JP2010527957A - 抗ウイルス剤 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ヌクレオシドホスホロアミダート、その合成、及びRNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体としてのその使用に関する。本発明の化合物は、RNA依存性RNAウイルス複製の阻害剤に対する前駆体であり、従ってRNA依存性RNAウイルス感染症を治療するために有用である。これらの化合物は特に、C型肝炎ウイルス(HCV)NS5Bポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、HCV複製の阻害剤に対する前駆体として、及びC型肝炎感染症の治療のために有用である。
C型肝炎ウイルス(HCV)感染症は重大な健康問題であり、世界の人口の2〜15%と推定される多数の感染者が肝硬変や肝細胞癌のような慢性肝疾患に至っている。米国疾病対策センターによれば、米国だけでも感染者数は450万人と推定されている。世界保健機構によれば、世界中の感染者は2億人以上であり、毎年3〜400万人が感染している。一度感染すると、感染者の約20%はウイルスを除去できるが、残りは生涯HCVを有している。慢性感染者の10〜20%が最終的に肝臓を壊す肝硬変または癌にかかっている。このウイルス疾患は非経口的に、汚染された血液及び血液製剤により、汚染された注射針により、或いは性的に、感染している母親またはキャリアの母親からその子孫へと垂直に伝染する。HCV感染症に対する現在の治療法は組換えインターフェロン−α単独でまたはヌクレオシドアナログのリバビリンと組み合わせて用いる免疫治療に限られているが、この治療の臨床効果も限定的である。更に、HCVに対して確立されたワクチンはない。従って、慢性HCV感染症を効果的に撲滅させる改良された治療薬が緊急に必要とされている。HCV感染症の治療の技術水準は検討されており、以下の刊行物を参照されたい:B.Dymockら,“Novel approaches to the treatment of hepatitis C virus infection”,Antiviral Chemistry & Chemotherapy,11:79−96(2000);H.Rosenら,“Hepatitis C virus:current understanding and prospects for future therapies”,Molecular Medicine Today,5:393−399(1999);D.Moradpourら,“Current and evolving therapies for hepatitis C”,European J.Gastroenterol.Hepatol.,11:1189−1202(1999);R.Bartenschlager,“Candidate Targets for Hepatitis C Virus−Specific Antiviral Therapy”,Intervirology,40:378−393(1997);G.M.Lauer and B.D.Walker,“Hepatitis C Virus Infection”,N.Engl.J.Med.,345:41−52(2001);B.W.Dymock,“Emerging therapies for hepatitis C virus infection”,Emerging Drugs,6:13−42(2001);及びC.Crabb,“Hard−Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C”,Science:506−507(2001)。これらのすべての刊行物の開示内容は全文参照により本明細書に組み入れる。
HCV治療に対する別のアプローチも採用されており、その中にはウイルスセリンプロテイナーゼ(NS3プロテアーゼ)、ヘリカーゼ及びRNA依存性RNAポリメラーゼ(NS5B)の阻害、並びにワクチンの開発が含まれる。
HCVビリオンは、約3,010アミノ酸のポリタンパク質をコード化する約9600塩基の単オリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有する包膜+鎖RNAウイルスである。HCV遺伝子のタンパク質産物は構造タンパク質C、E1及びE2と非構造タンパク質NS2、NS3、NS4A及びNS4B、NS5A及びNS5Bから構成されている。非構造(NS)タンパク質はウイルス複製のための触媒機構を与えると考えられている。NS3プロテアーゼはポリタンパク質鎖からRNA依存性RNAポリメラーゼであるNS5Bを放出させる。HCV NS5BポリメラーゼはHCVの複製サイクルにおいて鋳型として作用する一本鎖ウイルスRNAから二本鎖RNAの合成のために必要である。従って、NS5BポリメラーゼはHCV複製コンプレックスにおける必須成分であると考えられている[K.Ishiら,“Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein:Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding”,Hepatology,29:1227−1235(1999);及びV.Lohmannら,“Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA−Dependent RNA Polymerase of the Hepatits C Virus”,Virology,249:108−118(1998)を参照されたい]。HCV NS5Bポリメラーゼを阻害すると二本鎖HCV RNAの形成が防止され、従ってHCV NS5Bポリメラーゼの阻害はHCV特異的抗ウイルス治療を開発するための魅力的なアプローチとなる。
HCV感染症を治療できるHCV NS5Bポリメラーゼの阻害剤の開発は、M.P.Walkerら,“Promising candidates for the treatment of chronic hepatitis C”,Expert Opin.Invest.Drugs,12:1269−1280(2003)及びP.Hoffmannら,“Recent patents on experimental therapy for hepatitis C virus infection(1999−2002)”,Expert Opin.Ther.Patents,13:1707−1723(2003)において検討されている。HCVポリメラーゼに対するプリンリボヌクレオシドの活性は、A.E.Eldrupら,“Structure−Activity Relationship of Purine Ribonucleosides for inhibition of HCV RNA−Dependent RNA Polymerase”,J.Med.Chem.,47:2283−2295(2004)により報告されている。HCV治療に対する治療アプローチとしてのHCVポリメラーゼの阻害剤として構造的に異なるヌクレオシド誘導体が要望され続けている。
公表されている国際公開第2006/063149号パンフレット(Regents of the University of Minnesota)は、抗ウイルス及び抗癌活性を有するとして式:
今回、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがRNA依存性RNAウイルス複製、特にHCV複製の強力な阻害剤に対する前駆体であることを知見した。このホスホロアミダートはインビボでそのヌクレオシド5’−ホスフェート(ヌクレオチド)誘導体に変換され、この誘導体はRNA依存性RNAウイルスポリメラーゼ、特にHCV NS5Bポリメラーゼの阻害剤である対応のヌクレオシド5’−トリホスフェート誘導体に変換される。インビトロでのホスホロアミダートのヌクレオシド5’−ホスフェート誘導体への変換は本明細書中に記載されているアッセイBにおいてヒト肝細胞で説明されている。本ヌクレオシドホスホロアミダートはRNA依存性RNAウイルス感染症、特にHCV感染症を治療するために有用である。
従って、本発明の目的は、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、特にHCV NS5Bポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用なヌクレオシドホスホロアミダートを提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルスの複製の阻害剤に対する前駆体として、特にC型肝炎ウイルスの複製の阻害剤に対する前駆体として有用なヌクレオシドホスホロアミダートを提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス感染症の治療、特にHCV感染症の治療において有用なヌクレオシドホスホロアミダートを提供することである。
本発明の別の目的は、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、特にHCV NS5Bポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として使用するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス複製の阻害剤に対する前駆体、特にHCV複製の阻害剤に対する前駆体として使用するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス感染症の治療、特にHCV感染症の治療において使用するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートをRNA依存性RNAウイルス、特にHCVに対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの抑制方法、特にHCV NS5Bポリメラーゼの抑制方法を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス複製の抑制方法、特にHCV複製の抑制方法を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス感染症の治療方法、特にHCV感染症の治療方法を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルスに対して活性な他の物質と組み合わせたRNA依存性RNAウイルス感染症の治療方法、特にHCVに対して活性な他の物質と組み合わせたHCV感染症の治療方法を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス複製の抑制及び/またはRNA依存性RNAウイルス感染症の治療、特にHCV複製の抑制及び/またはHCV感染症の治療のための薬剤として使用するためのヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、RNA依存性RNAウイルス複製の抑制及び/またはRNA依存性RNAウイルス感染症の治療、特にHCV複製の抑制及び/またはHCV感染症の治療のための薬剤を製造するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物の使用を提供することである。
上記した及び他の目的は以下の詳細説明から容易に明らかなるであろう。
B.Dymockら,"Novel approaches to the treatment of hepatitis C virus infection",Antiviral Chemistry & Chemotherapy,11:79−96(2000)
H.Rosenら,"Hepatitis C virus:current understanding and prospects for future therapies",Molecular Medicine Today,5:393−399(1999)
D.Moradpourら,"Current and evolving therapies for hepatitis C",European J.Gastroenterol.Hepatol.,11:1189−1202(1999)
R.Bartenschlager,"Candidate Targets for Hepatitis C Virus−Specific Antiviral Therapy",Intervirology,40:378−393(1997)
G.M.Lauer and B.D.Walker,"Hepatitis C Virus Infection",N.Engl.J.Med.,345:41−52(2001)
B.W.Dymock,"Emerging therapies for hepatitis C virus infection",Emerging Drugs,6:13−42(2001)
C.Crabb,"Hard−Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C",Science:506−507(2001)
K.Ishiら,"Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein:Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding",Hepatology,29:1227−1235(1999)
V.Lohmannら,"Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA−Dependent RNA Polymerase of the Hepatits C Virus",Virology,249:108−118(1998)
M.P.Walkerら,"Promising candidates for the treatment of chronic hepatitis C",Expert Opin.Invest.Drugs,12:1269−1280(2003)
P.Hoffmannら,"Recent patents on experimental therapy for hepatitis C virus infection(1999−2002)",Expert Opin.Ther.Patents,13:1707−1723(2003)
A.E.Eldrupら,"Structure−Activity Relationship of Purine Ribonucleosides for Inhibition of HCV RNA−Dependent RNA Polymerase",J.Med.Chem.,47:2283−2295(2004)
本発明は、示されている立体化学配置の構造式(I):
環Bは場合によりR9aで置換されているアデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルまたは7−デアザアデニンであり、前記したアデニン、グアニン、シトシン及び7−デアザアデニンのNH2基は場合によりR9bで置換されており;
Xは
R1は水素、または場合によりフルオロで置換されているC1−6アルキルであり;
R2はフルオロまたはOR10であり;
R3は水素、C1−16アルキルカルボニル、C2−18アルケニルカルボニル、C1−10アルキルオキシカルボニル、C3−6シクロアルキルカルボニル、C3−6シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式:
R4は水素、C1−6アルキル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルであり、前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、1H−イミダゾリル及び1H−インドル−3−イルからなる群から選択される1個の置換基で置換されており、前記したフェニル、ベンジル及びフェネチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される1または2個の置換基で置換されており;
R5は水素またはメチルであり;或いは
R4及びR5はこれらが結合している炭素原子と一緒に、3〜6員脂肪族スピロ環式環系を形成し;或いは
R4及びXはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び1または2個の窒素原子を含有し、場合によりC7−16アルキルで置換されている5員芳香族環系を形成し;
R6はC7−16アルキル、C2−20アルケニル、(CH2)0−4C7−9シクロアルキル、(CH2)0−4C3−9シクロアルケニルまたはアダマンチルであり、前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、C1−4アルコキシ、トリフルオロメチル及び(CH2)0−4NRxRyから独立して選択される1〜3個の置換基で置換されており;
Rx及びRyは独立して水素及びC1−6アルキルから選択され;或いは
Rx及びRyはこれらが結合している窒素原子と一緒に、場合によりN、O及びSから選択される1または2個の追加ヘテロ原子を含有しており、場合によりC1−6アルキルで置換されている4〜7員ヘテロ環式環を形成し;
各R7は独立して水素、C1−5アルキルまたはフェニルC0−2アルキルであり;
各R8は独立して水素、C1−4アルキル、C1−4アシル、ベンゾイル、C1−4アルキルオキシカルボニル、フェニルC0−2アルキルオキシカルボニル、C1−4アルキルアミノカルボニル、フェニルC0−2アルキルアミノカルボニル、C1−4アルキルスルホニルまたはフェニルC0−2アルキルスルホニルであり;
R9a及びR9bは独立して水素、ハロゲン、C(O)C1−8アルキル、C(O)OC1−8アルキル、ベンゾイル、及び
R10は水素、メチル、C1−16アルキルカルボニル、C2−18アルケニルカルボニル、C1−10アルキルオキシカルボニル、C3−6シクロアルキルカルボニル、C3−6シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式:
の5員環状アセタール/ケタールを形成し;
R11は水素、CH2OC(O)R15、CH2CH2SR15、または(CH2)2−4−O−(CH2)1−17CH3であり;
R12はC6−16アルキル、C2−20アルケニル、(CH2)0−2C7−9シクロアルキル、(CH2)0−2C3−9シクロアルケニル、OC1−6アルキルまたはアダマンチルであり;
R13及びR14は独立して水素及びC1−6アルキルから選択され;或いは
R13及びR14はこれらが結合している炭素原子と一緒に、3〜6員脂肪族スピロ環式環系を形成し;
R15はC1−6アルキルである]
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩に関する。
式(I)を有する化合物は、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼ、特にHCV NS5Bポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である。前記化合物はRNA依存性RNAウイルス複製、特HCV複製の阻害剤に対する前駆体でもあり、RNA依存性RNAウイルス感染症の治療、特にHCV感染症の治療のために有用である。
作用メカニズムに限定を加えることことなく、本発明のホスホロアミダートは対応のヌクレオシド5’−モノホスフェートの前駆体として作用する。内因性キナーゼ酵素は、5’−モノホスフェートをその5’−トリホスフェート誘導体に変換させ、後者はRNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤である。よって、ホスホロアミダートは、ヌクレオシドそのものよりもより効率的に標的細胞を侵入させ得、代謝分解に対する感受性がより低いことがあり、肝臓のような特定組織をターゲットする能力を有し得、その結果抗ウイルス剤の全用量を低下させる広い治療指数が得られる。
化合物を単独でまたはRNA依存性RNAウイルス、特にHCVに対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物、並びにRNA依存性RNAウイルス複製の抑制方法及びRNA依存性RNAウイルス感染症の治療方法も本発明の範囲内に包含される。
本発明は、示されている立体化学配置の構造式(I):
環Bは場合によりR9aで置換されているアデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルまたは7−デアザアデニンであり、前記したアデニン、グアニン、シトシン及び7−デアザアデニンのNH2基は場合によりR9bで置換されており;
Xは
R1は水素、または場合によりフルオロで置換されているC1−6アルキルであり;
R2はフルオロまたはOR10であり;
R3は水素、C1−16アルキルカルボニル、C2−18アルケニルカルボニル、C1−10アルキルオキシカルボニル、C3−6シクロアルキルカルボニル、C3−6シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式:
R4は水素、C1−6アルキル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルであり、前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、1H−イミダゾリル及び1H−インドル−3−イルからなる群から選択される1個の置換基で置換されており、前記したフェニル、ベンジル及びフェネチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される1または2個の置換基で置換されており;
R5は水素またはメチルであり;或いは
R4及びR5はこれらが結合している炭素原子と一緒に、3〜6員脂肪族スピロ環式環系を形成し;或いは
R4及びXはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び1または2個の窒素原子を含有し、場合によりC7−16アルキルで置換されている5員芳香族環系を形成し;
R6はC7−16アルキル、C2−20アルケニル、(CH2)0−4C7−9シクロアルキル、(CH2)0−4C3−9シクロアルケニルまたはアダマンチルであり、前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、C1−4アルコキシ、トリフルオロメチル及び(CH2)0−4NRxRyから独立して選択される1〜3個の置換基で置換されており;
Rx及びRyは独立して水素及びC1−6アルキルから選択され;或いは
Rx及びRyはこれらが結合している窒素原子と一緒に、場合によりN、O及びSから選択される1または2個の追加ヘテロ原子を含有しており、場合によりC1−6アルキルで置換されている4〜7員ヘテロ環式環を形成し;
各R7は独立して水素、C1−5アルキルまたはフェニルC0−2アルキルであり;
各R8は独立して水素、C1−4アルキル、C1−4アシル、ベンゾイル、C1−4アルキルオキシカルボニル、フェニルC0−2アルキルオキシカルボニル、C1−4アルキルアミノカルボニル、フェニルC0−2アルキルアミノカルボニル、C1−4アルキルスルホニルまたはフェニルC0−2アルキルスルホニルであり;
R9a及びR9bは独立して水素、ハロゲン、C(O)C1−8アルキル、C(O)OC1−8アルキル、ベンゾイル及び
R10は水素、メチル、C1−16アルキルカルボニル、C2−18アルケニルカルボニル、C1−10アルキルオキシカルボニル、C3−6シクロアルキルカルボニル、C3−6シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式:
の5員環状アセタール/ケタールを形成し;
R11は水素、CH2OC(O)R15、CH2CH2SR15、または(CH2)2−4−O−(CH2)1−17CH3であり;
R12はC6−16アルキル、C2−20アルケニル、(CH2)0−2C7−9シクロアルキル、(CH2)0−2C3−9シクロアルケニル、OC1−6アルキルまたはアダマンチルであり;
R13及びR14は独立して水素及びC1−6アルキルから選択され;或いは
R13及びR14はこれらが結合している炭素原子と一緒に、3〜6員脂肪族スピロ環式環系を形成し;
R15はC1−6アルキルである]
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩に関する。
式(I)を有する化合物は、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である。前記化合物はRNA依存性RNAウイルス複製の阻害剤に対する前駆体でもあり、従ってRNA依存性RNAウイルス感染症の治療のために有用である。
本発明の1つの実施形態では、環Bはシトシンまたは7−デアザアデニンである。好ましくは、環Bはシトシンである。
本発明の別の実施形態では、R1は水素、または場合によりフルオロで置換されているC1−4アルキルである。好ましくは、R1は水素、または場合によりフルオロで置換されているC1−2アルキルである。より好ましくは、R1は水素、メチルまたはフルオロメチルである。最も好ましくは、R1はメチルである。
本発明の別の実施形態では、R2はヒドロキシ、フルオロまたはヒドロキシメチルである。好ましくは、R2はヒドロキシである。
本発明の別の実施形態では、R3は水素またはC1−6アルキルカルボニルである。好ましくは、R3は水素またはC1−2アルキルカルボニルである。より好ましくは、R3は水素である。
本発明の別の実施形態では、R4は水素またはC1−5アルキルである。好ましくは、R4は水素またはC1−3アルキルである。より好ましくは、R4は水素またはメチルである。
本発明の別の実施形態では、R4及びXはこれらが結合している炭素原子と一緒に、場合によりC7−16アルキルで置換されている酸素原子及び2個の窒素原子を含有する5員芳香族環系を形成する。好ましくは、5員芳香族環系はオキサジアゾール環である。好ましくは、C7−16アルキル置換基はC7アルキル基、例えば1−プロピルブチルである。
本発明の1つの好ましい実施形態では、R4及びXはこれらが結合している炭素原子と一緒に5員芳香族環系を形成しない。
本発明の別の実施形態では、R5は水素である。
本発明の別の実施形態では、R6はC7−16アルキルである。より好ましくは、R6はC7−10アルキルである。最も好ましくは、R6はオクチル、特に2−プロピルペンチルである。
本発明の別の実施形態では、R9a及びR9bは独立して水素、C1−6アルキルカルボニルまたはC1−6アルコキシカルボニルである。好ましくは、R9a及びR9bは独立して水素またはC1−4アルキルカルボニルである。より好ましくは、R9a及びR9bは水素である。
本発明の別の実施形態では、R10は水素またはメチルである。好ましくは、R10は水素である。
本発明の別の実施形態では、R11は水素またはCH2OC(O)R15(ここで、R15は前に定義されている通りである)である。好ましくは、R11は水素またはCH2OC(O)C1−4アルキルである。より好ましくは、R11は水素またはCH2OC(O)C1−2アルキルである。最も好ましくは、R11は水素である。
本発明の別の実施形態では、R12はC6−16アルキルである。より好ましくは、R12はC6−12アルキルである。最も好ましくは、R12はC7−10アルキルである。特に、R12はヘプチル、具体的には1−プロピルブチルである。
本発明の別の実施形態では、R13及びR14は独立して水素及びC1−4アルキルから選択される。好ましくは、R13及びR14は独立して水素及びC1−2アルキルから選択される。より好ましくは、R13及びR14は独立して水素またはメチルである。最も好ましくは、R13及びR14は共に水素である。
本発明の別の実施形態で、構造式(Ia):
RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である構造式Iを有する本発明の化合物の非限定的例は以下の化合物:
以下の化合物は本明細書中に参考例としても記載されている:
本発明の1つの実施形態では、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートは+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルス複製の阻害剤として、及び/または+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルス感染症の治療のために有用である。この実施形態のクラスでは、+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルスはフラビウイルス科(Flaviviridae)ウイルスまたはピコルナウイルス科(Picornaviridae)ウイルスである。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルスはライノウイルス、ポリオウイルスまたはA型肝炎ウイルスである。このクラスの第2サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスはC型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、バンジ(Banzi)ウイルス及びウシ下痢症ウイルス(BVDV)からなる群から選択される。このクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスはC型肝炎ウイルスである。
本発明の別の態様は、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害、RNA依存性RNAウイルス複製の抑制、及び/またはRNA依存性RNAウイルス感染症の治療を有する哺乳動物に対して治療有効量の構造式(I)を有する化合物を投与することを含む前記哺乳動物におけるRNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害方法、RNA依存性RNAウイルス複製の抑制方法、及び/またはRNA依存性RNAウイルス感染症の治療方法に関する。
本発明のこの態様の1つの実施形態では、RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼ は+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼである。この実施形態のクラスでは、+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼはフラビウイルス科ウイルスポリメラーゼまたはピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼである。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼはライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼまたはA型肝炎ウイルスポリメラーゼである。このクラスの第2サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはC型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱ウイルスポリメラーゼ、デング熱ウイルスポリメラーゼ、西ナイルウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、バンジウイルスポリメラーゼ及びウシ下痢症ウイルス(BVDV)ポリメラーゼからなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはC型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
本発明のこの態様の第2実施形態では、RNA依存性RNAウイルス複製は+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルス複製である。この実施形態のクラスでは、+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルス複製はフラビウイルス科ウイルス複製またはピコルナウイルス科ウイルス複製である。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルス複製はライノウイルス複製、ポリオウイルス複製またはA型肝炎ウイルス複製である。このクラスの第2サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス複製はC型肝炎ウイルス複製、黄熱ウイルス複製、デング熱ウイルス複製、西ナイルウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、バンジウイルス複製及びウシ下痢症ウイルス複製からなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス複製はC型肝炎ウイルス複製である。
本発明のこの態様の第3実施形態では、RNA依存性RNAウイルス感染症は+鎖一本鎖RNA依存性ウイルス感染症である。この実施形態のクラスでは、+鎖一本鎖RNA依存性RNAウイルス感染症はフラビウイルス科ウイルス感染症またはピコルナウイルス科ウイルス感染症である。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルス感染症はライノウイルス感染症、ポリオウイルス感染症またはA型肝炎ウイルス感染症である。このクラスの第2サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス感染症はC型肝炎ウイルス感染症、黄熱ウイルス感染症、デング熱ウイルス感染症、西ナイルウイルス感染症、日本脳炎ウイルス感染症、バンジウイルス感染症及びウシ下痢症ウイルス感染症からなる群から選択される、このサブクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス感染症はC型肝炎ウイルス感染症である。
本明細書を通じて、以下の用語は指定されている意味を有している:
上に特定されているアルキル基は、直鎖状または分岐状配置で指定されている長さを有するアルキル基を含むと意図される。アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、1−プロピルブチル、オクチル、2−プロピルペンチル等である。
上に特定されているアルキル基は、直鎖状または分岐状配置で指定されている長さを有するアルキル基を含むと意図される。アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、1−プロピルブチル、オクチル、2−プロピルペンチル等である。
用語「アダマンチル」は1−アダマンチル及び2−アダマンチルの両方を含む。
用語「場合により置換されているベンジル」は、フェニル部分が場合により置換されている−CH2フェニルを意味する。
用語「アルケニル」は、全部で2〜12個の炭素原子またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルケン(例:エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、オレイル等)を意味する。
用語「シクロアルキル」は、全部で3〜8個の炭素原子またはこの範囲内の炭素原子数を有するアルカンの環状環(すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチル)を意味する。
用語「シクロアルケニル」は、全部で3〜8個の炭素原子またはこの範囲内の炭素原子数を有するアルケンの環状環(すなわち、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、またはシクロオクテニル)を意味する。
用語「アルコキシ」は、特定されている炭素原子数(例えば、C1−4アルコキシ)またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルコキシド[すなわち、メトキシ(MeO−)、エトキシ、イソプロポキシ等]を指す。
用語「アルキルアミノ」は、特定されている炭素原子数(例えば、C1−4アルキルアミノ)またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐状アルキルアミン[すなわち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、t−ブチルアミノ等]を指す。
用語「アルキルスルホニル」は、特定されている炭素原子数(例えば、C1−6アルキルスルホニル)またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルスルホン[すなわち、メチルスルホニル(MeSO2−)、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニル等]を指す。
用語「アルキルオキシカルボニル」は、特定されている炭素原子数(例えば、C1−8アルキルオキシカルボニル)またはこの範囲内の炭素原子数を有する本発明の化合物中に存在するカルボン酸またはカルバミン酸基の直鎖または分岐鎖エステル[すなわち、メチルオキシカルボニル(MeOCO−)、エチルオキシカルボニル、またはブチルオキシカルボニル]を指す。
用語「アルキルカルボニル」は、特定されている炭素原子数(例えば、C1−8アルキルカルボニル)またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルアシル基[すなわち、メチルオキシカルボニル(MeOCO−)、エチルオキシカルボニル、またはブチルオキシカルボニル]を指す。
用語「ハロゲン」は、ハロゲン原子のフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含むと意図される。
用語「ホスホリル」は、−P(O)(OH)2を指す。
用語「ジホスホリル」は、構造:
用語「トリホスホリル」は、構造:
用語「5員環状カーボネート環」は、ヌクレオシドのフラノース環のC−2及びC−3位でC−2及びC−3ヒドロキシルをカルボニル化剤(例えば、ホスゲン及び1,1’−カルボニルジイミダゾール)を用いてアシル化することにより形成される以下の環系を指す。
用語「置換されている」は、挙げられている置換基による複数の置換を含むと見なされる。複数の置換基部分が開示乃至特許請求されている場合、置換されている化合物は独立して1つ以上の開示乃至特許請求されている置換基部分により1回または複数回置換されていてもよい。
用語「5’−トリホスフェート」は、以下の一般構造式(II):
用語「アデニン」は、構造:
用語「グアニン」は、構造:
用語「シトシン」は、構造:
用語「チミン」は、構造:
用語「ウラシル」は、構造:
用語「7−デアザアデニン」は、構造:
「医薬組成物」中のような用語「組成物」は、活性成分及び担体を構成する不活性成分からなる製品;及び2つ以上の成分の組合せ、複合体化または集合から、1つ以上の成分の解離から、または1つ以上の成分の他のタイプの反応または相互作用から直接または間接的に生ずる製品を包含すると意図される。従って、本発明の医薬組成物は本発明の化合物を医薬的に許容され得る担体と混合することにより製造される組成物を包含する。
用語「化合物の投与」及び「化合物を投与する」は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを必要な個人に与えることを意味すると理解されるべきである。
本発明の別の態様は、本発明の化合物をHCV感染症を治療するために有用な1つ以上の物質と一緒に用いるHCV NS5Bポリメラーゼの阻害、HCV複製の抑制、またはHCV感染症の治療方法に関する。HCVに対して活性な物質にはリバビリン、レボビリン、ビラミジン、ニタゾキサニド、サイモシンα−1、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α(ペグインターフェロン−α)、インターフェロン−αとリバビリンの組合せ、ペグインターフェロン−αとリバビリンの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの組合せが含まれるが、これらに限定されない。インターフェロン−αには組換えインターフェロン−α2a(例:ニュージャージー州ナトリーに所在のHoffmann−LaRocheから入手可能なロフェロンインターフェロン)、ペグ化インターフェロン−α2a(Pegasys(商品名))、インターフェロン−α2b(例:ニュージャージー州ケニルワースに所在のSchering Corp.から入手可能なイントロン−Aインターフェロン)、ペグ化インターフェロン−α2b(Peglntron(商品名))、組換えコンセンサスインターフェロン(例:インターフェロンアルファコン−1)及び精製インターフェロン−α産物が含まれるが、これらに限定されない。Amgenの組換えコンセンサスインターフェロンは商品名Infergen(登録商標)を有している。レボビリンは、リバビリンに類似している免疫調節活性を有していることが公知のリバビリンのL−エナンチオマーである。ビラミジンは、(ICN Pharmaceuticalsに譲渡されている)国際公開第01/60379号パンフレットに開示されているリバビリンのアナログに相当する。本発明のこの方法によれば、組合せの個々の成分を治療中の異なる時期に別々に投与しても、またはばらばらのまたは1つの配合剤の形態で同時に投与してもよい。従って、本発明は、同時または交互治療のすべてのレジメを包含すると理解され、用語「投与する」はそのように解釈されるべきである。本発明の化合物とHCV感染症の治療に有用な他の物質の組合せの範囲には原則としてHCV感染症を治療するための医薬組成物との組合せも含まれると理解されたい。本発明の化合物またはその医薬的に許容され得る塩をHCVに対して活性な第2治療薬と一緒に使用する場合、各化合物の用量は当該化合物を単独で使用したときと同じでも異なっていてもよい。
HCV感染症を治療するために、本発明の化合物をHCV NS3セリンプロテアーゼの阻害剤である物質と一緒に投与してもよい。HCV NS3セリンプロテアーゼは必須のウイルス酵素であり、HCV複製を抑制するための優秀な標的であることは記載されている。HCV NS3プロテアーゼ阻害剤の基質及び非基質をベースとする阻害剤は国際公開第98/22496号パンフレット、国際公開第98/46630号パンフレット、国際公開第99/07733号パンフレット、国際公開第99/07734号パンフレット、国際公開第99/38888号パンフレット、国際公開第99/50230号パンフレット、国際公開第99/64442号パンフレット、国際公開第00/09543号パンフレット、国際公開第00/59929号パンフレット、英国特許出願公開第2337262号明細書、国際公開第02/18369号パンフレット、国際公開第02/08244号パンフレット、国際公開第02/48116号パンフレット、国際公開第02/48172号パンフレット、国際公開第05/037214号パンフレット及び米国特許第6,323,180号明細書に開示されている。HCV複製の阻害剤を開発するため及びHCV感染症を治療するための標的としてのHCV NS3プロテアーゼはB.W.Dymock,“Emerging therapies for hepatitis C virus infection”,Emerging Drugs,6:13−42(2001)において検討されている。本発明の化合物と組み合わされ得る具体的なHCV NS3プロテアーゼ阻害剤にはBILN2061、VX−950、SCH6、SCH7及びSCH−503034が含まれる。
リバビリン、レボビリン及びビラミジンは、細胞内酵素イノシンモノホスフェートデヒドロゲナーゼ(IMPDH)を阻害することによりグアニンヌクレオチドの細胞内プールをモジュレートすることによりその抗HCV効果を発揮し得る。IMPDHはデノボグアニンヌクレオチド生合成中の生合成ルートに対する律速酵素である。リバビリンは細胞内で容易にリン酸化され、モノホスフェート誘導体はIMPDHの阻害剤である。よって、IMPDHの阻害はHCV複製の阻害剤を発見するための別の有用な標的に該当する。従って、本発明の化合物はIMPDHの阻害剤、例えば国際公開第97/41211号パンフレット及び国際公開第01/00622号パンフレット(Vertexに譲渡されている)に開示されているVX−497;別のIMPDH阻害剤、例えば国際公開第00/25780号パンフレット(Bristol−Myers Squibbに譲渡されている)に開示されているもの;またはミコフェノール酸モフェチル[A.C.Allison and E.M.Eugui,Agents Action,44(Suppl):165(1993)を参照されたい]と一緒に投与してもよい。
HCV感染症を治療するために、本発明の化合物を抗ウイルス剤アマンタジン(1−アミノアダマンタン)[この物質の包括的記載については、J.Kirschbaum,Anal.Profiles Drug Subs.,12:1−36(1983)を参照されたい]と一緒に投与してもよい。
HCV感染症の治療のために、本発明の化合物をR.E.Harry−O’kuruら,J.Org.Chem.,2:1754−1759(1997);M.S.Wolfeら,Tetrahedron Lett.,36:7611−7614(1995);米国特許第3,480,613号明細書(1969年11月25日)、米国特許第6,777,395号明細書(2004年8月17日)、米国特許第6,914,054号明細書(2005年7月5日)、国際公開第01/90121号パンフレット(2001年11月29日)、国際公開第01/92282号パンフレット(2001年12月6日)、国際公開第02/32920号パンフレット(2002年4月25日)、国際公開第02/057287号パンフレット(2002年7月25日)、国際公開第02/057425号パンフレット(2002年7月25日)、国際公開第04/002422号パンフレット(2004年1月8日)、国際公開第04/002999号パンフレット(2004年1月8日)、国際公開第04/003000号パンフレット(2004年1月8日)、国際公開第04/002422号パンフレット(2004年1月8日)、米国特許出願公開第2005/0107312号明細書、米国特許出願公開第2005/0090463号明細書、米国特許出願公開第2004/0147464号明細書、及び米国特許出願公開第2004/0063658号明細書に開示されている抗ウイルス性2’−C−分岐状リボヌクレオシドと組み合わせてもよい。これらの文献の各々の内容は全文参照により組み入れる。2’−C−分岐状リボヌクレオシドには2’−C−メチルシチジン、2’−フルオロ−2’−C−メチルシチジン、2’−C−メチルウリジン、2’−C−メチルアデノシン、2’−C−メチルグアノシン及び9−(2−C−メチル−β−D−リボフラノシル)−2,6−ジアミノプリン;フラノースC−2’、C−3’及びC−5’ヒドロキシルの対応するアミノ酸エステル(例えば、バロピシタビン二塩酸塩またはNM−283とも称されている3’−O−(L−バリル)−2’−C−メチルシチジン二塩酸塩、及び3’−O−(L−バリル)−2’−フルオロ−2’−C−メチルシチジン)、並びにその5’−ホスフェート誘導体の対応する場合により置換されている環状1,3−プロパンジオールエステルが含まれるが、これらに限定されない。
HCV感染症を治療するために、本発明の化合物を抗HCV特性を有する他のヌクレオシド、例えば米国特許第6,864,244号明細書(2005年3月8日);三菱製薬に譲渡されている国際公開第02/51425号パンフレット(2002年7月4日);Pharmasset,Ltd.に譲渡されている国際公開第01/79246号パンフレット、国際公開第02/32920号パンフレット及び国際公開第02/48165号パンフレット(2002年6月20日);ICN Pharmaceuticalsに譲渡されている国際公開第01/68663号パンフレット(2001年9月20日);国際公開第99/43691号パンフレット(1999年9月2日);Hoffmann−LaRocheに譲渡されている国際公開第02/18404号パンフレット(2002年3月7日);米国特許出願公開第2002/0019363号明細書(2002年2月14日);国際公開第02/100415号パンフレット(2002年12月19日)、国際公開第03/026589号パンフレット(2003年4月3日);国際公開第03/026675号パンフレット(2003年4月3日);国際公開第03/093290号パンフレット(2003年11月13日);米国特許出願公開第2003/0236216号明細書(2003年12月25日);米国特許出願公開第2004/0006007号明細書(2004年1月8日);国際公開第04/011478号パンフレット(2004年2月5日);国際公開第04/013300号パンフレット(2004年2月12日);米国特許出願公開第2004/0063658号明細書(2004年4月1日);及び国際公開第04/028481号パンフレット(2004年4月8日)に開示されているものと組み合わせてもよい。
1つの実施形態では、本発明のヌクレオシド誘導体と組み合わされ得るヌクレオシドHCV NS5Bポリメラーゼ阻害剤は、以下の化合物:4’−アジド−シチジン、4−アミノ−7−(2−C−メチル−β−D−リボフラノシル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン、4−アミノ−7−(2−C−ヒドロキシメチル−β−D−リボフラノシル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン、4−アミノ−7−(2−C−フルオロメチル−β−D−リボフラノシル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン、4−アミノ−5−フルオロ−7−(2−C−メチル−β−D−リボフラノシル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン、2−アミノ−7−(2−C−メチル−β−D−リボフラノシル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4(3H)−オン、4−アミノ−7−(2−C,2−O−ジメチル−β−D−リボフラノシル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン、並びにその医薬的に許容され得る塩及びプロドラッグから選択される。
HCV感染症を治療するために、本発明の化合物をHCVポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤、例えばTularik,Inc.に譲渡されている国際公開第01/77091号パンフレット(2001年10月18日);日本たばこ産業に譲渡されている国際公開第01/47883号パンフレット(2001年7月5日);Boehringer Ingelheimに譲渡されている国際公開第02/04425号パンフレット(2002年1月17日);Istituto di Ricerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A.に譲渡されている国際公開第02/06246号パンフレット(2002年1月24日);国際公開第02/20497号パンフレット(2002年3月3日);日本たばこ産業に譲渡されている国際公開第2005/016927号パンフレット(特に、JTK003);及びHCV−796(Viropharma Inc.)に開示されているものと組み合わせてもよい。これらの文献の各々の内容は全文参照により本明細書に組み入れる。
1つの実施形態では、本発明のヌクレオシド誘導体と組み合わされ得る非ヌクレオシドHCV NS5Bポリメラーゼ阻害剤は、以下の化合物:14−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−(2−モルホリン−4−イルエチル)−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−3−メトキシ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−3−メトキシ−6−メチル−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、({[(14−シクロヘキシル−3−メトキシ−6−メチル−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−イル)カルボニル]アミノ}スルホニル)酢酸メチル、({[(14−シクロヘキシル−3−メトキシ−6−メチル−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−イル)カルボニル]アミノ}スルホニル)酢酸、14−シクロヘキシル−N−[(ジメチルアミノ)スルホニル]−3−メトキシ−6−メチル−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボキサミド、3−クロロ−14−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン11−カルボン酸、N’−(11−カルボキシ−14−シクロヘキシル−7,8−ジヒドロ−6H−インドロ[1,2−e][1,5]ベンゾオキサゾシン−7−イル)−N,N−ジメチルエタン−1,2−ジアミニウムビス(トリフルオロ酢酸塩)、14−シクロヘキシル−7,8−ジヒドロ−6H−インドロ[1,2−e][1,5]ベンゾオキサゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−メチル−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−3−メトキシ−6−メチル−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−3−メトキシ−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−[3−(ジメチルアミノ)プロピル]−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−7−オキソ−6−(2−ピペリジン−1−イルエチル)−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−(2−モルホリン−4−イルエチル)−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−[2−(ジエチルアミノ)エチル]−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−(1−メチルピペリジン−4−イル)−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−N−[(ジメチルアミノ)スルホニル]−7−オキソ−6−(2−ピペリジン−1−イルエチル)−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボキサミド、14−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−N−[(ジメチルアミノ)スルホニル]−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボキサミド、14−シクロペンチル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−7−オキソ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、6−アリル−14−シクロヘキシル−3−メトキシ−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロペンチル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−α][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、14−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−5,6,7,8−テトラヒドロインドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−11−カルボン酸、13−シクロヘキシル−5−メチル−4,5,6,7−テトラヒドロフロ[3’,2’:6,7][1,4]ジアゾシノ[1,8−a]インドール−10−カルボン酸、15−シクロヘキシル−6−[2−(ジメチルアミノ)エチル]−7−オキソ−6,7,8,9−テトラヒドロ−5H−インドロ[2,1−a][2,6]ベンゾジアゾシン−12−カルボン酸、15−シクロヘキシル−8−オキソ−6,7,8,9−テトラヒドロ−5H−インドロ[2,1−a][2,5]ベンゾジアゾシン−12−カルボン酸、13−シクロヘキシル−6−オキソ−6,7−ジヒドロ−5H−インドロ[1,2−a][1,4]ベンゾジアゼピン−10−カルボン酸;並びにその医薬的に許容され得る塩から選択される。
「医薬的に許容され得る」とは、担体、希釈剤または賦形剤が製剤の他の成分と相容性でなければならず、レシピエントに対して有害であってはならないことを意味する。
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。本発明の別の例は、上記した化合物を医薬的に許容され得る担体と組み合わせることにより製造される医薬組成物である。本発明の別の例は、上記した化合物を医薬的に許容され得る担体と組み合わせることを含む医薬組成物の製造方法である。
有効量の本発明の化合物及び医薬的に許容され得る担体を含むRNA依存性RNAウイルスポリメラーゼ、特にHCV NS5Bポリメラーゼを阻害するために有用な医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。RNA依存性RNAウイルス感染症、特にΗCV感染症を治療するために有用な医薬組成物;RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼ、特にΗCV NS5Bポリメラーゼの阻害方法;及びRNA依存性ウイルス複製、特にΗCV複製の治療方法も本発明の範囲に含まれる。加えて、本発明は、治療有効量の本発明の化合物を治療有効量のRNA依存性RNAウイルス、特にΗCVに対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物に関する。ΗCVに対して活性な物質にはリバビリン、レボビリン、ビラミジン、サイモシンα−1、ΗCV NS3セリンプロテアーゼの阻害剤、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α(ペグインターフェロン−α)、インターフェロン−αとリバビリンの組合せ、ペグインターフェロン−αとリバビリンの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの組合せが含まれるが、これらに限定されない。インターフェロン−αには組換えインターフェロン−α2a(例:ニュージャージー州ナトリーに所在のHoffmann−LaRocheから入手可能なロフェロンインターフェロン)、インターフェロン−α2b(例;ニュージャージー州ケニルワースに所在のSchering Corp.から入手可能なイントロン−Aインターフェロン)、コンセンサスインターフェロン及び精製インターフェロン−α産物が含まれるが、これらに限定されない。リバビリン及びそのHCVに対する活性の検討については、J.O.Saunders and S.A.Raybuck,“Inosine Monophosphate Dehydrogenase:Consideration of Structure,Kinetics,and Therapeutic Potential”,Ann.Rep.Med.Chem.,35:201−210(2000)を参照されたい。
本発明の別の態様は、RNA依存性RNAウイルス複製、特にHCV複製の抑制、及び/またはRNA依存性RNAウイルス感染症、特にHCV感染症の治療のための薬剤を製造するためのヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物の使用を提供する。また、本発明の更なる態様は、RNA依存性RNAウイルス複製、特にHCV複製の抑制、及び/またはRNA依存性RNAウイルス感染症、特にHCV感染症の治療のための薬剤として使用するためのヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物を提供する。
本発明の医薬組成物は、活性成分として構造式(I)を有する化合物またはその医薬的に許容され得る塩を含み、医薬的に許容され得る担体及び場合により他の治療成分をも含み得る。
前記組成物には経口、直腸内、局所、(皮下、筋肉内及び静脈内を含めた)非経口、眼内(点眼)、肺内(鼻腔内または口腔内吸入)、または鼻腔内投与に適した組成物が含まれるが、所与の場合に最も適したルートは治療対象の状態の種類及び重症度、並びに活性成分の種類に依存する。組成物は一般的には単位投与形態で提供され、製薬業界で公知の方法により製造される。
実際の使用に際し、構造式(I)を有する化合物は活性成分として慣用の医薬コンパンディング技術に従って医薬用担体と均密に混合して組み合わされ得る。担体は、例えば経口または(静脈内を含めた)非経口投与のために所望する製剤の形態に応じて各種形態をとり得る。経口投与形態の組成物を製造するには、通常使用される医薬用媒体は、例えば懸濁液剤、エリキシル剤や溶液剤のような経口液体製剤の場合には水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存剤、着色剤等;散剤、硬または軟カプセル剤や錠剤のような経口固体製剤の場合には担体、例えばデンプン、糖、結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等である。固体経口製剤が液体製剤よりも好ましい。
投与が容易であるために、明らかに固体の医薬用担体が使用されている錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口投与単位形態に相当する。所望ならば、錠剤に標準の水性または非水性技術によりコーティングを被せてもよい。前記した組成物及び製剤は少なくとも0.1%の活性化合物を含有していなければならない。前記組成物中の活性化合物の%は勿論変更可能であり、通常単位の約2〜約60重量%であり得る。治療上有用な組成物中の活性化合物の量は有効用量が得られるような量である。活性化合物を、例えば液滴またはスプレーとして鼻腔内に投与してもよい。
錠剤、ピル剤、カプセル剤等は結合剤、例えはトラガカントガム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチン;賦形剤、例えばリン酸ジカルシウム;崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸;滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム;及び甘味料、例えばスクロース、ラクトースまたはサッカリンをも含み得る。投与単位形態がカプセル剤の場合、上記したタイプの材料に加えて液体担体、例えば脂肪油を含み得る。
コーティングとして、または投与単位の物理的形態を改変するために各種の他の材料を存在させてもよい。例えば、錠剤にシェラック及び/または糖をコーティングしてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は活性成分に加えて、甘味剤としてスクロース、保存剤としてメチル及びプロピルパラベン、染料及び着香剤(例えば、チェリーまたはオレンジフレーバー)を含み得る。
構造式Iを有する化合物は非経口的にも投与され得る。活性化合物を含む溶液剤または懸濁液剤は、界面活性剤(例えば、ヒドロキシプロピルセルロース)が適当に混合されている水中で製造され得る。分散液剤もグリセロール、液体ポリエチレングリコール及び油中のその混合物中で製造され得る。通常の貯蔵及び使用条件下で、これらの製剤は微生物の増殖を防止するために保存剤を含んでいる。
注射用に適した医薬形態には、滅菌の水性溶液剤または分散液剤、及び滅菌注射用溶液または懸濁液を即時調製するための滅菌散剤が含まれる。いずれの場合も、医薬形態は滅菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性でなければならない。製造及び貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物(例えば、細菌及び真菌)の汚染作用から保護されていなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール(例:グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール)、その適当な混合物及び植物油を含有している溶媒または分散媒体であり得る。
哺乳動物、特にヒトに有効量の本発明の化合物を与えるために適当な投与ルートが使用され得る。例えば、経口、直腸内、局所、非経口、眼内、肺内、鼻内等が使用され得る。剤形には錠剤、トローチ剤、分散液剤、懸濁液剤、溶液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏剤、エアゾール剤等が含まれる。構造式Iを有する化合物を経口投与することが好ましい。構造式Iを有する化合物を非経口投与することも好ましい。
ヒトに対して経口投与するための用量範囲は分割用量で0.01〜1000mg/kg体重である。1つの実施形態では、用量範囲は分割用量で0.1〜100mg/kg体重である。別の実施形態では、用量範囲は分割用量で0.5〜20mg/kg体重である。経口投与のためには、治療対象の患者に対する用量を症状に合わせて調節するために組成物を1.0〜1000mgの活性成分、特に1、5、10、15,20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、750、800、900及び1000mgの活性成分を含有する錠剤またはカプセル剤の形態で提供することが好ましい。
使用する活性成分の有効用量は使用する特定化合物、投与モード、治療対象の状態及び治療対象の状態の重症度に応じて変更され得る。用量は当業者により容易に確定され得る。この用量レジメンは最適治療応答を得るために調節され得る。
本発明の化合物は1つ以上の不斉中心を含み、よってラセミ体及びラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオマーとして存在し得る。R5が水素であり、構造式(I)中のリン原子に結合しているアミノアシル残基中のR4が式:
更に、Xが
構造式(I)を有する化合物中の四置換リンは別の不斉中心を構成し、本発明の化合物はリン原子での両方の立体化学配置を包含すると意図される。
本発明は、下記構造式に示す5員フラノース環についてβ−D立体化学配置を有するヌクレオシドホスホロアミダート、すなわち5員フラノース環のC−1及びC−4の置換基がβ−立体化学配置(太線で示すような“上向き”配置)を有するヌクレオシドホスホロアミダートを包含すると解される。
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはオレフィン二重結合を含み、別段の記載がない限りE及びZ幾何異性体の両方を含むと解される。
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはケト−エノール互変異性体のような互変異性体として存在し得る。個々の互変異性体及びその混合物も構造式(I)を有する化合物に包含される。本発明の化合物の範囲内に包含されると意図されるケト−エノール互変異性体の例を以下に示す。
構造式(I)を有する化合物は、例えば適当な溶媒(例えば、メタノール及び/または酢酸エチル)から分別結晶により、または光学活性固定相を用いるキラルクロマトグラフィーにより個々のジアステレオマーに分離され得る。
或いは、構造式(I)を有する化合物の立体異性体は、公知の配置を有する光学的に純粋な出発物質または試薬を用いる立体特異的合成により得られ得る。
本発明の化合物を医薬的に許容され得る塩の形態で投与してもよい。用語「医薬的に許容され得る塩」は、無機または有機塩基及び無機または有機酸を含めた医薬的に許容され得る非毒性の塩基または酸から製造される塩を指す。用語「医薬的に許容され得る塩」の範囲に含まれる塩基性化合物の塩は、通常遊離塩基を適当な無機または有機酸と反応させることにより製造される本発明の化合物の非毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、N−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩(エンボナート)、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩/二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド及び吉草酸塩が含まれるが、これらに限定されない。更に、本発明の化合物が酸性部分を有している場合、その適当な医薬的に許容され得る塩にはアルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第一鉄、第二鉄、リチウム、マグネシウム、第一マンガン、第二マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等を含めた無機塩基から誘導される塩が含まれるが、これらに限定されない。アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩及びナトリウム塩が特に好ましい。有機の医薬的に許容され得る非毒性塩基から誘導される塩には、第1級、第2級及び第3級アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂(例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、N,N−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、2−ジエチルアミノエタノール、2−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、N−エチルモルホリン、N−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テンブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等)の塩が含まれる。
また、本発明の化合物中にカルボン酸(−COOH)またはヒドロキシル基が存在する場合には、カルボン酸誘導体の医薬的に許容され得るプロドラッグエステル、例えばメチル、エチルまたはピバロイルオキシメチルエステル;或いはリボースC−2’、C−3’及びC−5’ヒドロキシルのプロドラッグアシル誘導体、例えばO−アセチル、O−ピバロイル、O−ベンゾイル及びO−アミノアシルを使用し得る。徐放性またはプロドラッグ製剤として使用するためにバイオアベイラビリティー、組織分布、溶解度、加水分解特性を改変するために当業界で公知のエステル及びアシル基が含まれる。考えられる誘導体はインビボで容易に所要化合物に変換される。よって、本発明の治療方法において、用語「投与する」及び「投与」は記載されているウイルス感染症を具体的に開示されている化合物または具体的に記載されていないが、ヒト患者を含めた哺乳動物に対して投与した後インビボで具体的化合物に変換する化合物を用いて治療することを包含すと考えられる。適当なプロドラッグ誘導体を選択及び製造するための一般的手順は、例えば全文参照により本明細書に組み入れる“Design of Prodrugs”,H.Bundgaard編,Elsevier,1985に記載されている。
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートの製造:
2’−C−メチルシチジンは、C.Pierraら,Nucleosides,Nucleotides and Nucleic Acids,24:767(2005)、またはJ.A.Piccirilliら,J.Org.Chem.,64:747(1999)に記載されているように製造した。2’−デオキシ−2’−フルオロ−2’−C−メチルシチジンは、J.Med.Chem.,48:5504−5508(2005)に記載されているように製造され得る。本明細書中に記載されているような他の2’−C−メチル−ヌクレオシドは、A.B.Eldrupら,J.Med.Chem.,47:2283(2004)及びM.M.Bioら,J.Org.Chem.,69:257(2004)及びここに引用されている文献に従って製造され得る。
2’−C−メチルシチジンは、C.Pierraら,Nucleosides,Nucleotides and Nucleic Acids,24:767(2005)、またはJ.A.Piccirilliら,J.Org.Chem.,64:747(1999)に記載されているように製造した。2’−デオキシ−2’−フルオロ−2’−C−メチルシチジンは、J.Med.Chem.,48:5504−5508(2005)に記載されているように製造され得る。本明細書中に記載されているような他の2’−C−メチル−ヌクレオシドは、A.B.Eldrupら,J.Med.Chem.,47:2283(2004)及びM.M.Bioら,J.Org.Chem.,69:257(2004)及びここに引用されている文献に従って製造され得る。
一般的手順:
溶媒はすべて市販業者から入手し、更に精製することなく使用した。反応は窒素雰囲気下、オーブン乾燥(110℃)したガラス器具を用いて実施した。有機抽出物を硫酸ナトリウム(Na2SO4)で乾燥し、(乾燥剤を濾過した後)減圧下で操作する回転蒸発器を用いて濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーは、公表されている手順(W.C.Stillら,J.Org.Chem.,43:2923(1978))に従ってシリカゲルを用いて、または予充填カラムを用いる市販のフラッシュクロマトグラフィーシステム(Biotage corporation and Jones Flashmaster II)を用いて実施した。
溶媒はすべて市販業者から入手し、更に精製することなく使用した。反応は窒素雰囲気下、オーブン乾燥(110℃)したガラス器具を用いて実施した。有機抽出物を硫酸ナトリウム(Na2SO4)で乾燥し、(乾燥剤を濾過した後)減圧下で操作する回転蒸発器を用いて濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーは、公表されている手順(W.C.Stillら,J.Org.Chem.,43:2923(1978))に従ってシリカゲルを用いて、または予充填カラムを用いる市販のフラッシュクロマトグラフィーシステム(Biotage corporation and Jones Flashmaster II)を用いて実施した。
試薬は通常市販業者から直接入手し、供給されたまま使用したり、または科学文献に報告されているかまたは当業者に公知のルーチンの合成ステップを用いて容易に得ることができた。
1H 及び31P NMRスペクトルは、300〜600MHzの(報告されている)周波数で操作するBruker AMシリーズ分光計で記録した。交換不能なプロトン(及び、目に見える場合には交換可能なプロトン)に対応するシグナルの化学シフト(δ)はテトラメチルシランに対する百万部の部(ppm)で記録し、基準として残留溶媒ピークを用いて測定する。シグナルを多重項(s,一重項;d,二重項;t,三重項;q,四重項;m,多重項;b,幅広、及びその組合せ);ヘルツ(Hz)のカップリング定数;プロトン数の順で表示している。質量スペクトル(MS)データは、負(ES−)または正(ES+)のイオン化モードで操作するPerkin Elmer API 100またはWaters MicroMass ZQを用いて得、結果を親イオンのみについての質量対荷電の比(m/z)として報告する。分取規模のHPLC分離は、2487二重吸収デテクタを備えているWaters 2525ポンプ;UV1000吸収モジュールを備えているTSP SpectraシステムP4000;または2525ポンプモジュール、Micromass ZMDデテクタ及び2525収集モジュールを含む自動化質量トリガーWaters Micromassシステムを用いて実施した。化合物は、いずれも0.1% トリフルオロ酢酸またはギ酸を含有している水及びMeCNの直線勾配を用いて10〜40mL/分の流速で溶離させた。固定相としてシンメトリーC18カラム(7μM,19×300mm)を使用した。
以下の略号を実施例及びスキーム中で使用した。
aq.:水性、Ar:アリール、atm:気圧、CCl4:四塩化炭素、DCM:ジクロロメタン、DMF:N,N−ジメチルホルムアミド、DMSO:ジメチルスルホキシド、eq:当量、Et3N:トリエチルアミン、EtOAc:酢酸エチル、Et2O:ジエチルエーテル、h:時、Me:メチル、MeCN:アセトニトリル、MeOH:メタノール、min:分、MS:質量スペクトル、DMA:N,N−ジメチルアセトアミド、PE:石油エーテル、Py:ピリジン、quant.:定量的、RP−HPLC:逆相高速液体クロマトグラフィー、RT:保持時間、sec:秒、TFA:トリフルオロ酢酸、及びTHF:テトラヒドロフラン。
aq.:水性、Ar:アリール、atm:気圧、CCl4:四塩化炭素、DCM:ジクロロメタン、DMF:N,N−ジメチルホルムアミド、DMSO:ジメチルスルホキシド、eq:当量、Et3N:トリエチルアミン、EtOAc:酢酸エチル、Et2O:ジエチルエーテル、h:時、Me:メチル、MeCN:アセトニトリル、MeOH:メタノール、min:分、MS:質量スペクトル、DMA:N,N−ジメチルアセトアミド、PE:石油エーテル、Py:ピリジン、quant.:定量的、RP−HPLC:逆相高速液体クロマトグラフィー、RT:保持時間、sec:秒、TFA:トリフルオロ酢酸、及びTHF:テトラヒドロフラン。
以下の実施例は本発明の化合物を製造するために使用される条件の例を示している。これらの実施例は本発明の範囲を決して限定するものと意図されず、このように解釈されるべきでない。ヌクレオシド及びヌクレオチド合成の当業者は、本発明のこれらの化合物及び他の化合物を製造するために以下の製造手順の条件及び方法の公知の変更を使用し得ることを認識している。温度はすべて別段の記載がない限り℃である。
参考例1(R 6 =Et)
ステップ1:5’−O−[[[(1S)−2−エトキシ−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ](9H−フルオレン−9−イルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
亜リン酸ビスフェニルをピリジン(0.3M)中に溶解し、フルオレニルメチルアルコールをピリジン(0.3M)中に含む溶液を添加した。混合物を0℃で20分間攪拌したた。次いで、2’−C−メチル−シチジンをピリジン(0.3M)中に含む溶液を0℃で添加した。生じた溶液を40℃に加温し、この温度で1時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をDMA(0.19M)中に溶解した。生じた溶液をL−アラニン−エチルエステル塩酸塩(1.2当量)及びEt3N(2.0当量)をiPrOH:CCl4(0.24M,10:1)中に含む溶液に添加した。混合物を0℃で10分間攪拌した後、溶媒を蒸発させた。残渣をEtOAc及び水中に溶解した。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物をRP−HPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、ジアステレオマーの1:1混合物として得た。MS(ES+) m/z 615(M+H)+。
ステップ1:5’−O−[[[(1S)−2−エトキシ−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ](9H−フルオレン−9−イルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
亜リン酸ビスフェニルをピリジン(0.3M)中に溶解し、フルオレニルメチルアルコールをピリジン(0.3M)中に含む溶液を添加した。混合物を0℃で20分間攪拌したた。次いで、2’−C−メチル−シチジンをピリジン(0.3M)中に含む溶液を0℃で添加した。生じた溶液を40℃に加温し、この温度で1時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をDMA(0.19M)中に溶解した。生じた溶液をL−アラニン−エチルエステル塩酸塩(1.2当量)及びEt3N(2.0当量)をiPrOH:CCl4(0.24M,10:1)中に含む溶液に添加した。混合物を0℃で10分間攪拌した後、溶媒を蒸発させた。残渣をEtOAc及び水中に溶解した。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物をRP−HPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、ジアステレオマーの1:1混合物として得た。MS(ES+) m/z 615(M+H)+。
ステップ2:5’−O−[[[(1S)−2−エトキシ−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
5’−O−[[[(1S)−2−エトキシ−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ](9H−フルオレン−9−イルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジンをDCM(0.012M)中に溶解し、ピペリジン(56当量)を添加した。生じた溶液を蒸発させ、残渣を水で洗浄した。沈殿を捨て、溶液を濃縮すると、残渣が生じた。この残渣をRP−ΗPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、NH4塩として得た。1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.23(d,J=7.6,1H),6.08−6.06(m,2H),4.25−4.15(m,3H),4.10−4.02(m,2H),3.95−3.87(m,2H),1.36(d,J=7.1,3H),1.28(t,J=7.1,3H),1.15(s,3H)。31P NMR:(400MHz MeOD)δ:6.87。MS(ES+) m/z 436(M+H)+。
5’−O−[[[(1S)−2−エトキシ−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ](9H−フルオレン−9−イルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジンをDCM(0.012M)中に溶解し、ピペリジン(56当量)を添加した。生じた溶液を蒸発させ、残渣を水で洗浄した。沈殿を捨て、溶液を濃縮すると、残渣が生じた。この残渣をRP−ΗPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、NH4塩として得た。1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.23(d,J=7.6,1H),6.08−6.06(m,2H),4.25−4.15(m,3H),4.10−4.02(m,2H),3.95−3.87(m,2H),1.36(d,J=7.1,3H),1.28(t,J=7.1,3H),1.15(s,3H)。31P NMR:(400MHz MeOD)δ:6.87。MS(ES+) m/z 436(M+H)+。
実施例2(R 6 =2PrPen)
ステップ1:2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン
2’−C−メチルシチジンをアセトン(0.04M)で希釈し、p−トルエンスルホン酸及び2,2−ジメトキシプロパンを添加した。生じたスラリーを室温で24時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をMeOH中に溶解し、(予め2N NaOH及びH2Oで洗浄した)アンバーライトA−26を添加した。生じた混合物を2時間攪拌した。アンバーライトを濾別し、溶液を蒸発させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=9:1)により精製して、所望生成物を白色粉末として得た。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:7.96(d,J=7.56,1H),6.18(s,1H),5.90(d,J=7.56,1H),4.51−4.48(m,1H),4.28−4.23(m,1H),3.86(dd,J=12.12,3.04,1H),3.78(dd,J=12.12,3.52,1H),1.59(s,3H),1.43(s,3H),1.25(s,3H)。MS(ES+) m/z 298(M+H)+。
ステップ1:2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン
2’−C−メチルシチジンをアセトン(0.04M)で希釈し、p−トルエンスルホン酸及び2,2−ジメトキシプロパンを添加した。生じたスラリーを室温で24時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をMeOH中に溶解し、(予め2N NaOH及びH2Oで洗浄した)アンバーライトA−26を添加した。生じた混合物を2時間攪拌した。アンバーライトを濾別し、溶液を蒸発させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=9:1)により精製して、所望生成物を白色粉末として得た。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:7.96(d,J=7.56,1H),6.18(s,1H),5.90(d,J=7.56,1H),4.51−4.48(m,1H),4.28−4.23(m,1H),3.86(dd,J=12.12,3.04,1H),3.78(dd,J=12.12,3.52,1H),1.59(s,3H),1.43(s,3H),1.25(s,3H)。MS(ES+) m/z 298(M+H)+。
ステップ2:5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン
2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジンをモレキュラーシーブの存在下でピリジン(0.67M)で希釈した。生じた溶液を0℃まで冷却し、亜リン酸ジフェニル(80%,1.3当量)を添加し、混合物を0℃で1時間攪拌した。この溶液にベンジルアルコール(2.0当量)を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。溶媒を蒸発させ 残渣をTHF:CCl4(0.08M,12:1)中に溶解した。生じた溶液を0℃まで冷却し、Et3N(7.0当量)及びL−アラニン2−プロピルペンチルエステル塩酸塩(1.3当量)(以下の中間体1)をiPrOH中に含む溶液を添加した。混合物を0℃で30分間攪拌した後、水を添加してクエンチした。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。MS(ES+) m/z 651(M+H)+。
2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジンをモレキュラーシーブの存在下でピリジン(0.67M)で希釈した。生じた溶液を0℃まで冷却し、亜リン酸ジフェニル(80%,1.3当量)を添加し、混合物を0℃で1時間攪拌した。この溶液にベンジルアルコール(2.0当量)を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。溶媒を蒸発させ 残渣をTHF:CCl4(0.08M,12:1)中に溶解した。生じた溶液を0℃まで冷却し、Et3N(7.0当量)及びL−アラニン2−プロピルペンチルエステル塩酸塩(1.3当量)(以下の中間体1)をiPrOH中に含む溶液を添加した。混合物を0℃で30分間攪拌した後、水を添加してクエンチした。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。MS(ES+) m/z 651(M+H)+。
ステップ3:5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)−ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−メチル−C−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジンをTFA−H2O(0.1M,8:2)の溶液中に溶解した。生じた溶液を30℃に加温し、20分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水及びEtOAc中に溶解した。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。MS(ES+) m/z 611(M+H)+。
5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−メチル−C−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジンをTFA−H2O(0.1M,8:2)の溶液中に溶解した。生じた溶液を30℃に加温し、20分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水及びEtOAc中に溶解した。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。MS(ES+) m/z 611(M+H)+。
ステップ4:5’−O−[ヒドロキシ[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−[(2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジンをMeOH(0.08M)中に溶解し、Pd/C(10%)(20%w/w)を添加した。生じた懸濁液をH2雰囲気下、室温で18時間攪拌した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をMeCN中に溶解し、RP−HPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。1H NMR(300MHz,MeOD)δ:8.26(d,J=7.65,1H),6.11(d,J=7.47,1H),6.05(s,1H),4.27−4.2(m,1H),4.18−3.90(m,6H),1.75−1.6(m,1H),1.4−1.35(m,11H),1.16(s,3H),0.95−0.9(m,6H)。31P NMR:(300MHz,MeOD)δ:5.22。MS(ES+) m/z 521(M+H)+。
5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジンをMeOH(0.08M)中に溶解し、Pd/C(10%)(20%w/w)を添加した。生じた懸濁液をH2雰囲気下、室温で18時間攪拌した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をMeCN中に溶解し、RP−HPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。1H NMR(300MHz,MeOD)δ:8.26(d,J=7.65,1H),6.11(d,J=7.47,1H),6.05(s,1H),4.27−4.2(m,1H),4.18−3.90(m,6H),1.75−1.6(m,1H),1.4−1.35(m,11H),1.16(s,3H),0.95−0.9(m,6H)。31P NMR:(300MHz,MeOD)δ:5.22。MS(ES+) m/z 521(M+H)+。
中間体1:L−アラニン2−プロピルペンチル塩酸塩
N−(tert−ブトキシカルボニル)−L−アラニンをDCM(0.42M)で希釈した。生じた溶液を0℃まで冷却し、2−プロピルペンタノール(1.0当量)、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(1.1当量)及びDMAP(0.1当量)を添加し、混合物を室温で18時間攪拌した。生じた溶液を蒸発させた後、EtOAc及びNaHCO3(飽和)で希釈した。水性相を分離し、有機相をNaHCO3(飽和,2×)及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。生成物を白色固体として単離した。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:5.06(s,br,1H),4.39−4.24(m,1H),4.13−3.98(m,2H),1.72−1.63(m,1H),1.45(s,9H),1.38(d,J=7.26,3H),1.35−1.22(m,8H),0.95−0.84(m,6H)。
ステップ2:L−アラニン2−プロピルペンチル塩酸塩
先の生成物をEtOAc(1M)中に溶解し、生じた溶液にHClをジオキサン中に含む冷溶液(4M,7当量)を添加した。混合物を室温で2時間攪拌した。生じた溶液を蒸発させると、黄色油状物が得られた。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.51(bs,3H),4.20−3.96(m,3H),1.76−1.59(m,1H),1.41(d,J=7.25,3H),1.36−1.19(m,8H),0.97−0.77(m,6H)。13C NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:170.06,67.78,47.82,36.11,32.71,32.65,19.19,15.69,14.14。
先の生成物をEtOAc(1M)中に溶解し、生じた溶液にHClをジオキサン中に含む冷溶液(4M,7当量)を添加した。混合物を室温で2時間攪拌した。生じた溶液を蒸発させると、黄色油状物が得られた。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.51(bs,3H),4.20−3.96(m,3H),1.76−1.59(m,1H),1.41(d,J=7.25,3H),1.36−1.19(m,8H),0.97−0.77(m,6H)。13C NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:170.06,67.78,47.82,36.11,32.71,32.65,19.19,15.69,14.14。
中間体2:L−アラニンシクロヘプチルエステル塩酸塩
実施例3(R 12 =4−Hep)
ステップ1:5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン
2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン(実施例2のステップ1に記載されているように製造)をモレキュラーシーブの存在下でピリジン(0.67M)で希釈した。生じた溶液を0℃まで冷却し、亜リン酸ジフェニル(80%,1.3当量)を添加し、混合物を0℃で1時間攪拌した。この溶液にベンジルアルコール(2.0当量)を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をTHF:CCl4(0.08M,12:1)中に溶解した。生じた溶液を0℃まで冷却し、Et3N(7.0当量)及び2−プロピルペンタン酸2−アミノエチル塩酸塩(1.3当量)をiPrOH−THF中に含む溶液を添加した。混合物を0℃で30分間攪拌した後、塩を濾過した。生じた溶液を蒸発させた後、EtOAc及び水で希釈した。水性相を分離し、EtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物(1:1)として得た。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.78(bs,1H),8.01(bs,1H),7.95−7.85(m,1H),7.42−7.30(m,5H),6.02(s,1H),5.93(d,J=7.26,1H),5.46−5.38(m,1H),5.0(d,J=7.44,2H),4.51(s,1H),4.38(s,1H),4.22−4.19(m,2H),4.06−4.01(m,2H),3.09−3.03(m,2H),2.37−2.3(m,1H),1.53(s,3H),1.58−1.21(m,8H),1.39(s,3H),1.21(s,3H),0.86(t,J=7.26,6H)。31P NMR:(300MHz,DMSO−d6)δ:10.4,10.2。MS(ES+) m/z 637(M+H)+。
ステップ1:5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン
2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジン(実施例2のステップ1に記載されているように製造)をモレキュラーシーブの存在下でピリジン(0.67M)で希釈した。生じた溶液を0℃まで冷却し、亜リン酸ジフェニル(80%,1.3当量)を添加し、混合物を0℃で1時間攪拌した。この溶液にベンジルアルコール(2.0当量)を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をTHF:CCl4(0.08M,12:1)中に溶解した。生じた溶液を0℃まで冷却し、Et3N(7.0当量)及び2−プロピルペンタン酸2−アミノエチル塩酸塩(1.3当量)をiPrOH−THF中に含む溶液を添加した。混合物を0℃で30分間攪拌した後、塩を濾過した。生じた溶液を蒸発させた後、EtOAc及び水で希釈した。水性相を分離し、EtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物(1:1)として得た。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.78(bs,1H),8.01(bs,1H),7.95−7.85(m,1H),7.42−7.30(m,5H),6.02(s,1H),5.93(d,J=7.26,1H),5.46−5.38(m,1H),5.0(d,J=7.44,2H),4.51(s,1H),4.38(s,1H),4.22−4.19(m,2H),4.06−4.01(m,2H),3.09−3.03(m,2H),2.37−2.3(m,1H),1.53(s,3H),1.58−1.21(m,8H),1.39(s,3H),1.21(s,3H),0.86(t,J=7.26,6H)。31P NMR:(300MHz,DMSO−d6)δ:10.4,10.2。MS(ES+) m/z 637(M+H)+。
ステップ2:5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)−ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジンをTFA−H2Oの溶液(0.1M,8:2)中に溶解した。生じた溶液を30℃に加温し、20分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水及びEtOAc中に溶解した。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。MS(ES+) m/z 597(M+H)+。
5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−シチジンをTFA−H2Oの溶液(0.1M,8:2)中に溶解した。生じた溶液を30℃に加温し、20分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水及びEtOAc中に溶解した。水性相をEtOAcで3回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=95:5)により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。MS(ES+) m/z 597(M+H)+。
ステップ3:5’−O−[ヒドロキシ[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジンをMeOH(0.08M)中に溶解し、Pd/C(10%)(20%w/w)を添加した。生じた懸濁液をH2雰囲気下、室温で18時間攪拌した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をMeCN中に溶解し、RP−HPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有している画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ:8.76(s,1H),8.08(d,J=7.8,1H),6.05(d,J=5.88,1H),5.79(s,1H),4.21−4.13(m,1H),4.02−3.95(m,4H),3.6(d,J=9.1,1H),2.96−2.9(m,2H),2.35−2.27(m,1H),1.51−1.3(m,4H),1.25−1.16(m,4H),1.03(s,3H),0.82(t,J=6.3,6H)。31P NMR:(300MHz,DMSO−d6)δ:7.87。MS(ES+) m/z 507(M+H)+。
5’−O−[[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジンをMeOH(0.08M)中に溶解し、Pd/C(10%)(20%w/w)を添加した。生じた懸濁液をH2雰囲気下、室温で18時間攪拌した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をMeCN中に溶解し、RP−HPLC(固定相:カラムXTerra C18,5μm,19×150mm;移動相:MeCN/H2O 5mM AMBIC)により精製した。純粋な化合物を含有している画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ:8.76(s,1H),8.08(d,J=7.8,1H),6.05(d,J=5.88,1H),5.79(s,1H),4.21−4.13(m,1H),4.02−3.95(m,4H),3.6(d,J=9.1,1H),2.96−2.9(m,2H),2.35−2.27(m,1H),1.51−1.3(m,4H),1.25−1.16(m,4H),1.03(s,3H),0.82(t,J=6.3,6H)。31P NMR:(300MHz,DMSO−d6)δ:7.87。MS(ES+) m/z 507(M+H)+。
実施例4(スキーム2;R 6 =cHep)
5’−O−[[[(1S)−2−(シクロヘプチルオキシ)−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例2に報告されているステップ1、2(L−アラニンシクロヘプチルエステル塩酸塩を使用)、3及び4に従って製造した。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.10(d,J=7.5Hz,1H),6.04(s,1H),6.00(d,J=7.5Hz,1H),4.95−4.85(m,1H),4.23−4.16(m,1H),4.08−3.96(m,2H),3.91−3.82(m,2H),1.95−1.83(m,2H),1.75−1.52(m,8H),1.51−1.39(m,2H),1.31(d,J=7.0Hz,3H),1.10(s,3H)。31P NMR:(400MHz,CD3OD)δ:5.88。MS(ES+) m/z 505(M+H)+。
5’−O−[[[(1S)−2−(シクロヘプチルオキシ)−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例2に報告されているステップ1、2(L−アラニンシクロヘプチルエステル塩酸塩を使用)、3及び4に従って製造した。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.10(d,J=7.5Hz,1H),6.04(s,1H),6.00(d,J=7.5Hz,1H),4.95−4.85(m,1H),4.23−4.16(m,1H),4.08−3.96(m,2H),3.91−3.82(m,2H),1.95−1.83(m,2H),1.75−1.52(m,8H),1.51−1.39(m,2H),1.31(d,J=7.0Hz,3H),1.10(s,3H)。31P NMR:(400MHz,CD3OD)δ:5.88。MS(ES+) m/z 505(M+H)+。
中間体3:L−アラニンシクロオクチルエステル塩酸塩
化合物を中間体1に報告されているステップ1(シクロオクタノールを使用した)及び2に従って製造した。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.52(bs,3H),4.97−4.89(m,1H),4.02−3.95(m,1H),1.85−1.41(m,14H),1.39(d,J=7.1Hz,3H)。
化合物を中間体1に報告されているステップ1(シクロオクタノールを使用した)及び2に従って製造した。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.52(bs,3H),4.97−4.89(m,1H),4.02−3.95(m,1H),1.85−1.41(m,14H),1.39(d,J=7.1Hz,3H)。
実施例5(スキーム2参照;R 6 =cOct)
5’−O−[[[(1S)−2−(シクロオクチルオキシ)−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例2に報告されているステップ1、2(L−アラニンシクロオクチルエステル塩酸塩を用いた)、3及び4に従って製造した。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.10(d,J=7.5Hz,1H),6.04(s,1H),6.00(d,J=7.5Hz,1H),4.97−4.89(m,1H),4.23−4.15(m,1H),4.09−3.96(m,2H),3.91−3.80(m,2H),1.86−1.66(m,6H),1.65−1.44(m,8H),1.31(d,J=7.0Hz,3H),1.10(s,3H)。31P NMR:(400MHz,CD3OD)δ:5.91。MS(ES+) m/z 519(M+H)+。
5’−O−[[[(1S)−2−(シクロオクチルオキシ)−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例2に報告されているステップ1、2(L−アラニンシクロオクチルエステル塩酸塩を用いた)、3及び4に従って製造した。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.10(d,J=7.5Hz,1H),6.04(s,1H),6.00(d,J=7.5Hz,1H),4.97−4.89(m,1H),4.23−4.15(m,1H),4.09−3.96(m,2H),3.91−3.80(m,2H),1.86−1.66(m,6H),1.65−1.44(m,8H),1.31(d,J=7.0Hz,3H),1.10(s,3H)。31P NMR:(400MHz,CD3OD)δ:5.91。MS(ES+) m/z 519(M+H)+。
実施例6(スキーム3;R 12 =cHep)
中間体4:シクロヘプタンカルボン酸2−アミノエチル塩酸塩
ステップ1:シクロヘプタンカルボン酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチル
DCM(0.12M)中の(2−ヒドロキシエチル)カルバミン酸tert−ブチル(1当量)にシクロヘプタンカルボン酸(1当量)、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(1.1当量)及びDMAP(0.1当量)を0℃で添加した。反応混合物を室温で16時間攪拌した。生じた溶液をDCMで希釈し、有機相をクエン酸及びNaHCO3(飽和)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=8:2)により精製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:4.72(bs,1H),4.12(t,J=5.2Hz,2H),3.45−3.35(m,2H),2.53−2.44(m,1H),1.98−1.88(m,2H),1.76−1.48(m,10H),1.45(s,9H)。
中間体4:シクロヘプタンカルボン酸2−アミノエチル塩酸塩
ステップ1:シクロヘプタンカルボン酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチル
DCM(0.12M)中の(2−ヒドロキシエチル)カルバミン酸tert−ブチル(1当量)にシクロヘプタンカルボン酸(1当量)、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(1.1当量)及びDMAP(0.1当量)を0℃で添加した。反応混合物を室温で16時間攪拌した。生じた溶液をDCMで希釈し、有機相をクエン酸及びNaHCO3(飽和)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=8:2)により精製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:4.72(bs,1H),4.12(t,J=5.2Hz,2H),3.45−3.35(m,2H),2.53−2.44(m,1H),1.98−1.88(m,2H),1.76−1.48(m,10H),1.45(s,9H)。
ステップ2:シクロヘプタンカルボン酸2−アミノエチル塩酸塩
EtOAc(0.9M)中のシクロヘプタンカルボン酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチル(1当量)にジオキサン(10当量)中4N HClを添加した。反応混合物を室温で2時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、物質を真空下、P2O5の存在下で乾燥し、そのまま使用した。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.00(bs,3H),4.17(t,J=5.2Hz,2H),3.07(t,J=5.2Hz,2H),2.56−2.50(m,1H),1.95−1.85(m,2H),1.70−1.41(m,10H)。
EtOAc(0.9M)中のシクロヘプタンカルボン酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチル(1当量)にジオキサン(10当量)中4N HClを添加した。反応混合物を室温で2時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、物質を真空下、P2O5の存在下で乾燥し、そのまま使用した。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.00(bs,3H),4.17(t,J=5.2Hz,2H),3.07(t,J=5.2Hz,2H),2.56−2.50(m,1H),1.95−1.85(m,2H),1.70−1.41(m,10H)。
5’−O−[[[2−[(シクロヘプチルカルボニル)オキシ]エチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例3に報告されているステップ1(シクロヘプタンカルボン酸2−アミノエチル塩酸塩を使用した)、2及び3に従って製造した。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.21(d,J=7.6Hz,1H),6.1(s,1H),6.02(d,J=7.6Hz,1H),4.27−4.22(m,1H),4.14−3.96(m,5H),3.17−3.10(m,2H),2.58−2.52(m,1H),1.97−1.92(m,2H),1.74−1.45(m,10H),1.15(s,3H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:6.21。MS(ES+) m/z 505(M+H)+。
化合物を実施例3に報告されているステップ1(シクロヘプタンカルボン酸2−アミノエチル塩酸塩を使用した)、2及び3に従って製造した。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.21(d,J=7.6Hz,1H),6.1(s,1H),6.02(d,J=7.6Hz,1H),4.27−4.22(m,1H),4.14−3.96(m,5H),3.17−3.10(m,2H),2.58−2.52(m,1H),1.97−1.92(m,2H),1.74−1.45(m,10H),1.15(s,3H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:6.21。MS(ES+) m/z 505(M+H)+。
実施例7(スキーム3;R 12 =OiPr)
中間体5:炭酸2−アミノエチルイソプロピル塩酸塩
ステップ1:炭酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチルイソプロピル
DCM(0.2M)中の(2−ヒドロキシエチル)−カルバミン酸tert−ブチル(1当量)にEt3N(1当量)、DMAP(0.1当量)及びクロリド炭酸イソプロピル(1当量)を添加した。反応混合物を室温で16時間攪拌した。溶液をDCMで希釈し、有機相をクエン酸及びNaHCO3(飽和)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=8:2)により精製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:4.92−4.81(m,2H),4.17(t,J=5.0Hz,2H),3.43−3.38(m,2H),1.44(s,9H),1.30(d,J=6.2Hz,6H)。
中間体5:炭酸2−アミノエチルイソプロピル塩酸塩
ステップ1:炭酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチルイソプロピル
DCM(0.2M)中の(2−ヒドロキシエチル)−カルバミン酸tert−ブチル(1当量)にEt3N(1当量)、DMAP(0.1当量)及びクロリド炭酸イソプロピル(1当量)を添加した。反応混合物を室温で16時間攪拌した。溶液をDCMで希釈し、有機相をクエン酸及びNaHCO3(飽和)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=8:2)により精製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:4.92−4.81(m,2H),4.17(t,J=5.0Hz,2H),3.43−3.38(m,2H),1.44(s,9H),1.30(d,J=6.2Hz,6H)。
ステップ2:炭酸2−アミノエチルイソプロピル塩酸塩
EtOAc(0.2M)中の炭酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチルイソプロピル(1当量)にジオキサン中4N HCl(20当量)を添加した。反応混合物を室温で3時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、物質を真空下、P2O5での存在下で乾燥し、そのまま使用した。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.19(bs,3H),4.85−4.73(m,1H),4.25(t,J=5.2Hz,2H),3.08(t,J=5.2Hz,2H),1.24(d,J=6.2Hz,6H)。
EtOAc(0.2M)中の炭酸2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]エチルイソプロピル(1当量)にジオキサン中4N HCl(20当量)を添加した。反応混合物を室温で3時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、物質を真空下、P2O5での存在下で乾燥し、そのまま使用した。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ:8.19(bs,3H),4.85−4.73(m,1H),4.25(t,J=5.2Hz,2H),3.08(t,J=5.2Hz,2H),1.24(d,J=6.2Hz,6H)。
5’−O−[ヒドロキシ[[2−[[(1−メチルエトキシ)カルボニル]オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例3に報告されているステップ1(炭酸2−アミノエチルイソプロピル塩酸塩を用いた)、2及び3に従って製造し、K+塩として単離した。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.20(d,J=7.5Hz,1H),6.09(s,1H),6.02(d,J=7.5Hz,1H),4.84−4.79(m,1H),4.27−3.94(m,6H),3.19−3.10(m,2H),1.28(d,J=6.2Hz,6H),1.15(s,3H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:6.11。MS(ES+) m/z 467(M+H)+。
化合物を実施例3に報告されているステップ1(炭酸2−アミノエチルイソプロピル塩酸塩を用いた)、2及び3に従って製造し、K+塩として単離した。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.20(d,J=7.5Hz,1H),6.09(s,1H),6.02(d,J=7.5Hz,1H),4.84−4.79(m,1H),4.27−3.94(m,6H),3.19−3.10(m,2H),1.28(d,J=6.2Hz,6H),1.15(s,3H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:6.11。MS(ES+) m/z 467(M+H)+。
実施例8
ステップ1:{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}カルバミン酸tert−ブチル
2−プロピルペンタンアミド(1.0当量)をジオキサン(0.24M)で希釈し、無水トリフルオロ酢酸(3.0当量)を添加した。生じた溶液を0℃まで冷却し、トリエチルアミン(6.0当量)を1滴ずつ添加し、反応物をこの温度で2時間攪拌した。次いで、溶液を1N NaOH、1N HCl及びブラインで順次洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥し、すべての揮発物を真空中で除去して、生じたニトリルを無色油状物として得た。このニトリルをエタノール(0.325M)中に溶解し、ヒドロキシルアミン(10当量,50%水溶液として)を添加し、生じた溶液を85℃に7時間加熱した。すべての揮発物を真空中で除去し、粗生成物をDCM中に溶解し、ブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥した後、すべての溶媒を除去し、中間体を後続ステップのためにそのまま使用した。L−N−Boc−アラニンをアセトニトリル(0.187M)中に溶解した後、N,N’−カルボニルジイミダゾール(1.0当量)を添加した。生じた溶液を15分間エージングした後、先に合成した中間体をアセトニトリル(1.0M)中の溶液として添加し、反応物を室温で6時間攪拌した後、80℃まで加熱し、12時間攪拌した。すべての揮発物を除去し、生じた油状物をEtOAc中に溶解し、NH4Cl、水、NaHCO3、水及びブラインで洗浄した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=9:1)により精製して、標記化合物(51%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO,300K)δ:7.68(d,J=7.4Hz,1H),4.84(t,J=6.8Hz,1H),2.89−2.79(qt,J=7.3Hz,1H),1.62−1.55(m,4H),1.45−1.43(d,J=7.2Hz,3H),1.45−1.15(m,13H),0.87−0.81(m,6H)。
2−プロピルペンタンアミド(1.0当量)をジオキサン(0.24M)で希釈し、無水トリフルオロ酢酸(3.0当量)を添加した。生じた溶液を0℃まで冷却し、トリエチルアミン(6.0当量)を1滴ずつ添加し、反応物をこの温度で2時間攪拌した。次いで、溶液を1N NaOH、1N HCl及びブラインで順次洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥し、すべての揮発物を真空中で除去して、生じたニトリルを無色油状物として得た。このニトリルをエタノール(0.325M)中に溶解し、ヒドロキシルアミン(10当量,50%水溶液として)を添加し、生じた溶液を85℃に7時間加熱した。すべての揮発物を真空中で除去し、粗生成物をDCM中に溶解し、ブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥した後、すべての溶媒を除去し、中間体を後続ステップのためにそのまま使用した。L−N−Boc−アラニンをアセトニトリル(0.187M)中に溶解した後、N,N’−カルボニルジイミダゾール(1.0当量)を添加した。生じた溶液を15分間エージングした後、先に合成した中間体をアセトニトリル(1.0M)中の溶液として添加し、反応物を室温で6時間攪拌した後、80℃まで加熱し、12時間攪拌した。すべての揮発物を除去し、生じた油状物をEtOAc中に溶解し、NH4Cl、水、NaHCO3、水及びブラインで洗浄した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=9:1)により精製して、標記化合物(51%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO,300K)δ:7.68(d,J=7.4Hz,1H),4.84(t,J=6.8Hz,1H),2.89−2.79(qt,J=7.3Hz,1H),1.62−1.55(m,4H),1.45−1.43(d,J=7.2Hz,3H),1.45−1.15(m,13H),0.87−0.81(m,6H)。
ステップ2:(1S)−1−[3−(l−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エタンアミニウムクロリド
{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}カルバミン酸tert−ブチルをEtOAc(0.67M)中に溶解し、ジオキサン中4N HCl(12.0当量)を0℃で添加した。反応物を室温まで加温し、2時間攪拌した。すべての溶媒を蒸発させ、残留油状物を石油エーテルから沈殿させて、標記化合物を白色固体(76%)として得た。1H NMR(400MHz,DMSO,300K)δ:8.87(bs,3H),4.90−4.85(q,J=6.9Hz,1H),2.93−2.85(t,J=7.2Hz,1H),1.62−1.57(m,7H),1.21−1.18(m,4H),0.85−0.81(t,J=7.3Hz,6H)。
{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}カルバミン酸tert−ブチルをEtOAc(0.67M)中に溶解し、ジオキサン中4N HCl(12.0当量)を0℃で添加した。反応物を室温まで加温し、2時間攪拌した。すべての溶媒を蒸発させ、残留油状物を石油エーテルから沈殿させて、標記化合物を白色固体(76%)として得た。1H NMR(400MHz,DMSO,300K)δ:8.87(bs,3H),4.90−4.85(q,J=6.9Hz,1H),2.93−2.85(t,J=7.2Hz,1H),1.62−1.57(m,7H),1.21−1.18(m,4H),0.85−0.81(t,J=7.3Hz,6H)。
ステップ3:[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メチルフェニル{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェート
(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エタンアミニウムクロリドを2−プロパノール/アセトニトリルの1:1混合物(0.2M)中に溶解した。ここに四塩化炭素(14.0当量)及びトリエチルアミン(4.0当量)を添加した。溶液を0℃まで冷却し、すぐに[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メチルフェニルホスホネートをTΗF(0.6M)中溶液として添加した。反応物を焼結ガラスフィルターを用いて濾過し、残留物をEtOAcで希釈した。有機層を水及びブラインで洗浄し、合わせた有機相をNa2SO4で乾燥し、すべての揮発物を真空中で除去し、カラムクロマトグラフィー(98:2→90:10のDCM:MeOΗ勾配)にかけた後、所望化合物を得た。MS(ES+) m/z 647(M+H)+。
(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エタンアミニウムクロリドを2−プロパノール/アセトニトリルの1:1混合物(0.2M)中に溶解した。ここに四塩化炭素(14.0当量)及びトリエチルアミン(4.0当量)を添加した。溶液を0℃まで冷却し、すぐに[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メチルフェニルホスホネートをTΗF(0.6M)中溶液として添加した。反応物を焼結ガラスフィルターを用いて濾過し、残留物をEtOAcで希釈した。有機層を水及びブラインで洗浄し、合わせた有機相をNa2SO4で乾燥し、すべての揮発物を真空中で除去し、カラムクロマトグラフィー(98:2→90:10のDCM:MeOΗ勾配)にかけた後、所望化合物を得た。MS(ES+) m/z 647(M+H)+。
ステップ4:[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−3,4−ジヒドロキシ−4−メチルテトラヒドロフラン−2−イル]メチルフェニル{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェート
[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メチルフェニル{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサゾアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェートをTFA:水の4:1混合物(0.4M)で希釈し、生じた溶液を30℃で70分間攪拌した後、すべての揮発物を真空中で除去し、残留している粗生成物をDMSO中に溶解し、RP−ΗPLC(固定相:カラムSymmetry C18,7μm,19×300mm;移動相:アセトニトリル/0.1% TFAで緩衝したΗ2O)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物をTFA塩(65%)として得た。MS(ES+) m/z 607(M+H)+。
[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メチルフェニル{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサゾアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェートをTFA:水の4:1混合物(0.4M)で希釈し、生じた溶液を30℃で70分間攪拌した後、すべての揮発物を真空中で除去し、残留している粗生成物をDMSO中に溶解し、RP−ΗPLC(固定相:カラムSymmetry C18,7μm,19×300mm;移動相:アセトニトリル/0.1% TFAで緩衝したΗ2O)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物をTFA塩(65%)として得た。MS(ES+) m/z 607(M+H)+。
ステップ5:[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−3,4−ジヒドロキシ−4−メチルテトラヒドロフラン−2−イル]メチル水素{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェート
[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−3,4−ジヒドロキシ−4−メチルテトラヒドロフラン−2−イル]メチルフェニル{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェートをEt3N:水の1:1混合物(0.023M)で希釈し、室温で7時間攪拌した後、すべての揮発物を真空中で除去し、残留粗生成物をDMSO中に再溶解し、RP−HPLC(固定相:カラムPhenomenex Luna C18,5μm,250×21.20mm;移動相:アセトニトリル/5mM AMBICで緩衝したH2O)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、アンモニウム塩(57%)として得た。1H NMR(400MHz,CD3OD,300K)δ:8.39(d,J=7.8Hz,1H),6.14(d,J=7.7Hz,1H),6.02(s,1H),4.73−4.63(m,1H),4.22(dd,J=5.1,10.1Hz,1H),4.08−3.94(m,3H),2.88(ddd,J=5.5,9.0,14.5Hz,1H),1.73−1.61(m,4H),1.57(d,J=7.0Hz,3H),1.29−1.21(m,4H),1.17(s,3H),0.90(t,J=7.3Hz,6H)。MS(ES+) m/z 531(M+H)+。
[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−3,4−ジヒドロキシ−4−メチルテトラヒドロフラン−2−イル]メチルフェニル{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェートをEt3N:水の1:1混合物(0.023M)で希釈し、室温で7時間攪拌した後、すべての揮発物を真空中で除去し、残留粗生成物をDMSO中に再溶解し、RP−HPLC(固定相:カラムPhenomenex Luna C18,5μm,250×21.20mm;移動相:アセトニトリル/5mM AMBICで緩衝したH2O)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、アンモニウム塩(57%)として得た。1H NMR(400MHz,CD3OD,300K)δ:8.39(d,J=7.8Hz,1H),6.14(d,J=7.7Hz,1H),6.02(s,1H),4.73−4.63(m,1H),4.22(dd,J=5.1,10.1Hz,1H),4.08−3.94(m,3H),2.88(ddd,J=5.5,9.0,14.5Hz,1H),1.73−1.61(m,4H),1.57(d,J=7.0Hz,3H),1.29−1.21(m,4H),1.17(s,3H),0.90(t,J=7.3Hz,6H)。MS(ES+) m/z 531(M+H)+。
中間体6:(1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾ−2−イル]エタンアミン塩酸塩
ステップ1:[(1S)−2−ヒドラジノ−1−メチル−2−オキソエチル]カルバミン酸tert−ブチル
N−(tert−ブトキシカルボニル)−L−アラニンメチル(1.0当量)にヒドラジンをTHF(1.5当量)中に含む1M 溶液を添加し、混合物をace管において攪拌し、一晩還流加熱した。溶媒を真空中で除去し、粗な生成物をそのまま使用した。MS(ES+) m/z 204(M+H)+。
N−(tert−ブトキシカルボニル)−L−アラニンメチル(1.0当量)にヒドラジンをTHF(1.5当量)中に含む1M 溶液を添加し、混合物をace管において攪拌し、一晩還流加熱した。溶媒を真空中で除去し、粗な生成物をそのまま使用した。MS(ES+) m/z 204(M+H)+。
ステップ2:{(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[2−(2−プロピルペンタノイル)ヒドラジン]エチル}カルバミン酸tert−ブチル
バルプロ酸をDCM(0.17M)中に含む溶液を0℃まで冷却し、ここにWSCDI(1.5当量)、DMAP(0.1当量)及び[(1S)−2−ヒドラジノ−1−メチル−2−オキソエチル]カルバミン酸tert−ブチル(1.0当量)を添加した。混合物を室温で2時間攪拌した後、溶媒を除去し、EtOAcを添加した。有機相を1N HCl、NaHCO3(飽和)、ブラインで処理し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空中で除去して、無色油状物を得た。MS(ES+) m/z 330(M+H)+。
バルプロ酸をDCM(0.17M)中に含む溶液を0℃まで冷却し、ここにWSCDI(1.5当量)、DMAP(0.1当量)及び[(1S)−2−ヒドラジノ−1−メチル−2−オキソエチル]カルバミン酸tert−ブチル(1.0当量)を添加した。混合物を室温で2時間攪拌した後、溶媒を除去し、EtOAcを添加した。有機相を1N HCl、NaHCO3(飽和)、ブラインで処理し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空中で除去して、無色油状物を得た。MS(ES+) m/z 330(M+H)+。
ステップ3:{(1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エチル}カルバミン酸tert−ブチル
{(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[2−(2−プロピルペンタノイル)ヒドラジン]エチル}カルバミン酸tert−ブチル(1当量)をTHF(0.2M)中に含む溶液にバージェス試薬(1.5当量)を添加し、不均質混合物を30分間還流加熱した。透明溶液を水でクエンチし、THFを真空中で除去し、EtOAcを添加した後、有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=85:15)により精製して、白色固体を得た。MS(ES+) m/z 312(M+H)+。
{(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[2−(2−プロピルペンタノイル)ヒドラジン]エチル}カルバミン酸tert−ブチル(1当量)をTHF(0.2M)中に含む溶液にバージェス試薬(1.5当量)を添加し、不均質混合物を30分間還流加熱した。透明溶液を水でクエンチし、THFを真空中で除去し、EtOAcを添加した後、有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(PE:EtOAc=85:15)により精製して、白色固体を得た。MS(ES+) m/z 312(M+H)+。
ステップ4:(1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エタンアミン塩酸塩
{(1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エチル}カルバミン酸tert−ブチル(1当量)をEtOAc(0.7M)中に含む溶液を0℃まで冷却し、ここにHClをジオキサン中に含む4M溶液(10当量)を添加した。氷浴を外し、溶液を室温で2時間攪拌した。溶媒を真空中で除去して、白色固体を得た。MS(ES+) m/z 212(M+H)+。
{(1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エチル}カルバミン酸tert−ブチル(1当量)をEtOAc(0.7M)中に含む溶液を0℃まで冷却し、ここにHClをジオキサン中に含む4M溶液(10当量)を添加した。氷浴を外し、溶液を室温で2時間攪拌した。溶媒を真空中で除去して、白色固体を得た。MS(ES+) m/z 212(M+H)+。
実施例9
5’−O−[ヒドロキシ[[1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例8に報告されているステップ3((1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エタンアミン塩酸塩を使用した)、4及び5に従って製造した。RP−HPLC(固定相:カラムX−Bridge C18,5μm,30×150mm;移動相:アセトニトリル:H2O,5mM NH4HCO3で緩衝した水)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色固体(57%)として得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6,300K)δ:7.82(d,J=7.4Hz,1H),7.20(bs,1H),7.01(bs,1H),5.86(s,1H),5.70(d,J=7.4Hz,1H),4.84(s,1H),4.48−4.35(m,1H),3.96−3.78(m,4H),3.68−3.62(m,1H),3.02−2.87(m,7H),1.68−1.53(m,4H),1.37(d,J=6.9Hz,3H),1.25−1.09(m,13H),0.92(s,3H),0.83(t,J=7.3Hz,6H)。31P NMR(400MHz,DMSO−d6)δ:4.18。MS(ES+) m/z 531(M+H)+。
5’−O−[ヒドロキシ[[1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン
化合物を実施例8に報告されているステップ3((1S)−1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エタンアミン塩酸塩を使用した)、4及び5に従って製造した。RP−HPLC(固定相:カラムX−Bridge C18,5μm,30×150mm;移動相:アセトニトリル:H2O,5mM NH4HCO3で緩衝した水)により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色固体(57%)として得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6,300K)δ:7.82(d,J=7.4Hz,1H),7.20(bs,1H),7.01(bs,1H),5.86(s,1H),5.70(d,J=7.4Hz,1H),4.84(s,1H),4.48−4.35(m,1H),3.96−3.78(m,4H),3.68−3.62(m,1H),3.02−2.87(m,7H),1.68−1.53(m,4H),1.37(d,J=6.9Hz,3H),1.25−1.09(m,13H),0.92(s,3H),0.83(t,J=7.3Hz,6H)。31P NMR(400MHz,DMSO−d6)δ:4.18。MS(ES+) m/z 531(M+H)+。
実施例10:
ステップ1:[(3aR,4R,6R,6aR)−6−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2,2,6 a −トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メタノール
7−デアザ,2’−C−メチルアデノシン(1当量)及びp−トルエンスルホン酸(1.2当量)をアセトン(0.1M)中に含む懸濁液に2,2−ジメトキシプロパン(10当量)を室温で添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗生成物をMeOH中に溶解し、(予めMeOHで洗浄した)アンバーライトを添加した。2時間後、樹脂を濾過し、溶液を蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=93:7)により精製して、標記化合物を得た。1H NMR(300MHz,DMSO−d6,300K)δ:7.26(s,1H),6.53(d,J=3.8Hz,1H),5.80(d,J=3.6Hz,1H),5.56(s,1H),3.79(d,J=2.4Hz,1H),3.49−3.45(m,1H),3.09(dd,J=3.2,12.3Hz,1H),2.99(dd,J=3.2,12.1Hz,1H),0.83(s,3H),0.60(s,3H),0.33(s,3H)。
7−デアザ,2’−C−メチルアデノシン(1当量)及びp−トルエンスルホン酸(1.2当量)をアセトン(0.1M)中に含む懸濁液に2,2−ジメトキシプロパン(10当量)を室温で添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗生成物をMeOH中に溶解し、(予めMeOHで洗浄した)アンバーライトを添加した。2時間後、樹脂を濾過し、溶液を蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=93:7)により精製して、標記化合物を得た。1H NMR(300MHz,DMSO−d6,300K)δ:7.26(s,1H),6.53(d,J=3.8Hz,1H),5.80(d,J=3.6Hz,1H),5.56(s,1H),3.79(d,J=2.4Hz,1H),3.49−3.45(m,1H),3.09(dd,J=3.2,12.3Hz,1H),2.99(dd,J=3.2,12.1Hz,1H),0.83(s,3H),0.60(s,3H),0.33(s,3H)。
ステップ2:2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ](フェニルメトキシ)ホスフィニル]−7−デアザ−2’−C−メチルアデノシン
ピリジン(0.4M)中の[(3aR,4R,6R,6aR)−6−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メタノール(1.0当量)に、モレキュラーシーブの存在下で亜リン酸ジフェニル(1.37当量)を0℃で添加し、反応混合物を2時間攪拌した。ベンジルアルコール(2.0当量)を添加し、反応混合物を室温で2時間攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗生成物をそのままTHF:CC14(12:1,0.08M)中に溶解し、iPrOH:CH3CN=1:1(0.4M)中に溶解させたL−アラニン2−プロピルペンチル塩酸塩(中間体1の製造を参照されたい)に添加し、Et3N(3当量)で処理した。反応は10分で完了した。混合物を濾過し、溶液を蒸発させた。EtOAcを添加し、有機相を水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発させると、化合物が得られた。この化合物をシリカゲカラムクロマトグラフィール(DCM:MeOH=95:5)及びHPLCクロマトグラフィー(カラムXBridge)により精製して、Pでジアステレオマーの混合物として得た。1H NMR(300MHz,DMSO−d6,300K)δ:8.06(s,1H),7.40−7.32(m,5H),7.22(d,J=3.2Hz,1H),7.02(bs,2H),6.59(t,J=2.8Hz,1H),6.41(d,J=3.2Hz,1H),5.82−5.73(m,1H),5.02−4.94(m,2H),4.57(dd,J=2.8,7.6Hz,1H),4.32−4.30(m,1H),4.21−4.13(m,2H),4.03−3.80(m,3H),1.70−1.50(m,1H),1.57(s,3H),1.36(s,3H),1.31−1.15(m,11H),1.07(s,3H),0.82(t,J=6.2Hz,6H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.57,8.22。MS(ES+) m/z 674(M+H)+。
ピリジン(0.4M)中の[(3aR,4R,6R,6aR)−6−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2,2,6a−トリメチルテトラヒドロフロ[3,4−d][1,3]ジオキソル−4−イル]メタノール(1.0当量)に、モレキュラーシーブの存在下で亜リン酸ジフェニル(1.37当量)を0℃で添加し、反応混合物を2時間攪拌した。ベンジルアルコール(2.0当量)を添加し、反応混合物を室温で2時間攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗生成物をそのままTHF:CC14(12:1,0.08M)中に溶解し、iPrOH:CH3CN=1:1(0.4M)中に溶解させたL−アラニン2−プロピルペンチル塩酸塩(中間体1の製造を参照されたい)に添加し、Et3N(3当量)で処理した。反応は10分で完了した。混合物を濾過し、溶液を蒸発させた。EtOAcを添加し、有機相を水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発させると、化合物が得られた。この化合物をシリカゲカラムクロマトグラフィール(DCM:MeOH=95:5)及びHPLCクロマトグラフィー(カラムXBridge)により精製して、Pでジアステレオマーの混合物として得た。1H NMR(300MHz,DMSO−d6,300K)δ:8.06(s,1H),7.40−7.32(m,5H),7.22(d,J=3.2Hz,1H),7.02(bs,2H),6.59(t,J=2.8Hz,1H),6.41(d,J=3.2Hz,1H),5.82−5.73(m,1H),5.02−4.94(m,2H),4.57(dd,J=2.8,7.6Hz,1H),4.32−4.30(m,1H),4.21−4.13(m,2H),4.03−3.80(m,3H),1.70−1.50(m,1H),1.57(s,3H),1.36(s,3H),1.31−1.15(m,11H),1.07(s,3H),0.82(t,J=6.2Hz,6H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.57,8.22。MS(ES+) m/z 674(M+H)+。
ステップ3:5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ](フェニルメトキシ)−ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン
2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ](フェニルメトキシ)ホスフィニル]−7−デアザ−2’−C−メチルアデノシン(1当量)をTFA:H2O(3ml,4:1)で処理し、30℃で15分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、EtOAcに何回も取り、蒸発させ、そのまま使用した。MS(ES+) m/z 634(M+H)+。
2’,3’−O−(1−メチルエチリデン)−5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ](フェニルメトキシ)ホスフィニル]−7−デアザ−2’−C−メチルアデノシン(1当量)をTFA:H2O(3ml,4:1)で処理し、30℃で15分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、EtOAcに何回も取り、蒸発させ、そのまま使用した。MS(ES+) m/z 634(M+H)+。
ステップ4:5’−O−[ヒドロキシル[[1−メチル−2−オキソ−2−[(プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン
iPrOH:H2O(1:2,6ml)中に溶解させた5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ](フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン(1当量)に5% Pd/C(16%w/w)を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で1時間攪拌した。混合物をセライトを介して濾過し、化合物をK+塩として単離した。1H NMR(300MHz,CD3OD,300K)δ:8.12(s,1H),7.63(d,J=3.8Hz,1H),6.67(d,J=3.8Hz,1H),6.31(s,1H),4.33−3.90(m,7H),1.74−1.57(m,1H),1.37(d,J=7.1Hz,3H),1.34−1.22(m,8H),1.07(s,3H),0.90(t,J=6.5Hz,6H),0.83(s,3H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:5.03。MS(ES+) m/z 544(M+H)+。
iPrOH:H2O(1:2,6ml)中に溶解させた5’−O−[[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ](フェニルメトキシ)ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン(1当量)に5% Pd/C(16%w/w)を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で1時間攪拌した。混合物をセライトを介して濾過し、化合物をK+塩として単離した。1H NMR(300MHz,CD3OD,300K)δ:8.12(s,1H),7.63(d,J=3.8Hz,1H),6.67(d,J=3.8Hz,1H),6.31(s,1H),4.33−3.90(m,7H),1.74−1.57(m,1H),1.37(d,J=7.1Hz,3H),1.34−1.22(m,8H),1.07(s,3H),0.90(t,J=6.5Hz,6H),0.83(s,3H)。31P NMR(300MHz,CD3OD)δ:5.03。MS(ES+) m/z 544(M+H)+。
実施例11
5’−O−[ヒドロキシ[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン
5’−O−[ヒドロキシ[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン
生物学的アッセイ:
化合物の活性トリホスフェートの形成についての能力はA及びBに記載されているアッセイにより調べられ得る。
化合物の活性トリホスフェートの形成についての能力はA及びBに記載されているアッセイにより調べられ得る。
A.HCV RNA複製の抑制についてのアッセイ:
本発明の化合物をサブゲノムHCVレプリコンを含んでいる培養肝癌(HuH−7)細胞においてC型肝炎ウイルスRNAの複製に影響を及ぼす能力について評価する。アッセイの詳細を以下に記載する。このレプリコンアッセイは、V.Lohmann,F.Korner,J−O.Koch,U.Herian,L.Theilmann,and R.Bartenschlager,“Replication of a Sub−genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line”,Science,285:110(1999)に記載されているアッセイの改変である。
本発明の化合物をサブゲノムHCVレプリコンを含んでいる培養肝癌(HuH−7)細胞においてC型肝炎ウイルスRNAの複製に影響を及ぼす能力について評価する。アッセイの詳細を以下に記載する。このレプリコンアッセイは、V.Lohmann,F.Korner,J−O.Koch,U.Herian,L.Theilmann,and R.Bartenschlager,“Replication of a Sub−genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line”,Science,285:110(1999)に記載されているアッセイの改変である。
プロトコル:
このアッセイは原位置リボヌクレアーゼ保護シンチレーション近傍ベースのプレートアッセイ(SPA)である。10,000〜40,000細胞を96ウェルのcytostarプレート(Amersham)において0.8mg/mLのG418を含有する培地(100〜200μL)を用いて平板培養する。0〜18時間目に化合物を1% DMSO中最高100μMの各種濃度で細胞に添加した後、24〜96時間培養する。細胞を固定し(20分間,10% ホルマリン)、透過性を付与し(20分間,0.25% トリトンX−100/PBS)、RNAウイルスゲノム中に含まれている(+)鎖NS5B(または他の遺伝子)に相補性の一本鎖33P RNAプローブとハイブリダイズした(一晩,50℃)。細胞を洗浄し、リボヌクレアーゼで処理し、洗浄し、65℃に加熱し、Top−Countでカウントする。複製の抑制をカウント/分(cpm)の減少として読取る。
このアッセイは原位置リボヌクレアーゼ保護シンチレーション近傍ベースのプレートアッセイ(SPA)である。10,000〜40,000細胞を96ウェルのcytostarプレート(Amersham)において0.8mg/mLのG418を含有する培地(100〜200μL)を用いて平板培養する。0〜18時間目に化合物を1% DMSO中最高100μMの各種濃度で細胞に添加した後、24〜96時間培養する。細胞を固定し(20分間,10% ホルマリン)、透過性を付与し(20分間,0.25% トリトンX−100/PBS)、RNAウイルスゲノム中に含まれている(+)鎖NS5B(または他の遺伝子)に相補性の一本鎖33P RNAプローブとハイブリダイズした(一晩,50℃)。細胞を洗浄し、リボヌクレアーゼで処理し、洗浄し、65℃に加熱し、Top−Countでカウントする。複製の抑制をカウント/分(cpm)の減少として読取る。
サブゲノムレプリコンを含むように選択されるヒトHuH−7肝癌細胞は、HCV 5’非翻訳領域(NTR)、ネオマイシン選択マーカー、EMCV IRES(配列内リボソーム進入部位)、及びHCV非構造タンパク質NS3〜NS5B、その後に3’NTRから構成される細胞質RNAを有している。
複製アッセイで試験した代表的化合物及び結果を表1に報告する。
B.細胞内代謝についてのアッセイ:
本発明の化合物を、該化合物の細胞(ヒト肝癌細胞株、肝細胞)に侵入し、トリホスフェートへの細胞内変換を受ける能力についても評価した。この方法は各種の細胞株及び化合物を使用した。化合物を細胞とインキュベートした後、サンプルを抽出し、HPLCにより定量する。
本発明の化合物を、該化合物の細胞(ヒト肝癌細胞株、肝細胞)に侵入し、トリホスフェートへの細胞内変換を受ける能力についても評価した。この方法は各種の細胞株及び化合物を使用した。化合物を細胞とインキュベートした後、サンプルを抽出し、HPLCにより定量する。
細胞を以下のプロトコルに従って作成する:
懸濁液中の細胞:凍結保存した細胞に対しては、凍結保存細胞ハンドリングに関するIn Vitro Technologies(米国ニュージャージー州エジソンに所在)によるプロトコルに従った。新鮮な細胞作成については、Xenobiotica 2005,35(1035−54);Giuliano Cらが発表しているプロトコルに従った。
懸濁液中の細胞:凍結保存した細胞に対しては、凍結保存細胞ハンドリングに関するIn Vitro Technologies(米国ニュージャージー州エジソンに所在)によるプロトコルに従った。新鮮な細胞作成については、Xenobiotica 2005,35(1035−54);Giuliano Cらが発表しているプロトコルに従った。
細胞(106細胞/mL)をHCM(イタリア国ミランに所在のCambrex Bio Science)で懸濁し、0.2ml/ウェルを滅菌アッセイプレート96ウェル丸底(Costar 3788)に移した。化合物をDMSO中に1:1000希釈で添加し、振とう水浴(Dubnoff Metabolic Shaking Incubator)において95% O2/5% CO2の雰囲気下、37℃でインキュベートした。細胞懸濁液のアリコートを異なる時間に取り出し、4℃で高速で20秒間遠心し、以下の抽出プロトコルにかけた。
接着細胞株に対しては、細胞を前もって約1日6ウェルの組織培養処理プレートにおいて適切な培地で平板培養し、37℃/5% CO2でインキュベートした。平板培養から24時間後、細胞を1:1000に希釈した化合物で処理し、37℃/5% CO2で適当な期間インキュベートした。
いずれの場合も、インキュベーション培地を吸引により除去した後、細胞を冷70% MeOH、20mM EDTA及び20mM EGTAで抽出し、遠心した。ライゼートを窒素下で乾燥し、固相抽出により精製し、分析まで−20℃で保存した。
分析:
乾燥したライゼートをエレクトロスプレーインターフェース(ESI)を備えたAPI 4000質量分光計に接続させたAgilant 1100 HPLCでZIC−HILIC SeQuantカラム(100×2.1mm,5μm)を用いて分析した。質量分析計は負イオンエレクトロスプレーモードで操作した。HPLC移動相は、溶離液A:水+0.1% ギ酸、溶離液B:アセトニトリル+0.1%ギ酸から構成した。標準に対する保持時間を比較することによりピークを同定した。活性は106細胞中で検出したヌクレオチドのピコモルとして表した。
乾燥したライゼートをエレクトロスプレーインターフェース(ESI)を備えたAPI 4000質量分光計に接続させたAgilant 1100 HPLCでZIC−HILIC SeQuantカラム(100×2.1mm,5μm)を用いて分析した。質量分析計は負イオンエレクトロスプレーモードで操作した。HPLC移動相は、溶離液A:水+0.1% ギ酸、溶離液B:アセトニトリル+0.1%ギ酸から構成した。標準に対する保持時間を比較することによりピークを同定した。活性は106細胞中で検出したヌクレオチドのピコモルとして表した。
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを以下のカウンタースクリーンで細胞毒性及び抗ウイルス特異性についても評価する。
代表的化合物をヒト肝細胞と2時間インキュベートし、良好レベルのヌクレオシドトリホスフェートを形成することが判明した(表2)。
C.カウンタースクリーン:
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがヒトDNAポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイにおいて調べる。
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがヒトDNAポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイにおいて調べる。
a.ヒトDNAポリメラーゼα及びβの抑制:
反応条件:
50μLの反応容量。
反応条件:
50μLの反応容量。
反応緩衝液成分:
20mM トリスHCl(pH7.5)、
200μg/mL ウシ血清アルブミン、
100mM KCl、
2mM β−メルカプトエタノール、
10mM MgCl2、
1.6μM dA,dG,dC,dTTP、
α−33P−dATP。
20mM トリスHCl(pH7.5)、
200μg/mL ウシ血清アルブミン、
100mM KCl、
2mM β−メルカプトエタノール、
10mM MgCl2、
1.6μM dA,dG,dC,dTTP、
α−33P−dATP。
酵素及び鋳型:
0.05mg/mL ギャップ魚精子DNA鋳型、
0.01U/μL DNAポリメラーゼαまたはβ。
0.05mg/mL ギャップ魚精子DNA鋳型、
0.01U/μL DNAポリメラーゼαまたはβ。
ギャップ魚精子DNA鋳型の作成:
5μLの1M MgCl2を500μLの活性化魚精子DNA(USB 70076)に添加する;
37℃に加温し、30μLの65U/μL エキソヌクレアーゼIII(GibcoBRL 18013−011)を添加する;
37℃で5分間インキュベートする;
65℃に10分間加熱することにより反応を停止させる;
50〜100μLのアリコートを20mM トリス−HCl(pH7.5)で平衡化したBio−spin 6クロマトグラフィーカラム(Bio−Rad 732−6002)に充填する;
1,000×gで4分間遠心することにより溶離させる;
溶出液をプールし、260nmでの吸光度を測定して、濃度を決定する。
5μLの1M MgCl2を500μLの活性化魚精子DNA(USB 70076)に添加する;
37℃に加温し、30μLの65U/μL エキソヌクレアーゼIII(GibcoBRL 18013−011)を添加する;
37℃で5分間インキュベートする;
65℃に10分間加熱することにより反応を停止させる;
50〜100μLのアリコートを20mM トリス−HCl(pH7.5)で平衡化したBio−spin 6クロマトグラフィーカラム(Bio−Rad 732−6002)に充填する;
1,000×gで4分間遠心することにより溶離させる;
溶出液をプールし、260nmでの吸光度を測定して、濃度を決定する。
DNA鋳型は適切な容量の20mM トリス−HCl(pH7.5)に希釈し、酵素は適切な容量の2mM β−メルカプトエタノール及び100mM KClを含有する20mM トリス−HClに希釈した。鋳型及び酵素をピペットで微量遠心管または96ウェルプレートに移した。酵素非含有ブランク反応物及び試験化合物非含有対照反応物もそれぞれ酵素希釈緩衝液及び試験化合物溶媒を用いて調製した。反応を上にリストした成分を含む反応緩衝液を用いて開始した。反応物を37℃で1時間インキュベートした。20μLの0.5M EDTAを添加することにより反応物をクエンチした。50μLのクエンチした反応物をWhatman DE81フィルターディスクにスポットし、風乾した。1mLの洗浄液が<100cpmとなるまでフィルターディスクを50mLの0.3M ギ酸アンモニウム(pH8)で繰り返し洗浄した。ディスクを150mLの無水エタノールで2回、150mLの無水エーテルで1回洗浄し、乾燥し、5mLのシンチレーション流体中でカウントした。
抑制%は、以下の式:
抑制%=
[1−(試験反応のcpm−ブランクのcpm)/(対照反応のcpm−ブランクのcpm)]×100
に従って計算した。
抑制%=
[1−(試験反応のcpm−ブランクのcpm)/(対照反応のcpm−ブランクのcpm)]×100
に従って計算した。
b.ヒトDNAポリメラーゼγの抑制:
ヒトDNAポリメラーゼγの抑制のポテンシャルは、20mM トリス(pH8)、2mM β−メルカプトエタノール、50mM KCl、10mM MgCl2及び0.1μg/μL BSAを含有している緩衝液中に0.5ng/μLの酵素、10μMのdATP,dGTP,dCTP及びTTP、2μCi/反応物の[α−33P]−dATP、及び0.4μg/μLの活性化魚精子DNA(US Biochemicalから購入)を含んでいる反応物中で調べた。反応を37℃で1時間進行させ、0.5M EDTAを142mMの最終濃度まで添加することによりクエンチする。産物の形成をアニオン交換フィルター結合及びシンチレーションカウントにより定量した。化合物を最高50μMで試験した。
ヒトDNAポリメラーゼγの抑制のポテンシャルは、20mM トリス(pH8)、2mM β−メルカプトエタノール、50mM KCl、10mM MgCl2及び0.1μg/μL BSAを含有している緩衝液中に0.5ng/μLの酵素、10μMのdATP,dGTP,dCTP及びTTP、2μCi/反応物の[α−33P]−dATP、及び0.4μg/μLの活性化魚精子DNA(US Biochemicalから購入)を含んでいる反応物中で調べた。反応を37℃で1時間進行させ、0.5M EDTAを142mMの最終濃度まで添加することによりクエンチする。産物の形成をアニオン交換フィルター結合及びシンチレーションカウントにより定量した。化合物を最高50μMで試験した。
抑制%は、以下の式:
抑制%=
[1−(試験反応のcpm−ブランクのcpm)/(対照反応のcpm−ブランクのcpm)]×100
に従って計算した。
抑制%=
[1−(試験反応のcpm−ブランクのcpm)/(対照反応のcpm−ブランクのcpm)]×100
に従って計算した。
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがHIV感染性及びHIV蔓延を抑制する能力を以下のアッセイで調べる。
c.HIV感染性アッセイ
アッセイは、低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ(β−gal)発現のために選択したCXCR4及びCCR5の両方を発現するHeLa Magi細胞の変異体を用いて実施する。細胞を48時間感染させ、組み込まれているHIV−I LTRプロモーターからのβ−gal産生を化学発光性基質(Galacto light Plus,マサチューセッツ州ベッドフォードに所在のTropix)を用いて定量する。阻害剤を100μMから出発する2倍連続希釈で滴定する(2回)。各濃度での対照感染に対する抑制%を計算する。
アッセイは、低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ(β−gal)発現のために選択したCXCR4及びCCR5の両方を発現するHeLa Magi細胞の変異体を用いて実施する。細胞を48時間感染させ、組み込まれているHIV−I LTRプロモーターからのβ−gal産生を化学発光性基質(Galacto light Plus,マサチューセッツ州ベッドフォードに所在のTropix)を用いて定量する。阻害剤を100μMから出発する2倍連続希釈で滴定する(2回)。各濃度での対照感染に対する抑制%を計算する。
d.HIV蔓延の抑制
本発明の化合物がヒト免疫不全ウイルス(HIV)の蔓延を抑制する能力は、いずれも全文参照により本明細書に組み入れる米国特許第5,413,999号明細書(1995年5月9日)及びJ.P.Vaccaら,Proc.Natl.Acad.Sci,,91:4096−4100(1994)に記載されている方法により調べる。
本発明の化合物がヒト免疫不全ウイルス(HIV)の蔓延を抑制する能力は、いずれも全文参照により本明細書に組み入れる米国特許第5,413,999号明細書(1995年5月9日)及びJ.P.Vaccaら,Proc.Natl.Acad.Sci,,91:4096−4100(1994)に記載されている方法により調べる。
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートは、サブゲノムHCVレプリコンを含む培養肝癌(HuH−7)細胞に対する細胞毒性について下記アッセイに記載されているMTS細胞ベースアッセイでもスクリーニングした。HuH−7細胞株はH.Nakabayashiら,Cancer Res.,42:3858(1982)に記載されている。
e.細胞毒性アッセイ:
細胞培養物は、懸濁培養物に対しては3日間インキュベーションで約1.5×105細胞/mLの濃度、接着細胞物に対しては3日間インキュベーションで5.0×104細胞/mLの濃度で作成する。99μLの細胞培養物を96ウェルの組織培養処理プレートのウェルに移し、1μLの100倍最終濃度のDMSO中試験化合物を添加した。プレートを37℃及び5% CO2で特定期間インキュベートした。インキュベートした後、各ウェルに20μLのCellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay試薬(MTS)(Promega)を添加し、プレートを37℃及び5% CO2で最長3時間の追加期間インキュベートした。プレートを攪拌して十分に混合し、490nmでの吸光度をプレートリーダーを用いて読取った。懸濁培養細胞の標準曲線はMTS試薬を添加する直前に公知の細胞数で作成した。代謝的に活性な細胞はMTSをホルマザンに還元した。ホルマザンは490nmで吸光する。化合物の存在下での490nmでの吸光度を化合物が添加されていない細胞の吸光度と比較した。
細胞培養物は、懸濁培養物に対しては3日間インキュベーションで約1.5×105細胞/mLの濃度、接着細胞物に対しては3日間インキュベーションで5.0×104細胞/mLの濃度で作成する。99μLの細胞培養物を96ウェルの組織培養処理プレートのウェルに移し、1μLの100倍最終濃度のDMSO中試験化合物を添加した。プレートを37℃及び5% CO2で特定期間インキュベートした。インキュベートした後、各ウェルに20μLのCellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay試薬(MTS)(Promega)を添加し、プレートを37℃及び5% CO2で最長3時間の追加期間インキュベートした。プレートを攪拌して十分に混合し、490nmでの吸光度をプレートリーダーを用いて読取った。懸濁培養細胞の標準曲線はMTS試薬を添加する直前に公知の細胞数で作成した。代謝的に活性な細胞はMTSをホルマザンに還元した。ホルマザンは490nmで吸光する。化合物の存在下での490nmでの吸光度を化合物が添加されていない細胞の吸光度と比較した。
参考文献:Cory,A.H.ら,“Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture”,Cancer Commun.,3:207(1991)。
以下のアッセイは、本発明の化合物の他のRNA依存性RNAウイルスに対する活性を調べるために使用される。
a.化合物のライノウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の測定(細胞変性効果抑制アッセイ):
アッセイ条件は、Sidwell and Huffman,“Use of disposable microtissue culture plates for antivirus and interferon induction studies”,Appl.Microbiol.,22:797−801(1971)の文献に記載されている。
アッセイ条件は、Sidwell and Huffman,“Use of disposable microtissue culture plates for antivirus and interferon induction studies”,Appl.Microbiol.,22:797−801(1971)の文献に記載されている。
ウイルス:
ライノウイルスタイプ2(RV−2)の菌株HGPをSidwell and Huffman文献に述べられているようにKB細胞及び培地(0.1% NaHCO3、抗生物質なし)と一緒に使用する。ATCCから入手したウイルスは軽度の急性発熱性上気道疾患を患っている成人男性の喉スワブ由来である。ライノウイルスタイプ9(RV−9)菌株211及びライノウイルスタイプ14(RV−14)菌株Towもメリーランド州ロックビルに所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)から入手する。RV−9はヒト喉洗浄液由来であり、RV−14は上気道疾患を患っている若い成人の喉スワブ由来である。これらのウイルスは両方とも、ヒト頸部上皮癌細胞であるHeLa Ohio−1細胞(バージニア大学のFred Hayden博士)と一緒に使用する。増殖培地として、5% ウシ胎児血清(FBS)及び0.1% NaHCO3を含むMEM(イーグル最少必須培地)を使用する。これら3つのウイルスタイプのすべてに対する抗ウイルス試験培地は5% FBS、0.1% NaHCO3、50μg ゲンタマイシン/mL及び10mM MgCl2を含むMEMであった。
ライノウイルスタイプ2(RV−2)の菌株HGPをSidwell and Huffman文献に述べられているようにKB細胞及び培地(0.1% NaHCO3、抗生物質なし)と一緒に使用する。ATCCから入手したウイルスは軽度の急性発熱性上気道疾患を患っている成人男性の喉スワブ由来である。ライノウイルスタイプ9(RV−9)菌株211及びライノウイルスタイプ14(RV−14)菌株Towもメリーランド州ロックビルに所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)から入手する。RV−9はヒト喉洗浄液由来であり、RV−14は上気道疾患を患っている若い成人の喉スワブ由来である。これらのウイルスは両方とも、ヒト頸部上皮癌細胞であるHeLa Ohio−1細胞(バージニア大学のFred Hayden博士)と一緒に使用する。増殖培地として、5% ウシ胎児血清(FBS)及び0.1% NaHCO3を含むMEM(イーグル最少必須培地)を使用する。これら3つのウイルスタイプのすべてに対する抗ウイルス試験培地は5% FBS、0.1% NaHCO3、50μg ゲンタマイシン/mL及び10mM MgCl2を含むMEMであった。
本発明の化合物をアッセイするために使用した最高濃度は2000μg/mLである。試験化合物から5分後にウイルスをアッセイプレートに添加した。正当な対照も使用する。アッセイプレートを湿潤空気及び5% CO2、37℃でインキュベートする。対照細胞において形態学的変化を顕微鏡検査することにより細胞毒性をモニターする。ウイルスCPEデータ及び毒性対照データの回帰分析により、ED50(50%有効用量)及びCC50(50%細胞毒性濃度)を求める。選択指数(SI)は式:SI=CC50÷ED50により計算する。
b.化合物のデング熱、バンジ及び黄熱に対するインビトロ抗ウイルス活性の測定(CPE抑制アッセイ)
アッセイの詳細は上記したSidwell and Huffman文献に記載されている。
アッセイの詳細は上記したSidwell and Huffman文献に記載されている。
ウイルス:
デング熱ウイルスタイプ2のニューギニア菌株は疾病対策センターから入手する。ウイルス(ベロ)を培養し、抗ウイルス試験(MA−104)を実施するために2株のアフリカミドリザル腎細胞を使用する。感染マウス脳から得た黄熱ウイルス17D菌株及び南アフリカの発熱している少年の血清から単離したバンジウイルスH336菌株はいずれもATCCから入手する。ベロ細胞はこれらの両細胞と一緒にアッセイのために使用する。
デング熱ウイルスタイプ2のニューギニア菌株は疾病対策センターから入手する。ウイルス(ベロ)を培養し、抗ウイルス試験(MA−104)を実施するために2株のアフリカミドリザル腎細胞を使用する。感染マウス脳から得た黄熱ウイルス17D菌株及び南アフリカの発熱している少年の血清から単離したバンジウイルスH336菌株はいずれもATCCから入手する。ベロ細胞はこれらの両細胞と一緒にアッセイのために使用する。
細胞及び培地:
MA−104細胞(メリーランド州ウォーカーズビルに所在のBioWhittaker,Inc.)及びベロ細胞(ATCC)を5% FBS及び0.1% NaHCO3を含有するが抗生物質を含有しない培地199において使用する。デング熱、黄熱及びバンジウイルスのためのアッセイ培地はMEM、2% FBS、0.18% NaHCO3及び50μg ゲンタマイシン/mLである。
MA−104細胞(メリーランド州ウォーカーズビルに所在のBioWhittaker,Inc.)及びベロ細胞(ATCC)を5% FBS及び0.1% NaHCO3を含有するが抗生物質を含有しない培地199において使用する。デング熱、黄熱及びバンジウイルスのためのアッセイ培地はMEM、2% FBS、0.18% NaHCO3及び50μg ゲンタマイシン/mLである。
本発明の化合物の抗ウイルス試験はSidwell and Huffman文献に従って、上記ライノウイルス抗ウイルス試験と同様にして実施する。これらのウイルスの各々について十分な細胞変性効果(CPE)の測定を5〜6日後に実施する。
c.化合物の西ナイルウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の測定(CPE抑制アッセイ)
アッセイの詳細は上で引用したSidwell and Huffman文献に記載されている。西ナイルウイルスのウシ脳由来のニューヨーク単離物は疾病対策センターから入手する。ベロ細胞を上記したように増殖させ、使用する。試験培地はMEM、1% FBS、0.1% NaHCO3及び50μg ゲンタマイシン/mLである。
アッセイの詳細は上で引用したSidwell and Huffman文献に記載されている。西ナイルウイルスのウシ脳由来のニューヨーク単離物は疾病対策センターから入手する。ベロ細胞を上記したように増殖させ、使用する。試験培地はMEM、1% FBS、0.1% NaHCO3及び50μg ゲンタマイシン/mLである。
本発明の化合物の抗ウイルス試験は、ライノウイルス活性をアッセイするために使用されている方法に類似しているSidwell and Huffmanの方法に従って実施する。十分な細胞変性効果(CPE)の測定を5〜6日後に実施する。
d.化合物のライノ、黄熱、デング熱、バンジ及び西ナイルウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の抑制(ニュートラルレッド取込みアッセイ)
上記したCPE抑制アッセイを実施した後に、“Microtiter Assay for Interferon:Microspectrophotometric Quantitation of Cytopathic Effect”,Appl.Environ.Microbiol.,31:35−38(1976)に記載されている追加の細胞変性検出方法を用いる。アッセイプレートを読取るためにモデルEL309マイクロプレートリーダー(Bio−Tek Instruments Inc.)を使用する。ED50及びCD50は上記したように計算する。
上記したCPE抑制アッセイを実施した後に、“Microtiter Assay for Interferon:Microspectrophotometric Quantitation of Cytopathic Effect”,Appl.Environ.Microbiol.,31:35−38(1976)に記載されている追加の細胞変性検出方法を用いる。アッセイプレートを読取るためにモデルEL309マイクロプレートリーダー(Bio−Tek Instruments Inc.)を使用する。ED50及びCD50は上記したように計算する。
医薬製剤の例
本発明の化合物の経口組成物の1つの具体的実施形態では、50mgの実施例2または実施例3の化合物をサイズO硬ゼラチンカプセルを満たすために全量を580〜590mgとするのに十分な微細ラクトースを用いて製剤化する。
本発明の化合物の経口組成物の1つの具体的実施形態では、50mgの実施例2または実施例3の化合物をサイズO硬ゼラチンカプセルを満たすために全量を580〜590mgとするのに十分な微細ラクトースを用いて製剤化する。
本発明の化合物の皮下組成物の1つの具体的実施形態では、50mgの実施例2または実施例3の化合物を5mLの0.9%w/v塩類溶液中に溶解することにより製剤化する。
本発明を具体的実施形態を参照して記載し、説明してきたが、当業者は本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく各種の変化、修飾及び置換を加え得ることを認識している。例えば、HCV感染症の重症度に対する治療対象のヒトの応答性が異なる結果として本明細書中に上記した好ましい用量以外の有効量を適用してもよい。また、観察された薬理応答は、選択した特定の活性化合物または医薬用担体の存在の有無、使用する製剤のタイプ及び投与モードに従って及びこれらに応じて異なり得、結果の予想される違いまたは差は本発明の目的及びプラクティスに従って考えられる。従って、本発明は特許請求の範囲によってのみ限定され、特許請求の範囲は合理的に広く解釈されると意図される。
Claims (15)
- 式(I):
環Bは場合によりR9aで置換されているアデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルまたは7−デアザアデニンであり、前記したアデニン、グアニン、シトシン及び7−デアザアデニンのNH2基は場合によりR9bで置換されており;
Xは
R1は水素、または場合によりフルオロで置換されているC1−6アルキルであり;
R2はフルオロまたはOR10であり;
R3は水素、C1−16アルキルカルボニル、C2−18アルケニルカルボニル、C1−10アルキルオキシカルボニル、C3−6シクロアルキルカルボニル、C3−6シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式:
R4は水素、C1−6アルキル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルであり、前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、1H−イミダゾリル及び1H−インドル−3−イルからなる群から選択される1個の置換基で置換されており、前記したフェニル、ベンジル及びフェネチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される1または2個の置換基で置換されており;
R5は水素またはメチルであり;或いは
R4及びR5はこれらが結合している炭素原子と一緒に、3〜6員脂肪族スピロ環式環系を形成し;或いは
R4及びXはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び1または2個の窒素原子を含有し、場合によりC7−16アルキルで置換されている5員芳香族環系を形成し;
R6はC7−16アルキル、C2−20アルケニル、(CH2)0−4C7−9シクロアルキル、(CH2)0−4C3−9シクロアルケニルまたはアダマンチルであり、各々は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、C1−4アルコキシ、トリフルオロメチル及び(CH2)0−4NRxRyから独立して選択される1〜3個の置換基で置換されており;
Rx及びRyは独立して水素及びC1−6アルキルから選択され;或いは
Rx及びRyはこれらが結合している窒素原子と一緒に、場合によりN、O及びSから選択される1または2個の追加ヘテロ原子を含有しており、場合によりC1−6アルキルで置換されている4〜7員ヘテロ環式環を形成し;
各R7は独立して水素、C1−5アルキルまたはフェニルC0−2アルキルであり;
各R8は独立して水素、C1−4アルキル、C1−4アシル、ベンゾイル、C1−4アルキルオキシカルボニル、フェニルC0−2アルキルオキシカルボニル、C1−4アルキルアミノカルボニル、フェニルC0−2アルキルアミノカルボニル、C1−4アルキルスルホニルまたはフェニルC0−2アルキルスルホニルであり;
R9a及びR9bは独立して水素、ハロゲン、C(O)C1−8アルキル、C(O)OC1−8アルキル、ベンゾイル、及び
R10は水素、メチル、C1−16アルキルカルボニル、C2−18アルケニルカルボニル、C1−10アルキルオキシカルボニル、C3−6シクロアルキルカルボニル、C3−6シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式:
R3及びR10はこれらが結合している酸素原子と一緒に、5員環状カーボネート、または構造式:
の5員環状アセタール/ケタールを形成し;
R11は水素、CH2OC(O)R15、CH2CH2SR15、または(CH2)2−4−O−(CH2)1−17CH3であり;
R12はC6−16アルキル、C2−20アルケニル、(CH2)0−2C7−9シクロアルキル、(CH2)0−2C3−9シクロアルケニル、OC1−6アルキルまたはアダマンチルであり;
R13及びR14は独立して水素及びC1−6アルキルから選択され;或いは
R13及びR14はこれらが結合している炭素原子と一緒に、3〜6員脂肪族スピロ環式環系を形成し;
R15はC1−6アルキルである]
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩。 - R4及びXはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び1または2個の窒素原子を含有し、場合によりC7−16アルキルで置換されている5員芳香族環系を形成しない請求項1に記載の化合物。
- Bはシトシンまたは7−デアザアデニンである請求項1または2に記載の化合物。
- R1は水素、メチルまたはフルオロメチルである請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
- R2はヒドロキシである請求項1〜4のいずれか1項に記載の化合物。
- R3は水素である請求項1〜5のいずれか1項に記載の化合物。
- R4は水素またはメチルであり、R5は水素であり、R6は2−プロピルペンチルであり、R12は1−プロピルブチルであり、R13及びR14は共に水素である請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物
- 5’−O−[[[(1S)−2−エトキシ−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[ヒドロキシ[[(1S)−1−メチル−2−オキソ−2−[(2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[ヒドロキシ[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[[[(1S)−2−(シクロヘプチルオキシ)−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[[[(1S)−2−(シクロオクチルオキシ)−1−メチル−2−オキソエチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[[[2−[(シクロヘプチルカルボニル)オキシ]エチル]アミノ]ヒドロキシホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[ヒドロキシ[[2−[[(1−メチルエトキシ)カルボニル]オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
[(3aR,4aR,6R,6aR)−6−(4−アミノ−2−オキソピリミジン−1(2H)−イル)−3,4−ジヒドロキシ−4−メチルテトラヒドロフラン−2−イル]メチル水素{(1S)−1−[3−(1−プロピルブチル)−1,2,4−オキサジアゾル−5−イル]エチル}アミドホスフェート、
5’−O−[ヒドロキシ[[1−[5−(1−プロピルブチル)−1,3,4−オキサジアゾル−2−イル]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチルシチジン、
5’−O−[ヒドロキシル[[1−メチル−2−オキソ−2−[(プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン、
5’−O−[ヒドロキシル[[2−[(1−オキソ−2−プロピルペンチル)オキシ]エチル]アミノ]ホスフィニル]−2’−C−メチル−7−デアザアデノシン
から選択される請求項1に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩。 - 請求項1〜9のいずれか1項に記載の式Iを有する化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
- A:請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩及びB:ΗCV NS3セリンプロテアーゼの阻害剤の組合せ。
- 治療によりヒト身体を治療するための請求項1〜11のいずれか1項に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
- C型肝炎ウイルスの治療または抑制用薬剤を製造するための請求項1〜11のいずれか1項に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩の使用。
- RNA依存性ウイルス感染症の治療を要する患者に対して治療有効量の請求項1に記載の式Iを有する化合物を投与することを含むRNA依存性ウイルス感染症の予防または治療方法。
- この治療を要する患者に対して治療有効量の請求項1に記載の式Iを有する化合物を投与することを含むRNA依存性RNAウイルス複製の抑制;RNA依存性RNAウイルス感染症の治療;HCV複製の抑制;HCV感染症の治療;RNA依存性RNAウイルスポリメラーゼの阻害;またはHCV NS5Bポリメラーゼの阻害方法。
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