CN104231102A - 碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法及其产品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法及其产品，按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6～15倍量的pH值为8～12的碱性溶液，90～100℃加热提取1～3小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达70％～90％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物；将上述提取方法获得的多糖类成分提取物应用在贞芪扶正药物的制备中。本发明能够提高贞芪组合物中多糖类有效成分的提取率，降低提取成本，从而降低贞芪扶正制剂服用量，使治疗效果更好。

Description

碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法及其产品

技术领域

本发明涉及一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法及其产品，属于贞芪扶正制剂制备技术领域。

背景技术

贞芪扶正制剂有补气养阴、扶正固本之功效。现代药理实验证明能提高人体免疫功能，保护骨髓和肾上腺皮质功能，促进干扰素产生；配合肿瘤患者放、化疗，减轻病人放、化疗期间的毒副作用，促进正常功能的恢复的作用。其处方由黄芪、女贞子组成。目前，贞芪扶正制剂供临床选择的剂型有片剂、胶囊剂、颗粒剂及滴丸剂等。

女贞子、黄芪均富含多种药物有效成分，主要包含萜类、多糖类、黄酮类和皂苷类等成分，而多糖类成分是在贞芪扶正制剂中最重要的天然有效成分，其具有增强免疫功能、抗肿瘤、减轻心肌损伤等作用。目前，贞芪扶正药物中多糖的提取多采取水提醇沉法，该类方法的缺点是多糖提取率低，且提取成本较高，不能满足生产使用的需求，这样不仅会导致患者的服用量较大，而且还会直接影响产品的质量和临床疗效。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法及其产品，能够提高多糖有效成分的提取率，降低提取成本，从而降低制剂服用量，治疗效果更好。

为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6～15倍量的pH值为8～12的碱性溶液，90～100℃加热提取1～3小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达70％～90％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

优选的，按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入10倍量的pH值为9的碱性溶液，95℃加热提取1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

前述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法中，多糖类成分提取物按下述方法进一步纯化：加水溶解后上中空纤维柱，截留分子量3kDa以上的成分，收集所得截留液，浓缩至干，复溶后脱盐，干燥，即得。

前述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法中，多糖类成分提取物按下述方法进一步纯化：加水溶解后上处理过的大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止，收集洗脱液，浓缩至干，复溶后脱盐，干燥，即得。

前述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法中，所述大孔吸附树脂为MG-1型大孔树脂。

前述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法中，所述碱性溶液为碱溶液或强碱弱酸盐溶液。

前述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法中，所述碱溶液中的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种；所述的强碱弱酸盐为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种。

前述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法中，还可往碱性溶液中加入乙醇，使乙醇的终浓度为1％～10％。

优选的，往碱性溶液中加入乙醇，使乙醇的终浓度为5％。

按照前述方法提取得到的多糖类成分提取物。

一种贞芪扶正药物，其有效成分包含前述多糖类成分提取物。所述贞芪扶正药物可以是将前述方法提取得到的多糖类有效成分混合其他有效成分后，加入相应辅料制成的各种药物制剂，比如胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、咀嚼剂等。

为确保本发明制剂的药效，申请人对提取工艺条件进行了一系列的试验研究和筛选，并对其药效进行了对比实验研究。

一、制备工艺研究

1、实验仪器(见表1)

表1

仪器名称	生产厂家
		rocker300a真空抽滤装置	厦门碧析仪器有限公司
116摇摆式粉碎机	海南佳惠食品机械厂
		R-220旋转蒸发仪	瑞士布其公司
TGL-16C型离心机	上海安亭科学仪器厂
		真空干燥箱	上海一恒实验仪器总厂

2、计算公式

(1)多糖提取率计算公式：多糖提取率＝(提取物中多糖总量/黄芪及女贞子中多糖的总量)×100％；

(2)多糖得率计算公式：(二次纯化所得多糖总量/一次纯化物总量)×100％；

(3)多糖纯度计算公式：(二次纯化所得多糖总量/二次纯化物总量)×100％。

3、水提醇沉法、碱提醇沉法与醇碱提醇沉法的对比试验

分别采用以下3种方法，按相同条件提取纯化贞芪组合物中的多糖类成分(即第一次纯化)，进行3次试验，比较多糖提取率，试验结果见表2。

水提醇沉法：取黄芪、女贞子药材粉碎，加水煎煮三次，每次加6倍量水，煎煮1.5小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏，加乙醇使含醇量达80％，搅匀，静置24小时，滤过，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

碱提醇沉法：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6倍量的pH值为8～12的氢氧化钠溶液煎煮1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

醇碱提醇沉法：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6倍量的pH值为8～12的氢氧化钠溶液，并向氢氧化钠溶液中加入乙醇，使乙醇的终浓度为1％～10％，煎煮1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

表2

由此可看出，醇碱提醇沉法的提取率稍高于碱提醇沉法的提取率，但远高于水提醇沉法的提取率。由于碱性溶液对植物细胞起到破壁作用，醇溶液渗透作用较强，在碱性溶液与醇的共同作用下，增加了多糖渗透率，降低多糖残留量和提取成本，实现了提高多糖提取率的目的，从而降低制剂服用量，使得贞芪扶正制剂的治疗效果更好。因此，我们选用碱提醇沉法来提取多糖成分，优选醇碱提醇沉法。

4、多糖类成分提取工艺条件筛选

为寻找多糖类成分较佳的提取工艺条件，选取不同的料液比(即药材与碱性溶液的质量比)、碱提取剂、提取温度、碱性溶液中乙醇的终浓度、碱性溶液PH值、加入沉淀剂乙醇后的含醇量作为考察因素，计算多糖类成分的提取率，结果见表3。

表3

由实验可知，多糖类成分提取条件为：料液比为1：6～15、表中列举的各种碱性溶液、提取温度为90℃～100℃、碱性溶液中乙醇的终浓度为1％～10％、碱性溶液pH值为8～12、加入沉淀剂乙醇后的含醇量达70％～90％时均能达到较好效果，其最佳提取工艺条件为：料液比为1:10、碱提取剂为氢氧化钠、提取温度为95℃、碱性溶液中乙醇的终浓度为5％、碱性溶液pH值为9、加入沉淀剂乙醇后的含醇量为80％。其中，提取方法可为多种如回流、煎煮等；当碱提取剂为氨水等易挥发物质时，只采用回流提取。

5、多糖类成分二次纯化方法筛选

先用碱/醇碱提醇沉法提纯多糖，再分别运用中空纤维柱进行超滤、上大孔吸附树脂、盐析法、金属络合物法进行二次纯化。对不同纯化工艺的多糖得率和纯度进行了比较，以便确定更优的纯化工艺，结果见表4。

表4

由上表可知，选用中空纤维柱进行超滤法或大孔树脂法对多糖提取物进行二次纯化，其多糖得率和纯度是较高的。因此本发明选用超滤法或大孔树脂法对碱/醇碱提醇沉法提纯得到的多糖进行二次纯化。

6、多糖类成分纯化工艺参数的筛选实验

(1)中空纤维柱分离纯化方法：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6～15倍量的pH值为8～12的碱性溶液加热提取1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，将沉淀物加水溶解后上中空纤维柱，分别截留分子量500Da～3kDa、3kDa以上及6kDa以上的成分，收集所得截留液，浓缩至干，即得多糖类成分提取物。计算多糖得率及多糖纯度，结果见表5。

表5

截留分子量	多糖得率(％)	多糖纯度(％)
			500Da～3kDa	86.59	71.85
≥3kDa	85.78	98.50
			＞6kDa	80.22	98.78

由上表可知，选用中空纤维柱进行超滤法对多糖提取物进行二次纯化，截留分子量选择大于3kDa，其多糖得率和纯度是较高的。这是由于黄芪和女贞子中黄酮、皂苷、萜类等成分的分子量都较小，其中几百道尔顿的居多，而多糖的分子量主要在1～5万Da左右，并且在3000Da～6000Da分子量段也有分布；因此，为了最大量的提取得到多糖，且不受其他有效成分的影响，故选择截留量为3000Da。

(2)大孔吸附树脂分离纯化方法：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6～15倍量的pH值为8～12的碱性溶液加热提取1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，将沉淀物加水溶解后上处理过的大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止，流速为1～2mL/min，收集洗脱液，浓缩至干，即得多糖类成分提取物。

①树脂类型筛选

分别采用“阳离子交换树脂上样、蒸馏水洗脱”，“大孔吸附树脂上样、蒸馏水洗脱”，“聚酰胺柱上样、蒸馏水洗脱”对按本发明碱/醇碱提醇沉法提取的多糖提取物进行纯化，计算多糖质量和纯度，结果见表6。

表6

方法	洗脱剂	多糖质量(g)	多糖纯度(％)
				阳离子交换树脂	蒸馏水	1.832	86.7
大孔吸附树脂	蒸馏水	1.481	96.8
				聚酰胺柱	蒸馏水	2.346	91.4

由上表可知：采用大孔吸附树脂为吸附剂得到的多糖纯度高效果好。下面对不同类型大孔吸附树脂纯化多糖的效果进行比较试验，结果见表7。

表7 不同类型大孔吸附树脂对多糖的饱和吸附容量和解吸率

由上表可知：采用MG-1型大孔树脂时，对多糖的饱和吸附容量及解吸率均较高，分别达到700mg/g以上和70％以上，因此，采用MG-1型大孔树脂。

②洗脱剂及浓度筛选

分别选择蒸馏水、15％乙醇、25％乙醇、35％乙醇、0.1mol/L Nacl作为洗脱剂，分别考察其洗脱能力，试验结果见下表。

表8

洗脱剂	吸附量(mg/g)	吸附率(％)	洗脱率(％)
				蒸馏水	6.24	77.23	94.44
15％乙醇	6.29	77.53	10.37

25％乙醇	6.27	78.05	90.82
				35％乙醇	6.22	76.73	89.73
0.1mol/L Nacl	6.21	76.81	8.42

表中数据表明，蒸馏水和一定浓度的乙醇均具有较好的洗脱效果；其中蒸馏水洗脱效果最好，因此选择蒸馏水作为洗脱剂。

与现有技术相比，本发明采用碱性溶液或醇碱溶液作为提取溶剂，由于碱性溶液对植物细胞起到破壁作用，醇溶液渗透作用较强，在碱与醇的共同作用下，增加了多糖渗透率，降低多糖残留量，降低了提取成本，实现了提高多糖提取率的目的，从而降低制剂服用量，使得贞芪扶正制剂的治疗效果更好。

具体实施方式

本发明实施例1：一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6倍量的pH值为8的碳酸钾溶液，90℃煎煮1小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达70％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，加水溶解后上中空纤维柱，截留分子量3kDa以上的成分，收集所得截留液，浓缩至干，复溶后透析，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例2：一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入10倍量的pH值为9的氢氧化钠溶液，并向氢氧化钠溶液中加入乙醇，使乙醇的终浓度为5％，95℃煎煮1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，加水溶解后上中空纤维柱，截留分子量3kDa以上的成分，收集所得截留液，浓缩至干，复溶后透析，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例3：一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入15倍量的pH值为12的氢氧化钾溶液，100℃回流提取3小时，趁热过滤，滤渣用同样方法回流提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达90％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，加水溶解后上中空纤维柱，截留分子量3kDa以上的成分，收集所得截留液，浓缩至干，复溶后超滤，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例4：一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入10倍量的pH值为9的氨水溶液95℃回流提取1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法95℃回流提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，加水溶解后上处理过的MG-1型大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止，收集洗脱液，浓缩至干，复溶后超滤，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例5：一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6倍量的pH值为8的碳酸钠，并向碳酸钠中加入乙醇，使乙醇的终浓度为1％，90℃煎煮1小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达70％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，加水溶解后上处理过的MG-1型大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止，收集洗脱液，浓缩至干，复溶后超滤，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例6：一种碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法为：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入15倍量的pH值为12的碳酸氢钠溶液，100℃煎煮3小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达90％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，加水溶解后上处理过的大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止，收集洗脱液，浓缩至干，复溶后透析，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例7：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入10倍量的pH值为9的碳酸氢钾溶液，并向碳酸氢钾中加入乙醇，使乙醇的终浓度为10％，煎煮1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法煎煮2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，复溶后透析，干燥，即得多糖类成分提取物。

本发明实施例8：一种贞芪扶正胶囊，通过以下方法制备而成：取实施例1～7中任一项的多糖类成分提取物，另取采用方法A提取的皂苷类成分、萜类成分及黄酮类成分提取物；将上述各有效成分的干燥物混合，粉碎成药粉；在药粉中加入崩解剂、润湿剂、助流剂和吸收剂，制备成贞芪扶正胶囊。

本发明实施例9：一种贞芪扶正滴丸，通过以下方法制备而成：取实施例1～7中任一项的多糖类成分提取物，另取采用方法A提取的皂苷类成分、萜类成分及黄酮类成分提取物；将上述各有效成分的干燥物混合，粉碎成药粉；将所述的药粉与基质在60～80℃下均匀混合，以10～50滴/分钟的速度滴入0～20℃的冷却剂中，即得贞芪扶正滴丸。

本发明实施例10：一种贞芪扶正糖浆剂，通过以下方法制备而成：取实施例1～7中任一项的多糖类成分提取物，另取采用方法A提取的皂苷类成分、萜类成分及黄酮类成分提取物；将上述各有效成分的干燥物混合，粉碎成药粉；取蔗糖，加水，煮沸溶解后，滤过，放冷，在滤液中加入药粉及防腐剂、助溶剂和稳定剂，搅匀，滤过，药液加水，即得贞芪扶正糖浆剂。

本发明实施例11：一种贞芪扶正分散片，通过以下方法制备而成：取实施例1～7中任一项的多糖类成分提取物，另取采用方法A提取的皂苷类成分、萜类成分及黄酮类成分提取物；将上述各有效成分的干燥物混合，粉碎成药粉；将该药粉按照常规工艺制备成分散片。

上述实施例8-11中所述的方法A同下述实验例中的方法A。

为确保本发明所得制剂产品的药效，申请人对其药效进行了对比实验研究。

1、实验材料

1.1实验药物：

(1)按照本发明实施例8-11分别制得的贞芪扶正制剂。

(2)按现有工艺方法(即发明专利200310122216.7)提取黄芪和女贞子中的多糖类成分、黄酮类成分、皂苷类及萜类成分后制得的贞芪扶正制剂。现有技术提取工艺如下：

皂苷类成分、萜类成分及黄酮类成分(现有技术方法A)：取黄芪，加水煎煮三次，每次加6倍量水，煎煮1.0小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，所得滤液减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相对密度为1.10(20℃)的清膏，滤过，滤液通过D-101大孔树脂柱，用3倍树脂体积的水洗涤，再用4倍树脂体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇后，浓缩，干燥，得黄酮类及皂苷类成分；取女贞子药材粉碎，加80％乙醇回流提取三次，每次加6倍量乙醇，回流提取1小时，滤过，合并三次滤液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相对密度为1.10(20℃)的清膏，搅拌下加入2倍量水，静置24小时，滤过，沉淀物干燥，得萜类成分；

多糖类成分(现有技术方法B)：取黄芪、女贞子药材粉碎，加水煎煮三次，每次加6倍量水，煎煮1.0小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，沉淀物干燥，即得。

1.2实验动物：昆明种小鼠，♀♂各半，体重20±0.7g，由贵阳医学院实验动物中心提供；实验室光照充足，通气良好，室温18～22℃，湿度50％～70％，按常规定期消毒；自由饮水、饮食，小鼠饲养笼分笼饲养，动物实验前观察适应5天，复查合格后开始进入正式实验。

2、实验方法

2.1对小鼠免疫器官的影响

胸腺为初级淋巴器官，游走的造血干细胞进入胸腺原基，在此分化增殖成T淋巴细胞，与细胞免疫有关；脾脏为次级淋巴细胞，免疫活性细胞移行于此，并在此处因受免疫过程中异体抗原刺放而进一步增殖分化和成熟，脾脏中有T淋巴细胞和B淋巴细胞，还有巨噬细胞，，与体液免疫和细胞免疫均有密切关系。因此，以胸腺和脾脏为例，研究本发明制剂对创伤应激小鼠免疫器官的影响。

取昆明种小鼠100只，雌雄各半，体重20±2g。随机分成10组(创伤应激对照组1个，本发明制剂组7个，现有贞芪扶正制剂组1个，正常对照组1个)，每组10只。除正常对照组以外，其余9组小鼠用4号医用缝合线于小鼠右后肢膝关节上端约0.5cm处结扎，然后用手术剪于右后肢膝关节处截去右后肢，酒精棉球消毒断端，不包扎，术中及术后基本无出血，术后仍按常规摄取食、水。正常对照组、创伤应激对照组的小鼠每天腹腔注射生理盐水0.5mL/只；本发明制剂组及现有贞芪扶正制剂组每天腹腔注射对应的药物1000mg/kg，用生理盐水稀释至0.5mL，以上各组均连续3天腹腔注射。末次给药后1.5小时引颈处死小鼠，取血前称取各组小鼠体重，取血后剖取脾脏和胸腺，分别称取质量，计算脾脏指数与胸腺指数，脾脏指数＝脾脏质量(mg)/小鼠体重(g)；胸腺指数＝胸腺质量(mg)/小鼠体重(g)。组间差异采用统计软件SPSS 8.0作t检验处理，数据统计以X±S表示。结果见表9。

表9 对小鼠免疫器官的影响(X±S，n＝10)

注：与创伤应激对照组比较，P*＜0.01。

由上表可知，创伤后小鼠的胸腺、脾脏重量指数明显下降，采用本发明工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂能明显增加小鼠的胸腺、脾脏指数，而采用现有工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂则作用很弱。

2.2抗炎免疫作用

对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)吞噬鸡红细胞(CRBC)能力的影响：取成年鼠100只，随机分为10组，每组10只，雌雄各半，分别灌胃本发明工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂、现有贞芪扶正制剂、LMS及等容量NS，共7天。停药后2小时，给每只小鼠腹腔注射5％(V/V)CRBC 0.4mL，12小时后将小白鼠脱臼处死，仰位固定于鼠板。剪开腹部皮肤，经腹腔注入NS 2mL；转动鼠板1分钟，然后吸取腹腔洗液1mL，滴于载玻片上；每片0.2mL置于37℃孵暖箱内保育30分钟，干后用4％姬姆萨-瑞特氏液染色5小时，油镜下每片计数100个MΦ，按下式计算吞噬率和吞噬指数，实验结果见表10。

吞噬率＝(吞噬CRBC的MΦ/100个MΦ)×100％；

吞噬指数＝被吞噬的CRBC/100个MΦ。

表10 贞芪扶正制剂对小鼠腹腔MΦ吞噬功能的影响(n＝10)

实验表明，采用本发明工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂和现有贞芪扶正制剂均可明显的增加小鼠腹腔MΦ吞噬CRBC的吞噬功能；采用本发明工艺方法提取的有效成分制得的贞芪扶正制剂与免疫增强剂LMS的作用近似，并且比现有贞芪扶正制剂更能增强小鼠腹腔MΦ吞噬CRBC的吞噬功能。

综上所述，采用本发明工艺方法提取的有效成分制备的贞芪扶正制剂能够明显提高胸腺和脾脏指数，能增强小鼠腹腔MΦ吞噬CRBC的功能，更好的提高机体的抗炎免疫功能。

Claims (10)

1.碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入6～15倍量的pH值为8～12的碱性溶液，90～100℃加热提取1～3小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达70％～90％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

2.根据权利要求1所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：按照2：1的重量比称取黄芪和女贞子，将黄芪、女贞子单独或混合后，加入10倍量的pH值为9的碱性溶液，95℃加热提取1.5小时，趁热过滤，滤渣用同样方法提取2次，合并滤液；滤液浓缩，向浓缩滤液中加入95％乙醇至含醇量达80％，静置过夜，离心，沉淀物干燥，即得多糖类成分提取物。

3.根据权利要求1或2所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于，多糖类成分提取物按下述方法进一步纯化：加水溶解后上中空纤维柱，截留分子量3kDa以上的成分，收集所得截留液，浓缩至干，复溶后脱盐，干燥，即得。

4.根据权利要求1或2所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：多糖类成分提取物按下述方法进一步纯化：加水溶解后上处理过的大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止，收集洗脱液，浓缩至干，复溶后脱盐，干燥，即得。

5.根据权利要求4所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂为MG-1型大孔树脂。

6.根据权利要求1或2所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：所述碱性溶液为碱溶液或强碱弱酸盐溶液。

7.根据权利要求6所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：所述碱溶液中的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种；所述的强碱弱酸盐为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种。

8.根据权利要求6所述的碱提醇沉法提取贞芪组合物中多糖类成分的方法，其特征在于：往碱性溶液中加入乙醇，使乙醇的终浓度为1％～10％，优选为5％。

9.权利要求1～8任意一项所述方法提取得到的多糖类成分提取物。

10.一种贞芪扶正药物，其特征在于：所述药物的有效成分包含权利要求9所述的多糖类成分提取物。