CN104761604A - 尿嘧啶核苷酸类似物及其制备方法和应用 - Google Patents

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    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses

Abstract

本发明涉及尿嘧啶核苷酸类似物及其制备方法和应用。具体而言，本发明提供了具有下式（I）化合物尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐及其制备方法和应用。这些化合物是RNA依赖性RNA病毒复制的抑制剂，并且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制剂、HCV复制的抑制剂以及用于治疗哺乳动物的丙型肝炎感染，具有广阔的应用前景，有望开发成新一代抗病毒药。

Description

尿嘧啶核苷酸类似物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种尿嘧啶核苷酸类似物及其制备方法和应用。
背景技术
黄病毒科家族的病毒包括至少三种不同的属：瘟病毒属(pestiviruses)，其在牛和猪中引起疾病；黄病毒属(flavivruses)，其为诸如登革热和黄热病等疾病的主要原因；以及丙型肝炎病毒属(hepaciviruses)，其唯一成员为HCV。黄病毒属包括的成员超过68个，基于血清学亲缘关系进行分组。临床症状各异并且包括发热、脑炎和出血热。全球所关注的与人类疾病有关的黄病毒属包括登革出血热病毒(DHF)、黄热病病毒、休克综合征病毒和日本脑炎病毒。由于HCV基因组在结构和表型特征上与人黄病毒和瘟病毒相类似，将其归为黄病毒科HCV。丙型肝炎病毒是正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。HCV仅有Huh7，Huh7.5，Huh7.5.1三种体外细胞培养系统。丙型肝炎病毒于1974年被首次发现，1989年美国科学家迈克尔·侯顿(Michael Houghton)和他的同事们利用分子生物学方法找到了该病毒的基因序列，并克隆出了丙肝病毒，命名本病及其病毒为丙型肝炎(Hepatitis C)和丙型肝炎病毒(HCV)。
HCV病毒体是包膜的正链RNA病毒，HCV-RNA大约有9500-10000bp组成，5′和3′非编码区(NCR)分别有319-341bp，和27-55bp，含有几个顺向和反向重复序列，可能与基因复制有关，基因组排列顺序为5'-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3'，能编码一长度大约为3014个氨基酸的多聚蛋白前体，后者可经宿主细胞和病毒自身蛋白酶作用后，裂解成10种病毒蛋白，包括三种结构蛋白，即分子量19KD的核衣壳蛋白（或称核心蛋白，Core）和两种糖蛋白（分子量为33KD的E1蛋白，分子量72Kd的E2蛋白），p7编码一种膜内在蛋白，其功能可能是一种离子通道。非结构蛋白部分则包括NS2，NS3，NS4A，NS5A和NS5B，非结构蛋白对比病毒的生活周期非常重要。NS2和NS3具有蛋白酶活性，参与病毒多聚蛋白前体的切割。此外，NS3蛋白还具有螺旋酶活性，参与解旋HCV-RNA分子，以协助RNA复制，NS4的功能尚不清楚。NS5A是一种磷酸蛋白，可以与多种宿主细胞蛋白相互作用，对于病毒的复制起重要作用。而NS5B则具有RNA依赖的RNA聚合酶活性，参与HCV基因组复制，因此，NS5B聚合酶被认为是HCV复制复合体中的必要组成部分。HCV NS5B聚合酶的抑制阻止了双链HCV RNA的形成，因此构成了开发HCV特异性抗病毒疗法的具吸引力的途径。
HCV具有显著异源性和高度可变性，对已知全部基因组序列的HCV株进行分析比较其核苷酸和氨基酸序列存在较大差异。并表现HCV基因组各部位的变异程度不相一致，如5′-CR最保守，同源性在92-100%，而3′NCR区变异程度较高，在HCV的编码基因中，C区最保守、非结构(NS)区次之，编码囊膜蛋白E2/NS1可变性最高称为高可变区。现知欧美国家多数HCV-I型感染，而亚洲国家以II型为主，III型次之。Okomoto报告日本慢性丙型肝炎患者和健康献血员主要为II型感染，分别占59.3%和82.4%，而血友病人约50%为I型感染，原因是应用输入美国进口凝因子VIII。Wang氏报告我国北京慢性丙型肝炎患者86.2%为II型感染，III型感染为13.8%。而新疆病人III型感染却占50%，说明不同型HCV具有一定的地区和人群分布特征。此外，不同基因型感染引起临床过程和干扰素治疗反应亦表现不同，如III型感染临床症状较重，有引起严惩肝病倾向：II型(Simmonds1b)感染对干扰素治疗不敏感效果差，III型感染(Simononds2a)用干扰素治疗效果好。
丙型肝炎病毒(HCV)已经严重危及人类健康，其在大量的受感染个体（据估计为全世界人口的2-15％）中导致慢性肝脏疾病如肝硬化和肝细胞癌。根据美国疾病控制中心估计，仅在美国就有四百五十万人受感染。根据世界卫生组织，全世界有超过2亿的受感染个体，每年至少有3至4百万人被感染。一旦被感染后，大约20％的人能清除该病毒，但是剩余的人可能在他们的余生中携带HCV。10％至20％的慢性感染个体最终发展成肝脏破坏性的硬化或癌症。该病毒性疾病在胃肠外通过被污染的血液和血液制品、被污染的针传播；或者通过性传播；以及从被感染的母亲或携带者母亲垂直传播给她们的后代。当前用于HCV感染的治疗限于重组干扰素α单独或与核苷类似物利巴韦林相结合免疫疗法，其具有有限的临床益处。
丙型肝炎发病机理仍未十分清楚，当HCV在肝细胞内复制引起肝细胞结构和功能改变或干扰肝细胞蛋白合成，可造成肝细胞变性坏死，表明HCV直接损害肝脏，导致发病起一定作用。但多数学者认为细胞免疫病理反应可能起重要作用，发现丙型肝炎与乙型肝炎一样，其组织浸润细胞以CD3+为主，细胞毒T细胞(TC)特异攻击HCV感染的靶细胞，可引起肝细胞损伤。无论是急性丙型肝炎，还是慢性丙型肝炎，标准治疗方案都是聚乙二醇干扰素(α-2a或α-2b)联合利巴韦林。这也是唯一有效治疗丙型肝炎的方案。聚乙二醇干扰素α由于一周一次给药，给药次数大大减少，方便了病人用药，相对于普通干扰素的一周三次或隔日一次，聚乙二醇干扰素又称为长效干扰素。两种长效干扰素联合利巴韦林的直接比较临床试验表明：12KD的聚乙二醇干扰素α-2b的复发率明显低于40KD聚乙二醇干扰素α-2a，原因可能与抗病毒活性及分子大小引起的药物分布有关。一般认为，聚乙二醇的分子量越大，抗病毒活性越低，12KD的聚乙二醇干扰素α-2b的活性明显高于40KD的长效干扰素；而且，12KD的长效干扰素可以全身分布，不仅清除肝内的主要病毒，更可以清除淋巴结、肾脏、脾脏、肾上腺、唾液腺等肝外病毒，故停药后的复发率较低。40KD大分子聚乙二醇干扰素由于分子过大，限于血管和肝内分布，对肝外的病毒清除不利。不仅加重肝脏负担，排泄慢，而且由于不经过肾脏排泄，当发生不良反应时撤药困难。一般认为，由于头对头比较的IDEAL试验结果的公布，12KD聚乙二醇干扰素α-2b应作为治疗丙型肝炎的优先用药。
目前，对于受丙型肝炎病毒感染的个体具有有限的治疗选择。现今已批准的治疗选择是重组干扰素α单独或与核苷类似物利巴韦林相结合的免疫疗法的使用。这种疗法受其临床效果的限制，并且仅有50％的受治疗患者对该疗法有响应。因此，需要发展更为有效和新型的疗法，以解决由HCV感染造成的未被满足的医疗需求。
目前已经能够确认的可以作为抗HCV治疗剂的药物开发的一些潜在的分子靶点，包括但不限于NS2-NS3自体蛋白酶(autoprotease)、N3蛋白酶、N3解旋酶和NS5B聚合酶。RNA依赖性RNA聚合酶对单链RNA基因组复制绝对重要，该聚合酶已引起了药物化学家的显著兴趣。NS5B聚合酶的核苷抑制剂可用作导致链终止的非天然底物，或者用作与核苷酸竞争结合于聚合酶的竞争性抑制剂。为了起链终止剂的作用，核苷类似物必须被细胞摄取并在体内转化为三磷酸酯来竞争聚合酶核苷酸结合部位。三磷酸酯的这种转化通常由细胞激酶介导，该细胞激酶对潜在的核苷聚合酶抑制剂提出额外的结构要求。遗憾的是，这就将核苷作为HCV复制抑制剂的直接评价限制于能够原位磷酸化的基于细胞的分析。
在一些情况中，核苷的生物活性受到相对于一种或多种激酶而言较差的底物特性阻碍，而所述底物特性是将该核苷转化为活性的三磷酸酯形式所需的。通过核苷激酶的单磷酸酯的形成一般被认为是三磷酸化过程中的限速步骤。为了避免从核苷至活性三磷酸酯类似物的代谢中第一步的磷酸化，稳定的磷酸酯前药制品已经被文献报道。核苷氨基磷酸酯前药是活性核苷三磷酸酯的前体，应当用于病毒感染的全细胞时抑制病毒复制。
限制核苷作为可行的治疗剂应用的还有它们有时较差的物理化学和药物代谢动力学性质。这些较差的性质可以限制药剂的肠内吸收并且限制摄取进入靶组织或细胞。为了改善它们的性质，采用了该核苷的前药。已经证实核苷氨基磷酸酯前药改善了核苷的系统吸收，再者，这些“原核苷酸”的氨基磷酸酯部分被中性的亲脂性基团掩蔽而获得合适的分配系数来优化摄取和进入细胞的转运，从而相对于单用母体核苷，显著地提高了核苷单磷酸酯类似物的细胞内浓度。磷酸酯部分的酶介导水解会产生核苷单磷酸酯，就不需要起始的单磷酸化限速步。
近年来研究该类核苷单磷酸酯类似物的专利主要有PHARMASSET公司开发的WO2008121634A2、WO2010075517A2，CHIMERIX公司开发的WO2010135520A1，ALIOS BIOPHARMA公司开发的WO2012040127A1、WO2012088155A1，MERCKSHARP&DOHME CORP公司开发的WO2012142075A1、WO2012142085A1、WO2013009737A1，但是，到目前为止，还没有相关抗丙型肝炎产品上市，因此，进一步开发该类核苷单磷酸酯类似物成为一种重要的策略。
发明内容
发明人在研究过程中发现一类尿嘧啶核苷酸类似物，这些新型化合物是RNA依赖性RNA病毒复制的抑制剂，并且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制剂、HCV复制的抑制剂以及用于治疗哺乳动物的丙型肝炎感染，具有广阔的应用前景，有望开发成新一代抗病毒药。
本发明一方面提供一种具有如下式(I)化合物尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
其中，Z选自氧或硫；
R1选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，
或者
R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环，
其中所述的C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3选自氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R4选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷甲基、卤取代C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷基硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5；
R5、R6、R7选自氢、Cl-4烷基、C3-8环烷基；
m为0、1、2、3、4。
r为0、1、2
本文所述的“5-7元碳环”是指含有5-7个碳原子的全碳环，包括环烷基或芳基，“5-7元杂环”是指含一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳的包含5至7个环原子的环基。
作为优先的方案，当Z选自氧时，其结构式如式(II)化合物，
其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，
其中所述的C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基，
其中所述的C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8链炔基进一步被一个或多个选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基或5-10元杂芳基硫基的取代基所取代；R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式（I）化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
最优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基，
其中所述的C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
最优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为最优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环，
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环选自如下结构：
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
最优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环选自如下结构：
作为优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，Z选自硫，结构式如式(III)化合物，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R4选自卤素、羟基、巯基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷甲基、卤取代C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷基硫基；R1、R2、R3、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R3选自氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4选自氟、甲基、三氟甲基、环丙基、环丙甲基；R1、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R3选自氢、C1-4烷基、环丙基、环己基或苯基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4选自甲基；R1、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自氢、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基，其中所述的C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8链炔基进一步被一个或多个选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基或5-10元杂芳基硫基的取代基所取代；R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基，其中所述的C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7；R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环，其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环选自如下结构：
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐选自如下化合物：
作为最优选的方案，前述尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其立体异构体为S构型，结构如下：
本发明另一方面提供一种所述式(I)化合物尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，包括如下步骤：
任选进一步包括柱层析分离得到其立体异构体，或者通过以下步骤得到其立体异构体：
其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
本发明再一方面提供一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的所述式(I)化合物尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
本发明又一方面提供所述式(I)化合物的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐或前述药物组合物在制备用于治疗丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、西尼罗病毒、黄热病病毒、登革病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、牛病毒性腹泻病毒或日本脑炎病毒感染所引起的疾病的药物中的应用。
具体实施方式
详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“C1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团，C0-8是指不含碳原子或者C1-8烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体等。
烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C3-8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，“5-10元环烷基”指包括5至10个碳原子的环烷基，例如：
单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。
多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：
“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，稠环烷基的非限制性实施例包含：
“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。
环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“5-10元杂环基”指包含5至10个环原子的环基，“3-8元杂环基”指包含3至8个环原子的环基。
单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。
多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺杂环基”指单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基。螺环烷基的非限制性实施例包含：
“稠杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，稠杂环基的非限制性实施例包含：
“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含：
杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“芳基”指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，“C5-10芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，“5-10元芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，5-7元杂芳基指含有5-7个环原子的杂芳族体系，5-10元杂芳基指含有5-10个环原子的杂芳族体系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：
杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基，C2-8链烯基指含有2-8个碳的直链或含支链烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。
烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，C2-8链炔基指含有2-8个碳的直链或含支链炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。C1-8烷氧基指含1-8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“环烷氧基”指和-O-(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。C3-8环烷氧基指含3-8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“卤取代的C1-8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“卤取代的C1-8烷氧基”烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷氧基基团。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18150×4.6mm色谱柱)和Waters2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
在无特殊说明的情况下，实施例中的溶液是指水溶液。反应的温度为室温。室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)或液质连用色谱(LC-MS)反应所使用的展开剂体系有：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，石油醚和乙酸乙酯体系，丙酮，溶剂的体积比可根据化合物的极性不同而进行调节。柱层析的洗脱剂的体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和乙酸乙酯体系，D：乙酸乙酯和甲醇，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的氨水和醋酸等进行调节。
实施例一
第一步异丙基((2-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯二氯化磷(320mg,1.25mmol)溶于CH2Cl2(2.5mL)中，冷却至-78℃，2-环丙基苯酚(185mg,1.38mmol)和TEA(192L,1.38mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液逐滴滴入，在此温度下反应30分钟后逐渐升温至0℃，此反应液逐滴滴入到0℃下冷却的L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(210mg,1.25mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液中，随后TEA(366L,2.63mmol)逐滴加入反应体系，在0℃下搅拌1小时，减压下浓缩反应液，反应瓶中加入EtOAc(20mL)，过滤白色固体，滤液浓缩得到黄色油状液体。柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=5:1)得到标题化合物异丙基((2-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(395mg,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.16-8.23(m,2H),7.33-7.42(m,3H),7.05-7.15(m,2H),6.86-6.93(m,1H),4.95-5.04(m,1H),3.95-4.18(m,2H),2.02-2.11(m,1H),1.34-1.43(m,3H),1.17-1.30(m,6H),0.83-0.98(m,2H),0.61-0.72(m,2H).
第二步异丙基((2-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(58mg,0.22mmol)溶于THF(2mL)和NMP(0.6mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,0.45mL,0.45mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室温下，搅拌10分钟，向反应中逐滴滴入异丙基((2-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(200mg,0.45mmol)的THF(1.5mL)溶液，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(1mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=30:1)，得到标题化合物异丙基((2-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(15mg,12%,差向异构体比例为SP/RP=4.1:1)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.80(s,1H),7.44(d,J=8.0Hz,1H),7.35(d,J=8.0Hz,1H),7.06-7.18(m,2H),6.89-6.95(m,1H),6.17(d,J=19.6Hz,1H),5.67(d,J=8.0Hz,1H),4.95-5.07(m,1H),4.43-4.60(m,2H),3.81-4.16(m,4H),2.04-2.15(m,1H),1.18-1.41(m,12H),0.93-1.02(m,2H),0.64-0.77(m,2H);
31P NMR(162MHz,CDCl3):δ4.40,3.50;
MS m/z(ESI):570.1[M+H]+.
实施例二
第一步异丙基((3-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯二氯化磷(1.950g,7.62mmol)溶于CH2Cl2(15mL)中，冷却至-78℃，3-环丙基苯酚(1.124g,8.38mmol)和TEA(1.17mL,8.39mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此温度下反应30分钟后逐渐升温至0℃，此反应液逐滴滴入到0℃下冷却的L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1.279g,7.63mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，随后TEA(2.23mL,16.0mmol)逐滴加入反应体系，在0℃下搅拌1小时，减压下浓缩反应液，反应瓶中加入EtOAc(30mL)，过滤白色固体，滤液浓缩得到黄色油状液体。柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=4.5:1)得到标题化合物异丙基((3-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(2.905g,85%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.17-8.26(m,2H),7.33-7.44(m,2H),7.15-7.23(m,1H),6.96-7.04(m,1H),6.86-6.94(m,2H),4.93-5.05(m,1H),3.92-4.18(m,2H),1.80-1.91(m,1H),1.38(d,J=6.8Hz,3H),1.18-1.28(m,6H),0.93-0.99(m,2H),0.63-0.69(m,2H).
第二步异丙基((3-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(272mg,1.05mmol)溶于THF(8mL)和NMP(2.7mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,2.1mL,2.10mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室温下，搅拌10分钟，向反应中逐滴滴入异丙基((3-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(938mg,2.09mmol)的THF(6mL)溶液，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(3mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=30:1)，得到标题化合物异丙基((3-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(20mg,3%,差向异构体比例为SP/RP=3.8:1)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.74(s,1H),7.46(d,J=8.0Hz,1H),7.15-7.25(m,1H),6.82-7.07(m,3H),6.09-6.27(m,1H),5.51-5.75(m,1H),4.94-5.10(m,1H),4.37-4.59(m,2H),3.70-4.16(m,4H),1.79-1.95(m,1H),1.18-1.41(m,12H),0.93-1.10(m,2H),0.63-0.72(m,2H);
31P NMR(162MHz,CDCl3):δ4.08,3.40;
MS m/z(ESI):570.1[M+H]+.
实施例三
第一步异丙基((2-环丙基-6-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯二氯化磷(1.950g,7.62mmol)溶于CH2Cl2(15mL)中，冷却至-78℃，2-环丙基-6-甲基苯酚(1.129g,7.62mmol)和TEA(1.17mL,8.39mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此温度下反应30分钟后逐渐升温至0℃，此反应液逐滴滴入到0℃下冷却的L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1.279g,7.63mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，随后TEA(2.23mL,16.0mmol)逐滴加入反应体系，在0℃下搅拌1小时，减压下浓缩反应液，反应瓶中加入EtOAc(30mL)，过滤白色固体，滤液浓缩得到黄色油状液体。柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=5:1～3:1)得到标题化合物异丙基((2-环丙基-6-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(2.880g,82%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.18(d,J=9.2Hz,2H),7.32(dd,J=8.4,7.2Hz,2H),7.00(d,J=4.8Hz,2H),6.68-6.75(m,1H),4.91-5.05(m,1H),4.05-4.21(m,1H),3.89-4.05(m,1H),2.39(s,3H),2.17-2.31(m,1H),1.13-1.42(m,12H),0.90-1.06(m,2H),0.59-0.75(m,2H).
第二步异丙基((2-环丙基-6-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(272mg,1.05mmol)溶于THF(8mL)和NMP(2.7mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,2.1mL,2.10mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室温下，搅拌10分钟，向反应中逐滴滴入异丙基((2-环丙基-6-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(967mg,2.09mmol)的THF(6mL)溶液，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(3mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=30:1)，得到标题化合物异丙基((2-环丙基-6-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(20mg，3%,差向异构体比例为SP/RP>10:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.53(d,J=8.0Hz,1H),6.98-7.06(m,2H),6.69-6.77(m,1H),6.01-6.08(m,1H),5.59(d,J=8.0Hz,1H),4.57(s,2H),4.41-4.50(m,1H),4.31-4.40(m,1H),4.03-4.11(m,1H),3.80-4.02(m,2H),2.38(s,3H),2.24-2.35(m,1H),1.26-1.40(m,6H),1.22(d,J=6.0Hz,6H),0.95-1.02(m,2H),0.59-0.71(m,2H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.81;
MS m/z(ESI):584.1[M+H]+.
实施例四
第一步异丙基((4-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯二氯化磷(1.260g,4.92mmol)溶于CH2Cl2(10mL)中，冷却至-78℃，4-环丙基苯酚(726mg,5.41mmol)和TEA(0.76mL,5.45mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液逐滴滴入，在此温度下反应30分钟后逐渐升温至0℃，此反应液逐滴滴入到0℃下冷却的L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(826mg,4.93mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，随后TEA(1.44mL,10.33mmol)逐滴加入反应体系，在0℃下搅拌1小时，减压下浓缩反应液，反应瓶中加入EtOAc(30mL)，过滤白色固体，滤液浓缩得到黄色油状液体。柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=5:1)得到标题化合物异丙基((4-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.48g,67%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.00-8.28(m,2H),7.32-7.45(m,2H),6.71-7.18(m,4H),4.91-5.02(m,1H),3.93-4.19(m,2H),1.77-1.92(m,1H),1.39(d,J=6.4Hz,3H),1.17-1.26(m,6H),0.90-0.98(m,2H),0.58-0.66(m,2H).
第二步异丙基((4-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(272mg,1.05mmol)溶于THF(8mL)和NMP(2.70mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,2.1mL,2.10mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室温下，搅拌10分钟，向反应中逐滴滴入异丙基((4-环丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(938mg,2.09mmol)的THF(6mL)溶液，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(3mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=30:1)，得到标题化合物异丙基((4-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(62mg,10%,差向异构体比例为SP/RP=3.1:1)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.26-9.45(m,1H),7.25-7.52(m,1H),7.05-7.12(m,2H),6.97-7.04(m,2H),6.16(d,J=18.4Hz,1H),5.54-5.75(m,1H),4.94-5.05(m,1H),4.36-5.57(m,2H),3.70-4.24(m,4H),1.17-1.91(m,1H),1.15-1.39(m,12H),0.88-0.98(m,2H),0.55-0.65(m,2H);
31P NMR(162MHz,CDCl3):δ4.05,3.58;
MS m/z(ESI):570.1[M+H]+.
实施例五
第一步(4-溴-2-甲基苯氧基)(叔-丁基)二甲基硅烷的制备
4-溴-2-甲基苯酚(2.1g,11mmol)和咪唑(2.2g,33mmol)溶于DMF(10mL)，冷却至0℃，叔-丁基氯二甲基硅烷(2.0g，14mmol)在搅拌下加入上述溶液中。溶液搅拌下升至室温并继续搅3h，LC-MS检测原料消失，溶液倾入水(40mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。EtOAc层用水(20mL×3)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE)得到标题化合物(4-溴-2-甲基苯氧基)(叔-丁基)二甲基硅烷(2.4g,73%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.05(m,1H),6.94(m,1H),6.43(d，J=8.4Hz，1H),1.97(s,3H),0.81(s,9H),0.00(s,6H).
第二步叔-丁基(4-环丙基-2-甲基苯氧基)二甲基硅烷的制备
磷酸钾(6.6g，32mmol)溶于水(10mL)中，环丙基硼酸(2.1g，24mmol)和Pd(OAc)2(290mg,1.28mmol)在搅拌条件加入上述溶液中，然后继续加入(4-溴-2-甲基苯氧基)(叔-丁基)二甲基硅烷的甲苯(50mL)溶液。悬浊液用氮气鼓泡除氧45分钟，三环己基磷(0.9g，3.2mmol)加入上述溶液中，悬浊液在搅拌及氮气保护下在95℃下反应过夜。LC-MS检测原料消失，溶液用EtOAc(50mL)和水(20mL)稀释，有机层用水(40mL)和饱和食盐水(40mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(洗脱剂:PE)得到粗品标题化合物叔-丁基(4-环丙基-2-甲基苯氧基)二甲基硅烷(1.1g,粗产率50%,85%纯度)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.65(d,J=2.0Hz,1H),6.57(m,1H),6.46(d，J=8.0Hz，1H),1.98(s,3H),1.61(m,1H),0.81(s,9H),0.68(m,2H),0.41(m,2H),0.00(s,6H).
第三步4-环丙基-2-甲基苯酚的制备
向叔-丁基(4-环丙基-2-甲基苯氧基)二甲基硅烷(1.1g,85%纯度，4mmol)的烧瓶中加入四丁基氟化铵(1M in THF,12mL,12mmol)。溶液在室温下搅拌2小时，TLC显示原料消失。溶液用10%氯化铵水溶液(30mL)稀释并用EtOAc(60mL)萃取。EtOAc层用饱和食盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩柱色谱(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=5:1)得到粗品标题化合物4-环丙基-2-甲基苯酚(0.64g,粗产率80%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.98(s,1H),6.79(d,J=1.6Hz,1H),6.75(m,1H),6.67(d,J=8.0Hz,1H),2.10(s,3H),1.77(m,1H),0.84(m,2H),0.55(m,2H).
第四步异丙基((4-环丙基-2-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(900mg,3.6mmol)溶于CH2Cl2(7.5mL)中，溶液冷至-78℃，4-环丙基-2-甲基苯酚(600mg,4.0mmol)和TEA(0.39g,3.9mmol)的CH2Cl2(7.5mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(600mg，3.6mmol)的CH2Cl2(7.5mL)溶液中，然后TEA(0.75g,7.5mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～7:3)得到标题化合物异丙基((4-环丙基-2-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(550mg,33%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(m,2H),7.37(m,2H),7.20(m,1H),6.90(s,1H),6.84(m,1H),5.02(m,1H),4.09(m,1H),3.89(m,1H),2.21(m,3H),1.82(m,1H),1.40(m,3H),1.23(m,6H),0.93(m,2H),0.62(m,2H).
第五步异丙基((4-环丙基-2-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(145mg，0.56mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.45mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.1mL,1.1mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基((4-环丙基-2-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(550mg，1.15mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基((4-环丙基-2-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(29mg,9%,差向异构体比例为SP/RP=9.3:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.57(d,J=8.0Hz,1H),7.21(m,1H),6.97(s,1H),6.88(m,1H),6.13(d,J=19.6Hz,1H),5.59-5.64(m,1H),4.93-5.01(m,1H),4.49-4.54(m,1H),4.36-4.41(m,1H),4.09-4.13(m,1H),3.89-3.97(m,2H),2.30(s,3H),1.83-1.89(m,1H),1.31-1.40(m,7H),1.23-1.26(m,6H),0.92-0.96(m,2H),0.62-0.66(m,2H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ4.09,3.99;
MS m/z(ESI):584.2[M+H]+.
实施例六
第一步3-(4-(苄氧基)苯基)噁丁环的制备
(4-(苄氧基)苯基)硼酸(684mg,3.00mmol)，NiI2(28.0mg,90mmol)，反式-2-氨基环己醇盐酸盐(11.0mg,90.0mmol）溶于iPrOH(10mL)，滴加入NaHMDS(1M,3.0mL,3.0mmol),氮气鼓泡10分钟，再加入3-碘噁丁环(276mg,1.50mmol)，再氮气鼓泡5分钟。微波下于80℃反应30分钟。反应平行做三批，三个反应的反应液冷却后，合并，加入EtOH稀释，用硅藻土过滤，滤液浓缩，柱层析（洗脱剂：PE:EA=50:1）得到标题化合物3-(4-(苄氧基)苯基)噁丁环(400mg,56%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.32(m,7H),6.91(d,J=8.8Hz,2H),4.97(m,4H),4.68(t,J=6.4Hz,2H),4.08(m,1H).
第二步4-(噁丁环-3-基)苯酚的制备
3-(4-(苄氧基)苯基)噁丁环(400mg,1.67mmol),Pd/C(10wt%,50mg)混合于EtOH(20mL)中，在氢气氛围下反应3个小时，用短的硅胶柱过滤，滤液浓缩，得标题化合物4-(噁丁环-3-基)苯酚(250mg,100%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.29(d,J=8.4Hz,2H),6.83(d,J=8.4Hz,2H),5.05(m,2H),4.74(m,2H),4.19(m,1H).
第三步异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(噁丁环-3-基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯二氯化磷(427mg,1.67mmol)溶于CH2Cl2(6mL)中，冷却至-78℃，4-(噁丁环-3-基)苯酚(250mg,1.67mmol)和TEA(233μL,1.67mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液逐滴滴入，室温下反应40分钟。然后再冷却至-78℃，依次缓慢滴入L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(280mg,1.67mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液和TEA(466μL,3.34mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液，缓慢升至室温，并搅拌过夜。减压下浓缩溶液，反应瓶中加入EtOAc(15mL)，过滤除去白色固体，滤液浓缩得到黄色油状液体。柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=2:1)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(噁丁环-3-基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(540mg,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.11(d,J=8.4Hz,2H),7.30(m,4H),7.16(m,2H),4.92(m,3H),4.62(t,J=6.4Hz,2H),4.47(m,1H),4.11(m,1H),1.30(m,3H),1.30(m,6H);
MS m/z(ESI):465.1[M+H]+.
第四步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(噁丁环-3-基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(152mg,0.584mmol)溶于THF(4mL)和NMP(1mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,1.17mL,1.17mmol)逐滴滴入到上述溶液中。室温下搅拌20分钟，向反应中逐滴滴入异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(噁丁环-3-基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(542mg,1.17mmol)的THF(2mL)溶液，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(2mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=20:1)，得到标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(噁丁环-3-基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(35mg,10%,一对差向异构体比例为SP/RP=2.5:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.51(m,1H),7.33(m,2H),7.16(m,2H),6.03(m,1H),5.46-5.56(m,1H),4.97(m,2H),4.88(m,1H),4.61(m,2H),4.45(m,1H),4.30(m,1H),4.18(m,1H),4.01(m,1H),3.83(m,2H),1.25(m,6H),1.11(m,6H)
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.93,3.89;
MS m/z(ESI):586.2[M+H]+.
实施例七
第一步4-(环丙基甲基)苯酚的制备
冰水浴下，向4-羟基-苯基环丙基酮(4.2g,26mmol)的THF(15mL)溶液中滴加硼烷四氢呋喃溶液(1M,31mL,31mmol)，加毕，室温下搅拌1小时，然后加入三氟化硼乙醚(0.32mL,2.6mmol)，继续搅拌1小时。TLC检测反应完毕，反应液倒入到冰水中，分出有机相，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=20:1)得到标题化合物4-(环丙基甲基)苯酚(3.7g,96%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.13(d,J=8.4Hz,2H),6.80(d,J=8.4Hz,2H),5.35(brs,1H),2.48(d,J=6.8Hz,2H),0.94(m,1H),0.51(m,2H),0.18(m,2H).
第二步异丙基((4-(环丙基甲基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
干冰丙酮浴下(-78℃)，向4-硝基苯基磷二氯化酸酯(1.50g，5.86mmol)的CH2Cl2溶液(30mL)中，滴加L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(982mg,5.86mmol)和TEA(1.63mL,11.7mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液，加毕，缓慢升至室温，并继续搅拌1小时。再用干冰丙酮浴冷却到-78℃，依次缓慢滴加4-(环丙基甲基)苯酚(868mg，5.86mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液和TEA(0.82mL,5.86mmol),缓慢升至室温，并搅拌过夜。反应液依次用水、饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=6:1)得淡黄色油状标题化合物异丙基((4-(环丙基甲基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(180mg,6.7%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.17(m,2H),7.32(m,2H),7.17(m,2H),7.07(m,2H),4.96(m,1H),4.00(m,1H),2.44(m,2H),1.36(m,3H),1.17(m,6H),0.85(m,1H),0.47(m,2H),0.12(m,2H);
MS m/z(ESI):463.0[M+H]+.
第三步异丙基((4-(环丙基甲基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(51mg,0.20mmol)溶于THF(2mL)和NMP(0.5mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,0.39mL,0.39mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室温下搅拌20分钟，向反应中滴加异丙基((4-(环丙基甲基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(180mg,0.39mmol)的THF溶液(1mL)，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(1mL)淬灭反应，浓缩除去大部分有机溶剂，残余物用CHCl3和iPrOH的混合溶剂溶液(v:v=3:1,20mL)稀释，用饱和食盐水洗涤多次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=40:1)，得无色泡沫状标题化合物异丙基((4-(环丙基甲基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)丙氨酸酯(54mg,47%,差向异构体比例为SP/RP=3.9:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.42(d,J=8.0Hz,1H),7.07(d,J=8.4Hz,2H),6.97(m,2H),5.94(d,J=19.2Hz,1H),5.41(m,1H),4.78(m,1H),3.92(m,1H),3.74(m,2H),2.33(d,J=6.8Hz,2H),1.18(m,3H),1.03(m,3H),0.75(m,1H),0.32(m,2H),0.01(m,2H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.99,3.90;
MS m/z(ESI):584.2[M+H]+.
实施例八
第一步异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
干冰-丙酮浴下(-78℃)，向4-硝基苯基磷二氯化酸酯(924mg,3.61mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，缓慢滴加入4-(苯基乙炔基)苯酚(700mg,3.61mmol)三乙胺(0.833mL,3.61mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液，加毕，升至室温并继续搅拌40分钟，重新冷却至-78℃下，依次缓慢滴加L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(605mg,3.61mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液和TEA(1.67mL,7.22mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液,滴加完毕，缓慢升至室温，并搅拌过夜。反应液浓缩，残余物中加入EtOAc稀释，过滤不溶物，滤饼用EtOAc洗涤，滤液用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=5:1)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.0g,55%)。
1H NMR(400Hz,CDCl3):δ8.17(dd,J=8.8,2.0Hz,2H),7.45(m,4H),7.31(m,5H),7.16(t,J=7.6Hz,2H),4.95(m,1H),4.01(m,1H),3.86(m,1H),1.33(d,J=7.2Hz,3H),1.17(m,6H);
MS m/z(ESI):509.0[M+H]+.
第二步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(26.0mg,0.100mmol)溶于THF(2mL)和NMP(0.5mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1.0M in THF,0.2mL,0.2mmol)缓慢滴加到上述溶液中，室温下搅拌20分钟，再向反应中缓慢滴加入异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(102mg,0.200mmol)的THF(1mL)溶液，55℃下搅拌过夜。次日冷却至室温，加入MeOH(1mL)淬灭反应，然后浓缩除去大部分有机溶剂，残余物用水洗涤，过滤，滤饼用CH2Cl2溶解，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后制备薄层纯化(洗脱剂:CH2Cl2:iPrOH=17:1)，得无色泡沫状标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(14mg,22%,差向异构体比例为SP/RP=3.8:1)。
1H NMR(400Hz,CD3OD):δ7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.41(m,4H),7.27(m,3H),7.20(d,J=7.2Hz,2H),6.01(m,1H),5.56–5.80(m,1H),4.88(m,1H),4.42(m,1H),4.30(m,1H),4.03(m,1H),3.83(m,2H),1.26(m,6H),1.06(m,6H)；
MS m/z(ESI):630.1[M+H]+.
实施例九
第一步4-(环丙基乙炔基)苯酚的制备
4-碘苯酚（5.00g,22.7mmol）,DIPEA(18.0mL,109mmol)溶于DMF(80mL)中，氮气置换瓶内空气三次，然后在冰水浴下，依次加入乙炔基环丙烷(2.50mL,29.5mmol),四(三苯基膦)钯(1.00g,0.866mmol)和CuI(900mg,109mmol)。反应缓慢升至室温，并在氮气保护下，搅拌过夜。反应液经硅藻土过滤，除去不溶性物质，然后用EtOAc稀释，并用0.5M稀盐酸洗涤一次，用饱和食盐水洗涤8次，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=8:1)得标题化合物4-(环丙基乙炔基)苯酚(3.50g,97%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.28(dd,J=7.2,2.0Hz,2H),6.75(dd,J=7.2,2.0Hz,2H),5.21(s,1H),1.45(m,1H),0.78-0.89(m,4H).
第二步异丙基((4-(环丙基乙炔基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯二氯化磷(2.50g,9.77mmol)溶于CH2Cl2(20mL)中，冷却至-78℃，4-(环丙基乙炔基)苯酚(1.55g,9.77mmol)和TEA(1.36mL,9.77mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液逐滴滴入，室温下反应40分钟。然后再冷却至-78℃，依次缓慢滴入L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1.64g,9.77mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液和TEA(2.72mL,19.5mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液，缓慢升至室温，并搅拌过夜。减压下浓缩溶液，反应瓶中加入EtOAc(50mL)，过滤除去白色固体，滤液浓缩得到黄色油状液体。柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=5:1)得到标题化合物异丙基((4-(环丙基乙炔基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(3.30g,72%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.24(dd,J=8.8,2.0Hz,2H),7.36(m,4H),7.14(m,2H),5.00(m,1H),4.12(m,1H),1.42(m,1H),1.38(m,3H),1.24(m,6H),0.78-0.89(m,4H);
MS m/z(ESI):473.1[M+H]+.
第三步异丙基((4-(环丙基乙炔基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(52mg,0.20mmol)溶于THF(2mL)和NMP(0.5mL)的混合溶剂，水浴下，tBuMgCl溶液(1M,0.40mL,0.40mmol)逐滴滴入滴入到上述溶液中，室温下，搅拌20分钟，向反应中逐滴滴入异丙基((4-(环丙基乙炔基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(189mg,0.40mmol)的THF(1mL)溶液，55℃下搅拌过夜。然后冷却至室温，加入甲醇(1mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=30:1)，得到标题化合物异丙基((4-(环丙基乙炔基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(45mg,38%,差向异构体比例为SP/RP=3.4:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.50(m,1H),7.24(d,J=8.8Hz,2H),7.08(m,2H),6.02(m,1H),5.57(m,1H),4.86(m,1H),4.42(m,1H),4.30(m,1H),4.01(m,1H),3.80(m,2H),1.34(m,1H),1.28(m,6H),1.11(m,6H),0.77(m,2H),0.62(m,2H);
MS m/z(ESI):594.3[M+H]+.
实施例十
第一步4-(丙基硫代)苯酚的制备
在室温下向DMF(40mL)中加入碳酸钾(28g,200mmol)，对羟基苯硫酚(2.5g,20mmol)和1-溴丙烷(3.1g,25mmol)，悬浊液室温下搅拌三天，LC-MS检测原料消失。反应液倾入水(200mL)中，并用EtOAc(50mL×3)萃取，有机相用水(50mL×3)，饱和食盐水(50mL×2)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=4:1)得到标题化合物4-(丙基硫代)苯酚(0.9g,27%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.52(s,1H),7.21(d,J=8.8Hz,2H),6.73(d,J=8.8Hz,2H),2.76(t,J=7.2Hz,2H),1.49(m,2H),0.93(t,J=7.2Hz,1H).
第二步异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(1.3g,5mmol)溶于CH2Cl2(10mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-(丙基硫代)苯酚(900mg,5.6mmol)和TEA(0.56g,5.6mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴入到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(840mg，5mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，然后TEA(1.05g,10.5mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，溶液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～7:3)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.5g,60%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.16(m,2H),7.33(m,2H),7.24(m,2H),7.08(m,2H),4.94(m,1H),4.02(m,1H),3.86(m,1H),2.78(m,2H),1.58(m,2H),1.33(m,3H),1.16(m,6H),0.94(t,J=7.2Hz,3H).
第三步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(484mg,1mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(66mg,22%,差向异构体比例为SP/RP=3.5:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.63(d,J=8.0Hz,1H),7.36(m,2H),7.22(m,2H),6.12(m,1H),5.65-5.72(m,1H),4.54(m,1H),4.40-4.42(m,1H),4.12-4.14(m,1H),3.91-3.95(m,2H),2.87-2.92(m,2H),1.61-1.66(m,2H),1.31-1.40(m,7H),1.23-1.26(m,6H),1.02(m,3H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.97,3.91;
MS m/z(ESI):604.2[M+H]+.
实施例十一
第一步4-(叔丁基硫代)苯酚的制备
在室温下向叔丁基氯(25g)中加入对羟基苯硫酚(3.1g,25mmol)。三氯化铝（4g,30mmol）分批加入，反应在室温下搅拌一小时，LC-MS检测原料消失。反应液倾入水(200mL)中，并用EtOAc(200mL)萃取，EtOAc层用饱和食盐水(100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=4:1)得到标题化合物4-(叔丁基硫代)苯酚(3.0g,65%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.76(s,1H),7.28(d,J=8.8Hz,2H),6.77(d,J=8.8Hz,2H),1.19(s,9H).
第二步异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(叔丁基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(3.8g,15mmol)溶于CH2Cl2(30mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-(叔丁基硫代)苯酚(3.0g,16mmol)和TEA(1.6g,16mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液在十分钟内逐滴滴入上述溶液中，反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(2.5g，15mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中，然后TEA(3.2g,32mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(100mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～6:4)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(叔丁基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(3.0g,40%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.23(m,2H),7.50(m,2H),7.40(m,2H),7.19(m,2H),5.01(m,1H),4.07(m,1H),3.96(m,1H),1.40(m,3H),1.22-1.28(m,15H).
第三步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(叔丁基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(叔丁基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(500mg，1mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(叔丁基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(126mg,41%,差向异构体比例为SP/RP=2.2:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.66(m,1H),7.53(m,2H),7.28(m,2H),6.14(m,1H),5.67-5.73(m,1H),4.96(m,1H),4.57(m,1H),4.39-4.44(m,1H),4.13-4.15(m,1H),3.90-4.00(m,2H),1.30-1.43(m,7H),1.20-1.27(m,14H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.79,3.74;
MS m/z(ESI):618.2[M+H]+.
实施例十二
第一步乙基(4-甲氧苄基)硫烷的制备
4-甲氧基苄硫醇(5.0g,32.5mmol)溶于DMF(100mL)中，依次加入DIPEA(5.2g,39mmol)和碘乙烷(6.0g,39mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应液用EtOAc(200mL)稀释，依次用水(600mL)，HCl(1N,400mL)，饱和食盐水(200mL)洗涤。分出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=20:1)得到标题化合物乙基(4-甲氧苄基)硫烷(3.9g,67%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.26(d,J=8.8Hz,2H),6.87(d,J=8.8Hz,2H),3.82(s,3H),3.71(s,2H),2.45(q,J=7.2Hz,2H),1.25(t,J=7.2Hz,3H).
第二步4-((乙硫基)甲基)苯酚的制备
乙基(4-甲氧苄基)硫烷(3.9g，22mmol)置于250mL烧瓶中，BBr3(1M,55mL,55mmol)的CH2Cl2(55mL)溶液逐滴滴入反应中，反应于室温下搅拌一小时，LC-MS检测原料消失。饱和碳酸氢钠溶液加入反应中并用CH2Cl2(50mL)稀释，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～6:4)得到标题化合物乙基(4-甲氧苄基)硫烷(2.5g,67%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.31(s,1H),7.09(d,J=8.4Hz,2H),6.88(d,J=8.4Hz,2H),3.82(s,2H),2.37(q,J=7.2Hz,2H),1.15(t,J=7.2Hz,3H).
第三步异丙基((4-硝基苯氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(3.5g,13.5mmol)溶于CH2Cl2(27mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-((乙硫基)甲基)苯酚(2.5g，15mmol)和TEA(1.5g,15mmol)的CH2Cl2(27mL)的溶液在十分钟内滴入上述溶液中，反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(2.3g，13.5mmol)的CH2Cl2(27mL)溶液中，然后TEA(3.0g,30mmol)在5分钟内滴入反应体系，反应缓慢升温至室温搅拌过夜。溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～6:4)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.7g,25%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.23(m,2H),7.41(m,2H),7.29(m,2H),7.16(m,2H),5.01(m,1H),4.11(m,1H),3.97(m,1H),3.68(m,2H),2.41(m,2H),1.40(m,3H),1.22(m,9H).
第四步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(4mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基((4-硝基苯氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(480mg，1mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(150mg,50%,差向异构体比例为SP/RP=2.2:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.63(d,J=8.4Hz,1H),7.35(d,J=8.4Hz,1H),7.22(m,2H),6.16(m,1H),5.64-5.71(m,1H),4.95-5.02(m,1H),4.52-4.57(m,1H),4.37-4.42(m,1H),4.12(m,1H),3.89-3.98(m,2H),3.73(m,2H),2.39-2.46(m,2H),1.31-1.40(m,7H),1.20-1.27(m,9H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.93,3.83;
MS m/z(ESI):604.2[M+H]+.
实施例十三
第一步异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(三甲基甲硅烷基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(1.02g,4mmol)溶于CH2Cl2(8mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-(三甲基甲硅烷基)苯酚(750mg,4.5mmol)和TEA(0.45g,4.5mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(690mg，4mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液中，然后TEA(800mg,8mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=3:2)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(三甲基甲硅烷基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.2g,60%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13(m,2H),7.39(m,2H),7.31(m,2H),7.11(m,2H),4.90(m,1H),4.01(m,1H),3.79(m,1H),1.30(m,3H),1.13(m,6H),0.15(m,9H).
第二步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(三甲基甲硅烷基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基((4-硝基苯氧基)(4-(三甲基甲硅烷基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(480mg，1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(三甲基甲硅烷基)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(38mg,13%,差向异构体比例为SP/RP>10:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.49(d,J=8.0Hz,1H),7.43(m,2H),7.15(m,2H),6.03(d,J=20.0Hz,1H),5.48(m,1H),4.83-4.89(m,1H),4.41-4.46(m,1H),4.25-4.31(m,1H),4.00-4.03(m,1H),3.78-3.86(m,2H),1.19-1.28(m,7H),1.10-1.14(m,6H),0.14(s,9H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.77;
MS m/z(ESI):602.2[M+H]+.
实施例十四
第一步异丙基(((2,3-二氢-1H-茚-5-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(2.0g,8.0mmol)溶于CH2Cl2(16mL)，冷至-78℃，2,3-二氢-1H-茚-5-醇(1.2g,9.0mmol)和TEA(0.9g,9mmol)的CH2Cl2(16mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴下滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(1.35g，8mmol)的CH2Cl2(16mL)溶液中，然后TEA(1.7g,17mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=3:2)得到标题化合物异丙基(((2,3-二氢-1H-茚-5-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.9g,50%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.15(m,2H),7.33(m,2H),7.07(m,1H),7.01(m,1H),6.89(m,1H),4.94(m,1H),4.02(m,1H),3.87(m,1H),2.80(m,4H),2.00(m,2H),1.33(m,3H),1.16(m,6H).
第二步异丙基(((2,3-二氢-1H-茚-5-基)氧代)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(260mg,1.0mmol)溶于THF(8mL)和无水NMP(2.6mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,2.0mL,2.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基(((2,3-二氢-1H-茚-5-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(900mg，2mmol)的无水THF(6mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基(((2,3-二氢-1H-茚-5-基)氧代)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(40mg,7%,差向异构体比例为SP/RP=3.3:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.61(d,J=8.0Hz,1H),7.18(d,J=8.0Hz,1H),7.12(s,1H),7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.14(d,J=18.8Hz,1H),5.57-5.67(m,1H),4.95-5.02(m,1H),4.52-4.56(m,1H),4.35-4.40(m,1H),4.12(d,J=3.0Hz,1H),3.89-3.98(m,2H),2.86-2.92(m,4H),2.06-2.14(m,2H),1.31-1.39(m,7H),1.23-1.27(m,6H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.96,3.90;
MS m/z(ESI):570.2[M+H]+.
实施例十五
第一步异丙基((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氢萘-2-基)氧代)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(600mg,2.4mmol)溶于CH2Cl2(5mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，5,6,7,8-四氢萘-2-酚(400mg,2.6mmol)和TEA(0.26g,2.6mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(400g，2,4mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中，然后TEA(500mg,5mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=1:1)得到标题化合物异丙基((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氢萘-2-基)氧代)磷基)-L-丙氨酸酯(480mg,40%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.16(m,2H),7.33(m,2H),6.94(m,1H),6.87(m,2H),4.94(m,1H),4.02(m,1H),3.79(m,1H),2.65(m,4H),1.69(m,4H),1.33(m,3H),1.16(m,6H).
第二步异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)((5,6,7,8-四氢萘-2-基)氧代)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(4mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氢萘-2-基)氧代)磷基)-L-丙氨酸酯(480mg，1mmol)的无水THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基(((2,3-二氢-1H-茚-5-基)氧代)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(25mg,9%,差向异构体比例为SP/RP=4.0:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.59(d,J=8.4Hz,1H),7.04(m,1H),6.96(m,2H),6.14(d,J=18.8Hz,1H),5.55-5.65(m,1H),4.95-5.02(m,1H),4.52-4.60(m,1H),4.35-4.40(m,1H),4.11-4.13(m,1H),3.89-3.98(m,2H),2.74(m,4H),1.77-1.81(m,4H),1.31-1.39(m,7H),1.23-1.28(m,6H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.91,3.86;
MS m/z(ESI):584.2[M+H]+.
实施例十六
第一步异丙基(((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
4-硝基苯基磷二氯化酸酯(600mg,2.4mmol)溶于CH2Cl2(5mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-醇(400mg,2.6mmol)和TEA(0.26g,2.6mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的异丙基L-丙氨酸酯盐酸(400g，2,4mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中，然后TEA(500mg,5mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=1:1)得到标题化合物异丙基(((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(480mg,50%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.25(m,2H),7.41(m,2H),6.80(m,2H),6.74(m,1H),5.03(m,1H),4.24(m,4H),4.11(m,1H),3.89(m,1H),1.42(m,3H),1.25(m,6H).
第二步异丙基(((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氧代)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(150mg,0.6mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.5mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.2mL,1.2mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，异丙基(((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(580mg，1.2mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到40mg含少量NMP的产物。制备薄层析(EtOAc)继续纯化得到标题化合物异丙基(((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氧代)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(20mg,6%,差向异构体比例为SP/RP=1.9:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.58-7.61(m,1H),6.75-6.81(m,2H),6.69-6.72(m,2H),6.12-6.17(m,1H),5.61-5.69(m,1H),4.94-5.00(m,1H),4.48-4.53(m,1H),4.32-4.37(m,1H),4.19-4.24(m,4H),4.08-4.11(m,1H),3.86-3.94(m,2H),1.29-1.38(m,7H),1.22-1.26(m,6H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ4.16,4.08;
MS m/z(ESI):588.1[M+H]+.
实施例十七
第一步S-异丙基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
磷二氯化酸苯酯(1.0g,4.7mmol)溶于CH2Cl2(10mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(750mg,5.4mmol)和TEA(0.54g,5.4mmol)溶于CH2Cl2(10mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的S-异丙基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸(1.2g，4.7mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，然后TEA(1.0g,10mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～3:1)得到标题化合物S-异丙基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(1.03g,50%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.16(m,2H),7.33(m,2H),7.28(m,2H),7.16(m,3H),4.09(m,1H),3.86(m,1H),3.53(m,1H),1.33(m,3H),1.21(m,6H).
第二步S-异丙基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，S-异丙基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(424mg，1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液取一半浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物S-异丙基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(66mg,24%,差向异构体比例为SP/RP=2.2:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.62-7.66(m,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.31(m,3H),6.15(d,J=18.8Hz,1H),5.64-5.71(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.02(m,2H),3.49-3.58(m,1H),1.26-1.40(m,12H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.66,3.55;
MS m/z(ESI):546.1[M+H]+.
实施例十八
第一步S-甲基(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙硫酸酯
封管中，N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸(5.7g,30mmol)和TEA(3.0g,30mmol)溶于THF(100mL)中，冷至-20℃，氯甲酸异丁酯(4.0g，30mmol)注入上述溶液中。溶液在-20℃下搅拌1小时，甲硫醇钠(1.7g，24mmol)加入上述溶液中，反应在封管下升至室温搅拌过夜。反应液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE～PE:EtOAc=9:1)得到标题化合物S-甲基(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙硫酸酯(3.4g,67%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.97(s,1H),4.40(q,J=7.2Hz,1H),2.29(s,3H),1.46(s,9H),1.37(d,3H).
第二步S-甲基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸盐的制备
在含有S-甲基(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙硫酸酯(3.4g,16mmol)的烧瓶中加入HCl(4N in dioxane,20mL)溶液室温下搅拌三小时，LC-MS检测原料消失。溶剂浓缩后得到粗品标题化合物S-甲基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸盐(2.5g,粗产率100%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.59(s,3H),4.29(q,J=7.2Hz,1H),2.37(s,3H),1.45(d,J=7.2Hz,3H).
第三步S-甲基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
磷二氯化酸苯酯(3.15g,15mmol)溶于CH2Cl2(30mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(2.3g,16.5mmol)和TEA(1.6g,16mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的S-甲基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸盐(2.3g，15mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中，然后TEA(3.3g,33mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(100mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=6:1～1:1)得到标题化合物S-甲基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(2.7g,45%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.23(m,2H),7.50(m,2H),7.40(m,2H),7.19(m,2H),5.01(m,1H),4.07(m,1H),3.96(m,1H),1.40(m,3H),1.22-1.28(m,15H).
第四步S-甲基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，S-甲基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(400mg，1mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物异丙基((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(叔丁基硫代)苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(130mg,50%,差向异构体比例为SP/RP=2.2:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.60-7.65(m,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.31(m,3H),6.15(m,1H),5.62-5.69(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.06(m,2H),2.25-2.29(m,3H),1.30-1.40(m,6H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.83,3.54;
MS m/z(ESI):518.0[M+H]+.
实施例十九
第一步S-(叔-丁基)(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙硫酸酯的制备
N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸（9.0g,48mmol）和DCC(10.0g,48mmol)溶于CH2Cl2(60mL)中，在35℃下搅拌15分钟后，叔丁基硫醇(3.6g，40mmol)和HOBt(650mg,5mmol)加入反应液中，反应在35℃下搅拌过夜。悬浊液过滤，滤饼用CH2Cl2(60mL)洗涤。减压浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=20:1～6:1)得到标题化合物S-(叔-丁基)(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙硫酸酯(2.2g,17%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.05(d,J=6.8Hz,1H),4.31(m,1H),1.49(s,9H),1.45(s,9H),1.35(d,J=7.2Hz,3H).
第二步S-叔丁基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸盐的制备
S-(叔-丁基)(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙硫酸酯(2.2g,8.5mmol)溶于4N盐酸二氧六环溶液(20mL)中，反应在30℃下搅拌两小时。LC-MS检测原料消失，溶液减压浓缩后得到标题化合物S-叔丁基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸盐(1.7g,粗产率100%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.59(s,3H),4.14(m,1H),1.48(s,9H),1.43(d,J=7.2Hz,3H).
第三步S-叔丁基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
磷二氯化酸苯酯(1.7g,8.0mmol)溶于CH2Cl2(15mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(1.25g,9.0mmol)和TEA(0.9g,9.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的S-叔丁基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸(1.7g，8.5mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，然后TEA(1.8g,18mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～6:4)得到标题化合物S-叔丁基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(1.9g,53%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(m,2H),7.40(m,4H),7.22(m,3H),4.11(m,1H),3.93(m,1H),1.42(m,9H),1.37(m,3H).
第四步S-叔丁基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，S-叔丁基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(440mg，1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物S-叔丁基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(134mg,49%,差向异构体比例为SP/RP=2.2:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.64-7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.30(m,3H),6.17(m,1H),5.64-5.71(m,1H),4.54-4.59(m,1H),4.38-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.88-3.96(m,2H),1.28-1.50(m,15H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.49；
MS m/z(ESI):560.0[M+H]+.
实施例二十
第一步S-环己基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
磷二氯化酸苯酯(1.7g,8.0mmol)溶于CH2Cl2(15mL)的室温溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(1.25g,9.0mmol)和TEA(0.9g,9.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液在十分钟内滴入上述溶液中，然后反应搅拌下升至室温。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷却的S-环己基(S)-2-氨基丙硫酸酯盐酸(1.8g，8.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，然后TEA(1.8g,18mmol)在5分钟内滴入反应体系。反应在0℃下搅拌1小时，溶液浓缩后加入EtOAc(50mL)，抽滤白色沉淀并用EtOAc(20mL)洗涤，滤液浓缩后柱层析(洗脱剂:PE:EtOAc=9:1～6:4)得到标题化合物S-环己基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(2.5g,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(m,2H),7.40(m,4H),7.22(m,3H),4.18(m,1H),3.88(m,1H),3.47(m,1H),1.84(m,2H),1.67(m,2H),1.57(m,1H),1.24-1.45(m,8H).
第二步S-环己基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯的制备
室温下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶于THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。搅拌下于五分钟内滴加tBuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反应在室温下搅拌10分钟后，S-环己基(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(424mg，1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分钟内滴入。反应在55℃下搅拌过夜，冷至室温，加入MeOH(3mL)淬灭反应。反应液浓缩后柱层析(洗脱剂:CH2Cl2:MeOH=50:1～10:1)得到标题化合物S-环己基(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷基)氨基)丙硫酸酯(122mg,42%,差向异构体比例为SP/RP=2.2:1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.62-7.66(m,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.31(m,3H),6.15(d,J=18.8Hz,1H),5.65-5.71(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.02(m,2H),3.40-3.43(m,1H),1.87(m,2H),1.71(m,2H),1.48(m,1H),1.29-1.48(m,11H);
31P NMR(162MHz,CD3OD):δ3.64,3.51;
MS m/z(ESI):586.2[M+H]+.
实施例二十一
第一步4-环丙基苯基磷二氯化酸酯的制备
称取4-环丙基苯酚(2.6g,19.39mmol)溶解于Et2O(15mL)中，室温下缓慢滴加TEA(2.7mL,19.39mmol)并搅拌15分钟。
取三氯氧磷(3.0g,19.39mmol)溶解于Et2O(100mL)中，冷至-55℃后缓慢滴加上述溶液，有白色固体析出。滴加完毕后在该温度下继续搅拌2小时，随后缓慢升至室温并搅拌过夜。在N2保护下滤去白色固体，滤液浓缩得标题化合物4-环丙基苯基磷二氯化酸酯(4.4g,91%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18-7.14(m,2H),7.12-7.08(m,2H),1.94-1.86(m,1H),1.03-0.96(m,2H),0.71-0.65(m,2H);
31P NMR(162MHz,CDCl3)δ3.99
第二步异丙基((4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
取L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(2.5g,14.97mmol)溶解于CH2Cl2(30mL)中，冷至-78℃，在N2保护下缓慢滴加TEA(4.3mL,31.44mmol)，搅拌15分钟后，缓慢滴加溶解于CH2Cl2(5mL)中的4-环丙基苯基磷二氯化酸酯(3.7g,14.82mmol)溶液，搅拌30分钟后缓慢升至0℃，在该温度下继续搅拌1小时。
取全氟苯酚(2.72g,14.82mmol)溶解于CH2Cl2(10mL)中，0℃下缓慢滴加TEA(2.3mL,16.46mmol)，搅拌5分钟后将该溶液缓慢滴加至上述反应体系中，保持0℃并搅拌过夜。滤去固体，滤液浓缩后以MTBE(30mL)稀释，室温下搅拌30分钟，然后滤去固体，滤液浓缩得到标题化合物异丙基((4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(6.03g,82%,差向异构体比例为SP/RP=1:1)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.16-7.08(m,4H),6.80-6.73(m,1H),4.91-4.84(m,1H),3.97-3.87(m,1H),1.95-1.89(m,1H),1.33-1.23(m,3H),1.18-1.14(m,6H),0.96-0.90(m,2H),0.65-0.59(m,2H);
31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ0.52
第三步异丙基((S)-(4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
将上述第二步所得异丙基((4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(差向异构体比例为SP/RP=1:1)以PE:EtOAc=5:1打浆，滤出固体，以石油醚淋洗，油泵抽干，得到标题化合物异丙基((S)-(4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(2.99g,40%,HPLC纯度:97%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.09(s,4H),6.80(dd,J=14.0,10.0Hz,1H),4.89-4.83(m,1H),3.96-3.87(m,1H),1.95-1.89(m,1H),1.26(d,J=6.8Hz,3H),1.16-1.14(m,6H),0.96-0.90(m,2H),0.65-0.60(m,2H);
31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ0.52
第四步异丙基(S)-(4-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(440mg,1.69mmol)溶解于THF(10mL)中，冷至-5℃，在N2保护下缓慢滴加tBuMgCl(1M in THF,3.6mL,3.6mmol)，滴加完毕后在该温度下搅拌30分钟，随后升至室温并继续搅拌30分钟。将反应体系置于冰水浴中，缓慢滴加溶解于THF(3.6mL)中的异丙基((S)-(4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(1.0g,2.03mmol)溶液，保持该温度并连续搅拌过夜。用1N HCl溶液(2mL)淬灭反应体系，浓缩后残余加入CH2Cl2(50mL)和1N HCl溶液(20mL)稀释，分离有机相，水相用CH2Cl2(50mL×2)萃取，合并有机相，分别以饱和碳酸氢钠溶液(30mL)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液得粗产物。将所得固体在CH2Cl2中重结晶，得标题化合物异丙基(S)-(4-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(680mg,70%,HPLC纯度:98%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.25(brs,1H),7.48(d,J=7.6,1H),7.11-7.08(m,2H),7.03-7.01(m,2H),6.18(d,J=18.4Hz,1H),5.70(d,J=8.0,1H),5.03-4.99(m,1H),4.55-4.43(m,2H),4.13-4.08(m,2H),3.96-3.91(m,2H),1.90-1.81(m,1H),1.45-1.32(m,6H),1.31-1.19(m,6H),0.98-0.91(m,2H),0.66-0.61(m,2H);
31P NMR(162MHz,CDCl3)δ3.65;
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-161.79;
ESI(m/z):570.1[M+H]+.
异丙基((R)-(4-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯的制备
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(220mg,0.845mmol)溶于THF(5mL)中，冷至-5℃，在N2保护下缓慢滴加tBuMgCl(1M in THF,1.8mL,1.8mmol)，滴加完毕后在该温度下搅拌30分钟，随后升至室温并继续搅拌30分钟。将反应体系置于冰水浴中，缓慢滴加溶解于THF(3mL)中的异丙基((4-环丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷基)-L-丙氨酸酯（实施例二十一中第二步）(500mg,1.02mmol)溶液，保持该温度并连续搅拌过夜。用1N HCl溶液(1mL)淬灭反应体系，水泵减压浓缩溶剂，残余加入CH2Cl2(30mL)和1N HCl溶液(15mL)稀释，分离有机相，水相用CH2Cl2萃取(30mL×2)，合并有机相，分别以饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液得粗产物。所得粗产物柱层析(CH2Cl2:iPrOH=20:1)得标题化合物异丙基((R)-(4-环丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷基)-L-丙氨酸酯(118mg,24%,HPLC纯度:98%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.95(s,1H),7.26-7.24(m,1H),7.11-7.09(m,2H),7.03-7.00(m,2H),6.17(d,J=18.8Hz,1H),5.59(d,J=8.0,1H),5.05-4.99(m,1H),4.51-4.45(m,2H),4.10(d,J=9.6Hz,1H),4.06-3.88(m,2H),3.76(dd,J=24.0,9.2,1H),1.87-1.82(m,1H),1.39-1.28(m,6H),1.27-1.21(m,6H),0.98-0.91(m,2H),0.66-0.55(m,2H);
31P NMR(162MHz,CDCl3)δ4.31;
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-162.04;
ESI(m/z):570.1[M+H]+.
生物学评价
1、丙肝病毒HCV抑制活性测定
本发明化合物对HCV复制的抑制活性是用HCV荧光素酶报告基因分析方法(HCV Replicon Reporter Luciferase Assay)测定的。实验用的细胞模型为HCV荧光素酶报告基因稳转的Huh-7细胞系；待测化合物贮备溶液用二甲基亚砜配制为10mM，实验时用培养基稀释成一系列梯度浓度，一般稀释成8到10个浓度。测试的内参化合物为Cyclosporine。
试验的程序为：将细胞生长在96孔培养板上，24小时后将不同浓度的待测化合物和内参化合物加到培养的细胞。48小时后，用酶标仪检测荧光素酶活性。化合物的半数抑制浓度IC50值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对荧光素酶活性的抑制数值进行计算。
2、化合物对细胞的毒性测试
本发明化合物对细胞的毒性是用MTT cytotoxicity assay测定的。实验用的细胞模型为HCV荧光素酶报告基因稳转的Huh-7细胞系；待测化合物贮备溶液用二甲基亚砜配制为10mM，实验时用培养基稀释成一系列梯度浓度，一般稀释成8到10个浓度。测试的内参化合物为Cyclosporine。
试验的程序为：将细胞生长在96孔培养板上，24小时后将不同浓度的待测化合物和内参化合物加到培养的细胞。48小时后，将MTT加入到培养的细胞里培养4小时，然后用酶标仪检测吸光度。化合物的半数抑制浓度CC50值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对细胞活性的抑制数值进行计算。
3、本发明实施例化合物生物活性检测数据列表如下：
表1
表2
**其中PSI-7851(SP/RP≈1:1)是依照参考文献J.Med.Chem.2010,53,7202制备，其光学纯形式Sofosbuvir(光学纯SP)是依照参考文献J.Org.Chem.2011,76,8311制备。
“NA”是“Not Available”首字母缩写，指还未检测活性。
由实施例二十一中制备的一对差向异构体的测试结果表2可得知，光学纯的Sp构型的异构体细胞活性优于Rp构型的异构体。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，例如实施例一至实施例二十可以柱层析分离得到(S)-异构体或者根据实施例二十一的方法合成(S)-异构体，所述技术方案也不会脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (32)

1.一种具有如下式(I)化合物尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
其中，Z选自氧或硫；
R1选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，
或者
R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环，
其中所述的C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3选自氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R4选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷甲基、卤取代C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷基硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5；
R5、R6、R7选自氢、Cl-4烷基、C3-8环烷基；
m为0、1、2、3、4；
r为0、1、2。
2.根据权利要求1所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，Z选自氧，结构式如式(II)化合物，
其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
3.根据权利要求2所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，
R1选自C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，
其中所述的C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
4.根据权利要求3所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，
R1选自C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基，
其中所述的C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8链炔基进一步被一个或多个选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基或5-10元杂芳基硫基的取代基所取代；
R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
5.根据权利要求4所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
6.根据权利要求5所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
7.根据权利要求3所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，
R1选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基，
其中所述的C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
8.根据权利要求7所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
9.根据权利要求8所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
10.根据权利要求3所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1选自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，
R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
11.根据权利要求10所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
12.根据权利要求11所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
13.根据权利要求2所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环，
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
14.根据权利要求13所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环选自如下结构：
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
15.根据权利要求14所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环选自如下结构：
16.根据权利要求1所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，Z选自硫，结构式如式(III)化合物，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
17.根据权利要求16所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，
R4选自卤素、羟基、巯基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷甲基、卤取代C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷基硫基；
R1、R2、R3、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
18.根据权利要求17所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R3选自氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4选自氟、甲基、三氟甲基、环丙基、环丙甲基；
R1、R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
19.根据权利要求18所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R3选自氢、C1-4烷基、环丙基、环己基或苯基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4选自甲基；
R1、R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
20.根据权利要求19所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1选自氢、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基，其中所述的C1-8烷基、卤取代C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8链炔基进一步被一个或多个选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基或5-10元杂芳基硫基的取代基所取代；
R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
21.根据权利要求20所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
22.根据权利要求19所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1选自C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基，其中所述的C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
23.根据权利要求22所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
24.根据权利要求19所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1选自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7；
R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
25.根据权利要求24所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
26.根据权利要求19所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，
R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环，
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
27.根据权利要求26所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1与苯环相邻的碳原子形成5-7元碳环、5-7元杂环选自如下结构：
其中所述的5-7元碳环或5-7元杂环任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定义。
28.根据权利要求27所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
29.根据权利要求16-27中任一项所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，其立体异构体为S构型，结构如下：
30.一种根据权利要求1所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
任选进一步包括柱层析分离得到其立体异构体，或者通过以下步骤得到其立体异构体：
其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如权利要求1所定义。
31.一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的根据权利要求1所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
32.根据权利要求1所述的尿嘧啶核苷酸类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐或根据权利要求31所述的药物组合物在制备用于治疗丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、西尼罗病毒、黄热病病毒、登革病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、牛病毒性腹泻病毒或日本脑炎病毒感染所引起的疾病的药物中的应用。
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