CN104203258A - 用于治疗代谢紊乱的草药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种草药组合物，包含治疗有效量的红厚壳属(Calophylum)植物提取物作为活性组分，以及任选地药学上可接受的载体。本发明还涉及一种包含植物胡桐(Calophylum inophylum)提取物的草药组合物。本发明还涉及用于制备提取物的方法。本发明还涉及采用所述组合物治疗代谢紊乱的方法。本发明还涉及包含治疗有效量的红厚壳属植物提取物与已知的治疗活性药剂组合的组合物，用于治疗代谢紊乱。

Description

用于治疗代谢紊乱的草药组合物
技术领域
本发明涉及一种草药组合物(herbal composition)，其单独包含治疗有效量的红厚壳属(Calophylum)植物提取物作为活性组分，或者还有药学上可接受的载体。本发明的组合物用于治疗代谢紊乱(metabolic disorder)。本发明还涉及一种用于制备草药组合物的方法。
背景技术
代谢紊乱是当身体无法正常代谢碳水化合物、脂类、蛋白质或核酸时出现的紊乱或缺陷。大多数代谢紊乱是由基因突变引起，导致细胞完成代谢过程所需的酶缺失或功能失调。代谢紊乱的例子包括肥胖症、过多体脂肪、高脂血症、高脂蛋白血症、高血糖症、高胆固醇血症、高胰岛素血、胰岛素耐受、葡萄糖耐受不良和糖尿病，尤其是2型糖尿病。
糖尿病是影响个体内产生或使用胰岛素能力的代谢紊乱。对于糖尿病患者，血液葡萄糖水平高于正常。不受控的糖尿病是导致失明、肾衰竭、非创伤性截肢和不成熟的心血管死亡的主要原因。由于例如血脂异常、肥胖、高血压和葡萄糖耐受不良等风险因素，糖尿病患者也处于心血管疾病事件发生增加的危险下。
2型糖尿病患者需要定期监测血液葡萄糖水平和持续治疗，从而维持正常的或接近正常的血液葡萄糖水平。NIDDM治疗包括生活方式调节、自我保健措施和药物，它能够尽可能降低糖尿病和糖尿病相关的心血管并发症的风险。很多药物用于治疗NIDDM，包括二甲双胍、磺酰脲类如格列吡嗪、GLP拮抗剂如艾塞那肽和利拉鲁肽、噻唑烷二酮类如吡格列酮和罗格列酮、DPP-IV抑制剂(如西他列汀、沙格列汀和维达列汀)，以及α-葡糖苷酶抑制剂如阿卡波糖和米格列醇。
另一普遍的代谢紊乱是肥胖症，主要由能量摄入和消耗不平衡导致。能量的摄入和它的消耗之间的长期差距导致正能量平衡，而正能量平衡导致体重增加，最终产生肥胖症。尽管通常不是威胁生命的疾病，肥胖症正成为世界范围的主要健康问题。肥胖症增大了高血压、血脂异常、2型糖尿病、心血管疾病、睡眠窒息症、骨关节炎和一些癌症的风险。克服肥胖症的最常见方法是改变生活方式，特别是节食和锻炼。但是从长远来看，实现显著减肥和保持较低体重是困难的。此外，肥胖症也可以通过药物控制。尽管对于减轻体重和一些心血管风险因素有了不错的效果，但由于不良的副作用，目前开发的抗肥胖症药物还未批准或必须撤出市场。例如，西布曲明不再可用，奥利司他是目前唯一的抗肥胖症药物，已获批准长期使用。因此，仍需要开发用于治疗代谢紊乱，例如NIDDM和/或肥胖症的安全且有效的疗法。
为了选择和开发用于治疗代谢紊乱的新候选药物，可以采用两种新颖的靶酶，二酰基甘油酰基转移酶-1(DGAT-1)和硬酯酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)。这些酶在甘油三酸酯(体内储存能量的主要形式)的合成中起关键作用。
DGAT-1是内质膜结合酶，在最终步骤催化甘油三酸酯的生物合成，即，将甘油二酯(DAG)和脂肪酰基辅酶A(CoA)转化成甘油三酸酯。因为需要为细胞生成甘油三酸酯，其在全部细胞类型中存在酶活性。DGAT-1在肠和脂肪内高表达，在肝脏和肌肉内水平较低。在这些组织(肠、脂肪、肝和肌肉)中各自抑制DGAT-1会抑制三酰甘油合成，可能逆转人代谢性疾病的过多脂质积累的病理生理学特性(Expert Opin.Ther.Patents17(11),1331-1339,(2007))。
硬酯酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)已描述为控制脂类代谢的主要酶之一，可能代表潜在的新治疗靶点。SCD-1是从饱和脂肪酸催化单不饱和脂肪酸生物合成的限速酶。SCD-1的优选底物，硬脂酸酯(C18:0)和棕榈酸酯(C16:0)，分别转化成油酸酯(C18:1)和棕榈酰酯(palmitoyleate，C16:1)。这些单不饱和酸被认为是包括甘油三酯、胆固醇酯、磷脂质和蜡酯在内的各种脂类的主要组分。动物实验研究表明抑制或减低这些酶的活性能抵御肥胖症、糖尿病和相关并发症的发生(European Journal of Pharmacology,618,28–36,(2009)；European Journal ofPharmacology,650,663–672,(2011))。
在现代医学时代，草药材料和植物在药物发现和开发中继续发挥重要的作用。天然产物提供大量的结构多样性。有分离、结构阐释、筛选和组合合成的现代技术可用已经使得植物产品作为新型药物资源得到新生。以保健品和食品补充剂形式引入的草本植物也正在改变植物药物市场。天然产物和它们的类似物可以开发成有用的候选药物(Pharmacol.Res.,60(3):195-206,(2008)；Drug Discov.Today,13(3-4),161-71,(2009))。因为与合成的小分子相比，植物的粗品或加工产品的副作用很低或没有副作用，植物药物的需求日益增长。
红厚壳属是约180-200种的热带常青树的开花植物属。红厚壳属种包括四种子种，包括巴西红厚壳(Calophylum brasiliense)、Calophylum caledonicum、胡桐(Calophylum inophylum)和Calophylum soulatri。
胡桐是中等到大型的常青树，平均25-65英尺高，具有不规则枝条广袤的冠。它原产于东非、印度、东南亚、澳洲、南太平洋和夏威夷群岛。文献中已经报导过该植物的不同药物用途，例如，报导该植物树皮的煎煮液可用于内出血和作为无痛溃疡的洗液。此外，获自该植物坚果的油通常用作药物和化妆品。提取自胡桐种子的油用于风湿性关节炎或关节紊乱、头部丘疹、瘙痒、湿疹、眼疾和肾功能衰竭(CB研究院(Chaukhambha Bharati Academy),东方不朽著作的出版商和经销商(Publisher and distributor of monumental treatise of theeast),瓦拉纳西,印度,第二卷,787,(2003)；Chakradatta of Sri Chakrapanidatta.Dwivedy R.(编)Chaukhambha sanskrit sansthan,东方文化文学的出版商和经销商(Publishers and distributors of oriental cultural literature),瓦拉纳西,印度,第280,354和499页,(2002))。
上文已经表明，考虑到代谢紊乱如2型糖尿病和肥胖越来越流行，仍然需要用于有效治疗代谢紊乱的新组合物和方法。事实上，本发明的发明人致力于发现解决这些问题的方法，已经获得了包括属于红厚壳属诸种的植物提取物的组合物，具有DGAT-1和SCD-1抑制活性，因此对于治疗代谢紊乱是有用的。
发明概要
本发明的一个方面提供一种组合物，包含治疗有效量的属于红厚壳属诸种的植物提取物作为活性组分，以及任选地至少一种药学上可接受的载体，用于治疗代谢紊乱。
本发明的一个方面提供一种组合物，包含治疗有效量的选自巴西红厚壳、Calophylum caledonicum、胡桐或Calophylum soulatri的植物的提取物作为活性组分，以及任选地至少一种药学上可接受的载体，用于治疗代谢紊乱。
本发明的另一方面提供一种组合物，包含治疗有效量的红厚壳属诸种的植物提取物，与治疗活性剂联用，和至少一种药学上可接受的载体，用于治疗代谢紊乱。
本发明的另一方面提供一种组合物，包含治疗有效量的胡桐的植物提取物作为活性组分，以及至少一种药学上可接受的载体，用于治疗代谢紊乱。
在另一方面，本发明涉及一种用于治疗患者代谢紊乱的方法，包括给予患者组合物的步骤，所述组合物包含治疗有效量的红厚壳属诸种的植物提取物作为活性组分，以及任选地至少一种药学上可接受的载体。
本发明的另一方面提供一种用于制备组合物的方法，所述组合物包含治疗有效量的红厚壳属诸种的植物提取物。
发明详述
应理解，在描述本发明的具体实施方式之时仅通过举例的方式给出详细描述和具体实施例，因为在本发明的实质和范围内的各种不同的改变和修饰对于本领域技术人员来说是显而易见的。根据本发明的描述，本领域技术人员可以最大程度上利用本发明。以下具体实施方式应理解为仅是说明性的，不以任何方式限制披露的余留内容。
除非特别定义，本文使用的全部技术和科学术语与本领域普通技术人员常规理解的含义相同。
应注意，如在说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一种”、“一个”和“该”包括多个所指物，除非该内容清楚地表示其他含义。
术语“代谢紊乱”是指当身体无法正常代谢碳水化合物、酯类、蛋白质或核酸时发生的紊乱或缺陷。代谢紊乱包括胰岛素耐受、高血糖症、2型糖尿病、肥胖症、葡萄糖耐受不良、高胆固醇血症、血脂异常、动脉粥样硬化疾病、多囊卵巢综合症、冠状动脉疾病、代谢综合征、高血压、或与异常血浆、甘油三酯相关的相关紊乱、或与葡萄糖水平相关的紊乱如胰腺β细胞再生。
本文使用的术语“治疗的”、“治疗”或“治疗方法”包括预防(预防性)和姑息治疗。
本文使用的术语“药学上可接受的”是指用于组合物的载体、稀释剂、和/或赋形剂必须与制剂的其他组分相容，对接受者无害。
红厚壳属是约180-200种热带常青树的开花植物属。红厚壳属的种包括四种子种，包括巴西红厚壳、Calophylum caledonicum、胡桐和Calophylumsoulatri。术语“红厚壳属”是指包括全部它的同物异名物。
术语“草药组合物”或“组合物”可互换使用，可以指或单独包含治疗有效量的属于红厚壳属诸种的植物的提取物、或还可包含至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的组合物。术语“或单独”可以进一步表明组合物仅包含属于红厚壳属诸种的植物的提取物，没有加入任何药学上可接受的载体。应注意术语“组合物”应广义解释，包括意欲获得治疗效果的任何组合物，不论以药物产品出售，例如，载有标签指示所需适应症，在柜台销售，或以植物药物出售。
本文使用的术语“药学上可接受的载体”是指任何形式的无毒惰性固体、半固体、稀释剂、包封材料或制剂辅剂。可以作为药学上可接受的载体的材料的一些实施例是糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素和它的衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；麦芽；明胶和其他无毒相容润滑剂如月桂基磺酸钠和硬脂酸镁；以及着色剂；释放剂；涂层剂；甜味剂；调味剂和香料；防腐剂和抗氧化剂，也可以根据制剂师的判断用于组合物内。
本文使用的术语“治疗有效量”是指提取物(例如胡桐提取物)或包含该提取物的组合物的用量，在合理的医学判断范围内，该用量足以在待调节或治疗的情况中显著诱导正面的改进，但该用量应足够低从而避免任何副作用(合理的效益/风险比)。提取物或组合物的治疗有效量会依据所治疗的具体病症，例如2型糖尿病或肥胖症，最终用户的年龄和身体条件、所治疗/预防病症的严重程度、治疗的持续时间、同时进行的治疗的性质、所利用的具体的药学上可接受的载体等因素而有所不同。如本文所用，全部百分比是重量百分比，除非另有说明。
本文使用的术语“胡桐提取物”或“胡桐的提取物”是指存在于植物胡桐的任何部位的化合物的混合物。此类化合物可以使用现有技术中已知的提取步骤，通过实施提取步骤使用有机溶剂如低级醇如甲醇或乙醇、烷基酯如乙酸乙酯、烷基醚如二乙醚、烷基酮如丙酮、氯仿、石油醚、乙烷和/或水性溶剂如水从植物的任何部位，如植物的树皮、树枝、茎和木质部提取。也可以使用合适比例的溶剂混合物，如乙烷-乙酸乙酯(1:1)，氯仿-甲醇(1:1)或甲醇-水(3:1)提取植物物料。
本文使用的术语“对象”是指动物，特别是哺乳动物，更特别是人。
本文使用的术语“哺乳动物”是指温血脊椎动物类哺乳动物，包括人，特征在于皮肤上覆盖有毛发，以及雌性中有用于哺育小孩的产奶乳腺。术语哺乳动物包括动物如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠、猪和人类。
在实施方式中，用于制备“胡桐提取物”的方法包括使用甲醇作为溶剂。例如，可以使用甲醇作为溶剂提取植物胡桐的粉碎树皮获得提取物。
在实施方式中，可以利用不同比例的甲醇-水混合物提取植物胡桐的粉碎树皮，例如，甲醇-水(9:1)混合物、甲醇-水(3:1)混合物、甲醇-水(1:1)混合物用于提取。
用于制备植物胡桐的提取物的方法易于为大规模生产而放大。
可以使用常规技术如高效液相色谱(HPLC)或高效薄层色谱(HPTLC)标准化“胡桐提取物”。术语“标准化的提取物”是指通过鉴定存在于提取物中的一种或多种特征性生物活性组分或生物活性标记物而经标准化的提取物。
本文使用的术语“活性组分”或“生物活性组分”是指包含一种或多种生物活性化合物(生物活性标记物)的“胡桐提取物”。可以使用各种不同的技术如高效液相色谱(HPLC)或高效薄层色谱(HPTLC)鉴定生物活性组分。可以通过生物活性导向的柱层析纯化和制备型高效液相色谱(HPLC)从植物胡桐提取物分离生物活性标记物。可以通过分析光谱数据表征化合物。
本文使用术语“生物活性标记物”限定与可接受程度的药物活性相关的活性化合物的特征(或植物化学特性)。“生物活性标记物”是这样一种活性化合物，其可以通过生物活性导向柱色谱纯化和制备型HPLC从植物胡桐获得的提取物中分离。可以通过分析光谱数据表征分离的化合物(生物活性标记物)。
可以使用各种已知的体内和体外生物试验实施提取物的生物活性检测。例如，可以使用如二酰基甘油酰基转移酶-1(DGAT-1)检测、硬酯酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)检测或甘油三酸酯合成检测完成提取物的初步体外活性检测。可以通过使用如高脂饮食诱导的肥胖模型检测确定体内活性。
在实施方式中，本发明提供草药组合物，包含治疗有效量的植物胡桐的提取物和任选地至少一种药学上可接受的载体。
在另一实施方式中，本发明涉及草药组合物，包含植物胡桐的标准化提取物，和任选地至少一种药学上可接受的载体。
本发明的草药组合物包含5-100％的植物胡桐的提取物。
本发明的草药组合物包含5-100％的提取物，该提取物由包含至少一种生物活性标记物的植物胡桐获得。
在一实施方式中，本发明提供包含治疗有效量的植物胡桐提取物的组合物的应用，用于制备治疗代谢紊乱的药物。
“胡桐提取物”与药学上可接受的载体混合，配制成治疗剂型。
包含治疗有效量的植物胡桐的提取物的组合物可以口服施药，例如，药丸、药片、包衣片剂、胶囊、粉末、颗粒、酏剂或糖浆形式。
可以通过使用常规方法彻底混合提取物和药学上可接受的一种或多种载体来制备包含5-100重量％的“胡桐提取物”的口服组合物。
在一实施方式中，提供所述组合物用于治疗代谢紊乱。
在一实施方式中，提供所述组合物用于选自下组的代谢紊乱：2型糖尿病、肥胖症、葡萄糖耐受不良、高胆固醇血症、血脂异常、高胰岛素血、动脉粥样硬化病、多囊卵巢综合征、冠状动脉疾病、代谢综合征、或高血压。
在一实施方式中，提供所述组合物用于治疗2型糖尿病。
在一实施方式中，提供所述组合物用于治疗肥胖症。
在一实施方式中，提供所述组合物用于治疗血脂异常。
在一实施方式中，提供所述组合物用于治疗与血浆脂蛋白、甘油三酯异常相关紊乱相关的代谢紊乱。
在一实施方式中，提供所述组合物用于治疗与葡萄糖水平相关的代谢紊乱，如胰腺β细胞再生。
在还有的另一实施方式中，本发明涉及一种组合物，包含与治疗活性剂联用的治疗有效量的红厚壳属诸种的植物提取物，以及至少一种药学上可接受的载体，用于治疗代谢紊乱。
在还有的另一实施方式中，本发明涉及一种组合物，包含治疗有效量的植物胡桐的提取物，以及至少一种药学上可接受的载体，与治疗活性剂联用，用于治疗代谢紊乱。
在还有的另一实施方式中，包含治疗有效量的植物胡桐的提取物的本发明组合物可以任选地与治疗活性剂联用，用于治疗代谢紊乱。
治疗活性剂可以选自已知的生物活性物质，如奥利司他、吡格列酮、罗格列酮、格列苯脲、格列吡嗪、格列美脲、瑞格列奈、那格列奈、或二甲双胍。
本发明还涉及治疗代谢紊乱的方法，包括有选择地通过口服途径给予组合物的步骤，所述组合物包含治疗有效量的植物胡桐的提取物，以及任选地至少一种药学上可接受的载体。
本发明的草药组合物可以通过将活性组分，即提取物与常规无毒的药学上可接受的一种或多种载体混合成粉末、药丸、片剂、包衣片剂、微丸、颗粒、胶囊、溶液、乳剂、悬浮液、酏剂、糖浆和适合使用的任何其他形式用于口服给药。本发明的制剂包括包含选自下组的那些物质：滑石、水、葡萄糖、乳糖、蔗糖、阿拉伯树胶、明胶、甘露醇、淀粉糊、三硅酸镁、玉米淀粉、角蛋白、胶体二氧化硅、马铃薯淀粉、尿素、和纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素)、麦芽、明胶以及其他无毒相容润滑剂如月桂醇硫酸酯钠盐和硬脂酸镁、释放剂、涂层剂、和适用于生产制剂的其他赋形剂，以固体、半固体或液体形式，除了辅助，可以使用稳定剂、增稠剂和着色剂。为制备固体组合物如片剂或胶囊，提取物与药学载体(如常规的压片组分如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙或树胶)和其他药学稀释剂(如水)混合从而形成固体组合物。然后将该固体组合物细分成为包含有效量本发明组合物的单位剂型。包含提取物的片剂或药丸可以被包衣或复合从而提供具有长效优势的剂型。
包含提取物以便口服或注射给药的液体剂型包括水性溶液、适当调味的糖浆、水性或油性悬浮液，和含食用油的调味乳剂以及酏剂和类似的药物载体。用于水性悬浮液的合适的分散剂或悬浮剂包括合成的天然树胶如黄芪胶、阿拉伯树胶、褐藻胶、葡萄聚糖、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。用于口服的液体制剂可采用以下形式，例如，溶液、糖浆或悬浮液，或者它们可以以干燥产品存在，在使用前与水或其他合适的载体重构。可以通过常规手段采用药学上可接受的添加剂，如悬浮剂(如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素或氢化可食用脂肪)、乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯树胶)、非水性载体(如杏仁油、油酯或乙醇)、防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)以及人工或天然的着色剂和/或甜味剂来制备该种液体制剂。
根据各种因素选择剂量水平，包括使用的本发明的特定提取物的活性、给药途径、给药时间、正使用的特定提取物的排泄率、治疗的持续时间、与其他提取物的联用、年龄、性别、体重、病情、正治疗的患者的总体健康状况和之前病史、以及医学领域已知的类似因素。但是，一般而言，用于成人治疗的剂量通常在0.02-5000毫克/天或1-1500毫克/天。所需剂量可以为单剂量或以合适的间隔给药的分次剂量，例如每天两次、三次、四次或更多亚剂量。
参考以下实施例将更易于理解本发明，给予这些实施例是为说明本发明而非限制本发明的范围。
实施例
实施中使用以下术语/缩写词。
L：升 μg：微克
mL：毫升 w/v：重量比体积
μL：微升 h：小时
g：克 min：分钟
mg：毫克 RT：室温(25±5℃)
植物的提取
胡桐的植物材料(树皮、木质部、茎和枝)选自印度马哈拉托特拉邦孟买。对各植物材料进行微观和宏观研究用于鉴定。植物胡桐各部分的样本已经保留在印度马哈拉托特拉邦孟买戈尔甘的皮拉马尔医疗有限公司植物学研究室。
将胡桐的植物材料(树皮、木质部、茎和枝)砍成小片，在干燥器的帮助下干燥。然后使用粉碎机将完全干燥的材料粗粉碎。
实施例1
使用甲醇(4L)、通过在45℃搅拌3h提取干燥粉状的胡桐植物材料(树皮，500g)。使用甲醇(3.5L)重复该提取过程两次。合并提取物并浓缩至干燥。产量：115克(23％)。
实施例1中获得的提取物在本文称为“实施例1提取物”。
实施例2
使用甲醇：水(9:1；900mL)、通过在45℃搅拌3h提取干燥粉状的胡桐植物材料(树皮，100g)。使用甲醇：水(9:1；700mL)重复该提取过程两次。合并和浓缩提取物。使用冷冻干燥机(爱德华兹Edwards)冻干浓缩的材料。产量：17.72g(17.7％)。
实施例2中获得的提取物在本文称为“实施例2提取物”。
实施例3
使用甲醇：水(3:1；500mL)、通过在45℃搅拌3h提取干燥粉状的胡桐植物材料(树皮，50g)。使用甲醇：水(3:1；400mL)重复该提取过程两次。合并和浓缩提取物。使用冷冻干燥机(爱德华兹)冻干浓缩的材料。产量：8.2g(16.4％)。
实施例3中获得的提取物在本文称为“实施例3提取物”。
实施例4
使用甲醇：水(1:1；500mL)、通过在45℃搅拌3h提取干燥粉状的胡桐植物材料(树皮，50g)。使用甲醇：水(1:1；400mL)重复该提取过程两次。合并和浓缩提取物。使用冷冻干燥机(爱德华兹)冻干浓缩的材料。产量：6.3g(12.6％)。
实施例4中获得的提取物在本文称为“实施例4提取物”。
实施例5
在45℃搅拌3h，使用甲醇提取干燥粉状的胡桐植物材料(茎，1:10w/v)。过滤提取物。使用甲醇(1:8w/v)重复该提取过程两次。合并提取物并浓缩。产率：6.5％。
实施例5中获得的提取物在本文称为“实施例5提取物”。
实施例6
在45℃搅拌3h，使用甲醇提取干燥粉状的胡桐植物材料(枝，1:10w/v)。使用甲醇(1:8w/v)重复该提取过程两次。合并提取物并浓缩至干燥。产率：10％。
实施例6中获得的提取物在本文称为“实施例6提取物”。
实施例7
在45℃搅拌3h，使用甲醇提取干燥粉状的胡桐植物材料(木质部，1:10w/v)。使用甲醇(1:8w/v)重复该提取过程两次。合并提取物并浓缩至干燥。产率：10.6％。
实施例7中获得的提取物在本文称为“实施例7提取物”。
实施例1提取物到实施例7提取物储存在4-8℃冷藏室的聚丙烯瓶内。
药理试验
通过本领域已知的和以下描述的一些药理试验测定植物胡桐的提取物抑制DGAT-1和SCD-1酶活性的效力。
在实施例中使用以下术语/缩写词：
体外试验
实施例8
hDGAT-1试验
使用Sf9细胞系内过表达的人DGAT-1酶设计hDGAT-1试验，如文献European Journal of Pharmacology,650,663–672,(2011)中描述的，文献披露的内容通过引用合并用于教导试验。
人DGAT-1(hDGAT-1)克隆的克隆和表达
由德国RZPD获得hDGAT-1ORF表达克隆(pDEST载体内RZPD0839C09146)。将hDGAT-1基因(NM_012079)克隆入具有氨苄青霉素抗性标记，在苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体症病毒(AcNPV)的强多角体启动子作用下的pDEST8载体。通过转染将包含杆状病毒穿梭载体(杆粒，bacmid)的重组质粒导入DH10BAC感受态细胞(英杰公司，美国)，根据杆状病毒表达系统(英杰公司，美国)将得到的细胞在包含氨苄青霉素(100微克/毫升)、卡那霉素(50微克/毫升))和庆大霉素(10微克/毫升))的培养基(LB)琼脂板上划线。挑选白色菌落，在具有上述抗生素的LB琼脂板重新划线，在37℃孵育过夜。在第二天，将具有包含hDGAT-1基因的重组杆粒的分离白色菌落接种到10毫升具有抗生素(氨苄青霉素(100微克/毫升)、卡那霉素(50微克/毫升)和庆大霉素(10微克/毫升))的LB培养基，利用定轨摇床(NBS公司，New Brunswick)，在200rpm、37℃孵育过夜。取10毫升LB培养液，使用凯杰小量制备试剂盒制备重组杆粒DNA(具有hDGAT-1基因)，并使用超微量分光光度计(nanodrop)定量。包含hDGAT-1基因的杆粒DNA的浓度为约97ng/μL。
使用Sf9细胞转染和病毒扩增
根据制造商的说明书使用脂质体(Cellfectin，英杰公司，美国)在6孔组织培养板中将1-3微克hDGAt-1杆粒DNA转染入Sf9细胞。在不完全格蕾丝昆虫培养基中，无胎牛血清和抗生素-抗菌剂(100单位/毫升)、青霉素(100毫克/毫升)、硫酸链霉素(0.25毫克/毫升)和两性霉素B条件下，在27℃培养转染的Sf9细胞5小时。孵育消耗后，将孵育培养基替换为生长培养基(格蕾丝昆虫培养基；包含10％胎牛血清(Hyclone)和抗生素-抗菌剂(100单位/毫升)、青霉素(100毫克/毫升)、硫酸链霉素(0.25毫克/毫升)和两性霉素B的)，在培养箱内于27℃继续培养细胞120小时。
在培养期间，在昆虫细胞内形成病毒颗粒并被分泌。120小时结束时，使用Biofuge statos离心机(Heraeus400)以1500Xg离心5分钟收集包含病毒的上清液，并通过0.22微米滤器(密理博公司，Millipore)过滤。将其作为P1重组杆状病毒在4℃储存。根据制造商(英杰公司试剂盒)的方案通过噬菌斑试验测定计数大于>105pfu(噬斑形成单位)/毫升。
为生成P2重组杆状病毒，在包含5毫升完全格蕾丝昆虫培养基和5×106Sf9细胞的T-25烧瓶内(Nunc)以0.05-0.1的MOI感染复数进一步扩增P1重组杆状病毒，随后以1500Xg离心5分钟，通过0.22微米滤器(密理博公司)过滤，将其作为P2(>106pfu/毫升)重组杆状病毒在4℃储存。类似地，通过以MOI为0.05-0.1再感染进一步扩增P3和P4重组杆状病毒，从而分别生成P3和P4重组杆状病毒，在4℃储存直至进一步使用。测定P4重组杆状病毒的病毒滴度，发现为1×108pfu/mL。最终使用P4(>108pfu/mL)重组杆状病毒以MOI为5-10感染sf9细胞。
微粒体制备
Sf9细胞(2x106个细胞/毫升)在包含250毫升格蕾丝昆虫培养基(Gibco)和抗生素-抗菌剂的500毫升反应器内生长，以MOI为5用hDGAT-1重组杆状病毒(25毫升)感染。感染的细胞在28℃维持48小时，在室温下以1000Xg离心培养液收集细胞团块。采用PBS(pH7.4)洗涤团块从而去除残留培养基。
然后通过将团块悬浮在15毫升微粒体制备缓冲液中，将裂解产物过27号针头，随后在4℃下温和超声波处理从而破碎细胞，所述缓冲液包含1×量的蛋白酶混合物片(Roche)和内部制备的蛋白酶抑制剂混合物。分离细胞碎片和核后上清(PNS)，使用Biofuge statos离心机(Heraeus400)在4℃以1000Xg离心裂解物10分钟。然后使用Biofuge statos离心机(Heraeus)在4℃以15000Xg离心获得的PNS30分钟从而分离线粒体后上清(PMS)。最后，使用BeckmaTi-rotor在4℃以100,000Xg进行超速离心1小时从而获得微粒体团块。为增加纯度，在包含内部制备的蛋白酶抑制剂混合物(抑肽酶(0.8μM)、胃酶抑素A(10μM)和亮抑肽酶(20μM)-西格玛)的微粒体制备缓冲液中洗涤团块两次。
最后将微粒体团块悬浮在1.5毫升微粒体制备缓冲液中，采用Bradford方法测定蛋白浓度。
微粒体以每份100微升存储在-70℃用于体外试验。
制备缓冲液和试剂
原液
hDGAT-1试验缓冲原液：通过将0.25M蔗糖(西格玛)和1mM EDTA(西格玛)溶解在150mM tris HCl(西格玛)中制备pH7.4的试验缓冲液。
终止液：为制备10毫升终止液，将7.84毫升异丙醇(考杰公司-Qualigens)和1.96毫升正庚烷(考杰公司)加入0.2毫升去离子水。
A.E.S.S.M(碱乙醇终止液混合物)：为制备10毫升的A.E.S.S.M溶液，将1.25毫升变性乙醇、1.0毫升去离子水和0.25毫升的1N NaOH(考杰公司)加入7.5毫升终止液。
闪烁液：为制备2.5升闪烁液，将1667毫升甲苯(默克),833毫升曲通(triton)X-100(西格玛)、12.5克2,5-二苯基噁唑(PPO；西格玛)和500毫克(1,4-二(5-苯基-2-噁唑基)苯(POPOP；西格玛)混合。
工作液
hDGAT-1试验缓冲液：使用前制备包含0.125％BSA(无脂肪酸，西格玛)的新hDGAT-1试验缓冲液。
底物混合物制备：通过添加2047.5μM的1,2-二油酰基-sn-甘油(19.5mM；西格玛)和280nCi/毫升的[14C]油酰-CoA(0.1mCi美国放射性标记化学物质/毫升)现场制备底物混合物。使用hDGAT-1试验缓冲液将终体积定为1000微升。
hDGAT-1酶制备：用hDGAT-1试验缓冲液将酶稀释到1毫克/毫升的工作浓度，2.5微升工作酶原液用于hDGAT-1试验(终浓度25微克/毫升)。
制备试验样本
如下制备试验样本：用100％二甲基亚砜(DMSO)为各提取物(实施例1提取物到实施例7提取物)制备20毫克/毫升的原液。在hDGAT-1试验缓冲液中制备工作液。将10微升工作液加入试验混合物从而使提取物的终浓度为50微克/毫升。
通过连续稀释原液为实施例1提取物制备三种不同浓度(即25微克/毫升、50微克/毫升和100微克/毫升)用于剂量响应。
试验
加入60微升底物混合物(如上所述)到总试验体积为100微升。通过加入包含微粒体蛋白的2.5微克hDGAT-1开始反应且在37℃孵育10分钟。通过加入300微升碱乙醇终止液混合物(AESSM)终止反应。反应包括将放射性的[14C]油酰-CoA并入1,2-二油酰基-sn-甘油的第三羟基(OH)从而形成放射性的甘油三酸酯([14C]甘油三酸酯)的步骤，然后将放射性的甘油三酸酯萃取到上层庚烷相。通过加入600微升正庚烷将如此形成的放射性甘油三酸酯产品分离进入有机相。将250微升上层庚烷加入4毫升闪烁液，使用液体闪烁计数仪(Packard，1600CA)检测每分钟衰变数。参照载体计算抑制百分比。结果如表1所示。
通过用hDGAT-1试验缓冲液连续稀释实施例1提取物的原液，测定在浓度为25微克/毫升、50微克/毫升和100微克/毫升的剂量响应。结果如表2所示。
表1：提取物的hDGAT-1抑制
编号 样本 浓度 ％hDGAT-1抑制
01 实施例1提取物 50微克/毫升 72.15
02 实施例2提取物 50微克/毫升 85.81
03 实施例3提取物 50微克/毫升 82.37
04 实施例4提取物 50微克/毫升 85.84
05 实施例5提取物 50微克/毫升 42.04
06 实施例6提取物 50微克/毫升 16.07
07 实施例7提取物 50微克/毫升 48.50
08 IN5530* 20nM 46.27
09 IN5530* 0.1μM 66.04
*IN5530:内部标准化合物(2-((1s,4s)-4-(4-(7,7-二甲基-7H-吡啶并[4,5-b][1,4]噁嗪-6-基)苯基)环己基)乙酸).
结论：在hDGTA-1抑制试验中发现植物胡桐的提取物(实施例1-5提取物和实施例7提取物)是有活性的。
表2：hDGAT-1抑制试验中实施例1提取物的剂量响应
编号 样本 浓度 ％hDGAT-1抑制
01 实施例1提取物 25微克/毫升 79.04
02 实施例1提取物 50微克/毫升 87.66
03 实施例1提取物 100微克/毫升 90.48
04 IN5530(Std.com.) 20nM 48.82
05 IN5530(Std.com.) 0.1μM 74.26
*IN5530：内部标准化合物(2-((1s,4s)-4-(4-(7,7-二甲基-7H-吡啶并[4,5-b][1,4]噁嗪-6-基)苯基)环己基)乙酸)。
结论：在hDGAT-1抑制试验中，实施例1提取物表现出剂量相关活性。
实施例9
SCD-1试验
根据文献(European Journal of Pharmacology,618,28–36,(2009))描述的方法进行试验，其内容通过参考合并用于教导试验。
制备SCD-1酶
如PCT公布申请WO2008/074835A1中所描述的从大鼠肝脏微粒体制备SCD-1酶，PCT披露的内容通过引用合并于本文用于教导试验。
雄性SD大鼠(150–175克)禁食两天后低脂饮食喂食3天从而诱导SCD-1活性。然后处死大鼠，去除它们的肝脏置于冰上。用剪刀细剪肝脏，然后使用Polytron匀浆器在匀浆缓冲液(150mM KCl、250mM蔗糖、50mM tris–HCl，pH7.5、5mM EDTA和1.5mM还原型谷胱甘肽)内匀浆。在4℃以1500Xg离心匀浆20分钟。收集得到的上清液，在4℃以10,000Xg离心两次，每次20分钟。收集得到的上清液，在4℃以100,000Xg离心60分钟。去除上清液，将微粒体团块重悬在匀浆缓冲液中，分成等份储存在-80℃。采用Bradford试验鉴定重悬团块的蛋白含量。
制备缓冲液和试剂
制备SCD-1试验缓冲液：缓冲液包含100mM K2HPO4(考杰公司)和100mMNa2H2PO4.2H2O(考杰公司)，pH7.4。
制备磷酸钾缓冲液：缓冲液包含200mM K2HPO4(考杰公司)和200mMKH2PO4(考杰公司)，pH7.0。
制备SCD-1提取缓冲液：缓冲液包含250mM蔗糖(西格玛)、15mM N-乙酰基半胱氨酸(西格玛)、5mM MgCl2(西格玛)、0.1mM EDTA(西格玛)、0.15MKCl(西格玛)和磷酸钾缓冲液62mM，pH7.0。
制备β-NADH：用SCD-1试验缓冲液制备20mMβ-NADH(西格玛)原液，在-70℃储存。在使用前通过采用试验缓冲液稀释原液到8mM制备β-NADH工作液。
制备硬脂酰co-A：在SCD-1试验缓冲液中制备1.65mM硬脂酰co-A(西格玛)原液，在-70℃储存。
制备放射性的混合物：将100微升的1μCi/毫升硬脂酰(9,103H)CoA(美国放射性标记化学品公司-American Radiolabeled Chemicals)和144微升的1.65mM硬脂酰co-A加入到5516微升的SCD-1试验缓冲液中。
在多筛板中制备活性炭床层
在试验缓冲液中制备33％活性炭(西格玛)溶液。将250微升溶液加入到多筛板的各孔中。通过真空歧管对板施加真空形成炭床层。储存板直至使用。
制备测试样本
如下制备测试样本。用100％二甲基亚砜(DMSO)为各提取物(实施例1提取物到实施例4提取物)中制备20毫克/毫升原液。用SCD-1试验缓冲液制备工作液。将10微升工作原液加入到100微升测试混合物中从而获得提取物终浓度为50微克/毫升。
试验
用测试样本处理微粒体(62.5微克)15分钟，之后加入25微升β-NADH工作液和20微升包含9,10-3H硬脂酰CoA的放射性混合物，在25℃孵育混合物30分钟。通过加入高氯酸终止反应。然后将板离心，通过用真空歧管使得各孔的上清液通过炭床层进入储板(reservoir plate)。包含3H2O的滤液转移到包含4毫升闪烁液的闪烁管，使用液态闪烁计数仪检测cpm数。参照载体对照计算％抑制。各实验也检测阳性对照。结果如表3所示。
表3：胡桐提取物的SCD-1抑制
编号 样本 浓度 ％SCD-1抑制
01 实施例1提取物 50微克/毫升 56.7
02 实施例2提取物 50微克/毫升 63.6
03 实施例3提取物 50微克/毫升 65.7
04 实施例4提取物 50微克/毫升 68.0
05 MF–152* 100nM 56.1
*MF-152:标准化合物(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,19,5214–5217,(2009))
结论：在SCD-1抑制试验中发现胡桐提取物(实施例1提取物到实施例4提取物)是有活性的。
实施例10
基于细胞的甘油三酸酯(TG)合成试验
根据参考文献European Journal of Pharmacology,618,28–36,(2009)报导的方法，评价选自初级试验的实施例1提取物抑制HepG2细胞内甘油三酸酯合成的能力，其内容通过引用合并用于教导试验。
制备缓冲液、试剂和培养基
Eagle最低必须培养基(EMEM)：一袋粉状EMEM(西格玛)添加到1升锥形烧瓶。采用10毫升蒸馏水洗涤空袋。使用电磁搅拌器将粉末溶解在900毫升蒸馏水中。还补加1.5克碳酸氢钠(西格玛)、10毫升丙酮酸钠(西格玛)和1毫升青霉素-链霉素(Gibco)。在适当混合后将pH值调整到7.2，体积达到1升。将培养基过滤除菌，在4℃储存。
灭活的胎牛血清(FBS)：将胎牛血清(Hyclone)放置在预设在56℃的水浴中30分钟。然后将FBS分装(45毫升)到50毫升聚丙烯管中，在-80℃储存。
磷酸缓冲盐水(PBS)：将一袋PBS内含物(西格玛)溶解在900毫升蒸馏水中。调节pH到7.2，体积达到1升。然后过滤除菌，在-20℃储存。
胰蛋白酶-EDTA溶液：将胰蛋白酶-EDTA溶液(西格玛)解冻，无菌分装(45毫升)到50毫升聚丙烯管中，在-20℃储存。
制备测试样本
如下制备测试样本。利用100％二甲基亚砜(DMSO)为实施例1提取物制备20毫克/毫升原液。将10微升工作原液加入100微升测试混合物中从而获得提取物终浓度物50微克/毫升。
通过连续稀释原液为实施例1提取物制备三种不同浓度(即25微克/毫升、50微克/毫升和100微克/毫升)用于剂量响应。
培养HepG2细胞
在37℃水中复苏一冻存管的HepG2细胞(ATCC No.HB-8065)。将管内全部内容物转移到包含9毫升EMEM和1毫升灭活胎牛血清的T-75组织培养瓶内。在湿度控制培养箱内，在37℃、5％CO2条件下孵育培养瓶。观察培养瓶内的细胞生长。当细胞达到约70％融合，去除耗尽的培养基，用5毫升PBS洗涤细胞单层。将1.5-2毫升胰蛋白酶EDTA溶液加入到培养瓶内以致覆盖全部细胞层。当全部细胞从培养瓶脱离，加入含10％胎牛血清的6毫升EMEM，混合得到均匀的细胞悬浮液。以1000rpm离心细胞悬浮液5分钟从而获得细胞团。将细胞团温和地分散到含10％胎牛血清的6毫升EMEM中。如上所述制备6个T-75培养瓶，每个瓶中加入1毫升细胞悬浮液。在湿度控制培养箱内，在37℃、5％CO2条件下孵育培养瓶24小时。然后每48小时更换培养基。到72小时，培养瓶内达到约70％融合，可以用于接种。
试验
采用包含10％胎牛血清的EMEM制备HepG2细胞悬浮液。使用血细胞计数器检测细胞数量，对于24孔板，将细胞数量调节至4×105细胞/毫升/孔。还制备平行板，在实验结束后用于活力测试。在湿度控制培养箱内，在37℃、5％CO2条件下孵育板直到细胞融合。当细胞达到70-80％融合，去除培养基，用含10μM标准化合物(MF-152)或50微克/毫升实施例1提取物的新鲜培养基替代。在载体孔内加入DMSO，终浓度为0.1％。孵育板过夜约18小时。第二天去除培养基，用包含补充了0.1％BSA(无脂肪酸)的标准化合物/提取物/DMSO的培养基替代。
每孔中还加入2μCi的14C标记的乙酸，进一步在37℃孵育板6小时，然后去除培养基，提取脂质。
为评价植物提取物的细胞毒性效果，在孵育2小时后使用MTS(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺酰基)-2H-四唑鎓)在平行的板上进行细胞活力实验。
脂质提取
根据以下方案进行提取：
在实验结束时，用冰冷PBS洗涤细胞两次。将细胞刮入1毫升冷PBS内，用移液器转入包含4毫升甲醇：氯仿(2:1)的15毫升玻璃管内，使用漩涡振荡器搅动。以4000rpm离心5分钟，将上清转移到新管内。去除主要包含蛋白质的团块。加入1毫升50毫摩尔的柠檬酸、2毫升水和1毫升氯仿到上述上清中，使用漩涡振荡器搅动。获得浑浊的两相混合物。在无冷却离心机内以3500rpm离心管。获得下层氯仿相和上层水/甲醇相。在两者之间还有内部相，主要包含沉淀蛋白质。去除上层水/甲醇相，使内部相不受影响。包含脂质的下层氯仿相转移到新管中，在加热器上蒸发。将脂质重新溶解在200微升氯仿：甲醇(2:1)中。在TLC二氧化硅板上使用己烷：乙醚：乙酸(85:15:0.5)溶剂系统分离甘油三脂。在旁边跑非放射性标记的甘油三酸酯标准品，且全部斑点与甘油三酸酯标准品共同点样。TLC板暴露于碘蒸气，刮下甘油三酸酯斑点转移到包含4毫升闪烁液的闪烁管。用液体闪烁计数仪检测放射性cpm。参照载体计算抑制性。结果如表4所示。
通过连续稀释实施例1提取物的原液在25微克/毫升、50微克/毫升和100微克/毫升检测剂量响应。结果如表5所示。
表4：实施例1提取物对甘油三酸酯合成的抑制
编号 样本 浓度 ％Tg抑制
01 实施例1提取物 50微克/毫升 69.65
02 MF-152 10μM 34.19
*MF-152:标准化合物(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,19,5214–5217,(2009)).
结论：在基于细胞的甘油三酸酯合成试验中发现实施例1提取物是有活性的。
表5：实施例1提取物对甘油三酸酯合成的抑制
编号 样本 浓度 ％甘油三酸酯抑制 ％毒性
01 实施例1提取物 25微克/毫升 31.12 12
02 实施例1提取物 50微克/毫升 55.37 46
03 实施例1提取物 100微克/毫升 84.12 66
04 MF-152 10μM 35.13 0
*MF-152：标准化合物(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,19,5214–5217,(2009)).
结论：实施例1提取物表现出对甘油三酸酯合成的剂量相关抑制。
体内研究
根据为管理和监督动物实验目的的委员会的指导，在动物伦理制度委员会(IAEC)的批准下进行体内实验。
实施例11
实施例1提取物对高脂肪饮食(HFD)引起的体重增加的影响
啮齿动物高脂饮食(HFD)诱导的肥胖症模型已被报导是用于评价抗肥胖症药剂效力的有用模型(Obesity,17(12),2127–2133,(2009))。已报道，喂食包含58％千卡脂肪的高脂饮食导致鼠肥胖(Metabolism,47,1354-1359,(1998))。此外，与喂食正常饮食的小鼠相比，喂食高脂饮食的小鼠已经表现出明显的体重增加和明显更重的内脏脂肪组织(例如附睾、腹膜后和肠系膜脂肪组织)(Life Science,77,194–204,(2005))。
有报道说HFD诱导体重增加模型用于评价各种不同天然产物的抗肥胖症效果(BMC Complementary and Alternative Medicine,5:9,1-10,(2005)；BMCComplementary and Alternative Medicine,6:9,1-9,(2006))。
用小鼠实施HFD诱导的体重增加研究以评价实施例1提取物的效力。
使雄性C57BL/6j小鼠(内部，印度马哈拉施特拉邦戈尔甘皮拉马尔医疗有限公司中心动物设施)适应HFD(60％千卡,D12492,研究饮食,USA)两周。选择体重增加的小鼠用于研究，随机分成治疗组，每组10只小鼠。
制备测试样本
在聚乙二醇400(30％)(PEG400、飞世尔科技、印度)和0.5％羧甲基纤维素(70％)(CMC、西格玛、美国)中制备实施例1提取物的悬浮液。
试验
以500毫克/千克体重的剂量口服实施例1提取物，每日一次。使用奥利司他(百康，印度)作为标准药物，以15毫克/千克体重的剂量口服，每日两次。单独的一组10只小鼠喂以低脂饮食(LFD,10％千卡,D12450B,研究饮食,USA)作为正常对照。以10毫升/kg体重的剂量将载体给药于HFD和LFD对照组。
连续治疗60天。每日监控体重和摄食量。计算％体重变化(从第一天开始的％体重变化)和累积摄食量数据。在第61天，在异氟烷麻醉下收集血液样本(约200微升/鼠)到肝素化(50IU/毫升)微量离心管。通过以10000rpm在4℃离心分离血浆用于评估各种不同的血浆生物化学参数。用BS-400自动分析仪(迈瑞公司，中国)进行生物化学分析。接着处死小鼠，随后解剖称重器官/组织，即肝脏、心脏、肾脏、附睾脂肪和腹膜后脂肪。采用单向方差分析及Dunnet因果测试分析全部数据统计学显著差异，P<0.05认为是显著的。使用Windows适用的GraphPadPrism(4.00版)(GS公司，GraphPad Software，圣地亚哥，加州，美国)进行全部分析。结果如表6、表7和表8所示。
表6：实施例1提取物对小鼠HFD诱导体重增加的影响
*p<0.05,**p<0.01Vs.HFD+载体；平均值±S.E.M.
与HFD+载体组相比，实施例1提取物表现出对体重增加的显著抑制。
表7：实施例1提取物对累积摄食量的影响
组 累积摄食量(克/小鼠)(60天)
LFD+载体 120.3±3.3
HFD+载体 110.5±2.8
HFD+实施例1提取物 105.8±3.1
HFD+奥利司他 119.7±4.7
平均值±S.E.M.
与HFD+载体组相比，在实施例1提取物组没有观察到累积摄食量的显著减少。
表8：实施例1提取物对脂肪组织重量的影响
组 附睾脂肪(克) 腹膜后脂肪(克) 总脂肪#(克)
LFD+载体 0.43±.03** 0.17±0.01** 0.60±0.05**
HFD+载体 1.39±0.13 0.65±0.08 2.03±0.20
HFD+实施例1提取物 1.03±0.15 0.45±0.08 1.48±0.23
HFD+奥利司他 1.07±0.10 0.42±0.05* 1.49±0.15
#总脂肪＝附睾脂肪+腹膜后脂肪,
*p<0.05,**p<0.01Vs.HFD+载体；平均值±S.E.M.
与HFD+载体组相比，实施例1提取物表现出脂肪组织重量减少的趋势。
对像葡萄糖、甘油三酸酯、胆固醇、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、白蛋白、肌酸酐和尿素等参数的血浆生物化学分析表明实施例1提取物和载体组之间没有显著差异。器官重量(心、肝和肾)没有任何明显的区别。
结论：实施例1提取物对HFD小鼠的治疗导致体重增加显著减少。这种体重增加的减少的实现没有显著降低摄食量，且在减少脂肪组织重量(脂肪量)上也是明显。在高脂肪饮食(HFD)诱导肥胖症模型中，实施例1提取物已经表现出抗肥胖症活性。

Claims (18)

1.一种组合物，包含治疗有效量的来源于红厚壳属(Calophylum)的植物提取物作为活性组分，和至少一种药学上可接受的载体。 
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含5-100％的来源于红厚壳属的植物提取物。 
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述红厚壳属的提取物包含生物活性标记物和至少一种药学上可接受的载体。 
4.一种组合物，包含治疗有效量的获自植物胡桐(Calophylum inophylum)的提取物作为活性组分，和至少一种药学上可接受的载体。 
5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含5-100％的植物胡桐的提取物。 
6.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述提取物获自植物胡桐的树皮。 
7.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述胡桐包含生物活性标记物。 
8.如权利要求1或4所述的组合物，其特征在于，所述组合物通过口服给予需要治疗代谢紊乱的对象。 
9.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述组合物配制成片剂、胶囊或颗粒的形式用于口服给药。 
10.如权利要求1或4所述的组合物的用途，用于治疗代谢紊乱。 
11.一种用于权利要求10所述用途的组合物，其特征在于，所述代谢紊乱选自下组：胰岛素耐受、高血糖症、2型糖尿病、肥胖症、葡萄糖耐受不良、高胆固醇血症、血脂异常、高胰岛素血、动脉粥样硬化病、多囊卵巢综合征、冠状动脉疾病、代谢综合征、高血压或与血浆脂蛋白、甘油三酸酯异常相关的紊乱、或与血糖水平相关的紊乱。 
12.一种用于权利要求11所述用途的组合物，其特征在于，所述代谢紊乱是2型糖尿病。 
13.一种用于权利要求11所述用途的组合物，其特征在于，所述代谢紊乱是肥胖症。 
14.一种治疗对象的代谢紊乱的方法，包括给予该对象治疗有效量的权利要求1或4所述的组合物。 
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述组合物是口服给药。 
16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述代谢紊乱选自下组：胰岛素耐受、高血糖症、2型糖尿病、肥胖症、葡萄糖耐受不良、高胆固醇血症、血脂异常、高胰岛素血、动脉粥样硬化病、多囊卵巢综合征、冠状动脉疾病、代谢综合征、高血压或与血浆脂蛋白、甘油三酸酯异常相关的紊乱、或与血糖水平相关的紊乱。 
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述代谢紊乱是2型糖尿病。 
18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述代谢紊乱是肥胖症。 
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