CN104208164A - 碱提酸沉法提取贞芪组合物中有效成分的方法及其产品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中有效成分的方法及其产品,按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6~15倍量的pH值为8~12的碱性溶液,90~100℃加热提取1~3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用酸将滤液pH值调至3~5,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后脱盐,干燥,即得黄酮类成分提取物,或用酸将滤液pH值调为6~7,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后脱盐,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物;将上述成分提取物应用在贞芪扶正药物的制备中。本发明能提高贞芪组合物中有效成分的提取纯度和提取率,从而降低贞芪扶正制剂服用量,治疗效果更好,提取方法安全性高。
Description
技术领域
本发明涉及一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中有效成分的方法及其产品,属于贞芪扶正制剂制备技术领域。
背景技术
贞芪扶正制剂有补气养阴、扶正固本之功效。现代药理实验证明能提高人体免疫功能,保护骨髓和肾上腺皮质功能,促进干扰素产生;配合肿瘤患者放、化疗,减轻病人放、化疗期间的毒副作用,促进正常功能的恢复的作用。其处方由黄芪、女贞子组成。目前,贞芪扶正制剂供临床选择的剂型有片剂、胶囊剂、颗粒剂及滴丸剂等。
女贞子、黄芪均富含多种药物有效成分,而在贞芪扶正制剂中起到免疫调节作用的成分主要有:萜类、多糖类、黄酮类和皂苷类成分。
目前,贞芪扶正制剂大多采用传统的制备方法制备,比如水提法、醇提法。水提法虽然提取工艺简单、操作方便,但是由于需要提取的药物有效成分有多种,通过水提法获得的药物有效成分基本为粗提物,提取率一般只有75%,这样不仅会导致患者的服用量较大,而且还会直接影响产品的质量和临床疗效。而醇提法虽然提取率较高,但是醇提法需要消耗乙醇溶剂,使得成本增加;另外,从生产的安全性出发,有机溶剂具有易燃性,并且过多的有机溶剂对操作工人的身体有害,应当尽量减少有机溶剂的使用。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中有效成分的方法及其产品,能够提高贞芪组合物中有效成分的提取率,从而降低贞芪扶正制剂的服用量,治疗效果更好;并且提取方法安全性高。
为解决上述技术问题,本发明采用如下的技术方案:
一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法为:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6~15倍量的pH值为8~12的碱性溶液,90~100℃加热提取1~3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用酸将滤液pH值调至3~5,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后脱盐,干燥,即得黄酮类成分提取物。
前述的碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法中,所述碱性溶液为碱溶液或强碱弱酸盐溶液;所述的碱溶液中的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种;所述的强碱弱酸盐为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种;所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸、柠檬酸中的一种。
优选的,按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的氢氧化钠,95℃加热提取1.5小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用盐酸将滤液pH值调至4,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后脱盐,干燥,即得黄酮类成分提取物。
前述方法提取得到的黄酮类成分提取物。
一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法为:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6~15倍量的pH值为8~12的碱性溶液,90~100℃加热提取1~3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用酸将滤液pH值调为6~7,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后脱盐,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
前述的碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法中,所述碱性溶液为碱溶液或强碱弱酸盐溶液;所述碱溶液中的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种;所述的强碱弱酸盐为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种;所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸、柠檬酸中的一种。
优选的,按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的氢氧化钠,95℃加热提取1.5小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用盐酸将滤液pH值调为6,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后脱盐,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
前述方法提取得到的皂苷类及萜类成分提取物。
一种贞芪扶正药物,其有效成分包含前述的黄酮类成分提取物和/或前述的皂苷类及萜类成分提取物。
所述的贞芪扶正药物可以是将前述方法提取得到的黄酮类和/或皂苷类和/或萜类有效成分混合其他有效成分后,加入相应辅料制成的各种药物制剂,比如胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、咀嚼剂等。
为确保本发明制剂的药效,申请人对提取工艺条件进行了一系列的试验研究和筛选,并对其药效进行了对比实验研究。
一、制备工艺研究
1、实验仪器(见表1)
表1
仪器名称 | 生产厂家 |
rocker300a真空抽滤装置 | 厦门碧析仪器有限公司 |
116摇摆式粉碎机 | 海南佳惠食品机械厂 |
R-220旋转蒸发仪 | 瑞士布其公司 |
TGL-16C型离心机 | 上海安亭科学仪器厂 |
真空干燥箱 | 上海一恒实验仪器总厂 |
2、黄酮类成分提取工艺条件筛选
在碱提酸沉法中,固液比、碱提取剂、碱性溶液pH值、提取温度、酸沉淀剂和酸沉pH值是重要影响因素,因此,为寻找黄酮类成分较佳的提取工艺条件,选取不同的固液比、碱提取剂、碱性溶液pH值、提取温度、酸沉淀剂和酸沉pH值作为考察因素,按照公式:提取率(%)=(提取物中黄酮总量/黄芪、女贞子中黄酮的总量)×100%,计算黄酮类成分的提取率,结果见表2。
据文献报道和相关研究表明:从黄芪中提取和分离黄芪总黄酮和皂苷,当酸沉pH值为2~3时,黄酮及其类似物可析出;而其他中药中沉淀黄酮类成分多用pH值3~5。本申请人经过进一步的试验考察,发现酸沉淀黄酮类成分的pH值若低于2,会破坏母核结构,故选择酸沉pH值为3~5。
表2
由上表可知,黄酮类成分提取条件为:固液比为1:6~15、表中列举的各种碱性溶液、碱性溶液pH值为8~12、提取温度为90~100℃、表中列举的各种酸沉淀剂、酸沉pH值为3~5时均能达到较好效果,其最佳提取工艺条件为:固液比为1:10,碱提取剂为氢氧化钠,碱性溶液pH值为9,提取温度为95℃,酸沉淀剂为盐酸,酸沉pH值为4。其中,提取方法可为多种如回流、煎煮等;当碱提取剂为氨水等易挥发物质时,只采用回流提取。
3、皂苷类及萜类成分提取工艺条件筛选
皂苷可分为三萜类皂苷和甾体皂苷,三萜类皂苷是酸性皂苷,而甾体皂苷是中性皂苷。黄芪皂苷属三萜类皂苷,是中性偏酸性皂苷,pH在6~7之间。又因为pH值低于5.0,酸性皂苷易被破坏而损失,故选择酸沉pH值为6~7。
女贞子中的萜类成分主要为三萜类化合物,而三萜类化合物是中性偏酸的多环有机化合物,pH在6~7之间,故选择酸沉pH值为6~7。
在碱提酸沉法中,固液比、碱提取剂、碱性溶液pH值、提取温度、酸沉淀剂和酸沉pH值是重要影响因素,因此,为寻找黄酮类成分较佳的提取工艺条件,选取不同的固液比、碱提取剂、碱性溶液pH值、酸沉淀剂和酸沉pH值作为考察因素,按照公式:提取率(%)=(提取物中皂苷及萜类总量/黄芪、女贞子中皂苷及萜类的总量)×100%,计算皂苷类及萜类成分的提取率,结果见表3。
表3
由上表可知,皂苷类及萜类成分提取条件为:固液比为1:6~15、表中列举的各种碱性溶液、碱性溶液pH值为8~12、提取温度为90~100℃、表中列举的各种酸沉淀剂、酸沉pH值为6~7时均能达到较好效果,其最佳提取工艺条件为:固液比为1:10,碱提取剂为氢氧化钠,碱水pH值为9,提取温度为95℃,酸沉淀剂为盐酸,酸沉pH值为6。其中,提取方法可为多种如回流、煎煮等;当碱提取剂为氨水等易挥发物质时,只采用回流提取。
与现有技术相比,采用本发明的贞芪组合物中有效成分的提取方法获得的黄酮类、皂苷类以及萜类成分提取物的提取率高,并且工艺、设备简单,操作方便,无环境污染,不使用有机溶剂,生产成本低,适用于工业化大生产;而采用上述有效成分提取物制得的贞芪扶正药物,其药物有效成分含量高,产品安全,可以降低制剂服用量,治疗效果更好。
具体实施方式
本发明实施例1:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法,按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的氢氧化钠溶液,95℃煎煮1.5小时,趁热过滤,滤渣用同样方法煎煮2次,合并滤液;用盐酸将滤液pH值调至4,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后透析,干燥,即得黄酮类成分提取物。
本发明实施例2:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法,按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6倍量的pH值为8的碳酸氢钠溶液,90℃煎煮1小时,趁热过滤,滤渣用同样方法煎煮2次,合并滤液;用硫酸将滤液pH值调至3,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后透析,干燥,即得黄酮类成分提取物。
本发明实施例3:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法,按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入15倍量的pH值为12的氢氧化钾溶液,100℃煎煮3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法煎煮2次,合并滤液;用磷酸将滤液pH值调至5,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后超滤,干燥,即得黄酮类成分提取物。
本发明实施例4:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的氨水溶液,95℃回流1.5小时,趁热过滤,滤渣用同样方法回流2次,合并滤液;用盐酸将滤液pH值调为6,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后超滤,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
本发明实施例5:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6倍量的pH值为8的碳酸钠溶液,90℃煎煮1小时,趁热过滤,滤渣用同样方法煎煮2次,合并滤液;用酒石酸将滤液pH值调为6.5,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后透析,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
本发明实施例6:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入15倍量的pH值为12的碳酸钾溶液,100℃煎煮3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法煎煮2次,合并滤液;用柠檬酸将滤液pH值调为7,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后透析,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
本发明实施例7:一种碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的碳酸氢钾溶液,98℃回流2小时,趁热过滤,滤渣用同样方法回流2次,合并滤液;用醋酸将滤液pH值调为6.5,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后超滤,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
本发明实施例8:一种贞芪扶正胶囊,通过以下方法制备而成:取实施例1~3中任一项的黄酮类成分提取物,另取采用方法E提取的皂苷类成分、方法C提取的萜类成分和方法D提取的多糖类成分;将上述各有效成分的干燥物混合,粉碎成药粉;在药粉中加入崩解剂、润湿剂、助流剂和吸收剂,制备成贞芪扶正胶囊。
本发明实施例9:一种贞芪扶正滴丸,通过以下方法制备而成:取实施例4~7中任一项的皂苷类及萜类成分提取物,另取采用方法D提取的多糖类成分;将上述各有效成分的干燥物混合,粉碎成药粉;将所述的药粉与基质在60~80℃下均匀混合,以10~50滴/分钟的速度滴入0~20℃的冷却剂中,即得贞芪扶正滴丸。
本发明实施例10:一种贞芪扶正分散片,通过以下方法制备而成:取实施例1~3中任一项的黄酮类成分提取物,取实施例4~7中任一项的皂苷类及萜类成分提取物,另取采用方法A提取的多糖类成分;将上述各有效成分的干燥物混合,粉碎成药粉;在药粉中加入崩解剂、润湿剂、助流剂和吸收剂,制备成贞芪扶正分散片。
上述实施例8-10中所述的方法A、方法C、方法D、方法E同下述实验例中的方法A、方法C、方法D、方法E。
为确保本发明所得制剂产品的药效,申请人对其药效进行了对比实验研究。
1、实验材料
1.1实验药物:
(1)按照本发明实施例8-10分别制得的贞芪扶正制剂。
(2)按现有工艺方法(即发明专利200310122216.7、200510038194.5)提取黄芪和女贞子中的多糖类成分、黄酮类成分、皂苷类成分、萜类成分后制得的贞芪扶正制剂。现有技术提取工艺如下:
①发明专利200310122216.7:
多糖类成分(现有技术方法A):取黄芪、女贞子药材粉碎,加水煎煮三次,每次加6倍量水,煎煮1.0小时,滤过,合并三次滤液,减压浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏,加乙醇使含醇量达70%,搅匀,静置24小时,滤过,沉淀物干燥,即得;
黄酮及皂苷类成分(现有技术方法B):取黄芪、女贞子药材粉碎,加水煎煮三次,每次加6倍量水,煎煮1.0小时,滤过,合并三次滤液,所得滤液减压回收乙醇至无醇味,继续浓缩至相对密度为1.10(20℃)的清膏,滤过,滤液通过D-101大孔树脂柱,用3倍树脂体积的水洗涤,再用4倍树脂体积的70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收乙醇后,浓缩,干燥,即得;
萜类成分(现有技术方法C):取女贞子药材粉碎,加80%乙醇回流提取三次,每次加6倍量乙醇,回流提取1小时,滤过,合并三次滤液,减压回收乙醇至无醇味,继续浓缩至相对密度为1.10(20℃)的清膏,搅拌下加入2倍量水,静置24小时,滤过,沉淀物干燥,即得。
②发明专利200510038194.5:
多糖类成分(现有技术方法D):将黄芪、女贞子加6~15倍量水煎煮3次,合并提取液,滤过,减压浓缩成每1mL相当于1.5g生药的药液,加乙醇至含醇量达60%~80%,静置24h,滤过,沉淀减压低温干燥,加适量蒸馏水溶解,再加乙醇至含醇量达60%~90%,静置24h,滤过,沉淀加蒸馏水溶解成1%的溶液,过中空纤维柱超滤,其截留分子量大于6000,超滤液减压浓缩至干,即得;
皂苷类成分(现有技术方法E):将黄芪、女贞子水提醇沉后的上清液,减压回收乙醇至无醇味,加蒸馏水使沉淀溶解,滤过,用乙酸乙酯、正丁醇或异戊醇萃取三次,合并萃取液,用1%的氢氧化钠水溶液洗涤二次,弃去碱水液,减压回收有机溶剂并浓缩至干,即得。
1.2实验动物:昆明种小鼠,♀♂各半,体重20±0.7g,由贵阳医学院实验动物中心提供;实验室光照充足,通气良好,室温18~22℃,湿度50%~70%,按常规定期消毒;自由饮水、饮食,小鼠饲养笼分笼饲养,动物实验前观察适应5天,复查合格后开始进入正式实验。
2、实验方法
2.1对小鼠免疫器官的影响
胸腺为初级淋巴器官,游走的造血干细胞进入胸腺原基,在此分化增殖成T淋巴细胞,与细胞免疫有关;脾脏为次级淋巴细胞,免疫活性细胞移行于此,并在此处因受免疫过程中异体抗原刺放而进一步增殖分化和成熟,脾脏中有T淋巴细胞和B淋巴细胞,还有巨噬细胞,与体液免疫和细胞免疫均有密切关系。因此,以胸腺和脾脏为例,研究本发明制剂对创伤应激小鼠免疫器官的影响。
取昆明种小鼠150只,雌雄各半,体重20±2g。随机分成15组(创伤应激对照组1个,本发明制剂组11个,现有贞芪扶正制剂组2个,正常对照组1个),每组10只。除正常对照组以外,其余12组小鼠用4号医用缝合线于小鼠右后肢膝关节上端约0.5cm处结扎,然后用手术剪于右后肢膝关节处截去右后肢,酒精棉球消毒断端,不包扎,术中及术后基本无出血,术后仍按常规摄取食、水。正常对照组、创伤应激对照组的小鼠每天腹腔注射生理盐水0.5mL/只;本发明制剂组及现有贞芪扶正制剂组每天腹腔注射对应的药物1000mg/kg,用生理盐水稀释至0.5mL,以上各组均连续3天腹腔注射。末次给药后1.5小时引颈处死小鼠,取血前称取各组小鼠体重,取血后剖取脾脏和胸腺,分别称取质量,计算脾脏指数与胸腺指数,脾脏指数=脾脏质量(mg)/小鼠体重(g);胸腺指数=胸腺质量(mg)/小鼠体重(g)。组间差异采用统计软件SPSS 8.0作t检验处理,数据统计以X±S表示。结果见表4。
表4 对小鼠免疫器官的影响(X±S,n=15)
注:与创伤应激对照组比较,P*<0.01。
由上表可知,创伤后小鼠的胸腺、脾脏重量指数明显下降,采用本发明工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂能明显增加小鼠的胸腺、脾脏指数,而采用现有工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂则作用很弱。以上实验表明,与采用现有工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂相比,采用本发明工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂能够明显提高胸腺和脾脏指数,更好的提高机体免疫功能。
Claims (9)
1.碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法,其特征在于:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6~15倍量的pH值为8~12的碱性溶液,90~100℃加热提取1~3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用酸将滤液pH值调至3~5,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后脱盐,干燥,即得黄酮类成分提取物。
2.根据权利要求1所述的碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法,其特征在于:所述碱性溶液为碱溶液或强碱弱酸盐溶液;所述碱溶液中的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种;所述的强碱弱酸盐为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种;所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸、柠檬酸中的一种。
3.根据权利要求1或2所述的碱提酸沉法提取贞芪组合物中黄酮类成分的方法,其特征在于:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的氢氧化钠,95℃加热提取1.5小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用盐酸将滤液pH值调至4,静置后离心或抽滤,滤渣复溶后脱盐,干燥,即得黄酮类成分提取物。
4.权利要求1或2或3所述方法提取得到的黄酮类成分提取物。
5.碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法,其特征在于:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入6~15倍量的pH值为8~12的碱性溶液,90~100℃加热提取1~3小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用酸将滤液pH值调为6~7,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后脱盐,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
6.根据权利要求5所述的碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法,其特征在于:所述碱性溶液为碱溶液或强碱弱酸盐溶液;所述碱溶液中的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种;所述的强碱弱酸盐为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种;所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸、柠檬酸中的一种。
7.根据权利要求5或6所述的碱提酸沉法提取贞芪组合物中皂苷类及萜类成分的方法,其特征在于:按照2:1的重量比称取黄芪和女贞子,将黄芪、女贞子单独或混合后,加入10倍量的pH值为9的氢氧化钠,95℃加热提取1.5小时,趁热过滤,滤渣用同样方法提取2次,合并滤液;用盐酸将滤液pH值调为6,静置后离心或抽滤,沉淀物复溶后脱盐,干燥,即得皂苷类及萜类成分提取物。
8.权利要求5或6或7所述方法提取得到的皂苷类及萜类成分提取物。
9.一种贞芪扶正药物,其特征在于:所述药物的有效成分包含权利要求4所述的黄酮类成分提取物和/或权利要求8所述的皂苷类及萜类成分提取物。
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CN116875376A (zh) * | 2023-07-24 | 2023-10-13 | 湖南成大生物科技有限公司 | 一种酸枣仁有效成分的提取工艺和提取设备 |
CN116875376B (zh) * | 2023-07-24 | 2024-05-28 | 湖南成大生物科技有限公司 | 一种酸枣仁有效成分的提取工艺和提取设备 |
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