ES2559687T3 - Composición y métodos para modular una cascada de cinasa - Google Patents

Composición y métodos para modular una cascada de cinasa Download PDF

Info

Publication number
ES2559687T3
ES2559687T3 ES07863295.7T ES07863295T ES2559687T3 ES 2559687 T3 ES2559687 T3 ES 2559687T3 ES 07863295 T ES07863295 T ES 07863295T ES 2559687 T3 ES2559687 T3 ES 2559687T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
disclosure
compounds
morpholinoethoxy
kinase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES07863295.7T
Other languages
English (en)
Inventor
David G. Hangauer
Daniel Coughlin
Jeremy A. Cody
Jonathan Gale
Debasis Patra
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Athenex Inc
Original Assignee
Athenex Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Athenex Inc filed Critical Athenex Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2559687T3 publication Critical patent/ES2559687T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)

Abstract

Un procedimiento para preparar 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-N-bencilacetamida que comprende la etapa de: hacer reaccionar 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-N-bencilacetamida.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
DESCRIPCION
Composicion y metodos para modular una cascada de cinasa Campo de la invencion
La presente invencion se dirige a procedimientos para la smtesis de N-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2- il)acetamida (KX2-391) sustancialmente pura y sales de la misma.
Antecedentes de la invencion
La transduccion de senales es cualquier procedimiento por el que una celula convierte un tipo de senal o estimulo en otro. Los procedimientos denominados transduccion de senales implican a menudo una secuencia de reacciones bioqmmicas dentro de la celula, que son llevadas a cabo por enzimas y conectadas a traves de segundos mensajeros. En muchos procedimientos de transduccion, un numero creciente de enzimas y otras moleculas se ven envueltas en los episodios que avanzan desde el estimulo inicial. En tales casos, la cadena de etapas se denomina una "cascada de senalizacion" o una "ruta de segundos mensajeros" y a menudo da como resultado un estfmulo pequeno que provoca una gran respuesta. Una clase de moleculas implicadas en la transduccion de senales es la familia de enzimas cinasa. El mayor grupo de cinasas son protema cinasas, que actuan sobre y modifican la actividad de protemas espedficas. Se usan ampliamente para transmitir senales y controlar procesos complejos en las celulas.
Las protema cinasas son una gran clase de enzimas que catalizan la transferencia del Y-fosfato desde ATP hasta el grupo hidroxilo de la cadena lateral de Ser/Thr o Tyr en protemas y peptidos y estan mtimamente implicadas en el control de diversas funciones celulares importantes, quizas lo mas notablemente: transduccion de senales, diferenciacion y proliferacion. Se estima que hay aproximadamente 2.000 protema cinasas distintas en el cuerpo humano, y aunque cada una de estas fosforila sustratos protemicos/peptfdicos particulares, todas se unen al mismo segundo sustrato, ATP, en un bolsillo muy conservado. Las protema fosfatasas catalizan la transferencia de fosfato en la direccion opuesta.
Una tirosina cinasa es una enzima que puede transferir un grupo fosfato desde ATP hasta un residuo de tirosina en una protema. La fosforilacion de protemas por cinasas es un mecanismo importante en la transduccion de senales para la regulacion de la actividad enzimatica. Las tirosina cinasas se dividen en dos grupos; las que son protemas citoplasmicas y las cinasas ligadas a receptores transmembranarios. En los seres humanos, hay 32 protema tirosina cinasas citoplasmicas y 58 protema tirosina cinasas ligadas a receptores. Las hormonas y los factores de crecimiento que actuan sobre receptores ligados a tirosina cinasas de la superficie celular generalmente son promotores del crecimiento y funcionan para estimular la division celular (p. ej., insulina, factor de crecimiento insulinoide 1, factor de crecimiento epidermico).
Los inhibidores de diversas protema cinasas o protema fosfatasas conocidas tienen una variedad de aplicaciones terapeuticas. Un uso terapeutico potencial prometedor para los inhibidores de protema cinasas o protema fosfatasas es como agentes anticancerosos. Aproximadamente 50% de los productos oncogenicos conocidos son protema tirosina cinasas (PTK, por sus siglas en ingles) y se ha mostrado que su actividad como cinasa conduce a la transformacion celular.
Las PTK se pueden clasificar en dos categonas, las PTK receptoras membranarias (p. ej. PTK receptoras de factores de crecimiento) y las PTK no receptoras (p. ej. la familia Src de productos protooncogenicos). Hay al menos 9 miembros de la familia Src de PTK no receptoras, siendo pp60c"src (posteriormente denominada simplemente en la presente "Src") la PTK prototfpica de la familia en la que aproximadamente 300 dominios catalfticos de aminoacido estan altamente conservados. La hiperactivacion de Src se ha presentado en un numero de canceres humanos, incluyendo los de colon, mama, pulmon, vejiga urinaria y piel, asf como en cancer gastrico, tricoleucemia y neuroblastoma. Las senales de proliferacion celular sobreestimuladas procedentes de receptores transmembranarios (p. ej. EGFR y p185HER2/Neu) al interior de la celula tambien parecen pasar a traves de Src. Por consiguientes, se ha propuesto recientemente que Src es una diana universal para la terapia del cancer, debido a que la hiperactivacion (sin mutacion) esta implicada en la iniciacion, el avance y la metastasis tumoral para muchos tipos de tumores humanos importantes.
Debido a que las cinasas estan implicadas en la regulacion de una amplia variedad de rutas de transduccion de senales celulares normales (p. ej., crecimiento, diferenciacion, supervivencia, adherencia, migracion, etc. celular), se cree que las cinasas representan un papel en una variedad de enfermedades y trastornos. Asf, la modulacion de cascadas de senalizacion de cinasas puede ser un modo importante de tratar o prevenir tales enfermedades y trastornos.
Se ha publicado una smtesis a pequena escala de KX2-391 (Patente de EE. UU. 7.300.931). Sin embargo, esta smtesis es poco practica para producir grandes cantidades del compuesto y el producto resultante sufre contaminacion con cloruro de etilo, que se sabe que es un agente alquilante debil. Asf, la presencia de cloruro de etilo en niveles suficientemente altos limita la eficacia practica de las composiciones de KX2-391.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Segun esto, hay una necesidad de composiciones y procedimientos para la smtesis de KX2-391 altamente purificada, que sea segura y simple y que produzca KX2-391 a gran escala con alto rendimiento y que este sustancialmente libre de cloruro de etilo.
Compendio de la invencion
La invencion se refiere a un procedimiento para preparar 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W- bencilacetamida que comprende la etapa de:
hacer reaccionar 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-A/-bencilacetamida.
El 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo se puede preparar mediante la etapa de convertir 2-(S- (4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo en 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo.
El 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo se puede preparar mediante la etapa de hacer reaccionar 4- (2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina con acetonitrilo.
La 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina se puede preparar mediante la etapa de acoplar 4-(2-(4- bromofenoxi)etil)morfolina con acido 6-fluoropiridin-3-il-3-boronico.
El procedimiento puede comprender las etapas de:
(1) hacer reaccionar 4-(2-cloroetil)morfolina con 4-bromofenol para dar 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina;
(2) acoplar la 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina con acido 6-fluoropiridin-3-il-3-boronico para dar 4-(2-(4-(5- fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina;
(3) hacer reaccionar la 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina con acetonitrilo para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo;
(4) convertir el 2-(S-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo en 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2- il)acetato de metilo; y
(5) hacer reaccionar el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5- (4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida.
El procedimiento puede comprender adicionalmente la etapa de poner en contacto la 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-A/-bencilacetamida con solucion de acido clorhndrico para dar dihidrocloruro de 2-(5- (4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida.
En otra realizacion de la invencion, el procedimiento comprende las etapas de:
(1) hacer reaccionar 4-(2-cloroetil)morfolina con 4-bromofenol para dar 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina;
(2) acoplar la 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina con acido 6-fluoropiridin-3-il-3-boronico para dar 4-(2-(4-(6- fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina;
(3) hacer reaccionar la 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina con acetonitrilo para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo;
(4) convertir el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo en 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2- il)acetato de metilo;
(5) hacer reaccionar el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5- (4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida; y
(6) poner en contacto la 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida con una solucion de acido clortndrico para dar dihidrocloruro de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-A/-bencilacetamida.
Los compuestos descritos en la presente memoria son utiles en la modulacion de un componente de la cascada de senalizacion de cinasa. Algunos compuestos pueden ser utiles en la modulacion de mas de un componente de una cascada de senalizacion de cinasa. Los compuestos son utiles como agentes farmaceuticos. Los compuestos pueden ser utiles para modular la regulacion de una cinasa que puede estar implicada en una ruta de transduccion de senales celulares normal (p. ej., crecimiento, diferenciacion, supervivencia, adherencia, migracion, etc. celular), o una cinasa implicada en una enfermedad o trastorno.
Por ejemplo, el componente o los componentes de la cascada de cinasa modulados por un compuesto de la divulgacion son responsables de la manifestacion de una enfermedad o trastorno tal como trastornos hiperproliferativos, canceres, precanceres, osteoporosis, trastornos cardiovasculares, disfuncion del sistema
5
10
15
20
25
30
35
40
45
inmunitario, diabetes tipo II, obesidad, enfermedad oftalmica, edema macular, dolor neuropatico cronico, perdida de audition y rechazo de trasplantes.
Los compuestos de la divulgation son utiles en el tratamiento de enfermedades y trastornos que son modulados por la inhibition de tirosina cinasas, por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades y trastornos que son modulados por cinasa Src. Los compuestos de la divulgacion tambien pueden ser utiles en el tratamiento de enfermedades y trastornos que son modulados por cinasa de adherencia focal (FAK, por sus siglas en ingles).
Por ejemplo, los compuestos pueden ser utiles como agentes antiproliferativos, para tratar mamriferos, tal como para tratar seres humanos y animales. Los compuestos se pueden usar sin limitation, por ejemplo, como agentes anticancerosos, antiangiogenicos, antimetastasicos, antimicrobianos, antibacterianos, antifungicos, antiparasitarios y/o antivirales. Los compuestos de la divulgacion son utiles, por ejemplo, en el tratamiento del cancer de pulmon. Los compuestos tambien son utiles, por ejemplo, en el tratamiento de cancer de colon o cancer de mama.
La divulgacion se refiere a N-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetamida (Compuesto 1) sustancialmente pura, y sales, solvatos, hidratos o profarmacos de la misma:
imagen1
(Compuesto 1, KX2-391).
La divulgacion se refiere a composiciones y procedimientos para la smtesis de KX2-391 altamente purificada (> 98,0% segun se determina mediante HPLC) que sea segura y simple y que produzca KX2-391 a gran escala (> 100 g) con alto rendimiento (> 80%) y con cloruro de etilo limitado (<250 ppm segun se determina por analisis del disolvente residual por cromatografia de gases del espacio libre superior).
Preferiblemente, el Compuesto 1 tiene una pureza de mas de 98%. Por ejemplo, la pureza del Compuesto 1 es 98,5%, 99,0%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% o 99,9%.
Las composiciones y las formulaciones pueden contener menos de 2% de impurezas. Por ejemplo, las composiciones y las formulaciones contienen menos de 2% de una cualquiera de las siguientes impurezas, o combinaciones de las mismas: cloruro de etilo, etanol, acetato de etilo, heptano, anisol y paladio.
Preferiblemente, la composition contiene menos de 250 ppm de cloruro de etilo segun se determina mediante analisis del disolvente residual por cromatografia de gases del espacio libre superior. Los compuestos y las formulaciones contienen cloruro de etilo en un intervalo de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 250 ppm (o cualquier valor dentro de dicho intervalo). Por ejemplo, las composiciones contienen menos de 200 ppm, menos de 200 ppm, menos de 150 ppm, menos de 100 ppm o menos de 50 ppm cloruro de etilo.
Los compuestos y las formulaciones de la divulgacion contienen menos de aproximadamente 100 ppm de paladio. Los compuestos y las formulaciones contienen paladio en un intervalo de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 100 ppm (o cualquier valor dentro de dicho intervalo). Por ejemplo, las composiciones contienen menos de 75 ppm, menos de 50 ppm, menos de 30 ppm, menos de 20 ppm, menos de 10 ppm o menos de 5 ppm de paladio.
La divulgacion se refiere a una composicion que incluye un solvato sustancialmente puro del Compuesto 1.
La divulgacion tambien se refiere a una composicion que incluye un hidrato sustancialmente puro del Compuesto 1.
La divulgacion tambien incluye una sal por adicion de acido sustancialmente pura del Compuesto 1, por ejemplo, una sal de hidrocloruro. La sal por adicion de acido puede ser, por ejemplo, una sal de dihidrocloruro.
La divulgacion se refiere a una composicion que incluye una sal por adicion de acido sustancialmente pura del Compuesto 1; a una composicion que incluye una sal de hidrocloruro sustancialmente pura del Compuesto 1; a una composicion que incluye una sal de dihidrocloruro sustancialmente pura del Compuesto 1; y tambien incluye un profarmaco del Compuesto 1 y una sal farmaceuticamente aceptable sustancialmente pura del Compuesto 1.
La divulgacion tambien se refiere a una composicion que incluye en Compuesto 1 sustancialmente puro o un solvato, un hidrato o una sal del mismo, y al menos un excipiente farmaceuticamente aceptable.
La divulgacion tambien se refiere al uso de tales compuestos sustancialmente puros y composiciones para modular un componente de la cascada de senalizacion de cinasa. Algunos compuestos pueden ser utiles en la modulation
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
de mas de un componente de una cascada de senalizacion de cinasa. Los compuestos son utiles como agentes farmaceuticos.
Ciertos compuestos son inhibidores de cinasa no competitivos con ATP.
La divulgacion se refiere a compuestos y metodos para usar los compuestos para tratar trastornos de proliferacion celular.
Por ejemplo, una composicion farmaceutica que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo, y al menos un excipiente farmaceuticamente aceptable se puede usar en un metodo para prevenir o tratar un trastorno de proliferacion celular.
Por ejemplo, el trastorno de proliferacion celular es precancer o cancer. El trastorno de proliferacion celular tratado o prevenido por los compuestos de la divulgacion puede ser un cancer, tal como, por ejemplo, cancer de colon o cancer de pulmon, un trastorno hiperproliferativo o psoriasis.
Por ejemplo, el tratamiento o la prevencion del trastorno proliferativo se puede presentar a traves de la inhibicion de una tirosina cinasa. Por ejemplo, la tirosina cinasa puede ser una cinasa Src o una cinasa de adherencia focal (FAK).
Una composicion farmaceutica que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo, y al menos un excipiente farmaceuticamente aceptable se puede usar en un metodo para tratar o prevenir una enfermedad o trastorno que es modulado por la inhibicion de tirosina cinasa. Por ejemplo, la enfermedad o el trastorno que es modulado por la inhibicion de tirosina cinasa es cancer, precancer, un trastorno hiperproliferativo o una infeccion microbiana.
La composicion farmaceutica de la divulgacion puede modular una ruta de cinasa. Por ejemplo, la ruta de cinasa es una ruta de cinasa Src o una ruta de cinasa de adherencia focal.
La composicion farmaceutica de la divulgacion puede modular una cinasa directamente. Por ejemplo, la cinasa es cinasa Src o cinasa de adherencia focal.
Ciertas composiciones farmaceuticas de la divulgacion son inhibidores de cinasa no competitivos con ATP.
Los compuestos de la divulgacion tambien son utiles para tratar o prevenir una infeccion microbiana, tal como una infeccion bacteriana, fungica, parasitaria o viral.
Un compuesto preparado mediante los metodos de la divulgacion puede usarse como un agente farmaceutico, por ejemplo, usarse como un agente antiproliferativo, para tratar seres humanos y/o animales, tal como para tratar seres humanos y/u otros mairnferos. Los compuestos se pueden usar sin limitacion, por ejemplo, como agentes anticancerosos, antiangiogenicos, antimicrobianos, antibacterianos, antifungicos, antiparasitarios y/o antivirales. Adicionalmente, los compuestos se pueden usar para otros trastornos relacionados con la proliferacion celular tales como retinopatfa diabetica, degeneracion macular y psoriasis. Los agentes anticancerosos incluyen agentes antimetastasicos.
El compuesto de la divulgacion usado como un agente farmaceutico incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro y sales, solvatos e hidratos del mismo.
Un compuesto de la divulgacion se puede usar para modular una cascada de cinasa. Por ejemplo, el compuesto se usa para modular un componente de una cascada de cinasa que es responsable de la manifestacion de una enfermedad o trastorno.
Tales enfermedades y trastornos incluyen canceres, osteoporosis, trastornos cardiovasculares, disfuncion del sistema inmunitario, diabetes tipo II, obesidad y rechazo de trasplantes.
Por ejemplo, un compuesto de la divulgacion se puede usar para tratar o prevenir un trastorno de proliferacion celular en un individuo, tal como precancer o cancer o un trastorno hiperproliferativo. La prevencion o el tratamiento del trastorno de proliferacion celular, el cancer o el trastorno hiperproliferativo se puede producir a traves de la inhibicion de una cinasa, tal como tirosina cinasa, p. ej. cinasa Src o cinasa de adherencia focal (FAK). El individuo puede ser un mamnfero, p. ej. el individuo es un ser humano.
La divulgacion tambien se extiende a un metodo para tratar o prevenir el cancer o un trastorno de proliferacion en un individuo, que comprende administrar una cantidad eficaz de una composicion que incluye el Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. Por ejemplo, el compuesto puede ser un inhibidor de cinasa. El compuesto puede ser un inhibidor de cinasa no competitivo con ATP. El compuesto puede inhibir una cinasa directamente, o puede afectar a la ruta de la cinasa.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la perdida de audicion en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes del inicio de la perdida de audicion. Alternativamente, el compuesto se administra despues del inicio de la perdida de audicion. El compuesto se puede administrar en combinacion con un farmaco que provoca perdida de audicion, p. ej. cisplatino o un antibiotico aminoglicosfdico, o en combinacion con un farmaco que tiene como diana tricoleucocitos.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la osteoporosis en un individuo, que comprende administrar la composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes del inicio de la osteoporosis o despues del inicio de la osteoporosis.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar enfermedades oftalmicas, p. ej., degeneracion macular, retinopatfa, edema macular, etc. en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes del inicio de la enfermedad oftalmica o despues del inicio de la enfermedad oftalmica.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la diabetes en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes del comienzo de la diabetes o despues del comienzo de la diabetes.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la obesidad en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes de que el individuo sea obeso o despues de que el individuo sea obeso.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la apoplejfa en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes de que se haya producido la apoplejfa o despues de que se haya producido la apoplejfa.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la aterosclerosis en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para regular la actividad del sistema inmunitario en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar el dolor neuropatico cronico en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes del comienzo del dolor neuropatico cronico o despues del comienzo del dolor neuropatico cronico.
Otro aspecto de la divulgacion incluye un metodo para proteger contra o tratar la hepatitis B en un individuo, que comprende administrar una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo. El compuesto se puede administrar antes del comienzo de la hepatitis B o despues del comienzo de la hepatitis B.
Otro aspecto de la divulgacion es un metodo para prevenir o tratar un trastorno de proliferacion celular, que comprende administrar a un individuo que lo necesite una composicion que incluye un Compuesto 1 sustancialmente puro, o una sal, un solvato, un hidrato o un profarmaco del mismo.
En estos aspectos de la divulgacion, la administracion del compuesto se puede llevar a cabo oralmente, parentalmente, subcutaneamente, intravenosamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, mediante instilacion intranasal, mediante instilacion intracavitaria o intravesical, topicamente, intraarterialmente, intralesionalmente, mediante una bomba dosificadora o mediante aplicacion a membranas mucosas. El compuesto se puede administrar con un vehroulo farmaceuticamente aceptable.
El compuesto puede inhibir uno o mas componentes de una cascada de senalizacion de protema cinasa. El compuesto puede ser un inhibidor alosterico o un inhibidor de un sustrato peptfdico. El compuesto puede no inhibir la union de ATP a una protema cinasa. El compuesto puede inhibir una protema cinasa de la familia Src, por ejemplo tirosina cinasa pp60c-src.
La divulgacion incluye un metodo para tratar o prevenir una enfermedad o un trastorno que es modulado por la inhibicion de tirosina cinasas, en donde el trastorno de proliferacion se selecciona de cancer, precancer, un trastorno hiperproliferativo y una infeccion microbiana.
Por ejemplo, la infeccion microbiana es una infeccion bacteriana, fungica, parasitaria o viral. En otro ejemplo, el trastorno de proliferacion es un trastorno hiperproliferativo seleccionado de psoriasis, retinopatfa diabetica y degeneracion macular. En ciertos ejemplos, el trastorno de proliferacion es cancer. Por ejemplo, el cancer puede ser un tumor solido, tal como cancer de pulmon, mama, colon, ovarios, cerebro, hugado, pancreas o prostata, melanoma 5 maligno o cancer de piel no melanomico. En ciertos ejemplos, el cancer es cancer de mama, colon o pulmon. En ciertos ejemplos, el cancer es un tumor hematologico, una enfermedad maligna hematologica, leucemia infantil, linfoma, mieloma multiple, enfermedad de Hodgkin, linfoma de origen linfocftico o cutaneo, leucemia aguda o cronica, leucemia linfoblastica, leucemia mielocftica aguda, leucemia mielocftica cronica, neoplasma de celulas plasmaticas, neoplasma linfoideo o un cancer asociado con el sida.
10 En algunos ejemplos, el trastorno de proliferacion es un quiste epidermico, un quiste dermoide, un lipoma, un adenoma, un hemangioma capilar, un hemangioma cutaneo, un linfangioma, una lesion nevica, un teratoma, un nefroma, una miofibromatosis, un tumor osteoplastico o una masa displastica.
En ciertos metodos de la divulgacion, el individuo tratado con un compuesto de la divulgacion es un ser humano. Breve descripcion de los dibujos
15 La Figura 1 es una grafica que indica la DSC de KX2-3912HCl lote 02BP111F.
La Figura 2 es una grafica que indica la DSC de KX2-391 2HCl lote 02BP111E.
La Figura 3 es una grafica que indica la XRPD de KX2-391 2HCl lote 02BP111E.
La Figura 4 es una grafica que indica la XRPD de KX2-391-2HCl lote 02BP111F.
La Figura 5 es un espectro de NMR de KX2-391 (lote 02BP096K).
20 Descripcion detallada de la invencion y la divulgacion
Los detalles de una o mas realizaciones de la invencion y la divulgacion se indican posteriormente en la descripcion adjunta.
Debido a que las cinasas estan implicadas en la regulacion de una amplia variedad de rutas de transduccion de senales celulares normales (p. ej., crecimiento, diferenciacion, supervivencia, adherencia, migracion, etc. celular), se 25 cree que las cinasas representan un papel en una variedad de enfermedades y trastornos. Asf, la modulacion de cascadas de senalizacion de cinasa puede ser un modo importante de tratar o prevenir tales enfermedades y trastornos. Tales enfermedades y trastornos incluyen, por ejemplo, canceres, osteoporosis, trastornos cardiovasculares, una disfuncion del sistema inmunitario, diabetes tipo II, obesidad y rechazo de trasplantes.
Los compuestos de la divulgacion y los compuestos preparados mediante los metodos de la invencion son utiles en 30 la modulacion de un componente de la cascada de senalizacion de cinasa. Algunos compuestos pueden ser utiles en la modulacion de mas de un componente de una cascada de senalizacion de cinasa. La expresion "modula uno o mas componentes de una cascada de senalizacion de protema cinasa" significa que uno o mas componentes de la cascada de senalizacion de cinasa estan afectados de modo que cambia el funcionamiento de una celula. Componentes de una cascada de senalizacion de protema cinasa incluyen cualesquiera protema implicadas 35 directamente o indirectamente en la ruta de senalizacion de cinasa incluyendo segundos mensajeros y dianas aguas arriba y aguas abajo.
Se conoce un numero de protema cinasas y fosfatasas, y son dianas para el desarrollo de tratamientos. Veanse, p. ej., Hidaka y Kobayashi, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol, 1992, 32:377-397; Davies et al., Biochem. J., 2000, 351:95105.
40 Una familia de cinasas, las protema tirosina cinasas, se dividen en dos grandes familias: tirosina cinasas receptoras, o RTK (por sus siglas en ingles) (p. ej., cinasa receptora de insulina (IRK, por sus siglas en ingles), receptor de factor de crecimiento epidermico (EGFR, por sus siglas en ingles), receptor de factor de crecimiento fibroblastico basico (FGFR, por sus siglas en ingles), receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR, por sus siglas en ingles), receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR-2 o Flk1/KDR) y receptor de factor de 45 crecimiento nervioso (NGFR, por sus siglas en ingles)) y tirosina cinasas no receptoras, o NRTK (por sus siglas en ingles) (p. ej., la familia Src (Src, Fyn, Yes, Blk, Yrk, Fgr, Hck, Lck y Lyn), Fak, Jak, Abl y Zap70). Vease, por ejemplo, Parang y Sun, Expert Opin. Ther. Patents, 2005, 15:1183-1207.
Debido al papel de las cinasas Src en una variedad de canceres, estas cinasas son el objeto de un numero de estudios que se refieren al desarrollo de inhibidores de Src como tratamientos para el cancer, incluyendo el 50 crecimiento de celulas cancerosas altamente metastasicas. Los inhibidores de Src se buscan como tratamientos para una variedad de canceres, incluyendo, por ejemplo, cancer de colon, lesiones colonicas precancerosas, cancer ovarico, cancer de mama, canceres epiteliales, cancer de esofago, cancer de pulmon no microcftico, cancer pancreatico y otros. Veanse, p. ej., Frame, Biochim. Biophys. Acta, 2002, 1602:114-130 y Parang y Sun, Expert Opin. Ther. Patents, 2005, 15:1183-1207.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
La inhibicion de otras cinasas puede ser util en el tratamiento y la modulacion de otros tipos de enfermedades y trastornos. Por ejemplo, diversas enfermedades oculares se pueden inhibir o prevenir mediante la administracion de inhibidores de la tirosina cinasa receptora VEGF. Los inhibidores de la tirosina fosfatasa PTP-1B y/o glicogeno fosforilasa pueden proporcionar tratamientos para la diabetes tipo II o la obesidad. Los inhibidores de p561ck pueden ser utiles para tratar trastornos del sistema inmunitario. Otras dianas incluyen transcriptasa inversa de VIH, tromboxano sintasa, EGFRTK, p55 fyn, etc.
Los compuestos de la divulgacion pueden ser inhibidores de la senalizacion de Src que se unen en el sitio de un sustrato peptfdico de Src. La actividad de diversos compuestos de la divulgacion se ha estudiado en celulas NIH3T3 transformadas con c-Src (527F, constitutivamente activa y transformante) y en celulas de cancer de color humano (HT29). Por ejemplo, en estas lmeas celulares, se observo que KX2-391 reducfa el nivel de fosforilacion de sustratos protemicos de Src conocidos de un modo dependiente de la dosis y en buena correlacion con los efectos inhibidores del crecimiento. Asf, los compuestos de la divulgacion pueden inhibir directamente Src, y lo pueden hacer al unirse al sitio de union a peptidos (en oposicion a la union en un sitio alosterico).
Se han realizado experimentos de modelado molecular que muestran que los compuestos de la divulgacion se ajustan al sitio del sustrato de Src del modelo (Veanse, p. ej., las Patentes de EE. UU. 7.005.445 y 7.070.936). El modelado tambien se usa para redisenar los andamiajes del inhibidor de cinasa Src a fin de elegir como diana otras cinasas, simplemente al usar un grupo diferente de cadenas laterales presentes en las moleculas y/o modificar el propio andamiaje.
Sin querer limitarse por una teona, se cree que la conformacion de algunas cinasas (p. ej., Src) fuera de las celulas con relacion a la conformacion dentro de las celulas es notablemente diferente, debido a que dentro de las celulas muchas cinasas estan embebidas en complejos de senalizacion multiprotemicos. Asf, debido a que el sitio de union al sustrato peptfdico no esta bien formado en una cinasa aislada (segun se muestra por las estructuras de rayos X de la Src), se cree que la actividad contra una cinasa aislada para un inhibidor de la union a un sustrato peptfdico sena debil. La union a este sitio en un ensayo de cinasa aislada requiere que el inhibidor capture el porcentaje muy pequeno de protema total en un ensayo de enzima aislada que esta en la misma conformacion que existe dentro de las celulas. Esto requiere un gran exceso del inhibidor para drenar cantidades significativas de la enzima desde el ciclo catalftico en el ensayo a fin de que sea detectable.
Sin embargo, para ensayos basados en celulas, no es necesario un gran exceso de inhibidor debido a que se espera que se forme el sitio de union a peptidos. En ensayos de Src basados en celulas, las protemas que se unen a los dominios SH2 y SH3 ya han cambiado la conformacion de la Src de modo que el sitio de union a sustratos peptfdicos este completamente formado. Asf, bajas concentraciones del inhibidor pueden retirar la enzima del ciclo catalftico debido a que toda la enzima esta en la conformacion de union estrecha.
La gran mayona de los inhibidores de cinasa conocidos son competitivos con ATP y muestran escasa selectividad en un conjunto de ensayos de cinasas aisladas. Sin embargo, se cree que muchos de los compuestos de la divulgacion son inhibidores de la union a sustratos peptfdicos. Asf, el tradicional cribado de alto rendimiento de compuestos contra enzimas aisladas, tales como Src, no dana como resultado el descubrimiento de estos compuestos.
Existe un considerable soporte bibliografico reciente para elegir como diana pp60c-src (Src) como un enfoque ampliamente util para la terapia del cancer sin dar como resultado una toxicidad grave. Por ejemplo, los tumores que presentan senalizacion mejorada de PTK receptora de EGF o sobreexpresan el receptor Her-2/neu relacionado, tienen constitutivamente Src activada e invasividad tumoral potenciada. La inhibicion de Src en estas celulas induce la interrupcion del crecimiento, desencadena la apoptosis e invierte el fenotipo transformado (Kami et al. (1999) Oncogene 18(33): 4654-4662). Se sabe que la actividad de Src anormalmente elevada permite que las celulas transformadas crezcan de un modo dependiente del anclaje. Aparentemente, esto esta provocado por el hecho de que la senalizacion de la matriz extracelular eleva la actividad de Src en la ruta FAK/Src, de un modo coordinado con la senalizacion mitogenica, y de ese modo bloquea un mecanismo apoptotico que normalmente se habna activado. Por consiguiente, la inhibicion de FAK/Src en celulas tumorales puede inducir la apoptosis debido a que se inducina el mecanismo apoptotico que normalmente se habna activado al liberarse de la matriz extracelular (Hisano, et al., Proc. Annu. Meet. Am. Assoc. Cancer Res. 38:A1925 (1997)). Adicionalmente, se aprecio la expresion reducida de mRNA de VEGF durante la inhibicion de Src y los tumores derivados de estas lmeas celulares inhibidas en Src mostraron un desarrollo angiogenico reducido (Ellis et al., Journal of Biological Chemistry 273 (2):1052-1057 (1998)).
Por ejemplo, una desactivacion del gen Src en ratones condujo a un solo defecto, a saber los osteoclastos no formaban bordes en cepillo y por consiguiente no reabsorbfan hueso. Sin embargo, la funcion de resorcion osea osteoclastica se rescato en estos ratones al insertar un gen Src defectuoso en cinasa (Schwartzberg et al., (1997) Genes & Development 11: 2835-2844). Esto sugena que la actividad de la cinasa Src se puede inhibir in vivo sin desencadenar la unica toxicidad conocida debido a que la presencia de la protema de Src es aparentemente suficiente para incorporar y activar otras PTK (que son esenciales para mantener la funcion de los osteoclastos) en un complejo de senalizacion esencial de los osteoclastos.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Se ha propuesto que la Src es una diana "universal" para la terapia del cancer ya que se ha encontrado que esta sobreactivada en un numero creciente de tumores humanos (Levitzki, Current Opinion in Cell Biology, 8, 239-244 (1996); Levitzki, Anti-Cancer Drug Design, 11, 175-182 (1996)). Los beneficios potenciales de la inhibicion de Src para la terapia del cancer parecen ser la cuadruple inhibicion del crecimiento celular descontrolado provocado por los efectos de bucle del factor de crecimiento autocrino, la inhibicion de la metastasis debida al desencadenamiento de la apoptosis al liberarse de la matriz celular, la inhibicion de la angiogenesis tumoral a traves de niveles de VEGF reducidos y la baja toxicidad.
Se ha presentado que las celulas de cancer de prostata tienen una sobreexpresion tanto de paxilina como de p130cas y estan hiperfosforiladas (Tremblay et al., Int. J. Cancer, 68, 164-171, 1996) y asf pueden ser una diana fundamental para los inhibidores de Src.
Asf, la divulgacion se refiere a compuestos y metodos para usar los compuestos para tratar trastornos de proliferacion celular.
Los compuestos preparados mediante los metodos de la invencion y la divulgacion son utiles como agentes farmaceuticos, por ejemplo, como agentes terapeuticos para tratar seres humanos y animales. Los compuestos se pueden usar sin limitacion, por ejemplo, como agentes anticancerosos, antiangiogenicos, antimetastasicos, antimicrobianos, antibacterianos, antifungicos, antiparasitarios y/o antivirales. Los compuestos se pueden usar para otros trastornos relacionados con la proliferacion celular tales como psoriasis.
Segun se describe en la presente memoria, un compuesto de la divulgacion se puede usar para proteger contra o prevenir la perdida de audicion en un individuo. A fin de proteger contra la perdida de audicion, el compuesto se puede administrar antes de la exposicion a ruido o la exposicion a un farmaco que induce la perdida de audicion. Tales farmacos pueden incluir farmacos quimioterapeuticos (p. ej., farmacos basados en platino que tienen como diana tricoleucocitos) y antibioticos aminoglicosfdicos. Un compuesto de la divulgacion puede proporcionar un efecto sinergico con ciertos farmacos para el cancer. Por ejemplo, se pueden rastrear inhibidores prometedores en ensayos tisulares de tumores humanos primarios, particularmente para buscar sinergia con otros farmacos antineoplasicos conocidos. Ademas, los inhibidores de protema cinasas pueden reducir la toxicidad de ciertos farmacos para el cancer (p. ej., farmacos basados en platino que son toxicos para la coclea y el rinon), permitiendo asf un incremento de la dosificacion.
Alternativamente, un compuesto de la divulgacion se puede usar para tratar la perdida de audicion en un individuo. El compuesto se puede administrar al individuo despues del inicio de la perdida de audicion para reducir el nivel de perdida de audicion. Un compuesto de la divulgacion puede estar implicado en la modulacion de una cascada de cinasa, p. ej. un inhibidor de cinasa, un inhibidor no competitivo con ATP, un inhibidor de tirosina cinasa, un inhibidor de Src o un modulador de cinasa de adherencia focal (FAK). Aunque sin querer limitarse por una teona, se cree que la administracion de inhibidores de cinasa evita la apoptosis de tricoleucocitos cocleares, evitando de ese modo la perdida de audicion. Un compuesto de la divulgacion se puede administrar a un individuo que sufra perdida de audicion a fin de evitar una perdida de audicion adicional, o para restaurar la audicion perdida. En particular, despues de la exposicion a ruido, las estrechas uniones celulares entre las tricoleucocitos cocleares, asf como la interaccion de la matriz celular-extracelular, se rompen y se tensionan. La tension de estas estrechas uniones celulares inicia la apoptosis en las celulas a traves de una ruta de senalizacion compleja en la que las tirosina cinasas actuan como conmutadores moleculares, interactuando con cinasa de adherencia focal para transducir senales de ruptura celula-matriz al nucleo. Se cree que la administracion de inhibidores de cinasa evita el inicio de la apoptosis en esta cascada.
La identificacion de la apoptosis en la coclea expuesta a ruido ha generado un numero de nuevas posibilidades para la prevencion de la perdida de audicion inducida por ruido (NIHL, por sus siglas en ingles) (Hu, et al.; 2000, Acta. Otolaryngol., 120, 19-24). Por ejemplo, el ofdo se puede proteger de la NIHL mediante la administracion de farmacos antioxidantes a la ventana redonda del ofdo (Hight, et al.; 2003, Hear. Res., 179, 21-32; Hu, et al.; Hear. Res. 113, 198-206). Espedficamente, la NIHL se ha reducido mediante la administracion de compuestos antioxidantes aprobados por la FDA (N-L-acetilcistema (L-NAC) y salicilato) en la chinchilla (Kopke, et al.; 2000, Hear. Res., 149, 138-146). Por otra parte, Harris et al. han descrito recientemente la prevencion de NIHL con inhibidores de Src-PTK (Harris, et al.; 2005, Hear. Res., 208, 14-25). Asf, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la actividad de cinasas es util para tratar la perdida de audicion.
Los cambios en la ligazon celular o la tension celular pueden activar una variedad de senales a traves de la activacion de integrinas y a traves de la fosforilacion de PTK, incluyendo la familia Src de tirosina cinasas. Las interacciones de Src se han relacionado con rutas de senalizacion que modifican el citoesqueleto y activan una variedad de cascadas de protema cinasa que regulan la supervivencia celular y la transcripcion genica (revisado en Giancotti y Ruoslahti; 1999, Science, 285, 1028-1032). De hecho, resultados recientes han indicado que los tricoleucocitos externos (OHC, por sus siglas en ingles), que se han separado en la base celular despues de una exposicion a ruido intenso, sufnan muerte celular apoptotica. Espedficamente, se cree que la cascada de senalizacion de la PTK Src esta implicada en la iniciacion inducida tanto metabolica como mecanicamente de la apoptosis en celulas sensoriales de la coclea. En un estudio reciente, los inhibidores de Src proporcionaban proteccion de un ruido de banda de octava de 4 Hz de 4 horas a 106 dB, indicando que las PTK Src podnan ser
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
activadas en tricoleucocitos externos despues de la exposicion a ruido (Harris, et al.; 2005, Hear. Res., 208, 14-25). Asf, los compuestos de la divulgacion que modulan la actividad de Src son utiles para tratar la perdida de audicion.
La divulgacion se refiere a un metodo para proteger contra o tratar la osteoporosis en un individuo. Este metodo implica administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgacion al individuo para proteger contra o para tratar la osteoporosis. A fin de proteger contra la osteoporosis, el compuesto se puede administrar antes del desarrollo de la osteoporosis. Alternativamente, el compuesto se puede usar para tratar la osteoporosis en un individuo. El compuesto se puede administrar al individuo despues del inicio de la osteoporosis para reducir el nivel de osteoporosis.
Un compuesto de la divulgacion puede ser, p. ej., un inhibidor no competitivo con ATP. El compuesto de la divulgacion puede modular una cascada de senalizacion de cinasa, dependiendo de las cadenas laterales particulares y las modificaciones del andamiaje seleccionadas. El compuesto de la divulgacion puede ser un inhibidor de cinasa. Por ejemplo, el compuesto puede ser un inhibidor de protema tirosina cinasa (PTK). La tirosina cinasa rica en prolina (PYK2; tambien conocida como cinasa de adherencia celular p, tirosina cinasa relacionada con la adherencia focal o tirosina cinasa dependiente del calcio) y la cinasa de adherencia focal (FAK) son miembros de una familia distinta de protema tirosina cinasas no receptoras que son reguladas por una variedad de estfmulos extracelulares (Avraham, et al.; 2000, Cell Signal., 12, l23-133; Schlaepfer, et al.; 1999, Prog. Biophys. Mol. Biol., 71, 435-478). El compuesto de la divulgacion puede ser un inhibidor de Src. Se ha mostrado que la deficiencia de Src esta asociada con la osteoporosis en ratones, debido a la perdida de la funcion de los osteoclastos (Soriano, et al.; 1991, Cell, 64,693-702). Alternativamente, el compuesto puede modular la expresion de cinasa M asociada con receptor de interleucina-1 (IRAK-M, por sus siglas en ingles). Los ratones que carecen de IRAK-M desarrollan osteoporosis grave, que esta asociada con la diferenciacion acelerada de osteoclastos, un incremento en la semivida de los osteoclastos, y su activacion (Hongmei, et al.; 2005, J. Exp. Med., 201, 1169-1177).
Se originan osteoclastos multinucleados a partir de la fusion de fagocitos mononucleares y representan un papel importante en el desarrollo y la remodelacion oseos a traves de la resorcion osea. Los osteoclastos son celulas terminalmente diferenciadas multinucleadas que degradan la matriz mineralizada. En tejido oseo normal, hay un equilibrio entre la formacion osea por los osteoblastos y la resorcion osea por los osteoclastos. Cuando el equilibrio de este proceso dinamico y altamente regulado se rompe, la resorcion osea puede superar la formacion osea dando como resultado una perdida osea cuantitativa. Debido a que los osteoclastos son esenciales para el desarrollo y la remodelacion de hueso, los incrementos en su numero y/o actividad condudan a enfermedades que estan asociadas con una perdida osea generalizada (p. ej., osteoporosis) o otras con perdida osea localizada (p. ej., artritis reumatoide, enfermedad periodontal).
Los osteoclastos y los osteoblastos dirigen una multitud de rutas de senalizacion celular que implican protema cinasas. La activacion de los osteoclastos se inicia mediante la adherencia a hueso, la redisposicion citoesqueletica, la formacion de la zona de sellado y la formacion de la membrana en cepillo polarizada. Se cree que la protema tirosina cinasa 2 (PYK2) participa en la transferencia de senales desde la superficie celular hasta el citoesqueleto, ya que esta fosforilada en la tirosina y activada por la senalizacion iniciada por adherencia en los osteoclastos (Duong, et al.; 1998, J. Clin. Invest., 102, 881-892). Una evidencia reciente ha indicado que la reduccion de los niveles de protema de PYK2 da como resultado la inhibicion de la formacion de osteoclastos y la resorcion osea in vitro (Duong, et al.; 2001, J Bio. Chem., 276, 7484-7492). Por lo tanto, la inhibicion de PYK2 u otras protema tirosina cinasas podnan reducir el nivel de osteoporosis al disminuir la formacion de osteoclastos y la resorcion osea. Asf, sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion modulara la actividad de cinasas (p. ej. PTK) y por lo tanto dara como resultado la inhibicion de la formacion de osteoclastos y/o la resorcion osea, tratando de ese modo la osteoporosis.
La tirosina cinasa Src destaca como una diana terapeutica prometedora para la enfermedad osea segun se valida por estudios en ratones desactivados para Src y experimentos celulares in vitro, sugiriendo un papel regulador para la Src tanto en osteoclastos (positivo) como en osteoblastos (negativo). En los osteoclastos, la Src representa papeles clave en la movilidad, la polarizacion, la supervivencia, la activacion (formacion de bordes en cepillo) y la adherencia, al mediar en diversas rutas de transduccion de senales, especialmente en la senalizacion de citocinas e integrinas (Parang y Sun; 2005, Expert Opin. Ther. Patents, 15, 1183-1207). Por otra parte, la perturbacion elegida como diana del gen src en ratones induce la osteopetrosis, un trastorno caracterizado por una disminucion de la resorcion osea, sin mostrar ningunas anormalidades morfologicas o funcionales obvias en otros tejidos o celulas (Soriano, et al.; 1991, Cell, 64, 693-702). El fenotipo osteopetrotico de ratones src--- es autonomo celularmente y resulta de defectos en los osteoclastos maduros, que normalmente expresan altos niveles de protema de Src (Horne, et al.; 1991, Cell, 119, 1003-1013). Al limitar la eficacia de tirosina cinasa Src, que desencadena la actividad de los osteoclastos e inhibe los osteoblastos, se cree que los inhibidores de Src reducen la rotura de huesos y fomentan la formacion osea. Debido a que los osteoclastos normalmente expresan altos niveles de Src, la inhibicion de la actividad de cinasa Src podna ser util en el tratamiento de la osteoporosis (Missbach, et al.; 1999, Bone, 24, 437-449). Asf, los inhibidores de PTK de la divulgacion que modulan la actividad de Src son utiles para tratar la osteoporosis.
Segun se describe en la presente memoria, un compuesto de la divulgacion se puede usar para proteger contra o prevenir la obesidad en un individuo. A fin de proteger contra la obesidad, el compuesto se puede administrar antes
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
del desarrollo de la obesidad en un individuo. Alternativamente, el compuesto se puede usar para tratar la obesidad en un individuo. Un compuesto de la divulgacion puede estar implicado en la modulacion de una cascada de senalizacion de cinasa, p. ej., un inhibidor de cinasa, un inhibidor no competitivo con ATP, un inhibidor de tirosina cinasa, un inhibidor de protema tirosina fosfatasa o un inhibidor de protema tirosina fosfatasa 1B.
La obesidad esta asociada con la diabetes y el incremento de la resistencia a insulina en tejidos sensibles a insulina, tales como el musculo esqueletico, el hngado y el tejido adiposo blanco (Klaman, et al.; 2000, Mol. Cell. Biol., 20, 5479-5489). La insulina representa un papel cntico en la regulacion de la homeostasis de glucosa, el metabolismo lipfdico y el balance energetico. La senalizacion de insulina se inicia mediante la union de insulina al receptor de insulina (IR, por sus siglas en ingles), una tirosina cinasa receptora. La union de insulina provoca una cascada de episodios de fosforilacion, comenzando con la autofosforilacion del IR sobre multiples residuos de tirosilo. La autofosforilacion potencia la actividad de la cinasa IR y desencadena episodios de senalizacion aguas abajo. Los efectos estimulantes de las protema tirosina cinasas y los efectos inhibidores de protema tirosina fosfatasas definen en gran parte la accion de la insulina. La senalizacion apropiada de insulina minimiza fluctuaciones grandes en las concentraciones de glucosa en sangre y asegura un aporte adecuado de glucosa a las celulas. Puesto que la estimulacion de insulina conduce a multiples episodios de fosforilacion de tirosilo, la actividad potenciada de una o mas protema tirosina fosfatasas (PTP, por sus siglas en ingles) podna conducir a resistencia a insulina, que puede conducir a obesidad. En efecto, el incremento de la actividad de PTP se ha presentado en varios estados resistentes a insulina, incluyendo la obesidad (Ahmad, et al.; 1997, Metabolism, 46,1140-1145). Asf, sin querer limitarse por una teona, la administracion de un compuesto de la divulgacion modula la actividad de cinasas (p. ej., PTP), tratando de ese modo la obesidad en un individuo.
La senalizacion de insulina comienza con la activacion del IR a traves de la fosforilacion de tirosina y culmina en la absorcion de glucosa en las celulas por el transportador de glucosa, GLUT4 (Saltiel y Kahn; 2001, Nature, 414, 799806). A continuacion, el IR activado se debe desactivar y devolver al estado basal, un proceso que se cree que implica la protema tirosina fosfatasa-1B (PTP-1B) (Ahmad, et al; 1997, J. Biol. Chem., 270, 20503-20508). La perturbacion del gen que codifica PTP-1B en ratones da como resultado sensibilidad a insulina y un incremento de la resistencia a obesidad inducida por la dieta (Elchebly, et al.; 1999, Science, 283, 1544-1548; Klaman, et al.; 2000, Mol. Cell. Biol., 20, 5479-5489). La disminucion de la adiposidad en ratones deficientes en PTP-1B se debfa a una notable reduccion en la masa de celulas grasas sin una disminucion en el numero de adipocitos (Klaman, et al.;
2000, Mol. Cell. Biol., 20, 5479-5489). Por otra parte, la magrez en ratones deficientes en PTP-1B estaba acompanada por un incremento en la tasa metabolica basal y el gasto energetico total, sin una alteracion notable de la expresion de mRNA de protemas de desacoplamiento. La perturbacion del gen de PTP-1B demostro que alterar la actividad de PTP-1B puede modular la senalizacion de insulina y la obesidad inducida por la dieta in vivo. Asf, sin querer limitarse por una teona, la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la senalizacion de insulina (p. ej., la actividad de PTP-1B) es util para tratar la obesidad en un individuo.
Segun se describe en la presente memoria, un compuesto de la divulgacion se puede usar para proteger contra o prevenir la diabetes en un individuo. A fin de proteger contra la diabetes, el compuesto se puede administrar antes del desarrollo de la diabetes en un individuo. Alternativamente, el compuesto se puede usar para tratar la diabetes en un individuo. El compuesto de la divulgacion puede estar implicado en la modulacion de una cascada de senalizacion de cinasa, p. ej. un inhibidor de cinasa, un inhibidor no competitivo con ATP, un inhibidor de tirosina cinasa, un inhibidor de fosfatasa y homologo de tensina en el cromosoma 10 (PTEN, por sus siglas en ingles) o un inhibidor de inositol 5'-fosfatasa 2 que contiene homologfa de secuencia 2 (SHIP2, por sus siglas en ingles).
La diabetes mellitus tipo 2 (T2DM, por sus siglas en ingles) es un trastorno del metabolismo energetico desregulado. El metabolismo energetico esta controlado en gran parte por la hormona insulina, un potente agente anabolico que promueve la smtesis y el almacenamiento de protemas, carbohidratos y lfpidos, e inhibe su descomposicion y liberacion de nuevo a la circulacion. La accion de la insulina se inicia mediante la union a su receptor de tirosina cinasa, lo que da como resultado la autofosforilacion y el incremento de la actividad catalftica de la cinasa (Patti, et al.; 1998, J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. 9, 89-109). La fosforilacion de tirosina hace que las protema del sustrato receptor de insulina (IRS, por sus siglas en ingles) interactuen con la subunidad reguladora p85 de fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K), conduciendo a la activacion de la enzima y su eleccion como diana para una localizacion subcelular espedfica, dependiendo del tipo de celula. La enzima genera el producto lipfdico 3,4,5-trisfosfato de fosfatidilinositol (PtdIns(3,4,5)P3), que regula la localizacion y la actividad de numerosas protemas (Kido, et al.; 2001, J. Clin. Endocrinol. Metab., 86, 972-979). La PI3K tiene un papel esencial en la absorcion y el almacenamiento de glucosa estimulados por insulina, la inhibicion de la lipolisis y la regulacion de la expresion de genes hepaticos (Saltiel, et al.;
2001, Nature, 414, 799-806). La sobreexpresion de formas dominantes-interferentes de PI3K puede bloquear la absorcion de glucosa y la translocacion del transportador de glutamato cuatro, GLUT4, a la membrana plasmatica (Quon, et al.; 1995, Mol. Cell. Biol., 15, 5403-5411). Asf, la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la actividad de una cinasa (p. ej. PI3K), y por lo tanto da como resultado un incremento de la absorcion de glucosa, es util para tratar la diabetes.
PTEN es un importante regulador de la senalizacion de PI3K en muchos tipos de celulas, y funciona como un supresor de tumores debido al antagonismo de las actividades antiapoptotica, proliferativa e hipertrofica de la ruta de PI3K (Goberdhan, et al.; 2003, Hum. Mol. Genet., 12, R239-R248; Leslie, et al.; 2004, J. Biochem., 382, 1-11). Aunque sin querer limitarse por una teona, se cree que PTEN atenua la ruta de PI3K mediante desfosforilacion de la
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
molecula de PtdIns(3,4,5)P3, degradando este importante segundo mensajero lipfdico hasta PtdIns(4,5)P2. En un estudio reciente, la reduccion de la protema de PTEN endogena en 50% usando RNA interferente pequeno (siRNA) potenciaba los incrementos dependientes de insulina en los niveles de PtdIns(3,4,5)P3, y la absorcion de glucosa (Tang, et al.; 2005, J. Biol. Chem., 280, 22523-22529). Asf, sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la actividad de PTEN, y por lo tanto da como resultado un incremento en la absorcion de glucosa, es util para tratar la diabetes.
Los niveles de PtdIns(3,4,5)P3 tambien son controlados por la familia de protemas de inositol 5'-fosfatasa que contiene homologfa de SRC 2 (SH2) (SHIP), SHIP1 y SHIP2 (Lazar and Saltiel; 2006, Nature Reviews, 5, 333-342). SHIP2, expresada en musculo esqueletico, entre otros tejidos sensibles a insulina, cataliza la conversion de PtdIns(3,4,5)P3 en PtdIns(3,4)P2 (Pesesse, et al.; 1997; Biochem Biophys. Res. Commun., 239, 697-700; Backers, et al.; 2003, Adv. Enzyme Regul., 43, 15-28; Chi, et al.; 2004, J. Biol. Chem., 279, 44987-44995; Sleeman, et al.; 2005, Nature Med., 11, 199-205). La sobreexpresion de SHIP2 reducfa notablemente los niveles de PtdIns(3,4,5)P3 estimulados por insulina, de acuerdo con la capacidad propuesta de la SHIP2 para atenuar la activacion de efectores aguas abajo de PI3K (Ishihara, et al.; 1999, Biochem. Biophys. Res. Commun., 260, 265-272). Asf, sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la actividad de SHIP2, y por lo tanto da como resultado un incremento en la absorcion de glucosa, es util para tratar la diabetes.
Segun se describe en la presente memoria, un compuesto de la divulgacion se puede usar para proteger contra o prevenir una enfermedad ocular en un individuo. A fin de proteger contra la enfermedad ocular, el compuesto se puede administrar antes del desarrollo de la enfermedad ocular en un individuo. Alternativamente, el compuesto se puede usar para tratar una enfermedad ocular en un individuo, p. ej. degeneracion macular, retinopatfa y edema macular. El compuesto de la divulgacion puede estar implicado en la modulacion de una cascada de cinasa, p. ej. un inhibidor de cinasa, un inhibidor no competitivo con ATP, un inhibidor de tirosina cinasa, p. ej. un inhibidor de tirosina cinasa receptora de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF, por sus siglas en ingles).
Se puede producir una neovascularizacion que amenaza la vision de la cornea fisiologicamente avascular. Las retinopatfas proliferativas, principalmente la retinopatfa diabetica y la degeneracion macular asociada a la edad, se caracterizan por un incremento en la permeabilidad vascular, que conduce a edema retinal y acumulacion de fluido subretinal, y a la proliferacion de nuevos vasos que son propensos a hemorragia. La angiogenesis, la formacion de nuevos vasos sangumeos a partir de capilares preexistentes, en una parte integral tanto del desarrollo normal como de numerosos procesos patologicos. El VEGF, un mediador fundamental de la compleja cascada de angiogenesis y un potente factor de permeabilidad, es una diana atractiva para nuevos tratamientos. El VEGF es el ligando para dos receptores de tirosina cinasa unidos a la membrana, VEGFR-1 y VEGFR-2. La union al ligando desencadena la dimerizacion y la transfosforilacion de VEGFR con la posterior activacion de un dominio de tirosina cinasa intracelular. El consiguiente eje de senalizacion intracelular da como resultado proliferacion, migracion y supervivencia de celulas endoteliales vasculares. Asf, sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula una actividad de cinasa, p. ej. actividad de tirosina cinasa, y da como resultado la inhibicion de la angiogenesis y/o neovascularizacion, es util para tratar una enfermedad ocular, p. ej. degeneracion macular, retinopatfa y/o edema macular.
La degeneracion macular se caracteriza por fuga retinal (un incremento en la permeabilidad vascular) mediada por VEGF y por el crecimiento anormal de pequenos vasos sangumeos en la parte posterior del ojo (angiogenesis). El VEGF se ha identificado en membranas neovasculares tanto en la retinopatfa diabetica como en la degeneracion macular asociada a la edad, y los niveles intraoculares del factor se correlacionan con la gravedad de la neovascularizacion en la retinopatfa diabetica (Kvanta, et al.; 1996, Invest. Ophthal. Vis. Sci., 37, 1929-1934.; Aiello et al., 1994, N. Engl. J. Med., 331, 1480-1487). El antagonismo terapeutico de VEGF en estos modelos da como resultado una inhibicion significativa de la neovascularizacion tanto retinal como coroidal, asf como una reduccion en la permeabilidad vascular (Aiello, et al.; 1995, Proe. Natl. Acad. Sci. USA., 92, 10457-10461; Krzystolik, et al.; 2002, Arch. Ophthal., 120, 338-346; Qaum, et al.; 2001, Invest. Ophthal. Vis. Sci., 42, 2408-2413). Asf, sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la actividad de VEGF, y da como resultado la inhibicion de la angiogenesis y/o la neovascularizacion, es util para tratar una enfermedad ocular, p. ej. degeneracion macular, retinopatfa y/o edema macular.
Los compuestos de la divulgacion se usan en metodos para tratar, prevenir o mejorar una apoplejfa en un individuo que tiene riesgo de sufrir una apoplejfa, esta sufriendo una apoplejfa o ha sufrido una apoplejfa. Los compuestos de la divulgacion son utiles en metodos para tratar a pacientes que se estan sometiendo a rehabilitacion posapopletica.
Una apoplejfa, tambien conocida como un accidente cerebrovascular (CVA, por sus siglas en ingles), es una lesion neurologica aguda por la que se interrumpe el suministro de sangre a una parte del cerebro debido bien al bloqueo de una arteria o bien a la rotura de un vaso sangumeo. La parte del cerebro en la que se interrumpe el suministro de sangre ya no recibe oxfgeno y/o nutrientes transportados por la sangre. Las celulas cerebrales se danan o se vuelven necroticas, deteriorando de ese modo la funcion en o desde esa parte del cerebro. El tejido cerebral deja de funcionar si se priva de oxfgeno durante mas de 60 a 90 segundos y despues de unos pocos minutos sufrira una lesion irreversible conduciendo posiblemente a una muerte del tejido, es decir, infarto.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Las apoplejfas se clasifican en dos tipos principales: isquemica, es dedr, bloqueo de un vaso sangumeo que alimenta el cerebro, y hemorragica, es dedr, sangrado en o alrededor del cerebro. La mayona de todas las apop^as son apop^as isquemicas. La apop^a isquemica se divide comunmente en apop^a trombotica, apoplejfa embolica, hipoperfusion sistemica (apop^a de Watershed) o trombosis venosa. En la apoplejfa trombotica, se desarrolla un proceso de formacion de trombo en la arteria afectada, el trombo, es decir, el coagulo de sangre, estrecha gradualmente la luz de la arteria, impidiendo de ese modo el flujo de sangre a tejido distal. Habitualmente, estos coagulos se forman alrededor de placas ateroscleroticas. Hay dos tipos de apoplejfas tromboticas, que se clasifican basandose en el tipo de vaso sobre el que se forma el trombo. La apoplejfa trombotica de vasos grandes implica las carotidas comun e interna, vertebral, y el drculo de Willis. La apoplejfa trombotica de vasos pequenos implica las arterias intracerebrales, las ramas del drculo de Willis, el tronco arterial cerebral medio y las arterias que surgen de la arteria vertebral y basilar distal.
Un trombo, aunque no sea oclusivo, puede conducir a una apoplejfa embolica si el trombo se rompe, punto en el que se convierte en un embolo. Un embolo se refiere a una partmula o residuo movil en la corriente sangumea arterial que se origina en cualquier parte. La apoplejfa embolica se refiere al bloqueo del acceso arterial a una parte del cerebro por un embolo. Un embolo es frecuentemente un coagulo de sangre, pero tambien puede ser una placa que se ha roto de un vaso sangumeo aterosclerotico o un numero de otras sustancias incluyendo grasa, aire e incluso celulas cancerosas. Debido a que un embolo surge de cualquier parte, una terapia local solo soluciona el problema temporalmente. Asf, se debe identificar la fuente del embolo. Hay cuatro categonas de apoplejfa embolica: aquellas con una fuente cardfaca conocida; aquellas con una fuente cardfaca o aortica potencial (procedentes de un ecocardiograma transtoracico o transesofagico); aquellas con una fuente arterial; y aquellas con una fuente desconocida.
La hipoperfusion sistemica es la reduccion del flujo sangumeo a todas las partes del cuerpo. Comunmente, se debe a un fallo de la bomba cardfaca procedente de paro cardfaco o arritmias, o procedente de una reduccion del gasto cardfaco como resultado de infarto de miocardio, embolismo pulmonar, efusion pericardica o sangrado. La hipoxemia (es decir, bajo contenido de oxfgeno en sangre) puede precipitar la hipoperfusion. Debido a que la reduccion en el flujo sangumeo es global, todas las partes del cerebro se pueden ver afectadas, especialmente las areas "de captacion" que son regiones de zonas fronterizas alimentadas por las arterias cerebrales principales. El flujo sangumeo a estas areas no se ha detenido necesariamente, pero en cambio se puede haber reducido hasta el punto de que se produzca dano cerebral.
Las venas del cerebro funcionan para drenar la sangre de vuelta al cuerpo. Cuando las venas estan ocluidas debido a trombosis, el drenaje de sangre se bloquea y la sangre retrocede hacia arriba, provocando asf un edema cerebral. Este edema cerebral puede dar como resultado apoplejfas tanto isquemicas como hemorragicas. Comunmente, esto se produce en la enfermedad rara trombosis venosa sinusal.
La apoplejfa se diagnostica en un individuo o paciente usando una o mas de una variedad de tecnicas conocidas en la especialidad, tales como, por ejemplo, examen neurologico, pruebas sangumeas, ecograffas de CT (sin mejoras por contraste), ecograffas de MRI, ecograffa Doppler y arteriograffa (es decir, roentgenograffa de las arterias despues de la inyeccion de material radioopaco en la corriente sangumea). Si se confirma una apoplejfa con el diagnostico por imagen, se realizan otros diversos estudios para determinar si hay una fuente periferica de embolos. Estos estudios incluyen, p. ej., un estudio de ultrasonidos/Doppler de las arterias carotidas (para detectar estenosis de la carotida); un electrocardiograma (ECG) y un ecocardiograma (para identificar arritmias y coagulos resultantes en el corazon que se pueden extender hasta los vasos cerebrales a traves de la corriente sangumea); un estudio Holter para identificar arritmias intermitentes y un angiograma de la vasculatura cerebral (si se piensa que se ha originado de un aneurisma o malformacion arteriovenosa).
Los compuestos utiles en estos metodos para tratar, prevenir o mejorar la apoplejfa o un smtoma asociado con la apoplejfa son compuestos que modulan una cascada de senalizacion de cinasa antes, durante o despues de una apoplejfa. En algunas realizaciones, el compuesto es un inhibidor de cinasa. Por ejemplo, el compuesto es un inhibidor de tirosina cinasa. En una realizacion, el inhibidor de tirosina cinasa es un inhibidor de Src. Por ejemplo, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar la apoplejfa o un smtoma asociado con la apoplejfa descrito en la presente memoria es un inhibidor alosterico de una cascada de senalizacion de cinasa antes, durante o despues de una apoplejfa. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar una apoplejfa o un smtoma asociado con la apoplejfa descrito en la presente memoria es un inhibidor no competitivo con ATP de una cascada de senalizacion de cinasa antes, durante o despues de una apoplejfa.
Se ha observado que la inhibicion de la actividad de Src proporciona proteccion cerebral durante la apoplejfa. (Vease Paul et al., Nature Medicine, vol. 7(2):222-227 (2001). Se ha observado que el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que se produce en respuesta a la lesion isquemica, promueve la permeabilidad vascular. Los estudios han mostrado que la cinasa Src regula la VP mediada por VEGF en el cerebro despues de una apoplejfa, y que la administracion de un inhibidor de Src antes o despues de la apoplejfa reduda el edema, mejoraba la perfusion cerebral y disminma el volumen de infarto despues de que se produjera una lesion. (Paul et al., 2001). Asf, la inhibicion de Src se puede usar en la prevencion, el tratamiento o la mejora de un dano secundario despues de una apoplejfa.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Los compuestos de la divulgacion previenen, tratan o mejoran la apop^a o un smtoma asociado con la apop^a. Smtomas de una apop^a incluyen entumecimiento o debilidad repentinos, especialmente en un lado del cuerpo; confusion o dificultad para hablar o entender el lenguaje repentinas; dificultad de vision repentina en uno o ambos ojos; dificultad repentina para caminar, mareos o perdida de equilibrio o coordinacion; o cefalea intensa repentina sin causa conocida.
Generalmente, hay tres fases de tratamiento para la apoplejfa: prevencion, terapia inmediatamente despues de la apoplejfa y rehabilitacion posapopletica. Las terapias para prevenir una primera apoplejfa o una recurrente se basan en tratar los factores de riesgo subyacentes para la apoplejfa, tales como, p. ej., hipertension, colesterol elevado, fibrilacion auricular y diabetes. Las terapias para la apoplejfa aguda tratan de detener una apoplejfa mientras esta ocurriendo al disolver rapidamente el coagulo de sangre que provoca una apoplejfa isquemica o al detener el sangrado de una apoplejfa hemorragica. La rehabilitacion posapopletica ayuda a los individuos a vencer las discapacidades que resultan del dano apopletico. La medicacion o la terapia farmacologica es el tratamiento mas comun para la apoplejfa. Las clases mas populares de farmacos usadas para prevenir o tratar la apoplejfa son los antitromboticos (p. ej., agentes antiplaquetarios y anticoagulantes) y tromboffticos. Los compuestos se administran a un paciente que tiene riesgo de sufrir una apoplejfa, esta sufriendo una apoplejfa o ha sufrido una apoplejfa en un momento antes, durante o despues, o cualquiera de sus combinaciones, de la presencia de una apoplejfa. Los compuestos de la divulgacion se administran solos, en composiciones farmaceuticas, o en combinacion con cualquiera de una variedad de tratamientos conocidos, tales como, por ejemplo, una medicacion antiplaquetaria (p. ej., aspirina, clopidogrel, dipiridamol), un anticoagulante (p. ej., warfarina) o una medicacion tombofftica (p. ej., activador de plasminogeno tisular (t-PA, por sus siglas en ingles), reteplasa, urocinasa, estreptocinasa, tenectaplasa, lanoteplasa o anistreplasa.
Los compuestos de la divulgacion se usan en metodos para tratar, prevenir, mejorar la aterosclerosis o un smtoma de la misma en un individuo que tiene riesgo de o sufre aterosclerosis.
La aterosclerosis es una enfermedad que afecta al vaso sangumeo arterial y se denomina comunmente un "endurecimiento" de las arterias. Esta provocada por la formacion de multiples placas dentro de las arterias. Las placas ateroscleroticas, aunque compensadas por el agrandamiento de la arteria, finalmente conducen a rupturas de placas y estenosis (es decir, estrechamiento) de la arteria, que, a su vez, conduce a un suministro de sangre insuficiente al organo que alimenta. Alternativamente, si el proceso de agrandamiento de la arteria compensatorio es excesivo, resulta un aneurisma neto. Estas complicaciones son cronicas, lentamente progresivas y acumulativas. Lo mas comunmente, una placa blanda se rompe repentinamente, provocando la formacion de un coagulo de sangre (es decir, un trombo) que rapidamente frena o detiene el flujo sangumeo, lo que, a su vez, conduce a la muerte de los tejidos alimentados por la arteria. Este episodio extremadamente grave se denomina infarto. Por ejemplo, la trombosis coronaria de una arteria coronaria provoca un infarto de miocardio, comunmente conocido como ataque cardfaco. Un infarto de miocardio se produce cuando una placa aterosclerotica se acumula lentamente en el revestimiento interno de una arteria coronaria y a continuacion se rompe repentinamente, ocluyendo totalmente la arteria e impidiendo el flujo sangumeo aguas abajo.
La aterosclerosis y el infarto de miocardio agudo se diagnostican en un paciente usando cualquiera de una variedad de pruebas clmicas y/o de laboratorio tales como examen ffsico, examen radiologico o ultrasonico y analisis de sangre. Por ejemplo, un medico o profesional clmico puede escuchar las arterias de un individuo para detectar un ruido sibilante anormal, llamado soplo. Un soplo se puede escuchar mediante un estetoscopio cuando se pone sobre la arteria afectada. Alternativamente, o ademas, el profesional clmico o el medico puede comprobar anormalidades del pulso tales como debilidad o ausencia, p. ej., en la pierna o el pie. El medico o profesional clmico puede realizar un analisis de sangre para comprobar los niveles de colesterol o para comprobar los niveles de enzimas cardfacas, tales como creatina cinasa, troponina y lactato deshidrogenasa, para detectar anormalidades. Por ejemplo, las subunidades de troponina I o T, que son muy espedficas para el miocardio, aumentan antes de que se desarrolle una lesion permanente. Una troponina positiva en el entorno de un dolor toracico puede predecir con precision una alta probabilidad de un infarto de miocardio en el fututo proximo. Otras pruebas para diagnosticar la aterosclerosis y/o el infarto de miocardio incluyen, por ejemplo, EKG (electrocardiograma) para medir el ritmo y la regularidad del latido cardfaco de un individuo; rayos X del torax, que miden el mdice maleolar/braquial, que compara la presion sangumea en el tobillo con la presion sangumea en el brazo; analisis ultrasonico de las arterias; ecograffa de CT de areas de interes; angiograffa; una prueba de esfuerzo, ecograffa cardfaca nuclear; y diagnostico por imagen de resonancia magnetica (MRI, por sus siglas en ingles) y ecograffa cardfaca por tomograffa de emision de positrones (PET, por sus siglas en ingles).
Los compuestos utiles en estos metodos para tratar, prevenir o mejorar la aterosclerosis o un smtoma de la misma son compuestos que modulan una cascada de senalizacion de cinasa en un paciente con riesgo de o que sufre aterosclerosis. En algunas realizaciones, el compuesto es un inhibidor de cinasa. Por ejemplo, el compuesto es un inhibidor de tirosina cinasa. En una realizacion, el inhibidor de tirosina cinasa es un inhibidor de Src. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar la aterosclerosis o un smtoma de la misma descrito en la presente memoria es un inhibidor alosterico de una cascada de senalizacion de cinasa implicada en la aterosclerosis. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar la aterosclerosis o un smtoma asociado con la aterosclerosis descrito en la presente memoria es un inhibidor no competitivo con ATP de una cascada de senalizacion de cinasa implicada en la aterosclerosis.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Se cree que la transduccion de senales celulares por Src representa un papel clave en el incremento de la permeabilidad de los vasos, conocida como permeabilidad vascular (VP, por sus siglas en ingles). Se ha observado que el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que se produce en respuesta a la lesion isquemica, incluyendo, p. ej., infarto de miocardio, promueve la permeabilidad vascular. Los estudios han mostrado que la inhibicion de la cinasa Src disminuye la VP mediada por VEGF. (Vease Parang y Sun, Expert Opin. Ther. Patents, vol. 15(9): 1183-1206 (2005). Ratones tratados con un inhibidor de Src demostraban un dano tisular reducido asociado con trauma o lesion de los vasos sangumeos despues de un infarto de miocardio, en comparacion con ratones no tratados. (Veanse p. ej., las Publicaciones de Patente de EE. UU. N° 20040214836 and y 20030130209 de Cheresh et al.). Asf, la inhibicion de Src puede ser util en la prevencion, el tratamiento o la mejora de dano secundario despues de una lesion debida a aterosclerosis, tal como, por ejemplo, infarto de miocardio.
Los compuestos de la divulgacion previenen, tratan o mejoran la apoplejfa o un smtoma asociado con la aterosclerosis. Generalmente, la aterosclerosis no produce smtomas hasta que estrecha mucho la arteria y restringe el flujo sangumeo, o hasta que provoca una obstruccion repentina. Los smtomas dependen de donde se desarrollen las placas y el estrechamiento, p. ej., en el corazon, el cerebro, otros organos vitales y las piernas o casi en cualquier parte del cuerpo. Los smtomas iniciales de la aterosclerosis pueden ser dolor o calambres cuando el cuerpo requiere mas oxfgeno, por ejemplo durante el ejercicio, cuando una persona puede sentir dolor toracico (angina) debido a la falta de oxfgeno al corazon o calambres en las piernas debido a la falta de oxfgeno a las piernas. El estrechamiento de las arterias que suministran sangre al cerebro puede provocar mareos o ataques isquemicos transitorios (TIA, por sus siglas en ingles), donde los smtomas y signos de una apoplejfa duran menos de 24 horas. Tfpicamente, estos smtomas se desarrollan gradualmente.
Los smtomas del infarto de miocardio se caracterizan por grados variables de dolor toracico, malestar, sudoracion, debilidad, nauseas, vomitos y arritmias, provocando a veces perdida de conocimiento. El dolor toracico es el smtoma mas comun del infarto de miocardio agudo y a menudo se describe como una sensacion de opresion, presion o aplastamiento. El dolor puede irradiarse a la mandfbula, el cuello, los brazos, la espalda y el epigastrio, lo mas a menudo al brazo izquierdo o el cuello. El dolor toracico esta provocado mas probablemente por un infarto de miocardio cuando dura mas de 30 minutos. Los pacientes que sufren un infarto de miocardio pueden exhibir falta de aliento (disnea) especialmente si la disminucion en la contractilidad del miocardio debida al infarto es suficiente para provocar insuficiencia ventricular izquierda con congestion pulmonar o incluso edema pulmonar.
Los compuestos de la divulgacion se administran solos, en composiciones farmaceuticas o en combinacion con cualquiera de una variedad de tratamientos conocidos para la aterosclerosis, tales como, por ejemplo, farmacos que reducen el colesterol (p. ej., estatinas), medicaciones antiplaquetarias o anticoagulantes.
Los compuestos de la divulgacion se usan en metodos para tratar, prevenir, mejorar el dolor neuropatico, tal como dolor neuropatico cronico, o un smtoma del mismo en un individuo que tiene riesgo de sufrir, esta sufriendo o ha sufrido dolor neuropatico.
El dolor neuropatico, tambien conocido como neuralgia, es cualitativamente diferente del dolor nociceptivo normal. El dolor neuropatico habitualmente se presenta como sensaciones continuas de quemazon y/u "hormigueo" y/o "descarga electrica". La diferencia entre el dolor nociceptivo y el dolor neuropatico se debe al hecho de que el dolor nociceptivo "normal" estimula solamente los nervios del dolor, mientras que la neuropatfa a menudo da como resultado la estimulacion de los nervios tanto del dolor como sensoriales no relacionados con el dolor (p. ej., nervios que responden al tacto, el calor, el fno) en la misma area, produciendo de ese modo senales que la medula espinal y el cerebro normalmente no esperan recibir.
El dolor neuropatico es un estado de dolor cronico complejo que habitualmente esta acompanado por una lesion tisular. Con el dolor neuropatico, las propias fibras nerviosas pueden estar danadas, ser disfuncionales o estar lesionadas. Estas fibras nerviosas danadas envfan senales incorrectas a otros centros del dolor. El impacto de la lesion de las fibras nerviosas incluye un cambio en la funcion nerviosa tanto en la zona de la lesion como en areas alrededor de la lesion.
El dolor neuropatico se diagnostica en un individuo o paciente usando una o mas de una variedad de tecnicas de laboratorio y/o clmicas conocidas en la especialidad, tales como, por ejemplo, un examen ffsico.
Los compuestos utiles en estos metodos para tratar, prevenir o mejorar el dolor neuropatico, tal como dolor neuropatico cronico, o un smtoma asociado con el dolor neuropatico son compuestos que modulan una cascada de senalizacion de cinasa implicada en el dolor neuropatico. En algunas realizaciones, el compuesto es un inhibidor de cinasa. Por ejemplo, el compuesto es un inhibidor de tirosina cinasa, En una realizacion, el inhibidor de tirosina cinasa es un inhibidor de Src. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar el dolor neuropatico o un smtoma del mismo es un inhibidor alosterico de un cascada de senalizacion de cinasa implicada en el dolor neuropatico. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar el dolor neuropatico o un smtoma del mismo es un inhibidor no competitivo con aTp de una cascada de senalizacion de cinasa implicada en el dolor neuropatico.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Se ha observado que c-Src regula la actividad de receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA). (Vease Yu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. uSa, vol. 96:7697-7704 (1999). Los estudios han mostrado que Pp2, un inhibidor de cinasa Src de bajo peso molecular, disminuye la fosforilacion de la subunidad NM2 del receptor de NMDA. (Vease Guo et al., J. Neuro., vol. 22:6208-6217 (2002). Asf, la inhibicion de Src que, a su vez, inhibe la actividad de receptores de NMDA, puede ser util en la prevencion, el tratamiento o la mejora del dolor neuropatico, tal como dolor neuropatico cronico.
Los compuestos de la divulgacion previenen, tratan o mejoran el dolor neuropatico, tal como dolor neuropatico cronico, o un smtoma asociado con el dolor neuropatico. Smtomas de dolor neuropatico incluyen dolor punzante y ardiente, parestesia y entumecimiento.
Los compuestos de la divulgacion se administran solos, en composiciones farmaceuticas, o en combinacion con cualquiera de una variedad de tratamientos conocidos, tales como, por ejemplo, analgesicos, opioides, antidepresivos tridclicos, anticonvulsivos e inhibidores de la reabsorcion de serotonina-norepinefrina.
Los compuestos de la divulgacion se usan en metodos para tratar, prevenir, mejorar la hepatitis B o un smtoma de la misma en un individuo que tiene riesgo de sufrir hepatitis B.
El virus de la hepatitis B, un miembro de la familia de Hepadnavirus, consiste en una partroula de nuclocapside protemica que contiene el genoma viral en la forma de DNA de doble hebra con regiones de una sola hebra y una envuelta externa basada en lfpidos con protemas embebidas. Las protemas de la envuelta estan implicadas en la union viral y la liberacion en celulas sensibles. La capside interna resitua el genoma de DNA en el nucleo de la celula donde se transcriben los mRNAs virales. Se forman tres transcritos subgenomicos que codifican las protemas de la envuelta, junto con un transcrito que codifica la protema X. Se transcribe un cuarto RNA pregenomico, que se exporta al citosol y traduce la polimerasa viral y las protemas de la nucleocapside. La polimerasa y el RNA pregenomico estan encapsidados en partroulas de ensamblaje de la nucleocapside, donde se produce la transcripcion inversa del RNA pregenomico en DNA genomico mediante la protema polimerasa. La partroula de la nucleocapside madura sale entonces de la celula a traves de rutas secretoras normales, adquiriendo una envuelta por el camino.
La hepatitis B es uno de unos pocos virus no retrovirales conocidos que emplean transcripcion inversa como parte del proceso de replicacion. Otros virus que usan transcripcion inversa incluyen, p. ej., HTLV o HIV.
Durante la infeccion con HBV, la respuesta inmunitaria del huesped es responsable tanto del dano hepatocelular como de la eliminacion viral. Aunque la respuesta inmunitaria innata no representa un papel significativo en estos procesos, la respuesta inmunitaria adaptativa, particularmente linfocitos T citotoxicos (CTL, por sus siglas en ingles) espedficos para el virus, contribuye a casi toda la lesion hepatica asociada con la infeccion por HBV. Al destruir las celulas infectadas y al producir citocinas antivirales capaces de purgar el HBV de hepatocitos viables, los CTL tambien eliminan el virus. Aunque el dano hepatico es iniciado y mediado por los CTL, las celulas inflamatorias no espedficas para el antfgeno pueden empeorar la inmunopatologfa inducida por CTL y las plaquetas pueden facilitar la acumulacion de CTL en el fugado.
La hepatitis B se diagnostica en un paciente usando cualquiera de una variedad de pruebas clmicas y/o de laboratorio tales como examen ffsico y analisis de sangre y suero. Por ejemplo, se ensaya en sangre o suero la presencia de antfgenos virales y/o anticuerpos producidos por el huesped. En una prueba comun para la hepatitis B, se usa la deteccion del antfgeno superficial de la hepatitis B (HBsAg, por sus siglas en ingles) para cribar la presencia de infeccion. Es el primer antfgeno viral detectable en aparecer durante la infeccion con este virus; sin embargo, inicialmente en una infeccion, este antfgeno puede no estar presente y puede ser indetectable posteriormente en la infeccion ya que esta siendo eliminado por el huesped. Durante esta 'ventana' en la que el huesped sigue infectado pero esta eliminando satisfactoriamente el virus, los anticuerpos de IgM para el antfgeno de la nucleocapside la hepatitis B (anti-HBc IGM) pueden ser la unica evidencia serologica de enfermedad.
Poco despues de la aparicion del HBsAg, aparecera otro antfgeno llamado antfgeno e de la hepatitis B (HBeAg, por sus siglas en ingles). Tradicionalmente, la presencia de HBeAg en un suero de huesped se asocia con velocidades muy superiores de replicacion viral; sin embargo, algunas variantes del virus de la hepatitis B no producen el antfgeno "e" en absoluto. Durante el transcurso natural de una infeccion, el HBeAg se puede eliminar, y surgiran inmediatamente despues anticuerpos para el antfgeno "e" (anti-HBe). Esta conversion se asocia habitualmente con una disminucion drastica en la replicacion viral. Si el huesped es capaz de eliminar la infeccion, finalmente el HBsAg se hara indetectable y estara seguido por anticuerpos para el antfgeno superficial de la hepatitis B (anti-HBs). Una persona negativa a HBsAg pero positiva a anti-HBs bien ha eliminado una infeccion o bien ha sido vacunada previamente. Un numero de personas que son positivas a HBsAg pueden tener muy poca multiplicacion viral, y de aim que puedan tener poco riesgo de complicaciones a largo plazo o de transmitir la infeccion a otros.
Compuestos utiles en estos metodos para tratar, prevenir o mejorar la hepatitis B o un smtoma de la misma son compuestos que modulan una cascada de senalizacion de cinasa en un paciente con riesgo de o que sufre hepatitis B. En algunas realizaciones, el compuesto es un inhibidor de cinasa. Por ejemplo, el compuesto es un inhibidor de tirosina cinasa. En una realizacion, el inhibidor de tirosina cinasa es un inhibidor de Src. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar la hepatitis B o un smtoma de la misma descrito en
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
la presente memoria es un inhibidor alosterico de una cascada de senalizacion de cinasa implicada en la hepatitis B. Preferiblemente, el compuesto usado en los metodos para tratar, prevenir o mejorar la hepatitis B o un smtoma asociado con la hepatitis B descrito en la presente memoria es un inhibidor no competitivo con ATP de una cascada de senalizacion de cinasa implicada en la hepatitis B.
La Src representa un papel en la replicacion del virus de la hepatitis B. El factor de transcripcion viralmente codificado HBx activa Src en una etapa que se requiere desde la propagacion del virus HBV. (Vease, p. ej., Klein et al., EMBO J., vol. 18:5019-5027 (1999); Klein et al., Mol. Cell. Biol., vol. 17:6427-6436 (1997). Asf, la inhibicion de Src, que, a su vez, inhibe la propagacion mediada por Src del virus HBV, puede ser util en la prevencion, el tratamiento o la mejora de la hepatitis B o un smtoma de la misma.
Los compuestos de la divulgacion previenen, tratan o mejoran la hepatitis B o un smtoma asociado con la hepatitis B. Los smtomas de la hepatitis B se desarrollan tfpicamente en 30-180 dfas desde la exposicion al virus. Sin embargo, hasta la mitad de todas las personas infectadas con el virus de la hepatitis B no tiene smtomas. Los smtomas de la hepatitis B a menudo se comparan con la gripe e incluyen, p. ej., perdida de apetito; fatiga; nauseas y vomitos, prurito en todo el cuerpo; dolor sobre el hugado (p. ej., sobre el lado derecho del abdomen, bajo la jaula toracica inferior), ictericia y cambios en las funciones excretoras.
Los compuestos de la divulgacion se administran solos, en composiciones farmaceuticas o en combinacion con cualquiera de una variedad de tratamientos conocidos para la hepatitis B, tales como, por ejemplo, interferon a, lamivudina (Epivir-HBV) y baraclude (entecavir).
Segun se describe en la presente memoria, los compuestos de la divulgacion se pueden usar para regular la actividad del sistema inmunitario en un individuo, protegiendo o previniendo de ese modo una enfermedad autoinmunitaria, p. ej., artritis reumatoide, esclerosis multiple, septicemia y lupus asf como rechazo de trasplantes y enfermedades alergicas. Alternativamente, el compuesto se puede usar para tratar una enfermedad autoinmune en un individuo. Por ejemplo, el compuesto puede dar como resultado la reduccion en la gravedad de los smtomas o la detencion del proximo avance de la enfermedad autoinmunitaria en un individuo. El compuesto de la divulgacion puede estar implicado en la modulacion de una cascada de senalizacion de cinasa, p. ej., un inhibidor de cinasa, un inhibidor no competitivo con ATP, un inhibidor de tirosina cinasa, p. ej., un inhibidor de Src, un inhibidor de p59fyn (Fyn) o un inhibidor de p561ck (Lck).
Las enfermedades autoinmunitarias son enfermedades provocadas por un desajuste de la autotolerancia de modo que el sistema inmunitario adaptativo responde a autoantfgenos y media en el dano celular y tisular. Las enfermedades autoinmunitarias pueden ser espedficas de un organo (p. ej., tiroiditis o diabetes) o sistemicas (p. ej., lupus eritematoso sistemico). Las celulas T modulan la respuesta inmunitaria mediada por celulas en el sistema inmunitario adaptativo. Bajo condiciones normales, las celulas T expresan receptores antigenicos (receptores de celulas T) que reconocen fragmentos peptfdicos de protemas extranas unidas a moleculas propias del complejo principal de histocompatibilidad. Entre los episodios mas tempranos reconocibles despues de la estimulacion del receptor de celulas T (TCR, por sus siglas en ingles) estan la activacion de Lck y Fyn, que da como resultado la fosforilacion de TCR sobre residuos de tirosina dentro de motivos de activacion basados en tirosina inmunorreceptores (Zamoyska, et al.; 2003, Immunol. Rev., 191, 107-118). Las tirosina cinasas, tales como Lck (que es un miembro de la familia Src de protema tirosina cinasas) representan un papel esencial en la regulacion de la senalizacion celular y la proliferacion celular por residuos de tirosina fosforilantes de peptidos y protemas (Levitzki; 2001, Top. Curr. Chem., 211, 1-15; Longati, et al.; 2001, Curr. Drug Targets, 2, 41-55; Qian, y Weiss; 1997, Curr. Opin. Cell Biol., 9, 205-211). Asf, aunque sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula la actividad de una tirosina cinasa (p. ej., Src) es util en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.
Las tirosina cinasas lck y fyn se activan ambas en la ruta de TCR; asf, los inhibidores de lck y/o fyn tienen utilidad potencial como agentes autoinmunitarios (Palacios y Weiss; 2004, Oncogene, 23, 7990-8000). Lck y Fyn son expresadas predominantemente por celulas T a traves de la mayona de su vida. Los papeles de Lck y Fyn en el desarrollo de celulas T, la homeostasis y la activacion se ha demostrado mediante estudios en animales y lmeas celulares (Parang y Sun; 2005, Expert Opin. The. Patents, 15, 1183-1207). La activacion de Lck esta implicada en enfermedades autoinmunitarias y rechazo de trasplantes (Kamens, et al.; 2001, Curr. Opin. Investig. Drugs, 2, 12131219). Los resultados han mostrado que las lmeas celulares Jurkat lck (-) son incapaces de proliferar, producir citocinas y generar incrementos en el calcio intracelular, el fosfato de inositol y la fosforilacion de tirosina en respuesta a la estimulacion de receptores de celulas T (Straus y Weiss; 1992, Cell., 70, 585-593; Yamasaki, et al.; 1996, Mol. Cell. Biol, 16, 7151-7160). Por lo tanto, un agente que inhiba lck bloquera eficazmente la funcion de las celulas T, actuara como un agente inmunosupresor y tendra utilidad potencial en enfermedades autoinmunitarias, tales como artritis reumatoide, esclerosis multiple y lupus, asf como en el area del rechazo de trasplantes y las enfermedades alergicas (Hanke y Pollok; 1995, Inflammation Res., 44, 357-371). Asf, aunque sin querer limitarse por una teona, se establece como hipotesis que la administracion de un compuesto de la divulgacion que modula uno o mas miembros de la familia Src de protema tirosina cinasas (p. ej., lck y/o fyn) es util en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.
5
10
15
20
25
30
35
40
La divulgation se refiere a N-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetamida (Compuesto 1)
sustancialmente pura, y sales, solvatos, hidratos o profarmacos de la misma:
imagen2
(Compuesto 1, KX2-391).
La divulgacion tambien se refiere a dihidrocloruro de N-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetamida sustancialmente puro:
imagen3
La presente divulgacion proporciona composiciones y formulaciones que contienen impurezas limitadas. Los compuestos y las formulaciones de la presente divulgacion tienen una pureza mayor que aproximadamente 98,0% segun se determina mediante metodos conocidos en la especialidad, por ejemplo, HPLC. Preferiblemente, los compuestos y las formulaciones de la presente divulgacion tienen una pureza que varia de aproximadamente 99,0% a aproximadamente 100% (o cualquier valor dentro de dicho intervalo). Por ejemplo, tales compuestos, composiciones o formulaciones pueden tener una pureza de 98,1%, 98,2%, 98,3%, 98,4%, 98,5%, 98,6%, 98,7%, 98,8%, 98,9%, 99,0%, 99,1%, 99,2%, 99,3, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% o 99,9%.
A fin de provocar el maximo efecto farmacodinamico y terapeutico de las composiciones y formulaciones de la presente divulgacion, es beneficioso limitar los niveles de impurezas tales como cloruro de etilo y paladio. Estas impurezas pueden dar como resultado una toxicidad no deseable.
Preferiblemente, las composiciones y formulaciones de la divulgacion contienen menos de 2% de impurezas. Por ejemplo, las composiciones y formulaciones de la divulgacion contienen menos de 2% de una cualquiera de las siguientes impurezas, o combinaciones de las mismas: cloruro de etilo, etanol, acetato de etilo, heptano, anisol y paladio.
La composition puede contener menos de 250 ppm de cloruro de etilo segun se determina mediante analisis del disolvente residual por cromatografia de gases del espacio libre superior. Los compuestos y las formulaciones de la divulgacion contienen cloruro de etilo en un intervalo de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 250 ppm (o cualquier valor dentro de dicho intervalo). Por ejemplo, las composiciones contienen menos de 200 ppm, menos de 200 ppm, menos de 150 ppm, menos de 100 ppm o menos de 50 ppm de cloruro de etilo.
Los compuestos y las formulaciones de la presente divulgacion contienen menos de aproximadamente 100 ppm de paladio. Los compuestos y las formulaciones de la divulgacion contienen paladio en un intervalo de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 100 ppm (o cualquier valor dentro de dicho intervalo). Por ejemplo, las composiciones contienen menos de 75 ppm, menos de 50 ppm, menos de 30 ppm, menos de 20 ppm, menos de 10 ppm o menos de 5 ppm de paladio.
Definiciones
Por comodidad, se recogen aqm ciertos terminos usados en la memoria descriptiva, los ejemplos y las reivindicaciones adjuntas.
Las protema cinasas son una gran clase de enzimas que catalizan la transferencia del fosfato y desde ATP hasta el grupo hidroxilo en la cadena lateral de Ser/Thr o Tyr en protemas y peptidos que estan mtimamente implicados en el control de diversas funciones celulares importantes, quizas lo mas notablemente: transduction de senales, diferenciacion y proliferation. Se estima que hay aproximadamente 2.000 protema cinasas distintas en el cuerpo humano, y, aunque cada una de estas fosforila sustratos protemicos/peptidicos particulares, todas se unen al mismo ATP del segundo sustrato en un bolsillo muy conservado. Aproximadamente 50% de los productos oncogenicos conocidos son protema tirosina cinasas (PTK), y se ha mostrado que su actividad de cinasa conduce a transformation celular.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Las PTK se pueden clasificar en dos categonas, las PTK receptoras membranarias (p. ej. PTK receptoras de factores de crecimiento) y las PTK no receptoras (p. ej. la familia Src de productos protooncogenicos y la cinasa de adherencia focal (FAK)). La hiperactivacion de Src se ha presentado en un numero de canceres humanos, incluyendo los de colon, mama, pulmon, vejiga urinaria y piel, asf como en cancer gastrico, tricoleucemia y neuroblastoma.
"Inhibe uno o mas componentes de una cascada de senalizacion de protema cinasa" significa que uno o mas componentes de la cascada de senalizacion de cinasa son afectados de modo que el funcionamiento de la celula cambie. Componentes de una cascada de senalizacion de protema cinasa incluyen cualesquiera protemas implicadas directamente o indirectamente en la ruta de senalizacion de cinasa incluyendo segundos mensajeros y dianas aguas arriba y aguas abajo.
"Tratar" incluye cualquier efecto, p. ej., disminuir, reducir, modular o eliminar, que de como resultado la mejora de la afeccion, la enfermedad, el trastorno, etc. "Tratar" o "tratamiento" de un estado patologico incluye: inhibir el estado patologico, es decir, detener el desarrollo del estado patologico o sus smtomas clmicos; o aliviar el estado patologico, es decir, provocar una regresion temporal o permanente del estado patologico o sus smtomas clmicos.
"Prevenir" el estado patologico incluye hacer que los smtomas clmicos del estado patologico no se desarrollen en un individuo que puede estar expuesto o predispuesto al estado patologico, pero todavfa no experimenta o presenta smtomas del estado patologico.
"Estado patologico" significa cualquier enfermedad, trastorno, afeccion, smtoma o indicacion.
Segun se usa en la presente memoria, el termino "trastorno proliferativo celular" se refiere a afecciones en las que el crecimiento desregulado y/o anormal de celulas puede conducir al desarrollo de una afeccion o enfermedad no deseada, que puede ser cancerosa o no cancerosa, por ejemplo una afeccion psoriasica. Segun se usa en la presente memoria, los terminos "afeccion psoriasica" o "psoriasis" se refieren a trastornos que implican hiperproliferacion de queratinocitos, infiltracion de celulas inflamatorias y alteracion de citocinas.
En una realizacion, el trastorno de proliferacion celular es cancer. Segun se usa en la presente memoria, el termino "cancer" incluye tumores solidos, tales como canceres de pulmon, mama, colon, ovario, cerebro, tugado, pancreas, prostata, melanoma maligno, canceres de piel no melanomicos, asf como tumores y/o enfermedades malignas hematologicas, tales como leucemia y linfomas infantiles, mieloma multiple, enfermedad de Hodgkin, linfomas de origen linfocftico y cutaneo, leucemia aguda y cronica tal como leucemia linfoblastica aguda, mielodtica aguda o mielodtica cronica, neoplasma de celulas plasmaticas, neoplasma linfoide y canceres asociados con el sida.
Ademas de las afecciones psoriasicas, los tipos de enfermedades proliferativas que pueden ser tratados usando las composiciones de la presente divulgacion son quistes epidermicos y dermoides, lipomas, adenomas, hemangiomas capilares y cutaneos, linfangiomas, lesiones nevicas, teratomas, nefromas, miofibromatosis, tumores osteoplasticos, y otras masas displasticas y similares. Las enfermedades proliferativas pueden incluir displasias y trastornos similares.
Una "cantidad eficaz" de un compuesto de la divulgacion es la cantidad que, cuando se administra a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno, da como resultado la regresion de la enfermedad o el trastorno en el individuo. Asf, una cantidad eficaz de un compuesto es la cantidad que, cuando se administra a un individuo que tiene un trastorno de proliferacion celular, da como resultado la regresion del crecimiento celular en el individuo. La cantidad del compuesto divulgado que se ha de administrar a un individuo dependera del trastorno particular, el modo de administracion, los compuestos coadministrados, si los hay, y las caractensticas del individuo, tales como la salud general, otras enfermedades, la edad, el sexo, el genotipo, el peso corporal y la tolerancia a los farmacos. El experto podra determinar las dosificaciones apropiadas dependiendo de estos y otros factores.
Segun se usa en la presente memoria, el termino "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto, o una combinacion de compuestos, de la divulgacion eficaz cuando se administra solo o en combinacion como un agente antiproliferativo. Por ejemplo, una cantidad eficaz se refiere a una cantidad del compuesto presente en una formulacion o en un dispositivo medico suministrado a un paciente o individuo receptor suficiente para provocar actividad biologica, por ejemplo, actividad antiproliferativa, tal como, p. ej., actividad anticancerosa o actividad antineoplastica. Opcionalmente, la combinacion de compuestos es una combinacion sinergica. La sinergia, segun se describe, por ejemplo, por Chou y Talalay, Adv. Enzyme Regul. vol. 22, pp. 27-55 (1984), se produce cuando el efecto de los compuestos cuando se administran en combinacion es mayor que el efecto aditivo de los compuestos cuando se administran solo como un agente individual. En general, un efecto sinergico se demuestra lo mas claramente a concentraciones suboptimas de los compuestos. La sinergia puede ser en cuanto a una citotoxicidad inferior, o un incremento del efecto antiproliferativo, o algun otro efecto beneficioso de la combinacion en comparacion con los componentes individuales.
"Una cantidad terapeuticamente eficaz" significa la cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un marnffero para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar tal tratamiento para la enfermedad. La "cantidad terapeuticamente eficaz" variara dependiendo del compuesto, la enfermedad y su gravedad y la edad, el peso, etc., del mairnfero que se va a tratar.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Una cantidad terapeuticamente eficaz de uno o mas de los compuestos se puede formular con un vehuculo farmaceuticamente aceptable para la administracion a un ser humano o un animal. Segun esto, los compuestos o las formulaciones se pueden administrar, por ejemplo, a traves de vfas oral, parenteral o topica, para proporcionar una cantidad eficaz del compuesto. En realizaciones alternativas, los compuestos preparados segun la divulgacion se pueden usar para revestir o impregnar un dispositivo medico, p. ej., una endoprotesis vascular (“stent”).
El termino "cantidad profilacticamente eficaz" significa una cantidad eficaz de un compuesto o compuestos de la divulgacion que se administra para prevenir o reducir el riesgo de proliferacion celular no deseada.
"Efecto farmacologico", segun se usa en la presente memoria, abarca efectos producidos en el individuo que alcanzan el proposito pretendido de una terapia. En una realizacion, un efecto farmacologico significa que las indicaciones primarias del individuo que se trata se previenen, alivian o reducen. Por ejemplo, un efecto farmacologico sena uno que diera como resultado la prevencion, el alivio o la reduccion de indicaciones primarias en un individuo tratado. En otra realizacion, un efecto farmacologico significa que los trastornos o smtomas de las indicaciones primarias del individuo que se trata se previenen, alivian o reducen. Por ejemplo, un efecto farmacologico sena uno que diera como resultado la prevencion o reduccion de indicaciones primarias en un individuo tratado.
Los compuestos de la divulgacion que contienen nitrogenos se pueden convertir en N-oxidos mediante tratamiento con un agente oxidante (p. ej., acido 3-cloroperoxibenzoico (m-CPBA) y/o peroxidos de hidrogeno) para proporcionar otros compuestos de la divulgacion. Asf, se considera que todos los compuestos que contienen nitrogeno mostrados y reivindicados, cuando este permitido por la valencia y la estructura, incluyen el compuesto que se muestra y su derivado de N-oxido (que se puede indicar como N^O o N+-O"). Por otra parte, en otros casos, los nitrogenos de los compuestos de la divulgacion se pueden convertir en compuestos N-hidroxilados o N-alcoxilados. Por ejemplo, los compuestos N-hidroxilados se pueden preparar mediante la oxidacion de la amina originaria por un agente oxidante tal como m-CPBA. Tambien se considera que todos los compuestos que contienen nitrogeno mostrados y reivindicados, cuando este permitido por la valencia y la estructura, cubren tanto el compuesto que se muestra como sus derivados N-hidroxilado (es decir, N-OH) y N-alcoxilado (es decir, N-OR, en donde R es alquilo C1-6, alquenilo C1-6, alquinilo C1-6, carbociclo C3-14 o heterociclo de 3-14 miembros, sustituido o no sustituido).
"Ion conjugado" se usa para representar una especie pequena cargada negativamente tal como cloruro, bromuro, hidroxido, acetato y sulfato.
Un "grupo anionico", segun se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo que esta cargado negativamente a pH fisiologico. Grupos anionicos incluyen carboxilato, sulfato, sulfonato, sulfinato, sulfamato, tetrazolilo, fosfato, fosfonato, fosfinato o fosforotioato o equivalentes funcionales de los mismos. Se pretende que los "equivalentes funcionales" de grupos anionicos incluyan bioisosteros, p. ej., bioisosteros de un grupo carboxilato. Los bioisosteros abarcan tanto equivalentes bioisostericos clasicos como equivalente bioisostericos no clasicos. Los bioisosteros clasicos y no clasicos se conocen en la especialidad (vease, p. ej., Silverman, R. B. The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc.: San Diego, Calif., 1992, pp.19-23). En una realizacion, un grupo anionico es un carboxilato.
Los isotopos incluyen los atomos que tienen el mismo numero atomico pero diferentes numeros de masa. A modo de ejemplo general y sin limitacion, isotopos de hidrogeno incluyen tritio y deuterio, e isotopos de carbono incluyen C-13 y C-14.
Los compuestos descritos en la presente memoria pueden tener centros asimetricos. Los compuestos que contienen un atomo asimetricamente sustituido se pueden aislar en formas opticamente activas o racemicas. Se conoce bien en la especialidad como preparar formas opticamente activas, tal como mediante resolucion de formas racemicas o mediante srntesis a partir de materias primas opticamente activas. Muchos isomeros geometricos de olefinas, dobles enlaces C=N, y similares tambien pueden estar presentes en los compuestos descritos en la presente memoria, y se contemplan todos estos isomeros estables. Los isomeros geometricos cis y trans de los compuestos se describen y se pueden aislar como una mezcla de isomeros o como formas isomeras separadas. Se incluyen todas las formas isomeras quirales, diastereoisomeras, racemicas y geometricas de una estructura, a menos que este espedficamente indicada la estereoqmmica o la forma isomera espedfica. Se divulgan en la presente memoria todos los tautomeros de los compuestos mostrados o descritos.
En la presente memoria descriptiva, la formula estructural del compuesto representa un cierto isomero por comodidad en algunos casos, pero la divulgacion incluye todos los isomeros tales como un isomero geometrico, un isomero optico basado en un carbono asimetrico, un estereoisomero, un tautomero y similares que se presenten estructuralmente y una mezcla de isomeros y no se limita a la descripcion de la formula por comodidad, y puede ser uno cualquiera de los isomeros o una mezcla. Por lo tanto, un atomo de carbono asimetrico puede estar presente en la molecula y un compuesto opticamente activo y un compuesto racemico puede estar presente en el presente compuesto, pero la divulgacion no se limita a ellos e incluye uno cualquiera. Ademas, puede estar presente un polimorfismo cristalino, pero no es limitativo, sino que cualquier forma cristalina puede ser individual o una mezcla de formas cristalinas, o un anddrido o hidrato. Ademas, se incluye en la presente memoria el llamado metabolito que se produce mediante degradacion del presente compuesto in vivo.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
"Isomena" significa compuestos que tienen formulas moleculares identicas pero que difieren en la naturaleza o la secuencia de union de sus atomos o en la disposicion de sus atomos en el espacio. Los isomeros que difieren en la disposicion de sus atomos en el espacio se denominan "estereoisomeros". Los estereoisomeros que no son imagenes especulares entre s^ se denominan "diastereoisomeros", y los estereoisomeros que son imagenes especulares no superponibles se denominan "enantiomeras", o a veces isomeros opticos. Un atomo de carbono unido a cuatro sustituyentes diferentes se denomina un "centro quiral".
"Isomero quiral" significa un compuesto con al menos un centro quiral. Tiene dos formas enantiomeras de quiralidad opuesta y puede existir bien como un enantiomero individual o bien como una mezcla de enantiomeros. Una mezcla que contiene cantidades iguales de formas enantiomeras individuales de quiralidad opuesta se denomina una "mezcla racemica". Un compuesto que tiene mas de un centro quiral tiene 2n-1 pares enantiomeros, donde n es el numero de centros quirales. Los compuestos con mas de un centro quiral pueden existir bien como un diastereoisomero individual o bien como una mezcla de diastereoisomeros, denominada una "mezcla diastereoisomera". Cuando esta presente un centro quiral, un estereoisomero se puede caracterizar por la configuracion absoluta (R o S) de ese centro quiral. Configuracion absoluta se refiere a la disposicion en el espacio de los sustituyentes ligados al centro quiral. Los sustituyentes ligados al centro quiral considerados se clasifican segun la regla de secuencia de Cahn, Ingold y Prelog. (Cahn et al, Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn e Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (Londres), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J., Chem. Educ. 1964, 41, 116).
"Isomeros geometricos" significa los diastereisomeros que deben su existencia a una rotacion impedida alrededor de dobles enlaces. Estas configuraciones se diferencian en sus nombres por los prefijos cis y trans, o Z y E, que indican que los grupos estan en el mismo lado o el opuesto del doble enlace en la molecula segun las reglas de Cahn- Ingold-Prelog.
Ademas, las estructuras y otros compuestos divulgados en esta solicitud incluyen todos los isomeros atropicos de los mismos. Los "isomeros atropicos" son un tipo de estereoisomero en el que los atomos de dos isomeros estan dispuestos de forma diferente en el espacio. Los isomeros atropicos deben su existencia a una rotacion restringida provocada por el impedimento de la rotacion de grupos grandes alrededor de un enlace central. Tales isomeros atropicos existen tfpicamente como una mezcla, sin embargo, como resultado de los recientes avances en las tecnicas cromatograficas, ha sido posible separar mezclas de dos isomeros atropicos en casos seleccionados.
Los terminos "polimorfos cristalinos" o "polimorfos" o "formas cristalinas" significan estructuras cristalinas en las que un compuesto (o una sal o solvato del mismo) puede cristalizar en diferentes disposiciones de empaquetamiento cristalino, todas las cuales tienen la misma composicion elemental. Diferentes formas cristalinas tienen habitualmente diferentes patrones de difraccion de rayos X, espectros infrarrojos, puntos de fusion, densidad y dureza, conformacion cristalina, propiedades opticas y electricas, estabilidad y solubilidad. El disolvente de recristalizacion, la velocidad de cristalizacion, la temperatura de almacenamiento y otros factores pueden hacer que domine una forma cristalina. Se pueden preparar polimorfos cristalinos de los compuestos mediante cristalizacion bajo diferentes condiciones.
Adicionalmente, los compuestos de la divulgacion, por ejemplo, las sales de los compuestos, pueden existir en forma bien hidratada o bien no hidratada (la anhidra) o como solvatos con otras moleculas de disolvente. Ejemplos no limitativos de hidratos incluyen monohidratos, dihidratos, etc. Ejemplos no limitativos de solvatos incluyen solvatos de etanol, solvatos de acetona, etc.
"Solvatos" significa formas por adicion de disolvente que contienen cantidades bien estequiometricas o bien no estequiometricas de disolvente. Algunos compuestos tienen tendencia a atrapar una relacion molar fija de moleculas de disolvente en el estado solido cristalino, formando asf un solvato. Si el disolvente es agua, el solvato formado es un hidrato, cuando el disolvente es alcohol, el solvato formado es un alcoholato. Los hidratos se forman mediante la combinacion de una o mas moleculas de agua con una o mas sustancias en las que el agua retiene su estado molecular como H2O, siendo capaz tal combinacion de formar uno o mas hidratos.
"Tautomeros" se refiere a compuestos cuyas estructuras difieren notablemente en la disposicion de atomos, pero que existen en un equilibrio facil y rapido. Se ha de entender que los compuestos de la divulgacion se pueden representar como diferentes tautomeros. Tambien se debe entender que cuando los compuestos tienen formas tautomeras, todas las formas tautomeras se divulgan en la presente memoria, y la denominacion de los compuestos no excluye ninguna forma tautomera.
Algunos compuestos de la divulgacion pueden existir en una forma tautomera.
Los compuestos, las sales y los profarmacos de la divulgacion pueden existir en varias formas tautomeras, incluyendo la forma enolica e imrnica, y la forma cetonica y enamrnica e isomeros geometricos y mezclas de los mismos. Todas estas formas tautomeras se describen en la presente memoria. Los tautomeros existen como mezclas de un grupo tautomero en solucion. En forma solida, habitualmente predomina un tautomero. Aunque se puede describir un tautomero, la divulgacion incluye todos los tautomeros de los presentes compuestos
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Un tautomero es uno de dos o mas isomeros estructurales que existen en equilibrio y se convierten facilmente de una forma isomera en otra. Esta reaccion da como resultado la migracion formal de un atomo de hidrogeno acompanada por un intercambio de dobles enlaces conjugados adyacentes. En soluciones en las que es posible la tautomerizacion, se alcanzara un equilibrio qmmico de los tautomeros. La relacion exacta de los tautomeros depende de varios factores, incluyendo la temperatura, el disolvente y el pH. El concepto de tautomeros que son interconvertibles mediante tautomerizaciones se denomina tautomena.
De los diversos tipos de tautomena que son posibles, comunmente se observan dos. En la tautomena cetoenolica, se produce un intercambio simultaneo de electrones y un atomo de hidrogeno. La tautomena de anillo-cadena es exhibida por la glucosa. Surge como resultado de que el grupo aldetudo (-CHO) en una molecula de cadena de azucar reaccione con uno de los grupos hidroxilo (-OH) de la misma molecula para darla una forma dclica (conformacion de anillo).
Las tautomerizaciones son catalizadas por: Base: 1. desprotonacion; 2. formacion de un anion deslocalizado (p. ej. un enolato); 3. protonacion en una posicion diferente del anion; Acido: 1. protonacion; 2. formacion de un cation deslocalizado; 3. desprotonacion en una posicion diferente adyacente al cation.
Pares tautomeros comunes son: cetona - enol, amida - nitrilo, lactama - lactima, tautomena amida - acido imfdico en anillos heterodclicos (p. ej. en las nucleobases guanina, timina y citosina), amina - enamina y enamina - enamina.
Se ha de entender segun esto que los isomeros que surgen de atomos de carbono asimetricos (p. ej., todos los enantiomeros y diastereoisomeros) estan incluidos dentro del alcance de la divulgacion, a menos que se indique otra cosa. Tales isomeros se pueden obtener en forma sustancialmente pura mediante tecnicas de separacion clasicas y mediante smtesis estereoqmmicamente controlada. Por otra parte, las estructuras y otros compuestos y restos analizados en esta solicitud tambien incluyen todos los tautomeros de los mismos. Los alquenos pueden incluir la geometna bien E o bien Z, cuando sea apropiado. Los compuestos de esta divulgacion pueden existir en forma estereoisomera, por lo tanto se pueden producir como estereoisomeros individuales o como mezclas.
Una "composicion farmaceutica" es una formulacion que contiene los compuestos divulgados en una forma adecuada para la administracion a un individuo. En una realizacion, la composicion farmaceutica esta a granel o en forma de dosificacion unitaria. Puede ser ventajoso formular las composiciones en forma unitaria de dosificacion por facilidad de administracion y uniformidad de dosificacion. Forma unitaria de dosificacion, segun se usa en la presente memoria, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el individuo que se va a tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de reactivo activo calculada para producir el efecto terapeutico en asociacion con el vehfculo farmaceutico requerido. Las especificaciones de las formas unitarias de dosificacion de la divulgacion estan dictadas por y son directamente dependientes de las caractensticas unicas del reactivo activo y el efecto terapeutico particular que se va a alcanzar, y las limitaciones inherentes a la especialidad de combinartal agente activo para el tratamiento de individuos.
La forma de dosificacion unitaria es cualquiera de una variedad de formas, incluyendo, por ejemplo, una capsula, una bolsa intravenosa, un comprimido, una bomba individual en un inhalador de aerosol, o un vial. La cantidad de ingrediente activo (p. ej., una formulacion del compuesto divulgado o una sal, un hidrato, un solvato o un isomero del mismo) en una dosis unitaria de la composicion es una cantidad eficaz y se vana segun el tratamiento particular implicado. Un experto en la especialidad apreciara que a veces es necesario hacer variaciones habituales en la dosificacion dependiendo de la edad y el estado del paciente. La dosificacion tambien dependera de la via de administracion. Se contempla una variedad de vfas, incluyendo oral, pulmonar, rectal, parenteral, transdermica, subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, por inhalacion, yugal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal y similares. Formas de dosificacion para la administracion topica o transdermica de un compuesto de esta divulgacion incluyen polvos, aerosoles, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhaladores. En una realizacion, el compuesto activo se mezcla bajo condiciones esteriles con un vehuculo farmaceuticamente aceptable, y con cualesquiera conservantes, tampones o propelentes que se requieran.
El termino "dosis instantanea" se refiere a formulaciones de compuesto que son formas de dosificacion que se dispersan rapidamente.
El termino "liberacion inmediata" se define como una liberacion de compuesto desde una forma de dosificacion en un penodo de tiempo relativamente breve, generalmente hasta aproximadamente 60 minutos. El termino "liberacion modificada" se define para incluir liberacion retardada, liberacion duradera y liberacion pulsatil. El termino "liberacion pulsatil" se define como una serie de liberaciones de farmaco desde una forma de dosificacion. El termino "liberacion sostenida" o "liberacion duradera" se define como una liberacion continua de un compuesto desde una forma de dosificacion a lo largo de un penodo prolongado.
Un "individuo" incluye mairnferos, p. ej., seres humanos, animales de comparua (p. ej., perros, gatos, aves y similares), animales de granja (p. ej., vacas, ovejas, cerdos, caballos, aves de corral y similares) y animales de laboratorio (p. ej., ratas, ratones, cobayas, aves y similares). En una realizacion, el individuo es un ser humano.
Segun se usa en la presente memoria, la expresion "farmaceuticamente aceptable" se refiere a los compuestos, los materiales, las composiciones, los vehfculos y/o las formas de dosificacion que son, dentro del alcance del juicio
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
medico razonable, adecuados para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritacion, respuesta alergica u otro problema o complicacion, de acuerdo con una relacion beneficio/riesgo razonable.
"Excipiente farmaceuticamente aceptable" significa un excipiente que es util para preparar una composicion farmaceutica que generalmente es seguro, atoxico y ni biologicamente ni de otro modo indeseable, e incluye un excipiente que es aceptable para uso veterinario asf como uso farmaceutico en seres humanos. Un "excipiente farmaceuticamente aceptable", segun se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones, incluye tanto uno como mas de uno de tales excipientes.
Los compuestos de la divulgacion son capaces de formar adicionalmente sales. Todas estas formas tambien se contemplan en la presente memoria.
Una "sal farmaceuticamente aceptable" de un compuesto significa una sal que es farmaceuticamente aceptable y que posee la actividad farmacologica deseada del compuesto originario.
Segun se usa en la presente memoria, "sales farmaceuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos divulgados en los que el compuesto originario se modifica al formar sales acidas o basicas del mismo. Ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de acidos minerales u organicos de residuos basicos tales como aminas, sales alcalinas u organicas de residuos acidos tales como acidos carboxflicos, y similares. Las sales farmaceuticamente aceptable incluyen las sales atoxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto originario formadas, por ejemplo, a partir de acidos inorganicos u organicos atoxicos. Por ejemplo, tales sales atoxicas convencionales incluyen, pero no se limitan a, las derivadas de acidos inorganicos y organicos seleccionados de acido 2-acetoxibenzoico, 2-hidroxietanosulfonico, acetico, ascorbico, bencenosulfonico, benzoico, bicarbonico, carbonico, dtrico, edetico, etanodisulfonico, 1,2-etanosulfonico, fumarico, glucoheptonico, gluconico, glutamico, glicolico, glicoliarsamlico, hexilresorcmico, hidrabamico, bromlddrico, clortudrico, yodhfdrico, hidroximaleico, hidroxinaftoico, isetionico, lactico, lactobionico, laurilsulfonico, maleico, malico, mandelico, metanosulfonico, naps^lico, mtrico, oxalico, pamoico, pantotenico, fenilacetico, fosforico, poligalacturonico, propionico, salidlico, estearico, subacetico, sucdnico, sulfamico, sulfamlico, sulfurico, tanico, tartarico, toluenosulfonico, y los aminoacidos comunmente presentes en la naturaleza, p. ej., glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc.
Otros ejemplos incluyen acido hexanoico, acido ciclopentanopropionico, acido piruvico, acido malonico, acido 3-(4- hidroxibenzoil)benzoico, acido cinamico, acido 4-clorobencenosulfonico, acido 2-naftalenosulfonico, acido 4- toluenosulfonico, acido canforsulfonico, acido 4-metilbiciclo-[2,2.2]-oct-2-eno-1-carbox^lico, acido 3-fenilpropionico, acido trimetilacetico, acido terc-butilacetico, acido muconico, y similares. La divulgacion tambien abarca sales formadas cuando un proton acido presente en el compuesto originario bien se reemplaza por un ion metalico, p. ej., un ion de metal alcalino, un ion alcalinoterreo o un ion aluminio; o bien se coordina con una base organica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina, y similares.
Se debe entender que todas las referencias a sales farmaceuticamente aceptables incluyen formas de adicion de disolvente (solvatos) o formas cristalinas (polimorfos) segun se definen en la presente memoria, de la misma sal.
Las sales farmaceuticamente aceptables de la divulgacion se pueden sintetizar a partir de un compuesto originario que contiene un resto basico o acido mediante metodos qmmicos convencionales. Generalmente, tales sales se pueden preparar al hacer reaccionar las formas de acido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiometrica de la base o el acido apropiados en agua o en un disolvente organico, o en una mezcla de los dos; se pueden usar medios no acuosos como eter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Listas de sales adecuadas se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. (Mack Publishing Company, 1990). Por ejemplo, las sales pueden incluir, pero no se limitan a, las sales de hidrocloruro y acetato de los compuestos de la divulgacion que contienen amina alifatica, que contienen hidroxilamina y que contienen imina.
Los compuestos de la divulgacion se pueden preparar como profarmacos, por ejemplo profarmacos farmaceuticamente aceptables. El termino "profarmaco" se refiere a cualquier compuesto que libere un farmaco originario activo in vivo. Puesto que se sabe que los profarmacos mejoran numerosas cualidades deseables de los productos farmaceuticos (p. ej., solubilidad, biodisponibilidad, fabricacion, etc.), los compuestos de la divulgacion se pueden aportar en forma de profarmaco. Asf, la divulgacion incluye profarmacos de los compuestos, metodos para aportar los mismos y composiciones que contienen los mismos. "Profarmacos" esta destinado a incluir cualesquiera vehfculos unidos covalentemente que liberen un farmaco originario activo in vivo cuando tal profarmaco se administra a un individuo. Los profarmacos se preparan al modificar grupos funcionales presentes en el compuesto de tal modo que las modificaciones se escindan, bien en una manipulacion habitual o bien in vivo, hasta el compuesto originario. Los profarmacos incluyen compuestos en lo que un grupo hidroxi, amino, sulfhidrilo, carboxi o carbonilo esta unido a cualquier grupo que se pueda escindir in vivo para formar un grupo hidroxilo libre, amino libre, sulfhidrilo libre, carboxi libre o carbonilo libre, respectivamente.
Ejemplos de profarmacos incluyen, pero no se limitan a, esteres (p. ej., acetato, dialquilaminoacetatos, formiatos, fosfatos, sulfatos y derivados de benzoato) y carbamatos (p. ej., N,N-dimetilaminocarbonilo) de grupos funcionales
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
hidroxi, grupos ester (p. ej. esteres etilicos, esteres de morfolinoetanol) de grupos funcionales carboxilo, derivados N-acilados (p. ej. N-acetilo), bases de Mannich nitrogenadas, bases de Schiff y enaminonas de grupos funcionales amino, oximas, acetales, cetales y esteres enolicos de grupos funcionales cetona y aldetudo en compuestos, y similares, vease Bundegaard, H. "Design of Prodrugs" p1-92, Elesevier, Nueva York-Oxford (1985).
"Grupo protector" se refiere a un agrupamiento de atomos que cuando esta ligado a un grupo reactivo en una molecula enmascara, reduce o previene esa reactividad. Ejemplos de grupos protectores se pueden encontrar en Green y Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, (Wiley, 2a ed. 1991); Harrison y Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Metodos, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996); y Kocienski, Protecting Groups, (Verlag, 3a ed. 2003).
Se entiende que "compuesto estable" y "estructura estable" indican un compuesto que es suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento hasta un grado de pureza util a partir de una mezcla de reaccion, y formularse como un agente terapeutico eficaz.
En la memoria descriptiva, las formas singulares tambien incluyen el plural, a menos que el contexto dicte claramente otra cosa. A menos que se defina otra cosa, todos los terminos tecnicos y cientfficos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que es entendido comunmente por un experto normal en la especialidad a la que pertenecen esta invencion y divulgacion. En caso de conflicto, dominara la presente memoria descriptiva.
Todos los porcentajes y las relaciones usados en la presente memoria, a menos que se indique otra cosa, son en peso.
Una "terapia combinada” (o "coterapia") incluye la administracion de un compuesto de la divulgacion y al menos un segundo agente como parte de un regimen de tratamiento espedfico destinado a proporcionar el efecto beneficioso de la accion conjunta de estos agentes terapeuticos. El efecto beneficioso de la combinacion incluye, pero no se limita a, una accion conjunta farmacocinetica o farmacodinamica que resulta de la combinacion de agentes terapeuticos. La administracion de estos agentes terapeuticos en combinacion se lleva a cabo tfpicamente a lo largo de un penodo de tiempo definido (habitualmente minutos, horas, dfas o semanas dependiendo de la combinacion seleccionada). "Terapia combinada" puede estar destinado a abarcar, pero generalmente no lo esta, la administracion de dos o mas de estos agentes terapeuticos como parte de regfmenes monoterapeuticos separados que incidentemente y arbitrariamente dan como resultado las combinaciones descritas en la presente memoria.
"Terapia combinada" pretende abarcar la administracion de estos agentes terapeuticos de modo secuencial, esto es, en donde cada agente terapeutico se administra en un momento diferente, asf como la administracion de estos agentes terapeuticos, o al menos dos de los agentes terapeuticos, de un modo sustancialmente simultaneo. Una administracion sustancialmente simultanea se puede efectuar, por ejemplo, al administrar al individuo una sola capsula que tiene una relacion fija de cada agente terapeutico o en multiples capsulas individuales para cada uno de los agentes terapeuticos. La administracion secuencial o sustancialmente simultanea de cada agente terapeutico se puede efectuar mediante cualquier via apropiada incluyendo, pero no limitado a, vfas orales, vfas intravenosas, vfas intramusculares y absorcion directa a traves de tejidos membranarios mucosos. Los agentes terapeuticos se pueden administrar mediante la misma ruta o mediante rutas diferentes. Por ejemplo, un primer agente terapeutico de la combinacion seleccionada se puede administrar mediante inyeccion intravenosa mientras que los otros agentes terapeuticos de la combinacion se pueden administrar oralmente. Alternativamente, por ejemplo, todos los agentes terapeuticos se pueden administrar oralmente o todos los agentes terapeuticos se pueden administrar mediante inyeccion intravenosa. La secuencia en la que se administran los agentes terapeuticos no es estrictamente cntica.
"Terapia combinada" tambien abarca la administracion de los agentes terapeuticos que se describen anteriormente en combinacion adicional con otros ingredientes biologicamente activos y terapias no farmacologicas (p. ej., cirugfa o tratamiento por radiacion). Cuando la terapia combinada comprende ademas un tratamiento no farmacologico, el tratamiento no farmacologico se puede efectuar en cualquier momento adecuado con tal de que se alcance un efecto beneficioso de la accion conjunta de la combinacion de los agentes terapeuticos y el tratamiento no farmacologico. Por ejemplo, en casos apropiados, el efecto beneficioso se alcanza sin embargo cuando el tratamiento no farmacologico se retira temporalmente de la administracion de los agentes terapeuticos, quizas dfas o incluso semanas.
A lo largo de la descripcion, cuando se describe que las composiciones tienen, incluyen o comprenden componentes espedficos, se contempla que las composiciones tambien consisten esencialmente en, o consisten en, los componentes citados. De forma similar, cuando se describe que los procedimientos tienen, incluyen o comprenden etapas de procedimiento espedficas, los procedimientos tambien consisten esencialmente en, o consisten en, las etapas de procesamiento citadas. Ademas, se debe entender que el orden de las etapas o el orden para realizar ciertas acciones son indiferentes con tal de que la invencion o divulgacion siga siendo operativa. Por otra parte, dos o mas etapas o acciones se pueden efectuar simultaneamente.
Los compuestos, o las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, se administran oralmente, nasalmente, transdermicamente, pulmonarmente, por inhalacion, yugalmente, sublingualmente, intraperitonealmente,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
subcutaneamente, intramuscularmente, intravenosamente, rectalmente, intrapleuralmente, intratecalmente y parenteralmente. En una realizacion, el compuesto se administra oralmente. Un experto en la especialidad conocera las ventajas de ciertas v^as de administracion.
El regimen de dosificacion que utiliza los compuestos se selecciona segun una variedad de factores incluyendo el tipo, la especie, la edad, el peso, el sexo y el estado medico del paciente; la gravedad de la afeccion que se va a tratar; la via de administracion; la funcion renal y hepatica del paciente; y el compuesto particular o la sal del mismo empleados. Un medico o veterinario de experiencia normal puede determinar y recetar facilmente la cantidad eficaz del farmaco requerida para prevenir, contrarrestar o detener el avance de la afeccion.
Tecnicas para la formulacion y administracion de los compuestos divulgados de la divulgacion se pueden encontrar en Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19a edicion, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). En una realizacion, los compuestos descritos en la presente memoria, y las sales farmaceuticamente aceptable de los mismos, se usan en preparaciones farmaceuticas en combinacion con un vehuculo o diluyente farmaceuticamente aceptable. Vehuculos farmaceuticamente aceptables adecuados incluyen cargas o diluyentes solidos inertes y soluciones acuosas u organicas esteriles. Los compuestos estaran presentes en tales composiciones farmaceuticas en cantidades suficientes parar proporcionar la cantidad de dosificacion deseada en el intervalo descrito en la presente memoria.
En una realizacion, el compuesto se prepara para administracion oral, en donde los compuestos divulgados o las sales de los mismos se combinan con un vehuculo solido o lfquido adecuado para formar capsulas, comprimidos, pfldoras, polvos, jarabes, soluciones, suspensiones y similares.
Los comprimidos, las pfldoras, las capsulas y similares contienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 99 por ciento en peso del ingrediente activo y un aglutinante tal como goma de tragacanto, gomas arabigas, almidon de mafz o gelatina; excipientes tales como fosfato dicalcico; un agente desintegrante tal como almidon de mafz, almidon de patata o acido algmico; un lubricante tal como estearato magnesico; y/o un agente edulcorante tal como sacarosa, lactosa, sacarina, xilitol, y similares. Cuando la forma unitaria de dosificacion es una capsula, a menudo contiene, ademas de materiales del tipo anterior, un vehuculo lfquido tal como un aceite graso.
En algunas realizaciones, varios otros materiales estan presentes como revestimientos o para modificar la forma ffsica de la unidad de dosificacion. Por ejemplo, en algunas realizaciones, los comprimidos se revisten con goma laca, azucar o ambos. En algunas realizaciones, un jarabe o elixir contiene, ademas del ingrediente activo, sacarosa como agente edulcorante, metil- y propilparabenos como conservantes, un colorante y un saborizante tal como sabor a cereza o naranja, y similares.
Para algunas realizaciones que se refieren a la administracion parenteral, los compuestos divulgados, o las sales, los tautomeros o los polimorfos de los mismos, se pueden combinar con medios acuosos u organicos esteriles para formar soluciones o suspensiones inyectables. En una realizacion, las composiciones inyectables son soluciones o suspensiones isotonicas acuosas. Las composiciones pueden esterilizarse y/o contener adyuvantes, tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de la disolucion, sales para regular la presion osmotica y/o tampones. Ademas, tambien pueden contener otras sustancias terapeuticamente valiosas. Las composiciones se preparan segun metodos de mezcladura, granulacion o revestimiento convencionales, respectivamente, y contienen de aproximadamente 0,1 a 75%, en otra realizacion, las composiciones contienen de aproximadamente 1 a 50% del ingrediente activo.
Por ejemplo, se producen soluciones inyectables usando disolventes tales como aceite de sesamo o cacahuete o propilenglicol acuoso, asf como soluciones acuosas de sales farmaceuticamente aceptables solubles en agua de los compuestos. En algunas realizaciones, se preparan dispersiones en glicerol, polietilenglicoles lfquidos y mezclas de los mismos en aceites. Bajo condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos. Los terminos "administracion parenteral" y "administrado parenteralmente", segun se usan en la presente memoria, significan modos de administracion distintos a la administracion enteral y topica, habitualmente mediante inyeccion, e incluyen, sin limitacion, inyeccion e infusion intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardfaca, intradermica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutanea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoide, intraespinal e intraesternal.
Para la administracion rectal, composiciones farmaceuticas adecuadas son, por ejemplo, preparaciones topicas, supositorios o enemas. Los supositorios se preparan ventajosamente a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Las composiciones se pueden esterilizar y/o contener adyuvantes, tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de la disolucion, sales para regular la presion osmotica y/o tampones. Ademas, tambien pueden contener otras sustancias terapeuticamente valiosas. Las composiciones se preparan segun metodos de mezcladura, granulacion o revestimiento convencionales, respectivamente, y contienen de aproximadamente 0,1 a 75%, en otra realizacion, las composiciones contienen de aproximadamente 1 a 50% del ingrediente activo.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
En algunas realizaciones, los compuestos se formulan para aportar el agente activo mediante administracion pulmonar, p. ej., la administracion de una formulacion en aerosol que contiene el agente activo desde, por ejemplo, un atomizador de bomba manual, un nebulizador o un inhalador de dosis medida presurizado. En algunas realizaciones, formulaciones adecuadas de este tipo tambien incluyen otros agentes, tales como agentes antiestaticos, para mantener los compuestos divulgados como aerosoles eficaces.
Un dispositivo de aporte de farmacos para aportar aerosoles comprende un bote de aerosol adecuado con una valvula de dosificacion que contiene una formulacion farmaceutica de aerosol como la descrita y una carcasa de accionamiento adaptada para contener el bote y permitir el aporte de farmaco. El bote del dispositivo de aporte de farmaco tiene un espacio libre superior que representa mas de aproximadamente 15% del volumen total del bote. A menudo, el polfmero destinado a la administracion pulmonar esta disuelto, suspendido o emulsionado en una mezcla de un disolvente, tensioactivo y propelente. La mezcla se mantiene bajo presion en un bote que se ha sellado con una valvula dosificadora.
Para la administracion nasal, se puede usar un vehnculo bien solido o bien lfquido. El vehnculo solido incluye un polvo grueso que tiene un tamano de partfcula en el intervalo de, por ejemplo, aproximadamente 20 a aproximadamente 500 micras y tal formulacion se administra mediante inhalacion rapida a traves de la fosas nasales. En algunas realizaciones en las que se usa el vehnculo lfquido, la formulacion se administra como una nebulizacion o gotas nasales e incluye soluciones oleosas o acuosas de los ingredientes activos.
Los reactivos activos se pueden preparar con vehnculos que protegeran contra la eliminacion rapida del cuerpo. Por ejemplo, se puede usar una formulacion de liberacion controlada, incluyendo implantes y sistemas de aporte microencapsulados. Se pueden usar polfmeros biocompatibles biodegradables, tales como etileno-acetato de vinilo, polianhndridos, poli(acido glicolico), colageno, poliortoesteres y poli(acido lactico). Metodos para la preparacion de tales formulaciones seran evidentes para los expertos en la especialidad. Los materiales tambien se pueden obtener comercialmente de Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Tambien se pueden usar suspensiones liposomicas (incluyendo liposomas que eligen como diana celulas infectadas con anticuerpos monoclonales para antfgenos virales) como vehnculos farmaceuticamente aceptables. Estas se pueden preparar segun metodos conocidos por los expertos en la especialidad, por ejemplo, como se describe en la Pat. EE. UU. N° 4.522.811.
Las composiciones y formulaciones de la divulgacion tambien pueden comprender uno o mas desecantes. Desecantes adecuados que se pueden usar son los farmaceuticamente seguros e incluyen, por ejemplo, calidades farmaceuticas de gel de sflice, aluminosilicato sodico, potasico o calcico cristalino, sflice coloidal, sulfato calcico anhidro y similares. El desecante puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 1,0% a 20,0%, o de aproximadamente 2% a 15% p/p (o cualquier valor dentro de dicho intervalo).
Tambien se contemplan formulaciones que son formas de dosificacion que se dispersan rapidamente, tambien conocidas como formas de "dosificacion instantanea". En particular, algunas realizaciones de la divulgacion se formulan como composiciones que liberan sus ingredientes activos en un corto penodo de tiempo, p. ej., tipicamente menos de aproximadamente cinco minutos, en otra realizacion, menos de aproximadamente noventa segundos, en otra realizacion, menos de aproximadamente treinta segundo y en otra realizacion, en menos de aproximadamente diez o quince segundos. Tales formulaciones son adecuadas para la administracion a un individuo a traves de una variedad de vfas, por ejemplo mediante la insercion en una cavidad corporal o la aplicacion a una superficie corporal humeda o herida abierta.
Tfpicamente, una "dosificacion instantanea" es una forma de dosificacion solida que se administra oralmente, que se dispersa rapidamente en la boca y de ahn que no requiere un gran esfuerzo para tragar y permite que el compuesto se ingiera o absorba rapidamente a traves de las membranas mucosas orales. En algunas realizaciones, tambien se usan en otras aplicaciones formas de dosificacion que se dispersan rapidamente, incluyendo el tratamiento de heridas y otras lesiones corporales y estados patologicos en los que no es posible la liberacion del medicamento mediante humedad suministrada externamente.
Las formas de "dosificacion instantanea" se conocen en la especialidad; veanse, por ejemplo, formas de dosificacion efervescentes y revestimientos de liberacion rapida de micropartfculas insolubles en las Pat. EE. UU. N° 5,578.322 y 5.607.697; espumas y lfquidos liofilizados en las Pat. EE. UU. N° 4.642.903 y 5.631.023; hilado en estado fundido de formas de dosificacion en las Pat. EE. UU. N° 4.855.326, 5.380.473 y 5.518.730; fabricacion en forma libre solida en la Pat. EE. UU. N° 6.471.992; matriz portadora basada en sacaridos y un aglutinante lfquido en las Pat. EE. UU. N° 5.587.172, 5.616.344, 6.277.406 y 5.622.719; y otras formas conocidas en la especialidad.
Los compuestos de la divulgacion tambien se formulan como formulaciones de "liberacion pulsatil", en las que el compuesto se libera de las composiciones farmaceuticas en una serie de liberaciones (es decir, pulsos). Los compuestos tambien se formulan como formulaciones de "liberacion sostenida" en las que el compuesto se libera continuamente de la composicion farmaceutica a lo largo de un penodo prolongado.
Tambien se contemplan formulaciones, p. ej., formulaciones lfquidas, incluyendo agentes encapsulantes o solvatantes dclicos o adclicos, p. ej., ciclodextrinas, polieteres o polisacaridos (p. ej., metilcelulosa), o en otra realizacion derivados de 13-ciclodextrina polianionicos con un grupo salino sulfonato sodico separado de la cavidad
lipofila por un grupo espaciador de eter alqu^lico o polisacaridos. En una realization, el agente es metilcelulosa. En otra realizacion, el agente es un derivado de B-ciclodextrina polianionico con una sal de sulfonato sodico separada de la cavidad lipofila por un grupo espaciador de eter butflico, p. ej., CAPTISOL® (CyDex, Overland, KS). Un experto en la especialidad puede evaluar relaciones adecuadas de agente/formulacion de compuesto divulgado al preparar 5 una solution del agente en agua, p. ej., una solution al 40% en peso; preparar diluciones en serie, p. ej. para elaborar soluciones de 20%, 10, 5%, 2,5%, 0% (control) y similares; anadir un exceso (en comparacion con la cantidad que puede ser solubilizada por el agente) del compuesto divulgado; mezclar bajo condiciones apropiadas, p. ej., calentamiento, agitation, ultrasonidos y similares; centrifugar o filtrar las mezclas resultantes para obtener soluciones trasparentes; y analizar la concentration del compuesto divulgado en las soluciones.
10 Habiendo descrito ahora la invention y la divulgation por medio de una description escrita, los expertos en la especialidad sabran que la invencion se puede poner en practica en una variedad de realizaciones y que la descripcion precedente y los ejemplos posteriores tienen propositos de ilustracion y no limitation de las reivindicaciones que siguen.
Ejemplos
15 Ejemplo comparativo 1: Smtesis a pequena escala de KX2-391
imagen4
La smtesis preliminar descrita posteriormente se ilustraba en la Patente de EE. UU. 7.300.931. Este procedimiento es util para reacciones a pequena escala, por ejemplo, reacciones que producen hasta 50 g de producto. Esta smtesis es util, por ejemplo, para producir material de calidad para investigation.
20 Para la siguiente smtesis, a menos que se apunte otra cosa, los reactivos y los disolventes se usaron segun se recibian de proveedores comerciales. Los espectros de resonancia magnetica nuclear de proton y carbono se obtuvieron en un espectrometro Bruker AC 300 o Bruker AV 300 a 300 MHz para el proton y 75 MHz para el carbono. Los espectros se dan en ppm (5) y las constantes de acoplamiento, J, se presentan en hertzios. Se uso tetrametilsilano como un patron interno para los espectros de proton y el pico del disolvente se uso como el pico de
25 referencia para espectros de carbono. Los espectros de masas y los datos de masas de LC-MS se obtuvieron en un espectrometro de masas de ionization a presion atmosferica (APCI, por sus siglas en ingles) Sciex 100 de Perkin Elmer. Los analisis de LC-MS se obtuvieron usando una columna Luna C8(2) (100 x 4,6 mm, Phenomenex) con detection UV a 254 nm usando un programa de gradiente de disolvente estandar (Metodo B). Se realizo cromatografia en capa fina (TLC, por sus siglas en ingles) usando placas de gel de sflice Analtech y se visualizo
30 mediante luz ultravioleta (UV), yodo o acido fosfomoKbdico al 20% en peso en etanol. Los analisis de HPLC se obtuvieron usando una columna Prevail C18 (53 x 7 mm, Alltech) con deteccion UV a 254 nm usando un programa de gradiente de disolvente estandar (Metodo A o B).
Metodo A:
Tiempo (min.)
Flujo (ml/min.) %A %B
0,0
3,0 95,0 5,0
10,0
3,0 0,0 100,0
11,0
3,0 0,0 100,0
A = Agua con acido trifluoroacetico al 0,1 v/v
B = Acetonitrilo con acido trifluoroacetico al 0,1 v/v
5
10
15
20
25
30
35
Metodo B:
Tiempo (min)
Flujo (ml/min) %A %B
0,0
2,0 95,0 5,0
4,0
2,0 5,0 95,0
A = Agua con acido trifluoroacetico al 0,02 v/v B = Acetonitrilo con acido trifluoroacetico al 0,02 v/v
Smtesis de N-bencil-2-(5-bromopiridin-2-il)acetamida:
imagen5
Un matraz se cargo con 5-(5-bromopiridin-2(1H)-iliden)-2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (1,039 g, 3,46 mmol), bencilamina (0,50 ml, 4,58 mmol) y tolueno (20 ml). La reacciOn se llevO hasta reflujo bajo nitrOgeno durante 18 horas, a continuaciOn se enfriO y se puso en un frigorffico hasta que se enfriaba. El producto se recogiO y se lavO con hexanos para dar una masa de cristales blancos brillantes (1,018 g, 96%).
Smtesis de 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi)etil)morfolina:
imagen6
Se anadiO gota a gota DIAD (2,82 g, 13,9 mmol) una soluciOn agitada de 4-(4,4,5,5-tetrametil[1,3,2]dioxaborolan-2- il)-fenol (2,55 g, 11,58 mmol), 2-morfolin-4-iletanol (1,60 ml, 1,73 g, 13,2 mmol) y trifenilfosfina (3,64 g, 13,9 mmol) en cloruro de metileno (60 ml) a 0°C. Se dejO que la reacciOn se enfriara hasta temperatura ambiente y se agitO durante la noche. Despues de 18 horas, se anadieron porciones adicionales de trifenilfosfina (1,51 g, 5,8 mmol), 2- morfolin-4-iletanol (0,70 ml, 5,8 mmol) y DIAD (1,17 g, 5,8 mmol). Despues de agitar 2 horas adicionales a temperatura ambiente, la reacciOn se concentrO y el residuo se purificO mediante cromatografia de desarrollo rapido (EtOAc del 5% al 25% en CHCl3) para proporcionar el producto como un sOlido blanco (2,855 g, 74%).
Un tubo de reacciOn de 10 ml con un tapOn de goma y barra agitadora se cargO con N-bencil-2-(5-bromopiridin-2- il)acetamida (123 mg, 0,403 mmol), 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi)etil)morfolina (171 mg, 0,513 mmol) y FibreCat 10071 (30 mg, 0,015 mmol). Se anadiO etanol (3 ml), seguido por soluciOn acuosa de carbonato potasico (0,60 ml, 1,0 M, 0,60 mmol). El tubo se cerrO hermeticamente y se calentO bajo condiciones de microondas a 150°C durante 10 minutos. La reacciOn se enfriO y se concentrO para retirar la mayoria del etanol, y a continuaciOn se recogiO en 10 ml de acetato de etilo y se lavO sucesivamente con agua y soluciOn saturada de cloruro sOdico. La capa organica se secO con MgSO4, se filtrO y se concentrO hasta un sOlido blanco. Este sOlido blanco se triturO con eter etflico para dar KX2-391 como un sOlido blanco (137 mg, 79%): pf 135-137°C.; 1H NMR (300 MHz,CDCls) 5 8,70 (d, 1H, J=2,0 Hz), 7,81 (dd, 1H, J=2,4 Hz, J=8,0Hz), 7,65 (s an, 1H), 7,49 (d, 2H, J=8,8 Hz), 7,37-7,20 (m, 6H), 7,01 (d, 2H, J=8,8 Hz), 4,49 (d, 2H, J=5,8 Hz), 4,16 (t, 2H, J=5,7 Hz, 3,82 (s, 2H), 3,78-3,72 (m, 4H), 2,84 (t, 2H, J=5,7 Hz), 2,62-2,58 (m, 4H); HPLC (Metodo B) 98,0% (AUC), tR = 1,834 min.; APCI MS m/z 432 [M+H]+.
1 Di(acetato)diciclohexilfenilfosfinapaladio(II) unido a polimero, fabricado por Johnson Matthey, Inc. y disponible de Aldrich (n° de catalogo 590231).
Ejemplo 2: Smtesis a escala intermedia de KX2-391
La smtesis esbozada en este ejemplo se puede usar en reacciones a escala intermedia. La preparaciOn de lotes de al menos 50 g de la sal de dihidrocloruro de KX2-391 se muestra en el Esquema 1. La smtesis lineal consistia en 6 etapas, siendo una septima etapa la preparaciOn de uno de los reactivos, acido 6-fluoropiridin-3-ilborOnico (que tambien esta disponible comercialmente). El rendimiento global de la secuencia era 35% con un rendimiento medio
5
10
15
20
25
30
de 83%, siendo la etapa de rendimiento mas bajo la de 68%. De las siete etapas solo una requeria cromatografia. El procedimiento listado posteriormente se realizo a una escala de 70 g.
imagen7
La primera etapa es una smtesis de eter de Williamson entre 4-bromofenol (131 g) y N-cloroetilmorfolina (1 como la sal de HCl; 141 g) usando polvo de K2CO3 (de 3 a 3,5 equivalentes) como la base y que tiene acetonitrilo como el disolvente. Los ingredientes se mezclaron y se agitaron a reflujo durante la noche con alta conversion (96,3-99,1%). Despues de la dilution con diclorometano y heptano, la mezcla de reaction se filtro y se evaporo para dar el producto deseado 2 con un rendimiento esencialmente cuantitativo (216 g). Notese que con sustratos similares (p. ej., 4-bromo-3-fluorofenol), las conversiones (incluso con calentamiento intensivo) no siempre eran tan altas (p. ej., 59,9-98,3%). Tanto el cloruro de alquilo como el K2CO3 se adquieren preferiblemente de Aldrich. Si el calentamiento continuado no conduce la reaccion hasta la termination, el bromofenol sin reaccionar se puede retirar facilmente disolviendo la mezcla de reaccion en bruto en 4 partes de tolueno y lavando el fenol con 4 partes de NaOH acuoso al 15%.
Uno de los reactivos requeridos para la segunda etapa (acoplamiento de Suzuki) era el acido 6-fluoropiridin-3- ilboronico (4). Aunque estaba disponible comercialmente, este reactivo se preparaba facilmente mediante intercambio con bromuro de litio de 5-bromo-2-fluoropiridina (3) (102 g) con n-butil-litio (1,2 eq) a bajas temperaturas (<-60°C) en TBME seguido por la adicion de borato de triisopropilo (1,65 eq). Ambas fases de la reaccion son breves, con un tiempo de reaccion global (incluyendo los tiempos de adicion) de ~3 h. La desactivacion se consigue con NaOH acuoso al 24%, que tambien extrae el producto dejando impurezas en la capa organica. Una vez que se retira la capa acuosa, se neutraliza con HCl y se extrae con EtOAc. Despues de secar las fases organicas y diluir con algo de heptano, la concentration conduce a precipitacion/cristalizacion del producto. La filtration dio el acido boronico 4 con una pureza relativamente alta (96,4% del AUC) y buen rendimiento (69 g, 79-90%; vease la nota sobre la estimation del rendimiento en la section experimental), que se puede usar sin purification adicional.
La segunda etapa de reaccion en la secuencia lineal (un acoplamiento de Suzuki) es una reaccion simple de establecer; todos los reactivos [2(111 g), Na2CO3 acuoso, DME y Pd(PPh3)4 (0,04 eq)] se cargaron al matraz de reaccion y la mezcla se calento a reflujo; notese que la mezcla de reaccion se desgasificaba para retirar oxigeno. Una vez que la reaccion fuera completa (en 7 h), el tratamiento implicaba decantar (o separar con sifon) la solution de reaccion de las sales organicas en la zona del matraz (no habia capa acuosa visible), el matraz se enjuago y se seco, y el disolvente se retiro de las fases organicas combinadas. La cristalizacion de 5 en bruto en isopropanol/heptano proporcionaba material de pureza mejorada en comparacion con el material en bruto, pero todavia requeria cromatografia (la relation de gel de sflice a material en bruto era ~8,5:1) para obtener material de pureza adecuada (>98%); el rendimiento era 68% (79,5 g). El uso de 5 puro evitaba la necesidad de cromatografia en la siguiente etapa, desplazamiento por acetonitrilo del atomo de fluor.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
La sustitucion de fluoruro por acetonitrilo tambien era una reaccion simple, y una cristalizacion simple a temperatura ambiente del producto en bruto proporciono 6 puro con rendimiento y pureza altos. La reaccion implicaba la formacion inicial del "enolato" a partir de acetonitrilo (6,5 eq) usando hexametildisilano potasico KHMDS (8 eq)/THF a -10°C seguido inmediatamente por la adicion del fluoruro 5 (79 g). La reaccion era rapida y despues de una hora se alcanzaba la desactivacion con salmuera saturada. Despues del secado y la evaporacion del disolvente de las fases organicas, la mezcla en bruto resultante consistia en solo dos componentes, el producto deseado y un producto mucho menos polar procedente de la autocondensacion aparente de acetonitrilo. La mezcla en bruto se sometio a turbulencia en isopropanol/heptano y se dejo asentar durante la noche, lo que dio como resultado la cristalizacion completa del producto, que se separo por filtracion y se lavo para proporcionar 6 de alta pureza (99,3% del AUC) con buen rendimiento (64 g, 76%).
La metanolisis de 6 (64 g) se efectuo al calentar en H2SO4 al 40% (en MeOH) hasta que la reaccion se completaba (25 h). A continuacion, la reaccion se enfrio, se agito con MgSO4 para convertir trazas de producto hidrolizado (ArcH2-CO2Me) de nuevo en producto, y a continuacion se anadio a K2CO3 acuoso enfriado, con extraccion simultanea en diclorometano. El secado y la evaporacion de la mayoria del DCM seguido por la adicion de EtOAc al 5% (en heptano) y la concentracion adicional dio como resultado la cristalizacion del producto. La filtracion del solido y el lavado dieron 7 con alta pureza (98,9% del AUC) con buen rendimiento (82%), obteniendose producto de alta pureza adicional (4 g) a partir de las aguas madres para un rendimiento total de 61,7 g (87%).
La etapa de amidacion tambien implicaba la carga del recipiente de reaccion con los ingredientes (7 (61 g), bencilamina (3 eq) y anisol de alto punto de ebullicion) y a continuacion el calentamiento a reflujo hasta que la reaccion se completaba. El enfriamiento de la mezcla de reaccion dio como resultado la cristalizacion completa del compuesto buscado con alta pureza (98,9%) y buen rendimiento (81%).
La etapa final era la formacion de la sal dihidroclorica del compuesto buscado. A fin de asegurar la protonacion completa en ambos centros basicos, la reaccion se efectuo en etanol absoluto, que disolvia libremente la sal de dihidrocloruro. Despues de la evaporacion casi hasta sequedad, la mezcla de reaccion se "capturo" con etanol dos veces para retirar el exceso de cloruro de hidrogeno. El aceite viscoso resultante se disolvio en etanol (2 partes) y a continuacion se anadio, con agitacion rapida, a un gran volumen (20 partes) de EtOAc (acetato de etilo). La filtracion, el lavado con acetato de etilo (sin heptano) y el secado a vado proporcionaron la sal de dihidrocloruro de KX2-391 como un polvo blanco crema. Se obtuvo un total de 68 g (rendimiento de 97%) de la sal final con alta pureza (99,6% del AUC), que contema trazas de EtOAc (4,8% p/p), EtOH (0,3% p/p) y heptano (0,6% p/p; a partir de un lavado final con heptano antes del secado a vado). Esta sal tambien se cristalizo (en lugar del metodo de precipitacion descrito anteriormente) en EtOH/EtOAc calientes para proporcionar cuentas cristalinas que teman niveles muy inferiores de disolvente atrapado (solamente 0,26% p/p de EtOAc y 0,45% p/p de EtOH) y flman libremente.
Parte experimental
imagen8
Preparacion de 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina (2):
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 5 l, equipado con agitador mecanico, termometro con adaptador, condensadory entrada para nitrogeno (en la parte superior del condensador), se cargo con 1 (140,7 g, 0,756 mol), 4-bromofenol (130,6 g, 0,755 mol), polvo de K2CO3 anhidro (367,6 g, 2,66 mol, 3,5 eq) y acetonitrilo (1,3 l). La mezcla se agito vigorosamente (tocando el alabe el fondo del matraz) a 80°C (durante la noche), seguido por dilucion con DCM (500 ml) y heptano (200 ml) y filtracion a traves de Celite. La evaporacion hasta sequedad (rotavapor, a continuacion alto vado) dio 2 como un aceite amarillo claro (216,00 g, rendimiento de 100%, 96,3% del AUC, contiene 3,7% de bromofenol sin reaccionar). Este material se uso satisfactoriamente sin purificacion adicional.
1H NMR (CDCl3) 5 2,57 (t, 4 H), 2,79 (t, 2 H), 3,73 (t, 4 H), 4,08 (t, 2 H), 6,78 (d, 2 H), 7,37 (d, 2 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 287,1 [M + 1].
Que el bromofenol se puede retirar facilmente se demostro sobre una muestra de 2 g al disolver en primer lugar la muestra en tolueno (8 g) y lavar con 8 g de NaOH acuoso al 15%; la cromatografia de liquidos no mostraba traza de bromofenol sin reaccionar en el producto recuperado (1,97 g; 98,5% de recuperacion).
imagen9
5
10
15
20
25
30
35
40
Preparacion de acido 6-fluoropiridin-3-ilbor6nico (4):
Se anadio (a traves de una jeringa) BuLi 2 M (352 ml, 0,704 mol, 1,2 eq) a [TBME] anhidro (bano de hielo seco- acetona) agitado y enfriado (620 ml; en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 3 l equipado con agitador mecanico, sonda de temperatura con adaptador, y entrada para nitrogeno). Se anadio una solucion de 3 (102,2 g, 0,581 mol) en TBME anhidro (100 ml) a esta mezcla rapidamente agitada y enfriada (< -75°C) a lo largo de un periodo de 13 min., tiempo durante el cual la temperatura interna ascendia hasta -62°C. La reaccion se agito durante otros 45 min. (la temperatura se mantuvo entre -62°C y -80°C), seguido por la adicion rapida y secuencial de cuatro porciones de borato de triisopropilo (total de 180 g, 0,957 mol, 1,65 eq). Al final de la adicion, la temperatura interna habia ascendido hasta -33°C. Despues de agitar 45 min. adicionales sobre el bano frfo (la temperatura interna disminma desde -33°C hasta -65°C), el bano frio se retiro y la mezcla agitada ascendia por si misma hasta -22°C a lo largo de un periodo de 50 min. Despues de calentar (a traves de un bano de agua) hasta 6°C a lo largo de un periodo de 15 min., la mezcla de reaccion agitada se puso en un bano de agua de hielo y a continuacion se desactivo bajo nitrogeno con una solucion enfriada de NaOH (160 g) en agua (500 ml). Una vez que se completaba la adicion, la temperatura interna era 20°C. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1,5 h. La capa acuosa se retiro, se neutralizo hasta pH 7 con ~350 ml de HCl concentrado y a continuacion se extrajo con EtOAc (3 x 1 l). Debido a que el pH era ahora 8-9, la capa acuosa se ajusto hasta pH 7 usando ~15 ml de HCl concentrado y se extrajo adicionalmente (2 x 1 l) con acetato de etilo. Los extractos de EtOAc combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron hasta un volumen de ~150 ml. Con turbulencia del concentrado, se anadio heptano en porciones (volumen total de 300 ml) dando como resultado la precipitacion/cristalizacion del producto. La filtracion, el lavado del solido con heptano (100 ml, 300 ml, a continuacion otros 300 ml) y el secado al aire dieron el producto del epigrafe como un solido blancuzco (68,6 g, rendimiento de 79-90%*; pureza por LC de 96,4%, la NMR mostraba un 5,5% p/p estimado de heptano), que se uso satisfactoriamente sin purificacion adicional. La LC/MS mostraba que era una mezcla de las dos entidades siguientes, siendo mayor la intensidad de la entidad de mayor peso molecular (*Nota: el rendimiento de la reaccion es 79% si se supone que el acido boronico es el unico constituyente y es 90% si se supone que el borato dclico es el unico constituyente):
imagen10
1H NMR (CDCls) 5 7,14 (dd, 1 H), 8,27 (ddd, 1 H), 8,39 (s an, 2 H, 2 OH), 8,54 (d fino, 1 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 143,0 [M + 1; para el acido boronico] y 370,0 [M + 1; para el borato dclico anterior].
imagen11
Preparacion de 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina (5):
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 2 l equipado con agitador mecanico, termometro y adaptador, condensador y entrada para nitrogeno (en la parte superior del condensador) se cargo con 2 (110,7 g, 0,387 mol), 4 (71,05 g, 0,477 mol, 1,23 eq) y DME (700 ml). La solucion agitada resultante se desgasifico al hacer pasar una corriente rapida de nitrogeno a traves de la solucion agitada a lo largo de un periodo de 5 min. seguido por la adicion de una solucion desgasificada de Na2CO3 (121,06 g, 1,142 mol, 3 eq) en H2O (250 ml) y tambien Pd(PPh3)4 solido (19,8 g, 0,044 eq). Inmediatamente despues de la ultima adicion, el espacio libre por encima de la mezcla de reaccion se purgo con nitrogeno y a continuacion la mezcla se agito a 80-85°C (temperatura interna) durante 7 h, seguido por enfriamiento hasta temperatura ambiente. Debido a la falta de una capa acuosa, el sobrenadante se decanto, dejando las sales inorganicas (con agua adsorbida). El matraz de reaccion con las sales inorganicas se lavo con diclorometano al 50%/acetato de etilo (2 x 250 ml), anadiendose los lavados al sobrenadante decantado.
Estas fases organicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se evaporaron hasta sequedad hasta un aceite pardo oscuro (148 g). Se anadieron a este aceite 150 g de heptano al 50%/alcohol isopropflico (IPA) y, despues de la turbulencia y el enfriamiento (a traves de un bano de agua de hielo), comenzaba la cristalizacion. Se anadio heptano adicional (50 g) y el solido resultante se filtro, se lavo y se seco al aire para dar 48 g de un solido 5 pardo claro. Despues de evaporar el filtrado hasta sequedad, la mezcla resultante se sometio a turbulencia en 100 ml de heptano al 50%/IPA seguido por la adicion de mas heptano (~100 ml), la tapadura y la colocacion en el refrigerador para la cristalizacion. El solido resultante se filtro, se lavo con heptano y se seco al aire para dar 61 g de un solido gomoso. La evaporation del filtrado resultante dio un aceite (34 g) que contema impurezas menos polares significativas incluyendo Ph3P=O y asi se repartio entre HCl 2 N (240 ml) y EtOAc (220 ml). La capa acuosa inferior 10 se retiro y a continuation se agito con EtoAc mientras se neutralizaba con K2CO3 hasta un pH de 7-8. La capa de EtOAc se seco, se filtro y se evaporo hasta sequedad (22 g). Las porciones de 48 g, 61 g y 22 g se cromatografiaron sobre gel de sflice (1,1 kg) rellenas en DCM. La elucion con DCM (400 ml), DCM al 50%/EtOAc (5 l) y a continuacion DCM al 50%/EtOAc (8 l) que conteman cantidades crecientes de MeOH/Et3N (empezando con MeOH al 1,5%/Et3N al 1% y terminando con MeOH al 5%/Et3N al 3%) dieron 77,68 g de un aceite viscoso (pureza 98,0%) que cristalizo 15 inmediatamente al someter a turbulencia en heptano (300 ml). La filtracion, el lavado con heptano y el secado al aire dieron 75,55 g (98,7% del AUC) de 5 solido. Se obtuvo 5 puro adicional (total de 3,9 g, 98,6-99,3% del AUC) a partir de fracciones cromatograficas previas que conteman Ph3P=O depurandolas como se hizo para la muestra de 34 g anterior, seguido por cristalizacion evaporativa. El rendimiento total de 5 era 79,5 g (68%).
1H NMR (CDCh) 5 2,59 (t, 4 H), 2,84 (t, 2 H), 3,75 (t, 4 H), 4,16 (t, 2 H), 6,97 (dd, 1 H), 7,01 (d, 2 H), 7,46 (d, 2 H), 20 7,92 (ddd, 1 H), 8,37 (d fino, 1 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 303,2 [M + 1].
imagen12
Preparation de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo (6):
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 3 l equipado con agitador mecanico, termometro y adaptador, embudo adicional y una entrada para nitrogeno (sobre el embudo de adicion, presion positiva a traves de un burbujeador). 25 Pasando una corriente rapida de nitrogeno a traves del burbujeador, el tapon se retiro y el matraz se cargo con KHMDS (415,8 g, 2,08 mol) y a continuacion THF anhidro (1 l). Se anadio gota a gota una solution de MeCN (70 g) en THF (110 ml) a la solucion de KHMDS/THF agitada y enfriada (bano de hielo/metanol, la temperatura interna de la solucion era -8°C) a lo largo de un periodo de 22 min. seguido inmediatamente por la adicion relativamente rapida (4 min.) de 5 (79,06 g, 0,262 mol) en THF (400 ml), tiempo despues del cual la temperatura interna de la mezcla de 30 reaction habia alcanzado 10°C. Con enfriamiento continuado (1 h), la temperatura interna era -6°C y mediante TLC
la reaccion paretia completa. Despues de 30 min. adicionales (temperatura interna de -3°C), la mezcla de reaccion se desactivo con salmuera saturada (1 l) y se diluyo con EtOAc (500 ml). Despues de retirar la capa acuosa, la solucion organica se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo hasta sequedad (hasta un aceite) seguido por disolver completamente en IPA (150 ml), diluir con heptano (300 ml), anadir cristales seminales (preparados al disolver ~100 35 mg de aceite en bruto en IPA (~150 mg) y diluir con heptano (~2,5 ml)) y dejar reposar durante la noche. Despues de agitar para romper el solido cristalino, el solido se filtro, se lavo con 250 ml de heptano/IPA 2:1 y a continuacion multiples lavados con heptano y secado al aire para dar 64,38 g (rendimiento de 76%) del producto del epigrafe 6 como un solido cristalino de color canela (pureza por LC de 99,3%). Se obtuvieron del filtrado otros 5,88 g de material menos puro.
40 1H NMR (CDCl3) 5 2,59 (t, 4 H), 2,84 (t, 2 H), 3,74 (t, 4 H), 3,97 (s, 2 H), 4,17 (t, 2 H), 7,02 (d, 2 H), 7,46 (d, 1 H),
7,51 (d, 2 H), 7,87 (dd, 1 H), 8,77 (d fino, 1 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 324,4 [M + 1].
imagen13
Un matraz de fondo redondo de una boca de 2 l se cargo con 6 (64,00 g, 0,198 mol) y MeOH (360 g) seguido por la 45 adicion lenta, cuidadosa y gota a gota de H2SO4 (240 g) y la solucion homogenea resultante se agito a reflujo (bano de aceite de 115°C) hasta que se completo la reaccion (25 h con 0,8% de materia prima sin reaccionar) con ArCH2CO2H al 3,5%. Despues de un enfriamiento breve, se anadio MgSO4 (75 g) y la mezcla se sometio a
turbulencia y se dejo reposar 45 min. adicionales (composition ahora 96,3% de producto, 0,8% de materia prima sin reaccionar y 2,5% de ArCH2CO2H). A continuation, la mezcla de reaction se anadio lentamente a una mezcla rapidamente agitada y enfriada (bano de agua de hielo) de DCM (2 l) y una solution de K2CO3 (450 g) en H2O (600 ml). La emulsion resultante se dejo reposar durante la noche. Las porciones transparentes de solucion organica se 5 separaron con sifon y las porciones restantes se trataron repetitivamente con agua y DCM, combinandose las fases organicas transparentes con la portion original que se separaba con sifon. Las fases organicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron hasta un volumen de ~1,2 l seguido por la adicion de 300 ml de EtOAc al 5% (en heptano) y a continuacion heptano (300 ml) y la mezcla se concentro (rotavapor con calor) de nuevo para retirar el DCM. En este punto, se anadieron 15 ml de EtOAc y la mezcla caliente se sometio a 10 turbulencia hasta que hubo comenzado la cristalizacion, la turbulencia continuo hasta que la cristalizacion era casi completa, y a continuacion se dejo reposar y enfriar hasta temperatura ambiente para la cristalizacion completa. A continuacion, el solido se filtro, se lavo con 300 ml de EtOAc al 5% (en heptano) y heptano (100 ml) y a continuacion se seco completamente al aire para dar 57,74 g (rendimiento de 82%) de 7 como un solido amarillo claro (98,9% del AUC). Se obtuvieron otros 3,94 g de producto puro (97,9% del AUC) a partir del filtrado (rendimiento total de 87%).
15 1H NMR (CDCl3) 6 2,60 (t, 4 H), 2,84 (t, 2 H), 3,74 (t ys solapados, 6 H), 3,89 (s, 2 H), 4,17 (t, 2 H), 7,01 (d, 2 H),
7,34 (d, 1 H), 7,49 (d, 2 H), 7,80 (dd, 1 H), 8,74 (d fino, 1 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 357,4[M + 1].
imagen14
Preparacion de N-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetamida (base libre de KX2-391).
Un matraz de fondo redondo de una boca de 1 l se cargo con 7 (61,4 g, 0,172 mol), bencilamina (55,6 g, 0,519 mol, 20 3 eq) y anisol anhidro (300 g) y a continuacion se agito a reflujo hasta que la reaccion se completaba esencialmente
(23 h, temperatura del bano de aceite 165°C; la temperatura interna era 147°C) y a continuacion se dejo enfriar hasta cerca de la temperatura ambiente. Una porcion (1 ml) de la mezcla de reaccion se diluyo con tolueno (1 ml) dando como resultado la cristalizacion completa de esa porcion. Esta semilla se anadio a continuacion a la mezcla de reaccion y se dejo reposar hasta que toda la mezcla de reaccion hada cristalizado en un solo bloque. Se anadio 25 tolueno (150 ml) y la mezcla se sometio a turbulencia para romper el solido. Se anadio heptano/tolueno (1:1, 100 ml) y la mezcla solida se rompio mas. Finalmente, se anadio heptano (50 ml, a continuacion 25 ml) y la mezcla se rompio aun mas, dejando reposar 30 min. adicionales antes de filtrar el solido. La filtration del solido, el lavado con tolueno/heptano 2:1 (300 ml), tolueno/heptano 1:2 (300 ml) y a continuacion heptano (2 x 300 ml) y a continuacion el secado (aire, a continuacion alto vado) dieron 60,16 g (rendimiento de 81%) del producto del epigrafe como un 30 solido blanco (>98,9% del AUC). Se obtuvieron otros 2,5 g de material menos puro (97,4%) a partir de las aguas madres.
1H NMR (CDCh) 6 2,60 (t, 4 H), 2,83 (t, 2 H), 3,74 (t, 4 H), 3,82 (s, 2 H), 4,18 (t, 2 H), 4,49 (d, 2 H), 7,01 (d, 2 H), 7,27,35 (m, 6 H), 7,49 (d, 2 H), 7,64 (t an, 1 H), 7,81 (dd, 1 H), 8,69 (d fino, 1 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 432,5 [M + 1].
35
Preparacion de cloruro de 4-(2-(4-(6-(2-(bencilamino)-2-oxoetil)piridinio-3-il)fenoxi)etil)-morfolin-4-io (KX2-391, sal de diHCl).
Se anadieron 170 ml de HCl 2,5 M (en etanol) a una suspension agitada de KX2-391 (base libre, 60,00 g) en EtOH absoluto (600 ml), anadiendose 25 ml de EtOH para lavar las paredes del matraz. La solucion homogenea resultante 40 se agito a temperatura ambiente (20 min) y a continuacion se evaporo casi hasta sequedad (hasta la formation de espuma). Despues de capturar con EtOH (2 x 150 ml), el residuo se recogio de nuevo en EtOH (150 ml) y a continuacion fue seguido por la adicion lenta de heptano hasta que la mezcla pareda saturada (se requenan 33 ml para que permaneciera la turbidez). Despues de asentar durante la noche, se hadan formado dos capas. Despues de anadir heptano adicional (250 ml), ya no se podia inducir cristalizacion y asi la mezcla de reaccion concentro
imagen15
hasta un volumen de ~200 ml, momento en el cual la mezcla era homogenea. Esta solucion homogenea espesa se anadio gota a gota a EtOAc (2 l) agitado muy rapidamente (mecanicamente). Despues de que se completara la adicion, se anadio un enjuague de 25 ml de EtOH del matraz original y el embudo de adicion a la mezcla agitada rapidamente. La agitacion rapida se continuo durante otra ~1 h y a continuacion la mezcla se filtro y el solido 5 (parcialmente gomoso) se lavo con EtOAc (300 ml) y a continuacion heptano. Tan pronto como comenzaba el lavado de heptano, el solido se volvfa mucho mas gomoso. El embudo de Buchner fritado y su contenido se cubrieron (toalla de papel/banda de goma) y se pusieron inmediatamente en el horno de vado. Despues de un vado durante la noche a ~45°C, el vado se libero bajo nitrogeno, y el embudo de Buchner que contema el producto (solido espumoso) se puso inmediatamente en una bolsa de cierre de cremallera y a continuacion, bajo nitrogeno (bolsa con
10 guantes), se transfirio a una botella y el solido espumoso se rompio (espatula) hasta un polvo. Una segunda noche bajo alto vado (~45°C) dio como resultado solamente 1,3 g de perdida de peso adicional. El peso constante se alcanzaba esencialmente con la tercera noche de alto vado (~45°C) en la que solo se perdfan 0,2 g de peso. El peso final del material era 68,05 g (rendimiento de 97%), que contema 0,29 eq (4,8% p/p) de EtOAc, 0,035 eq (0,3% p/p) de EtOH y 0,03 eq (0,6% p/p) de heptano. La pureza era 99,6%. 1H NMR (DMSO-da) 8 3,1-3,3 (m, 2 H), 3,4515 3,65 (m, 4 H), 3,8-4,0 (m, 4 H), 4,11 (s, 2 H), 4,32 (d, 2 H), 4,57 (t, 2 H), 7,19 (d, 2 H), 7,2-7,4 (m, 5 H), 7,88 (d, 2 H),
7,93 (d, 1 H), 8,68 (dd, 1 H), 8,99 (t an, 1 H), 9,10 (d fino, 1 H), 11,8 (s an, 1 H). MS (a partir de LC/MS): m/z 432,5 [M + 1 de base libre].
Analisis elemental (para C26H29N3O3 • 2 HCl • 0,035 EtOH • 0,29 EtOAc • 0,03 heptano • 0,8 H2O): a. Calculado (%): C, 60,03; H, 6,54; N, 7,65; Cl, 12,91
20 b. Observado (%):C, 59,85/59,97; H, 6,54/6,47; N, 7,67/7,67; Cl, 13,10/13,24 Peso formula calculado: 534,63
(no tiene en cuenta los 0,8 H2O que probablemente surgfan durante el manejo de este polvo muy higroscopico, puesto que la 1H NMR no muestra evidencia de H2O). Se midio el nivel de cloruro de etilo en este material y se encontro que era 98 ppm. Tambien se analizo la muestra y se encontro que contema 5.800 ppm de heptano.
25 El analisis de otra porcion de esta muestra dio los siguientes resultados: 99,6% del AUC, 1.640 ppm de etanol, 41.480 ppm de acetato de etilo, 5.600 ppm de heptano, no se detecto anisol, y 120 ppm de cloruro de etilo.
Tambien se desarrollo un procedimiento para recristalizar la sal usando la sal secada anteriormente. Este procedimiento funcionana igual de bien en la sal en bruto muy pura (que contiene EtOH residual) obtenida de concentrar la mezcla de reaccion que forma la sal de HCl:
30 La sal (575 mg) se disolvio en dos veces la masa de EtOH absoluto (1,157 g) y a continuacion se calento bajo nitrogeno. Se anadieron 1,6 g de EtOH al 25% (en EtOAc) a esta solucion caliente (agitada) seguido por la adicion de EtOAc (0,25 ml), dando como resultado una turbidez que se mantema. La solucion caliente turbia se dejo enfriar hasta temperatura ambiente, tiempo durante el cual se produda la cristalizacion. Despues de que se completara la cristalizacion (2 h), el solido cristalino se filtro, se lavo con EtOAc anhidro (~40 ml) y se seco a vado para dar 424
35 mg de la sal de dihidrocloruro de KX2-391 como un solido que fluye libremente (cuentas diminutas, 99,8% del AUC) que contiene solo 0,05 eq (0,45% p/p) de EtOH y 0,015 eq (0,26% p/p) de EtOAc. Se obtuvo una recuperacion ligeramente mejor (460 mg a partir de 586 mg) usando isopropanol/EtOAc pero el nivel de atrapamiento de disolvente era superior [0,085 eq (1,0% p/p) de isopropanol y 0,023 eq (0,4% p/p) de EtOAc].
Ejemplo 3: Smtesis a gran escala de KX2-391
40 Este ejemplo describe el desarrollo de una ruta sintetica para la preparacion de KX2-391.2HCl a una escala de al menos 100 g. Este procedimiento se puede usar, por ejemplo, para producir cantidades de material en kilogramos. La ruta final se representa en el Esquema 1. La ruta tiene seis etapas e incluye una formacion de eter, un acoplamiento de Suzuki, un desplazamiento de fluoruro y una solvatacion catalizada por acido. Este procedimiento se probo a una escala de una partida de demostracion de 105 g.
45
imagen16
Se desarrollaron varias modificaciones para el procedimiento descrito en el Ejemplo 2 para la smtesis del eter. Cuando la smtesis del eter se efectuaba en acetonitrilo como disolvente, la mezcla de reaccion era una suspension 5 muy espesa y dificil de agitar. Por lo tanto, el disolvente se cambio por dimetilformamida (DMF), que generaba una suspension blanca diluida mas manejable. Tambien se determino que no eran esenciales condiciones rigurosamente secas, por ejemplo, 0,3 volumenes de agua desionizada (DI) sin efectos perjudiciales en la pureza o el rendimiento de la reaccion. Debido a los cambios en el disolvente de reaccion por DMF, tambien se modificaba el tratamiento. El tratamiento modificado implicaba ahora la dilucion con agua DI y la extraccion con MTBE. Tambien era conveniente 10 efectuar un lavado basico con hidroxido sodico acuoso para retirar cualquier 4-bromofenol restante. La smtesis del eter se aumento a escala para convertir 3.435 g de hidrocloruro de 4-(3-cloropropil)morfolina en 4.800 g de 4-(2-(4- bromofenoxi)etil)morfolina (2). La pureza mediante HPLC (% del AUC) era 99,9%).
Etapa 2: Preparacion de acido 6-fluoropiridin-3-ilboronico (4)
La formacion del acido boronico 4 se mejoro de varios modos al cambiar el orden de adicion y los disolventes. El 15 procedimiento inicial requena anadir una solucion de n-BuLi en hexanos a una solucion fna de MTBE. A continuacion, la solucion anionica se enfrio hasta menos de -75°C y se anadio lentamente una segunda solucion de 5-bromo-2-fluoropiridina en MTBE. Se anadio borato de triisopropilo en porciones en una secuencia rapida a la mezcla resultante. Este procedimiento no era propenso al aumento a escala debido a la rapida adicion del borato de triisopropilo. El desarrollo de este procedimiento tema prioridad al seguir un procedimiento publicado (Li, et al., J. 20 Org. Chem. 2002, 67, 5394-5397). Una mejora era premezclar 5-bromo-2-fluoropiridina y borato de triisopropilo en una solucion de tolueno y THF. La mezcla se enfrio entre -50 y -35°C y a continuacion se anadio una solucion de n- BuLi para formar el anion arilo que a continuacion se desactivo in situ mediante borato de triisopropilo para formar el borato de arilo. Este procedimiento no solo controlaba el episodio exotermico, sino que tambien conduda a
temperatures mas calientes que menos de -75°C como se describe previamente. Se penso que si se obteman temperaturas mas calientes durante la reaccion, se observana una reaccion de eliminacion competitiva de HBr del bromobutano. No se exploro si el n.BuLi o el anion arilo era la base en la reaccion secundaria. El tratamiento se modifico al anadir una extraccion con hidroxido sodico acuoso en lugar de solo acido clortudrico acuoso. Las 5 extracciones acuosas se combinaron cuidadosamente, lo que daba como resultado que solo se necesitaba un pequeno ajuste del pH.
La preparacion de acido 6-fluoropiridin-3-ilboronico (4) avanzo bien para convertir 5.050 g de 5-bromo-2- fluoropiridina para dar 3.515 g del acido boronico 4 en 3 partidas. Los detalles se pueden observar en la Tabla 3.
Etapa 3: Preparacion de 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina (5)
10 Al realizar las reacciones de acoplamiento de paladio a menor escala, se aprecio que se formaban solidos sobre las paredes de vidrio del reactor. Debido a que los solidos actuanan como un aislante, el aumento a escala de esta reaccion podna dar como resultado un sobrecalentamiento del reactor. Se acometieron dos enfoques para evitar el sobrecalentamiento. La cantidad de agua anadida a la reaccion se incremento de 2,3 a 4,0 volumenes y, cuando la reaccion se efectuaba a una escala de kilogramos, se uso un termopar adicional entre el reactor y la manta 15 calentadora para controlar el calentamiento si se alcanzaba una temperatura umbral. La reaccion de acoplamiento se completo en dos partidas, de modo que un total de 5.269 g de 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina se convertfa en 5.735 g de 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina, y la pureza mediante HPLC de las partidas era 94,9 y 90,3 (% del AUC).
Etapa 3a: Purificacion de 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina (5)
20 El producto en bruto procedente del acoplamiento de paladio se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice. El material (5.735 g) se purifico en siete columnas para dar el compuesto 5 como un solido pardo claro (4.220 g, 97,6 de AUC por HPLC), y el nivel de paladio era 0,2% en peso. En la partida para toxicologfa, se observaron niveles de paladio de 7 y 11 ppm en la fase del compuesto 5 purificado.
Etapa 4: Preparacion de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo (6)
25 Se realizaron varias modificaciones en el desarrollo de una reaccion de desplazamiento de fluoruro aumentable a escala. La reaccion de desplazamiento requena hexametildisilano potasico (KHMDS), que no estaba disponible comercialmente como una solucion en THF. Por lo tanto, la reaccion requena preparar la mezcla a partir del solido. Esta operacion sena indeseable para una reaccion a gran escalada. Se evaluaron tres cationes diferentes (LiHMDS, KHMDS y NaHMDS). El LiHMDS dio como resultado una mezcla de reaccion de color pardo oscuro, sin conversion 30 observada. El NaHMDS se comportaba de forma equivalente a KHMDS. Estan facilmente disponibles soluciones en THF de NaHMDS.
El uso de un gran exceso de base (KHMDS, 8 equiv.) y nucleofilo (acetonitrilo, 6,5 equiv.) en reacciones a menor escala no estaba de acuerdo con lo que se ha presentado en la bibliograffa con sistemas similares (2 equivalentes de base y 1 equivalente del nucleofilo: vease Klapars, et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 10186-10189). Disminuir los 35 equivalentes de NaHMDS y acetonitrilo en proporcion dio como resultado conversiones incompletas. Sin embargo, se apuntaba que la reaccion se podfa llevar hasta la terminacion cuando se anadfan equivalentes adicionales de base y acetonitrilo. Inicialmente en el desarrollo, el compuesto 5 en THF se anadio rapidamente a una solucion de acetonitrilo y base. Las adiciones rapidas a escala no senan aceptables o plausibles. Los tiempos de espera y los tiempos de adicion se prolongaron a pequena escala para simular los tiempos de espera y el tiempo de adicion 40 requeridos a escalas mayores. Con tiempos de adicion y tiempos de espera mas prolongados, las conversiones se deterioraban mucho, de 43 a 5%, respectivamente. Mantener la solucion de base y acetonitrilo durante 2 h antes de anadir una solucion de 5 proporcionaba rapidamente conversiones pobres (5%). La base y el acetonitrilo no son compatibles y dan como resultado la degradacion de los reactivos. Por lo tanto, el orden de adicion de reactivos se cambio de modo que la base y el compuesto 5 se premezclaran y el acetonitrilo se anadiera lentamente. La reaccion 45 realizada usando el nuevo procedimiento dio como resultado una conversion consecuentemente en los 90. Los equivalentes mmimos de NaHMDS y acetonitrilo usados satisfactoriamente eran 5 equivalentes y 4 equivalentes, respectivamente. Se alcanzaba una disminucion de 40% en los equivalentes tanto de base como de acetonitrilo.
Etapa 5: Preparacion de 2-(5-(4-(2-morfolindetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo (7)
Tfpicamente, la metanolisis catalizada por acido del nitrilo 6 daba como resultado una pequena cantidad del acido 50 carboxflico 7a. Un enfoque adoptado para retirar agua ventajosa, una fuente probable de 7a, era anadir acido sulfurico fumante a la mezcla de reaccion de metanol y acido sulfurico concentrado. El acido sulfurico concentrado se suministra normalmente como una solucion al 95-98%. El acido sulfurico fumante retira el 2-5% de agua contenida en el acido sulfurico. Usar la mezcla de acido sulfurico concentrado y fumante proporcionaba consecuentemente menos de 6% del acido carboxflico 7a como un subproducto, que se retiraba facilmente con 55 tratamiento acuoso.
Desactivar la reaccion bajo condiciones acuosas requena una atencion cuidadosa para evitar generar el acido carboxflico 7a. La estabilidad del ester 7 se determino a pH 1, 9 y 13-14 al agitar en metanol y agua durante 18 h
5
10
15
20
25
cada uno. Despues de 18 h, hada 19% de conversion en 7a a pH 1, 37% de conversion a pH 9 y 100% de conversion a pH 13-14. La reaccion se desactivo al anadir una mezcla agitada de bicarbonato sodico saturado y diclorometano asegurando mantener la temperatura por debajo de 20°C.
Conviene destacar que durante una reaccion a pequena escala en la que el metanol se evaporaba por equivocation, se formaba una nueva impureza atribuida a la amida 7b por los datos de LC/MS. Un procedimiento precedente para preparar amidas a partir de nitrilos es tratar con acido sulfurico concentrado (Sarel, S., J. Am. Chem. Soc., 1956, 79, 5416).
imagen17
Etapa 6: Preparation de KX2-391
El procedimiento para la formation de amida descrito para la reaccion a media escala funcionaba bien a gran escala. El ester metflico 7 y bencilamina (3 equiv.) se disolvieron en anisol y se calentaron a 150°C durante casi 2 dias. Sin embargo, el aislamiento del producto usando el procedimiento a media escala puede dar como resultado una masa solida de producto. Para evitar este problema, la mezcla de reaccion no se enfriaba hasta temperatura ambiente, sino que se enfriaba hasta 45-50°C antes de anadir el antidisolvente. Se usaban tolueno y heptano como antidisolvente en el procedimiento original. Usar n-heptano solo proporcionaba una pureza adecuada y rendimientos incrementados de 81 a 90%. Ademas, el uso de un solo isomero de heptano era esencial para cuantificar adecuadamente el disolvente residual.
Etapa 7: Preparacion de KX2-391-2HCI
Debido a la naturaleza higroscopica del KX2-3912HCl, se adoptaron precauciones adicionales a fin de preparar la reproducibilidad de la sal de bis-HCl. Se formo una solution de HCl seco en etanol al anadir cloruro de acetilo a etanol absoluto. A continuation, la base libre de KX2-391 se trato con esta solucion bajo una atmosfera de nitrogeno. Se emplearon a continuacion concentration y secado azeotropico. Sin embargo, la cristalizacion de KX2- 3912HCl no se obtema reproduciblemente. Se usaron varios disolventes diferentes, por ejemplo, IPA (alcohol isopropflico), acetato de etilo/IPA, etanol, propanol y alcohol butflico (Tabla 1). Los experimentos de la Tabla 1 son los intentos iniciales para explorar diferentes condiciones de cristalizacion y precipitation. Las condiciones experimentales finales que produtian los dos lotes presentados (E y F) se seleccionaron basandose en esta informacion.
Tabla 1: Estudio de cristalizacion de KX2-391 2HCI
Condiciones de Formacion de Sal
Condiciones de Cristalizacion Comentarios
Expt
Amida (g) Lote Disolvente Acido Disolvente (vo I) Lote EtOAc (vo I) Temp. (C) Solidos Correctos (s/n)
02BP097A
0,1 02BP090D (blancuzco) I PA IPA-HCI (5M) I PA (10) - 10 60 N Solidos gomosos / lechada formada al anadir EtOAc
02BP097B
0,1 02BP09 1 E (bianco) I PA IPA-HCI (5M) I PA (10) - - 60 N Formacion de goma con enfriamiento
02BP097 C
0,1 02BP09 1 E (bianco) I PA IPA-HCI (5M) I PA (15) - 6 65 N Secado con EtOAc en primer lugar; producto formado como aceite con enfriamiento
02BP097 D
0,1 02BP09 IE (bianco) -- IPA-HCI (5M) EtOAc/1 PA - - 60 N IPA-HCI anadidos a la solucion de amida; formacion de goma durante la adicion (2 gotas)
02BP097E
0,3 02BP090D (blancuzco) EtOH IPA-HCI (5M) EtOH (3,3) Acros 6,3 30-60 S Solidos observados a 30°C despues de anadir EtOAc; filtracion lenta
02BP097F
0,3 02BP093G (solido canela) EtOH IPA-HCI (5M) EtOH (3,3) Acros 6,6 60 S Solidos observados durante el enfriamiento despues de anadir EtOAc; filtracion lenta
02BP097 G
0,3 02BP093G (solido canela) PrOH IPA-HCI (5M) PrOH (3,3) - 1,7 60 S Solidos observados durante el enfriamiento despues de anadir EtOAc; filtracion lenta
02BP097 H
0,3 02BP093G (solido canela) BuOH IPA-HCI (5M) BuOH (5) - 1,2 60 S Solidos observados durante el enfriamiento despues de anadir EtOAc; filtracion muy lenta
02BP098 A,B,C
1,0 02BP093G (solido canela) EtOH IPA-HCI (5M) EtOH (3,3) Aid 4-6 60 N Turbidez observada antes de lo esperado; formacion de aceite
02BP098 D
1,0 02BP093G (solido canela) EtOH EtO H-HCI (2,5 M) EtOH (3,3) Aid 4,6 60 N Formacion de aceite al enfriar
02BP098E
0,3 02BP090D (blancuzco) EtOH EtO H-HCI (2,5 M) EtOH (3,3) Aid 5,3 60 N Formacion de aceite a partir de la adicion de EtOAc
02BP098F
0,3 02BP09 1 E (bianco) EtOH IPA-HCI (5M) EtOH (3,3) Acros 6 60 N Formacion de aceite a partir de la adicion de EtOAc
02BP098 G
0,3 02BP09 1 E (bianco) PrOH IPA-HCI (5M) PrOH (3,3) - 4 60 N Formacion de aceite con enfriamiento
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Se alcanzo una precipitacion satisfactoria mediante una adicion inversa de KX2-391.2HCI en una solucion concentrada de etanol a un gran volumen de acetato de etilo que se agita rapidamente. Este procedimiento de precipitacion se puso en practica para la partida de demostracion dando como resultado la formacion de dos tipos de solidos distintos. Los dos tipos de solidos distintos se separaron ffsicamente y se filtraron separadamente. Un solido canela menos denso (lote 02BP111E, 74 g, 99,1% del aUc mediante HPLC) se filtro en primer lugar, seguido por un solido mas oscuro mas denso (lote 02BP111F, 43 g, 99,1% del AUC mediante HPLC). Despues de secar en un horno de vado y antes de combinar los dos solidos, una muestra de cada uno se reservo para el analisis. Los datos de interes son la calorimetna diferencial de barrido (DSC, por sus siglas en ingles, Figuras 1 y 2) la difraccion del polvo de rayos X (XRPD, por sus siglas en ingles, Figuras 3 y 4). Los datos de HPLC para las dos muestras eran comparables aunque la DSC y la XRPD eran diferentes.
Ambas preparaciones de HPLC teman mas de 99,0% de pureza (por el % del area), la muestra del lote 02BP111E mostraba un solo episodio endotermico a aproximadamente 198°C mientras que la muestra del lote 02BP111F mostraba dos episodios endotermicos a 117°C y 189°C. Los datos de XRPD para las dos muestras tambien eran diferentes. La muestra del lote 02BP111E pareda cristalina mientras que la muestra del lote 02BP111F pareda ser amorfa. Los datos de HPLC, los datos de XRPD y los datos de DSC apoyan que las dos muestras son formas diferentes del mismo material.
Los dos lotes de KX2-3912HCl (lote 02BP111E y 02BP111F) se combinaron en seco dando como resultado un nuevo lote de KX2-3912HCl (lote 02BP111G). KX2-3912HCl (lote 02BP111G) contema 170 ppm de cloruro de etilo.
Parte experimental
Los reactivos y los disolventes se usaron segun se recidan de proveedores comerciales. El avance de las reacciones se verifico mediante HPLC, GC/MS o 1H NMR. Se realizo cromatograffa en capa fina (TLC) usando placas de gel de sflice Analtech y se visualizaron mediante luz UV (254 nm). Se realizo cromatograffa de lfquidos de alta presion (HPLC) en un instrumento de la serie Agilent 1100. Los espectros de resonancia magnetica nuclear de proton y carbono se obtuvieron usando un Bruker AV 300 a 300 MHz para el proton y 75 MHz para el carbono. El pico del disolvente se uso como un pico de referencia para los espectros de proton y carbono.
Preparacion de 4-(2-(4-Bromofenoxi)etil)morfolina (2)
Un reactor de 50 l con envuelta equipado con un condensador de reflujo y una sonda de temperatura se cargo con 4-(3-cloropropil)morfolina (2,44 kg, 0,54 mol), 4-bromofenol (2,27 kg, 0,54 mol, 1,0 equiv.), carbonato potasico en polvo (6,331 kg, 1,88 mol, 3,50 equiv.) y DMF (12,2 l) y se agito. A continuacion, la mezcla de reaccion se calento hasta 60-65°C y se agito durante la noche. Despues de 17,5 h, la mezcla de reaccion se enfrio hasta 20-25°C. La mezcla de reaccion se cargo a un reactor diferente equipado con una valvula de fondo para el tratamiento. Mientras se mantema la temperatura entre 20-30°C, se cargo al reactor agua DI (48,7 l). Las fases se separaron. La capa acuosa se extrajo con MTBE (3 * 24,4 l). Se anadieron agua DI (18,3 l) y a continuacion hidroxido sodico 6M (18,2 l) a las fases organicas combinadas. La mezcla se agito durante 2-5 minutos y las fases se separaron. La fase organica se lavo con agua (24,4 l) y salmuera (24,4 l), se seco sobre sulfato magnesico, se filtro y se concentro para dar 3.370 g de un aceite amarillo (rendimiento del producto en bruto 89%, 99,4% de AUC mediante HPLC).
Preparacion de acido 6-fluoropiridin-3-ilboronico (4)
Un reactor de 72 l estaba equipado con un condensador de reflujo y una sonda de temperatura. Se cargaron al reactor 5-bromo-2-fluoropiridina (1,17 l, 0,568 mol), tolueno (18,2 l) y borato de triisopropilo (3,13 l, 0,68 mol, 1,2 equiv.) y se agitaron. Se anadio al reactor tetrahidrofurano (4,4 l) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta entre -35 y -50°C. Mientras se mantema una temperatura entre -35 y -45°C, se anadio cuidadosamente al reactor n-butil-litio (solucion 2,5 M de hexanos, 5,44 l, 0,68 mol, 1,2 equiv.). Despues de 5 h, la reaccion se consideraba completa y la mezcla de reaccion se calento hasta entre -15 y -20°C. Se anadio a la reaccion HCl 2 M (11,80 l) mientras se mantema una temperatura entre -15°C y 0°C. La mezcla de reaccion se agito a de 18 a 23°C durante 16 h y las fases se separaron. A continuacion, las fases organicas se extrajeron con hidroxido sodico 6 M (6,0 l). Las fases acuosas acidas y basicas se mezclaron en el reactor y se anadio HCl 6 M (2,5 l) hasta que se alcanzaba un pH 7,5. A continuacion, se anadio cloruro sodico (6,0 kg) a la fase acuosa. A continuacion, la fase acuosa se extrajo con THF (3 x 20 l). Las fases organicas combinadas se secaron con sulfato magnesico y se concentraron para dar 1.300 g de un solido canela (81% de rendimiento del producto en bruto).
Preparacion de 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina (5)
Un reactor de 72 l equipado con condensador de reflujo, tubo de rociado, burbujeador y sonda de temperatura se cargo con acido 6-fluoropiridin-3-ilborico (2,84 kg, 1,24 equiv.), 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina (4,27 kg, 1,0 equiv.) y DME (27 l). Se inicio la agitacion y a continuacion se cargo a la mezcla de reaccion carbonato sodico (4,74 kg, 3,0 equiv.) como una solucion en agua DI (17,1 l). Se burbujeo argon a traves de la mezcla de reaccion durante 50 minutos. Bajo una atmosfera de argon, se anadio tetraquis(trifenilfosfina)paladio (750 g, 0,04 equiv.) a la mezcla de reaccion como una suspension en DME (1,0 l). La mezcla de reaccion se calento hasta 75 - 85°C y se agito durante la noche (17 h). La mezcla de reaccion se enfrio hasta entre 18 - 22°C. Se cargaron al reactor agua DI
(26,681kg) y MTBE (26,681 l) y se agitaron durante 5 minutes. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con MTBE (2 x 26,7 l). Las fases organicas combinadas se extrajeron con HCl 2 M (1 x 15,0 l, 3 x 21,8 l). La fase acuosa se cargo de nuevo al reactor y se anadio acetato de etilo (26,7 l). El pH se ajusto hasta 6,2 usando hidroxido sodico 6 M (26,7 l) mientras se mantema una temperature entre 15 - 25°C. Las fases se separaron y la fase acuosa 5 se extrajo con acetato de etilo (2 x 26,7 l). Las fases organicas combinadas se secaron con sulfato magnesico y se concentraron para dar 4.555 g de un residuo (101% de rendimiento del producto en bruto, 67,1% del AUC mediante HPLC).
Purificacion de 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina (5)
El producto en bruto (575 g) se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice al eluir con metanol/acetato de 10 etilo/heptano (acetato de etilo al 30%/heptano, acetato de etilo al 50%/heptano, acetato de etilo al 75%/heptano, acetato de etilo al 100% y metanol al 5%/acetato de etilo). La concentracion de las fracciones puras mediante TLC (metanol al 10%/diclorometano, Rf = 0,3) proporciono 420 g de un solido pardo claro (73% de recuperacion, >99,9% del AUC mediante HPLC).
Preparacion de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo (6)
15 Una solucion 1 M de NaHMDS (2,0 l, 5,0 equiv.) en THF se cargo a un matraz de 5 l y se enfrio hasta de -20 a -15°C. Mientras se mantema una temperatura por debajo de -10°C, se cargo al matraz fluoruro (119,7g, 1,0 equiv.) en THF (500 ml) a lo largo de 20 minutos. Se anadio al matraz acetonitrilo (82,5 ml, 4,0 equiv.) en THF (170 ml) a lo largo de 20 minutos, mientras se mantema una temperatura por debajo de -10°C. A continuacion, la mezcla de reaccion se agito durante 1 h. Se anadio salmuera (1,5 l, 12,6 vol.) a la reaccion a una velocidad para mantener una 20 temperatura por debajo de 10°C. A continuacion, la solucion se calento hasta temperatura ambiente y se dejo que las capas se separaran. La mezcla se filtro sobre Celite y se lavo con THF (1 x 200 ml, 1 x 100 ml). La fase acuosa se extrajo con tolueno (750 ml). Las fases organicas combinadas se secaron con sulfato magnesico, se filtraron, se lavaron con tolueno (2 x 250 ml) y se concentraron hasta sequedad. Se anadio tolueno (1 l) y la solucion se concentro hasta sequedad de nuevo para dar 169,8 g de un aceite. Se anadio MTBE (1.190 ml, 7 vol.) al aceite a 25 50°C y se agito durante 15 minutos. Se anadio heptano (850 ml, 5 vol.) a lo largo de diez minutos a 50°C. A
continuacion, la mezcla se enfrio hasta temperatura ambiente a lo largo de 1,5 h y se agito durante 2 h. La suspension se filtro, se lavo con MBTE/heptano 1:4 (2 x 100 ml) y se seco en un horno durante la noche a 45°C para dar 102,3 g de un solido blancuzco (80% de rendimiento, 98,8% del AUC mediante HPLC).
Preparacion de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo (7)
30 Se cargaron el nitrilo 6 (101 g) y metanol (1,01 l, 10 vol.) a un matraz de 3 l equipado con una barra agitadora y un termopar. Se anadio gota a gota a la solucion H2SO4 concentrado (175 ml, 10,0 equiv.) a lo largo de 15 minutos mientras se mantema una temperatura por debajo de 60°C. Seguidamente, se anadio gota a gota a la solucion acido sulfurico fumante al 30% (124 ml) mientras se mantema una temperatura por debajo de 60°C. A continuacion, la solucion se calento hasta reflujo con una manta calentadora y se agito durante la noche. Cuando la reaccion se 35 consideraba completa, se enfrio hasta 20°C. En un segundo matraz (22 l), se cargaron bicarbonato sodico saturado (10,7 l) y diclorometano (1,1 l) y se enfriaron hasta 15°C. Mientras se mantema una temperatura por debajo de 20°C, la mezcla de reaccion se anadio a la mezcla de bicarbonato sodico/diclorometano. La mezcla desactivada se agito durante 15 minutos y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (1 x 550 ml, 1 x 300 ml). Las fases organicas combinadas se secaron con sulfato magnesico y se concentraron hasta sequedad para dar 105 40 g de un solido naranja (94% de rendimiento del producto en bruto, 97,7% del AUC mediante HPLC).
Preparacion de W-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetamida (KX2-391)
Se cargaron el ester 7 (103 g), anisol (513 ml, 5 vol.) y bencilamina (94 ml, 3,0 equiv.) a un matraz de 3 l equipado con un termopar y un agitador superior. A continuacion, la mezcla de reaccion se calento hasta 142°C y se agito durante dos dfas. La mezcla de reaccion se enfrio hasta 45-50°C y se agito durante 2 horas. Se anadio n-heptano 45 (1,5 l) a la mezcla gota a gota a lo largo de una hora. La solucion se enfrio hasta temperatura ambiente a lo largo de
tres horas y a continuacion se agito durante la noche. La suspension resultante se filtro, se lavo con anisol/n-heptano 4:1 (200 ml) y n-heptano (3 * 100 ml). Secando en el horno durante la noche, el producto resultante era 112,1 g de un solido canela (90% de rendimiento, 99,6% del AUC mediante HPLC). Vease la Figura 5 para la 1H NMR de KX2- 391.
50 Preparacion de sal de dihidrocloruro de A/-bencil-2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetamida (KX2-3912HCl)
Se cargo EtOH (1,0 l) a un matraz de 2 l y se anadio lentamente al matraz cloruro de acetilo (62,5 ml, 3,0 equiv.) y se agito durante 40 minutos. La solucion resultante se anadio a KX2-391 (100 g) a lo largo de 30 minutos mientras se mantema una temperatura de 30°C. La solucion se concentro hasta una masa de 270 g. La solucion concentrada se anadio a acetato de etilo (2 l) a lo largo de 20 minutos con agitacion rapida. La mezcla se agito durante la noche y 55 a continuacion se filtro bajo nitrogeno para dar dos productos solidos distintos, solidos canela (73,5 g) y solidos mas oscuros (42,2 g). Los solidos se combinaron en seco para dar un rendimiento combinado de 99%. El analisis por HPLC indicaba 99,0% de pureza (AUC). El analisis indicaba que estaba presente etanol en 2.530 ppm, acetato de
etilo en 48.110 ppm, cloruro de etilo en 170 ppm, y no se detectaban heptano ni anisol. El contenido de paladio se ensayo tres veces y se midio que era 29 ppm, 2 ppm y menos de 1 ppm.

Claims (7)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    1. Un procedimiento para preparar 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida que comprende la etapa de:
    hacer reaccionar 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-A/-bencilacetamida.
  2. 2. El procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo se prepara mediante la etapa de convertir 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo en 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo:
  3. 3. El procedimiento segun la reivindicacion 2, en el que el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo se prepara mediante la etapa de hacer reaccionar 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina con acetonitrilo.
  4. 4. El procedimiento segun la reivindicacion 3, en el que la 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina se prepara mediante la etapa de acoplar 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina con acido 6-fluoropiridin-3-il-3-boronico.
  5. 5. El procedimiento segun las reivindicaciones 1 a 4, que comprende las etapas de:
    (1) hacer reaccionar 4-(2-cloroetil)morfolina con 4-bromofenol para dar 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina;
    (2) acoplar la 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina con acido 6-fluoropiridin-3-il-3-boronico para dar 4-(2-(4-(6- fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina;
    (3) hacer reaccionar la 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina con acetonitrilo para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo;
    (4) convertir el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo en 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2- il)acetato de metilo; y
    (5) hacer reaccionar el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5- (4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida.
  6. 6. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 5, que comprende adicionalmente poner en contacto la 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-A/-bencilacetamida con una solucion de acido clortudrico para dar dihidrocloruro de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida.
  7. 7. El procedimiento segun la reivindicacion 6, que comprende las etapas de:
    (1) hacer reaccionar 4-(2-cloroetil)morfolina con 4-bromofenol para dar 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina;
    (2) acoplar la 4-(2-(4-bromofenoxi)etil)morfolina con acido 6-fluoropiridin-3-il-3-boronico para dar 4-(2-(4-(6- fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina;
    (3) hacer reaccionar la 4-(2-(4-(6-fluoropiridin-3-il)fenoxi)etil)morfolina con acetonitrilo para dar 2-(5-(4-(2- morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo;
    (4) convertir el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetonitrilo en 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2- il)acetato de metilo;
    (5) hacer reaccionar el 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)acetato de metilo con bencilamina para dar 2-(5- (4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida; y
    (6) poner en contacto la 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-W-bencilacetamida con una solucion de acido clorfudrico para dar dihidrocloruro de 2-(5-(4-(2-morfolinoetoxi)fenil)piridin-2-il)-A/-bencilacetamida.
ES07863295.7T 2006-12-28 2007-12-28 Composición y métodos para modular una cascada de cinasa Active ES2559687T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US87776206P 2006-12-28 2006-12-28
US877762P 2006-12-28
PCT/US2007/026457 WO2008082637A1 (en) 2006-12-28 2007-12-28 Composition and methods for modulating a kinase cascade

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2559687T3 true ES2559687T3 (es) 2016-02-15

Family

ID=39232910

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES07863295.7T Active ES2559687T3 (es) 2006-12-28 2007-12-28 Composición y métodos para modular una cascada de cinasa

Country Status (11)

Country Link
US (1) US7851470B2 (es)
EP (1) EP2114934B1 (es)
JP (4) JP2010514771A (es)
CN (3) CN101616915B (es)
AU (1) AU2007340350B2 (es)
CA (1) CA2673974C (es)
DK (1) DK2114934T3 (es)
ES (1) ES2559687T3 (es)
HK (1) HK1136570A1 (es)
TW (1) TWI457336B (es)
WO (1) WO2008082637A1 (es)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7968574B2 (en) * 2004-12-28 2011-06-28 Kinex Pharmaceuticals, Llc Biaryl compositions and methods for modulating a kinase cascade
ATE544748T1 (de) 2004-12-28 2012-02-15 Kinex Pharmaceuticals Llc Zusammensetzungen und verfahren für die behandlung von zellproliferationserkrankungen
US20070202186A1 (en) 2006-02-22 2007-08-30 Iscience Interventional Corporation Apparatus and formulations for suprachoroidal drug delivery
CA2656564C (en) 2006-06-29 2015-06-16 Kinex Pharmaceuticals, Llc Biaryl compositions and methods for modulating a kinase cascade
US7939529B2 (en) 2007-05-17 2011-05-10 Kinex Pharmaceuticals, Llc Process for the preparation of compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof
US20210198202A1 (en) * 2006-12-28 2021-07-01 Athenex, Inc. Compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof
US7935697B2 (en) 2006-12-28 2011-05-03 Kinex Pharmaceuticals, Llc Compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof
US20100256147A1 (en) * 2007-04-13 2010-10-07 Hangauer Jr David G Biaryl acetamide derivatives as modulators of the kinase cascade for the treatment of hearing loss, osteoporosis and cell proliferation disorders
AU2014202221B2 (en) * 2007-05-17 2016-06-23 Atnx Spv, Llc Process for the Preparation of Compositions for Modulating a Kinase Cascade and Methods of Use Thereof
US8124605B2 (en) 2007-07-06 2012-02-28 Kinex Pharmaceuticals, Llc Compositions and methods for modulating a kinase cascade
WO2009051848A1 (en) * 2007-10-20 2009-04-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Pharmaceutical compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof
CA2796419C (en) 2010-04-16 2018-11-06 Kinex Pharmaceuticals, Llc Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer
EP3520749A1 (en) 2010-10-15 2019-08-07 Clearside Biomedical, Inc. Device for ocular access
CN102627663A (zh) * 2012-03-23 2012-08-08 上海泰坦化学有限公司 含氟吡啶硼酸的制备方法
TWI664167B (zh) * 2012-08-30 2019-07-01 美商艾瑟奈克斯公司 用於調節激酶級聯之組成物及方法
MX2015005839A (es) 2012-11-08 2015-12-17 Clearside Biomedical Inc Metodos y dispositivos para el tratamiento de trastornos oculares en sujetos humanos.
PT3248597T (pt) 2015-01-19 2024-03-25 Univ Keio Agente terapêutico para a perda auditiva neurossensorial
CA3005391A1 (en) * 2015-11-19 2017-05-26 Zhuhai Tairuishang Biopharm Ltd. Methods and compositions for binding vegf
US10058803B2 (en) * 2015-12-18 2018-08-28 Synfuel Americas Corporation Filter assembly and method of use
CN106902358B (zh) 2015-12-21 2020-07-10 广州市香雪制药股份有限公司 口服制剂及其制备方法
WO2017192565A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Clearside Biomedical, Inc. Systems and methods for ocular drug delivery
CN110177527B (zh) 2016-08-12 2022-02-01 科尼尔赛德生物医学公司 用于调节药剂递送用针的插入深度的装置和方法
US10213435B2 (en) 2016-08-12 2019-02-26 Athenex, Inc. Biaryl compositions and methods for modulating a kinase cascade
CN106810490A (zh) * 2017-02-06 2017-06-09 重庆泰润制药有限公司 一种二芳基化合物的晶型及其制备方法和应用
CA3055938A1 (en) 2017-03-10 2018-09-13 Athenex, Inc. Methods of treating and/or preventing actinic keratosis
WO2018204515A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Georgia Tech Research Corporation Targeted drug delivery methods using a microneedle
JP2020533412A (ja) 2017-09-07 2020-11-19 アセネックス エイチケイ イノベイティブ リミテッド ２−（５−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−ｎ−ベンジルアセトアミドの固体形態
CN110034895B (zh) 2018-01-12 2020-07-03 电信科学技术研究院有限公司 信息指示、确定方法及装置、计算机存储介质
CN109485599A (zh) * 2019-01-16 2019-03-19 重庆迈德凯医药有限公司 一种Src酪氨酸激酶抑制剂晶型、其制备方法及药物组合物
CN113354575B (zh) * 2021-06-07 2022-09-27 河南应用技术职业学院 一种特班布林的合成方法
EP4302831A1 (en) 2022-07-04 2024-01-10 Trifarma S.p.A. Process for synthesis of tirbanibulin
CN115010655A (zh) * 2022-07-21 2022-09-06 重庆迈德凯医药有限公司 一种替尼布林的纯化方法
CN115073362A (zh) * 2022-08-04 2022-09-20 重庆迈德凯医药有限公司 一种替尼布林的合成方法

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1044222B (it) 1972-05-23 1980-03-20 Zambeletti Spa L Bifenilil alcanoilaminopiridine ad attivita anti infiammatoria di lunga durata
CA1261835A (en) 1984-08-20 1989-09-26 Masaaki Toda (fused) benz(thio)amides
US5643957A (en) 1993-04-22 1997-07-01 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
ZA985542B (en) 1997-07-03 1999-04-07 Smithkline Beecham Corp Substituted benzanilides as CCR5 receptor ligands antiinflammatory agents and antiviral agents
US20030130209A1 (en) 1999-12-22 2003-07-10 Cheresh David A. Method of treatment of myocardial infarction
US20040214836A1 (en) 1998-05-29 2004-10-28 Cheresh David A. Method of treatment of myocardial infarction
JP2001023259A (ja) 1999-07-09 2001-01-26 Sony Corp 光磁気記録媒体およびその製造方法
US6844367B1 (en) 1999-09-17 2005-01-18 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Benzamides and related inhibitors of factor Xa
KR100423899B1 (ko) 2000-05-10 2004-03-24 주식회사 엘지생명과학 세포 증식 억제제로 유용한 1,1-디옥소이소티아졸리딘을갖는 인다졸
JP4160401B2 (ja) 2001-03-29 2008-10-01 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃ−ｊｕｎｎ末端キナーゼ（ｊｎｋ）および他のタンパク質キナーゼのインヒビター
DE10201764A1 (de) 2002-01-18 2003-07-31 Bayer Cropscience Ag Substituierte 4-Aminopyridin-Derivate
GB0206215D0 (en) 2002-03-15 2002-05-01 Novartis Ag Organic compounds
TWI319387B (en) 2002-04-05 2010-01-11 Astrazeneca Ab Benzamide derivatives
AU2003234464B2 (en) 2002-05-03 2009-06-04 Exelixis, Inc. Protein kinase modulators and methods of use
WO2004011427A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Smithkline Beecham Corporation Substituted benzanilides as modulators of the ccr5 receptor
US20040242572A1 (en) 2002-08-24 2004-12-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh New carboxamide compounds having melanin concentrating hormone antagonistic activity, pharmaceutical preparations comprising these compounds and process for their manufacture
CA2510471A1 (en) 2002-12-19 2004-07-08 Neurogen Corporation Substituted biphenyl-4-carboxylic acid arylamide analogues as capsaicin receptor modulators
EP2332912A1 (en) 2003-08-08 2011-06-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heteroarylaminosulfonylphenylderivates for use as sodium or calcium channel blockers in the treatment of pain
US7501538B2 (en) 2003-08-08 2009-03-10 Transtech Pharma, Inc. Aryl and heteroaryl compounds, compositions and methods of use
GB2406856B (en) 2003-10-07 2005-10-19 Renovis Inc Amide compounds as ion channel ligands and uses thereof
ATE544748T1 (de) * 2004-12-28 2012-02-15 Kinex Pharmaceuticals Llc Zusammensetzungen und verfahren für die behandlung von zellproliferationserkrankungen
US7968574B2 (en) 2004-12-28 2011-06-28 Kinex Pharmaceuticals, Llc Biaryl compositions and methods for modulating a kinase cascade
WO2006103045A1 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Ucb Pharma S.A. Compounds comprising an oxazole or thiazole moiety, processes for making them, and their uses
WO2007026920A2 (en) 2005-09-02 2007-03-08 Astellas Pharma Inc. Amide derivatives as rock inhibitors
CA2656564C (en) * 2006-06-29 2015-06-16 Kinex Pharmaceuticals, Llc Biaryl compositions and methods for modulating a kinase cascade
CA2686267C (en) * 2007-05-17 2015-10-06 Kinex Pharmaceuticals, Llc Process for the preparation of compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
JP2016222733A (ja) 2016-12-28
TW200827354A (en) 2008-07-01
AU2007340350A1 (en) 2008-07-10
CA2673974A1 (en) 2008-07-10
AU2007340350A2 (en) 2009-09-17
TWI457336B (zh) 2014-10-21
CN104230793A (zh) 2014-12-24
JP2015232050A (ja) 2015-12-24
HK1136570A1 (zh) 2010-07-02
CN101616915B (zh) 2014-12-17
DK2114934T3 (en) 2016-01-25
CN102657656A (zh) 2012-09-12
WO2008082637A1 (en) 2008-07-10
JP2010514771A (ja) 2010-05-06
CA2673974C (en) 2017-01-17
JP6022657B2 (ja) 2016-11-09
WO2008082637A9 (en) 2008-09-18
CN101616915A (zh) 2009-12-30
EP2114934A1 (en) 2009-11-11
US7851470B2 (en) 2010-12-14
JP2014037439A (ja) 2014-02-27
EP2114934B1 (en) 2015-10-21
US20080221102A1 (en) 2008-09-11
AU2007340350B2 (en) 2014-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2559687T3 (es) Composición y métodos para modular una cascada de cinasa
ES2682108T3 (es) Proceso para la preparación de composiciones para modular una cascada de quinasas y métodos de uso de estas
US10323001B2 (en) Compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof
US8293739B2 (en) Process for the preparation of compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof
AU2014200559B2 (en) Composition and Methods for Modulating a Kinase Cascade
AU2014202221B2 (en) Process for the Preparation of Compositions for Modulating a Kinase Cascade and Methods of Use Thereof