖吸收的增加的化合物，能够有效地治疗糖尿病。
正如本发明中所述，本发明中的所述化合物能够被用来保护对象避免患上眼部疾病或者预防对象患眼部疾病。为了保护对象避免患上眼部疾病，可以在眼部疾病形成之前向对象施用所述的化合物。或者，所述的化合物可以被用来治疗对象的眼部疾病，例如，黄斑病变，视网膜病，以及黄斑水肿。本发明所述的化合物可能涉及到激酶级联的调控，例如，是一种激酶抑制剂，非ATP竞争性抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，例如，血管内皮生长因子(VEGF)受体酪氨酸激酶抑制剂。
生理学上无血管的角膜可能发生威胁视力的新血管形成反应。所述的增生性视网膜病变，主要是糖尿病性视网膜病变以及与年龄相关的视网膜黄斑变性的特征是血管的渗透性增强，从而导致视网膜水肿和视网膜下液体聚集，以及易于出血的新血管的增生。血管的生成，即，从先前存在的毛细血管中形成新的血管的过程，是正常的生长过程以及诸多的病理过程中必需的一部分。VEGF作为血管生成作用的复杂级联中的一种中心介质以及一有效的渗透因素，对于新的治疗剂而言是一个有吸引力的靶标。VEGF是两种膜结合酪氨酸激酶受体VEGFR-1和VEGFR-2的配位体。配位体的结合触发了VEGFR的二聚作用以及转磷酸化作用，并且随后伴随着胞内酪氨酸激酶结构域的活化。继而发生的胞内信号轴导致血管内皮细胞的增生、迁移、以及存活。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明中所述的能够调节激酶活性，例如，酪氨酸激酶的活性，从而抑制血管生成和/或新血管形成的化合物能够有效地治疗眼部疾病，例如，黄斑病变，视网膜病变和/或黄斑水肿。
黄斑病变的特征是VEGF介导的视网膜渗漏(血管渗透性的增强)以及眼底小血管的异常生长(血管生成)。已经在糖尿病性视网膜病变以及与年龄相关的视网膜黄斑变性中的新血管膜中识别出了血管内皮生长因子，并且在糖尿病性视网膜病变中，新血管形成的严重程度与上述因子的眼内水平存在关联(Kvanta等人，1996，Invest.Ophthal.Vis.Sci.，37，1929-1934；Aiello等人，1994，N.Engl.J.Med.，331，1480-1487)。血管内皮生长因子在这些模型中的治疗对抗性导致视网膜新血管形成以及脉络膜新血管形成被显著的抑制，同时也导致了血管渗透性的降低(Aiello等人，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，92，10457-10461；Krzystolik等人，2002，Arch.Ophthal.，120，338-346；Qaum等人，2001，Invest.Ophthal.Vis.Sci.，42，2408-2413)。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明中所述的能够调节VEGF的活性、从而抑制血管生成和/或新血管形成的化合物能够有效地治疗眼部疾病，例如，黄斑病变，视网膜病变和/或黄斑水肿。
本发明中所述的化合物可以被用于治疗、预防、改善对象脑卒中的方法中，其中所述的对象具有患上脑卒中的危险、正患有脑卒中或者已经患有脑卒中。本发明所述的化合物能够被用在治疗处于脑卒中后恢复期的患者的方法中。
脑卒中，也被称为脑血管意外(CVA)，是一种急性的神经损伤，是由于动脉的封闭或者血管的破裂而导致的大脑部分区域的血液供应阻断。所述的血液供应被阻断的大脑部分区域不再接收到由所述血液带来的氧和/或营养。所述的脑细胞被损坏或者坏死，从而削弱了那部分大脑区域具有的功能以及来自于那部分大脑区域的功能。如果氧气被剥夺超过60至90秒，脑组织将终止其功能，并且在几分钟之后将遭受不可逆的损伤，可能导致所述组织的死亡，即，梗死。
脑卒中被划分成两种主要的类型：缺血性的，即，供应给脑部的血管发生封闭，以及出血性的，即，血液流至脑部内或者脑部周围。所有的脑卒中多半都是缺血性脑卒中。缺血性脑卒中通常被分成血栓形成性脑卒中，栓塞性脑卒中，全身性低灌注(分水岭脑卒中)，或者静脉血栓。在血栓形成性脑卒中中，血栓形成的过程发生在被感染的动脉内，所述的血栓，即血液凝块儿，使得所述的动脉内腔逐渐变窄，从而阻止血液流向末梢组织。这些凝块儿通常形成在动脉粥样硬化斑块的周围。有两种类型的血栓形成性脑卒中，它们是根据形成所述血栓的血管的类型来分类的。大血管血栓形成性脑卒中包括颈总动脉以及颈内动脉，脊椎，以及Willis环。小血管血栓形成性脑卒中包括所述的大脑内动脉，Willis环分支，大脑中动脉主干，以及发于所述末梢脊椎和基底动脉的动脉。
血栓，即使是非堵塞性的，也能够导致栓塞性脑卒中，只要所述的血栓在其成为栓塞处发生中断。栓塞指的是在发源于别处的动脉血流中存在的移动的粒子或者碎片。栓塞性脑卒中指的是由栓塞引起的到达大脑部分区域的动脉通路的封闭。栓塞通常都是血液凝块儿，但其也可以是一个从动脉粥样硬化的血管中脱落的斑块，或者是许多其他的物质，包括脂肪，空气，并且甚至是癌细胞。由于栓塞是来自于别处的，因而局部治疗仅仅能解决临时性的问题。因此，必须识别出所述栓塞的来源。有四种类型的栓塞性脑卒中：已知的心脏来源的；可能的心脏来源或者大动脉来源的(来自于经胸廓超声心动图或者经食管超声心动图)；动脉来源的；以及未知来源的。
全身性低灌注是指流向身体的所有部分的血液减少。其最常见的原因是由于心搏停止或者心律不齐、或者心脏输出量的减少而导致的心脏泵的衰竭，而这些都是由心肌梗塞、肺部栓塞、心包积液、或者流血造成的。血氧不足(即，低血氧含量)可能促进了所述的低灌注。由于这种血液流动的减少是全局性的，脑部的所有部分都可能受到影响，特别是所述的“分水岭”区域，这一区域是由主要的脑动脉供给的边缘带区域。血液流动至这些区域不必然停止，但取而代之的是，可能在脑部损伤发生处血液流动降低。
脑部静脉的功能是将所述的血液排放回身体。当静脉由于形成血栓的原因而发生堵塞，所述的血液排放被阻滞并且所述的血液倒流，引发脑水肿。这种脑水肿能够导致缺血性脑卒中以及出血性脑卒中。这通常发生在罕见疾病窦静脉血栓形成中。
利用本领域已知的各种技术中的一种或者多种在对象或者患者体内诊断脑卒中，所述的技术是例如，神经系统检查，血液检测，CT扫描(不利用对比度增强手段)，MRI(磁共振成像)扫描，多普勒超声，以及动脉造影术(即，在所述血流中注射进不透射线的物质之后的动脉X光片)。如果通过造影证实了脑卒中，则进行各种其他的研究，以确定是否存在外围来源的栓塞。这些研究包括，例如，针对所述颈动脉的超声/多普勒研究(用来检测颈动脉狭窄)；心电图(ECG)以及超声波心动图(用来识别心律不齐以及由此形成的心脏凝块，所述的心脏凝块能够通过血流蔓延至脑血管中)；霍尔特氏心电图研究，用来识别间歇性心律不齐，以及大脑血管系统的血管造影片(如果认为出血是来源于动脉瘤或者动静脉畸形)。
能够被用于这些治疗、预防或者改善脑卒中或者与脑卒中相关的症状的方法中的化合物，是能够在脑卒中之中或者之后调控激酶信号级联行动的化合物。在某些实施方式中，所述的化合物是一种激酶抑制剂。例如，所述的化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方式中，所述的酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。例如，能够被用于本发明中所述的这些治疗、预防或者改善脑卒中或者与脑卒中相关的症状的方法中的化合物是一种在脑卒中之中或者之后的激酶信号级联行动的变构抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的这些治疗、预防或者改善脑卒中或者与脑卒中相关的症状的方法中的化合物是一种在脑卒中之中或者之后的激酶信号级联行动的非ATP竞争性抑制剂。
已经表明，在脑卒中的过程中对于Src活性的抑制能够提供对于大脑的保护(Paul等人，，Nature Medicine，vol.7(2)：222-227(2001)，上述文献的全部内容在此引入作为参考)。血管内皮生长因子(VEGF)的产生是为了对缺血性损伤进行应答，已经证明它能够提高血管的渗透性。研究表明，在发生脑卒中之后，所述的Src激酶能够调节大脑中由血管内皮生长因子介导的血管渗透性(VP)，而在脑卒中之前以及之后施用Src抑制剂减轻了水肿，增加了脑部的灌注并且在损伤发生之后减小了梗塞的体积(Paul等人，2001年)。因此，Src抑制剂能够有效地用于预防、治疗或者改善脑卒中发生之后的继发性损伤。
本发明所述的化合物能够预防、治疗或者改善脑卒中或者与脑卒中相关的症状。脑卒中的症状包括突发麻痹或者虚弱，特别是发生在身体的一侧；话语的突发混淆或者困难或者言语不清；单眼或者双眼的突发视觉困难；突发的行走困难，头昏眼花，或者丧失平衡或丧失协调性；或者是无已知缘由的突发的严重头痛。
对于脑卒中的治疗通常分为三个阶段：预防，脑卒中发生之后立即采取的治疗，以及脑卒中后的恢复。预防首发或者复发脑卒中的治疗是以治疗脑卒中的潜在危险因素为基础的，所述的潜在危险因素是例如，高血压，高胆固醇，心房颤动，以及糖尿病。急性脑卒中的治疗是尝试在脑卒中发生的时候对其进行终止，通过快速溶解引起缺血性脑卒中的血液凝块儿或者通过阻止出血性脑卒中的流血的方式。脑卒中后的恢复是帮助个体克服由脑卒中的损伤所导致的伤残。药物治疗是最常见的治疗脑卒中的方法。用于预防或者治疗脑卒中的最常见的药物类型是抗血栓形成剂(例如，抗斑块剂以及抗凝血剂)以及血栓溶解剂。向患者施用所述的化合物，其中所述的患者具有患脑卒中的危险、正患有脑卒中或者已经患有脑卒中，施用的时间是在脑卒中的发生之前、发生的过程中、发生之后、以及上述时机的任意组合。本发明中所述的化合物可以单独施用，以药物组合物的形式施用，或者与各种已知的治疗中的任意一种进行组合治疗，所述的已知的治疗是，例如，抗血小板药物(例如，阿司匹林，克拉匹多，双嘧达莫)，抗凝血剂(例如，华法林)，或者溶解血栓类药物(例如，组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)，瑞替普酶(reteplase)，尿激酶，链激酶，替奈替普酶(tenectaplase)，兰替普酶(lanoteplase)，或者阿尼普酶(anistreplase))。
本发明中所述的化合物能够被用于治疗、预防、改善对象的动脉硬化症或者由动脉硬化症带来的症状的方法，其中所述的对象具有患动脉硬化症的危险或者患有动脉硬化症。
动脉硬化症是一种影响动脉血管的疾病，并且其通常被称为动脉的“硬化”。它是由所述动脉内的多个斑块的形成所引发的。动脉粥样硬化斑块尽管可以通过动脉的扩张来补救，但其最终会导致斑块的破裂以及动脉的狭窄(即，变窄)，上述情况继而会导致由所述动脉供血的器官的血液供应补足。或者，如果用于进行补救的动脉扩张处理过度，会导致动脉瘤的最终结果。这些并发症是慢性的、缓慢发展的并且是累积的。最常见的，柔软的斑块突然破裂，引发血液凝块的形成(即，血栓)，所述的血液凝块迅速的减慢或者终止血液流动，上述情况继而会导致由上述动脉供血的组织死亡。这种灾变性事件被称为梗死。例如，冠状动脉患有的冠状动脉血栓症会引发心肌梗塞，通常被认为是心脏病发作。当动脉粥样硬化斑块缓慢地在冠状动脉的内衬积累并且随后突然破裂，完全地封闭所述动脉并且阻止血液向下游流动时，就会发生心肌梗塞。
利用各种临床检测和/或实验室检测中的任意一种为患者诊断动脉硬化症以及急性心肌梗塞，所述的临床检测和/或实验室检测例如是，身体检查，放射性检查或者超声波检查以及血液分析。例如，医生或者临床医师可以听诊患者的动脉，以检测一种异常移动的声响，被称为杂音(bruit)。当将听诊器放置于受到影响的动脉之上时，可以听到杂音。或者，或此外，临床医师或者内科医师可以检查脉搏，例如在腿上或者在脚上，查看其异常状况例如脉搏微弱或者缺乏脉搏。所述的内科医师或者临床医师可以进行血液研究，来检查胆固醇水平或者检查心肌酶水平，例如肌酸激酶，肌钙蛋白以及乳酸脱氢酶，查看其异常状况。例如，肌钙蛋白亚基I或者T对于所述的心肌层具有强烈的特异性，其在永久性损伤形成之前开始升高。在胸部疼痛发作时阳性肌钙蛋白的出现能够准确的预测出在不久的将来将发生心肌梗塞的高度可能性。用于诊断动脉硬化症和/或心肌梗塞的其他检测包括，例如，测量对象的心跳速率以及规律的EKG(心电图)；测量踝肱指数的胸部X光，其利用踝部的血压与臂部的血压进行比较；动脉的超声分析；目标区域的CT扫描；血管造影术；运动负荷试验，核素心脏扫描；以及心脏的磁共振成像(MRI)与心脏的正电子发射断层(PET)扫描。
能够被用于这些治疗、预防或者改善动脉硬化症或者由动脉硬化症带来的症状的方法中的化合物，是能够调控患者的激酶信号级联的化合物，其中所述的患者具有患动脉硬化症的危险或者患有动脉硬化症。在某些实施方式中，所述的化合物是一种激酶抑制剂。例如，所述的化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方式中，所述的酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的治疗、预防或者改善动脉硬化症或者由动脉硬化症带来的症状的方法中的化合物是一种动脉硬化症所涉及的激酶信号级联的变构抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的治疗、预防或者改善动脉硬化症或者与动脉硬化症相关的症状的方法中的化合物是一种动脉硬化症所涉及的激酶信号级联的非ATP竞争性抑制剂。
由Src引起的细胞信号转导被认为在血管渗透性的增强中起到关键性的作用，血管的渗透性被称为血管渗透性(VP)。血管内皮生长因子(VEGF)的产生是为了对缺血性损伤进行应答，已经表明它能够提高血管的渗透性，其中所述的缺血性损伤包括，例如心肌梗塞。研究表明，对于Src激酶的抑制降低了由血管内皮生长因子介导的血管渗透性(VP)(参见Parang与Sun，，Expert Opin.Ther.Patents，vol.15(9)：1183-1206(2005)，上述文献的全部内容在此引入作为参考)。经过Src抑制剂处理过的小鼠表明，与未经处理的小鼠相比，在心肌梗塞之后与血管的外伤或者损伤相关联的组织损伤降低了(参见，例如，由Cheresh等人申请的美国专利申请No.20040214836以及No.20030130209，上述文献的全部内容作为整体在此引入作为参考)。因此，Src的抑制能够有效地用于预防、治疗或者改善由于动脉硬化症而产生的损伤所带来的继发性损伤，例如，心肌梗塞。
本发明中所述的化合物能够预防、治疗或者改善脑卒中或者与动脉硬化症相关的症状。动脉硬化症通常不会产生症状，直至其严重的使动脉变窄或者限制血液流动，或者直至其引发突发性障碍。症状取决于形成所述斑块或者变窄的部位，例如，在心脏中，脑部，其他重要器官以及腿部，或者甚至是身体的任何一处。动脉硬化症的初始症状可能是疼痛或者抽筋，当身体需要更多氧气的时候，例如运动的过程中，当人由于心脏缺氧而感觉胸部疼痛(绞痛)的时候，或者由于腿部缺氧而感觉腿部抽筋的时候。为大脑提供血液的动脉的变窄可能导致头晕眼花或者短暂性缺血性发作(TIA’s)，在这种情况下，脑卒中的症状以及迹象将持续至少24小时。这些症状通常是逐步发展的。
心肌梗塞的症状被定义为不同程度的胸部疼痛、不适、发汗、虚弱、恶心、呕吐、以及心律不齐，有些时候会导致失去知觉。胸部疼痛是急性心肌梗塞的最常见的症状，并且通常被描述为紧缩感、压迫感、或者压榨感。疼痛可能蔓延至下颌，颈部，臂部，背部，以及上腹部，最通常蔓延至左臂或者颈部。当胸部疼痛持续时间超过30分钟时，其更有可能是由心肌梗塞引发的。患有心肌梗塞的患者可能表现出呼吸短促(呼吸困难)，特别是当心肌收缩性的减弱是由于所述的梗塞足以引发左心室衰竭以及肺部充血或者甚至肺部水肿而产生的情况。
本发明所述的化合物可以单独施用，以药物组合物的形式施用，或者与各种已知的用于动脉硬化症的治疗中的任意一种进行组合治疗，所述的已知的用于动脉硬化症的治疗是，例如，降胆固醇类药物(例如，他汀类)，抗血小板药物，或者抗凝血剂。
本发明中所述的化合物能够被用在治疗、预防、改善对象的神经性疼痛或者由神经性疼痛带来的症状的方法中，其中所述的神经性疼痛是例如慢性神经性疼痛，所述的对象具有患神经性疼痛的危险、正患有神经性疼痛、或者已经患有神经性疼痛。
神经性疼痛，也被称为神经痛，其本质上异于正常的伤害感受性疼痛。神经性疼痛通常呈现出持续稳定的烧灼感和/或“发麻(pins and needles)”感和/或“电击(electric shock)”感。伤害感受性疼痛与神经性疼痛之间的差异的原因在于一个“正常(ordinary)”的事实，伤害感受性疼痛所刺激的仅仅是疼痛神经，而神经病通常在同一区域内同时导致对疼痛感觉神经以及非疼痛感觉神经(例如，负责应答触觉、温暖、凉爽的神经)的刺激，从而产生了脊髓以及大脑在正常状态下不会接收到的信号。
神经性疼痛是一种复杂的、慢性的疼痛状态，并且通常伴随着组织损伤。发生神经性疼痛时，所述的神经纤维本身可能被破坏、功能紊乱或者损伤。这些被破坏的神经纤维向其他疼痛中心发出不正确的信号。所述的神经纤维损伤所带来的影响包括在所述损伤的位点处以及所述损伤周围的区域发生神经功能的变化。
利用本领域已知的各种实验室技术和/或临床技术中的一种或者多种为对象或者患者诊断神经性疼痛，所述的实验室技术和/或临床技术例如是，身体检查。
能够被用于这些治疗、预防或者改善神经性疼痛或者与神经性疼痛相关的症状的方法中的化合物，是能够调控在神经性疼痛中所涉及到的激酶信号级联的化合物，其中所述的神经性疼痛是例如慢性神经性疼痛。在某些实施方式中，所述的化合物是一种激酶抑制剂。例如，所述的化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方式中，所述的酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的治疗、预防或者改善神经性疼痛或者由神经性疼痛带来的症状的方法中的化合物是一种神经性疼痛所涉及的激酶信号级联的变构抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的治疗、预防或者改善神经性疼痛或者由神经性疼痛带来的症状的方法中的化合物是一种神经性疼痛中所涉及的激酶信号级联的非ATP竞争性抑制剂。
已经证明，c-Src能够调节N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的活性(参见Yu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.96：7697-7704(1999)，上述文献的全部内容在此引入作为参考)。研究表明，PP2，一种低分子量的Src激酶抑制剂，降低了所述的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NM2亚基的磷酸化作用(参见Guo等人，J.Neuro.，vol.22：6208-6217(2002)，上述文献的全部内容在此引入作为参考)。因此，对于Src的抑制继而抑制了所述N-甲基-D-天冬氨酸受体的活性，能够有效的用于预防、治疗或者改善神经性疼痛，例如慢性神经性疼痛。
本发明所述的化合物能够预防、治疗或者改善神经性疼痛或者由神经性疼痛带来的症状，其中所述的神经性疼痛是例如慢性神经性疼痛。神经性疼痛的症状包括击打疼痛以及烧灼疼痛，刺痛以及麻痹。
本发明所述的化合物可以单独施用，以药物组合物的形式施用，或者与各种已知的治疗中的任意一种进行组合治疗，所述的已知的治疗是，例如，止痛剂，类阿片，三环类抗抑郁药物，抗痉挛药物以及血清素去甲肾上腺素再吸收抑制剂。
本发明所述的化合物能够被用在治疗、预防、改善对象的乙型肝炎或者由乙型肝炎带来的症状的方法中，其中所述的对象具有患乙型肝炎的危险，或者患有乙乙型肝炎。
所述的乙型肝炎病毒，是嗜肝DNA病毒家族中的一个成员，由一种蛋白质核心粒子与包埋该蛋白的外层脂质基包膜组成，其中所述的蛋白质核心粒子中含有病毒基因组，所述的病毒基因组以带有单链区域的双链DNA的形式存在。所述的包膜蛋白参与了病毒的结合以及向易感染细胞中的释放。所述的内衣层(inner capsid)将所述DNA基因组迁移至病毒mRNA发生转录的细胞核中。生成了三种编码所述包膜蛋白的次基因组转录体，以及一种编码所述的X蛋白的转录体。第四个前基因组RNA进行转录，其被输出至细胞溶质中并且对所述的病毒聚合酶以及核心蛋白进行了翻译。聚合酶以及前基因组RNA在装配核心粒子时发生壳体化，所述的聚合酶蛋白使得从前基因组RNA至基因组DNA的逆转录发生。之后，所述的成熟的核心粒子经由正常的分泌途径离开了所述的细胞，在离开的途中获得了包膜。
乙型肝炎是少数几个已知的将逆转录作为复制过程中的一部分的非逆转录病毒中的一个。其他的利用逆转录的病毒包括，例如，人T细胞白血病病毒(HTLV)或者人类免疫缺陷病毒(HIV)。
在乙型肝炎病毒(HBV)的感染过程中，所述的对象免疫应答负责对肝细胞的损伤以及病毒的清除产生应答。由于先天性的免疫应答在这些过程中不起到主要的作用，适应性的免疫应答，特别是病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，促成了与乙型肝炎病毒的感染相关的几乎全部的肝损伤。通过杀死被感染细胞，以及通过生成能够从存活的肝细胞中清除乙型肝炎病毒的抗病毒细胞因子，细胞毒性T淋巴细胞也能够清除所述的病毒。尽管肝损伤是由所述的细胞毒性T淋巴细胞引发并且介导的，但抗原非特异性炎性细胞能够恶化由细胞毒性T淋巴细胞诱导的免疫病理学作用，而血小板能够促进细胞毒性T淋巴细胞在肝脏中的积累。
可以利用各种临床检测和/或实验室检测中的任意一种为患者诊断乙型肝炎，所述的临床检测和/或实验室检测是例如，身体检查，以及血液分析或者血清分析。例如，对血液或者血清进行检测，看其中是否存在由所述的对象产生的病毒抗原和/或抗体。在一项常规的乙型肝炎检测中，对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)进行检测，用来筛选是否存在感染。在受到某一病毒感染的过程中，第一个出现的可以被探测到的是该病毒的抗原；然而，在感染的前期，这种抗原可能并不存在，并且在所述感染的后期可能探测不到这种抗原，因为它已经被所述的对象清除了。在这个“空窗期(window)”，所述的对象仍旧处于感染状态但其已经成功的清除了所述的病毒，所述的乙型肝炎核心抗原的免疫球蛋白M(IgM)抗体(anti-HBc IGM)可能是该疾病的唯一的血清学证据。
在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)出现后不久，另外一种名字叫做乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抗原也将出现。传统意义上，对象血清中乙型肝炎e抗原的出现与病毒复制的超高速率相关；然而，所述的乙型肝炎病毒的某些变异体根本不产生所述的“e”抗原。在所述感染发生的自然过程中，所述的乙型肝炎e抗原可能被清除，并且在此之后针对所述“e”抗原的抗体(anti-HBe)将立即出现。这种转变通常与病毒复制的戏剧性衰退有关联。如果所述的对象有能力清除所述感染，最终所述的乙型肝炎表面抗原将变得不可检测，并且随后出现针对所述乙型肝炎表面抗原的抗体(anti-HBs)。乙型肝炎表面抗原呈阴性、但针对乙型肝炎表面抗原的抗体呈阳性的人，可能是已经清除了感染，或者是先前接种过疫苗。许多乙型肝炎表面抗原呈阳性的人可能存在非常稀少的病毒繁殖，并且因此其患有长期并发症的危险很小，或者将这种感染传播给别人的危险很小。
能够被用于这些治疗、预防或者改善乙型肝炎或者由乙型肝炎带来的症状的方法中的化合物，是能够调控患者的激酶信号级联的化合物，其中所述的患者具有患乙型肝炎的危险，或者患有乙型肝炎。在某些实施方式中，所述的化合物是一种激酶抑制剂。例如，所述的化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方式中，所述的酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的治疗、预防或者改善乙型肝炎或者由乙型肝炎带来的症状的方法中的化合物是一种乙型肝炎所涉及的激酶信号级联的变构抑制剂。优选的，能够被用于本发明中所述的治疗、预防或者改善乙型肝炎或者与乙型肝炎相关的症状的方法中的化合物是一种乙型肝炎中所涉及的激酶信号级联的非ATP竞争性抑制剂。
Src在乙型肝炎病毒的复制中发挥作用。所述的病毒编码的转录因子HBx在所述的乙型肝炎病毒的传播所需的步骤中激活Src(参见，例如，Klein等人，EMBO J.，vol.18：5019-5027(1999)；Klein等人，Mol.Cell.Biol.，vol.17：6427-6436(1997))，上述文献的全部内容在此引入作为参考)。因此，对于Src的抑制继而抑制了由Src介导的乙型肝炎病毒(HBV)的传播，能够有效的用于预防、治疗或者改善乙型肝炎或者由乙型肝炎所带来的症状。
本发明所述的化合物能够预防、治疗或者改善乙型肝炎或者与乙型肝炎相关的症状。乙型肝炎的症状通常在被暴露于所述病毒中的30-180天内出现。然而，在所述被乙型肝炎病毒感染的人中，有达到半数的人没有出现症状。所述乙型肝炎的症状通常被和流感相比，并且包括，例如，食欲不佳；疲劳；恶心以及呕吐，浑身瘙痒；肝脏疼痛(例如，腹部的右侧，下胸腔的下方)，黄疸，以及排泄功能的变化。
本发明所述的化合物可以单独施用，以药物组合物的形式施用，或者与各种已知的用于乙型肝炎的治疗中的任意一种进行组合治疗，所述的已知的治疗是，例如，α干扰素，拉米夫定(Epivir-HBV)以及博路定(恩替卡韦)。
正如本发明中所述，本发明所述的化合物可以被用来调节对象的免疫系统活性，从而保护其避免患有或者预防自身免疫性疾病，例如，风湿性关节炎，多发性硬化症，脓血症以及狼疮，以及移植排斥和过敏性疾病。或者，所述的化合物可以被用来治疗对象的自身免疫性疾病。例如，所述的化合物可能导致对象的自身免疫性疾病的症状的严重程度的减轻，或者终止所述对象的自身免疫性疾病即将进行的恶化。本发明所述的化合物可能涉及到激酶信号级联的调控，例如，是一种激酶抑制剂，一种非ATP竞争性抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，例如，Src抑制剂，p59fyn(Fyn)抑制剂或者p56lck(Lck)抑制剂。
自身免疫性疾病是一类由自身耐受性的崩溃而引发的疾病，由于自身耐受性发生崩溃，所述的适应性免疫系统对自身抗原进行应答，并且介导细胞以及组织的损伤。自身免疫性疾病可能是器官特异性的(例如，甲状腺炎或者糖尿病)，或者是全身性的(例如，全身性红斑狼疮)。T细胞调控着所述的适应性免疫系统的由细胞介导的免疫应答。在正常的情况下，T细胞表达抗原受体(T细胞受体)，所述的抗原受体识别与自身主要组织相容性复合分子结合的外源蛋白质的肽片段。在T细胞受体(TCR)的刺激发生后最先被识别到的事件是Lck以及Fyn的活化，这种活化导致了存在于免疫受体酪氨酸活化基序中的酪氨酸残基上发生了T细胞受体的磷酸化作用(Zamoyska等人，2003，Immunol.Rev.，191，107-118)。酪氨酸激酶，例如Lck(它是蛋白质酪氨酸激酶Src家族中的一个成员)通过将肽以及蛋白质的酪氨酸残基磷酸化而在细胞信号以及细胞增殖的调节中起到至关重要的作用(Levitzki，2001，Top.Curr.Chem.，211，1-15；Longati等人，2001，Curr.Drug Targets，2，41-55；Qian与Weiss，1997，Curr.Opin.Cell Biol.，9，205-211)。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明中所述的能够调控酪氨酸激酶(例如，Src)活性的化合物可以有效的用于自身免疫性疾病的治疗。
上述的酪氨酸激酶lck以及fyn均在所述的T细胞受体途径中得到活化；因此，lck和/或fyn的抑制剂具有作为自身免疫性试剂的潜在效用(Palacios与Weiss，2004，Oncogene，23，7990-8000)。Lck以及Fyn主要是由T细胞在它们大部分的生命期限内进行表达的。通过对动物以及细胞系进行的研究，已经证明了Lck以及Fyn在T细胞的形成、动态平衡以及活化中所起的作用(Parang与Sun，2005，Expert Opin.The.Patents，15，1183-1207)。在自身免疫性疾病以及移植排斥中涉及到Lck的活化(Kamens等人，2001，Curr.Opin.Investig.Drugs，2，1213-1219)。结果表明，lck(-)Jurkat细胞系不能够增殖、生成细胞因子、并且产生胞内的钙、肌醇磷酸、以及酪氨酸的磷酸化作用的增加以应答T细胞受体的刺激(Straus与Weiss，1992，Cell.，70，585-593；Yamasaki，1996，Mol.Cell.Biol.，16，7151-7160)。因此，一种抑制lck的试剂能够有效的阻止T细胞的功能，发挥免疫抑制剂的作用，并且具有治疗自身免疫性疾病的潜在效用，例如风湿性关节炎，多发性硬化症，以及狼疮，并且在移植排斥的区域以及过敏性疾病中具有潜在效用(Hanke与Pollok，1995，InflammationRes.，44，357-371)。因此，尽管不希望受到理论的限制，但可以设想，施用本发明中所述的能够调控蛋白酪氨酸激酶Src家族中的一个或者多个成员(例如，lck和/或fyn)的活性的化合物可以有效地用于自身免疫性疾病的治疗。
本发明涉及本质上纯的N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(化合物1)，以及该化合物的盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物：
本发明涉及高度纯化的KX2-391组合物(通过高效液相色谱法测得纯度＞98.0％)及其合成方法，所述的合成方法是安全并且简单的，并且该方法大规模(＞100克)的生产KX2-391。优选的，所述的合成方法高产率(＞80％)的生产所述化合物，并且具有有限的杂质。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物中的化合物1具有高于98％的纯度。例如，在本发明所述的组合物中，所述化合物1的纯度为98.5％，99.0％，99.5％，99.6％，99.7％，99.8％或者99.9％。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的杂质。例如，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的下述杂质中的任意一种或是它们的组合：氯乙烷，乙醇，乙酸乙酯，庚烷，苯甲醚，以及钯。
某些杂质是以百万分之一的水平进行测量的，这是一种相对重量的测量，其等同于溶质的重量除以溶液的重量再乘以1000000，例如，氯乙烷的重量除以KX 2-391二盐酸盐样本的重量再乘以1000000。
在另外的优选实施方式中，所述的组合物含有少于250ppm的氯乙烷，该数据是通过顶空气相色谱法残留溶剂分析测得的。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的氯乙烷在大约0ppm至大约250ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于200ppm、少于200ppm、少于150ppm、少于100ppm、或者少于50ppm的氯乙烷。
本发明所述的化合物以及制剂含有少于大约100ppm的钯。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的钯在大约0ppm至大约100ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于75ppm、少于50ppm、少于30ppm、少于20ppm、少于10ppm、或者少于5ppm的钯。
在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的乙醇在大约0ppm至大约5000ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于4500ppm、少于4000ppm、少于3500ppm、少于3000ppm、少于2500ppm、或者少于2000ppm的乙醇。
在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的乙酸乙酯在大约0ppm至大约50000ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于48000ppm、少于45000ppm、少于40000ppm、少于35000ppm、少于30000ppm、或者少于25000ppm的乙酸乙酯。
在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的庚烷在大约0ppm至大约7500ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于7000ppm、少于6500ppm、少于6000ppm、少于5000ppm、少于3000ppm、或者少于1000ppm的庚烷。
在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的苯甲醚在大约0ppm至大约100ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于80ppm、少于75ppm、少于50ppm、少于25ppm、少于10ppm、或者少于5ppm的苯甲醚。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的溶剂化物。
本发明还涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的水合物。
本发明还包括本质上纯的化合物1的酸加成盐。例如，盐酸盐。所述的酸加成盐可以是，例如，二盐酸盐。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的酸加成盐。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的盐酸盐。
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1的二盐酸盐。
本发明还包括化合物1的前体药物。
本发明还包括本质上纯的、化合物1的药物可接受性盐。
本发明还涉及一种组合物，所述组合物包含本质上纯的化合物1，或者是其溶剂化物、水合物或者盐，以及至少一种药物可接受性赋形剂。
本发明还涉及一种本质上纯的N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺二盐酸盐：
本发明涉及高度纯化的KX2-391.2HCl组合物(通过高效液相色谱法测得纯度＞98.0％)及其合成方法，所述的合成方法是安全并且简单的，该方法大规模(＞100克)、高产率(＞80％)的生产KX2-391.2HCl，并且仅具有有限量的氯乙烷(利用顶空气相色谱法残留溶剂分析测得＜250ppm)。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物中的KX2-391.2HCl具有高于98％的纯度。例如，在本发明所述的组合物中，所述KX2-391.2HCl的纯度为98.5％，99.0％，99.5％，99.6％，99.7％，99.8％或者99.9％。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的杂质。例如，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的下述杂质中的任意一种或是它们的组合：氯乙烷，乙醇，乙酸乙酯，庚烷，苯甲醚，以及钯。
在另外的优选实施方式中，所述的组合物含有少于250ppm的氯乙烷，该数据是通过顶空气相色谱法残留溶剂分析测得的。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的氯乙烷在大约0ppm至大约250ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于200ppm、少于200ppm、少于150ppm、少于100ppm、或者少于50ppm的氯乙烷。
本发明所述的化合物以及制剂含有少于大约100ppm的钯。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的钯在大约0ppm至大约100ppm的范围之内(或者是所述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于75ppm、少于50ppm、少于30ppm、少于20ppm、少于10ppm、或者少于5ppm的钯。
本发明还涉及一种组合物，所述的组合物包括本质上纯的KX2-391.2HCl以及至少一种药物可接受性赋形剂。
本发明中所述的某些化合物是非ATP竞争性激酶抑制剂。
本发明还包括预防或者治疗细胞增殖障碍的方法，所述的方法是给有需要的对象施用一种药物组合物，所述的药物组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，以及至少一种药物可接受性赋形剂。
例如，所述的细胞增殖障碍是癌前状态或者癌症。利用本发明所述的化合物治疗或者预防的所述细胞增殖障碍可以是癌症，例如，结肠癌或者肺癌。
利用本发明所述的化合物治疗或者预防的所述细胞增殖障碍可以是过度增殖障碍。
利用本发明所述的化合物治疗或者预防的所述细胞增殖障碍可以是银屑病。
例如，可以通过对酪氨酸激酶的抑制来实现对于所述增殖障碍的治疗或者预防。例如，所述的酪氨酸激酶可以是Src激酶或者是黏着斑激酶(FAK)。
本发明涉及一种治疗或者预防疾病或者障碍的方法，其中所述的疾病或者障碍受到激酶抑制的调控，所述的方法是施用一种药物组合物，所述的药物组合物中包含本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，以及至少一种药物可接受性赋形剂。例如，所述的受到酪氨酸激酶抑制的调控的疾病或者障碍是癌症，癌前状态，过度增殖障碍，或者微生物感染。
本发明所述的药物组合物可以调控激酶途径。例如，所述的激酶途径是Src激酶途径，或者是黏着斑激酶途径。
本发明所述的药物组合物可以直接对激酶进行调控。例如，所述的激酶是Src激酶，或者是黏着斑激酶。
本发明中所述的某些药物组合物是非ATP竞争性激酶抑制剂。
例如，本发明所述的化合物可以有效的用于治疗或者预防微生物感染，例如细菌、真菌、寄生虫或者病毒的感染。
本发明中的某些药物组合物包含本质上纯的KX2-391.2HCl。
本发明所述的化合物可以被用来作为药物制剂。例如，本发明所述的化合物被用来作为抗增殖剂，用于对人类和/或动物进行治疗，例如用于对人类和/或其他哺乳动物进行治疗。所述的化合物可以被用来作为，例如但不局限于，抗癌剂，抗血管生成剂，抗微生物剂，抗细菌剂，抗真菌剂，抗寄生虫剂和/或抗病毒剂。除此之外，所述的化合物可以被用于其他与细胞增殖相关的障碍例如糖尿病性视网膜病变，黄斑变性以及银屑病。抗癌剂包括抗转移剂。
本发明中所述的用作药物制剂的化合物可以是，例如，本质上纯的KX 2-391或者KX2-391.2HCl。
在本发明的一个方面，本发明中所述的组合物，例如，包括本质上纯的KX 2-391或者KX2-391.2HCl的组合物，被用来治疗或者预防对象的细胞增殖障碍。在所述实施方式中的一个方面，所述的细胞增殖障碍是癌前状态或者癌症。在所述实施方式中的另外一个方面，所述的细胞增殖障碍是过度增殖障碍。在另外一种实施方式中，对于所述的细胞增殖障碍、癌症或者过度增殖障碍的预防或者治疗是经由对所述激酶的抑制来实现的。在另外一种实施方式中，对于所述的细胞增殖障碍、癌症或者过度增殖障碍的预防或者治疗是经由对所述酪氨酸激酶的抑制来实现的。在另外一种实施方式中，对于所述的细胞增殖障碍、癌症或者过度增殖障碍的预防或者治疗是经由对所述Src激酶或者黏着斑激酶(FAK)的抑制来实现的。在另外一种实施方式中，所述的对象是哺乳动物。在一种实施方式中，所述的对象是人类。
本发明还涉及治疗或者预防对象的癌症或者增殖障碍的方法，包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。例如，本发明所述的化合物可以是一种激酶抑制剂。本发明所述的化合物可以是一种非ATP竞争性激酶抑制剂。本发明所述的化合物可以直接抑制激酶的活性，或者可以影响所述的激酶途径。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象免受听力损失或者治疗对象的听力损失的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物并不抑制ATP与所述的蛋白激酶发生结合。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。在一种实施方式中，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部的方式实现，例如，通过向耳朵内进行滴注、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在另外一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。
在一种实施方式中，将所述的化合物在出现听力损失之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在出现听力损失之后进行施用。
在一种实施方式中，将所述化合物与一种能够引起听力损失的药物一同施用，其中所述的药物是例如顺铂或者是一种氨基糖苷类抗生素。在另外一种实施方式中，将所述的化合物与一种以毛细胞为靶向的药物一同施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有骨质疏松症或者治疗对象的骨质疏松症的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在出现骨质疏松之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在出现骨质疏松之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有眼科疾病或者治疗对象的眼科疾病的方法，所述的眼科疾病是例如黄斑病变、视网膜病、黄斑水肿等等，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。在另外一种实施方式中，所述的化合物抑制血管内皮生长因子(VEGF)途径中的一个或者多个成员。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部(例如，通过向耳朵内进行滴注)、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在出现所述的眼科疾病之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在出现眼科疾病之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有糖尿病或者治疗对象的糖尿病的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在糖尿病的发作之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在所述疾病的发作之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有肥胖症或者治疗对象的肥胖症的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在对象发生肥胖症之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在对象发生肥胖症之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有脑卒中(stroke)或者治疗对象的脑卒中(stroke)的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在发生脑卒中(stroke)之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在发生脑卒中(stroke)之后进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有动脉粥样硬化或者治疗对象的动脉粥样硬化的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种调节对象的免疫系统活性的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。
本发明的另外一个方面包括一种保护对象防止患有乙型肝炎或者治疗对象的乙型肝炎的方法，所述方法包括施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。例如，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
在一种实施方式中，所述化合物的给药是通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内的方式实现，通过鼻内灌输、通过腔内或者膀胱内灌输、局部、动脉内、病灶内、通过计量泵、或者通过施用至黏膜的方式实现。在一种实施方式中，所述的化合物与一种药物可接受性载体一同进行施用。在一种实施方式中，将所述的化合物在对象感染了乙型肝炎之前进行施用。在另外一种实施方式中，将所述的化合物在对象感染了乙型肝炎之后进行施用。
本发明的另外一个方面是一种预防或者治疗细胞增殖障碍的方法，所述的方法包括向有需要的对象施用一种组合物，所述的组合物中包含有效剂量的本质上纯的化合物1，或者是其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，是本质上纯的KX2-391或者KX2-391.2HCl。在一种实施方式中，所述的化合物抑制蛋白激酶信号级联中的一个或者多个成员。在另外一种实施方式中，所述的化合物是一种变构抑制剂。在一种实施方式中，所述的化合物是一种肽底物抑制剂。在另外一种实施方式中，所述的化合物并不抑制ATP与蛋白激酶发生结合。在一种实施方式中，所述的化合物抑制Src家族蛋白激酶。在另外一种实施方式中，所述的Src家族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
本发明提供的组合物以及制剂仅含有有限的杂质。本发明中所述的化合物以及制剂具有高于大约98.0％的纯度，这一数据是通过本领域已知的方法来测定的，例如，高效液相色谱法(HPLC)。在一种实施方式中，本发明中所述的化合物以及制剂所具有的纯度在大约99.0％至大约100％的范围内(或者是存在于该范围之内的任意数值)。例如，这样的化合物、组合物、或者制剂可能具有的纯度为98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或者99.9％。
为了获得本发明中所述的组合物以及制剂的最大药效以及治疗效果，限制所述杂质的水平是有益的，其中所述的杂质是例如氯乙烷以及钯。这些杂质能够导致不期望的毒性。
在优选的实施方式中，本发明所述的组合物以及制剂具有少于2％的杂质。例如，本发明所述的组合物以及制剂含有低于2％的下述杂质中的任意一种，或是它们的组合：氯乙烷，乙醇，乙酸乙酯，庚烷，苯甲醚，以及钯。
在另外的优选实施方式中，所述的组合物含有少于250ppm的氯乙烷，该数据是通过顶空气相色谱法残留溶剂分析测得的。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的氯乙烷在大约0ppm至大约250ppm的范围之内(或者是存在于上述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于200ppm、少于200ppm、少于150ppm、少于100ppm、或者少于50ppm的氯乙烷。
本发明所述的化合物以及制剂含有少于大约100ppm的钯。在一种实施方式中，本发明所述的化合物以及制剂中含有的钯在大约0ppm至大约100ppm的范围之内(或者是存在于上述范围内的任意值)。例如，所述的组合物中含有少于75ppm、少于50ppm、少于30ppm、少于20ppm、少于10ppm、或者少于5ppm的钯。
定义
出于方便的目的，在这里总结在说明书、实施例以及随后的权利要求中所使用到的某些术语。
蛋白激酶是酶中的一个大类，它催化了γ-磷酸从ATP(三磷酸腺苷)转化成蛋白质以及肽中的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)侧链或者酪氨酸(Tyr)侧链上的羟基基团，并且最终参与控制各种重要的细胞功能，或许最显著地控制：信号转导，分化以及扩增。据估计，在人类体内存在大约2000种不同的蛋白激酶，并且尽管它们中的每一种针对特定的蛋白/肽底物进行磷酸化，但它们都以高度保守的方式与一种同样的次级底物进行结合。在已知的致癌基因产物中有大约50％是蛋白酪氨酸激酶(PTK)，并且已经表明，它们的激酶活性导致了细胞的转化。
所述的蛋白酪氨酸激酶(PTK)可以被划分为两个种类，膜受体蛋白酪氨酸激酶(例如，生长因子受体蛋白酪氨酸激酶)以及非受体蛋白酪氨酸激酶(例如，原致癌基因产物中的Src家族以及黏着斑激酶(FAK))。已经在多种人类癌症中报道了Src的过度活化，包括结肠癌，乳腺癌，肺癌，膀胱癌，以及皮肤癌，还有胃癌，毛细胞白血病，以及成神经细胞瘤。
“抑制蛋白激酶信号级联中的一个或者多个成员”指的是所述的激酶信号级联中的一个或者多个成员受到作用，从而使得所述细胞的功能发生改变。蛋白激酶信号级联中的成员包括在所述的激酶信号途径中直接或者间接涉及到的任何的蛋白质，包括第二信使以及上游靶向和下游靶向。
“治疗”，包括能够引起所述的状况、疾病、障碍、等等发生改善的任意的效果，例如，减轻，缓解，调控，或者消除。对于疾病状态的“治疗”包括：抑制所述疾病的状态，即停止所述疾病状态的发展或者其临床症状的发展；或者缓解所述疾病的状态，即导致所述疾病状态或者其临床症状发生暂时的或者永久的减退。
“预防”所述的疾病状态包括使所述疾病状态的临床症状在对象中不会发展，所述的对象可能被暴露于或者容易罹患所述的疾病状态，但尚未体验到或者表现出所述疾病状态的症状。
“疾病状态”指的是任何的疾病、障碍、状况、症状、或者迹象。
本发明中所使用的所述术语“细胞增殖障碍”指的是细胞的不规则生长和/或异常生长导致了不期望的状况或者疾病的发生的情形，这种情形可以是癌性的或者是非癌性的，例如是一种银屑病的情形。本发明中所使用的所述术语“银屑病的情形”或者“银屑病”指的是涉及角化细胞过度增殖、炎性细胞渗透、以及细胞因子改变的障碍。
在一种实施方式中，所述的细胞增殖障碍是癌症。本发明中所使用的所述术语“癌症”包括实体肿瘤，例如肺癌，乳腺癌，结肠癌，卵巢癌，脑癌，肝癌，胰腺癌，前列腺癌，恶性黑素瘤，非黑素瘤皮肤癌，以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤，例如儿童白血病以及淋巴瘤，多发性骨髓瘤，霍奇金氏病，淋巴细胞以及皮肤原发性淋巴瘤，急性与慢性白血病例如成淋巴细胞白血病，急性髓细胞白血病或者慢性髓细胞白血病，浆细胞肿瘤，淋巴肿瘤以及与AIDS相关的癌症。
除了银屑病的情形，可以利用本发明所述的组合物进行治疗的所述增殖疾病的类型还有表皮囊肿以及皮样囊肿，脂肪瘤，腺瘤，毛细血管瘤以及皮肤血管瘤，淋巴管瘤，痣损伤(nevi lesion)，畸胎瘤，肾瘤，肌纤维瘤，成骨细胞瘤，以及其他发育不良性团块(dysplastic mass)和类似物。所述的增殖疾病可能包括发育异常以及类似的障碍。
本发明所述的化合物的“有效剂量”指的是这样的量：当为患有疾病或者障碍的对象施用时，能够引发所述对象的疾病或者障碍减退的量。因此，本发明所述的化合物的有效剂量指的是这样的量：当为患有细胞增殖障碍的对象施用时，能够引发所述对象的细胞生长减退的量。施用给对象的公开化合物的量将取决于具体的障碍，给药的方式，组合施用的化合物，如果存在的话，以及所述对象的特征，例如一般健康状况，其他疾病，年龄，性别，基因型，体重以及对药物的耐受性。熟练的技术人员将有能力依据这些因素以及其他因素来确定适当的剂量。
本发明中所使用的所述术语“有效剂量”指的是当将本发明所述的化合物或者所述化合物的组合作为一种抗增殖制剂单独施用或者组合施用时能够达到效果的量。例如，有效剂量指的是存在于一种制剂或者一种医学装置中的所述化合物的量，所述的量使得将其施用至接受治疗的患者或者对象后足以引发生物学活性，例如，抗增殖活性，例如，抗癌症活性或者抗肿瘤活性。所述的化合物的组合任选的是一种协同的组合。正如在例如Chou与Talalay，Adv.Enzyme Regul.vol.22，pp.27-55(1984)中所描述的，当所述的组合物进行组合施用时所产生的效果大于所述的组合物作为单一制剂进行单独施用时所产生的效果之和时，就发生了协同作用。通常，在所述化合物的非最适宜浓度条件下能够最显著的证明这种协同效应。协同作用可以是所述的组合比所述的单独组分具有更低的细胞毒性、或者增强的抗增殖效果、或者某些其他的有益效果来确定。
“治疗有效剂量”指的是这样的量：当向哺乳动物施用所述化合物以治疗一种疾病时，足以影响所述疾病的治疗的化合物的量。所述的“治疗有效剂量”将根据所述的化合物、所述的疾病及其严重程度以及所述接受治疗的哺乳动物的年龄、体重等等而改变。
可以将治疗有效剂量的一种或者多种所述的化合物与药物可接受性载体一同进行配制，用以对人类或者动物进行施用。因此，所述的化合物或者制剂可以经由例如口服、肠胃外、或者局部的路径进行施用，从而提供有效剂量的所述化合物。在另外的实施方式中，可以利用依照本发明而制备的所述化合物对一种医学装置进行涂层或者灌注，所述的医学装置是例如血管支架。
所述的术语“预防有效剂量”指的是能够预防或者降低患有不期望的细胞增殖的危险而施用的本发明所述化合物的有效剂量。
本发明中所使用的“药理学作用”包括在对象体内所产生的、达到了治疗的预期目的的作用。在一种实施方式中，药理学作用指的是接受治疗的对象的初始迹象(primaryindications)被预防、缓解、或者减轻了。例如，药理学作用应当是导致了接受治疗的对象的初始迹象被预防、缓解、或者减轻了的作用。在另外一种实施方式中，药理学作用指的是接受治疗的对象的初始迹象的障碍或者症状被预防、缓解、或者减轻了。例如，药理学作用应当是导致了接受治疗的对象的初始迹象被预防或者减轻了的作用。
通过利用氧化剂(例如，3-间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)和/或过氧化氢)进行处理，可以将本发明所述的含氮化合物转化成N-氧化物，从而提供本发明所述的其他化合物。因此，只要化合价以及结构允许，所有已显示的以及请求保护的含氮化合物均被认为同时包括所表示的化合物及其N-氧化物衍生物(其可以被标示为N→O或者N+→O-)。此外，在其他的情况中，本发明所述化合物中的氮可以被转化成N-羟基或者N-烷氧基化合物。例如，可以利用氧化剂例如3-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)对所述的母体胺进行氧化来制备N-羟基化合物。只要化合价以及结构允许，所有已显示的以及请求保护的含氮化合物还可以被认为同时覆盖了所显示的化合物及其N-羟基(即，N-OH)衍生物以及N-烷氧基(即，N-OR，其中R是被取代的或者未被取代的C1-6烷基，C1-6烯基，C1-6炔基，C3-14碳环，或者是具有3-14个原子的杂环)衍生物。
“平衡离子”用来表示小的、带负电荷的种类，例如氯离子，溴离子，氢氧根离子，醋酸根离子，以及硫酸根离子。
本发明中所使用的“阴离子基团”指的是在生理pH下带负电荷的基团。阴离子基团包括羧酸根，硫酸根，磺酸根，亚磺酸根，氨基磺酸根，四唑基，磷酸根，膦酸根，亚膦酸根，或者硫代磷酸根或者是上述基团的功能等价物。阴离子基团的“功能等价物”意在包括生物电子等排，例如，羧基基团的生物电子等排。生物电子等排包括经典生物电子等排等价物以及非经典生物电子等排等价物。经典生物电子等排以及非经典生物电子等排是本领域已知的(参见，例如，Silverman，R.B.，The OrganicChemistry of Drug Design and Drug Action，Academic Press，Inc.：San Diego，Calif.1992，pp.19-23)。在一种实施方式中，阴离子基团是羧酸根。
本发明意在包括出现在本发明中的原子的所有同位素。同位素包括那些具有相同的原子序数以及不同的质量数的原子。作为常规的例子而不构成限制，氢的同位素包括氚以及氘，而碳的同位素包括C-13以及C-14。
本发明中所描述的化合物可以具有不对称中心。本发明中所述的含有不对称取代原子的化合物可以以光学活性形式或者外消旋形式被分离。本领域熟知怎样制备光学活性形式，例如通过外消旋形式的拆分或者通过从光学活性起始物质来合成。石蜡、C＝N双键等许多种几何异构体也可以存在于本发明所描述的化合物中，并且全部这些稳定的异构体都在本发明所考虑的范围内。在此描述了本发明所述化合物的顺式几何异构体以及反式几何异构体，并且它们可以以异构体混合物的形式或者单独的异构体的形式被分离。除非特别指明具体的立体化学形式或者异构形式，否则意在包括一种结构的所有的手性形式、非对映异构体形式、外消旋形式、以及几何异构形式。被公开或者被描述的化合物的所有的互变异构体也被认为是本发明的一个部分。
在本申请说明书中，在某些情况下出于便利的目的，所述化合物的结构式代表着某种异构体，但本发明包括所有的异构体，例如几何异构体，基于不对称碳原子的光学异构体，立体异构体，互变异构体以及能够在结构上出现的类似异构体，还包括异构体混合物，并且不局限于出于便利的目的而描述的所述结构式，其可以是任何一种异构体或其混合物。因此，在所述的分子中可以存在不对称碳原子，并且在本发明所述的化合物中可以存在光学活性化合物以及外消旋化合物，但本发明并不局限于它们，其包括任意一种情况。除此之外，可以存在多晶形，但不局限于此，但任何的晶体形式都可以是单独存在的或者是晶体形式的混合物，是无水物或者是水合物。进一步的，由本发明所述化合物的体内降解所生成的所谓的代谢物被包括在本发明的范围之内。
“异构现象”指的是化合物具有相同的分子式但其性质不同，或者是这些化合物的原子的连接顺序不同或者是它们的原子的空间排列不同。原子的空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。之间不是呈镜像关系的立体异构体被称为“非对映异构体”，并且之间呈不能重叠的镜像关系的立体异构体被称为“对映异构体”，或者有时被称为光学异构体。与四种不同的取代基相连接的碳原子被称为“手性中心”。
“手性异构体”指的是具有至少一个手性中心的化合物。存在两个具有相反手性的对映异构体形式，并且它们可以以单独的对映异构体形式存在或者以对映异构体混合物的形式存在。含有等量的具有相反手性的各自单独的对映异构体形式的混合物被称为“外消旋混合物”。具有多于一个手性中心的化合物具有2n-1个对映异构体对，其中n表示手性中心的个数。具有多于一个手性中心的化合物可以以各自单独的非对映异构体的形式存在，或者以非对映异构体的混合物的形式存在，被称为“非对映异构混合物”。当存在一个手性中心时，立体异构体可以由所述手性中心的绝对构型(R或者S)来定义。绝对构型指的是与所述的手性中心相连接的取代基的空间排列。依据卡恩-英格尔-普雷洛格(Cahn，Ingold and Prelog)顺序规则，对被考虑的连接于所述手性中心上的取代基进行归类(Cahn等人，，Angew.Chem.Inter.Edit.，1966，5，385；errata511；Cahn等人，Angew.Chem.1966，78，413；Cahn与Ingold，J.Chem.Soc.1951(London)，612；Cahn等人，Experientia 1956，12，81；Cahn等人，J.Chem.Educ.1964，41，116)。
“几何异构体”指的是由于沿双键发生位阻旋转而存在的非对映异构体。这些构型通过它们的名字中的前缀顺式以及反式、或者Z以及E来区分，这种前缀表明在所述分子中所述基团在所述双键的同侧还是相对侧，依据的是卡恩-英格尔-普雷洛格(Cahn，Ingold and Prelog)规则。
进一步的，本申请中所讨论的所述结构以及其他化合物均包括所述结构以及化合物的所有阿托异构体。“阿托异构体”是立体异构体中的一种类型，其中两种异构体的原子的空间排列存在差异。阿托异构体的存在归因于由大基团沿中心键进行的位阻旋转而引发的阻碍旋转。这样的阿托异构体通常是以混合物的形式存在的，然而色谱技术的新近发展结果表明，在某些选择性的情况下，分离两种阿托异构体的混合物已经成为可能。
所述的术语“多晶形”或者“多形体”或者“晶体形式”指的是晶体结构，具有上述晶体结构的化合物(或其盐或者溶剂化物)能够以不同的晶体堆积排列发生结晶，所有的晶体结构均具有相同的元素组成。不同的晶体类型通常具有不同的X-射线衍射图，红外光谱，熔点，密度硬度，晶体形状，光学特性和电学特性，稳定性以及溶解性。重结晶溶剂、结晶速率、存储温度、以及其他因素可能导致一种晶体形式占主导地位。所述化合物的多晶形可以通过在不同条件下的结晶来制备。
此外，本发明中所述的化合物，例如，所述化合物的盐，能够以水合或者非水合(无水的)的形式存在，或者以含有其他溶剂分子的溶剂化物的形式存在。水合物的非限制性例子包括一水合物，二水合物，等等。溶剂化物的非限制性例子包括乙醇的溶剂化物，丙酮的溶剂化物，等等。
“溶剂化物”指的是含有化学计量或者非化学计量的溶剂的溶剂加成物形式。一些化合物具有以结晶固体的状态锁住固定摩尔比率的溶剂分子的趋向，因而形成了一种溶剂化物。如果所述的溶剂是水，则形成的所述溶剂化物是水合物，当所述的溶剂是乙醇，则形成的所述溶剂化物是醇化物。当一个或者多个水分子与一种物质发生组合，并且所述的水在其中仍然以H2O的形态保持其分子状态，则形成水合物，这样的组合能够形成一种或者多种水合物。
“互变异构体”指的是在原子排列结构上存在显著差异、但存在于一种简单并且快速的平衡之中的化合物。可以理解的是，本发明所述的化合物可能被描述成不同的互变异构体。同样可以理解的是，当化合物具有互变异构形式时，所有的互变异构形式均意在被包括在本发明的范围之内，并且所述化合物的命名不能排除任何互变异构体形式。
本发明所述的某些化合物可以以互变异构的形式存在。互变异构体同样意在被包括在本发明的范围之内。
本发明中所述的化合物、其盐以及前体药物可以以几种互变异构形式存在，包括烯醇形式以及亚胺形式，以及酮形式和烯胺形式，以及几何异构体形式，以及上述形式的混合物。所有这些互变异构形式均被包括在本发明的范围之内。互变异构体以互变异构混合物的形式存在于溶液中。在固体形式中，通常一种互变异构体占主导地位。尽管可能对一种互变异构体进行描述，但本发明包括所述化合物的所有的互变异构体。
互变异构体是两种或者多种结构异构体中的一种，这些结构异构体以平衡状态存在，并且很容易从一种异构形式转化至另外一种异构形式。这一反应引发了氢原子的形式转移，伴随着邻近的共轭双键的转换。在可能存在互变异构反应的溶液中，所述的互变异构体将达到一种化学平衡。所述的互变异构体的确切比率取决于几个因素，包括温度，溶剂，以及pH。通过互变异构反应实现相互转化的互变异构体的概念被称为互变异构现象。
在可能存在的各种类型的互变异构现象中，通常可以观察到的有两种。在酮-烯醇互变异构现象中，发生了电子与氢原子的同时转换。环-链互变异构现象，是由葡萄糖表现出来的。这种现象的发生是由于存在于糖链分子中的醛基(-CHO)与存在于相同分子中的羟基(-OH)中的一个发生了反应，从而形成了环(环状)的形式。
互变异构反应是由下列物质催化的：碱：1.去质子化；2.形成离开原位的阴离子(例如，一种烯醇化物)；3.在所述阴离子的不同位置处发生质子化；酸：1.质子化；2.形成离开原位的阳离子；3.在邻近所述阳离子的不同位置处发生去质子化。
常见的互变异构对是：酮-烯醇，酰胺-腈，内酰胺-内酰亚胺，杂环中(例如，在核碱基鸟嘌呤、胸腺嘧啶、以及胞核嘧啶中)的酰胺-亚胺酸互变异构，胺-烯胺以及烯胺-烯胺。
因此可以理解的是，除非特别指明，来自于不对称性碳原子的异构体(例如，所有的对映异构体以及非对映异构体)被包括在本发明的范围之内。这类异构体可以以本质上纯化的形式通过经典的分离技术以及立体化学控制合成的方法来获得。此外，本申请中所讨论的所述结构以及其他化合物及其基团同样包括它们所有的互变异构体。如果合适的话，烯烃可能包括所述的E-几何构型或者Z-几何构型。本发明所述的化合物可以以立体异构的形式存在，因此可以以各自单独的立体异构体形式或者以混合物的形式进行制备。
“药物组合物”指的是含有所述化合物的制剂，其中所述的制剂以适合施用给对象的形式存在。在一种实施方式中，所述的药物组合物以大批剂量的形式或者以单元剂量的形式存在。为了方便施用并且保持剂量的均一，以剂量单元的形式配制所述的组合物是有利的。这里所使用的剂量单元形式指的是适合作为单一剂量施用至接受治疗的对象的物理上离散的单元；每个单元含有预先确定量的活性试剂并与所需要的药物载体相结合，所述的预先确定量是经过计算能够产生期望的治疗效果的量。本发明所述的剂量单元形式的规格是由下列因素所规定的并且直接取决于下列因素：所述活性试剂的独特性质以及所要达到的特定治疗效果，以及为了对个体进行治疗而对这样的活性试剂进行组合所固有的局限性。
所述的单元剂量形式是各种形式中的任何一种，包括，例如，胶囊，静脉输液袋(IV bag)，片剂，气雾剂吸入器的单流向泵，或者是小瓶。在单元剂量的组合物中的所述活性成分(例如，所述被公开的化合物或其盐、水合物、溶剂化物、或者异构体的制剂)的量是能够达到效果的剂量，并且根据具体涉及到的治疗方法而存在变化。本领域技术人员能够认识到，有些时候根据所述患者的年龄以及状况对所述的剂量进行常规的改变是必要的。所述的剂量还将取决于所述的给药途径。可以预期各种不同的途径，包括口服，肺内，直肠，肠胃外，透皮，皮下，静脉内，肌肉内，腹膜内，吸入，口腔内，舌下，胸膜内，鞘内，鼻内，以及类似的途径。用于局部给药或者透皮给药的本发明所述化合物的剂量形式包括粉末，喷雾，软膏，贴剂，霜剂(creams)，洗剂(lotions)，凝胶剂，溶液，片剂以及吸入剂。在一种实施方式中，将所述的活性化合物在无菌条件下与药物可接受性载体进行混合，并且可以混合所需要的任何防腐剂、缓冲剂、或者推进剂。
所述的术语“闪释剂型”指的是以快速分散的剂量形式存在的化合物制剂。
所述的术语“立即释放”定义的是化合物在相对短暂的时间段内从一种剂量形式中进行释放，通常达到大约60分钟。所述的术语“控释”的定义包括延迟释放，延长释放，以及脉冲释放。所述的术语“脉冲释放”定义的是药物从一种剂量形式中进行一系列的释放。所述的术语“持续释放”或者“延长释放”定义的是化合物在一段延长的时间内从一种剂量形式中进行连续的释放。
“对象”包括哺乳动物，例如，人类，宠物动物(例如，狗，猫，鸟，以及类似动物)，农场动物(例如，牛，羊，猪，马，家禽，以及类似动物)以及实验室动物(例如，小鼠，大鼠，豚鼠，鸟，以及类似动物)。在一种实施方式中，所述的对象是人类。
这里所使用的所述短语“药物可接受性”指的是那些在合理的医学判断的范围之内、适合以与人类以及动物的组织相接触的形式进行使用、不具有过量的毒性、刺激性、过敏反应、或者其他问题或并发症、具有相称的合理的利益/风险比的化合物、原料、组合物、载体、和/或剂量形式。
“药物可接受性赋形剂”指的是能够用于制备药物组合物的赋形剂，其通常是安全的，无毒性的并且既不具有生物活性也不是不合乎要求的，包括那些在兽医用途以及人类药物用途上被接受的赋形剂。在本说明书以及权利要求中使用到的“药物可接受性赋形剂”包括一种以及多种这样的赋形剂。
本发明所述的化合物能够进一步的形成盐。所有的这些形式同样被考虑在请求保护的发明的范围之内。
化合物的“药物可接受性盐”指的是一种药物学上可以接受的盐类，并且所述的盐类具有所述母体化合物的预期的药物学活性。
这里所使用的“药物可接受性盐”指的是被公开的化合物的衍生物，其中所述的母体化合物通过被制成其酸式盐或者碱式盐而被修饰。药物可接受性盐的例子包括，但不局限于，碱性残基例如胺的无机酸盐或者有机酸盐，酸性残基例如羧酸等的碱金属盐或者有机盐。所述的药物可接受性盐包括所述母体化合物的常规的无毒性盐或者季胺盐，它们来自于，例如，无毒性无机酸或者有机酸。例如，这样的常规的无毒性盐包括，但不局限于，那些来自于无机酸以及有机酸的盐，选自2-乙酰氧基苯甲酸盐，2-羟基乙烷磺酸盐，醋酸盐，抗坏血酸盐，苯磺酸盐，安息香酸盐，碳酸氢盐，碳酸盐，柠檬酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙烷二磺酸盐，1，2-乙烷磺酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，葡糖酸盐，谷氨酸盐，羟基乙酸盐，对α羟乙酰氨基苯砷酸盐(glycollyarsanilate)，己基间苯二酚酸盐(hexylresorcinate)，hydrabamic，氢溴酸盐，盐酸盐，氢碘酸盐，羟基马来酸盐，羟基萘酸盐，羟基乙磺酸盐，乳酸盐，乳糖酸盐，十二烷基磺酸盐，马来酸盐，苹果酸盐，扁桃酸盐，甲烷磺酸盐，napsylic，硝酸盐，草酸盐，双羟萘酸盐，泛酸盐，苯乙酸盐，磷酸盐，多聚半乳糖醛酸盐，丙酸盐，水杨酸盐，硬脂酸盐，亚醋酸盐(subacetic)，琥珀酸盐，氨基磺酸盐，磺胺酸盐，硫酸盐，丹宁酸盐，酒石酸盐，甲苯磺酸盐，以及常见的氨基酸盐，例如，甘氨酸盐，丙氨酸盐，苯丙氨酸盐，精氨酸盐，等等。
其他的酸例子包括己酸，环戊烷丙酸，丙酮酸，丙二酸，3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸，肉桂酸，4-氯苯磺酸，2-萘基磺酸，4-甲苯磺酸，樟脑磺酸，4-甲基二环-[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸，3-苯丙酸，三甲基醋酸，叔丁基醋酸，己二烯二酸，以及类似的酸。本发明还包括下述方式形成的盐：存在于所述母体化合物中的酸性质子被金属离子所取代而生成的酸，或者是这种酸性质子与有机碱发生配位反应而生成的盐，其中所述的金属离子是，例如，碱金属离子，碱土金属离子，或者铝离子；所述的有机碱是例如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，氨基丁三醇，N-甲基葡糖胺，以及类似的有机碱。
应当理解的是，所有谈及的药物可接受性盐均包括本发明中所定义的这些盐的溶剂加成形式(溶剂化物)或者晶体形式(多晶形)。
本发明所述的药物可接受性盐可以通过常规的化学方法从含有碱基团或者酸基团的母体化合物合成得到。一般的，可以通过将这些化合物的游离酸形式或者游离碱形式与化学当量剂量的适当的碱或者酸进行反应来制备这样的盐，其中所述的反应是在水或者有机溶剂或两者的混合物中进行的；其中可以使用非水介质，例如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇，或者乙腈。适当的盐的列表可以在Remington’s Pharmaceutical Sciences，18thed.(Mack出版公司，1990年)。例如，所述的盐可以包括，但不局限于，含有脂肪胺的本发明所述化合物的盐酸盐以及醋酸盐，含有羟胺的本发明所述化合物的盐酸盐以及醋酸盐，以及含有亚胺的本发明所述化合物的盐酸盐以及醋酸盐。
本发明所述的化合物可以以前体药物的形式来制备，例如药物可接受性前体药物。这里所使用的所述术语“前药”与“前体药物”可以互换使用，并且指的是能够在体内释放活性母体药物的任意化合物。由于已知前体药物能够增强医药品的多种期望的品质(例如，溶解性，生物利用度，制造性，等等)，本发明的化合物可以以前体药物的形式进行递送。因此，本发明意在覆盖这里所请求保护的化合物的前体药物，递送这类物质的方法以及含有这类物质的组合物。“前体药物”意在包括当将其施用给对象时，能够在体内释放本发明所述的活性母体药物的任意共价结合的载体。本发明所述的前体药物是通过对存在于所述化合物中的官能团进行修饰而制备得到的，其中所述的修饰在常规操作中或者在体内裂解成所述的母体化合物。前体药物包括其中羟基、氨基、氢硫基、羧基或者羰基基团与能够在体内发生裂解而分别生成游离的羟基，游离的氨基，游离的氢硫基，游离的羧基或者游离的羰基基团的任意基团键合的本发明化合物。
前体药物的例子包括，但不局限于，化合物中的羟基官能团的酯(例如，醋酸酯，二烷基氨基醋酸酯，甲酸酯，磷酸酯，硫酸酯，以及苯甲酸衍生物)以及氨基甲酸酯(例如，N，N-二甲基氨基羰基)，化合物中的羧基官能团的酯基团(例如，乙酯，吗啉代乙醇酯)，化合物中的氨基官能团的N-酰基衍生物(例如，N-乙酰基)N-Mannich碱，Schiff碱以及烯胺酮，化合物中的酮以及醛基官能团的肟，乙缩醛，缩酮以及烯醇酯，以及类似物，参见Bundegaard，H.的“Design of Prodrugs”p1-92，Elesevier，New York-Oxford(1985)。
“保护基团”指的是与分子中的活性基团相连时掩蔽、降低或者阻止该基团活性的一组原子。保护基团的例子可以在Green与Wuts编写的Protective Groups in Organic Chemistry《有机化学中的保护基团》(Wiley，第二版，1991年)中、Harrison与Harrison等人编写的Compendium of Synthetic Organic Methods《合成有机方法纲要》Vol.(卷)1-8(John Wiley and Sons，1971-1996年)中、以及Kocienski编写的Protecting Groups《保护基团》(Verlag，第三版，2003年)中找到。
“稳定的化合物”以及“稳定的结构”意在表明一种足够稳固的化合物，所述的化合物能够经受以有效程度的纯度从反应混合液中被分离，并且被配制成有效的治疗试剂。
在本说明书中，除非另有说明，否则所述的单数形式也包含其复数。除非特别定义，这里所使用的全部技术术语以及科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。在出现矛盾的情况中，将以本说明书为准。
除非特别指明，这里所使用的全部百分含量以及比例均为重量比。
“组合治疗”(或者“共同治疗”)包括将本发明所述化合物与至少一种第二试剂一起进行施用，作为一个具体的治疗方案的一部分，意在通过这些治疗试剂的共同作用来提供有益的效果。这种组合所产生的所述有益的效果包括，但不局限于，由所述治疗试剂的组合而引发的药物动力学的共同作用或者药效的共同作用。这些治疗试剂的组合施用通常是在一段规定的时间段内进行的(通常是分钟，小时，天或者周，取决于所选择的组合)。“组合治疗”可以、但通常并非意在包括本发明中作为独立的单一治疗方案的两种或者更多种这类治疗试剂的施用，这些治疗试剂顺带的并且随意的构成了本发明中所述的组合。
“组合治疗”意在包括以一种连续的方式施用这些治疗试剂，其中每种治疗试剂在不同的时间施用，也包括以一种本质上同时的方式施用这些治疗试剂，或者至少施用这些治疗试剂中的两种。本质上同时施用的方式可以通过例如向对象施用单一胶囊的方式来完成，所述的胶囊中含有固定比例的每种治疗试剂，或者通过向对象施用多个胶囊的方式来完成，所述的每一种胶囊为一种治疗试剂。每种治疗试剂的连续施用或者本质上同时施用的方式可能通过任意适当的途径实现，所述的任意适当的途径包括，但不局限于，口服途径，静脉内途径，肌肉内途径，以及经由黏膜组织的直接吸收。所述的治疗试剂可以以同样的途径或者不同的途径进行给药。例如，可以以静脉内注射的方式施用所选择的组合中的第一种治疗试剂，而以口服的方式施用所述组合中的其他的治疗试剂。或者，例如，可以以口服的方式施用所有的治疗试剂，或者以静脉内注射的形式施用所有的治疗试剂。所述的治疗试剂的施用顺序并不是紧密苛求的。
“组合治疗”还包括将如上所述的治疗试剂进一步与其他生物活性成分以及非药物治疗(例如，外科手术或者放射性治疗)组合施用。当所述的组合治疗进一步包括一种非药物治疗时，所述的非药物治疗可以在任意适当的时间进行，只要通过所述治疗试剂与所述非药物治疗的组合的共同作用能够达到有益的效果即可。例如，在适当的情况下，当所述的非药物治疗与所述治疗试剂的施用在时间上隔开，或许是几天或者甚至是几周，也仍然能够达到所述的有益效果。
在整篇说明书中，当组合物被描述为具有、包括、或者包含具体组分的时候，可以预期到所述的组合物同样是本质上由上述提及的组分组成，或者由上述提及的组分组成。类似的，当方法被描述为具有、包括、或者包含具体的方法步骤的时候，所述的方法同样是本质上由上述提及的方法步骤组成，或者由上述提及的方法步骤组成。进一步的，应当理解的是，这些步骤的顺序或者完成某些行为的顺序不重要，只要所述的发明仍然能够实施即可。并且，两个或者更多个步骤或者行为可以同时进行。
所述的化合物或者其药物可接受性盐可以通过口服、鼻内、透皮、肺内、吸入、口腔内、舌下、腹膜内、皮下、肌肉内、静脉内、直肠、胸膜内、鞘内以及肠胃外的形式进行施用。在一种实施方式中，所述的化合物以口服形式施用。本领域技术人员将能够认识到某些给药途径的优点。
利用所述化合物的剂量方案将依据多种因素进行选择，所述的因素包括所述患者的类型，种属，年龄，体重，性别以及医学状况；接受治疗的症状的严重程度；给药途径；所述患者的肾功能以及肝功能；以及所使用的具体化合物或其盐。普通的熟练内科医师或者兽医能够容易的确定并且指定用于预防、抵抗或者终止所述症状的恶化所需要的药物的有效剂量。
配制并且施用本发明中公开的化合物的技术可以在Remington：the Science and Practice of Pharmacy《雷明顿药物科学与实践》，第19版，Mack出版公司，Easton，PA(1995年)中找到。在一种实施方式中，这里公开的所述化合物及其药物可接受性盐与一种药物可接受性载体或者赋形剂一同被用于进行药物的制备。适当的药物可接受性载体包括惰性固体填充剂或者赋形剂以及无菌水溶液或者有机溶液。所述化合物应当以足以提供在本发明所述范围内期望的药剂剂量的量存在于所述的药物组合物中。
在一种实施方式中，将所述的化合物制备成口服给药形式，其中将所述被公开的化合物或其盐与一种适当的固体或者液体载体或者赋形剂混合，从而形成胶囊，片剂，丸剂，粉末，糖浆，溶液，悬浮液以及类似剂型。
所述的片剂，丸剂，胶囊，以及类似剂型中含有大约1重量％至大约99重量％的所述活性成分以及粘合剂例如黄芪胶，阿拉伯树胶，玉米淀粉或者明胶；赋形剂例如磷酸氢钙；崩解剂例如玉米淀粉，马铃薯淀粉或者褐藻酸；润滑剂例如硬脂酸镁；和/或甜味剂例如蔗糖，乳糖，糖精，木糖醇，以及类似物质。当所述的剂量单元形式是一种胶囊时，除上述类型的原料之外，其通常含有液体载体例如脂肪油。
在某些实施方式中，各种其他的原料作为涂层或者为了对所述的剂量单元进行物理形式的修饰而存在。例如，在一些实施方式中，片剂上涂覆有虫胶、糖或者两者的结合。在某些实施方式中，除了所述的活性成分之外，糖浆或者酏剂中还含有蔗糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯以及对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂，染料以及调味剂，例如樱桃香精或者橙子香精，以及类似物质。
在一些涉及到肠胃外给药的实施方式中，所述被公开的化合物、或其盐、溶剂化物、互变异构体或者多形体可以与无菌水介质或者有机介质进行混合，从而形成注射溶液或者悬浮液。在一种实施方式中，注射性组合物是等渗水溶液或者悬浮液。所述的组合物可以是无菌的和/或含有佐剂，例如防腐剂，稳定剂，润湿剂或者乳化剂，增溶剂，调节渗透压的盐类和/或缓冲剂。除此之外，它们还可以含有在其他治疗学上有价值的物质。所述的组合物是分别根据传统的混合、制粒或者涂覆的方法制备的，并且含有大约0.1％至75％的活性成分，在另外一种实施方式中，所述的组合物含有大约1％至50％的活性成分。
例如，使用溶剂以及所述化合物的水溶性药物可接受性盐的水溶液来制备注射溶液，其中所述的溶剂实例如芝麻油或者花生油或者丙二醇水溶液。在某些实施方式中，在甘油、液体聚乙二醇或者上述物质在油中的混合液来制备分散液。在常规的储存以及使用的环境下，这些制剂中含有防腐剂，以阻止所述微生物的生长。这里所使用的所述术语“肠胃外给药”以及“肠胃外施用”指的是不同于肠内给药以及局部给药的给药方式，通常通过注射的形式给药，并且包括，但不局限于，静脉内，肌肉内，动脉内，鞘内，囊内，眼窝内，心脏内，皮内，腹膜内，经气管，皮下，角质层下，关节内，囊下，蛛网膜下，脊柱内以及胸骨内注射以及输液的方式。
对于直肠给药而言，适当的药物组合物是，例如，局部制剂，栓剂或者灌肠剂。栓剂可以方便的通过脂肪乳化剂或者悬浮剂进行制备。所述的组合物可以是无菌的和/或含有佐剂，例如防腐剂，稳定剂，润湿剂或者乳化剂，增溶剂，调节渗透压的盐类和/或缓冲剂。除此之外，它们还可以含有在其他治疗学上有价值的物质。所述的组合物是分别根据传统的混合、制粒或者涂覆的方法制备的，并且含有大约0.1％至75％的活性成分，在另外一种实施方式中，所述的组合物含有大约1％至50％的活性成分。
在一些实施方式中，所述的化合物被配制成通过肺内给药的方式递送所述的活性试剂，例如，施用含有所述活性试剂的气雾剂，通过，例如，手动泵喷雾器、喷雾器或者定量吸入气雾剂(pressurized metered-dose inhaler)的形式。在某些实施方式中，适当的这种类型的制剂中还包括其他试剂，例如抗静电剂，使所述被公开的化合物保持有效的气雾剂形式。
用于递送气雾剂的药物递送装置包括一个带有计量阀的适当的气雾剂筒以及一个驱动外壳，所述的气雾剂筒中装有本发明中所述的药物气雾剂制剂，所述的驱动外壳适于承载所述的气雾剂筒并且用于药物的递送。所述的药物递送装置上的气雾剂筒具有一个顶部空间，其占据了所述筒的全部体积的大约15％以上。通常，在溶剂、表面活性剂以及推进剂组成的混合液中将意在进行肺部给药的所述聚合物溶解、悬浮或者乳化。将所述的混合液在压力条件下保存于筒中，所述的筒利用计量阀进行密封。
对于鼻内给药而言，可以使用固体载体或者液体载体。所述的固体载体包括粗糙粉末，所述的粉末具有例如在大约20微米至大约500微米范围内的颗粒尺寸，并且这样的制剂是通过经由鼻管的快速吸入来施用的。在某些实施方式中，当使用所述的液体载体时，所述的制剂是以鼻内喷雾或者液滴的形式被施用的，并且其中包括所述活性成分的油或者水溶液。
所述的活性试剂可以与载体一同进行制备，这样将能够避免其从身体中快速清除。例如，可以使用一种控释制剂，包括植入递送体系以及微胶囊化递送体系。可以使用生物可降解的、生物兼容性聚合体，例如乙烯醋酸乙烯酯，聚酸酐，聚乙醇酸，胶原，聚原酸酯，以及聚乳酸。这类制剂的制备方法将是本领域技术人员显而易见的。所述的原料还可以通过从Alza公司以及Nova(诺华)制药有限公司处商购获得。脂质体悬浮液(包括以感染细胞为靶向的脂质体，带有针对病毒抗原的单克隆抗体)也可以被用作药物可接受性载体。这可以通过本领域技术人员已知的方法来制备，例如，利用美国专利No.4,522,811中描述的方法。
本发明所述的组合物以及制剂中还可以包括一种或者多种干燥剂。能够用于本发明中的适当的干燥剂是那些具有制药安全性的干燥剂，并且包括，例如，制药等级的硅胶、晶体钠、硅铝酸钾或者硅铝酸钙、胶体二氧化硅、无水硫酸钙以及类似物质。所述的干燥剂可以以大约1.0％至20.0％重量/重量的量存在，或者以大约2％至15％重量/重量的量存在(或者是存在于上述范围之内的任意值)。
同样可以考虑的是以快速分散的剂量形式存在的制剂，也被称为“闪释剂量”形式。具体的，在本发明的某些实施方式中配制出的组合物能够在一段短时间内释放它们的活性成分，例如，通常在少于大约5分钟的时间内，在另外一种实施方式中，少于大约90秒，在另外一种实施方式中，少于大约30秒并且在另外一种实施方式中，少于大约10秒或者15秒。这样的制剂适合经由各种途径施用给对象，例如通过插入体腔内的方式施用，或者将其施用至潮湿的身体表面或者开放的伤口处。
通常情况下，“闪释剂型”是一种口服施用的固体剂量形式，其能够在口中快速分散，并且因此不需要付出巨大的努力进行吞咽，并且允许所述化合物经由所述的口腔黏膜进行快速的摄取或者吸收。在一些实施方式中，适当的快速分散的剂量形式还可以进行其他的应用，包括进行伤口和其他身体损伤以及疾病状态的治疗，在这些情况中，通过外部提供的水分来进行药物的释放是不可能的。
“闪释剂型”的形式是本领域已知的，参见，例如，在美国专利No.5,578,322以及5,607,697中公开的泡腾剂型以及不可溶性微粒的快速释放涂层；美国专利No.4,642,903以及5,631,023中公开的冻干泡沫以及液体；美国专利No.4,855,326、5,380,473以及5,518,730中公开的熔融纺丝的药剂形式；美国专利No.6,471,992中公开的固体、自由形式的制作；美国专利No.5,587,172、5,616,344、6,277,406以及5,622,719中公开的以糖类为基础的载体基质以及液体粘合剂；以及本领域已知的其他形式。
本发明所述的化合物还可以被配制成“脉冲释放”的制剂，其中所述的化合物以一系列的释放形式(即，脉冲)从所述的药物组合物中释放出来。所述的化合物还可以被配制成“持续释放”的制剂，其中所述的化合物在一段延长的时间内从所述的药物组合物中连续释放出来，
同样可以考虑的制剂是，例如，液体制剂，包括环状或者非环状的胶囊化试剂或者溶剂化试剂，例如，环糊精，聚醚，或者多糖(例如，甲基纤维素)，或者在另外一种实施方式中，所述的试剂是带有通过烷基醚间隔基团与亲脂性腔(lipophilic cavity)分隔开的磺酸钠盐基团的聚阴离子β-环糊精衍生物、或者多糖。在一种实施方式中，所述的试剂是甲基纤维素。在另外一种实施方式中，所述的试剂是带有通过丁基醚间隔基团与亲脂性腔(lipophilic cavity)分隔开的磺酸钠盐的聚阴离子β-环糊精衍生物，例如，(CyDex，Overland，KS)。本领域技术人员能够评估出适合的试剂/被公开化合物的配制比例，通过下述方式：制备一种所述试剂的水溶液，例如，40％重量的溶液；制备连续的稀释液，例如制成20％，10％，5％，2.5％，0％的溶液(对照)，以及类似的稀释液；加入过量的(与所述的试剂所能溶解的剂量相比)所述被公开的化合物；在适当的条件下混合，例如，加热，搅拌，超声，以及类似条件；将得到的混合液进行离心或者过滤，从而获得透明的溶液；以及分析所述溶液中所述被公开化合物的浓度。
本发明中所引用的全部出版物以及专利文献在此引入作为参考，就如同这些出版物或者文献中的每一篇都被具体的并且分别的指明在此引入作为参考一般。对于出版物以及专利文献的引用并不意在认可其中任意一篇作为相关的现有技术，也不构成对其公开的内容或者日期的任何认可。本发明现在通过记载说明书的方式进行了描述，本领域技术人员将可以认识到，本发明可以以各种不同的实施方式进行实践，前述的说明书以及下述的实施例的目的在于描述，并不构成对后附的权利要求的限制。
实施例
实施例1：KX2-391的小规模合成
下面所描述的初步的合成过程在美国专利7,300,931中有所描述。这一方法能够用于小规模的反应中，例如，制备高达50克产物的反应。所述的合成方法能够用于，例如，制备研究等级的物质。
在下述的合成过程中，除非特别指明，所使用的试剂以及溶剂来自于商业供应者。质子以及碳核磁共振光谱是通过Bruker AC 300或者Bruker AV 300光谱仪获得的，质子核磁共振光谱是在300兆赫(MHz)下测得的，碳核磁共振光谱是在75兆赫(MHz)下测得的。光谱是以ppm(δ)为单位，而耦合常数J以赫兹(Hertz)为单位。四甲基硅烷作为内标被用于质子核磁共振光谱中，并且所述的溶剂峰作为参考峰被用于碳核磁共振光谱中。质谱以及LC-MS谱数据是通过Perkin Elmer Sciex 100大气压电离(APCI)质谱仪获得的。LC-MS分析是利用Luna C 8(2)柱(100x 4.6毫米，Phenomenex)，通过标准溶剂梯度方案(方法B)在254纳米下进行UV(紫外光)探测而获得的。薄层层析(TLC)是利用Analtech硅胶板完成的，并且利用紫外(UV)光、碘、或者20重量％的磷钼酸的乙醇溶液来显像的。高效液相色谱(HPLC)分析是利用Prevail C 18柱(53x 7毫米，Alltech)，通过标准溶剂梯度方案(方法A或者B)在254纳米下进行UV(紫外光)探测而获得的。
方法A：
A＝含有0.1体积/体积(v/v)三氟乙酸的水
B＝含有0.1体积/体积(v/v)三氟乙酸的乙腈
方法B：
A＝含有0.02体积/体积(v/v)三氟乙酸的水
B＝含有0.02体积/体积(v/v)三氟乙酸的乙腈
N-苯甲基-2-(5-溴吡啶-2-基)乙酰胺的合成：
向长颈瓶中装入5-(5-溴吡啶-2(1H)-基亚甲基)-2，2-二甲基-1，3-二烷-4，6-二酮(1.039克，3.46毫摩)，苯甲胺(0.50毫升，4.58毫摩)，以及甲苯(20毫升)。将所述的反应液在氮气条件下回流18小时，之后冷却并且放置于冷冻器中直至冷却。通过过滤收集得到的产物，并且利用己烷进行洗涤，从而获得许多亮白色的晶体(1.018克，96％)。
4-(2-(4-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二氧杂戊硼烷-2-基)-苯氧基)乙基)吗啉的合成：
在0℃下，向处于搅拌状态下的4-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二氧杂戊硼烷-2-基)-苯酚(2.55克，11.58毫摩)、2-吗啉-4-基乙醇(1.60毫升，1.73克，13.2毫摩)以及三苯基膦(3.64克，13.9毫摩)的二氯甲烷溶液(60毫升)中逐滴加入DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯)(2.82克，13.9毫摩)。将所述的反应液升温至室温并且搅拌过夜。18小时过后，向其中加入另外部分的三苯基膦(1.51克，5.8毫摩)，2-吗啉-4-基乙醇(0.70毫升，5.8毫摩)，以及DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯)(1.17克，5.8毫摩)。在室温下继续搅拌2小时之后，将所述的反应液浓缩并且利用快速色谱法(5％至25％的乙酸乙酯的三氯甲烷溶液)对得到的残余物进行纯化，从而提供以白色固体形式存在的所述产物(2.855克，74％)。
向一个带有隔膜闭合以及搅拌棒的10毫升反应试管中装入N-苯甲基-2-(5-溴吡啶-2-基)乙酰胺(123毫克，0.403毫摩)，4-(2-(4-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二氧杂戊硼烷-2-基)-苯氧基)乙基)吗啉(171毫克，0.513毫摩)，以及FibreCat1007(聚合物结合二(乙酸)二环己基苯基膦钯(II)，JohnsonMetthey，Inc.生产，可从Aldrich购得(目录号为#590231)(30毫克，0.015毫摩)。向其中加入乙醇(3毫升)，随后加入碳酸钾水溶液(0.60毫升，1.0M，0.60毫摩)。将所述的试管密封并且在微波条件下于150℃下加热10分钟。将所述的反应液冷却并且浓缩，以除去大部分的乙醇，并且随后利用10毫升的乙酸乙酯进行吸收，并且利用水以及饱和的氯化钠溶液进行连续的洗涤。将得到的有机层通过硫酸镁进行干燥，过滤并且浓缩成为一种白色固体。将这种白色固体与二乙醚一同进行粉碎，从而获得白色固体形式的KX2-391(137毫克，79％)：熔点135-137℃；1HNMR(300MHz，氘代氯仿)δ8.70(d，1H，J＝2.0Hz)，7.81(dd，1H，J＝2.4Hz，J＝8.0Hz)，7.65(br s，1H)，7.49(d，2H，J＝8.8Hz)，7.37-7.20(m，6H)，7.01(d，2H，J＝8.8Hz)，4.49(d，2H，J＝5.8Hz)，4.16(t，2H，J＝5.7Hz，3.82(s，2H)，3.78-3.72(m，4H)，2.84(t，2H，J＝5.7Hz)，2.62-2.58(m，4H)；HPLC(方法B)98.0％(AUC)，tR＝1.834分钟.；APCI MS m/z 432[M+H]+。
实施例2：KX2-391的中等规模的合成
在这个实施例中概括的合成过程可以用于进行中等规模的反应。方案1中表示的是至少50克KX2-391的二盐酸盐的批量制备过程。所述的线性合成过程由6个步骤组成，第七个步骤是其中一种试剂的制备方法，所述的试剂是6-氟吡啶-3-基硼酸(其也可以通过商业购买获得)。所述程序的总产率为35％，平均产率为83％，产率最低的步骤所具有的产率为68％。在所述的七个步骤中，仅有一个步骤需要使用色谱技术。下面列出的所述步骤是按照70克的规模进行的。
上述的第一个步骤是在4-溴苯酚(131克)与N-氯乙基吗啉(1表示的是其盐酸盐；141克)之间发生的威廉逊醚合成，其中使用碳酸钾粉末(3至3.5当量)作为碱，并且利用乙腈作为溶剂。将上述成分混合并且以高转化率(highconversion)(96.3-99.1％)搅拌回流过夜。利用二氯甲烷以及庚烷进行稀释之后，将所述反应混合液过滤并且蒸发，从而以本质上定量的产量(216克)获得所述的目标产物2。值得注意的是，利用类似的物质(例如，4-溴-3-氟苯酚)，所述的转化率(即使经过强烈的加热)也不会总保持这样的高度(例如，59.9-98.3％)。其中所述的烷基氯以及碳酸钾均优选从Aldrich处购买获得。如果持续的加热不能促使所述的反应完成，未反应的溴苯酚可以容易的被除去，通过将所述的粗反应混合液溶解于4份甲苯中的方法，利用4份15％的氢氧化钠水溶液将所述的苯酚洗脱出来。
在所述的第二个步骤(Suzuki耦合反应)需要使用的一种试剂是6-氟吡啶-3-基硼酸(4)。该试剂尽管可以商业购买获得，但也可以通过下述方法容易地制备：在低温下(＜-60℃)在TBME(叔丁基甲基醚)中利用5-溴-2-氟吡啶(3，102克)与正丁基锂(1.2当量)进行锂-溴交换，随后向其中加入三异丙基硼酸酯(1.65当量)的方法可以容易的制备出这种试剂。所述反应的两个过程都很简短，全部的反应时间(包括加入试剂的时间)为大约3小时。利用24％的氢氧化钠水溶液淬火，其还能提取所述的产物，将杂质留在有机层中。当水层被分离后，利用盐酸进行中和并且利用乙酸乙酯进行萃取。将得到的有机物进行干燥并且利用一定量的庚烷进行稀释后，浓缩使所述产物沉淀/结晶。过滤，从而获得相对高纯度(曲线下面积(AUC)96.4％)以及高产量(69克，79-90％；参见在试验例部分中记载的对产量评价的注释)的所述硼酸4，其不需要进一步的纯化即可被使用。
在上述线性程序中的第二个反应步骤(Suzuki耦合反应)是一个建立起来很简单的反应；将所有的试剂[2(111克)，碳酸钠水溶液，二甲醚(DME)，以及四(三苯基膦)钯(0.04当量)]全部装入反应用长颈瓶中，并且将所述的混合液加热回流；值得注意的是，将所述的反应混合液进行脱气以除去氧气。当所述的反应完成时(在7小时内)，所述的工作涉及从所述长颈瓶的侧面(不存在可见的水层)的有机盐中倾析(或者虹吸)出反应溶液，将所述的长颈瓶进行漂洗，并且干燥，从所述的合并的有机相中除去所述的溶剂。对来自于异丙醇/庚烷中的粗产物5进行结晶，从而获得与所述的粗产物相比具有改进的纯度的物质，但仍然需要色谱处理(硅胶与粗产物的比例约为8.5∶1)，从而获得具有足够纯度(＞98％)的物质，所述的产率为68％(79.5克)。使用纯净的5则不需要在所述的下一个步骤中使用色谱处理，所述的下一个步骤是乙腈对氟原子的取代。
利用乙腈对氟化物进行取代同样是一个简单的反应，并且对于所述粗产物进行一个简单的室温结晶能够以高产率以及高纯度提供纯净的6。所述的反应包括：在-10℃下利用六甲基二硅烷基钾KHMDS(8当量)/四氢呋喃(THF)从乙腈中(6.5当量)初始合成“烯醇化物”，随后立即加入氟化物5(79克)。上述反应非常迅速，并且在一小时之后利用饱和的盐水淬火。对所述有机相中的溶剂进行干燥以及蒸发之后，得到的粗混合物仅由所述的目标产物以及数量上少得多的极性产物两种组分构成，所述的极性产物来自于乙腈的外观自冷凝。将得到的粗混合物置于异丙醇/庚烷中进行涡流，并且将其放置过夜，这使得所述产物完全结晶，将其过滤并且进行洗涤，从而获得高产量(64克，76％)、高纯度(曲线下面积99.3％)的6。
6(64克)的甲醇分解反应是通过将其在40％的硫酸(甲醇溶液)中加热直至所述反应完毕(25小时)来完成的。随后将所述反应液冷却，与硫酸镁一同进行搅拌，从而将痕量的发生水解的产物(ArCH2-CO2Me)转回为产物，并且随后加入到冷却的碳酸钾水溶液中，同时在二氯甲烷中进行提取。干燥以及蒸发掉大部分所述的二氯甲烷(DCM)之后，加入5％的乙酸乙酯(庚烷溶液)并且进一步的浓缩，从而得到所述产物的结晶。对得到的固体进行过滤并且洗涤，从而获得高产率(82％)、高纯度(曲线下面积98.9％)的7，从上述的母液中获得了另外的高纯度的产物(4克)，使得总产量达到61.7克(87％)。
上述的酰胺化步骤还包括：向所述的反应容器中装入所述成分(7(61克)，苯甲胺(3当量)，以及高度沸腾的苯甲醚)，随后加热回流直至所述的反应完成。对所述反应混合液进行冷却使所述的目标化合物完全结晶，其中所述的化合物具有高纯度(98.9％)以及高产率(81％)。
上述的最后一个步骤是所述目标化合物的二盐酸盐的形成。为了确保在两个碱性位点处发生完全的质子化作用，所述的反应是在无水乙醇中进行的，所述的无水乙醇能够自由地(freely)溶解所述的二盐酸盐。在被蒸发至接近干燥后，利用乙醇两次对所述反应混合液进行“追踪(chased)”，从而去除过量的盐酸。将得到的粘性油溶解于乙醇(2份)中并且随后在快速搅拌的状态下将其加入大体积(20份)的乙酸乙酯(EtOAc)中。过滤，利用乙酸乙酯(不含庚烷)进行洗涤，并且真空干燥，从而获得以乳白色粉末形式存在的KX2-391的二盐酸盐。共计获得68克(产率97％)高纯度(曲线下面积99.6％)的最终产品的盐，其中含有痕量的乙酸乙酯(4.8％重量/重量)，乙醇(0.3％重量/重量)，以及庚烷(0.6％重量/重量；来自于在真空干燥之前利用庚烷的最后一次洗涤)。将这种盐在热乙醇/乙酸乙酯中进行结晶(代替上文中描述的沉淀方法)，从而获得晶体珠，所述的晶体珠包埋有极低水平的溶剂(仅仅0.26％重量/重量的乙酸乙酯以及0.45％重量/重量的乙醇)并且能够自由流动。
试验例
4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉(2)的制备：
在一个5升的三颈圆底长颈瓶中装入1(140.7克，0.756摩)，4-溴苯酚(130.6克，0.755摩)，无水碳酸钾粉末(367.6克，2.66摩，3.5当量)，以及乙腈(1.3升)，其中所述的三颈圆底长颈瓶上装配有机械搅拌器，带有适配器的温度计，冷凝器，以及氮气入口(在冷凝器的顶端)。将所述的混合液在80℃下剧烈搅拌(刀刃接触到长颈瓶的底部)(过夜)，随后利用二氯甲烷(DCM)(500毫升)以及庚烷(200毫升)进行稀释，并且通过硅藻土进行过滤。蒸发至干燥(旋转蒸发，随后高真空蒸发)，从而获得淡黄色油形式的2(216.00克，产率100％，曲线下面积96.3％，含有3.7％的未反应的溴苯酚)。所述物质无需进行进一步的纯化即可被顺利的使用。
1H NMR(氘代氯仿)δ2.57(t，4H)，2.79(t，2H)，3.73(t，4H)，4.08(t，2H)，6.78(d，2H)，7.37(d，2H).MS(来自于LC/MS)：m/z 287.1[M+1]。
所述的溴苯酚能够容易的被去除，这一事实可以利用一个2克的样本来证明，首先将所述的样本溶解于甲苯(8克)中，并且利用8克15％的氢氧化钠水溶液进行洗涤；液相色谱分析表明在所述的回收产物(1.97克，回收率98.5％)中不存在未反应的溴苯酚的痕迹。
6-氟吡啶-3-基硼酸(4)的制备：
向处于搅拌状态下的冷却(干冰-丙酮浴)的无水[TBME](叔丁基甲基醚)(620毫升，在一个3升的三颈圆底长颈瓶中，所述的长颈瓶装配有机械搅拌器，带有适配器的温度探针，以及氮气入口)中加入(经由注射器)2M的正丁基锂(BuLi)(352毫升，0.704摩，1.2当量)。在13分钟的时间内，向这种快速搅拌状态下的冰冷的(＜-75℃)的混合液中添加3(102.2克，0.581摩)的无水TBME(叔丁基甲基醚)溶液(100毫升)，在此期间所述的内部温度升至-62℃。将所述的反应液再搅拌45分钟(所述温度保持在-62℃到-80℃之间)，随后快速并且按顺序加入四份三异丙基硼酸酯(共计180克，0.957摩，1.65当量)。在上述加入过程的最后，所述的内部温度上升至-33℃。在上述冰浴中再搅拌45分钟后(内部温度由-33℃下降至-65℃)，除去所述的冰浴并且所述被搅拌的混合液凭借自身在50分钟的时间内上升至-22℃。在15分钟的时间内将其升温至6℃(经由水浴)，将所述被搅拌的反应混合液放置于冰水浴中并且随后在氮气下利用冰冷的氢氧化钠(160克)水溶液(500毫升)淬火。当上述加入过程完成后，所述的内部温度为20℃。将所述混合液在室温下搅拌1.5小时。除去得到的水层，利用大约350毫升的浓盐酸中和至pH为7，并且之后利用乙酸乙酯(3x 1升)进行提取。由于现在所述的pH为8-9，使用大约15毫升的浓盐酸将所述水层的pH调节至7，并且再次利用乙酸乙酯(2x 1升)进行提取。将所述合并的乙酸乙酯提取物进行干燥(硫酸钠)，过滤，并且浓缩至达到大约150毫升的体积。对浓缩物进行涡流(swirling)处理，同时分次向其中加入庚烷(总体积300毫升)，得到所述产物的沉淀/结晶。过滤，利用庚烷(100毫升，300毫升，之后再用300毫升)对所述的固体进行洗涤，并且空气干燥，从而获得灰白色固体形式的所述标题产物(68.6克，产率79-90％*；液相色谱纯度96.4％，核磁共振显示其具有5.5％重量/重量估算值的庚烷)，所述产物无需进行进一步的纯化即可被顺利的使用。液相色谱/质谱(LC/MS)显示它是下述两种物质的混合物，所述的较高分子量的物质的强度占主要部分(*注释：当假定硼酸是唯一的组分时，反应的产率为79％；而当假定环硼酸酯是唯一的组分时，反应的产率为90％)：
1H NMR(氘代氯仿)δ7.14(dd，1H)，8.27(ddd，1H)，8.39(br s，2H，2OH)，8.54(fine d，1).MS(来自于LC/MS)：m/z143.0[M+1；对于硼酸而言]以及370.0[M+1；对于上述的环硼酸酯而言]。
4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的制备：
在一个2升的三颈圆底长颈瓶中装入2(110.7克，0.387摩)，4(71.05克，0.477摩，1.23当量)以及DME(二甲醚)(700毫升)，其中所述的三颈圆底长颈瓶上装配有机械搅拌器，带有适配器的温度计，冷凝器，以及氮气入口(在冷凝器的顶端)。将得到的被搅拌的溶液脱气，所述的脱气是通过下述方式进行的：在5分钟的时间内向所述被搅拌的溶液中通入氮气的快速气体流，之后向其中加入经过脱气的碳酸钠(121.06克，1.142摩，3当量)的水溶液(250毫升)以及固体四(三苯基膦)钯(19.8克，0.044当量)。在最后的加入步骤完成之后，立即利用氮气对所述反应混合液上面的顶部空间进行吹洗，并且随后在80-85℃下(内部温度)将所述混合液搅拌7小时，之后冷却至室温。由于缺乏水层，因而将所述的上清液倒出，留下所述的无机盐(含有吸收的水分)。利用50％的二氯甲烷/乙酸乙酯(2x 250毫升)对装有所述无机盐的反应长颈瓶进行洗涤，将所述洗涤液加入到被倒出的上清液中。将这些合并的有机物进行干燥(硫酸钠)，过滤，并且蒸发至干燥，直至获得深褐色的油(148克)。向所述的油中加入150克50％的庚烷/异丙醇(IPA)并且在涡流处理以及冷却(经由冰水浴)之后，开始结晶。另外加入庚烷(50克)并且将得到的固体过滤，洗涤，并且空气干燥，从而获得48克淡褐色的固体。将所述的滤液蒸发至干燥之后，将得到的混合液在100毫升50％的庚烷/异丙醇(IPA)中进行涡流处理，之后再加入庚烷(大约100毫升)，密闭(stoppering)并且放置于冷却器中进行结晶。将得到的固体过滤，利用庚烷进行洗涤，并且空气干燥，从而获得61克的粘性固体。对得到的滤液进行蒸发，得到一种油(34克)，其中含有显著减少的极性杂志，包括三苯基氧膦(Ph3P＝O)，因而其被2N的盐酸(240毫升)以及乙酸乙酯(220毫升)进行了分配。除去所述底部的水层，并且随后与乙酸乙酯一同进行搅拌，同时利用碳酸钾将其中和至pH达到7-8。将所述的乙酸乙酯层进行干燥，过滤，并且蒸发至干燥(22克)。通过装于DCM中的硅胶(1.1千克)层析出48克、61克、22克三部分。利用二氯甲烷(400毫升)、50％的二氯甲烷/乙酸乙酯(5升)、以及随后的含有增加量的甲醇/三乙胺(开始时利用1.5％甲醇/1％三乙胺，结束时利用5％甲醇/3％三乙胺)的50％的二氯甲烷/乙酸乙酯(8升)进行洗脱，得到77.68克的粘性油(纯度98.0％)，立刻将其在庚烷(300毫升)中进行涡流处理以进行结晶。过滤，利用庚烷进行洗涤并且空气干燥，从而获得75.55克(曲线下面积98.7％)的固体5。按照对于上述34克样本所进行的处理，对先层析出的含有三苯基氧膦的馏分进行清洗，之后蒸发结晶，从而获得另外的纯的5(共计3.9克，曲线下面积98.6-99.3％)。5的总产量为79.5克(68％)。
1H NMR(氘代氯仿)δ2.59(t，4H)，2.84(t，2H)，3.75(t，4H)，4.16(t，2H)，6.97(dd，1H)，7.01(d，2H)，7.46(d，2H)，7.92(ddd，1H)，8.37(fine d，1H).MS(来自于LC/MS)：m/z303.2[M+1]。
2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙腈(6)的制备：
在一个3升的三颈圆底长颈瓶中装配机械搅拌器，温度计以及适配器，额外的漏斗，以及氮气入口(位于额外的漏斗的顶部，经由起泡器提供正压力)。当一股快速的氮气流经由所述的起泡器流入时，瓶塞(stopper)被移开并且所述的长颈瓶中被装入六甲基二硅烷基钾(KHMDS)(415.8克，2.08摩)并随后被装入无水四氢呋喃(THF)(1升)。在22分钟的时间内，向处于搅拌状态下的冷却的(冰/甲醇浴，溶液的内部温度为-8℃)六甲基二硅烷基钾/四氢呋喃溶液中逐滴加入乙腈(70克)的四氢呋喃溶液(110毫升)，并且之后立即以相对快的速度(4分钟)加入5(79.06克，0.262摩)的四氢呋喃溶液(400毫升)，在此之后所述的反应混合液的内部温度已经达到10℃。在持续的冷却(1小时)之后，所述的内部温度为-6℃并且通过薄层层析分析(TLC)显示所述反应完成。再经过30分钟之后(内部温度为-3℃)，利用饱和的盐水(1升)对所述的反应混合液进行淬火并且利用乙酸乙酯(500毫升)进行稀释。除去所述的水层之后，将得到的有机溶液进行干燥(硫酸钠)，过滤，并且蒸发至干燥(至成为一种油)，之后将其完全溶解于IPA(150毫升)，利用庚烷(300毫升)进行稀释，加入晶种(通过将大约100毫克的粗油溶解于IPA(大约150毫克)中并且利用庚烷(大约2.5毫升)对其进行稀释的方法来制备)，并且将其静置过夜。在通过搅拌打碎所述的结晶固体之后，将所述固体过滤，利用250毫升2∶1的庚烷/异丙醇进行洗涤，并且随后利用庚烷进行多次洗涤，并进行空气干燥，从而获得64.38克(产率76％)的棕褐色结晶固体形式的标题产物6(液相色谱纯度99.3％)。从所述的滤液中另外获得5.88克纯度较低的物质。
1H NMR(氘代氯仿)δ2.59(t，4H)，2.84(t，2H)，3.74(t，4H)，3.97(s，2H)，4.17(t，2H)，7.02(d，2H)，7.46(d，1H)，7.51(d，2H)，7.87(dd，1H)，8.77(fine d，1H).MS(来自于LC/MS)：m/z 324.4[M+1]。
2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酸甲酯(7)的制备：
在一个2升的单颈圆底长颈瓶中装入6(64.00克，0.198摩)以及甲醇(360克)，随后缓慢地、小心地、并且逐滴地加入硫酸(240克)并且将得到的均一的溶液与3.5％的ArCH2CO2H一同搅拌回流(115℃油浴)直至所述的反应完成(25小时，含有0.8％的未反应的起始原料)。经过短暂的冷却之后，向其中加入硫酸镁(75克)并且将所述混合液进行涡流(swirled)处理，再静置45分钟(其组成现在为96.3％的产物，0.8％的未反应的起始原料，以及2.5％的ArCH2CO2H)。之后将所述的反应混合物缓慢地加入到快速搅拌并冷却过(冰水浴)的DCM(2升)与碳酸钾(450克)的水溶液(600毫升)的混合液中。将得到的乳化液静置过夜。将所述有机溶液的透明部分吸出，并且利用水以及二氯甲烷对剩余的部分进行反复的处理，将得到的透明的有机层与被吸出的最初部分进行混合。将所述合并的有机层进行干燥(硫酸钠)，过滤，并且浓缩至达到大约1.2升的体积，之后加入300毫升5％的乙酸乙酯(的庚烷溶液)并随后加入庚烷(300毫升)，将所述混合液再次进行浓缩(在加热条件下进行旋转蒸发)以除去所述的二氯甲烷。在此时加入15毫升乙酸乙酯并且将所述的热混合物进行涡流处理直至开始结晶，持续进行涡流处理直至所述的结晶接近完成，并且之后将其放置并且冷却至室温，以完成所述的结晶。随后将得到的固体进行过滤，利用300毫升5％的乙酸乙酯(的庚烷溶液)以及庚烷(100毫升)进行洗涤，并且之后进行充分的空气干燥，从而获得57.74克(产率82％)淡黄色固体形式的7(曲线下面积98.9％)。在所述的滤液中另外获得了3.94克纯净的产物(曲线下面积97.9％)(总产率87％)。
1H NMR(氘代氯仿)δ2.60(t，4H)，2.84(t，2H)，3.74(overlapping t and s，6H)，3.89(s，2H)，4.17(t，2H)，7.01(d，2H)，7.34(d，1H)，7.49(d，2H)，7.80(dd，1H)，8.74(fine d，1H).MS(来自于LC/MS)：m/z 357.4[M+1]。
N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(KX2-391游离碱)的制备：
在一个1升的单颈圆底长颈瓶中装入7(61.4克，0.172摩)，苯甲胺(55.6克，0.519摩，3当量)，以及无水苯甲醚(300克)，并且随后搅拌回流直至反应基本上完成(23小时，165℃油浴温度；内部温度为147℃)，并且之后冷却至接近室温。利用甲苯(1毫升)对所述反应混合液的一部分(1毫升)进行稀释，致使该部分的结晶完成。随后将该晶种加入到所述的反应混合液中并且进行静置直至全部的反应混合液结晶成一块。加入甲苯(150毫升)并且对所述混合液进行涡流处理以弄碎所述的固体。向其中加入庚烷/甲苯(1∶1，100毫升)并且使得所述的固体混合物进一步弄碎。最终，加入甲苯(50毫升，随后是25毫升)并且使得所述的混合液进行更进一步弄碎，在过滤所述固体之前将其再静置30分钟。对所述固体进行过滤，利用2∶1的甲苯/庚烷(300毫升)、1∶2的甲苯/庚烷(300毫升)、庚烷(2x 300毫升)进行洗涤，并且随后进行干燥(空气干燥，最后高真空干燥)，获得60.16克(产率81％)白色固体形式的标题产物(曲线下面积≥98.9％)。从所述的母液中另外获得2.5克纯度较低的(97.4％)物质。
1H NMR(氘代氯仿)δ2.60(t，4H)，2.83(t，2H)，3.74(t，4H)，3.82(s，2H)，4.18(t，2H)，4.49(d，2H)，7.01(d，2H)，7.2-7.35(m，6H)，7.49(d，2H)，7.64(br t，1H)，.7.81(dd，1H)，8.69(fine d，1H).MS(来自于LC/MS)：m/z 432.5[M+1]。
4-(2-(4-(6-(2-(苯甲基氨基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)苯氧基)乙基)-吗啉-4-氯化物(KX2-391，二盐酸盐)的制备：
向处于搅拌状态下的KX2-391(游离碱，60.00克)的无水乙醇悬浮液(600毫升)中加入170毫升2.5M的盐酸(的乙醇溶液)，加入25毫升乙醇来冲洗所述长颈瓶的侧壁。将得到的均一的溶液在室温下进行搅拌(20分钟)并且之后蒸发至接近干燥(至达到发泡状态)。利用乙醇(2x 150毫升)进行追踪(chasing with)之后，再次利用乙醇(150毫升)将得到的残余物进行吸收(take up)，并且在此之后缓慢加入庚烷直至所述的混合液达到饱和(保持浑浊状态需要33毫升)。放置过夜之后，形成了两个层。加入另外的庚烷(250毫升)之后仍然不能诱发结晶作用，因而在所述的混合物质地均一的时候将所述反应混合物浓缩至达到大约200毫升的体积。将这一浓稠的均一溶液逐滴加入到非常快速搅拌下(机械性)的乙酸乙酯(2升)之中。当所述的加入过程完成之后，利用25毫升的乙醇对所述初始的长颈瓶进行漂洗并且将另外一个漏斗加入到上述快速搅拌的混合物中。将快速搅拌再持续进行大约1小时，之后将所述的混合物过滤并且利用乙酸乙酯(300毫升)以及随后的庚烷对得到的固体(有部分粘性)进行洗涤。当上述利用庚烷的洗涤开始的时候，所述的固体变得非常有粘性。对所述的玻璃布氏漏斗及其内含物进行覆盖(纸巾/橡皮圈)并且迅速将其置于真空炉中。在大约45℃下真空处理过夜之后，在氮气下对所述的真空进行释放，并且将装有所述产物(泡沫状固体)的布氏漏斗立即放回一个拉链密封袋中并且随后，在氮气下(气密隔离保护罩)，将其转移至瓶中，并且所述的泡沫状固体被弄碎(利用抹刀)成为粉末。在高真空状态下(大约45℃)再处理一夜，导致仅仅1.3克的额外的重量损失。高真空状态(大约45℃)处理第三夜之后基本上达到了恒重，其中仅仅损失了0.2克的重量。所述物质的最终重量为68.05克(产率97％)，含有0.29当量(4.8％重量/重量)的乙酸乙酯，0.035当量(0.3％重量/重量)的乙醇，以及0.03当量(0.6％重量/重量)的庚烷。其纯度为99.6％。
1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ3.1-3.3(m，2H)，3.45-3.65(m，4H)，3.8-4.0(m，4H)，4.11(s，2H)，4.32(d，2H)，4.57(t，2H)，7.19(d，2H)，7.2-7.4(m，5H)，7.88(d，2H)，7.93(d，1H)，8.68(dd，1H)，8.99(br t，1H)，9.10(fine d，1H)，11.8(br s，1H).MS(来自于LC/MS)：m/z 432.5[游离碱的M+1]。
元素分析(针对C26H29N3O3·2HCl·0.035EtOH·0.029EtOAc·0.03庚烷·0.8H2O)：
a.计算值(％)：C，60.03；H，6.54；N，7.65；Cl，12.91
b.测量值(％)：C，59.85/59.97；H，6.54/6.47；N，7.67/7.67；Cl，13.10/13.24
分子量(FW)的计算值：534.63(不考虑其中的0.8H2O，其可能在处理这种非常吸湿的粉末的过程中出现，因为1HNMR显示没有水的迹象)。
对这种物质中的氯乙烷的水平进行测定，并且发现其为98ppm。同样对所述的样本进行分析，发现其中含有5800ppm的庚烷。
对这一样本的另外一部分进行分析，得到下述的结果：曲线下面积(AUC)为99.6％，含有1640ppm的乙醇，41480ppm的乙酸乙酯，5600ppm的庚烷，没有检测到苯甲醚，以及120ppm的氯乙烷。
还利用上述干燥的盐进行了所述盐的重结晶的步骤。这一步骤仅仅能够在所述的高纯度的粗盐(含有残留的乙醇)中取得很好的效果，其中所述的高纯度的粗盐是通过浓缩所述的形成盐酸盐的反应混合液而得到的：
将所述的盐(575毫克)溶解于其两倍重量的纯乙醇(1.157克)中并且之后在氮气环境下加热。向这一热溶液中(搅拌下的)加入1.6克25％的乙醇(的乙酸乙酯溶液)，之后加入乙酸乙酯(0.25毫升)使得有浑浊物质保留。将上述浑浊的热溶液冷却至室温，在这段时间内结晶作用发生了。当结晶反应完成后(2小时)，将得到的结晶固体进行过滤，利用无水乙酸乙酯(大约40毫升)进行洗涤，并且真空干燥，从而获得424毫克以自由流动的固体形式存在的(微小的珠子，曲线下面积99.8％)KX2-391的二盐酸盐，其中仅含有0.05当量(0.45％重量/重量)的乙醇以及0.015当量(0.26％重量/重量)的乙酸乙酯。使用异丙醇/乙酸乙酯能够获得些微升高的回收率(从586毫克中回收到460毫克)，但是其溶剂截留的水平升高了[0.085当量(1.0％重量/重量)的异丙醇以及0.023当量(0.4％重量/重量)的乙酸乙酯]。
实施例3：KX2-391的大规模合成
这一实施例描述的是以至少100克的规模制备KX2-391.2HCl的合成途径的实施。这一过程可以被用于，例如生产千克量级的物质。最终的途径在方案1中有描述。所述的途径具有六个步骤并且包括醚的形成，Suzuki耦合反应，氟的取代，以及酸催化的溶剂化作用。
这一过程是以105克的示例性批量规模进行测试的。
方案2.KX2-391.2HCl的制备
步骤1：4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉(2)的制备
对于实施例2中所描述的过程中的醚合成步骤进行了几处修饰。当在乙腈溶剂中进行所述的醚合成时，所述的反应混合液是一种非常浓稠的浆液并且难以进行搅拌。因此，将所述的溶剂改为二甲基甲酰胺(DMF)，它能够生成一种更加易于处理的稀的白色浆液。另外可以被确定的是，严格的干燥环境不是必要的。例如，0.3体积的去离子(DI)水对于所述反应的纯度或者产量而言不存在有害的影响。由于所述的反应溶剂变为二甲基甲酰胺(DMF)，所述的操作(work up)也进行了修饰。现在所述的经过修饰的操作涉及利用去离子水进行稀释并且利用MTBE(甲基叔丁基醚)进行提取。利用氢氧化钠水溶液进行一次碱性的洗涤同样是很便利的，用以除去任何残留的4-溴苯酚。
所述的醚合成被扩大规模，将3435克4-(3-氯丙基)吗啉盐酸盐转化成4800克4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉(2)。通过高效液相色谱法(HPLC)测定的纯度为99.9％(AUC％)。
步骤2：6-氟吡啶-3-基硼酸(4)的制备
通过改变试剂的加入顺序以及溶剂，在几种方式上对于所述硼酸4的合成进行了改进。所述的起始步骤要求向MTBE(甲基叔丁基醚)的冰冷溶液中加入正丁基锂的己烷溶液。之后将所述的阴离子溶液冷却至低于-75℃并且向其中缓慢的加入第二种溶液，即5-溴-2-氟吡啶的MTBE(甲基叔丁基醚)溶液。以快速的顺序向上述得到的混合液中分批加入三异丙基硼酸酯。这一过程没有被修正以扩大规模，因为所述的三异丙基硼酸酯是被快速加入的。通过依照已经公开的方法(Li等人，2002，J.Org.Chem.，67，5394-5397)，使得这一方法的发展已经具备优先级。其中一项改进是在甲苯与四氢呋喃的溶液中预先混合5-溴-2-氟吡啶以及三异丙基硼酸酯。将所述混合液冷却至-50℃至-35℃，并且随后向其中加入正丁基锂溶液，从而形成所述的芳基阴离子，之后利用三异丙基硼酸酯在原位对其进行淬火，从而生成所述的芳基硼酸。这一方法不仅仅控制了放热反应，其也可以在比如前所述的低于-75℃更高的温度下进行。已经认为如果在所述的反应过程中获得了较高的温度，可以观察到从溴丁烷中除去氢溴酸的竞争性反应。不去探究正丁基锂或者所述的芳基阴离子是否构成所述副反应中的碱。通过加入氢氧化钠水溶液的提取来替代仅仅使用盐酸水溶液的提取，对所述的操作进行修饰。将得到的含水提取物进行小心的合并，其仅仅需要进行微小的pH调整。
所述6-氟吡啶-3-基硼酸(4)的制备过程进行得很顺利，分三个批次转化了5050克5-溴-2-氟吡啶，从而获得3515克硼酸4。详细情况可以参看表3。
步骤3：4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的制备
在进行小规模的钯耦合的反应中，能够注意到所述的固体形成于所述反应器的玻璃壁上。由于所述的固体具有一种绝缘体的作用，将这一反应的规模扩大可能导致所述反应器过热。采取两种途径来防止这种过热。将向所述反应中加入的水的量由2.3体积增加至4.0体积，并且当所述的反应以千克级的规模进行时，利用在所述的反应器与所述的加热罩之间的另一个热电偶进行控制，当达到极限温度时，其用来控制所述的热量。所述的耦合反应分两批完成，这样一来，将总量5269克的4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉转化成5735克的4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉，并且通过高效液相色谱(HPLC)分析得到的两个批次的纯度为94.9以及90.3(曲线下面积％)。
步骤3a：4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的纯化
利用硅胶色谱法对来自于上述的钯耦合反应的粗产物进行纯化。将所述的物质(5735克)在七个柱中进行纯化，从而获得淡褐色固体形式的化合物5(4220克，通过高效液相色谱分析的曲线下面积为97.6％)，并且所述的钯水平为0.2重量％。在具有毒性的批量中，在经过纯化的化合物5状态中观察到7ppm以及11ppm水平的钯。
步骤4：2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙腈(6)的制备
为了进行一种规模扩大的氟取代反应，进行了几处修饰。所述的取代反应中需要六甲基二硅烷基钾(KHMDS)，而通过商业购买不能获得它的四氢呋喃溶液。因此，所述的反应需要从所述固体制备上述的混合液。这种操作对于大规模的反应而言是不期望的。对三种不同的阳离子(六甲基二硅烷基锂，六甲基二硅烷基钾，以及六甲基二硅烷基钠)进行评价。六甲基二硅烷基锂(LiHMDS)产生一种深褐色的反应混合物，其中观察不到任何的转化。六甲基二硅烷基钠(NaHMDS)的表现与六甲基二硅烷基钾相当。六甲基二硅烷基钠的四氢呋喃溶液是容易获得的。
在较小规模的反应中使用大量过量的碱(六甲基二硅烷基钾，8当量)以及亲核试剂(乙腈，6.5当量)，这与记载有类似体系的文献(2当量的碱以及1当量的亲核试剂：参见Klapars等人，2005，J.Org.Chem《有机化学杂志》70，10186-10189)中所报道的不一致。按比例的减少六甲基二硅烷基钠以及乙腈的当量导致了不完全的转化。然而，已经注意到，当加入额外当量的碱以及乙腈时，所述的反应可以被完成。在最初的实施中，将化合物5的四氢呋喃溶液快速地加入到乙腈和碱组成的溶液中。大规模的快速加入不被认为是可以接受的或者合乎情理的。小规模的延长所述的放置时间以及加入时间，用来模拟大规模所需要的放置时间以及加入时间。加入时间以及放置时间的延长严重妨碍了所述的转化，分别为43％至5％。在迅速加入5溶液之前将所述的碱以及乙腈组成的溶液放置2小时，带来了不良的转化率(5％)。所述的碱与乙腈不能相容并且导致所述试剂的降解。因此，对试剂的添加顺序做出改变，使得所述的碱与化合物5进行预先混合并且向其中缓慢的加入所述的乙腈。利用这一新的程序所进行的反应使得转化率始终保持在90以上(in the high 90s)。可以顺利使用的六甲基二硅烷基钠以及乙腈的最小当量分别为5当量以及4当量。所述的碱以及乙腈的当量达到了40％的降低。
步骤5：2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酸甲酯(7)的制备
腈6的酸催化甲醇分解反应通常生成小量的羧酸7a。用以除去作为7a的可能来源的有益的水的一种方法是向甲醇以及浓硫酸的反应混合物中加入发烟硫酸。浓硫酸通常是以95-98％的溶液来提供的。所述的发烟硫酸除去了硫酸中所含有的2-5％的水。使用浓硫酸以及发烟硫酸的混合物始终能够提供低于6％的羧酸7a副产物，其可以通过水化操作(aqueous work up)被容易的除去。
在含水条件下对所述反应进行淬火需要谨慎注意避免生成羧酸7a。通过分别在甲醇以及水中搅拌18小时，在pH为1、pH为9以及pH为13-14的条件下测定所述酯7的稳定性。18小时过后，在pH为1时具有19％的7a转化率，在pH为9时具有37％的7a转化率，而在pH为13-14时具有100％的7a转化率。通过加入饱和碳酸氢钠以及二氯甲烷的搅拌混合液将所述的反应淬火，同时确保所述的温度低于20℃。
值得注意的一点是，在一个小规模的反应中，当甲醇被不注意地蒸发掉的时候，LC/MS数据表明产生了新的杂质酰胺7b。通过腈类制备酰胺的一种先例性的方法是利用浓硫酸进行处理(Sarel，S.，J.Am.Chem.Soc，1956，79，5416)。
步骤6：KX2-391的制备
在上述中等规模的反应中所描述的酰胺的生成方法能够进行很好的大规模的应用。将甲基酯7以及苯甲胺(3当量)溶解于苯甲醚中并且在150℃下加热将近2天。然而，在所述的中等规模的方法中使用到的产物的分离可能导致产物形成固体块(solid mass)。为了避免这样的结果，在加入所述的抗溶剂化试剂之前，不将所述的反应混合液冷却至室温，而是将其冷却至45-50℃。在所述最初的方法中利用甲苯以及庚烷作为抗溶剂化试剂。单独使用正庚烷提供了足够的纯度以及增加的产率，产率从81％增加至90％。进一步的，庚烷的单一异构体的使用对于所述残留溶剂的充分定量而言是必要的。
步骤7：KX2-391.2HCl的制备
由于KX2-391.2HCl所具有的吸湿性质，为了能够可重复性地制备上述二盐酸盐，需要进行额外的预防措施。通过向无水乙醇中加入乙酰氯，生成盐酸的无水乙醇溶液。随后，在氮气环境下利用这一溶液对所述的KX2-391游离碱进行处理。随后进行浓缩以及共沸干燥。然而，不能可重复性地获得KX2-391.2HCl的结晶。使用了几种不同的溶剂，例如，IPA(异丙醇)，乙酸乙酯/异丙醇，乙醇，丙醇以及丁醇(表1)。表1中列出的试验是为了探索不同的结晶条件以及沉淀条件所作的最初的尝试。生产出上述被报道的两个类别(lots)(E&F)的最终试验条件是根据这一信息选择出的。
表1：KX2-391.2HCl的结晶研究
通过将KX2-391.2HCl的乙醇浓溶液反向添加到大体积的快速搅拌状态下的乙酸乙酯中的方式，成功的完成了沉淀过程。在所述的示例性的批次中实行了这样的沉淀方法，导致生成了两种截然不同的固体类型。将所述的两种截然不同的固体类型是物理分离，并且分别对其进行过滤。一种相对不稠密的棕褐色固体(lot 02B P111E，74克，通过高效液相色谱法测得的曲线下面积为99.1％)首先被过滤出来，之后是较稠密的颜色更深的固体(lot 02BP 111F，43克，通过高效液相色谱法测得的曲线下面积为99.1％)。在利用真空炉进行干燥之后，并且在将上述两种固体进行混合之前，各保留一份样本用于分析。所感兴趣的数据是差式扫描量热(DSC，附图1以及附图2)以及X-射线粉末衍射(XRPD，附图3以及附图4)。上述两个样本的高效液相色谱(HPLC)数值相当而所述的差式扫描量热(DSC)以及X-射线粉末衍射(XRPD)存在差异。
上述两种高效液相色谱标本均具有高于99.0％的纯度(面积％)，所述的lot 02BP 111E在大约198℃下表现出单一的放热现象，而所述的lot 02BP 111F在117℃以及189℃下表现出两个放热现象。上述两种样本的X-射线粉末衍射数据也存在差异，所述的lot 02BP 111E样本似乎是晶体而所述的lot 02BP 111F看起来是无定形的。上述的高效液相色谱数据、X-射线粉末衍射数据以及差式扫描量热数据证明了上述两个样本属于同一种物质的不同形式。
将上述两个类别的KX2-391.2HCl(lot 02BP 111E以及lot 02B P111F)进行干混，生成了一种新的类别的KX2-391.2HCl(lot 02BP 111G)。KX2-391.2HCl(lot 02BP 111G)含有170ppm的氯乙烷。
试验例
所使用的试剂以及溶剂来自于商业供应者。通过高效液相色谱(HPLC)、气相色谱/质谱(GC/MS)、或者核磁共振氢谱(1H NMR)对所述的反应过程进行监测。薄层层析(TLC)是利用Analtech硅胶板完成的，并且利用紫外光(254纳米)进行显像。高效液相色谱(HPLC)是利用Agilent 1100系列仪器完成的。质子以及碳核磁共振光谱是通过Bruker AV 300获得的，质子核磁共振光谱是在300兆赫(MHz)下测得的，碳核磁共振光谱是在75兆赫(MHz)下测得的。所述的溶剂峰作为参考峰被用于质子核磁共振光谱以及碳核磁共振光谱中。
4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉(2)的制备
在一个装配有回流冷凝器以及温度探针的50升的夹套反应器中装入4-(3-氯丙基)吗啉(2.44千克，0.54摩)，4-溴苯酚(2.27千克，0.54摩，1.0当量)，粉末碳酸钾(6.331千克，1.88摩，3.50当量)以及二甲基甲酰胺(12.2升)并且进行搅拌。之后将所述反应混合物加热至60-65℃并且搅拌过夜。17.5小时之后，将所述的反应混合物冷却至20-25℃。将所述的反应混合液装入一个装配有用于操作的底部阀的另一反应器中。将温度保持在20-30℃的同时，向所述反应器中装入DI水(48.7升)。进行相分离。利用MTBE(甲基叔丁基醚)(3x 24.4升)对所述的水层进行提取。向得到的合并的有机层中加入DL水(18.3升)并随后加入6M的氢氧化钠(18.2升)。将所述混合物搅拌2-5分钟并且进行相分离。利用水(24.4升)以及盐水(24.4升)对得到的有机相进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥，过滤，并且浓缩，从而获得3370克的黄色油(粗产率89％，通过高效液相色谱测定的曲线下面积为99.4％)。
6-氟吡啶-3-基硼酸(4)的制备
在一个72升的反应器上装配回流冷凝器，以及温度探针。向所述反应器中装入5-溴-2-氟吡啶(1.17升，0.568摩)，甲苯(18.2升)，以及三异丙基硼酸酯(3.13升，0.68摩，1.2当量)并且进行搅拌。向所述反应器中加入四氢呋喃(4.4升)并且将所述的反应混合液冷却至-35℃至-50℃。将温度保持在-35℃至-45℃的同时，向所述反应器中小心的加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，5.44升，0.68摩，1.2当量)。5小时过后，确认反应完成后将所述反应混合液升温至-15℃至-20℃。将温度保持在-15℃至0℃的同时，向所述反应器中的反应液中加入2M的盐酸(11.80升)。将所述反应混合液在18℃至23℃的范围下搅拌(16小时)并且进行相分离。之后利用6M的氢氧化钠(6.0升)对得到的有机相进行提取。在所述反应器中将所述的酸性水相以及碱性水相进行混合并且加入6M的盐酸(2.5升)直至其pH达到7.5。之后向所述的水相中加入氯化钠(6.0千克)。随后利用四氢呋喃(3x 20升)对得到的水相进行提取。将合并的有机相通过硫酸镁进行干燥并且浓缩，从而获得1300克的棕褐色固体(粗产率81％)。
4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的制备
在一个装配有回流冷凝器，喷射管，起泡器，以及温度探针的72升的反应器中装入6-氟吡啶-3-基硼酸(2.84千克，1.24当量)，4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉(4.27千克，1.0当量)，以及二甲醚(DME)(27升)。开始进行搅拌并且随后向所述反应混合液中加入碳酸钠(4.74千克，3.0当量)的DI水(17.1升)。向所述的反应混合物中吹入50分钟的氩气。在氩气环境下，向所述反应混合物中加入四(三苯基膦)钯(750克，0.04当量)的二甲醚浆液(1.0升)。将所述反应混合物加热至75-85℃并且搅拌过夜(17小时)。将所述反应混合物冷却至18-22℃。向所述反应器中加入DI水(26.681千克)以及MTBE(26.681升)并且搅拌5分钟。进行相分离并且利用MTBE(2x 26.7升)对得到的水相进行提取。利用2M的盐酸(1x 15.0升，3x 21.8升)对所述的合并的有机相进行提取。之后将所述的水相装回到所述反应器中并且加入乙酸乙酯(26.7升)。将温度保持在15-25℃的同时，利用6M的氢氧化钠(26.7升)将其pH调节至6.2。进行相分离并且利用乙酸乙酯(2x 26.7升)对得到的水相进行提取。将得到的合并的有机相通过硫酸镁进行干燥并且浓缩，从而获得4555克残余物(粗产率101％，通过高效液相色谱测得的AUC为67.1％)。
4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的纯化
将所述的粗产物(575克)利用硅胶色谱进行纯化，其中使用甲醇/乙酸乙酯/庚烷进行洗脱(30％的乙酸乙酯/庚烷，50％的乙酸乙酯/庚烷，75％的乙酸乙酯/庚烷，100％的乙酸乙酯，以及5％的甲醇/乙酸乙酯)。利用TLC(10％的甲醇/二氯甲烷，Rf＝0.3)对纯化流分进行浓缩，得到420克淡褐色固体(回收率73％，通过高效液相色谱测定的AUC＞99.9％)。
2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙腈(6)的制备
在一个5升的长颈瓶中装入1M的六甲基二硅烷基钠(2.0升，5.0当量)的四氢呋喃溶液并且将其冷却至-20℃至-15℃。将温度保持在低于-10℃的同时，在20分钟的时间内向所述的长颈瓶中装入氟化物(119.7克，1.0当量)的四氢呋喃溶液(500毫升)。将温度保持在低于-10℃的同时，在20分钟的时间内向所述的长颈瓶中装入乙腈(82.5毫升，4.0当量)的四氢呋喃溶液(170毫升)。之后将所述反应混合物搅拌1小时。以能够保持所述温度在低于10℃的速率向所述反应液中加入盐水(1.5升，12.6体积)。之后将所述溶液升温至室温并且对所述的层进行分离。将所述的混合液通过硅藻土进行过滤并且利用四氢呋喃(1x200毫升，1x 100毫升)进行洗涤。利用甲苯(750毫升)对所述的水相进行提取。将合并的有机相通过硫酸镁进行干燥，过滤，利用甲苯(2x 250毫升)进行洗涤，并且浓缩至干燥。加入甲苯(1升)并且将所述溶液再次浓缩至干燥，从而获得169.8克油。在50℃下向所述的油中加入MTBE(甲基叔丁基醚)(1190毫升，7体积)并且搅拌15分钟。在50℃下于10分钟内向其中加入庚烷(850毫升，5体积)。之后将所述的混合液在1.5小时内冷却至室温并且搅拌2小时。将得到的浆液进行过滤，利用1∶4的MTBE(甲基叔丁基醚)/庚烷(2x 100毫升)进行洗涤，并且于45℃下在炉中干燥过夜，从而获得102.3克的灰白色固体(产率80％，通过高效液相色谱测定的曲线下面积＞98.8％)。
2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酸甲酯(7)的制备
在一个装配有搅拌棒以及热电偶的3升的长颈瓶中装入腈6(101克)以及甲醇(1.01升，10体积)。将温度保持在低于60℃的同时，在15分钟的时间内向所述溶液中逐滴加入浓硫酸(175毫升，10.0当量)。之后，在将温度保持在低于60℃的同时，向所述溶液中逐滴加入30％的发烟硫酸(124毫升)。之后利用加热罩将所述溶液加热至回流并且搅拌过夜。当确认所述反应完成后，将其冷却至20℃。在另外一个长颈瓶(22升)中加入饱和的碳酸氢钠(10.7升)以及二氯甲烷(1.1升)并且冷却至15℃。将温度保持在低于20℃的同时，将所述的反应混合液加入到碳酸氢钠/二氯甲烷的混合液中。搅拌15分钟进行淬火并且进行相分离。利用二氯甲烷(1x 550毫升，1x 300毫升)对得到的水相进行提取。将合并的有机相通过硫酸镁进行干燥并且浓缩至干，从而获得105克的橙色固体(粗产率94％，通过高效液相色谱测定的曲线下面积为97.7％)。
N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(KX2-391)的制备
在一个装配有热电偶以及悬臂式搅拌器的3升的长颈瓶中装入酯7(103克)，苯甲醚(513毫升，5体积)，以及苯甲胺(94毫升，3.0当量)。之后将所述的反应混合液加热至142℃并且搅拌两天。将所述的反应混合液冷却至45-50℃并且搅拌2小时。在1小时的时间内向所述混合液中逐滴加入正庚烷(1.5升)。将所述溶液在三小时内冷却至室温并且之后搅拌过夜。将得到的浆液过滤，利用4∶1的苯甲醚/正庚烷(200毫升)以及正庚烷(3x 100毫升)进行洗涤。在炉中进行干燥过夜，得到的产物是112.1克的棕褐色固体(产率90％，通过高效液相色谱测定的曲线下面积为99.6％)。参见附图5中的KX2-391的1HNMR(核磁共振氢谱)图表。
N-苯甲基-2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酰胺二盐酸盐(KX2-391.2HCl)的制备
将乙醇(1.0升)装入一个2升的长颈瓶中并且向所述的长颈瓶中缓慢的加入乙酰氯(62.5毫升，3.0当量)并且搅拌40分钟。将温度保持在30℃的同时，在30分钟的时间内将上述得到的溶液加入到KX2-391(100克)中。将所述溶液浓缩至270克的质量。在20分钟的时间内，在快速搅拌的条件下将得到的浓缩溶液加入到乙酸乙酯(2升)中。将所述的混合液搅拌过夜并且随后在氮气下进行过滤，从而获得两种截然不同的固体产物，棕褐色固体(73.5克)以及颜色更深的固体(42.2克)。将所述的固体进行干混，从而获得99％的组合产率。高效液相色谱分析显示其具有99.0％的纯度(曲线下面积)。
分析表明，乙醇以2530ppm的水平存在，乙酸乙酯以48110ppm的水平存在，氯乙烷以170ppm的水平存在，而没有检测到庚烷以及苯甲醚。对钯的含量进行了三次检测，测量值是29ppm，2ppm，以及少于1ppm。
其他实施方式
尽管本发明结合其中的详细说明进行了描述，但前述的说明意在进行解释，并且不限制本发明的范围，本发明的范围由随后的权利要求的范围进行定义。其他的方面、优点、以及修饰均落入随后的权利要求的范围之内。本领域技术人员可以理解，可以进行形式以及细节上的各种改变，这些改变不会背离由后附的权利要求所包含的本发明的范围。

Claims (5)

1.一种制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐的方法，包括下述的步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与盐酸在乙醇中的溶液进行接触，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐，其中通过向无水乙醇中加入乙酰氯而生成盐酸在乙醇中的溶液。
2.一种制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的方法，包括下述的步骤：在150℃下，将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酸甲酯与三个当量的苯甲胺在苯甲醚中进行反应，并在加入抗溶剂之前将反应混合物冷却至45-50℃从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺，其中，所述抗溶剂是正庚烷。
3.根据权利要求1或2中所述的制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的方法，其包括下述的步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙腈在H2SO4和甲醇中转化成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙酸甲酯，在低于20℃的温度下，通过加入饱和碳酸氢钠以及二氯甲烷的搅拌混合液将所述的反应淬火。
4.根据权利要求3中所述的制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的方法，其包括下述的步骤：将4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与乙腈和NaHMDS进行反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙腈，其中，将4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与NaHMDS进行预先混合并且向混合物中加入所述的乙腈。
5.根据权利要求4中所述的制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的方法，其包括下述的步骤：在4体积的水和Pd(PPh3)4存在的条件下，将4-(2-(4-溴苯氧基)乙基)吗啉与6-氟吡啶-3-基-3-硼酸进行耦合反应，从而生成4-(2-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉。
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Application publication date: 20141224

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