CN104151360B - 磷酸/膦酸衍生物及其医药用途 - Google Patents

磷酸/膦酸衍生物及其医药用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式I所示磷酸/膦酸衍生物：其中，R1或R2代表如下结构：Q1代表L‑氨基酸的酯衍生物，其中R3为碳原子数1‑6的烷基或环烷基，R4为H或碳原子数1‑6的烷基；Q2代表羟基取代的苯并二氧六环衍生物；Q3代表羟基取代的苯并二氧戊环衍生物；R1或R2相同或不同，但是其中至少有一个为Q2或Q3；D代表含磷酸/膦酸基的药理活性分子的残基，即代表含磷酸/膦酸基的药理活性分子；当R1和R2不同时，与R1和R2相连的P原子的构型为R型或S型。

Description

磷酸/膦酸衍生物及其医药用途
技术领域
本发明涉及分子中含有磷酸或膦酸基的药理活性分子的新的肝靶向前药衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及含有该前药衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分以及适宜的赋型剂形成的药物组合物，以及该前药衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物、含有该前药衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分的药物组合物在制备肝病或代谢性疾病的治疗药物的用途。
背景技术
肝脏是病毒性肝炎、肝硬化、肝癌的靶器官，也是糖脂代谢的主要器官。针对这些疾病的治疗技术、治疗方法和治疗药物的研究，在近十年中取得了重要进展，但是远不能满足临床的需求。如对于慢性病毒性肝炎，干扰素疗效不稳定，副作用较大；抗乙肝病毒药物拉米夫定易产生耐药性，阿德福韦酯具有剂量限制性的肾脏毒性；而唯一的小分子抗丙肝病毒药物利巴韦林长期应用可引起严重的血液毒性。对于肝癌，常规化疗药物全身副作用大。对于肝纤维化和肝硬化，临床尚无安全有效的药物。对于糖尿病及高血脂，临床也迫切需要新的更有效的治疗方法。
核苷磷酸/膦酸是抗病毒药物的重要组成部分。如拉米夫定、替比夫定、恩替卡韦、利巴韦林、PSI-6130等核苷类似物均是通过磷酸化形成具有药理活性的核苷酸类似物，发挥抗病毒作用。
阿德福韦(PMEA)、替诺福韦(PMPA)和PMPDAP是具有抗HIV和HBV活性的无环核苷膦酸类似物。
MB05032是具有降糖作用的膦酸类果糖1，6-二磷酸酶抑制剂，MB07344是具有降脂作用的膦酸类甲状腺受体激动剂。
但是，含有磷酸或膦酸基的药理活性分子由于磷酸或膦酸基的强极性，难以透过细胞膜，因此其口服给药的生物利用度低，难以达到有效治疗浓度。因此，研究开发安全有效的含有磷酸或膦酸基的药理活性分子的前药是该类药物研发的关键。
将含膦酸基的药物分子制成羧酸酯或碳酸酯前药，可以显著提高膦酸类药物的口服生物利用度。阿德福韦酯和LB-80380是特戊酸活泼酯前药，替诺福韦酯是碳酸异丙酯的前药。阿德福韦酯和替诺福韦酯是临床应用最广泛的抗病毒药物。
但是，阿德福韦特戊酸酯、LB-80380及替诺福韦吡呋酯化学稳定性差，其原料药及制剂对温度湿度较敏感，易分解形成人体不能吸收的单酯；其体内代谢产物甲醛对人体具有毒性；而且由于其在胃肠道不稳定，易水解生成强酸性的膦酸化合物，对胃肠道有刺激性。另外，阿德福韦特戊酸酯和LB-80380进入体内，水解生成的特戊酸，不易代谢排泄，有一定的副作用。
MCC-478是具有抗乙肝病毒作用的无环核苷酸的三氟乙醇酯，具有较好的化学稳定性。MCC-478进入体内后水解释放出游离酸(602076)发挥抗病毒作用；但是I期临床的药代动力学研究结果表明，MCC-478在人体内的主要代谢产物为核苷酸单酯(602074)，游离酸602076的血药浓度只有单酯602074的1/10(Clark Chan，et al.Clinical Pharmaco-kinetics of Alamifovir and Its Metabolites Antivicrob Agents Chemother，2005，49(5)：1813-1822.)，而单酯602074 的细胞毒性(CC50＝548μM)显著高于MCC-478和602076(CC50均＞1000μM)(Kamiya N，et al.Antiviral activities of MCC-478，a novel andspecific inhibitor of hepatitis B Virus.Antimicrob Agents Chemother 2002；46(9)：2872。)。
S-乙酰硫乙基酯(SATE)的设计也是磷酸/膦酸类药物最常用的前药设计策略。如ddUMP和膦甲酸的双-(S-乙酰硫乙基酯)能够显著提高ddUMP和膦甲酸的口服生物利用度。
但是，磷酸/膦酸类药物的S-乙酰硫乙基酯(SATE)进入体内，产生乙烯基硫化物，为强的烷基化试剂。
CGS25463和CGS26393为膦酸衍生物的双酚酯前药，进入体内能够释放活性膦酸药物：
PSI-7977和INX-08189分别为具有抗HIV活性的核苷酸的磷酰胺酚酯和 磷酰胺萘酚酯的前药，进入体内后释放核苷单磷酸衍生物，并进一步转化为三磷酸产物，发挥抗HCV的作用：
但是，CGS25463、CGS26393、PSI-7977及INX-08189进入体内后，会产生高毒性的酚类物质。
Pradefovir、MB07811和MB07133分别为抗乙肝药物PMEA、甲状腺受体激动剂MB07344及抗肿瘤药物阿糖胞苷的苯取代环状膦酸酯的前药；该类前药具有较好的化学稳定性，在胃肠道和血液中保持稳定，而在肝脏中能够被细胞色素P450酶选择性氧化，在肝脏靶向释放活性药物PMEA、MB07344或阿糖胞苷，发挥抗乙肝病毒作用、降脂作用或抗肝癌作用：
但是，Pradefovir、MB07811和MB07133进入体内后，会产生高度致癌作用的代谢中间体，具有致癌作用。
发明内容
为了克服上述磷酸/膦酸类前药的不足，本发明提供式I所示磷酸/膦酸衍生物：
其中，R1或R2代表如下结构：
Q1代表L-氨基酸的酯衍生物，其中R3为碳原子数1-6的烷基或环烷基，R4为H或碳原子数1-6的烷基；Q2代表羟基取代的苯并二氧六环衍生物；Q3代表羟基取代的苯并二氧戊环衍生物；R1或R2相同或不同，但是其中至少有一个为Q2或Q3；D代表含磷酸/膦酸基的药理活性分子的残基，即代表含磷酸/膦酸基的药理活性分子；当R1和R2不同时，与R1和R2相连的P原子的构型为R型或S型。
本发明人通过大量研究发现，与现有技术相比，式I所示的磷酸/膦酸衍生物具有更高的生物活性和更好的生物安全性；发明人还意外地发现，目标化合物在胃肠道和血液中保持稳定，而在肝脏中能够充分释放活性物质，具有较好的肝靶向性；发明人更意外地发现，式I所示的目标化合物口服给药后，具有保肝作用，能够抑制肝炎病毒所致的肝损伤，快速降低肝炎病毒所引起的转氨酶升高。
因此，本发明提供式I所示的磷酸/膦酸衍生物及其非毒性药学上可接受的盐在制备治疗肝脏疾病如病毒性肝炎药物的用途。
本发明还提供式I所示的磷酸/膦酸衍生物及其非毒性药学上可接受的盐在制备治疗肝脏代谢失调所致的疾病如高血脂和高血糖药物的用途。
本发明另一方面提供含式I所示的磷酸/膦酸衍生物及其非毒性药学上可 接受的盐作为活性成分及药用赋形剂的药物组合物；这些药物组合物可以是片剂，如速释片、缓释片、控释片、薄膜衣片、糖衣片、口含片、舌下片、等；胶囊剂如硬胶囊剂、软胶囊剂等；注射剂如无菌的或含抑菌剂的水性注射液、油性注射液、冷冻干燥粉针剂、注射用微球等。
式I所示磷酸/膦酸衍生物可以按照如下合成路线制备：
路线一：以5-羟基苯并二氧无环PMEA双酯衍生物的制备为例，R1和R2同时为Q2或Q3的膦酸酯类目标化合物可以按照合成路线一制备：
合成路线一
PMEA在二环己基碳二亚胺作用下，与5-羟基苯并二氧无环的羟基缩合，得到目标化合物。
路线二：以阿昔洛韦的5-羟基苯并二氧无环磷酸酯衍生物的制备为例，R1和R2同时为Q2或Q3的磷酸酯类目标化合物可以按照合成路线二制备：
合成路线二
阿昔洛韦与三氯氧磷作用，生成磷酰氯中间体II1，II1与5-羟基苯并二氧无环反应，得到目标化合物。
路线三：以PMPA的膦酰胺单酯衍生物的制备为例，R1为Q1，R2为Q2或Q3的膦酰胺单酯类目标化合物可以按照合成路线三制备：
合成路线二
PMEA首先在二环己基碳二亚胺作用下，与5-羟基苯并二氧无环的羟基缩合，得到单酯衍生物III1，III1与氯化亚砜作用，生成膦酰氯单酯中间体IV1，IV1与氨基酸酯反应，得到目标化合物。
路线四：以阿昔洛韦的磷酰胺单酯衍生物的制备为例，R1为Q1，R2为Q2或Q3的磷酰胺单酯类目标化合物可以按照合成路线四制备：
合成路线四
二氯磷酰酯衍生物与氨基酸衍生物反应得到氯代磷酰胺酯衍生物V，V与阿昔洛韦侧链的羟基反应，得到目标化合物。
具体实施方式
下述实施例用于具体地解释本发明，然而本发明的范围并不限于下述实施例。
参考实施例1 9-[[双-(苯氧基)-膦酰基-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(i-1)的制备
将13g9-[(膦酰基-甲氧基)-乙基]-腺嘌呤(PMEA)及9.4g苯酚加于100mlN-甲基吡咯烷酮中，加热至90℃搅拌，然后依次加入10ml三乙胺，20g二环己基碳二亚胺，于90℃加热搅拌15小时。自然冷却过夜，滤去固体；将滤液减压浓缩，将残留物用乙酸乙酯溶解，依次用碳酸钠饱和溶液(2X200ml)及氯化钠饱和溶液(2X200ml)洗涤，将有机层用无水硫酸钠干燥过夜，滤去干燥剂，将滤液减压蒸干，用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇(20∶1)混合溶剂洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得i-14.1g。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：8.16(s，1H)；8.12(s，1H)；7.34-7.37(m，4H)；7.33(b，2H)；7.20-7.25(m，6H)；4.35-4.33(t，2H)；3.92-3.90(t，2H)；3.79-3.77(d，2H)。
参考实施例2 9-[[双-(萘氧基)-膦酰基-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(i-2)的制备
参照参考实施例1的方法，用萘酚代替苯酚与PMEA反应，反应产物经分离纯化，得到i-2，产率27％。8.16(s，1H)；8.12(s，1H)；7.73-7.77(m，2H)；7.45-7.59(m，10H)；7.20-7.25(m，6H)；6.22-6.34(m，2H)；4.35-4.33(t，2H)；3.92-3.90(t，2H)；3.79-3.77(d，2H)。
参考实施例3 5’-[((苯氧基-1-甲氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-2’，3’-二脱氧-3’-
硫代-胞苷(Cf1109)的制备
将2.1克(0.01 mol)二氯磷酸苯酚酯和1.3克(0.01 mol)L-丙氨酸甲酯溶于30mL无水二氯甲烷中，冷却至-78℃。搅拌下滴加2ml三乙胺溶于20mL无水二氯甲烷的溶液，控制滴加速度以保持反应温度-78℃。加完后，待反应温度缓升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸出溶剂，在残留物中加入30ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得无色油状物，即为磷酰胺中间体V1，直接用于下步反应。
将0.21g拉米夫定溶于50ml THF，然后加入7ml吡啶，通氮气，加入1ml1M特丁基氯化镁的THF溶液，搅拌0.5h，搅拌下加入2ml1M V1的THF溶液，搅拌2h。于反应液中加入50ml二氯甲烷，100ml饱和氯化铵水溶液萃取后；分出有机层，水层用二氯甲烷萃取(3X50ml)，合并有机层，用饱和氯化钠水溶液洗，然后用无水硫酸镁干燥过夜，过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(100∶5∶1)混合溶剂洗脱，收集所需组分，蒸干后得到目标化合物0.18g。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.68(d，1H)；7.25-7.30(m，7H)；6.23(t，1H)；6.11(m，1H)；5.72(d，1H)；5.35(t，1H)；4.27(m，2H)；3.88(m，1H)；3.58(s，3H)；3.42(q，1H)；3.05(m，2H)；1.21(d，3H)。
参考实施例4 9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)-乙基]-胺基]-苯氧基膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤富马酸盐(GS-7340)的制备
在50ml N-甲基吡咯烷酮中加入14.6g9-[(R)-2-(膦酸基甲氧基)-丙基]-腺嘌呤(PMPA)，9.6g苯酚，加热至85℃，加入6.3ml三乙胺。搅拌下缓慢加入13.4gDCC，于100℃加热搅拌过夜，冷却后加入30ml水。放置，滤去固体，合并洗滤液，减压蒸干，加入30ml水，用25％的氢氧化钠调节pH至11，滤去固体，合并洗滤液，用30ml乙酸乙酯萃取。将水溶液用37％盐酸调节pH至3.1，放置析出固体。滤取固体，加入50ml甲醇搅拌洗涤，过滤，真空干燥，得PMPA的苯酚单酯衍生物7.2g。
将上步产物7.1g加于30ml乙腈中，搅拌下滴加6.2g氯化亚砜，保持温度50℃以下。将反应混合物于75℃加热至固体溶解，然后加热至80℃，蒸干。冷却至25℃，加入40ml二氯甲烷，冷却至-30℃；在30min内，滴加6.5g L-丙氨酸异丙酯于35ml二氯甲烷的溶液，保持温度-18℃。然后在15min内，滴加7ml三乙胺，保持温度-18℃至-11℃。室温搅拌2h，用10％的磷酸二氢钠溶液洗(3X15ml)。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用丙酮洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得油状物3.6g，用手性制备色谱(Diacel’s Chiralpak AS)分离，用含30％甲醇的乙腈洗脱，收集第二个主峰，减压蒸干，得1.3g棕黄色固体。加入25ml乙腈，0.3g富马酸，加热回流至固体溶解，趁热过滤，将滤液冷却至5℃，放置过夜。过滤，干燥，得白色固体1.2g，熔点120-122℃，[α]D20-41.7°(c1.0，醋酸)。
参考实施例5 5’-[(S)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)-乙基]-胺基]-苯氧基磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基尿苷(PSI-7977)的制备
将2.1克(0.01mol)苯氧基-二氯氧磷和1.6克(0.01mol)L-丙氨酸异丙酯溶于30mL无水二氯甲烷中，冷却至-78℃。搅拌下滴加2ml三乙胺溶于20mL无水二氯甲烷的溶液，控制滴加速度以保持反应温度-78℃。加完后，待反应温度缓升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸出溶剂，在残留物中加入30ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得无色油状物，即为磷酰胺中间体V2，直接用于下步反应。
将1.5gβ-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基尿苷(济南中科一通化工有限公司，纯度98％)溶于30ml THF，然后加入3g N-甲基咪唑，加入V2溶于20ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第二个组分，减压蒸干，得到PSI-7977 0.21g。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：11.21(s，1H)；7.52(d，1H)；7.36-7.30(m，2H)；7.20-7.12(m，3H)；6.05-5.95(m，2H)；5.80(m，1H)；5.51(d，1H)；4.81(q，1H)；4.36-4.30(m，1H)；4.21-4.16(m，1H)；4.00-3.94(m，1H)；3.82-3.70(m，2H)；1.21(d，3H)；1.18(d，3H)；1.10(d，6H)。
参考实施例6 5’-[((苯氧基-1-异丙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(PSI-353661)的制备
参照参考实施例5的方法，用β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(济南中科一通化工有限公司，纯度98％)代替β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基尿苷，与磷酰胺中间体V2反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物PSI-353661。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：10.70(s，1H)；7.38-7.32(m，2H)；7.22-7.15(m，3H)；6.52(s，2H)；6.08-5.92(m，3H)；5.82(m，1H)；4.84(q，1H)；4.39-4.33(m，1H)；4.25-4.19(m，1H)；4.03-3.97m，1H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，2H)；1.24(d，3H)；1.22(d，3H)；1.12(d，6H)。
参考实施例7 9-[[[(苯氧基-1-甲氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-氧基]-乙氧基]-甲基]-鸟嘌呤(i-3)的制备
参照参考实施例3的方法，用阿昔洛韦代替拉米夫定，与磷酰胺中间体V1反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物i-3。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：10.65(s，1H)；7.83(s，1H)；7.38-7.14(m，5H)；6.53(s，2H)；6.00-5.93(m，1H)；5.36(s，2H)；4.13-4.05(m，2H)；3.85-3.80(m，1H)；3.72-3.63(m，2H)；3.59(s，3H)；1.23-1.19(m，3H)。
参考实施例8 2-氨基-1，9-二氢-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-((R)-((S)-1-乙氧基羰基乙胺基-酚氧基-磷酰基)-氧甲基)-2-亚甲基环戊基]-6H-嘌呤-6-酮(i-4)及2-氨基-1，9-二氢-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-((S)-((S)-1-异丙氧基羰基乙胺基-酚氧基-磷酰基)-氧甲基)-2-亚甲基环戊基]-6H-嘌呤-6-酮(i-5)的制备
将5.5g无水恩替卡韦溶于50ml THF，然后加入6g N-甲基咪唑，加入6.3gV2溶于30ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第一个组分，减压蒸干，得到i-40.20克；收集第二个组分，减压蒸干，得到i-50.24克。
i-4的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6，400MHz)：10.51(bs，1H)；7.63(s，1H)；7.39-7.35(m，2H)；7.22-7.17(m，3H)；6.09(m，1H)；6.45(s，2H)；5.32(m，1H)；5.06(m，1H)；4.89(d，1H)；4.85-4.83(m，2H)；4.52(m，1H)；4.40(m，1H)；4.23(m，1H)；3.51(m，2H)；2.52(m，1H)；2.22(m，1H)；2.04(m，1H)；1.19(d，3H)；1.16(d，6H)。
i-5的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6，400MHz)：10.54(bs，1H)；7.67(s，1H)；7.38-7.33(m，2H)；7.21-7.15(m，3H)；6.45(s，2H)；6.03(m，1H)；5.80(m，1H)；5.32(m，1H)；5.07(m，1H)；4.87-4.83(m，3H)；4.58(m，1H)；4.35(m，1H)；4.23(m， 1H)；3.51(m，2H)；2.50(m，1H)；2.21(m，1H)；2.03(m，1H)；1.21(d，3H)；1.13(d，6H)。
实施例1 9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I1)的制备
将13.7g9-[(膦酰基-甲氧基)-乙基]-腺嘌呤(PMEA)及13.8g4-羟基苯并[1，3]二氧五环加于100ml N-甲基吡咯烷酮中，加热至90℃搅拌，然后依次加入10ml三乙胺，20g二环己基碳二亚胺，于90℃加热搅拌15小时。自然冷却过夜，滤去固体；将滤液减压浓缩，将残留物用乙酸乙酯溶解，依次用碳酸钠饱和溶液(2X200ml)及氯化钠饱和溶液(2X200ml)洗涤，将有机层用无水硫酸钠干燥过夜，滤去干燥剂，将滤液减压蒸干，用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇(20∶1)混合溶剂洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得I13.2g。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.16(s，1H)，8.12(s，1H)，7.33(b，2H)，6.67-6.71(t，2H)；6.58-6.60(d，2H)；6.53-6.55(d，2H)；5.97-5.98(d，4H)，4.35-4.33(t，2H)，3.92-3.90(t，2H)，3.79-3.77(d，2H)。
实施例2 9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I2)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，3]二氧五环代替4-羟基苯并[1，3]二氧五环，与PMEA缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I2，产率14％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.15(s，1H)；8.11(s，1H)；7.32(b，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；4.35-4.33(t，2H)；3.93-3.91(t，2H)；3.80-3.78(d，2H)。
实施例3 9-[[[双-((苯并[1，4]二氧六环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I3)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，4]二氧六环代替4-羟基苯并[1，3]二氧五环，与PMEA缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I3，产率19％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.16(s，1H)；8.12(s，1H)； 7.33(b，2H)；6.58-6.62(t，2H)；6.51-6.53(d，2H)；6.41-6.43(d，2H)；4.35-4.33(t，2H)；4.20-4.24(m，8H)；3.92-3.90(t，2H)；3.79-3.77(d，2H)。
实施例4 9-[[[双-((苯并[1，4]二氧六环-6-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I4)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，4]二氧六环代替4-羟基苯并[1，3]二氧五环，与PMEA缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I4，产率14％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.16(s，1H)；8.12(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；4.35-4.33(t，2H)；4.20-4.24(m，8H)；3.92-3.90(t，2H)；3.79-3.77(d，2H)。
实施例5 9-[(R)-2-[[双-((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I5)的制备
参照实施例1的方法，用4-羟基苯并[1，3]二氧五环与9-(R)-[2-(膦酸甲氧基)-丙基]-腺嘌呤(R-PMPA)缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I5，产率23％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.60(b，2H)；6.67-6.71(t，2H)；6.58-6.60(d，2H)；6.53-6.55(d，2H)；5.97-5.98(s，4H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(d，2H)；3.79-3.77(d，2H)；1.29(d，3H)。
实施例6 9-[(R)-2-[[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I6)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与R-PMPA缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I6，产率19％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(d，2H)；3.79-3.77(d，2H)；1.29(d，3H)。
实施例7 2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-嘌呤(I7)的制备
参照实施例1的方法，用4-羟基苯并[1，3]二氧五环与2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[(膦酰基-甲氧基)-乙基]-嘌呤缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I7，产率14％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.89(s，1H)；7.54(d，2H)；7.32(b，2H)；6.91(d，2H)；6.67-6.71(t，2H)；6.58-6.60(d，2H)；6.53-6.55(d，2H)；5.97-5.98(s，4H)；4.35-4.33(t，2H)；3.93-3.91(t，2H)；3.89(s，3H)；3.80-3.78(d，2H)。
实施例8 2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-嘌呤(I8)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[(膦酰基-甲氧基)-乙基]-嘌呤缩合，经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物I8，产率16％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.89(s，1H)；7.54(d，2H)；7.32(b，2H)；6.91(d，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；4.35-4.33(t，2H)；3.93-3.91(t，2H)；3.89(s，3H)；3.80-3.78(d，2H)。
实施例9 [(3，5-二甲基-4-(4’-羟基-3’-异丙基苄基)苯氧基)-甲基]-膦酸-双-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-酯(I9)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与[(3，5-二甲基-4-(4’-羟基-3’-异丙基苄基)苯氧基)-甲基]-膦酸缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I9，产率27％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.99(s，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.71(s，2H)；6.68-6.53(m，7H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；4.03(d，2H)；3.77(s，2H)；3.02(m，1H)；2.15(s，6H)；1.08(d，6H)。
实施例10 [5-[2-氨基-5-(2-甲基丙基)-噻唑-4-基]-呋喃-2-基]-膦酸-双-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-酯(I10)的制备
参照实施例1的方法，用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与[5-[2-氨基-5-(2-甲基丙基)-噻唑-4-基]-呋喃-2-基]-膦酸缩合，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I10，产率14％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.32(b，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.50(d，1H)；6.49-6.47(d，2H)；6.45(d，1H)；5.99(s，4H)2.11(d，2H)；1.43(m，1H)；0.97(d，6H)。
实施例11 9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-磷酰氧基]-乙氧基]-甲基]-鸟嘌呤(I11)的制备
在100ml干燥的THF中加入4.5克无水阿昔洛韦，通氮气，将反应混合物搅拌冷却至-15℃至-20℃。搅拌下滴加2.8克三氯氧磷与8ml无水二氯甲烷的溶液，保持反应混合物的温度-15℃至-20℃，持续搅拌直到阿昔洛韦完全反应，将反应液减压蒸干，得到阿昔洛韦的二氯磷酸酯衍生物II1。
将II1用50ml无水二氯甲烷溶解，冷却至-78℃，搅拌下滴加8.3克4-羟 基苯并[1，3]二氧五环和6克新蒸三乙胺于50ml无水二氯甲烷的溶液。加完后搅拌，渐升至室温，搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用乙酸乙酯溶解，依次用碳酸钠饱和溶液(2X200ml)及氯化钠饱和溶液(2X200ml)洗涤，将有机层用无水硫酸钠干燥过夜，滤去干燥剂，将滤液减压蒸干，用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇(20∶1)混合溶剂洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得I111.2g。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：10.65(s，1H)；7.81(s，1H)；6.67-6.71(t，2H)；6.58-6.60(d，2H)；6.53-6.55(d，2H)；6.5(bs，2H)；5.35(s，2H)；5.97-5.98(s，4H)；4.1-4.0(t，2H)；3.7-3.6(t，2H)。
实施例12 9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰氧基]-乙氧基]-甲基]-鸟嘌呤(I12)的制备
参照实施例11的方法，用5-羟基苯并[1，3]二氧五环代替4-羟基苯并[1，3]二氧五环，与II1反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I12，产率17％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：10.65(s，1H)；7.81(s，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.5(bs，2H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；5.35(s，2H)；4.1-4.0(t，2H)；3.7-3.6(t，2H)。
实施例13 2-氨基-6-甲氧基-9-[[[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰氧基]-乙氧基]-甲基]-嘌呤(I13)的制备
参照实施例11的方法，用2-氨基-6-甲氧基-9-[(2-羟基乙氧基)-甲基]-嘌呤代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到2-氨基-6-甲氧基-9-[(2-二氯磷酰基氧基-乙氧基)-甲基]-嘌呤(II2)。
用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与II2反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I13，产率20％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.5(bs，2H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；5.35(s，2H)；3.91(s，3H)；4.1-4.0(t，2H)；3.7-3.6(t，2H)。
实施例14 5’-双-[((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰基]-2’，3’-二脱氧-3’-硫代-胞苷(I14)的制备
参照实施例11的方法，用拉米夫定代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到拉米夫定二氯磷酸酯衍生物II3。
用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与II3反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I14，产率12.0％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.71(d，1H)；7.30(b，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；6.25(t，1H)；5.99(s，4H)；5.74(d，1H)；5.38(t，1H)；4.29(m，2H)；3.89(m，1H)；3.06(m，2H)。
实施例15 9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-(双-(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰基)-氧甲基)-2-亚甲基环戊基]-鸟嘌呤(I15)的制备
参照实施例11的方法，用恩替卡韦代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到恩替卡韦的二氯磷酸酯衍生物II4。
用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与II4反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I15，产率23％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：10.54(bs，1H)；7.66(s，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；6.42(s，2H)； 5.99(s，4H)；5.36(m，1H)；5.10(m，1H)；4.87(d，1H)；4.84(m，1H)；4.56(m，1H)；4.23(m，1H)；3.53(m，2H)；2.52(m，1H)；2.22(m，1H)；2.04(m，1H)。
实施例16 2-氨基-6-甲氧基-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-(双-(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰基)-氧甲基)-2-亚甲基环戊基]-嘌呤(I16)的制备
参照实施例11的方法，用2-氨基-6-甲氧基-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-羟甲基)-2-亚甲基环戊基]-嘌呤代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到2-氨基-6-甲氧基-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-(二氯磷酰基氧甲基)-2-亚甲基环戊基]-嘌呤(II5)。
用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与II5反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I15，产率15％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.96(s，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；6.42(s，2H)；5.99(s，4H)；5.36(m，1H)；5.10(m，1H)；4.87(d，1H)；4.84(m，1H)；4.56(m，1H)；4.23(m，1H)；3.94(s，3H)；3.53(m，2H)；2.52(m，1H)；2.22(m，1H)；2.04(m，1H)。
实施例17 5’-O-[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基尿苷(I17)的制备
参照实施例11的方法，用2-氨基-6-甲氧基-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-羟甲基)-2-亚甲基环戊基]-嘌呤代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到2-氨基-6-甲氧基-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-(二氯磷酰基氧甲基)-2-亚甲基环戊基]-嘌呤(II6)
用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与II6反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I15，产率12.5％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：11.37(s，1H)；7.82(d，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；5.99(s，4H)；5.95(d，1H)；5.51(d，1H)；3.82-3.70(m，3H)；3.63-3.60(m，1H)；1.21(d，3H)。
实施例18 5’-O-[双-((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(I18)的制备
参照实施例11的方法，用5’-O-磷酰基-β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到5’-O-(二氯磷酰基)-β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(II7)。
用5-羟基苯并[1，3]二氧五环与II7反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I15，产率13.9％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.52(s，2H)；6.49-6.47(d，2H)；6.08-5.92(m，6H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，2H)；1.25(d，3H)。
实施例19 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-甲氧基羰基乙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I19)的制备
在150mlN-甲基吡咯烷酮中加入29.2g9-[(R)-2-(膦酸基甲氧基)-丙 基]-腺嘌呤(PMPA)，27.6g5-羟基苯并[1，3]二氧五环，加热至85℃，加入12ml三乙胺。搅拌下缓慢加入26g DCC，于100℃加热搅拌过夜，冷却后加入100ml水。放置，滤去固体，合并洗滤液，减压蒸干，加入100ml水，用25％的氢氧化钠调节pH至11，滤去固体，水洗，合并洗滤液，用30ml乙酸乙酯萃取。将水溶液用37％盐酸调节pH至3.1，放置析出固体。滤取固体，加入50ml甲醇搅拌洗涤，过滤，真空干燥，得9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(III1)的白色固体13.5g。
将上步产物III11.42g加于10ml乙腈中，搅拌下滴加1.3g氯化亚砜，保持温度50℃以下。将反应混合物于75℃加热至固体溶解，然后加热至80℃，蒸干，得9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-一氯-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(IV1)，直接用于下步反应。
将IV1用10ml干燥的二氯甲烷溶解，冷却至-30℃；在30min内，滴加1.3g L-丙氨酸甲酯于10ml二氯甲烷的溶液，保持温度-18℃。然后在15min内，滴加1.4ml三乙胺，保持温度-18℃至-11℃。室温搅拌2h，用10％的磷酸二氢钠溶液洗(3X10ml)。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用丙酮洗脱，收集所需组分，减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)混合溶剂洗脱，收集所需洗脱组分，得I190.41g。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.59(s，3H)；3.45(m，1H)；1.28(d，3H)；1.25(d，3H)。
实施例20 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-乙氧基羰基乙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I20)的制备
参照实施例19的方法，用L-丙氨酸乙酯代替L-丙氨酸甲酯与IV1反应，将反应产物用10％的磷酸二氢钠溶液洗(3X10ml)。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用丙酮洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得油状物0.73g，用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)混合溶剂洗脱，收集所需洗脱组分，得I190.41g。经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I20，产率11.3％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.62(m，2H)；3.45(m，1H)；1.28(d，3H)；1.25(d，3H)，1.15(m，3H)。
实施例21 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I21)及其异构体的制备
将2.84gIII1加于20ml乙腈中，搅拌下滴加2.6g氯化亚砜，保持温度50℃以下。将反应混合物于75℃加热至固体溶解，然后加热至80℃，蒸干，得IV1，直接用于下步反应。将IV1用20ml干燥的二氯甲烷溶解，冷却至-30℃；在30min内，滴加3.1gL-丙氨酸甲酯于20ml二氯甲烷的溶液，保持温度-18℃。然后在15min内，滴加2.8ml三乙胺，保持温度-18℃至-11℃。室温搅拌2h，用10％的磷酸二氢钠溶液洗(3X20ml)。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用丙酮洗脱，收集所需组分，减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶异丙醇(95∶5)混合溶剂洗脱，收集所需洗脱组分，减压蒸干，得I210.75g。
将I21用手性制备色谱(Diacel’s Chiralpak AS)分离，用含30％甲醇的乙腈洗脱，收集第一个主峰，减压蒸干，得9-[(R)-2-[[(R)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)-乙基]-胺基]-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I21-a)0.32g；收集第二个主峰，减压蒸干，得9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)-乙基]-胺基]-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I21-b)0.35g。
I21-a的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)； 7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.76(m，1H)；3.45(m，1H)；1.27(d，3H)；1.20(d，3H)；1.15(d，6H)。
I21-b的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.76(m，1H)；3.45(m，1H)；1.26(d，3H)；1.22(d，3H)；1.13(d，6H)。
实施例22 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基-2-甲基-丙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I22)的制备
参照实施例19的方法，用L-缬氨酸异丙酯代替L-丙氨酸甲酯与IV1反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I22，产率18.2％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.76(m，1H)；3.45(m，1H)；1.09-1.28(m，16H)。
实施例23 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基-3-甲基-丁胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I23)的制备
参照实施例19的方法，用L-亮氨酸异丙酯代替L-丙氨酸甲酯与IV1反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I23，产率12.8％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.76(m，1H)；3.45(m，1H)；1.09-1.28(m，18H)。
实施例24 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I24)的制备
参照实施例19的方法，用4-羟基苯并[1，3]二氧五环代替5-羟基苯并[1，3]二氧五环与PMPA反应，经类似方法处理及分离纯化，得到9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(III2)。
参照实施例19的方法，用III2代替III1与氯化亚砜反应，经类似方法处理及分离纯化，得到9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-一氯-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(IV2)。
参照实施例19的方法，用IV2代替IV1，与L-丙氨酸异丙酯反应，经类似方法处理及分离纯化，得I24，产率13.7％，核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.67-6.71(t，1H)；6.58-6.60(d，1H)；6.53-6.55(d，1H)；5.97(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.63(m，1H)；3.45(m，1H)；1.12-1.28(m，12H)。
实施例25 9-[(R)-2-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-环己氧基羰基乙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-丙基]-腺嘌呤(I25)的制备
参照实施例19的方法，用L-丙氨酸环己醇酯代替L-丙氨酸甲酯与IV1 反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I25，产率16.3％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.33(b，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.41(m，1H)；3.92-3.90(m，2H)；3.79-3.77(d，2H)；3.64(m，1H)；3.45(m，1H)；1.58(m，4H)，1.18-1.39(m，9H)。
实施例26 2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙基氧基羰基乙胺基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-嘌呤(I26)的制备
参照实施例19的方法，用2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[(膦酰基-甲氧基)-乙基]-嘌呤代替PMPA，与5-羟基苯并[1，3]二氧五环反应，经类似方法处理及分离纯化，得到2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-嘌呤(III3)。
参照实施例19的方法，用III3代替III1与氯化亚砜反应，经类似方法处理及分离纯化，得到2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-一氯膦酰基]-甲氧基]-乙基]-嘌呤(IV3)。
参照实施例19的方法，用IV3代替IV1，与L-丙氨酸异丙酯反应，经类似方法处理及分离纯化，得I26，产率10.4％，核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.89(s，1H)；7.54(d，2H)；7.32(b，2H)；6.91(d，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.35-4.33(t，2H)；3.93-3.91(t，2H)3.89(s，3H)；3.80-3.78(d，2H)；3.63(m，1H)；3.45(m，1H)；1.12-1.28(m，9H)。
实施例27 9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙基氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-氧基]-乙氧基]-甲基]-鸟嘌呤(I27)的制备
将15.3g三氯氧磷和13.8g5-羟基苯并二氧无环加于250ml无水乙醚溶液中，氩气保护下，冷却到-78℃，滴加13.4ml三乙胺，加完后在-78℃搅拌30分钟，然后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，得苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基-二氯氧磷备用。
将2.6克(0.01mol)苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基-二氯氧磷和1.6克(0.01mol)L-丙氨酸异丙酯溶于30mL无水二氯甲烷中，冷却至-78℃。搅拌下滴加2ml三乙胺溶于20mL无水二氯甲烷的溶液，控制滴加速度以保持反应温度-78℃。加完后，待反应温度缓升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸出溶剂， 在残留物中加入30ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得无色油状物，即为磷酰胺中间体V3，直接用于下步反应。
将0.22g阿昔洛韦溶于50ml THF，然后加入7ml吡啶，通氮气，加入1ml1M特丁基氯化镁的THF溶液，搅拌0.5h，搅拌下加入2ml1M V3的THF溶液，搅拌2h。于反应液中加入50ml二氯甲烷，100ml饱和氯化铵水溶液萃取后；分出有机层，水层用二氯甲烷萃取(3X50ml)，合并有机层，用饱和氯化钠水溶液洗，然后用无水硫酸镁干燥过夜，过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(100∶5∶1)混合溶剂洗脱，收集所需组分，蒸干后得到目标化合物I27 0.15g。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：10.65(s，1H)；7.81(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.5(bs，2H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.35(s，2H)；4.1-4.0(t，2H)；3.7-3.6(m，3H)；3.45(m，1H)；1.12-1.28(m，9H)。
实施例28 9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-环己基氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-氧基]-乙氧基]-甲基]-鸟嘌呤(I28)的制备
参照实施例27的方法，用L-丙氨酸环己醇酯代替L-丙氨酸异丙酯，与苯 并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基-二氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到磷酰胺中间体V4，直接用于下步反应。
用V4代替V3与阿昔洛韦反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I28，产率14.2％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：10.65(s，1H)；7.81(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.5(bs，2H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.35(s，2H)；4.1-4.0(t，2H)；3.7-3.6(m，3H)；3.45(m，1H)；1.55(m，4H)，1.15-1.37(m，9H)。
实施例29 2-氨基-6-甲氧基-9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙基氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-氧基]-乙氧基]-甲基]-嘌呤(I29)的制备
参照实施例27的方法，用2-氨基-6-甲氧基-9-[(2-羟基乙氧基)-甲基]-嘌呤代替阿昔洛韦与V3反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I29，产率16.9％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.5(bs，2H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.35(s，2H)；3.91(s， 3H)；4.1-4.0(t，2H)；3.7-3.6(m，3H)；3.45(m，1H)；1.12-1.28(m，9H)。
实施例30 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-乙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基尿苷(I30)的制备
参照实施例27的方法，用L-丙氨酸乙酯代替L-丙氨酸异丙酯，与苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基-二氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到磷酰胺中间体V5，直接用于下步反应。
参照实施例27的方法，用V5与β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基尿苷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I30，产率13.5％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：11.37(s，1H)；7.82(d，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.95(d，1H)；5.51(d，1H)；3.82-3.70(m，3H)；3.63-3.60(m，3H)；3.45(m，1H)；1.12-1.28(m，9H)。
实施例31 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基尿苷(I31)及其异构体的制备
将4.5gβ-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基尿苷(济南中科一通化工有限公司，纯度98％)溶于80ml THF，然后加入9g N-甲基咪唑，加入10.5gV3溶于50ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第一个主峰，减压蒸干，得I31-a0.28g；收集第二个主峰，减压蒸干，得I31-b0.23g。
I31-a的核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：11.37(s，1H)；7.82(d，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.95(d，1H)；5.51(d，1H)；3.82-3.70(m，3H)；3.63-3.60(m，2H)；3.45(m，1H)；1.25(d，3H)；1.20(d，3H)；1.15(d，6H)。
I31-b的核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：11.37(s，1H)；7.82(d，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.95(d，1H)；5.51(d，1H)；3.82-3.70(m，3H)；3.63-3.60(m，2H)；3.45(m，1H)；1.24(d，3H)；1.21(d，3H)；1.14(d，6H)。
实施例32 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-环己基氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基尿苷(I32)的制备
参照实施例27的方法，用2-氨基-6-甲氧基-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-羟甲基)-2-亚甲基环戊基]-嘌呤与V4反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I32，产率9.8％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：11.37(s，1H)；7.82(d，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；5.95(d，1H)；5.51(d，1H)；3.82-3.70(m，3H)；3.63-3.60(m，2H)；3.45(m，1H)；1.55(m，4H)，1.15-1.37(m，12H)。
实施例33 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-乙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(I33)的制备
参照实施例27的方法，用V5与β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I33，产率24.2％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.52(s，2H)；6.49-6.47(d，1H)；6.08-5.92(m，4H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，2H)；3.62(m，2H)；3.45(m，1H)；1.25(d，3H)；1.21(d，3H)，1.15(m，3H)。
实施例34 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(I34)及其异构体的制备
将6.0gβ-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(济南中科一通化工有限公司，纯度98％)溶于80ml THF，然后加入9g N-甲基咪唑，加入10.5g V3溶于50ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。 将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第一个主峰，减压蒸干，得I34-a0.31g；收集第二个主峰，减压蒸干，得I34-b0.25g。
I34-a的核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.52(s，2H)；6.49-6.47(d，1H)；6.08-5.92(m，4H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，3H)；3.45(m，1H)；1.25(d，3H)；1.22(d，3H)；1.14(d，6H)。
I34-b的核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.52(s，2H)；6.49-6.47(d，1H)；6.08-5.92(m，4H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，3H)；3.45(m，1H)；1.24(d，3H)；1.21(d，3H)；1.13(d，6H)。
实施例35 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-环己氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(I35)的制备
参照实施例27的方法，用5’-O-磷酰基-β-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’- β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷与V4反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I35，产率13.0％。核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.52(s，2H)；6.49-6.47(d，1H)；6.08-5.92(m，4H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，3H)；3.45(m，1H)；1.55(m，4H)；1.15-1.37(m，12H)。
实施例36 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-2’，3’-二脱氧-3’-硫代-胞苷(I36)的制备
参照实施例27的方法，用拉米夫定代替阿昔洛韦与V3反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I36。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.68(d，1H)；7.26(s，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；6.23(t，1H)；6.11(m，1H)；5.99(s，2H)；5.72(d，1H)；5.35(t，1H)；4.27(m，2H)；3.88(m，1H)；3.61(m，1H)；3.42(q，1H)；3.05(m，2H)；1.21(d，3H)；1.12(d，6H)。
实施例37 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-甲氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-2’，3’-二脱氧-3’-硫代-胞苷(I37)的制备
参照实施例27的方法，用L-丙氨酸甲酯代替L-丙氨酸异丙酯，与苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基-二氯氧磷反应，经类似方法处理及分离纯化，得到磷酰胺中间体V6，直接用于下步反应。
参照实施例27的方法，用V6与拉米夫定反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I37，产率21.7％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.68(d，1H)；7.26(s，2H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；6.23(t，1H)；6.11(m，1H)；5.99(s，2H)；5.72(d，1H)；5.35(t，1H)；4.27(m，2H)；3.88(m，1H)；3.58(s，3H)；3.42(q，1H)；3.05(m，2H)；1.21(d，3H)。
实施例38 9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基-磷酰基)-氧甲基]-2-亚甲基环戊基]-鸟嘌呤(I38)及其异构体的制备
将8.25g恩替卡韦溶于80ml THF，然后加入9g N-甲基咪唑，加入10.5gV3溶于50mlTHF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第一个主峰，减压蒸干，得I39-a0.28g；收集第二个主峰，减压蒸干，得I39-b0.22g。
I39-a的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6，400MHz)：10.51(bs，1H)；7.63(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；6.09(m，1H)；6.45(s，2H)；5.99(s，2H)；5.32(m，1H)；5.06(m，1H)；4.89(d，1H)；4.85-4.83(m，2H)；4.52(m，1H)；4.40(m，1H)；4.23(m，1H)；3.51(m，2H)；2.52(m，1H)；2.22(m，1H)；2.04(m，1H)；1.19(d，3H)；1.16(d，6H)。
I39-b的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6，400MHz)：10.54(bs，1H)；7.67(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.49-6.47(d，1H)；6.45(s，2H)；5.98-6.03(m，3H)；5.80(m，1H)；5.32(m，1H)；5.07(m，1H)；4.87-4.83(m，3H)；4.58(m，1H)；4.35(m，1H)；4.23(m，1H)；3.51(m，2H)；2.50(m，1H)；2.21(m，1H)；2.03(m，1H)；1.21(d，3H)；1.13(d，6H)。
实施例39 9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-[(((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基-磷酰基)-氧甲基]-2-亚甲基环戊基]-鸟嘌呤(I39)的制备
将15.3g三氯氧磷和13.8g4-羟基苯并二氧无环加于250ml无水乙醚溶液中，氩气保护下，冷却到-78℃，滴加13.4ml三乙胺，加完后在-78℃搅拌30分钟，然后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，得苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基-二氯氧磷备用。
将2.6克(0.01mol)苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基-二氯氧磷和1.6克(0.01mol)L-丙氨酸异丙酯溶于30mL无水二氯甲烷中，冷却至-78℃。搅拌下滴加2ml三乙胺溶于20mL无水二氯甲烷的溶液，控制滴加速度以保持反应温度-78℃。加完后，待反应温度缓升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸出溶剂，在残留物中加入30ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得无色油状物，即为磷酰胺中间体V7，直接用于下步反应。
将8.25g恩替卡韦溶于80ml THF，然后加入9g N-甲基咪唑，加入10.5gV7溶于50mlTHF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第一个主峰，减压蒸干，得I39-a0.27g；收集第二个主峰，减压蒸干，得I39-b0.20g。
I39-a的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6，400MHz)：10.51(bs，1H)；7.63(s，1H)；6.67-6.71(t，1H)；6.58-6.60(d，1H)；6.53-6.55(d，1H)；6.09(m，1H)；6.45(s，2H)；5.99(s，2H)；5.32(m，1H)；5.06(m，1H)；4.89(d，1H)；4.85-4.83(m，2H)；4.52(m，1H)；4.40(m，1H)；4.23(m，1H)；3.51(m，2H)；2.52(m，1H)；2.22(m，1H)；2.04(m，1H)；1.19(d，3H)；1.16(d，6H)。
I39-b的核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6，400MHz)：10.54(bs，1H)；7.67(s，1H)；6.67-6.71(t，1H)；6.58-6.60(d，1H)；6.53-6.55(d，1H)；6.45(s，2H)；5.98-6.03(m，3H)；5.80(m，1H)；5.32(m，1H)；5.07(m，1H)；4.87-4.83(m，3H)；4.58(m，1H)；4.35(m，1H)；4.23(m，1H)；3.51(m，2H)；2.50(m，1H)；2.21(m，1H)；2.03(m，1H)；1.21(d，3H)；1.13(d，6H)。
实施例40 5’-[((((苯并[1，3]二氧五环-4-基)-氧基)-1-异丙氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(I40)及其异构体的制备
将6.0gβ-D-2’-脱氧-2’-a-氟-2’-β-C-甲基-6-O-甲基鸟苷(济南中科一通化工有限公司，纯度98％)溶于80ml THF，然后加入9g N-甲基咪唑，加入10.5g V7溶于50ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用含2％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干。将残留物用含20％异丙醇的乙腈溶解，用手性制备色谱分离，色谱柱为Diacel’s Chiralpak AS，流动相为含20％异丙醇的乙腈溶液，流速8ml/min，收集第一个主峰，减压蒸干，得I40-a0.22g；收集第二个主峰，减压蒸干，得I40-b0.24g。
I40-a的核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.67-6.71(t，1H)；6.58-6.60(d，1H)；6.53-6.55(d，1H)；6.52(s，2H)；6.08-5.92(m，4H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，3H)；3.45(m，1H)；1.25(d，3H)；1.22(d，3H)；1.14(d，6H)。
I40-b的核磁共振氢谱(ppm，DMSO-d6)：7.98(s，1H)；6.67-6.71(t，1H)；6.58-6.60(d，1H)；6.52-6.55(m，3H)；6.08-5.92(m，4H)；3.91(s，3H)；3.85-3.73(m，3H)；3.45(m，1H)；1.25(d，3H)；1.20(d，3H)；1.13(d，6H)。
实施例41 9-[[[(((苯并[1，3]二氧五环-5-基)-氧基)-1-甲氧基羰基乙胺基)-磷酰基]-氧基]-乙氧基]-甲基]-鸟嘌呤(I41)的制备
参照实施例27的方法，用V6代替V3与阿昔洛韦反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I41，产率23.3％。7.83(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.68(s，1H)；6.5(bs，2H)；6.49-6.47(d，1H)；6.00-5.93(m，3H)；5.36(s，2H)；4.13-4.05(m，2H)；3.85-3.80(m，1H)；3.72-3.63(m，2H)；3.59(s，3H)；1.23-1.19(m，3H)。
实施例42 [(3，5-二甲基-4-(4’-羟基-3’-异丙基苄基)苯氧基)-甲基]-膦酸-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-酯-(1-异丙氧基羰基乙胺基)-膦酰胺(I42)的制备
参照实施例19的方法，用[(3，5-二甲基-4-(4’-羟基-3’-异丙基苄基)苯氧基)-甲基]-膦酸代替PMPA，与5-羟基苯并[1，3]二氧五环反应，经类似方法处理及分离纯化，得到[(3，5-二甲基-4-(4’-羟基-3’-异丙基苄基)苯氧基)-甲基]-膦酸-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-单酯(III4)。
参照实施例19的方法，用III4代替III1与氯化亚砜反应，经类似方法处理及分离纯化，得到[(3，5-二甲基-4-(4’-羟基-3’-异丙基苄基)苯氧基)-甲基]-膦酸-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-单酯单膦酰氯(IV4)。
参照实施例19的方法，用IV4代替IV1，与L-丙氨酸异丙酯反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I42，产率15.5％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：8.99(s，1H)；6.77-6.75(d，1H)；6.71(s，1H)；6.68-6.53(m，7H)；6.49-6.47(d，1H)；5.99(s，2H)；4.03(d，2H)；3.77(s，2H)；3.63(m，1H)；3.45(m，1H)；3.02(m，1H)；2.15(s，6H)；1.05-1.23(m，15H)。
实施例43 [5-[2-氨基-5-(2-甲基丙基)-噻唑-4-基]-呋喃-2-基]-膦酸-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-酯-(1-异丙氧基羰基乙胺基)-膦酰胺(I43)的制备
参照实施例19的方法，用[5-[2-氨基-5-(2-甲基丙基)-噻唑-4-基]-呋喃-2-基]-膦酸PMPA，与5-羟基苯并[1，3]二氧五环反应，经类似方法处理及分离纯化，得到[5-[2-氨基-5-(2-甲基丙基)-噻唑-4-基]-呋喃-2-基]-膦酸-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-单酯(III5)。
参照实施例19的方法，用III5代替III1与氯化亚砜反应，经类似方法处理及分离纯化，得到[5-[2-氨基-5-(2-甲基丙基)-噻唑-4-基]-呋喃-2-基]-膦酸-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)-单酯单膦酰氯(IV5)。
参照实施例19的方法，用IV5代替IV1，与L-丙氨酸异丙酯反应，经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物I43，产率11％。核磁共振氢谱δ(ppm，DMSO-d6)：7.32(b，2H)；6.77-6.75(d，2H)；6.68(s，2H)；6.50(d，1H)；6.49-6.47(d，2H)；6.45(d，1H)；5.99(s，4H)；3.63(m，1H)；3.45(m，1H)；2.11(d，2H)；1.43(m，1H)；0.98-1.24(m，15H)。
实施例44 体外抗HBV活性筛选
Hep G 2.2.15细胞接种于96孔板中，细胞数3.5x104个培养，置CO2培养箱中孵育至细胞密度达到80％，弃去培养液，加入含不同浓度待测药物的新培养液，设置3个平行孔；每隔2天更换培养液。在给药后第10天，取100μl上清，通过定量PCR的方法，测定HBV DNA的含量，计算IC50值。结果见表1。
表1 体外抗HBV活性筛选结果
实施例45 体外细胞毒性评价
Hep G2.2.15细胞接种于96孔板中，细胞数5.5x104个，继续培养3天，加入含不同浓度药物的新培养液，设置3个平行孔；在给药后第3天，加入MTT至7.5mg/ml，继续培养2小时，弃去上清，加入含10％吐温X-100异丙醇，120μl/孔，再加入0.4μl/孔，用酶联仪测定540nm处的吸收，计算50％CC50值。结果见表2。
表2 细胞毒性评价结果
实施例46 肝靶向性评价
采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定目标化合物小鼠灌胃给药后不同时间点血液和肝组织中的活性药物(游离膦酸或游离磷酸)浓度/含量，计算肝/血药物浓度比值，比较肝靶向性。
仪器：美国Finnigan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪(LC/MS/MS)，由Finnigan Surveyor LC泵、Surveyor AS自动进样器、电喷雾离子化电离源(ESI)及三级串联质谱组成。控制软件为Xcalibur 1.4，质谱数据分析采用Lcquan 2.0数据处理系统。色谱柱为Discovery ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)，C18保护柱(4mm×3.0mm)，流动相为甲醇-水-甲酸(10-30∶90-70∶0.5，V/V/V)，流速0.7ml/min；进样量20μL；柱温为室温。
动物实验
Balb/C小鼠，雄性，禁食16h，随机分为3组，每组3只，分别灌胃给予分别灌胃给予磷霉素(200mg/kg)或等摩尔剂量的目标化合物的羧甲基纤维素钠的悬浮液，分别于给药后1小时和6小时采血离心取血清，同时取肝组织制备匀浆，离心取上清；测定血液和肝组织中的活性药物(游离膦酸或游离磷酸)浓度/含量，计算肝/血药物浓度比值。结果见表3。
表3 肝靶向性评价结果
实施例47 抗CCl4所致小鼠肝损伤作用的评价
昆明种小鼠(20g)，随机分组(每组8只)。通过口服给予0.2mmol的待测化合物；给药1h后，皮下注射0.1％CCl4的花生油溶液(10mL/kg)，制备肝损伤模型；注射生理盐水作为正常对照组。造模后12小时后，再次口服给予0.2mmol的待测化合物。第二次给药后24小时，采血取血清标本，测定ALT，AST。结果见表4。
表4 抗CCl4中毒所致小鼠肝损伤的作用
化合物 ALT(U/L) AST(U/L) 化合物 ALT(U/L) AST(U/L)
正常对照 75 946 生理盐水 1562 2408
i-1 2930 2943 I<sub>1</sub> 328 433
i-2 3482 3660 I<sub>2</sub> 435 764
Cf1109 2048 3351 I29 307 561
GS-7340 2483 2645 I<sub>31</sub>-a 507 446
PSI-7977 2324 2538 I<sub>31</sub>-b 205 439
PSI-353661 1669 2312 I<sub>34</sub>-a 293 763
i-3 231 446 I<sub>34</sub>-b 289 536
i-4 102 592 I<sub>36</sub> 490 543
i-5 551 641 I<sub>38</sub>-a 410 289
I<sub>21</sub>-a 353 191 I<sub>38</sub>-b 162 387
I<sub>21</sub>-b 251 152 I<sub>42</sub> 653 710
I<sub>26</sub> 521 363 I<sub>43</sub> 507 280
I<sub>27</sub> 663 940
实施例48 抗D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤作用的评价
昆明种小鼠(20g)，随机分组(每组8只)。通过口服给予0.2mmol的待测化 合物；给药2h后，按750mg/kg的剂量腹腔注射给予D-氨基半乳糖制备肝损伤模型，皮下注射生理盐水作为正常对照组。造模12h后，再次口服给予0.2mmol的待测化合物。第二次给药后24小时，采血取血清标本，测定ALT，AST。结果见表5。
表5 抗D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤的作用
化合物 ALT(U/L) AST(U/L) 化合物 ALT(U/L) AST(U/L)
正常对照 58 193 生理盐水 1255 1490
i-1 1227 1456 I<sub>1</sub> 679 796
i-2 1374 1812 I<sub>2</sub> 514 560
Cfl109 191 140 I<sub>29</sub> 301 510
GS-7340 1064 1320 I<sub>31</sub>-a 421 253
PSI-7977 1079 1727 I<sub>31</sub>-b 375 751
PSI-353661 1558 1027 I<sub>34</sub>-a 131 282
i-3 1150 1419 I<sub>34</sub>-b 341 194
i-4 1451 1356 I<sub>36</sub> 187 113
i-5 1512 1646 I<sub>38</sub>-a 177 275
I<sub>21</sub>-a 379 169 I<sub>38</sub>-b 217 493
I<sub>21</sub>-b 514 268 I<sub>42</sub> 1491 346
I<sub>26</sub> 212 586 I<sub>43</sub> 256 517
I<sub>27</sub> 713 522
实施例49 体内抗乙肝病毒作用的评价
将垂直传播感染、DHBV DNA检测阳性的麻鸭随机分组，每组5只。分别灌胃给予水及不同剂量的待测化合物，每天一次，给药14天。分别在给药前、给药14天及停药后第7天时静脉采血，采用外标准TaqMan实时荧光PCR法测定血清DHBV DNA含量，与溶剂组比较，计算抑制率。结果见表6：
表6 体内抗乙肝病毒的作用
。

Claims (5)

1.磷酸衍生物或其非毒性药学上可接受的盐，选自如下结构：
2.磷酸衍生物或其非毒性药学上可接受的盐，选自如下结构：
3.一种药物组合物，其特征在于含有权利要求1或2所述的磷酸衍生物或其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分，以及一种或者多种药用载体。
4.权利要求1或2所述的磷酸衍生物及其非毒性药学上可接受的盐在制备治疗肝炎药物中的用途。
5.权利要求1或2所述的磷酸衍生物及其非毒性药学上可接受的盐在制备治疗病毒性肝炎药物中的用途。
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