CN104203958A

CN104203958A - 二环杂环衍生物、其制备及治疗用途

Info

Publication number: CN104203958A
Application number: CN201380016539.XA
Authority: CN
Inventors: A·布朗; O·克雷斯平; Y·福里彻; G·马西尼亚克; N·马齐特; E·尼古莱; C·帕斯卡尔; B·维瓦特; F·维维安尼
Original assignee: Sanofi Aventis France
Current assignee: Sanofi SA; Sanofi Aventis France
Priority date: 2012-01-26
Filing date: 2013-01-25
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2033-01-25
Also published as: SI2807172T1; RU2627269C2; RU2014134640A; HRP20170288T1; DK2807172T3; ES2617880T3; AU2013213261A1; BR112014018226A2; FR2986232B1; US20140378433A1; CY1118852T1; JP2015504914A; US9120812B2; AU2013213261B2; AR089782A1; FR2986232A1; UY34594A; HUE031917T2; EP2807172A1; PT2807172T

Abstract

本发明涉及通式(I)的二环杂环衍生物、其制备方法及治疗用途。

Description

二环杂环衍生物、其制备及治疗用途

技术领域

本发明涉及二环杂环衍生物及其制备和治疗用途。

背景技术

mTOR(雷帕霉素(rapamycin)的哺乳动物靶标)，也称为FRAP(FKBP12及雷帕霉素相关蛋白)，其为PIKK(磷酸肌醇3-激酶样激酶)家族的289-kDa丝氨酸/苏氨酸激酶，但mTOR并不磷酸化磷脂。

所述蛋白含有若干域，其包含C-末端激酶域、FKBP12-雷帕霉素结合域、涉及蛋白-蛋白相互作用的20个N-末端HEAT重复结构(repetition)、FAT(FRAP-ATM-TRRAP)域和C-末端FAT域，其还存在于其它PIKK中(Wullschleger et al.(2006)Cell,124,471-484)。

激酶mTOR不但是细胞生长和增殖的重要调节器(central regulator)，而且在细胞代谢和血管生成中发挥重要作用。mTOR由PI3K/Akt轴活化且继而磷酸化PI3K/Akt信号传导途径的下游效应器(effector)，具体地是核糖体蛋白S6激酶(S6K1)和真核起始因子4E结合蛋白(4E-BP1)，其为细胞蛋白翻译机构(machinery)中两种主要的调节器(mTOR信号传导途径在Zoncu et al.(2011)Nature Rev.Mol.Cell Biol.12,21-35中有述)。

在各种人类癌症中，mTOR信号传导途径是突变且失调的。蛋白激酶Akt、脂质激酶PI3K的突变和/或肿瘤阻抑剂(suppressant)PTEN和TSC2的失活，以及影响生长因子受体的扩增和/或突变，是mTOR上游造成PI3K/Akt/mTOR途径的构成性失活和不受控细胞增殖的若干事件(关于蛋白mTOR在癌症中的作用的综述，参见Guertin and Sabatini(2007)Cancer Cell12,9-22)。

影响mTOR途径的基因突变和扩增已经在成胶质细胞瘤(glioblastomas)、前列腺癌、结节性硬化症(tuberous sclerosis)、肺癌(NSCLC)、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肠癌、胰腺癌、头颈癌(cancer of the head andneck)、皮肤癌和肝细胞癌瘤(hepatocellular carcinomas)的形成中进行鉴别(Yuan and Cantley(2008)Oncogene 27,5497-5510；Whittaker et al.(2010)Oncogene 29,4989-5005)。

mTOR募集若干配偶体以形成两种对于肿瘤生长关键的多蛋白复合物。通过磷酸化蛋白s6K和4E-BP1，mTORC1复合物使癌基因信号传导与蛋白合成、糖酵解和脂质生物合成之间产生联系(Yecies and Manning(2011)J.Mol.Med.89,221-228)。最近已经将mTORC2复合物鉴别为磷酸化Ser-473残基上的Akt的激酶，由此用作激酶Akt的关键活化物(essential activator)。最近，已经将复合物mTORC2的作用与细胞转化具体地联系(Sparks andGuertin(2010)Oncogene 29,3733-3744)。

雷帕霉素及其类似物rapalogue(其经由蛋白FKBP12进行结合)是mTORC1复合物的变构抑制剂。若干所述抑制剂正处于治疗某些癌症的临床开发中。依维莫司(Everolimus)(Novartis)和替西罗莫司(Temsirolimus)(Wyeth)最近已被批准用于治疗肾癌(肾细胞癌瘤或RCC)。然而，尽管取得了某些有前景的结果，但是rapalogue在癌症治疗中的效能(efficacy)仍然低于预期，且似乎限于癌症亚组。所述限制归因于以下事实：rapalogue不与mTORC2复合物相互作用，以及mTORC1复合物活性的某些方面且具体地是4E-BP1的磷酸化对雷帕霉素及其类似物抵抗(Benjamin et al.(2011)Nature Reviews Drug Discovery 10,868-880)。

另一方面，mTOR的激酶位点的抑制剂不具有所述缺点(Feldman et al.(2009)PLoS Biology 7,371-383)，且作为优点，其被视为mTOR途径的新一代调节剂，且潜在地增加抗肿瘤效能并拓宽治疗应用领域。若干所述抑制剂现已进入临床阶段(Garcia-Echeverria(2011)Biochem.Soc.Trans.39,451-455；Richard et al.(2010)Curr.Drug Opinion Disc.Dev.13,428-440)。

针对mTOR抑制剂已提出了其它潜在的治疗适应症(Tsang et al.(2007)Drug Discovery Today 12,112-124)。mTOR抑制剂可在神经变性疾病中发挥神经保护作用，所述神经变性疾病例如阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、帕金森病(Parkinson's disease)和亨廷顿病(Huntington's disease)(Bové et al.(2011)Nature Reviews Neuroscience 12,437-452)。此外，mTOR机能亢进(hyperactivity)与年龄相关性病状(age-related pathologies)有关(Harrison et al.(2009)Nature 460,392)。其它应用包括肾、肺和肝纤维化(Mehrad et al.(2009)Int.J.Biochem.Cell Biol.41,1708-1718；Lieberthal and Levine(2009)；Shouval(2011))、炎性和自身免疫性病症(Bhonde et al.(2008)Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.295,G1237-G1245；Young and Nickerson-Nutter(2005)Curr.Opinion Pharmacol.5,418-423)、糖尿病、肥胖症(Dann et al.(2007)Trends Mol.Medicine 13,252-259)、庞培病(Pompe's disease)(Ashe et al.(2010)Molecular Genetics and Metabolism 100,309-315)、心血管疾病(Hagenmuelleret al.(2010).FEBS Lett.584,74-80)、眼部疾病(ocular diseases)(Blumenkranz(2007)Retina Today 24-26)、癫痫(epilepsy)(Huang et al.(2010)Neurobiologyof Disease 40,193-199)和寄生虫疾病(parasitic diseases)(Wanget al.(2010)240th ACS National Meeting Boston,MEDI-152)。

mTOR抑制还活化自身吞噬作用(autophagocytosis)且一些疾病应当对其抑制敏感，具体地是蛋白质病变(proteinopathies)、细菌和病毒感染以及癌症(综述于Rubinsztein et al.(2007)Nature 6,304-312中)。

因此，开发靶向mTOR激酶位点且抑制两种化合物mTORC1和mTORC2活性的化合物是重要的。

发明内容

[化合物]

根据第一方面，本发明的主题是对应于式(I)的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式：

其中：

-每个基团R₁独立地表示基团(C₁-C₆)-烷基，应当理解的是，吗啉基环的两个不同碳原子所带有的两个基团R₁可连接在一起与吗啉基环形成二环杂环结构，

-R₂和R₃独立地表示：

-H或

-基团(C₁-C₆)烷基，

-R₄表示：

-H，

-基团(C₁-C₆)-烷基，其任选地取代有羟基，

-基团(C₁-C₆)-烷氧基，

-基团-L₁-R₁₀，其中：

-L₁表示基团(C₁-C₆)-亚烷基，

-R₁₀表示选自以下的基团：-COOR₁₁、-CO-R₁₂、-OR₁₃、-CONR₁₄R₁₅和任选地取代有基团-R₁₆、-COOR₁₇、-CO-R₁₈、-OR₁₉或-NR₂₀R₂₁的5-或6-个原子的杂环，或

-5-或6-个原子的杂环，其任选地取代有基团–R₂₂、-COOR₂₃、-CO-R₂₄、-OR₂₅或-CONR₂₆R₂₇，

-G₁表示二价苯基或5-或6-个原子的杂芳基，所述二价苯基或杂芳基任选地取代有1至4个基团R₅，所述基团R₅独立地选自：卤素原子、基团-OR₃₀和任选地取代有羟基的基团-(C₁-C₆)-烷基，

-X₁表示基团-O-或-NR₄₀-，

-X₂表示单键或基团-CONR₅₀-、-CONR₅₁-O-、-COO-、-CO-或-SO₂-，

-R₆表示：

-H，

-基团-L₂-R₇，其中：

-L₂-表示基团(C₁-C₆)-亚烷基或(C₃-C₆)-亚环烷基，

-R₇表示选自以下的基团：

-H，

-OR₆₀，

-卤素原子，

-基团(C₁-C₆)-卤代烷基，

-5-至6-个原子的杂环，其任选地取代有一个或多个选自以下的基团：基团(C₁-C₆)-烷基、基团(C₁-C₆)-烷氧基和基团＝O，或

-基团-G₂-X₃-G₃，其中：

-X₃表示单键或基团-O-、-CO-或-CH₂-，

-G₂表示单键或任选地取代有一个或多个基团R₈₀的5-至6-个原子的二价环状基团，

-G₃表示任选地取代有一个或多个基团R₈₁的4-至8-个原子的环，

-或-G₂-X₃-G₃一起形成7-至10-个原子的稠合二环，

-每个基团R₈₀和每个基团R₈₁独立地选自：

-卤素原子，

-基团-COOR₇₀、-CO-R₇₁、-OR₇₂、-NR₇₃R₇₄、-CONR₇₅R₇₆、-CN或-S(O)_p-R₇₇，

-基团(C₁-C₆)-烷基，其任选地取代有一个或多个基团R₁₀₀和/或任选地被一个或多个氧原子间隔，

-基团(C₁-C₆)-烷氧基，任选地取代有一个或多个基团R₁₀₁和/或任选地被一个或多个氧原子间隔，

-n表示0、1或2，

-m表示0或1，

-p表示0、1或2，

-R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₁₇、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₃₀、R₄₀、R₅₀、R₅₁、R₆₀、R₇₀、R₇₁、R₇₂、R₇₃、R₇₄、R₇₅、R₇₆和R₇₇独立地表示H或任选取代有基团R₉₀和/或任选地被一个或多个氧原子间隔的基团(C₁-C₆)-烷基，

-R₉₀表示基团-OR₉₁或-NR₉₂R₉₃，

-R₉₁、R₉₂和R₉₃独立地表示H或基团(C₁-C₆)-烷基，

-R₁₀₀和R₁₀₁独立地选自卤素原子和羟基。

式(I)化合物可包含一个或多个不对称碳原子。因此，它们可以对映异构体或非对映异构体的形式存在。这些对映异构体、非对映异构体及其混合物(包含外消旋混合物)构成本发明的部分。

本发明化合物的纯对映异构体可由对映异构体纯的前体或可替换地通过手性相层析法获得，或可替换地在所述化合物包含酸或胺官能团时通过非对映异构体盐的选择性结晶来获得，其中所述非对映异构体盐通过使化合物(I)分别与对手性胺或酸反应来获得。

式(I)化合物可以互变异构体的形式存在。这些互变异构体形式构成本发明的部分。

由于其结构，通式(I)的化合物还可以旋转异构体(rotamer)或阻转异构体(atropoisomer)类型的对映异构体形式存在。

式(I)化合物可以碱或酸加成盐的形式存在。所述加成盐构成本发明的部分。

这些盐可有利地使用可药用酸制备，但用于例如纯化或分离式(I)化合物的其它酸的盐也构成本发明的部分。

在本发明的上下文中，下列定义适用：

-卤素原子：氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，尤其是氟原子；

-烷基：除非另有说明，包含1至6个、尤其是1至4个且具体地1至2个碳原子的饱和直链或支链烃基脂肪族基团，或环状烃基脂肪族基团，其还表述为环烷基且定义于下文中。可提及的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基等基团；

-环烷基：除非另有说明，包含3至6个碳原子的环状烷基。可提及的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等基团；

-亚烷基：除非另有说明，包含1至6个碳原子的直链或支链饱和烃基二价脂肪族基团；

-亚环烷基：除非另有说明，包含3至6个碳原子的环状或碳环烃基二价脂肪族基团；

-烷氧基：基团-O-烷基，其中所述烷基如先前所定义。可提及的实例包括基团-O-(C₁-C₆)烷基或-(C₁-C₆)-烷氧基，且具体地是(i)基团-O-C₁烷基，即基团-O-甲基；(ii)基团-O-C₂烷基，即基团-O-乙基；(iii)基团-O-C₃烷基，即基团-O-丙基、-O-异丙基；(iv)基团-O-C₄烷基，即基团-O-丁基、-O-异丁基、-O-叔丁基；(v)基团-O-C₅烷基，即基团-O-戊基、-O-异戊基；(vi)基团-O-C₆烷基，即基团-O-己基；

-环：饱和、不饱和或芳族(芳基或杂芳基)碳环或杂环；

-碳环：由碳原子构成的环，其为饱和的(饱和碳环，尤其是环烷基，例如丙基、环戊基、环己基或金刚烷基(桥三环的实例))、不饱和的(例如环己烯)或芳族的(即芳基)环。在碳环包括若干取代基时，所述取代基可由相同原子或不同原子产生，

-芳基：除非另有说明，包含5至10个碳原子的单环或二环芳族烃基基团。可提及的芳基的实例包括苯基及萘基，具体地是苯基，

-杂环：除非另有说明，包含3至10个原子且包含一个或多个选自O、N和/或S的杂原子的单环或二环基团。所述杂环可为饱和的或部分不饱和的且可包含一个或多个双键。其由此称为杂环烷基。除非另有说明，其还可为包含5至10个原子的芳族基团且由此表示杂芳基。当杂环被取代时，所述取代可在一个(或多个)碳原子上和/或在杂原子上。当杂环包含若干取代基时，所述取代基可由相同原子或不同原子产生。

可提及的非芳族杂环或杂环烷基包括环氧乙基、环氧乙烷基(oxiranyl)、氮杂环丁基(aziridinyl)、四氢呋喃基、二氧杂环戊基(dioxolanyl)、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基、二硫杂环戊基(dithiolanyl)、噻唑烷基、四氢吡喃基、二噁烷基(dioxanyl)、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、四氢噻喃基(tetrahydrothiopyranyl)、二噻烷基(dithianyl)、硫吗啉基、二氢呋喃基、2-咪唑啉基、2,-3-吡咯啉基、吡唑啉基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、吡喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、四氢嘧啶基、二氢噻喃基、异噁唑啶基和自与苯基核稠合衍生的相应基团，且更具体地是吗啉基、二氧杂环戊基、苯并噻唑烷基、吡咯烷基和苯并吡咯烷基环。

可提及的桥接杂环包括桥连的吗啉基类型的环，例如：

尤其可提及的杂芳基包括下列表示性基团：苯并咪唑基、苯并噻唑基、呋喃基、呋咱基(furazanyl)、咪唑基、吲哚基、吲嗪基(indolizinyl)、异噁唑基、异喹啉基、异噻唑基、噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、1,3,4-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、1,2,3-三唑基和1,2,4-三唑基；

-稠合二环包含如上文所定义的两个环，两个环的稠合可能是通过共享原子序列(分支和桥头)(例如降莰烷(norbornane))或通过共享两个原子之间的键(例如异喹啉或喹啉)来发生；

-环状二价基团的环如上文所定义。环状二价基团的环可为碳环或杂环且其可为饱和的、不饱和的或芳族环，尤其是芳族环。具体地，环状二价基团的环可为芳基，例如苯基，或杂芳基，其中杂原子尤其是氮原子。可提及的具有5个原子的环状二价基团的实例为二价三唑基团，且可提及的具有6个原子的环状二价基团的实例为苯基(亚苯基(phenylene))、吡啶和吡嗪的二价基团。例如，5或6个原子的环状二价基团可具有下列式中之一，应当理解的是，环原子可为取代的(取代有一个或多个基团R₈₀)：

在一个实施方案中，本发明的主题是对应于式(I)的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式，其中：

-每个基团R₁独立地表示基团(C₁-C₆)-烷基，有利地是基团(C₁-C₃)-烷基，应当理解的是，吗啉基环的两个不同碳原子所带有的两个基团R₁可连接在一起与吗啉基环形成二环杂环结构，

-R₂和R₃独立地表示H或基团(C₁-C₆)-烷基，

-R₄表示：

-H，

-基团(C₁-C₆)-烷基，有利地为任选地取代有羟基的基团(C₁-C₃)-烷基，

-基团-L₁-R₁₀，其中：

-L₁表示基团(C₁-C₂)-亚烷基，

-R₁₀表示选自以下的基团：-COOR₁₁、-OR₁₃、-CONR₁₄R₁₅或任选地取代有基团-COOR₁₇、-CO-R₁₈的5个原子的杂环，或

-任选地取代有基团-R₂₂的6个原子的杂环，

-G₁表示二价苯基或6个原子的杂芳基，所述二价苯基或杂芳基任选地取代有1至4个基团R₅，所述R₅独立第选自卤素原子和任选地取代有羟基的基团-(C₁-C₆)-烷基，

-X₁表示基团-O-或-NR₄₀-，

-R₆表示：

-H,

-基团-L₂-R₇，其中：

-L₂-表示基团(C₁-C₄)-亚烷基或(C₃-C₆)-亚环烷基，

-R₇表示选自以下的基团：

-H，

-OR₆₀，

-卤素原子，

-5-至6-个原子的杂环，其任选地取代有一个或多个选自以下的基团：基团(C₁-C₆)-烷基和基团＝O，或

-基团-G₂-X₃-G₃，其中：

-X₃表示单键或基团-O-、-CO-或-CH₂-，

-G₂表示单键或5至6个原子的环状二价基团，

-G₃表示表示4-至8-个原子的环，其任选地取代有一个或多个基团R₈₁，

-或-G₂-X₃-G₃一起形成7-至10-个原子的稠合二环，

-每个基团R₈₁独立地选自：

-卤素原子，

-基团-COOR₇₀、-OR₇₂、-NR₇₃R₇₄、-CONR₇₅R₇₆、-CN or-S(O)_p-R₇₇，

-基团(C₁-C₂)-烷基，其任选地取代有一个或多个基团R₁₀₀，

-基团(C₁-C₂)-烷氧基，其任选地取代有一个或多个基团R₁₀₁，

-n表示0、1或2，

-m表示0或1，

-p表示2，

-R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₁₇、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₃₀、R₄₀、R₅₀、R₅₁、R₆₀、R₇₀、R₇₁、R₇₂、R₇₃、R₇₄、R₇₅、R₇₆和R₇₇独立地表示H或任选取代有基团R₉₀的基团(C₁-C₂)-烷基，

-R₉₀表示基团-OR₉₁或-NR₉₂R₉₃，

-R₉₁、R₉₂和R₉₃表示基团(C₁-C₂)-烷基，

-R₁₀₀和R₁₀₁表示卤素原子。

在一个实施方案中，在上述式(I)中，m表示0且R₂和R₃表示甲基，所述化合物由此具有下式(II)，其呈碱或酸加成盐的形式：

其中n、R₁、R₄、G₁、X₁、X₂和R₆如上文所定义。

在一个实施方案中，在上述式(I)中，G₁表示任选取代的苯，X₁表示-NH-且所述化合物具有下式(III)，其呈碱或酸加成盐的形式：

其中：

-R₄表示基团(C₁-C₆)-烷基，具体地是乙基或甲基，

-R'₅和R″₅表示-H或-F，应当理解的是，当基团R'₅和R″₅中的一个表示-F时，则另一个表示-H，

-X₂表示-CONR₅₀-或-COO-，尤其是-CONH-或-COO-，具体地是-CONH-，

-R₆表示：

-基团-L₂-R₇，其中：

-L₂-表示基团(C₁-C₆)-亚烷基或(C₃-C₆)-亚环烷基，

-R₇表示选自以下的基团：

-H，或

-OR₆₀，

-基团-G₂-X₃-G₃，其中：

-X₃表示单键或基团-O-，

-G₂表示单键或6个原子的环状二价基团，

-G₃表示4-至8-个原子的环，其任选地取代有一个或多个(尤其是1个或2个)基团R₈₁，

-n、R₁、R₅₀、R₆₀和R₈₁如上文所述。

在上述式中，可使用下列实施方案且可独立地彼此组合：

-m表示0，

-基团尤其选自下列基团：

-R₂和R₃表示甲基，

-R₄表示：

-H，

-基团(C₁-C₆)-烷基(尤其是(C₁-C₂)-烷基)，其任选地取代有羟基，

-基团-L₁-R₁₀，其中：

-L₁表示基团(C₁-C₆)-亚烷基，

-R₁₀表示选自以下的基团：-COOR₁₁、-OR₁₃、-CONR₁₄R₁₅和任选地取代有基团-COOR₁₇或-CO-R₁₈的5-或6-个原子的杂环，或

-5-或6-个原子的杂环，其任选地取代有基团-R₂₂，

-R₄尤其表示基团(C₁-C₆)-烷基，例如甲基或乙基，

-G₁表示二价苯基或吡啶基，所述二价苯基或吡啶基任选地取代有基团R₅，所述基团R₅选自卤素原子，尤其是氟，

-G₁表示二价吡啶基或二价苯基，其任选地取代有基团R₅，所述基团R₅选自卤素原子，尤其是氟，

-G₁尤其表示任选地取代有氟基团的二价苯基，

-当X₁表示O时，X₂表示单键且R₆表示基团(C₁-C₆)-烷基(即基团-L₂-R₇，其中-L₂-表示(C₁-C₆)-亚烷基且R₇表示-H)，

-X₁表示基团-NR₄₀-，尤其是-NH-，

-X₂表示单键或基团-CONH-、-COO-、-CO-或-SO₂-，尤其是-CONH-或-COO-，

-X₂表示-CONR₅₀-或-COO-，尤其是-CONH-或-COO-，

-当R₇表示任选地取代有一个或多个基团＝O的5-至6-个原子的杂环时，所述杂环典型地为带有氧化硫原子的杂环，例如四亚甲基砜。

-当-G₂-X₃-G₃一起形成7-至10-个原子的稠合二环时，所述环为苯并咪唑基(benzimidazolyl)或7-氮杂吲哚基(7-azaindolyl)，

-G₂为6个原子的环状二价基团，

-G₂为6个原子的环状二价基团且基团X₂和X₃在所述环上处于对位，

-G₂任选地取代有基团R₈₀，

-G₃表示任选地取代有1、2或3个，尤其是1或2个基团R₈₀，

-G₂为芳族环，

-G₂为芳族环且G₃为饱和环，

-每个基团R₈₀和每个R₈₁独立地选自：

-卤素原子，尤其是氟，

-基团-COOR₇₀、-OR₇₂、-NR₇₃R₇₄、-CONR₇₅R₇₆、-CN或-S(O)_p-R₇₇，

-基团(C₁-C₆)-烷基，其任选地取代有一个或多个基团R₁₀₀，

-基团(C₁-C₆)-烷氧基，其任选地取代有一个或多个基团R₁₀₁和/或任选地被一个或多个氧原子间隔。

在作为本发明主题的式(I)化合物中，尤其可提及下表1中的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式：

表1：本发明的化合物-IUPAC命名法

应当注意的是，属于所述化合物的编号对应于实施例的编号且在本专利申请中通篇保持相同。

在作为本发明主题的式(III)化合物中，尤其可提及下表2的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式：

表2：本发明的化合物-IUPAC命名法

作为实施方案，本发明化合物的组(group)的组合也构成本发明的部分。

具体实施方式

[制备方法]

在下文中，术语"PG"(保护基团)意指如下基团：首先其可在合成期间保护反应性官能团，例如羟基或胺，且其次其在合成结束时重新生成完整的(intact)反应性官能团。保护基团以及保护和脱保护方法的实例在ProtectiveGroups in Organic Chemistry,J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973,in Greene'sProtective Groups in Organic Synthesis,by Theodora W.Greene published byJohn Wiley&Sons Inc.,2006 or in Protecting Groups,KocienskiP.J.,1994,Georg Thieme Verlag中给出。

可提及的实例如下：用于胺的暂时性保护基团为：苄基、氨基甲酸酯(例如叔丁基氧基羰基，其可在酸性介质中裂解；或苄基氧基羰基，其可通过氢解裂解)；用于羧酸的暂时性保护基团为：烷基酯(例如甲基、乙基或叔丁基的酯，其可在碱性或酸性介质中水解)和苄基酯，其可被氢解；用于醇或酚的暂时性保护基团为例如四氢吡喃基、甲基氧基甲基、甲基乙氧基甲基、叔丁基、苄基和叔丁基二甲基甲硅烷基醚；用于羰基衍生物的暂时性保护基团为例如直链或环状缩醛，例如1,3-二噁烷-2-基或1,3-二氧杂环戊-2-基(1,3-dioxolan-2-yl)；且可参照在所述出版物中描述的公知的一般方法。

使用保护基团进行保护和脱保护的方法典型地是所述出版物中描述的方法。

在下文所提及步骤中的每个之前或之后(或两个步骤之间)，可增加用于存在于化合物和反应中间体上的各种基团保护/脱保护步骤。确定是否需要保护所述基团和所要使用的保护基团的性质，对于本领域技术人员而言是标准方式(approach)，其根据常识(general knowledge)知晓基团是否易于在随后步骤期间发生反应且是否应对其进行保护。

在下文中，术语"LG"(离去基团)意指可易于通过断裂异裂键(heterolyticbond)从分子裂解并损失电子对的基团。因此，例如，在取代反应期间所述基团可易于被另一基团代替。所述离去基团为例如卤素原子或活化的羟基，例如甲烷磺酸酯、苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯(triflate)、乙酸酯等。离去基团及其制备参考的实例在Advances in Organic Chemistry,J.March,3^rd Edition,Wiley Interscience,pp.310-316中给出。

下文所述中间体可包含其它官能团的前体的基团，所述其它官能团是随后在一个或多个其它步骤中生成的。

根据本发明，通式(I)的化合物可根据下列方法来制备。

在第一个实施方案中，制备式(I)化合物的方法可包括以下步骤m)：

m)将基团-X₂-R₆接枝到下式(XLII)化合物上，获得式(I)化合物：

其中R₁、n、m、R₂、R₃、R₄、G₁和X₁如上文所定义。

经由步骤m)制备式(I)化合物的反应方案示于以下方案1中。

方案1：由式(XLII)化合物制备式(I)化合物的反应方案。

当所实施的方法需要保护X₁(更确切地，当X₁表示-O-时为羟基官能团或当X₁表示-NR₄₀-时为胺官能团)时，上述步骤m)中用于制备式(XLII)化合物的方法通常包括以下步骤I)：

I)下式(XLI)化合物的脱保护，获得式(XLII)化合物：

其中：

-R₁、n、m、R₂、R₃、R₄、G₁和X₁如上文所定义，且

-PG₁为X₁的保护基团(当X₁表示-O-时为羟基官能团的保护基团或当X₁表示-NR₄₀-时为胺的保护基团)。

经由步骤I)制备式(XLII)化合物的反应方案示于以下方案2中。

方案2：当PG₁为X₁的保护基团时，由式(XLII)化合物制备式(XLI)化合物的反应方案。

当所实施的方法不需要保护X₁时，步骤I)不是必需的。在此情况下，在以下步骤中，PG₁表示H且式(XLII)化合物对应于式(XLI)化合物，其中PG₁表示H。

因此，在下述步骤(用于制备式(I)、(XLI)或(XLII)的化合物)中，PG₁表示H或X₁的保护基团。

已开发出两种可替换的实施方案用于制备上述式(XLI)化合物。

在第一种可替换方式(alternative)中，制备式(XLI)化合物的方法可包括下列步骤：

c)使下式(XIII)化合物与式PG₁-X₁-G₁-R₃₀₀进行Suzuki反应，获得下式(XXI)化合物，

所述式(XIII)为：

其中m、R₂、R₃和R₄如上文所述且LG₂为离去基团，例如卤素原子，例如氯，

在式PG₁-X₁-G₁-R₃₀₀中X₁和G₁如上文所定义，PG₁为H或X₁的保护基团且R₃₀₀为硼酸或硼酸酯基团，典型地为下式(CII)化合物：

其中X₁、PG₁和G₁如上文所定义，

所述式(XXI)为：

其中m、R₂、R₃、R₄、X₁、PG₁和G₁如上文所定义，

d)氧化在步骤c)中所获得的式(XXI)化合物，获得下式(XXII)化合物：

其中m、R₂、R₃、R₄、X₁、PG₁和G₁如上文所定义，

e)使下式(CI)化合物亲核进攻在步骤d)中所获得的式(XXII)化合物，获得式(XLI)化合物，

所述式(CI)为：

其中n和R₁如上文所定义。

当PG₁表示H时，在步骤e)结束时所获得的式(XLI)化合物对应于式(XLII)化合物，其可直接参与步骤m)而无需脱保护步骤I)。

经由步骤c)至e)制备式(XLI)化合物的反应方案示于以下方案3中(在步骤c)使用式(CII)化合物的实施方案中)。

方案3：以式(XIII)化合物起始经由步骤c)至e)制备式(XLI)化合物的反应方案。

根据第二种可替换方式，制备式(XLI)化合物的方法可包括下列步骤：

f)使式PG₂-OH化合物亲核进攻下式(XIII)化合物，获得下式(XXXI)化合物

在式PG₂-OH中PG₂为羟基官能团的保护基团，例如苄基，

所述式(XIII)为：

其中m、R₂、R₃和R₄如上文所定义且LG₂为离去基团，例如卤素原子，例如氯，

所述式(XXXI)为：

其中PG₂、m、R₂、R₃和R₄如上文所定义，

g)氧化在步骤f)中所获得的的式(XXXI)化合物，获得下式(XXXII)化合物：

其中m、R₂、R₃、R₄和PG₂如上文所定义，

h)使下式(CI)化合物亲核进攻在步骤g)中所获得的式(XXXII)化合物，获得下式(XXXIII)化合物：

所述式(CI)为：

其中n和R₁如上文所定义，

所述式(XXXIII)为：

其中n、R₁、m、R₂、R₃、R₄和PG₂如上文所定义，

i)将在步骤h)中所获得的式(XXXIII)化合物脱保护，获得下式(XXXIV)化合物：

其中n、R₁、m、R₂、R₃和R₄如上文所定义，

j)将离去基团LG₅接枝到在步骤i)中所获得的式(XXXIV)化合物上，获得下式(XXXV)化合物：

其中n、R₁、m、R₂、R₃和R₄如上文所定义且LG₅为离去基团，例如卤素原子或三氟甲磺酸酯，

k)使在步骤j)中所获得的式化合物(XXXV)与式PG₁-X₁-G₁-R₃₀₀化合物进行Suzuki反应，获得式(XLI)化合物，

在式PG₁-X₁-G₁-R₃₀₀中X₁和G₁如上文所定义，PG₁为H或X₁的保护基团且R₃₀₀为硼酸或硼酸酯基团，

典型地为下式(CII)化合物：

其中X₁、PG₁和G₁如上文所定义。

当PG₁表示H时，在步骤k)结束时所获得的式(XLI)化合物对应于式(XLII)化合物，其可直接参与步骤m)而无需脱保护步骤I)。

经由步骤f)至k)的制备式(XLI)化合物的反应方案示于以下方案4中(在步骤k)使用式(CII)化合物的实施方案中)。

方案4：以式(XIII)化合物起始经由步骤f)至k)制备式(XLI)化合物的反应方案。

在上述步骤c)或f)中实施的制备上述式(XIII)化合物的方法典型地包括下列步骤：

a)使下式(XI)化合物亲核进攻下式(X)化合物，获得下式(XII)化合物，

所述式(XI)为：

其中m、R₂、R₃和R₄如上文所定义，

所述式(X)为：

其中LG₂如上文所定义且LG₁和LG₄独立地为离去基团，例如卤素原子例如氯原子，

所述式(XII)为：

其中m、R₂、R₃、R₄、LG₁和LG₂如上文所定义，

b)环化在步骤a)中所获得的式(XII)化合物，获得式(XIII)化合物。

经由步骤a)和b)制备式(XIII)化合物的反应方案示于以下方案5中。

方案5：以式(X)化合物起始经由步骤a)和b)制备式(XIII)化合物的反应方案。

在第二个实施方案中，当式(I)中X₁表示-NR₄₀-且X₂表示-CONR₅₀-时，制备式(I)化合物的方法可包括下列步骤：

n)使式(XXXV)化合物与式R₆R₅₀N-(C＝O)-NR₄₀-G₁-R₃₀₀化合物进行Suzuki反应，获得式(I)化合物，

所述式(XXXV)为：

在式R₆R₅₀N-(C＝O)-NR₄₀-G₁-R₃₀₀中G₁、R₆、R₅₀和R₄₀如上文所述且R₃₀₀为硼酸或硼酸酯基团，

典型地为下式(CIII)化合物：

其中G₁、R₆、R₅₀和R₄₀如上文所定义，

在式(I)中X₁表示-NR₄₀-且X₂表示-CONR₅₀-。

在步骤n)实施的制备式(XXXV)化合物的方法典型地包括上述步骤f)、g)、h)、i)和j)。

经由步骤n)制备式(I)化合物的反应方案示于以下方案6中(在步骤n)使用式(CIII)化合物的实施方案中)。

方案6：由式(XXXV)化合物经由步骤n)制备式(I)化合物的反应方案。

在第三个实施方案中，制备式(I)化合物的方法可包括以下步骤q)：

q)使下式(CI)化合物亲核进攻下式(LII)化合物，获得式(I)化合物，

所述式(CI)为：

其中n和R₁如上文所定义，

所述式(LII)为：

其中m、R₂、R₃、R₄、G₁、X₁、X₂和R₆如上文所定义。

经由步骤q)制备式(I)化合物的反应方案示于以下方案7：

方案7：由式(LIII)化合物经由步骤q)制备式(I)化合物的反应方案。

在上述步骤q)中实施的制备式(LII)化合物的方法典型地包括下列步骤：

o)使下式(XIII)化合物与式R₆-X₂-X₁-G₁-R₃₀₀化合物进行Suzuki反应，获得下式(LI)化合物

所述式(XIII)为：

其中m、R₂、R₃、R₄和LG₂如上文所定义，

在式R₆-X₂-X₁-G₁-R₃₀₀中R₆、X₂、X₁和G₁如上文所定义且R₃₀₀为硼酸或硼酸酯基团，

典型地为下式(CIV)化合物：

其中R₆、X₂、X₁和G₁如上文所定义，

所述式(LI)为：

其中R₆、X₂、X₁、G₁、m、R₂、R₃和R₄如上文所定义，

p)氧化在步骤o)所获得的式(LI)化合物，获得式(LII)化合物。

在步骤o)中实施的制备式(XIII)化合物的方法典型地包括上述步骤a)和b)。

经由o)和p)制备式(LII)化合物的反应方案示于以下方案8中(在步骤o)使用式(CIV)化合物的实施方案中)：

方案8：以式(XIII)化合物起始经由步骤o)和p)制备式(LII)化合物的反应方案。

上述步骤a)至q)的实施方案在下文有述。

步骤m)可根据Advanced Organic Chemistry,J.March,3^rd Edition,WileyInterscience和其中所引用的参考文献所述的方法来实施。

例如，当X₂表示单键且R₆表示基团-G₂-X₃-G₃，其中：

-G₂表示任选地取代有一个或多个基团R₈₀的二价杂芳基，X₃和G₃如上文所定义，或

-G₂和X₃表示单键且G₃表示任选地取代有一个或多个基团R₈₁的杂芳基，

步骤m)可由如Topics in Current Chemistry Chemical Review 2002,219,131-209中所述的Buchwald-Hartwig反应组成，其通过在钯催化剂、碱和任选地膦存在下，在溶剂中，通常在室温至150℃的温度下，式(XLII)化合物与式LG₇-G₂-X₃-G₃进行反应来实现，

在所述LG₇-G₂-X₃-G₃中：

-G₂表示任选地取代有一个或多个基团R₈₀的二价杂芳基，或

-G₂和X₃表示单键且G₃表示任选地取代有一个或多个基团R₈₁的杂芳基，且

-LG₇表示离去基团，例如卤素原子，

所述碱例如碳酸钾、氟化钾、叔丁醇钾或磷酸钾，

所述溶剂选自二甲基甲酰胺、二噁烷、乙二醇二甲醚、甲苯、叔丁醇、四氢呋喃和水，或它们的混合物。

当X₂表示-CONR₅₀-、-CONR₅₁-O-或-COO-时，开发四个实施方案用于实施步骤m)。

在第一个实施方案中，步骤m)包括下列步骤：

m1-1)在碱存在下使式(XLII)化合物与光气或三光气进行反应，

m1-2)使式HNR₅₀R₆、HNR₅₁-O-R₆或HO-R₆的化合物与在步骤m1-1)中所获得的化合物进行反应，获得式(I)化合物，其中R₆、R₅₀和R₅₁如上文所定义，

反应m1-1)和m1-2)可实施为一釜式反应(one-pot reaction)。

在第二个实施方案中，步骤m)包括下列步骤：

m2-1)在碱存在下使式HNR₅₀R₆、HNR₅₁-O-R₆或HO-R₆的化合物与光气或三光气进行反应，其中R₆、R₅₀和R₅₁如上文所定义，

m2-2)使式(XLII)化合物与在步骤m2-1)中所获得的化合物进行反应，获得式(I)化合物，

反应m2-1)和m2-2)可实施为一釜式反应。

步骤m1-1)、m1-2)、m2-1)和m2-2)典型地在二氯甲烷、二噁烷或两者的混合物中实施。步骤m1-1)和m2-2)通常在胺碱如三乙胺或二异丙基乙基胺存在下实施。

在第三个实施方案中，步骤m)包括下列步骤：

m3-1)在碱存在下使式(XLII)化合物与氯甲酸烷基酯或氯甲酸芳基酯进行反应，

m3-2)使式HNR₅₀R₆、HNR₅₁-O-R₆或HO-R₆的化合物与在步骤m3-1)中所获得的化合物进行反应，获得式(I)化合物，其中R₆、R₅₀和R₅₁如上文所定义，

反应m3-1)和m3-2)可实施为一釜式反应。

在第四个实施方案中，步骤m)包括下列步骤：

m4-1)在碱存在下使式HNR₅₀R₆、HNR₅₁-O-R₆或HO-R₆的化合物与氯甲酸烷基酯或氯甲酸芳基酯进行反应，其中R₆、R₅₀和R₅₁如上文所定义

m4-2)使式(XLII)化合物与在步骤m4-1)中所获得的化合物进行反应，获得式(I)化合物，

反应m4-1)和m4-2)可实施为一釜式反应。

步骤m3-1)、m3-2)、m4-1)和m4-2)典型地在极性非质子性溶剂如二甲基甲酰胺、四氢呋喃或两者的混合物中实施。步骤m3-1)和m4-1)通常在室温典型地以氯甲酸苯酯来实施。步骤m3-2)和m4-2)典型地在80至120℃实施且可通过微波实施。

步骤a)典型地在碱，尤其是胺例如三乙胺存在下，通常在极性非质子性溶剂例如四氢呋喃中，在尤其是-78℃的温度下来实施。

步骤b)典型地在碱，尤其是胺例如1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯存在下，通常在极性非质子性溶剂例如二甲基亚砜中，在尤其是在室温(25℃)至60℃的温度下来实施。

步骤c)、n)和o)，其对应于Suzuki偶联反应，典型在矿物碱(mineral base)和钯络合物(complex)存在下，通常在溶剂中，典型地在室温至150℃的温度下实施；所述矿物碱例如碳酸钠或碳酸钾、氟化钾、叔丁醇钾或磷酸三钾；所述钯络合物例如四(三苯基膦)钯或二(三苯基膦)氯化钯(II)；所述溶剂选自二甲基甲酰胺、二噁烷、乙二醇二甲醚、甲苯、四氢呋喃和水或它们的混合物，典型地为二噁烷/水混合物。尤其可遵循Chemical Review 2007,107,133-173中所述的条件。这些步骤可通过微波来实施。

步骤d)、g)和p)典型地在氧化剂例如六水合单过氧邻苯二甲酸镁存在下，通常在乙腈/醇(例如乙醇)混合物(典型地为3/1至3/2混合物)中，通常在室温至70℃的温度下来实施。

步骤e)、h)和q)通常在碱，尤其是胺碱例如三乙胺存在下，典型地在极性非质子性溶剂二甲基亚砜或二噁烷中，在70至110℃的温度下来实施。这些步骤可通过微波来实施。

步骤I)的条件随保护基团PG₁的性质而变化。PG₁尤其是Boc基团。当PG₁为Boc基团时，步骤I)典型地在溶剂中，在酸存在下，通常在室温实施；所述溶剂通常选自二氯甲烷、乙醚、四氢呋喃和二噁烷或它们的混合物，典型地为二氯甲烷；所述酸例如三氟乙酸或盐酸。

步骤f)的条件随保护基团PG₂的性质而变化。PG₂尤其是苄基。当PG₂为苄基时，步骤f)典型地通过使式(XIII)化合物与苄氧化物(benzoxide)(通常通过使苄醇和碱例如氢化钠进行反应来获得)接触，典型地在无水极性非质子性溶剂溶剂例如四氢呋喃中，通常在-10至10℃的温度下来实施。

步骤i)的条件随保护基团PG₂的性质而变化。PG₂尤其是苄基。当PG₂为苄基时，步骤i)可通过以下方式来实施：

-例如在氢气和钯/碳(palladium-on-charcoal)存在下氢解，或

-在钯催化剂存在下，尤其是在甲醇中，在室温至回流点(reflux point)的温度下，与甲酸铵进行反应。

步骤j)的条件根据保护基团LG₅的性质而变化。LG₅典型地为三氟甲磺酸酯基团。当LG₅为三氟甲磺酸酯基团时，步骤i)可通过使式(XXXIV)化合物与三氟甲磺酸酐进行反应，典型地在碱，尤其是胺碱例如三乙胺存在下，在例如二氯甲烷中，通常在-10至10℃的温度下来实施。

在上述反应方案中，当其制备方法未被描述时，起始化合物和试剂为可商购的(commercially available)或述于文献中，或者(or alternatively)可根据其中所述的或本领域技术人员已知的方法来制备。

下列实施例描述了本发明某些化合物的制备。这些实施例并非限制而仅用于举例说明(illustrate)本发明。所示例化合物的编号是指下表3中所给出的编号，其举例说明许多本发明化合物的化学结构和物理性质。

本领域技术人员可毫不费力地将以下教导用于通式(I)化合物。他能够根据其知识和文献选择使得能够引入所有基团或官能团的适当保护基团。

在以下操作(procedures)和实施例中：

-如下文所述，在300K的温度下以300、400或600MHz在DMSO-d₆中使用DMSO-d₆峰作参考来记录质子核磁共振谱(¹H NMR)(未记录可交换的质子)。化学位移δ以百万分之一(ppm)来表示。所观察到的信号表示如下：s＝单峰、d＝二重峰、m＝多重峰、bs＝宽单峰、t＝三重峰、q＝四重峰。

-下述LC/MS特性(characteristic)依次表示(indicate)下文所用的和详述的高效液相色谱分析方法、通过质谱鉴定的峰M+H⁺和以分钟表示的化合物的保留时间(Tr)。

*方法A

仪器：Acquity UPLC系列(Waters)；LCT质谱仪(Waters)

柱：BEH C18 50x2.1mm 1.7μm，T°＝40℃

溶剂A：H₂O+0.05％TFA；溶剂B：乙腈+0.035％TFA

流速：1.0毫升/分钟

梯度A/B：t0分钟2％B，t1.6分钟100％B，t2.1分钟100％B，t2.5分钟2％B，t3.0分钟2％B

检测：UV 220nm

离子化：正模式电喷射(electrospray positive mode)

*方法B

仪器：Alliance HPLC系列(Waters)；ZQ质谱仪(Waters)

柱：Kromasil C18 50x2.1mm,3.5μm，T°＝40℃

溶剂A：乙酸铵5mM+3％乙腈；溶剂B：乙腈

流速：0.8毫升/分钟

梯度A/B：t0分钟0％B，t5.5分钟100％B，t7.0分钟100％B，t7.1分钟0％B，t10.0分钟0％B

检测：UV 220nm

离子化：正模式电喷射

*方法C

仪器：Acquity UPLC型HPLC系列(Waters)；SQD质谱仪(Waters)

柱：Ascentis Express C18 50x2.1mm 2.7μm，T°＝55℃

溶剂A：H₂O+0.02％TFA；溶剂B：乙腈+0.014％TFA

流速：1毫升/分钟

梯度A/B：t0分钟2％B，t1.2分钟98％B，t1.5分钟2％B

检测：UV 220nm

离子化：正模式电喷射

*方法D

仪器：Acquity UPLC型HPLC系列(Waters)；SQD质谱仪(Waters)

柱：BEH C18 100x2.1mm 1.7μm，T°＝70℃

溶剂A：H₂O+0.02％TFA；溶剂B：乙腈+0.014％TFA

流速：0.8毫升/分钟

梯度A/B：t0分钟2％B，t5.0分钟98％B，t5.3分钟98％B，t5.33分钟2％B

检测：UV 220nm

离子化：正模式电喷射

*方法E

仪器：Alliance HPLC系列(Waters)；ZQ质谱仪(Waters)

柱：Xbridge C18 30x2.1mm 2.5μm，T°＝55℃

溶剂A：H₂O+0.02％TFA；溶剂B：MeOH

流速：0.7毫升/分钟

梯度A/B：t0分钟2％B，t3.0分钟100％B，t3.5分钟100％B，t3.6分钟2％B

检测：UV 220nm

离子化：正模式电喷射

*方法F

仪器：Alliance HPLC系列(Waters)；ZQ质谱仪(Waters)

柱：Waters Select CSH C18 30x7.5mm，3.5μm,T°＝60℃

溶剂A：H₂O+0.1％甲酸；溶剂B：乙腈+0.1％甲酸

流速：1.1毫升/分钟

梯度A/B：t0分钟6％B，t0.8分钟6％B，t4.7分钟100％B，t4.8分钟100％B，t5.0分钟6％B，t6.0分钟6％B

检测：UV 220nm

离子化：正模式电喷射

溶剂混合物以体积比来定量。

NMR谱和质谱证实根据下文实施例所获得的化合物的结构。

在下列实施例中，使用下列缩写和经验式：

DBU：1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

DCM：二氯甲烷

DIEA：N,N-二异丙基乙基胺

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DMSO：二甲基亚砜

Et₂O：乙醚

EtOH：乙醇

HPLC：高效液相色谱

K₂CO₃：碳酸钾

LC/MS：液相色谱/质谱

MeOH：甲醇

MgSO₄：硫酸镁

MHz：兆赫

Min：分钟

Mmol：毫摩尔

Na₂CO₃：碳酸钠

NaCl：氯化钠

NaHCO₃：碳酸氢钠

Na₂SO₄：硫酸钠

Psi：磅/每平方英寸，其中1psi＝0.069巴

TFA：三氟乙酸

THF：四氢呋喃

℃：摄氏度

Tr：保留时间

实施例1:

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-甲基脲的合成

步骤1.1：(式(X)化合物的制备)

4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酰氯

在搅拌下将10g 4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸(41.83mmol)置于61ml亚硫酰氯(836.54mmol)。18小时后，在80℃下，蒸除亚硫酰氯且用15ml甲苯将残余物吸收两次并浓缩，获得10.77g 4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酰氯。

步骤1.2：(其对应于步骤a))

4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸乙基-(2-羟基-2-甲基丙基)酰胺

在搅拌下将4.9g 1-(乙基氨基)-2-甲基丙-2-醇(41.82mmol)和17.5ml三乙胺(125.46mmol)置于30ml无水THF中。用干冰/丙酮浴(a bath of cardice inacetone)将反应介质冷却至-70℃，逐滴加入10.77g和(41.82mmol)稀释于80ml THF中的步骤1.1中所述的化合物。在-70℃下搅拌4小时后，将反应介质倾入冰水中，然后用DCM萃取两次。用盐水洗涤有机相，以Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发至干。获得13.54g 4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸乙基-(2-羟基-2-甲基丙基)酰胺。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝338；Tr＝3.70和3.80分钟(构象异构体)

步骤1.3：(其对应于步骤b))

4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

在搅拌下将13g(38.43mmol)步骤1.2中所述的化合物置于200mlDMSO中。加入6.3ml DBU(42.28mmol)。将反应介质在55℃下搅拌5小时，然后加入500ml冰-水。形成白色沉淀物，将其滤出并用水冲洗两次。将固体吸收在乙腈中并滤出，得到3.6g 4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

回收母液并用300ml DCM萃取3次。合并有机相，用盐水洗涤，以Na₂SO₄干燥，然后过滤。将溶液蒸发至干。然后用0％至10％的乙酸乙酯/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。获得3g 4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝302；Tr＝3.68分钟

步骤1.4：(其对应于步骤c))

[4-(6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-2-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯

将8g(26.51mmol)步骤1.3中所述的化合物置于150ml二噁烷中。在搅拌下相继加入7.67g(29.16mmol)4-N-Boc-氨基-3-氟苯基硼酸、66.27ml(132.5mmol)1N Na₂CO₃水溶液和1.53g(1.33mmol)四(三苯基膦)钯。将混合物在85℃下搅拌2小时，然后倾入水中。然后滤出所获得的沉淀并用水冲洗。将所获得的固体吸收在MeOH中，滤出并用戊烷冲洗。获得11.2g[4-(6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-2-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝477；Tr＝4.55分钟

步骤1.5：(其对应于步骤d))

[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-2-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯

将21g(44.06mmol)步骤1.4中所述的化合物和34.1g六水合单过氧邻苯二甲酸镁(88.13mmol)置于300ml2/1乙腈/EtOH混合物中。在室温搅拌18小时后，蒸除溶剂。将残余物吸收在500ml水中。滤出所获得的产物并用EtOH冲洗，得到22g[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-2-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝509；Tr＝4.08分钟

步骤1.6：(其对应于步骤e))

{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁酯

将5g(9.83mmol)步骤1.5中所述的化合物置于100ml DMSO中。相继加入5.67ml三乙胺(39.33mmol)和2.94g 8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸化物(19.66mmol)。在90℃下搅拌1小时30分钟后，蒸除DMSO。将残余物吸收在200ml水中并滤去所形成的固体，先后用水、乙腈和戊烷冲洗，得到5g{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝542；Tr＝4.49分钟

步骤1.7：(其对应于步骤l))

4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将5g(9.23mmol)步骤1.6中所述的化合物置于90ml DCM中。逐滴加入21.3ml TFA并将反应介质在室温搅拌3小时。加入饱和NaHCO₃水溶液至pH 10，并用DCM萃取反应介质两次。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并蒸发。将固体吸收在乙腈中并滤出，得到3.25g 4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝442；Tr＝3.71分钟

步骤1.8：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-甲基脲

将400mg(0.91mmol)步骤1.7中所述的化合物和0.24ml DIEA(1.36mmol)置于10ml二噁烷中。然后加入0.715ml 1.9N光气的甲苯溶液(phosgene in toluene)(1.6mmol)。在50℃下搅拌30分钟后，加入3.17ml 2N甲胺/THF(6.34mmol)。在室温搅拌1小时后，过滤反应混合物。先后用水、乙酸乙酯和戊烷冲洗固体。获得343mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-甲基脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝499；Tr＝0.90分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.48(m,1H)；8.14(dd,1H)；7.35(dd；1H)；7.24(dd,1H)；6.53(q,1H)；4.41(m,2H)；4.22(m,2H)；3.66(s,2H)；3.51(m,2H)；3.10(d,2H)；2.67(d,3H)；1.81(m,2H)；1.64(m,2H)；1.34(s,6H)；1.14(t,3H)

实施例2:

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-甲基脲的合成

步骤2.1：(其对应于步骤e))

{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁酯

将2.5g[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-2-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯(19.66mmol)的20ml二噁烷溶液分别置于4个微波管中。向每个管中分别加入四分之一的(S)-3-甲基吗啉(98.32mmol)。将所述管在100℃下在Biotage微波机(microwave machine)中加热2小时。过滤反应介质并用MeOH冲洗。先后用水、乙腈和戊烷洗涤固体。获得3.7g{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁酯。将DMSO/MeOH相蒸发至干。将残余物吸收在水中并过滤，先后用乙腈和戊烷冲洗。用0至5％的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对该产物进行层析。获得1.7g{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝530；Tr＝4.52分钟

步骤2.2：(其对应于步骤l))

4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将5.4g(10.2mmol)步骤2.1中所述的化合物置于100ml DCM中。逐滴加入23.57ml TFA(305.89mmol)。在室温搅拌2小时后，浓缩介质，吸收在水中并用饱和的NaHCO₃溶液碱化。用DCM萃取水相并用盐水洗涤有机相，以Na₂SO₄干燥，然后浓缩。获得4.2g 4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝430；Tr＝3.75分钟

步骤2.3：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-甲基脲

将400mg(0.93μmol)步骤2.2中所述的化合物和0.23ml DIEA(1.30mmol)置于20ml二噁烷中。加入0.686ml 1.9N光气的甲苯溶液(1.3mmol)。在50℃下搅拌30分钟后，加入2.33ml 2N甲胺/THF(4.66mmol)。在室温搅拌1小时后，用水洗涤反应混合物，以Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。用0％至100％的95/5乙酸乙酯/MeOH混合物/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。获得268mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-甲基脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝487；Tr＝0.91分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.48(m,1H)；8.14(dd,1H)；7.34(dd,1H)；7.25(dd,1H)；6.54(q,1H)；4.65(m,1H)；4.34(m,1H)；3.91(m,1H)；3.72-3.67(m,3H)；3.59-3.51(m,3H)；3.45-3.36(m,1H)；3.22-3.15(m,1H)；2.67(d,3H)；1.35(s,6H)；1.21(d,3H)；1.15(t,3H)

实施例3:

1-乙基-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}脲的合成

步骤3.1：(其对应于步骤f))

4-苄基氧基-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将6.20ml苄醇(59.64mmol)置于400ml无水THF中。将溶液在冰浴中冷却至4℃并逐份加入2.39g 60％氢化钠(59.64mmol)。将反应混合物在4℃下搅拌15分钟。逐滴加入15g溶于400ml无水THF的4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮(49.70mmol)。在4℃下搅拌2小时后，加入400ml水并蒸除THF。用300ml DCM萃取水相两次，合并有机相并先后用400ml水和400ml盐水洗涤。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并浓缩。用30％至50％的乙酸乙酯/庚烷的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。获得18.6g 4-苄基氧基-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝374；Tr＝4.21分钟

步骤3.2：(其对应于步骤g))

4-苄基氧基-6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将18.6g(49.80mmol)步骤3.1中所述的化合物和49.27g六水合单过氧邻苯二甲酸镁(99.61mmol)置于375ml2/1乙腈/EtOH混合物中。在室温搅拌2小时后，蒸除溶剂。将残余物吸收在400ml水中。过滤混合物并用水冲洗两次。将所获得的固体吸收在DCM中，以Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发，得到15.9g 4-苄基氧基-6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝406；Tr＝3.70分钟

步骤3.3：(其对应于步骤h))

4-苄基氧基-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将11.23g(27.7mmol)步骤3.2中所述的化合物置于120ml DMSO中。相继加入5.79ml三乙胺(41.54mmol)和8.4g(S)-3-甲基吗啉(83.09mmol)。在搅拌下用无水MgSO₄将介质干燥30分钟。过滤混合物并分配至(dividedamong)六个20ml微波管中。将所述管在100℃下在Biotage微波机中加热30分钟。

将反应介质倾入水中并用乙酸乙酯萃取三次。用水洗涤有机相三次，以Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。在硅胶上用乙酸乙酯/DCM的梯度对残余物进行层析，得到6.91g 4-苄基氧基-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝427；Tr＝4.16分钟

步骤3.4：(其对应于步骤i))

6-乙基-4-羟基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将6.9g(16.18mmol)步骤3.3中所述的化合物和160ml EtOH置于Parr瓶中。加入0.17g 50％水合的10％钯/碳(1.62mmol)并将反应介质在40psi氢气、25℃下搅拌1小时。过滤反应介质并浓缩，得到4.81g 6-乙基-4-羟基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝337；Tr＝3.40分钟

步骤3.5：(其对应于步骤j))

三氟甲磺酸6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基酯

将4.6g(13.67mmol)步骤3.4中所述的化合物置于140ml DCM中。加入2.86ml三乙胺(20.51mmol)。将溶液在冰浴中冷却至4℃，然后加入3.47ml三氟甲磺酸酐(20.51mmol)。将混合物在4℃搅拌3小时后，加入300ml水。萃取有机相并用饱和的NaHCO₃水溶液洗涤，以Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。用20％至50％的乙酸乙酯/庚烷的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到5.27g三氟甲磺酸6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝469；Tr＝4.35分钟

步骤3.6：(式(CIII)化合物的制备)

1-乙基-3-[2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲

将5g 4-氨基-3-氟苯基硼酸频哪醇酯(21.08mmol)置于100ml DCM中。加入3.23ml三乙胺(23.20mmol)。将反应混合物在冰浴中冷却至4℃。搅拌5分钟后，逐滴加入2.21g三光气(7.38mmol)，然后移除冰浴。在室温搅拌1小时30分钟后，先后逐滴加入8.77g乙胺盐酸化物(105.45mmol)和14.57gK₂CO₃(105.45mmol)。2小时后，在冰浴中冷却介质，然后用1N盐酸溶液酸化。用DCM萃取水相3次。合并有机相，用盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并浓缩。用0％至5％的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到4.65g 1-乙基-3-[2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝309；Tr＝4.11分钟

步骤3.7：(其对应于步骤n))

1-乙基-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}脲

将420mg(0.89mmol)步骤3.5中所述的化合物置于20ml微波管中的10ml二噁烷中。相继加入276mg(0.89mmol)步骤3.6中所述的化合物、380mg磷酸三钾(tribasic potassium phosphate)(1.79mmol)和0.5ml水。用氩气将溶液脱气，随后加入63mg二(三苯基膦)氯化钯(II)(0.09mmol)。将所述管在100℃下在Biotage微波机中加热2分钟。将反应介质稀释至DCM中，并用水洗涤两次以及用盐水洗涤一次。以Na₂SO₄干燥干燥有机相，过滤并浓缩。用0％至30％的5/1乙酸乙酯/MeOH混合物/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。将产物吸收在Et₂O中，然后滤出，得到222mg 1-乙基-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝501；Tr＝1.02分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.42(m,1H)；8.15(dd,1H)；7.34(dd,1H)；7.24(dd,1H)；6.66(q,1H)；4.65(m,1H)；4.32(m,1H)；3.91(m,1H)；3.72-3.67(m,3H)；3.59-3.37(m,4H)；3.21-3.09(m,3H)；1.35(s,6H)；1.21(d,3H)；1.15(t,3H)；1.07(t,3H)

实施例4：

1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(S)-1-吡咯烷-2-基甲基-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲的合成

步骤4.1：(式(XI)化合物的制备)

(S)-2-[(2-羟基-2-甲基丙基氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

将4.34g 1-氨基-2-甲基丙-2-醇(48.68mmol)置于50ml MeOH中。相继逐滴加入2.79ml乙酸(48.68mmol)和4.72ml预先稀释于20ml MeOH中的N-Boc-L-脯氨醛(prolinal)(24.34mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后逐份加入3.22g氰基硼氢化钠(48.68mmol)。在室温搅拌18小时后，将介质倾入400ml饱和的NaHCO₃水溶液中。用150ml DCM萃取水相3次。合并有机相，用200ml水、200ml盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。获得7.19g(S)-2-[(2-羟基-2-甲基丙基氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝273；Tr＝2.55分钟

步骤4.2：(其对应于步骤a))

(S)-2-{[(4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羰基)-(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

将6.63g(24.34mmol)步骤4.1中所述的化合物置于17ml无水THF。将反应混合物在-70℃下在干冰/丙酮浴中冷却，然后相继逐滴加入10.18ml三乙胺(73.02mmol)和6.46g预溶于50ml THF中的4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酰氯(25.08mmol)。在-70℃下搅拌3小时后，将反应混合物倾入冰-水中，然后用150ml DCM萃取4次。合并有机相并先后用200ml水和200ml盐水洗涤。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并蒸发。用6％至60％的乙酸乙酯/庚烷的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到10.56g(S)-2-{[(4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羰基)-(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝493；Tr＝4.57分钟

步骤4.3：(其对应于步骤b))

(S)-2-(4-氯-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

将10.56g(21.40mmol)步骤4.2中所述的化合物置于107ml DMSO中。逐滴加入3.55ml DBU(23.54mmol)并将反应混合物在55℃下搅拌5小时。然后将介质倾入水中并用DCM萃取。用盐水洗涤有机相，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用5％至50％的乙酸乙酯/庚烷的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到3.55g(S)-2-(4-氯-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝457；Tr＝4.47分钟

步骤4.4：(其对应于步骤o))

(S)-2-{4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

将1g(2.19mmol)步骤4.3中所述的化合物置于20ml微波管中的10ml二噁烷中。相继加入809mg(2.63mmol)1-乙基-3-[2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲和6.02ml 2N Na₂CO₃溶液(12.04mmol)。用氩气将溶液脱气，随后加入126mg四(三苯基膦)钯(109.41μmol)。将所述管在110℃下在Biotage微波机中加热30分钟。将介质倾入300ml水中并用300ml乙酸乙酯萃取两次。合并有机相，先后用水和盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用7％至70％的乙酸乙酯/庚烷的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到1.9g(S)-2-{4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝603；Tr＝4.42分钟

步骤4.5：(其对应于步骤p))

(S)-2-{4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

将1.9g(3.15mmol)步骤4.4中所述的化合物和3.9g六水合单过氧邻苯二甲酸镁(6.3mmol)置于25ml 3/2乙腈/EtOH混合物中。在室温搅拌3小时后，将介质倾入水中并用DCM萃取3次。合并有机相，先后用水和盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。获得2.5g(S)-2-{4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝635；Tr＝4.08分钟

步骤4.6：(其对应于步骤q))

(S)-2-[4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

在两个20ml微波管中，将1.93g(3.04mmol)步骤4.5中所述的化合物的一半分别置于26ml DMSO的一半中。相继且分别加入1g 8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸化物(6.35mmol)和1.78ml三乙胺(12.68mmol)中的每种试剂的一半。将所述管在80℃下在微波机中加热30分钟。将介质倾入水中并用DCM洗涤3次。合并有机相，用盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用1％至10％的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到1.46g(S)-2-[4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝668；Tr＝4.37分钟

步骤4.7：(脱保护)

1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(S)-1-吡咯烷-2-基甲基-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲

将1.17g(1.75mmol)步骤4.6中所述的化合物置于20ml DCM中。逐滴加入4ml TFA(51.92mmol)。在室温搅拌30分钟后，将反应介质浓缩至干。将残余物稀释至DCM中并先后用饱和的NaHCO₃水溶液和盐水洗涤。以MgSO₄干燥有机相，过滤并蒸发，得到1.15g 1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(S)-1-吡咯烷-2-基甲基-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝568；Tr＝0.76分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.43(m,1H)；8.14(dd,1H)；7.43(dd,1H)；7.35(dd,1H)；6.64(t,1H)；4.41(m,2H)；4.29(d,2H)；3.75(d,2H)；3.69-3.43(m,3H)；3.21-3.12(m,4H)；3.17-3.08(m,2H)；1.95-1.69(m,8H)；1.51(m,1H)；1.39(d,6H)；1.11(t,3H)

实施例5：

(S)-2-[4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基]吡咯烷-1-甲酸乙酯的合成

将400mg(704.65μmol)1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(S)-1-吡咯烷-2-基甲基-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲置于5ml DCM中。相继加入0.15ml三乙胺(1.06mmol)和5mg 4-二甲基氨基吡啶(40.93μmol)。将反应混合物在冰浴中冷却至4℃并逐滴加入89μL氯甲酸乙酯(916.05μmol)。移除冰浴并在4小时后将反应介质倾入100ml饱和的NaHCO₃水溶液中。萃取有机相，用水、盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用0％至45％的5/1乙酸乙酯/MeOH混合物/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。将所获得的固体吸收在Et₂O中并滤出，得到310mg(S)-2-[4-[4-(3-乙基脲基)-3-氟苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基甲基]吡咯烷-1-甲酸乙酯。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝640；Tr＝1.08分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.43(m,1H)；8.15(m,1H)；7.39(dd,2H)；7.30(dd,1H)；6.63(q,1H)；4.40(m,2H)；4.08-3.99(m,4H)；3.77-3.59(m,3H)；3.41-3.31(m,3H)；3.17-3.08(m,4H)；1.90-1.81(m,6H)；1.65(m,2H)；1.35(d,6H)；1.19(t,3H)；1.06(t,3H)

实施例6：

1-{4-[6-((S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基甲基)-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲的合成

将400mg(704.65μmol)1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(S)-1-吡咯烷-2-基甲基-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲置于5ml DCM中。相继逐滴加入0.19ml三乙胺(1.41mmol)和0.1ml乙酸酐(1.06mmol)。在室温搅拌3小时后，将反应介质倾入饱和的NaHCO₃水溶液中并用DCM萃取两次。合并有机相，先后用水和盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用0％至45％的5/1乙酸乙酯/MeOH混合物/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。将获得的固体吸收在Et₂O中并滤出，得到277mg 1-{4-[6-((S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基甲基)-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-乙基脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝610；Tr＝0.91分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.10-8.04(m,2H)；7.41-7.30(m,2H)；6.46(m,1H)；4.38(m,2H)；4.29-4.22(m,2H)；3.38(m,3H)；3.43(m,3H)；3.14-3.10(m,5H)；1.97-1.81(m,9H)；1.68(m,2H)；1.36(d,6H)；1.08(t,3H)

实施例7：

3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸的合成

步骤7.1：(式(XI)化合物的制备)

3-(2-羟基-2-甲基丙基氨基)丙酸叔丁酯

将1g 1-氨基甲基丙-2-醇(11.22mmol)置于10ml DMF中。相继逐滴加入1.58ml三乙胺(11.22mmol)和1.87ml预稀释于5ml DMF中的3-溴丙酸叔丁酯(11.22mmol)。在室温搅拌18小时后，蒸除溶剂。用0％至20％的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到2g 3-(2-羟基-2-甲基丙基氨基)丙酸叔丁酯。

步骤7.2：(其对应于步骤a))

3-[(4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羰基)-(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]丙酸叔丁酯

将1g(4.58mmol)步骤7.1中所述的化合物置于5ml无水THF中。加入0.35ml三乙胺(4.58mmol)并将混合物在干冰/丙酮中冷却至-70℃。然后加入1.18g预稀释于10ml无水THF中的4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酰氯(4.58mmol)。在-70℃下搅拌2小时后，加入10ml水并用DCM萃取反应介质。用盐水洗涤有机相，干燥并浓缩至干。用0％至10％的乙酸乙酯/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到1.3g 3-[(4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羰基)-(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]丙酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝438；Tr＝4.34分钟

步骤7.3：(其对应于步骤b))

3-(4-氯-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基)丙酸叔丁酯

将800mg(1.82mmol)步骤7.2中所述的化合物置于10ml DMSO中。加入0.3ml DBU(2.01mmol)并将反应混合物在55℃下搅拌2小时。将反应介质倾入水中并用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用0％至10％的乙酸乙酯/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到460mg 3-(4-氯-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基)丙酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝402m；Tr＝4.32分钟

步骤7.4：(其对应于步骤o))

3-{4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基}丙酸叔丁酯

将410mg(1.02mmol)步骤7.3中所述的化合物置于20ml微波管中的15ml二噁烷。相继加入350mg(1.22mmol)1-乙基-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲和2.8ml 2N Na₂CO₃溶液(5.61mmol)。用氩气将溶液脱气，随后加入60mg四(三苯基膦)钯(51μmol)。将所述管在110℃下在Biotage微波机中加热30分钟。将介质倾入5ml水中并过滤溶液。先后用乙腈和戊烷冲洗固体，得到500mg 3-{4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基}丙酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝603；Tr＝4.42分钟

步骤7.5:(其对应于步骤p))

3-{4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基}丙酸叔丁酯

将450mg(0.85mmol)步骤7.4中所述的化合物和1.05g六水合单过氧邻苯二甲酸镁(1.7mmol)置于6ml 2/1乙腈/EtOH混合物中。在室温搅拌18小时后，蒸除溶剂。将残余物吸收在20ml水中。滤出所获得的产物并先后用乙腈、戊烷和Et₂O冲洗，得到410mg 3-{4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基}丙酸叔丁酯。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝562；Tr＝3.81分钟

步骤7.6：(其对应于步骤q))

3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸叔丁酯

将410mg(0.73mmol)步骤7.5中所述的化合物置于20ml微波管中的10ml DMSO中。相继加入345mg 8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸化物(2.19mmol)和0.6ml三乙胺(4.38mmol)。将所述管在80℃在Biotage微波机中加热45分钟。将介质倾入水中并用DCM萃取两次。合并有机相，用盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用乙腈和戊烷冲洗固体，得到420mg 3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸叔丁酯。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝595；Tr＝1.14分钟

步骤7.7：(脱保护))

3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸

将300mg(0.5mmol)步骤7.6中所述的化合物置于5ml DCM中。向介质中慢慢加入0.5ml 4M氯化氢在二噁烷中的溶液(2mmol)。在室温搅拌3小时后，蒸除溶剂并用0％至10％的含10％氨水的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。获得130mg 3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝539；Tr＝0.86分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 9.48(m,1H)；8.53(m,1H)；7.45-7.35(m,4H)；6.15(t,1H)；4.38(m,2H)；4.26(m,2H)；3.75-3.63(m,4H)；3.15-3.03(m,4H)；2.55(t,2H)；1.81(m,2H)；1.66(m,2H)；1.35(s,6H)；1.06(t,3H)

实施例8:

3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]-N,N-二甲基丙酰胺的合成

将70mg(0.13mmol)3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸置于3ml DCM中。在搅拌下相继加入0.66ml DIEA(0.39mmol)、12mg二甲胺盐酸化物(0.14mmol)、21mg羟基苯并三唑(0.14mmol)和27mg 1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸化物(0.14mmol)。在室温搅拌3天后，蒸除DCM。将残余物吸收在水中并用乙酸乙酯萃取。先后用饱和的NaHCO₃水溶液和盐水洗涤有机相，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将所获得的固体吸收在乙腈中，滤出并用戊烷冲洗，得到34mg 3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]-N,N-二甲基丙酰胺。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝566；Tr＝0.86分钟

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δppm 8.64(m,1H)；7.38(m,4H)；6.15(t,1H)；4.40(m,2H)；4.23(m,2H)；3.72(s,2H)；3.66(m,2H)；3.15-3.05(m,4H)；3.01(s,3H)；2.88(s,3H)；2.68(m,2H)；1.81(m,2H)；1.65(m,2H)；1.34(s,6H)；1.05(t,3H)

实施例9:

1-乙基-3-{4-[6-(3-羟基丙基)-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲的合成

将13mg氢化锂铝(0.34mmol)置于5ml无水THF中。逐滴加入在10mlTHF中含90mg(0.17mmol)3-[4-[4-(3-乙基脲基)苯基]-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-7,8-二氢-5H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-6-基]丙酸的溶液。将反应混合物在66℃下加热18小时。加入72mg氢化锂铝(1.89mmol)并将混合物在66℃下再加热24小时。然后将介质在冰-水浴中冷却至4℃并用饱和的Na₂SO₄水溶液冲洗。加入乙酸乙酯并经由硅藻土(Celite)过滤混合物，用乙酸乙酯冲洗并浓缩。用0％至10％的含10％氨水的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。先后用乙腈和戊烷冲洗固体，得到22mg 1-乙基-3-{4-[6-(3-羟基丙基)-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝525；Tr＝0.82分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.29(m,1H)；7.44-7.34(m,4H)；5.95(t,1H)；4.38(m,2H)；4.27(d,2H)；3.62(s,2H)；3.58-3.52(m,4H)；3.15-3.09(m,5H)；1.83-1.66(m,6H)；1.36(s,6H)；1.07(t,3H)

实施例10:

1-乙基-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基]苯基}脲的合成

步骤10.1:

3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2,2-二甲基丙基胺

将2g 3-氨基2,2-二甲基丙-1-醇(19.39mmol)置于40ml DCM中。加入2.56g咪唑(38.77mmol)并将溶液在冰浴中冷却至+4℃，随后逐滴加入3.36ml叔丁基(氯)二甲基甲硅烷(19.39mmol)。将介质在+4℃下搅拌30分钟，然后移除冰浴并将混合物在室温搅拌18小时。然后先后用水和盐水洗涤介质。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并浓缩，得到4.02g 3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2,2-二甲基丙基胺。

步骤10.2：(羟基官能团被保护的式(XI)化合物的制备)

[3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2,2-二甲基丙基]乙基胺

将4.02g(18.49mmol步骤10.1)中所述的化合物置于40ml无水THF中。逐份加入0.81g氢化钠(20.34mmol)。30分钟后，加入1.63ml碘甲烷(20.34mmol)并将混合物在55℃下加热18小时，将反应介质倾入水中并用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，以Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到4.47g[3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2,2-二甲基丙基]乙基胺。

步骤10.3：(其对应于步骤a)，具有保护的羟基官能团)

4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸[3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2,2-二甲基丙基]乙基酰胺

将4.47g(18.21mmol)步骤10.2中所述的化合物置于400ml THF中。加入7.57ml三乙胺(5.53mmol)并将混合物在干冰/丙酮浴中冷却至-70℃。然后逐滴加入4.69g预稀释于20ml无水THF中的4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酰氯(18.21mmol)。在-70℃下搅拌4小时后，加入1N盐酸水溶液并用乙酸乙酯萃取反应介质，以Na₂SO₄干燥并浓缩至干。将残余物吸收在乙腈中并过滤。蒸发滤液，得到4.1g 4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸[3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2,2-二甲基丙基]乙基酰胺。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝466；Tr＝5.77分钟

步骤10.4：(醇官能团的脱保护)

4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸乙基(3-羟基-2,2-二甲基丙基)酰胺

将4.1g(8.79mmol)步骤10.3中所述的化合物置于40ml MeOH中。加入1.83ml 12N盐酸(21.98mmol)。18小时后，蒸除MeOH。将残余物吸收在乙酸乙酯中并用饱和的NaHCO₃溶液洗涤。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并浓缩，得到3.1g 4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸乙基(3-羟基-2,2-二甲基丙基)酰胺。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝352；Tr＝4.08分钟

步骤10.5：(其对应于步骤b))

4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-6,7,8,9-四氢-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-5-酮

在搅拌下将2.95g(8.37mmol)步骤10.4中所述的化合物置于55mlDMSO中。加入1.38ml DBU(9.21mmol)。将反应介质在55℃下搅拌3小时，然后加入40ml冰-水。用乙酸乙酯萃取介质，用盐水洗涤，以Na₂SO₄干燥，然后过滤。将溶液蒸发至干。然后用0％至10％的乙酸乙酯/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析。获得1.18g 4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-6,7,8,9-四氢-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-5-酮。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝316；Tr＝3.91分钟

步骤10.6：(其对应于步骤o))

1-乙基-3-[4-(6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基)苯基]脲

将0.3g(0.95mmol)步骤10.5中所述的化合物置于20ml微波管中的8ml二噁烷中。相继加入330mg(1.14mmol)1-乙基-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲和2.61ml 2N Na₂CO₃溶液(5.22mmol)。用氩气将溶液脱气，随后加入55mg四(三苯基膦)钯(50μmol)。将所述管在110℃下在Biotage微波机中加热30分钟。将介质倾入水中并过滤，得到330mg 1-乙基-3-[4-(6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基)苯基]脲。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝444；Tr＝3.70分钟

步骤10.7：(其对应于步骤p))

1-乙基-3-[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基)苯基]脲

将0.292g(0.66mmol)步骤10.6中所述的化合物和0.65g六水合单过氧邻苯二甲酸镁(1.32mmol)置于20ml 2/1乙腈/EtOH混合物中。在室温搅拌4小时后，蒸除溶剂。将残余物吸收在水中。滤出所获得的产物并用水冲洗两次，得到0.25g 1-乙基-3-[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基)苯基]脲。

LC/MS(方法F):M+H⁺＝476；Tr＝3.34分钟

步骤10.8：(其对应于步骤q))

1-乙基-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基]苯基}脲

将410mg(0.26mmol)步骤10.7中所述的化合物置于20ml微波管中的7ml DMSO中。相继加入118mg 8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸化物(0.79mmol)和0.22ml三乙胺(1.58mmol)。将所述管在100℃下在Biotage微波机中加热1小时30分钟。将介质倾入水中并用乙酸乙酯萃取两次。合并有机相，用盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤并蒸发。用含10％氨水的MeOH/DCM的梯度，在硅胶上对残余物进行层析，得到48mg 1-乙基-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-10-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环辛烯-4-基]苯基}脲。

LC/MS(方法A):M+H⁺＝509；Tr＝0.96分钟

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.60(m,1H)；7.36(m,4H)；6.13(t,1H)；4.39-3.92(m,5H)；3.72-3.62(m,2H)；3.14-3.03(m,5H)；2.93(m,1H)；1.81-1.61(m,5H)；1.1-1.03(m,9H)；0.93(m,3H)

实施例11：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-3-氟苯基}-3-甲基脲的合成

步骤11.1：(其对应于步骤c))

[4-(6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-3-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯

将1.77g(5.85mmol)4-氯-6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮、2.27g(6.73mmol)[3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯和14.63ml 2M Na₂CO₃在35ml二噁烷中的溶液一起混合，随后用氩气脱气5次。加入339mg(293μmol)四(三苯基膦)钯(0)并用氩气将混合物再脱气3次，然后在90℃下加热2小时30分钟。使所得混合物冷却。将其倾入水中。滤出产物，用水洗涤，溶于DCM中，干燥并浓缩。将其吸收在Et₂O中，并将搅拌混合物，过滤并干燥。回收2.94g[4-(6-乙基-8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-3-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝477；Tr＝2.60分钟

步骤11.2：(其对应于步骤d))

[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-3-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯

将2.79g(5.85mmol)步骤11.1中所述的化合物混悬在30ml乙腈和10ml EtOH中，随后加入7.23g六水合单过氧邻苯二甲酸镁(11.70mmol)。将混合物在60℃下搅拌2小时，然后在室温搅拌过夜。加入1当量六水合单过氧邻苯二甲酸镁。将混合物在60℃下加热2小时。使其冷却，用水稀释，搅拌10分钟，然后过滤。用水洗涤产物，溶于DCM中，干燥并浓缩，得到3.05g[4-(6-乙基-2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基)-3-氟苯基]氨基甲酸叔丁酯。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝509；Tr＝2.20分钟

步骤11.3：(其对应于步骤e))

{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-3-氟苯基}氨基甲酸叔丁酯

在氩气下，向混悬在5ml无水二噁烷中的1.02g(2.0mmol)步骤11.2中所述的化合物中加入2.02g(20mmol)(S)-3-甲基吗啉，随后在95℃下加热3小时。使混合物冷却并将其部分浓缩，加入水，然后过滤所得混合物。将残余物吸收在DCM中且将溶液干燥并浓缩。所获得的固体(1g)未经纯化即用于随后的步骤中。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝530；Tr＝2.64分钟

步骤11.4：(其对应于步骤l))

4-(4-氨基-2-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将步骤11.3中所述的化合物混悬在5ml DCM和500μL水中。加入10ml TFA。将混合物在室温反应2小时。将所得混合物浓缩，吸收在DCM/水混合物中并用K₂CO₃碱化。通过沉降(settling)分离各相且干燥有机相并浓缩。将固体吸收在Et₂O中。将产物搅拌，滤出并风干(air-dried)，得到690mg4-(4-氨基-2-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝430；Tr＝2.04分钟

步骤11.5：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-3-氟苯基}-3-甲基脲

在氩气下，将200mg(466μmol)步骤11.4中所述的化合物混悬在5ml无水二噁烷中。将混合物加热至溶解混悬液。使所得混合物冷却并加入123μl(699μmol)DIEA，随后加入368μl(699μmol)1.9M光气在甲苯中的溶液，此后将混合物在50℃下加热30分钟。使其冷却并加入1.63ml 2M甲胺的THF溶液(3.26mmol)。使所得混合物反应过夜。将其倾入水中并过滤。将产物溶于DCM中，以Na₂SO₄干燥，然后在减压下浓缩。将所得产物吸收在Et₂O中，滤出并干燥，得到191mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-3-氟苯基}-3-甲基脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝487；Tr＝0.64分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.95(s,1H)；7.49(d,1H)；7.45(d,1H)；7.05(d,1H)；6.17(s,1H)；4.63(s,1H)；4.29(d,1H)；3.90(dd,1H)；3.70(d,1H)；3.57(dd,1H)；3.52(s,2H)；3.36-3.50(bs,3H)；3.18(bs,1H)；2.65(d,3H)；1.35(d,6H)；1.21(d,3H)；1.08(t,3H)

实施例12：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-3-氟苯基}-3-吡啶-4-基脲的合成(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

在氩气下，将150mg(394μmol)4-(4-氨基-2-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮混悬在4ml无水二噁烷中。加入92μl(524μmol)DIEA，随后加入276μl1.9M光气在甲苯中的溶液，此后将混合物在50℃下加热30分钟。使所得混合物冷却，随后加入202mg(2.10mmol)溶于2ml无水DMF中的4-氨基吡啶。使所得混合物反应3小时。将其倾入水中，搅拌，过滤并用水洗涤。将产物溶于DCM中，以Na₂SO₄干燥，然后在减压下浓缩。将其吸收在Et₂O中，且将混合物搅拌并过滤。将产物溶于5ml具有少量MeOH的DCM中，加入20ml乙酸乙酯。将产物置于冰箱中，然后滤出固体，得到146mg1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-3-氟苯基}-3-吡啶-4-基脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝550；Tr＝0.57分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 9.30(s,2H)；8.38(d,2H)；7.57(t,1H)；7.48(dd,1H)；7.45(d,2H)；7.17(dd,1H)；4.64(s,1H)；4.30(d,1H)；3.91(dd,1H)；3.71(d,1H)；3.58(dd,1H)；3.54(s,2H)；3.39-3.53(m,3H)；3.19(dt,1H)；1.36(d,6H)；1.22(d,3H)；1.09(t,3H)

实施例13：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]脲的合成(其对应于步骤m)(步骤m2-1)和m2-2))

将136.5mg(460μmol)三光气溶于2ml DCM中。以一份加入90.7mg(460μmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基胺和389μl(2.76mmol)三乙胺在3mlDCM中的混合物。将所得混合物在室温搅拌30分钟。加入100mg(226.5μmol)4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。使所得混合物在室温反应15小时。将反应混合物稀释于50ml DCM中并用20ml饱和的NaHCO₃溶液洗涤有机相两次。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并蒸发。用(0/100v/v)直至(10/90v/v)的MeOH/DCM混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到75mg白色粉末。先后用2ml MeOH和2ml乙酸乙酯再次洗涤所获得的粉末。干燥所得产物。回收68mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝659；Tr＝0.53分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.91(1H)；8.67(s,1H)；8.19(t,1H)；7.42(d,1H)；7.30(t,3H)；6.91(d,2H)；4.43(s,2H)；4.1-4.3(bs,2H)；3.70(s,2H)；3.4-3.6(bs,2H)；3.11(d,2H)；3.06(t,4H)；2.46(t,4H)；2.22(s,3H)；1.8-1.9(bs,2H)；1.6-1.7(bs,2H)；1.36(s,6H)；1.17(t,3H)

实施例14：

1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-乙基脲的合成

步骤14.1：(式化合物的制备(XI))

2-甲基-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丙-2-醇

将2.75g 1-氨基-2-甲基丙-2-醇溶于20ml MeOH中。在惰性气氛下逐滴加入1.71ml冰乙酸。加入2g在10ml MeOH中的四氢吡喃-4-酮，将混合物在室温搅拌30分钟并加入1.98g氰基硼氢化钠。将所得混合物在惰性气氛下搅拌15小时。将反应介质倾入饱和的NaHCO₃水溶液(100ml)中。将所得混合物搅拌30分钟，然后用100ml DCM萃取4次。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤且在不加热下蒸发(evaporated without heating)。蒸出含在水相中的MeOH并重复萃取、过滤和蒸发操作3次。总共回收2.8g 2-甲基-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丙-2-醇。

步骤14.2(其对应于步骤a))

4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酸(2-羟基-2-甲基丙基)(四氢吡喃-4-基)酰胺

根据步骤1.2中所述的操作，以4,6-二氯-2-甲基硫基嘧啶-5-甲酰氯和步骤14.1中所述的化合物起始，制备本化合物。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝395；Tr＝2.13分钟

步骤14.3：(其对应于步骤b))

4-氯-8,8-二甲基-2-甲基硫基-6-(四氢吡喃-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

根据步骤1.3中所述的操作，以步骤14.2中所述的化合物起始，制备本化合物。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝360；Tr＝1.90分钟

步骤14.4：(其对应于步骤c))

{4-[8,8-二甲基-2-甲基硫基-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸叔丁酯

根据步骤1.4中所述的操作，以步骤14.3中所述的化合物和[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯起始，制备本化合物。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝515；Tr＝2.44分钟

步骤14.5：(其对应于步骤d))

{4-[2-甲磺酰基-8,8-二甲基-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸叔丁酯

根据步骤1.5中所述的操作，以步骤14.4中所述的化合物起始，制备本化合物。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝547；Tr＝2.03分钟

步骤14.6：(其对应于步骤e))

{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸叔丁酯

根据步骤1.6中所述的操作，以步骤14.5中所述的化合物和8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷起始，制备本化合物。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝580；Tr＝2.43分钟

步骤14.7：(其对应于步骤l))

4-(4-氨基苯基)-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-6-(四氢吡喃-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

根据步骤1.7所述的操作，以步骤14.6中所述的化合物起始，制备本化合物。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝480；Tr＝1.74分钟

步骤14.8：(其对应于步骤m)(步骤m3-1))

{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸苯基酯

将200mg(417μmol)步骤14.7中所述的化合物混悬在THF中，加入152μl(917.5μmol)DIEA，随后加入66mg(417μmol)氯甲酸苯基酯。将混合物在室温搅拌10分钟。滤出固体，用MeOH冲洗并干燥。回收171mg{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸苯基酯。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝600；Tr＝2.40分钟

步骤14.9：(其对应于步骤m)(步骤m3-2))

1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-乙基脲

将100mg(166.8μmol)混悬在2ml DMF中的步骤14.8中所述的化合物置于微波反应器中，并加入1ml 2M乙胺(2.0mmol)在THF中的溶液。将混合物在100℃下在Biotage微波机中加热1小时。蒸除溶剂和过量的乙胺。用(0/100v/v)直至(5/95v/v)的MeOH/DCM混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到66mg 1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-乙基脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝551；Tr＝0.61分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.61(s,1H)；7.38(dd,4H)；6.14(t,1H)；4.41(m,4H)；4.0-4.3(bs,1H)；3.95(dd,2H)；3.61(s,2H)；3.38(t,2H)；3.09-3.14(m,4H)；1.85-1.94(m,2H)；1.78-1.84(m,2H)；1.60-1.70(m,4H)；1.34(s,6H)；1.07(t,3H)

实施例15：(其对应于步骤m)(步骤m3-2))

1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲的合成

将50mg(83.38μmol){4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸苯基酯置于微波反应器中并加入25mg(0.25mmol)5-甲基异噁唑-3-基胺。加入2ml DMF和1ml THF。将反应混合物在100℃下在Biotage微波机中加热30分钟。加入100mg(1.0mmol)5-甲基异噁唑-3-基胺并将混合物在110℃下加热2小时。再加入300mg(3mmol)5-甲基异噁唑-3-基胺并将混合物在110℃下加热2小时。蒸除溶剂。将残余物吸收在水中并滤出不溶性物质(material)，用水洗涤三次，吸收在MeOH/DCM中并干燥。用(0/100v/v)直至(5/95v/v)的MeOH/DCM混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到6mg 1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝604；Tr＝0.68分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 9.52(s,1H)；9.03(s,1H)；7.44(dd,4H)；6.55(s,1H)；4.41(m,4H)；4.0-4.3(bs,1H)；3.95(dd,2H)；3.61(s,2H)；3.38(t,2H)；3.11(d,2H)；2.36(s,3H)；1.85-1.94(m,2H)；1.78-1.84(m,2H)；1.60-1.70(m,4H)；1.36(s,6H)

实施例16：(其对应于步骤m)(步骤m3-2))

1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)脲的合成

将50mg(83.4μmol){4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}氨基甲酸苯基酯置于微波反应器中并加入25mg(26μmol)1-甲基-1H-吡唑-3-基胺。加入1ml DMF和2ml THF。将反应器在100℃下在Biotage微波机中加热30分钟。加入100mg(100μmol)1-甲基-1H-吡唑-3-基胺并将混合物在110℃下加热2小时。蒸除溶剂。用(0/100v/v)直至(5/95v/v)的MeOH/DCM混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到固体，然后将其用水洗涤并干燥。回收23mg 1-{4-[8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-6-(四氢吡喃-4-基)-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝603；Tr＝0.63分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 9.12(s,1H)；8.93(s,1H)；7.54(s,1H)；7.44(dd,4H)；6.24(s,1H)；4.41(m,4H)；4.0-4.3(bs,1H)；3.95(dd,2H)；3.74(s,3H)；3.61(s,2H)；3.38(t,2H)；3.11(d,2H)；1.85-1.94(m,2H)；1.78-1.84(m,2H)；1.60-1.70(m,4H)；1.36(s,6H)

实施例17：

1-乙基-3-{5-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]吡啶-2-基}脲的合成

步骤17.1：(其对应于步骤k))

4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将170mg(353.83μmol)三氟甲磺酸6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基酯和90.16mg(389.21μmol)5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基胺溶于微波管中的3ml二噁烷中。加入150.21mg(707.66μmol)磷酸三钾和1ml水。用氩气吹扫溶液。最后，加入24.84mg(35.38μmol)二(三苯基膦)氯化钯(II)并将混合物在100℃下在Biotage微波机中加热15分钟。将反应混合物稀释于乙酸乙酯中并先后用水及饱和的NaCl溶液洗涤。滤出有机相中存在的沉淀物，得到120mg 4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δppm 8.08(d,1H)；7.58(dd,1H)；6.37-6.45(m,3H)；6.37-6.45(m,3H)；4.06-4.46(bs,4H)；(bs,4H)；3.42-3.68(bs,4H)；3.03-3.13(bs,2H)；1.73-1.86(bs,2H)；1.60-1.69(bs,2H)；1.33(bs,6H)；1.14(t,3H)

步骤17.2：(其对应于步骤m)(步骤m3-1)和m3-2))

1-乙基-3-{5-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]吡啶-2-基}脲

将100mg(235.57μmol)步骤17.1中所述的化合物、30.52μl(235.57μmol)氯甲酸苯基酯和90.52μl(518.26μmol)DIEA置于微波管中的2.5mlTHF中。将所得混合物在室温搅拌30分钟。在THF中加入235.57μl(471.15μmol)2N乙胺并将混合物在100℃下在Biotage微波机中加热1小时。减压蒸发反应介质。用(100/0v/v)直至(95/5v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到56mg 1-乙基-3-{5-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]吡啶-2-基}脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝496；Tr＝0.59分钟

¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)ppm 9.39(s,1H)；8.34(d,1H)；7.92(bs,1H)；7.79(dd,1H)；7.41(d,1H)；4.05-4.46(bs,4H)；3.69(bs,2H)；3.51(bs,2H)；3.20(m,2H)；3.10(bs,2H)；1.82(bs,2H)；1.65(bs,2H)；1.35(bs,6H)；1.05-1.18(m,6H)

实施例18：(其对应于步骤m)(步骤m4-1)和m4-2))

1-(3-二氟甲氧基苯基)-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲的合成

将96.84mg 3-二氟甲氧基苯基胺(590.31μmol)、206.20μl DIEA(1.18mmol)和30.81μl氯甲酸苯基酯(237.83μmol)加入到在微波管中的4ml THF中。将混合物在室温搅拌20分钟。加入250mg 4-(4-氨基苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮(590.31μmol)并将所得混合物在120℃下在Biotage微波机中加热1小时。减压蒸发反应介质。用(100/0v/v)直至(98/2v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到180mg 1-(3-二氟甲氧基苯基)-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝609；Tr＝0.81分钟

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δppm 9.23(bs,2H)；7.44-7.52(bs,5H)；7.27-7.36(m,1H)；6.92-7.25(m,2H)；6.73-6.81(m,1H)；4.41(bs,2H)；3.95-4.36(bs,2H)；3.67(s,2H)；3.37-3.63(bs,2H)；3.10(m,2H)；1.82(bs,2H)；1.65(bs,2H)；1.35(bs,6H)；1.15(t,3H)

实施例19：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-(2,4-二氟苯基)-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲的合成

向350.35mg(1.18mmol)三光气在6ml DCM中的溶液中以单份加入500mg(1.18mmol)4-(4-氨基苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和987.33μl(7.08mmol)三乙胺在6ml DCM中的混悬液。将所得混合物在室温搅拌20分钟。加入607.12μl(5.90mmol)2,4-二氟苯胺。滤出所获得的沉淀物，用MeOH冲洗两次并在减压下干燥，得到575mg 1-(2,4-二氟苯基)-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝579；Tr＝0.80分钟

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δppm 9.22(bs,1H)；8.56(bs,1H)；8.08(dt,1H)；7.42-7.52(m,4H)；7.33(m,1H)；7.06(m,1H)；4.41(bs,2H)；4.11(q,2H)；3.67(bs,2H)；3.40-3.62(bs,2H)；3.10(bs,2H)；1.82(bs,2H)；1.65(bs,2H)；1.35(bs,6H)；1.15(t,3H)

实施例20：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸(S)-2-羟基丙基酯

将134.43mg(0.45mmol)三光气、200mg(0.45mmol)4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和275.04mg(2.72mmol)三乙胺在50mlDCM中的混合物在室温搅拌30分钟。加入134mg(1.81mmol)(S)-丙-1,2-二醇并将混合物在室温搅拌2小时。用水将所得混合物水解，然后减压蒸发。通过加入乙酸乙酯/水使产物沉淀。滤出产物并在真空下干燥，得到120mg{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}氨基甲酸(S)-2-羟基丙基酯。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝544；Tr＝0.64分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 9.45(bs,1H)；7.7(t,1H)；7.32(t,2H)；4.8(d,1H)；4.42(bs,2H)；4.3(m,2H)；3.95(m,2H)；3.87(m,1H)；3.7(bs,2H)；3.5(bs,2H)；3.09(bs,1H)；1.82(bs,1H)；1.66(bs,1H)；1.35(bs,6H)；1.12(t,3H)；1.1(t,3H)

实施例21：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-(4-甲氧基吡啶-2-基)-3-{4-[6,8,8-三甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲的合成

向3ml DCM中加入210mg(0.51mmol)4-(4-氨基苯基)-6,8,8-三甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和314.5mg(3mmol)三乙胺。然后在氮气下将所述混合物加入到在3ml DCM中含152.2mg(0.51mmol)三光气的溶液中。将混合物在室温搅拌30分钟，然后加入268.1mg(2mmol)2-氨基-4-甲氧基吡啶。将所述混合物在室温搅拌2小时，用DCM萃取，先后用水及饱和的NaCl溶液洗涤一次，并以Na₂SO₄干燥有机相。过滤所得相并减压蒸发滤液。用(100/0v/v)直至(100/4v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。然后将所获得固体吸收在DCM/MeOH/戊烷混合物中，滤出并干燥，得到85mg 1-(4-甲氧基吡啶-2-基)-3-{4-[6,8,8-三甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝560；Tr＝0.55分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 9.42(s,1H)；8.11(d,1H)；7.50-7.54(m,4H)；7.10(s,1H)；6.64(d,1H)；4.41(s,2H)；4.10-4.40(bs,2H)；3.81(s,3H)；3.70(s,2H)；3.07-3.13(m,5H)；1.80-1.84(m,2H)；1.62-1.68(m,2H)；1.35(s,6H)

实施例22：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-(1-甲基哌啶-4-基氧基)吡啶-3-基]脲的合成

步骤22.1：

2-(1-甲基哌啶-4-基氧基)-5-硝基吡啶

将557mg混悬于10ml THF中的NaH(14mmol)置于氮气下。将混合物冷却至0℃并逐滴加入1.5g(9.3mmol)2-氯-5-硝基吡啶和1.28g(11.1mmol)4-羟基-1-甲基哌啶在15ml THF中的溶液。使反应混合物回流4小时，水解过量的NaH后，在减压下蒸除溶剂。将残余物吸收在乙酸乙酯中并先后用水及饱和的NaCl溶液洗涤。然后将其以Na₂SO₄干燥并过滤，且减压蒸发滤液。用(100/0v/v)直至(100/4v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到1.1g 2-(1-甲基哌啶-4-基氧基)-5-硝基吡啶。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝238；Tr＝0.79分钟

步骤22.2：

6-(1-甲基哌啶-4-基氧基)吡啶-3-基胺

将1.05g步骤20.1中所获得的化合物溶于90ml MeOH中，然后在大气压、35℃下以10％Pd/C进行氢化。过滤介质，然后减压蒸发，得到860mg 6-(1-甲基哌啶-4-基氧基)吡啶-3-基胺。

步骤22.3：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-(1-甲基哌啶-4-基氧基)吡啶-3-基]脲

将130mg(0.29mmol)4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和180.6mg(1.8mmol)三乙胺置于3ml DCM中。然后在氮气下将所述混合物加入到在3ml DCM中含87.4mg(0.29mmol)三光气的溶液中。将所得混合物在室温搅拌30分钟，随后加入244.1mg(1.18mmol)步骤21.2中所述的化合物。将所得混合物在室温搅拌2小时。用DCM萃取所述混合物，先后用水及饱和的NaCl溶液洗涤，并以Na₂SO₄干燥有机相。过滤所得相并减压蒸发滤液。用(100/0v/v)直至(100/20v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。然后将所获得的固体吸收在DCM/戊烷混合物中，滤出并干燥，得到90mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-(1-甲基哌啶-4-基氧基)吡啶-3-基]脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝675；Tr＝0.53分钟

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δppm 9.03(s,1H)；8.80(d,1H)；8.15(d,1H)；8.13(t,1H)；7.84；(dd,1H)；7.40(dd,1H)；7.29(dd,1H)；6.75(d,1H)；4.89(m,1H)；4.02-4.47(m,4H)；3.68(s,2H)；3.53(bs,2H)；3.08(m,2H)；2.63(m,2H)；2.17(s,3H)；2.12(m,2H)；1.93(m,2H)；1.81(m,2H)；1.65(m,4H)；1.34(s,6H)；1.14(t,3H)

实施例23：

1-[4-(4-二甲基氨基哌啶-1-羰基)苯基]-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲的合成(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

在233μl 1.9M光气在甲苯中的溶液(442.3mmol)和75μl(442.3mmol)DIEA存在下，将130mg(316μmol)混悬在3ml二噁烷中的4-(4-氨基苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮在50℃下加热30分钟。然后加入391mg(1.58mmol)(4-氨基苯基)-(4-二甲基氨基哌啶-1-基)甲酮。将介质在室温搅拌16小时。减压蒸发混合物并将残余物吸收在水中并用DCM萃取。用水洗涤有机相两次，以MgSO₄干燥，然后过滤。减压蒸发滤液，然后用(100/0v/v)直至(93/7v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。将所获得的产物溶于最小量的DCM中，然后从Et₂O中再沉淀，得到61mg1-[4-(4-二甲基氨基哌啶-1-羰基)苯基]-3-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝685；Tr＝0.52分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.94(s,2H)；7.51(d,2H)；7.48(m,4H)；7.34(d,2H)；4.66(m,1H)；4.35(m,2H)；3.91(m,1H)；3.71(m,1H)；3.67(m,2H)；3.57(m,1H)；3.52(m,2H)；3.42(m,1H)；3.19(m,1H)；2.89(bs,2H)；2.32(m,1H)；2.18(s,6H)；1.75(m,2H)；1.33(m,8H)；1.22(m,3H)；1.16(t,3H)

实施例24：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-(2-羟基-2-甲基丙基)脲的合成

在179μl 1.9M光气(339.75μmol)在甲苯中的溶液和58μl(339.5μmol)DIEA存在下，将100mg(226.5μmol)混悬在2ml二噁烷中的4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮在50℃下加热30分钟。然后加入101mg(1.13mmol)溶于1ml二噁烷中的2-羟基-2-甲基丙基胺。将反应介质在室温搅拌16小时，然后用水稀释。滤出所形成的沉淀物并先后用水和乙醚(ether)洗涤。将所获得的固体溶于最小量的DCM中，然后从乙醚中再沉淀，得到66mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-(2-羟基-2-甲基丙基)脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝557；Tr＝0.62分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.66(s,1H)；8.16(t,1H)；7.35(d,1H)；7.23(d,1H)；6.80(t,1H)；4.49(m,1H)；4.41(m,2H)；4.2(bs,2H)；3.66(m,2H)；3.52(bs,2H)；3.09(m,2H)；3.05(m,2H)；1.81(m,2H)；1.65(m,2H)；1.34(s,6H)；1.14(t,3H)；1.09(s,6H)

实施例25：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(5-吡咯烷-1-基吡啶-2-基)脲的合成

步骤25.1:

2-硝基-5-吡咯烷-1-基吡啶

将600mg(2.93mmol)5-溴-2-硝基吡啶和1.05g(14.63mmol)吡咯烷的混合物在120℃下在Biotage微波机中加热1小时。将反应介质用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机相两次，以MgSO₄干燥，然后过滤。减压蒸发滤液，然后用(100/0v/v)直至(50/50v/v)的庚烷/乙酸乙酯混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到410mg 2-硝基-5-吡咯烷-1-基吡啶。

步骤25.2：

5-吡咯烷-1-基吡啶-2-基胺

在10％Pd/C存在下，将410mg(2.12mmol)步骤25.1中所获得的产物在大气压、35℃下进行氢化。减压蒸发所获得的溶液，得到321mg 5-吡咯烷-1-基吡啶-2-基胺。

步骤25.3：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(5-吡咯烷-1-基吡啶-2-基)脲

在碳酸盐介质中用DCM萃取120mg(223μmol)4-(4-氨基苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮2,2,2-三氟乙酸盐，然后在177μl 1.9M光气(334.9μmol)在甲苯中的溶液和56μl(893μmol)DIEA存在下，将所获得的游离碱在二噁烷中在50℃下加热30分钟。然后加入146mg(893μmol)步骤25.2中所获得的5-吡咯烷-1-基吡啶-2-基胺并将反应介质在室温搅拌16小时。减压蒸发介质并将残余物吸收在水中并用DCM萃取。将有机相用水洗涤两次，以MgSO₄干燥，然后过滤。减压蒸发滤液，然后用(100/0v/v)直至(95/5v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到68mg1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(5-吡咯烷-1-基吡啶-2-基)脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝613；Tr＝0.63分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm10.42(bs,1H)；9.02(bs,1H)；7.64(m,1H)；7.44(m,4H)；7.39(m,1H)；7.05(m,1H)；4.30(bs,4H)；3.66(s,2H)；3.50(bs,2H)；3.22(m,4H)；3.10(m,2H)；1.95(m,4H)；1.82(m,2H)；1.66(m,2H)；1.35(s,6H)；1.16(t,3H)

实施例26：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-甲基苯基}-3-异噁唑-3-基脲的合成

步骤26.1：(其对应于步骤k))

{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-甲基苯基}氨基甲酸叔丁酯

将1g(2.13mmol)三氟甲磺酸6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基酯、711.35mg(2.13mmol)[2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯、906.25mg(4.27mmol)磷酸三钾、149.83mg(213.47μmol)二(三苯基膦)氯化钯(II)在10ml二噁烷和3ml水中的混合物在100℃下在Biotage微波机中加热30分钟。将反应介质稀释于250ml乙酸乙酯中并经由硅藻土过滤。以MgSO₄干燥有机相。减压蒸发滤液。将残余物吸收在30ml庚烷中，使其回流并趁热过滤，得到1.24g{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-甲基苯基}氨基甲酸叔丁酯。

步骤26.2：(其对应于步骤l))

4-(4-氨基-3-甲基苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮

将1.24g(2.36mmol)步骤26.1中所述的化合物和5ml(64.90mmol)TFA在15ml DCM中的混合物在室温搅拌45分钟。减压蒸发反应介质，吸收在10％Na₂CO₃溶液中并过滤。用(100/0v/v)直至(95/5v/v)的DCM/乙酸乙酯混合物洗脱，在硅胶上通过层析对沉淀物进行纯化，得到720mg 4-(4-氨基-3-甲基苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮。

步骤26.3：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-甲基苯基}-3-异噁唑-3-基脲

在氩气下，向230mg(540.51μmol)步骤26.2中所述的化合物和452.02μl(3.24mmol)三乙胺在10ml DCM中的混合物中加入160.40mg(540.51μmol)三光气。将混合物在室温搅拌45分钟，然后加入199.67μl(2.70mmol)异噁唑-3-基胺。将所述混合物在室温搅拌过夜，然后将反应介质倾入水中。用DCM萃取所得混合物饱和的NaCl溶液洗涤。以MgSO₄干燥有机相，过滤并减压蒸发。用(100/0v/v)直至(95/5v/v)的DCM/EtOAc混合物洗脱，在硅胶上通过层析对残余物进行纯化，得到39mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-甲基苯基}-3-异噁唑-3-基脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝536；Tr＝0.70分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 10.03(s,1H)；9.34(s,1H)；9.35(s,1H)；7.94(m,1H)；7.34-7.39(m,2H)；6.83(d,1H)；4.65(s,1H)；4.30-4.35(m,1H)；3.92(dd,1H)；3.65-3.73(m,3H)；3.58(dd,1H)；3.52(m,2H)；3.40-3.44(m,1H)；3.16-3.22(m,1H)；2.26(s,3H)；1.36(s,6H)；1.22(d,3H)；1.16(t,3H)

实施例27:

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-((R)-2-羟基-1-甲基乙基)脲的合成(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

将134.43mg(0.45mmol)三光气、200mg(0.45mmol)4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和275.04mg(2.72mmol)三乙胺在50mlDCM中的混合物在室温搅拌30分钟。然后加入138.88mg(1.81mmol)(R)-2-氨基丙-1-醇并将混合物在室温搅拌2小时。用5ml水将所得混合物水解，然后在减压下蒸除溶剂。通过加入乙酸乙酯/水使产物沉淀。滤出产物并在减压下蒸除溶剂，得到68mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-((R)-2-羟基-1-甲基乙基)脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝544；Tr＝0.64分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.49(bs,1H)；8.16(t,1H)；7.35(d,1H)；7.24(d,1H)；6.70(d,1H)；3.78(t,1H)；4.42(bs,4H)；3.70(m,1H)；3.68(s,2H)；3.5(bs,2H)；3.37(m,2H)；3.1(bs,2H)；1.72(bs,2H)；1.66(bs,2H)；1.35(bs,6H)；1.15(t,3H)；1.08(d,3H)

实施例28：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(6-甲氧基吡嗪-2-基)脲的合成

步骤28.1：(式(CIII)化合物的制备)

1-(6-甲氧基吡嗪-2-基)-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲

在氮气下，将350mg(1.60mmol)4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基胺和1.35ml(9.59mmol)三乙胺在10ml DCM中的混合物加入到474.07mg(1.60mmol)三光气在30ml DCM中的溶液中。将混合物在室温搅拌30分钟，随后加入1g(7.99mmol)6-甲氧基吡嗪-2-胺。将所得混合物在室温搅拌2小时。加入水并用DCM萃取产物。以MgSO₄干燥溶液，然后过滤。减压蒸发滤液，然后用(100/0v/v)直至(96/4v/v)的DCM/MeOH的混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。在减压下蒸除溶剂。将残余物吸收在乙酸乙酯中并先后用1N盐酸溶液及饱和的NaCl溶液洗涤三次。以MgSO₄干燥所得溶液。获得167mg 1-(6-甲氧基吡嗪-2-基)-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基]脲。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝371；Tr＝2.46分钟

步骤28.2：(其对应于步骤n))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(6-甲氧基吡嗪-2-基)脲

将167mg(0.451mmol)步骤28.1中所述的化合物、216mg(0.451mmol)三氟甲磺酸6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基酯、197mg(0.902mmol)磷酸三钾和32mg(0.045mmol)二(三苯基膦)氯化钯(II)在5ml水和15ml二噁烷中的混合物在100℃下在Biotage微波机中加热20分钟。减压蒸发反应混合物，然后用(100/0v/v)直至(96/4v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。将产物吸收在EtOH中，然后经由Millipore滤器过滤，得到85mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]苯基}-3-(6-甲氧基吡嗪-2-基)脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝575；Tr＝0.70分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 9.47(s,1H)9.37(s,1H)；8.68(s,1H)；7.92(s,1H)；7.5(m,4H)；4.15-4.4(bs,4H)；3.95(s,3H)；3.65(bs,4H)；3.1(d,2H)；1.82(bs,2H)；1.65(bs,2H)；1.37(s,6H)；1.17(t,3H)

实施例29：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-((S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基]脲的合成

步骤29.1:

(S)-3-甲基-4-(5-硝基吡啶-2-基)吗啉

将1g(6.18mmol)2-氯-5-硝基吡啶和1.31g(12.36mmol)(S)-3-甲基吗啉的混合物在150℃下在Biotage微波机中加热1小时。将反应介质吸收在MeOH中，然后减压蒸发。用(100/0v/v)直至(95/5v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到1.35g(S)-3-甲基-4-(5-硝基吡啶-2-基)吗啉。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝224；Tr＝1.72分钟

步骤29.2：

6-((S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基胺

在10％Pd/C存在下，将1.35g(6mmol)步骤29.1中所获得的产物在大气压、50℃下进行氢化。减压蒸发所获得的溶液，得到1.17g 6-((S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基胺。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝194；Tr＝0.45分钟

步骤29.3：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-((S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基]脲

将150mg(0.34mmol)4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和287.20μl(2.04mmol)三乙胺置于3ml DCM中。然后在氮气下将所述混合物加入在3ml DCM中含100mg(0.34mmol)三光气的溶液中。将所得混合物在室温搅拌30分钟，随后加入262.62mg(1.36mmol)步骤29.2中所述的化合物。将所述混合物在室温搅拌2小时，然后用DCM萃取。用水及饱和的NaCl溶液洗涤有机相一次。以Na₂SO₄干燥有机相，过滤并减压蒸发。用(100/0v/v)直至(98/2v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。然后用EtOH洗涤所获得的固体两次并吸收在乙酸乙酯/戊烷混合物(10/90)中，过滤并干燥，得到72mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-((S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基]脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝661；Tr＝0.59分钟

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δppm 8.9(s,1H)；8.73(s,1H)；8.15(m,2H)；7.72(dd,1H)；7.4(d,1H)；7.28(d,1H)；6.75(d,1H)；4.4(bs,4H)；4.25(m,1H)；3.92(dd,1H)；3.68(m,5H)；3.5(dt,3H)；3.1(m,2H)；3.02(m,1H)；1.82(bs,2H)；1.65(bs,2H)；1.35(s,6H)；1.15(t,4H)；1.08(d,3H)

实施例30：

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-((R)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基]脲的合成

步骤30.1：

(R)-3-甲基-4-(5-硝基吡啶-2-基)吗啉

将1g(6.18mmol)2-氯-5-硝基吡啶和1.31g(12.36mmol)(R)-3-甲基吗啉的混合物在150℃下在Biotage微波机中加热1小时。将反应介质吸收在MeOH中，然后减压蒸发。用(100/0v/v)直至(95/5v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析，得到1.07g(R)-3-甲基-4-(5-硝基-吡啶-2-基)-吗啉。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝224；Tr＝1.72分钟

步骤30.2：

6-((R)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基胺

在10％Pd/C存在下，将1.07g(4.79mmol)步骤30.1中所获得的产物在大气压、45℃下进行氢化。减压蒸发所获得的溶液，得到840mg6-((R)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基胺。

LC/MS(方法E):M+H⁺＝194；Tr＝0.45分钟

步骤30.3：(其对应于步骤m)(步骤m1-1)和m1-2))

1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-((R)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基]脲

将200mg(453μmol)4-(4-氨基-3-氟苯基)-6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-7,8-二氢-6H-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-5-酮和287.20μl(2.72mmol)三乙胺置于3ml DCM中。然后在氮气下将所述混合物加入到在3ml DCM中含134mg(453μmol)三光气的溶液中。将所得混合物在室温搅拌30分钟，随后加入350.16mg(1.81mmol)步骤30.2中所获得的化合物中。将所得混合物在室温搅拌2小时。将产物吸收在DCM中并先后用水及饱和的NaCl溶液洗涤。以Na₂SO₄干燥有机相。过滤所得相并减压蒸发滤液。用(100/0v/v)直至(98/2v/v)的DCM/MeOH混合物洗脱，在硅胶上对残余物进行层析。然后用EtOH洗涤所获得的固体两次并吸收在乙酸乙酯/戊烷混合物(10/90)中，过滤并以MgSO₄干燥，得到40mg 1-{4-[6-乙基-8,8-二甲基-2-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-5-氧代-5,6,7,8-四氢-9-氧杂-1,3,6-三氮杂苯并环庚烯-4-基]-2-氟苯基}-3-[6-((R)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶-3-基]脲。

LC/MS(方法C):M+H⁺＝661；Tr＝0.59分钟

下表3举例说明许多本发明化合物的化学结构和物理性质。

表3：许多本发明化合物的实例的化学结构和物理性质。

[治疗应用]

对本发明化合物进行药理学试验以测定其对mTOR的抑制效应以及对两种复合物mTORC1和mTORC2的效应。

所述试验由测量本发明化合物对mTOR和对PI3Kα、Akt-pS473以及对U87MG细胞增殖的体外活性组成。通过抑制50％的mTOR、PI3Kα、Akt-pS473的活性或U87MG细胞增殖的浓度来给出抑制活性。

模型1：通过TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移(time-resolvedfluorescence resonance energy transfer))的mTOR酶测试。

所述测试使用对磷酸-Thr46表位(phospho-Thr46 epitope)具有特异性的铽标记抗体(terbium-labelled antibody)检测底物GFP-4EBP1的磷酸化。Tb-抗体与磷酸化GFP表位的结合使得能量从Tb转移至GFP，其在340nm下激发，GFP在520nm下的荧光发射增加。所述测试在96孔格式(Corning/Costar 96黑色平底半孔板，ref.3694)在30μl总体积中实施。向1μl在100％DMSO中的抑制剂中加入在缓冲液(HEPES 50mM pH 7.5、EGTA 1mM、MnCl₂10mM、BSA 0.1mg/ml、甘油0.5％、NV-100.1mg/ml、DTT 2mM)中的(终浓度)400nM GFP-4EBP1(Invitrogen PV4759)、8μM ATP、200ng/ml酶(人重组aa mTOR 1360-2549,Invitrogen PV4753)。将混合物在室温孵育30分钟。获取10μl溶液并通过加入10μlTb-抗体溶液(InvitrogenPV4757)/EDTA(最终为2nM Tb-Ac和10mM EDTA)淬灭反应。在室温60分钟后，在装配有LanthascreenTM滤光器(filter)的BMG PHERAstar读数器(reader)(在340nm下激发，在490和520nm下发射)中测量来自Tb激发的490nm处和来自GFP发射的520nm处的荧光。结果以520/490比率的形式给出。

通过以至少10000的比例制备连续三倍稀释液来测定IC50值。

模型2：通过测量ATP消耗的PI3Kα酶测试。

所述测试使用荧光素/荧光素酶(lucifeurerin/luciferase)系统测量酶反应期间ATP的浓度及其消耗。所述测试在96孔格式(Corning/Costar 96黑色平底半孔板，ref.3694)在30μl总体积中实施。

向1μl在100％DMSO中的抑制剂中加入在缓冲液(Tris/HCl 50mM pH7.5、EGTA 1mM、MgCl₂10mM、Chaps 0.03％、1mM DTT)中的(终浓度)50μM底物PIP2((L-α-磷脂酰基-D-肌醇4,5-二磷酸酯，Echelon117P-4516-0500)、2μM ATP和1.7μg/ml PI3Kα(p110α/p85α,InvitrogenPV4788))。90分钟后，通过加入20μl/孔的KinaseGlo试剂(Promega V6713)淬灭反应。在暗处10分钟后，在PHERAStar微量板读数器(microplate reader)上读取发光(以0.8sec/孔进行读取)。

通过以至少10 000的比例制备连续三倍稀释液来测定IC50值。

模型3：经由ELISA测试对U87MG细胞系的Akt蛋白的表位S473磷酸化的细胞测试

原理

以细胞裂解物(cell lysate)起始，经由夹心式ELISA测试(ELISA sandwichtest)使用抗-AKT摄取抗体和抗-AKT磷酸丝氨酸-473检测抗体测量AKT激酶的丝氨酸-473的磷酸化。通过钌标记的抗兔抗体来生成电化学发光信号(electrochemiluminescence signal)

细胞测试

将细胞以12x10⁴细胞/孔/100μl培养基[90％of DMEM 4.5g/l葡萄糖和L-谷氨酰胺(Gibco 41965)、10％热灭活的胎牛血清、1mM丙酮酸钠(Gibco11360-039)、青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin)(10 000IU-10mg/ml,Gibco 15140-023,稀释200倍(dil.200x))和非必需氨基酸(Gibco 11140-035,稀释100倍(dil.100x))]接种在I型胶原涂覆的96孔培养板(Becton Dickinso n356407)中。在37℃和5％CO₂下孵育16-20小时(细胞100％铺满(confluence))后，加入在100％DMSO中的1μl化合物(细胞上的DMSO终浓度为1％)。将细胞与化合物在37℃、5％CO₂下孵育3小时。

加入90μl裂解缓冲液[Hepes 50mM(Sigma H-0887)、NaCl 150mM,Triton X-1001％、蛋白酶抑制剂混合剂(cocktail)(Complete Mini:Roche11836 153 001,即时加入物(extemporaneous addition))、磷酸酶抑制剂混合剂(Sigma P5726和P0044，即时加入)、AEBSF盐酸化物2μM(Calbiochem101500)、NaF 10mM(Fluka 67414)]后，在搅动下将混合物在冰上孵育1小时。

ELISA板的制备

在室温用抗-山羊Akt抗体(Santa Cruz sc1618g，无明胶，无BSA，2mg/ml，在HEPES 50mM pH 7.2、0.0075％Triton X-100的缓冲液中稀释30-40倍)以2.5μl/孔涂覆标准96孔板(MSD L11XA-6)过夜。在室温用150μl/孔的缓冲液(50mM Tris pH 7.5、0.15M NaCl、0.02％Tween 20、3％BSA)在450rpm的搅拌下阻断自由位点(free sites)1小时，随后用3×300μl缓冲液(50mMTris pH 7.5、0.15M NaCl、0.02％Tween 20)进行洗涤步骤。

ELISA

将15μl细胞裂解物与15μl 50mM缓冲液(Tris pH 7.5、0.15M NaCl、0.02％Tween 20、1％BSA)在预涂覆ELISA板(参见上文)中混合，并在室温、搅拌下孵育1小时，随后用3×300μl缓冲液(50mM Tris pH 7.5、0.15M NaCl、0.02％Tween 20)进行洗涤步骤。用在50mM Tris pH 7.5、0.15M NaCl、0.02％Tween 20、1％BSA中稀释100倍的25μl/孔的兔多克隆抗体(Cell Signaling,SC9271)检测Akt的pS473表位(在室温、450rpm搅拌下孵育1小时)。

洗涤(参见上文)后，用在50mM缓冲液(Tris pH 7.5、0.15M NaCl、0.02％Tween 20、1％BSA)中稀释3000倍的25μl/孔的钌标记的抗兔抗体(MSDR32AB1)实施验证，随后在室温、450rpm搅拌下孵育1小时，并用铝覆盖所述板。

再一次洗涤步骤后，板被清空并加入150μl用水稀释四倍的MSD读数器缓冲液T。在MSD SectorImager 6000上测量化学发光信号。

模型4：U87MG肿瘤细胞的体外增殖的测试。

将U87MG肿瘤细胞与化合物在37℃、5％CO₂下孵育72小时。用来自Promega的试剂CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay(Cat.No.G3581)测定细胞生长。

以2500个细胞/孔/100μl培养基[90％DMEM 4.5g/l葡萄糖和L-谷氨酰胺(Gibco 41965)、10％热灭活的胎牛血清、1mM丙酮酸钠(Gibco 11360-039)、青霉素-链霉素(10 000 IU-10mg/ml,Gibco 15140-023,稀释200倍)和非必需氨基酸(Gibco 11140-035,稀释100倍)]在I型胶原涂覆的透明96孔培养板(BD Biosciences Cat No.356407)中实施接种。

附着(adhesion)过夜后，加入1μl在100％DMSO中的化合物(1％DMSO终浓度)。在37℃、5％CO₂下72小时后，每孔加入20μl来自Promega的试剂CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay(Cat.No.G3581)。将混合物在37℃、5％CO₂下孵育1小时30分钟，然后在490nm下读取吸光度(例如在来自Wallac/Perkin-Elmer的Victor读数器上)。读取在T＝0(在72小时孵育前)时的读数，其对应于100％抑制。

药理学数据在下表4中给出：

表4：许多本发明化合物的实例的药理学数据(NT意指未测试)

因此，本发明的化合物似乎对激酶mTOR具有选择性抑制活性。

本发明的化合物由此可用于制备药物，具体地用于制备抑制mTOR的药物。

本发明的主题还在于本发明的化合物在治疗需要抑制激酶mTOR的疾病中的用途。

根据另一方面，本发明的主题更具体地是如上所定义的化合物在制备用于治疗或预防以下疾病的药物中的用途：

-癌症，尤其是：

-恶性血液肿瘤(malignant haematological tumour)，例如白血病(leukaemia)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、淋巴瘤(lymphomas)例如霍奇金病(Hodgkin's disease)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphomas)(其包括套细胞淋巴瘤(mantle-cell lymphoma))和骨髓增生异常性综合征(myelodysplastic syndromes)，

-实体肿瘤及其转移，例如乳腺癌和肺癌(非小细胞肺癌，NSCL；小细胞肺癌，SCLC)、鳞状细胞癌瘤(squamous cell carcinoma)和子宫内膜癌，

-中枢神经系统肿瘤，例如神经胶质瘤(gliomas)、神经-胚胎发育不良性肿瘤(neuro-dysembryoplastic tumours)、多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme)、混合性神经胶质瘤(mixed gliomas)、成神经管细胞瘤(medulloblastoma)、视网膜成神经细胞瘤(retinoblastoma)、成神经细胞瘤(neuroblastoma)、生殖细胞瘤(germinoma)和畸胎瘤(teratoma)，

-胃肠道癌，例如胃癌(stomach cancer)、食管癌(oesophageal cancer)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)(肝癌)、胆管癌(cholangiocarcinomas)、肠和结肠癌瘤(bowel and rectal carcinomas)、肠癌(bowel cancer)和胰腺癌(pancreatic cancers)，

-皮肤癌例如黑色素瘤(具体地为转移性黑色素瘤)、甲状腺癌、头颈癌(cancers of the head and neck)、唾液腺癌、前列腺癌、睾丸癌、卵巢癌、子宫颈癌、外阴癌、膀胱癌、肾癌(其包括透明细胞肾癌瘤(clear-cell renalcarcinoma)和肾嗜酸细胞瘤(renal oncocytoma))、鳞状细胞癌瘤、肉瘤(sarcomas)例如骨肉瘤(osteosarcoma)、软骨肉瘤(chondrosarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、软组织肉瘤(soft-tissue sarcomas)、尤因肉瘤(Ewing'ssarcomas)、胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumours,GIST)、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)，以及儿科癌症(paediatric cancers)例如横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcomas)和成神经细胞瘤，

-炎性和免疫性疾病，例如类风湿性关节炎，

-糖尿病，

-肥胖症，

-呼吸道阻塞性疾病(obstructive diseases of the respiratory pathways)，

-纤维化(fibroses)(其包括肺、肾和肝纤维化)，

-庞培病(柯里II型糖原贮积病(Cori's type II glycogenosis))，

-心血管疾病，或

-年龄相关性疾病例如神经变性疾病(其包括阿尔茨海默病、亨廷顿病和帕金森病)、听力丧失(loss of hearing)和眼部疾病(ocular diseases)，其包括年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)，

-癫痫，

-寄生虫疾病。

因此，根据其另一方面，本发明的主题为包括式(I)化合物或其可药用酸加成盐的药物。

这些药物可用于治疗中，尤其是治疗或预防以下疾病：

-癌症，尤其是：

-恶性血液肿瘤，例如白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤例如霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(其包括套细胞淋巴瘤)和骨髓增生异常性综合征，

-实体肿瘤及其转移，例如乳腺癌和肺癌(非小细胞肺癌，NSCL；小细胞肺癌，SCLC)、鳞状细胞癌瘤和子宫内膜癌，

-中枢神经系统肿瘤，例如神经胶质瘤、神经-胚胎发育不良性肿瘤、多形性成胶质细胞瘤、混合性神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、视网膜成神经细胞瘤、成神经细胞瘤、生殖细胞瘤和畸胎瘤，

-胃肠道癌，例如胃癌、食管癌、肝细胞癌瘤(肝癌)、胆管癌、肠和结肠癌瘤、肠癌和胰腺癌，

-皮肤癌例如黑色素瘤(具体地为转移性黑色素瘤)、甲状腺癌、头颈癌、唾液腺癌、前列腺癌、睾丸癌、卵巢癌、子宫颈癌、外阴癌、膀胱癌、肾癌(其包括透明细胞肾癌瘤和肾嗜酸细胞瘤)、鳞状细胞癌瘤、肉瘤例如骨肉瘤、软骨肉瘤、平滑肌肉瘤、软组织肉瘤、尤因肉瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、卡波西肉瘤，以及儿科癌症例如横纹肌肉瘤和成神经细胞瘤，

-炎性和免疫性疾病，例如类风湿性关节炎，

-糖尿病，

-肥胖症，

-呼吸道阻塞性疾病，

-纤维化(其包括肺、肾和肝纤维化)，

-庞培病(柯里II型糖原贮积病)，

-心血管疾病，或

-年龄相关性疾病例如神经变性疾病(其包括阿尔茨海默病、亨廷顿病和帕金森病)、听力丧失和眼部疾病，其包括年龄相关性黄斑变性(ARMD)，

-癫痫，

-寄生虫疾病。

根据另一方面，本发明涉及包含本发明化合物作为活性成分(activeprinciple)的药物组合物。这些药物组合物含有有效剂量的至少一种本发明化合物或所述化合物的可药用盐，以及至少一种可药用赋形剂。

根据药物形式(pharmaceutical form)和期望的给药模式(mode ofadministration desired)，所述赋形剂选自本领域技术人员已知的常用赋形剂。

在用于口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、表面(topical)、局部(local)、气管内、鼻内、经皮或直肠给药的本发明药物组合物中，上述式(I)的活性成分或其盐可作为与标准药物赋形剂的混合物以单位给药形式对人和动物给药用于治疗或预防上述病症或疾病。

适当的单位给药形式包括口服途径(oral-route)形式，例如片剂、软或硬明胶胶囊、粉剂、颗粒剂和口服溶液剂或混悬剂；舌下、含服(buccal)、气管内、眼内和鼻内给药形式；吸入形式；表面、经皮、皮下、肌内或静脉内给药形式；直肠给药形式和植入(implants)。本发明化合物可用于乳膏剂(creams)、凝胶剂(gels)、润发脂(pomades)或洗剂(lotions)。

举例而言，呈片剂形式的本发明化合物的单位给药形式可包含下列成分(constituent)：

根据另一方面，本发明还涉及治疗或预防上述病状的方法，所述方法包括对患者给药有效量的本发明化合物或其可药用盐。

Claims

1.化合物，其呈碱或酸加成盐的形式，其对应于式(I)：

其中：

-R₂和R₃独立地表示：

-H或

-基团(C₁-C₆)烷基，

-R₄表示：

-H，

-基团(C₁-C₆)-烷基，任选地取代有羟基，

-基团(C₁-C₆)-烷氧基，

-基团-L₁-R₁₀，其中：

-L₁表示基团(C₁-C₆)-亚烷基，

-G₁表示二价苯基或5-或6-个原子的杂芳基，所述苯基或杂芳基任选地取代有1至4个基团R₅，所述基团R₅独立地选自：卤素原子、基团-OR₃₀和任选地取代有羟基的基团-(C₁-C₆)-烷基，

-X₁表示基团-O-或-NR₄₀-，

-R₆表示：

-H，

-基团-L₂-R₇，其中：

-L₂-表示基团(C₁-C₆)-亚烷基或(C₃-C₆)-亚环烷基，

-R₇表示选自以下的基团：

-H，

-OR₆₀，

-卤素原子，

-基团(C₁-C₆)-卤代烷基，

-基团-G₂-X₃-G₃，其中：

-X₃表示单键或基团-O-、-CO-或-CH₂-，

-或-G₂-X₃-G₃一起形成7-至10-个原子的稠合二环，

-每个基团R₈₀和每个基团R₈₁独立地选自：

-卤素原子，

-n表示0、1或2，

-m表示0或1，

-p表示0、1或2，

-R₉₀表示基团-OR₉₁或-NR₉₂R₉₃，

-R₉₁、R₉₂和R₉₃独立地表示H或基团(C₁-C₆)-烷基，

-R₁₀₀和R₁₀₁独立地选自卤素原子和羟基。

2.如权利要求1所述的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式，其选自下式(II)：

其中n、R₁、R₄、G₁、X₁、X₂和R₆如权利要求1中所定义。

3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R₄表示：

-H，

-基团(C₁-C₆)-烷基，其任选地取代有羟基，

-基团-L₁-R₁₀，其中：

-L₁表示基团(C₁-C₆)-亚烷基，

-R₁₀表示选自以下的基团：-COOR₁₁、-OR₁₃、-CONR₁₄R₁₅和任选地取代有-COOR₁₇或-CO-R₁₈的5-或6-个原子的杂环，

-5-或6-个原子的杂环，其任选地取代有基团-R₂₂，

-R₁₁、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₇、R₁₈和R₂₂如权利要求1中所定义。

4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中G₁表示二价苯基或吡啶基，所述二价苯基或吡啶基任选地取代有选自卤素原子的基团R₅。

5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中X₁表示基团-NR₄₀-，其中R₄₀如权利要求1中所定义。

6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中X₂表示-CONR₅₀-或-COO-。

7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式，其具有下式(III)：

其中：

-R₄表示基团(C₁-C₆)-烷基，

-R'₅和R″₅表示-H或-F，应当理解的是，当所述R'₅和R″₅中的一个表示-F时，则另一个表示-H，

-X₂表示-CONR₅₀-或-COO-，

-R₆表示：

-基团-L₂-R₇，其中：

-L₂-表示基团(C₁-C₆)-亚烷基或(C₃-C₆)-亚环烷基，

-R₇表示选自以下的基团：

-H，或

-OR₆₀，

-基团-G₂-X₃-G₃，其中：

-X₃表示单键或基团-O-，

-G₂表示单键或6个原子的环状二价基团，

-G₃表示4-至8-个原子的环，其任选地取代有一个或多个基团R₈₁，

-n、R₁、R₅₀、R₆₀和R₈₁如权利要求1中所定义。

8.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R₄表示甲基或乙基。

9.如权利要求7或8所述的化合物，其呈碱或酸加成盐的形式，其选自下列化合物：

10.制备如权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物的方法，其包括以下步骤m)：

其中R₁、n、m、R₂、R₃、R₄、G₁和X₁如权利要求1中所定义。

11.制备如权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物的方法，其中X₁表示-NR₄₀-且X₂表示-CONR₅₀-，所述方法包括以下步骤：

n)使式(XXXV)化合物与式R₆R₅₀N-(C＝O)-NR₄₀-G₁-R₃₀₀化合物进行Suzuki反应，获得式(I)化合物

所述式(XXXV)为：

其中n、R₁、m、R₂、R₃和R₄如权利要求1中所定义且LG₅为离去基团，

在式R₆R₅₀N-(C＝O)-NR₄₀-G₁-R₃₀₀中G₁、R₆、R₅₀和R₄₀如权利要求1中所定义且R₃₀₀为硼酸或硼酸酯基团，

在式(I)中X₁表示-NR₄₀-且X₂表示-CONR₅₀-。

12.制备如权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物的方法，其包括以下步骤q)：

所述式(CI)为：

其中n和R₁如权利要求1中所定义，

所述式(LII)为：

其中m、R₂、R₃、R₄、G₁、X₁、X₂和R₆如权利要求1中所定义。

13.药物，其特征在于其包含如权利要求1至9中任一项所述的化合物或该化合物的可药用酸加成盐。

14.药物组合物，其特征在于其包括如权利要求1至9中任一项所述的化合物、该化合物的可药用酸加成盐以及至少一种可药用赋形剂。

15.如权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物用于治疗或预防需要抑制激酶mTOR的病状。

16.如权利要求15所述的式(I)化合物用于治疗或预防以下疾病：癌症、炎性和免疫性疾病、糖尿病、肥胖症、呼吸道阻塞性疾病、纤维化、庞培病、心血管疾病、年龄相关性疾病、癫痫或寄生虫疾病。