CN104062389B - 一种不同提取方法的普洱茶gc指纹图谱试验方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法，样品准备，将市场上所购买的普通茶叶和大益牌7542系列普洱茶分别在研钵中研细，分别储存在2个密封性好的广口瓶中；样品前处理；不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较；普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较；普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较；不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较。本发明采用气相色谱法对不同提取方法和不同溶剂提取的普洱茶提取液进行检测，对所得的气相指纹图谱进行整体性比较，最终建立一种得到方法简捷、整体性强、灵敏度高、分析时间短的普洱茶GC色谱指纹图谱方法，为普洱茶GC指纹图谱技术研究提供参考。

Description

一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法

技术领域

本发明属于普洱茶研究领域，尤其涉及一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法。

背景技术

目前，国内外对茶叶的研究主要是集中在茶叶加工过程以及终端产品中呈香、呈味物质的组成、含量、转变规律和协调性、相关性等方面。自1893年M·K·Bamber就开始研究茶叶香气成分；1896年P·Van·Rombargn用蒸馏法提取茶叶中的香精油；1920年荷兰学者从茶叶中发现青叶醛(反-2-己烯醛)；1933年日本京都大学和台湾台北大学开始对煎茶和红茶香气进行研究，已做了大量工作，因为技术落后，每次研究必须消耗1吨茶叶来抽提香气，且对香气组成的研究还很肤浅。从此以后，在日本、美国掀起了研究茶叶高潮，特别是日本的山西贞博士和田中协和博士，他们不但研究鲜茶叶中的青叶醛和青叶醛的形成机制，还研究了其他香气物质及其形成机制和综合利用等。在国内，对茶叶方面指纹图谱研究的报道相对很多。如：宋冠群等利用胶束电动色谱法建立了茶叶的指纹图谱并用于分析10种中国名茶，实现了图谱的数据化；成浩等人利用多元化学指纹图谱和逐步判别技术对茶叶进行判别，使不同产地属性的扁形茶得到了有效的分离；宁井铭等人采用高效液相色谱技术对云南普洱茶晒青毛茶的主要化学成分的指纹图谱进行了研究，为普洱毛茶鉴别和质量控制提供了实验依据；顾睿等人利用气相色谱-质谱技术对普洱茶香气成分的分析，研究普洱茶香气成分对普洱茶品质的影响。

就挥发性成分研究而言，以往的学者们所采用的提取分离方法主要有：常压水蒸气蒸馏萃取法(SDE法)、减压蒸馏萃取法(VDE)、顶空吸附法(HAS法)、超临界二氧化碳萃取法(SFE)等。而在运用不同提取方式和不同溶剂提取的气相指纹图谱研究方面的报道相对较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法，旨在对不同提取方法和不同溶剂提取的普洱茶提取液进行检测，对所得的气相指纹图谱进行整体性比较，为普洱茶GC指纹图谱技术研究提供参考。

本发明是这样实现的，一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法包括：

步骤一、样品准备，将市场上所购买的普通茶叶和大益牌7542系列普洱茶分别在研钵中研细，分别储存在2个密封性好的广口瓶中；

步骤二、样品前处理；

步骤三、不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较；

步骤四、普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较；

步骤五、普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较；

步骤六、不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较。

进一步，样品前处理包括普通茶叶样品的制备和大益普洱茶样品的制备，具体方法为：

普通茶叶样品的制备过程为：

步骤一、准确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用索氏提取法回流提取30min；

步骤二、准确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取20ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用超声提取法提取30min；

步骤三、确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取30ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用新仪微波在提取温度(T)：50℃；搅拌转速(r)：800转/min；功率(W)：3KW；提取时间(t)：30min条件下提取；

步骤四、确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用可调高速匀浆机在转速(r)：1万转/min；提取时间(t)：5min条件下提取；

将丙酮、乙酸乙酯、石油醚经不同提取方法得到的提取液常压滤后，用有机相滤膜过滤至进样瓶；用工业酒精提取的提取液经常压过滤后用旋转蒸发仪浓缩干，用2ml无水乙醇定容后用滤膜过滤至进样瓶；水提取液经常压过滤后，分别用乙酸乙酯、石油醚、正己烷萃取，萃取液用有机相滤膜过滤至进样瓶于GC上检测；

大益普洱茶样品的制备：准确称取普洱茶，每份1.000g，分别采用与普通茶叶样品制备过程一样的提取方法与条件进行提取、制备样品，并与GC上检测。

进一步，不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较包括不同提取溶剂的普洱茶GC指纹图谱整体性比较和不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较具体方法为：

不同提取溶剂的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、以普洱茶为原料，采用索氏提取法，按照样品前处理步骤中的步骤一的方法进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在索氏提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析。

步骤二、以普洱茶为原料，采用超声提取法，按照样品前处理步骤二进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在超声提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析。

步骤三、以普洱茶为原料，采用微波提取法，按照样品前处理步骤三进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下下于GC中进样检测，得到在微波提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析。

步骤四、以普洱茶为原料，采用匀浆提取法，按照样品前处理步骤四进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在匀浆提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析。

步骤五、通过在同种提取方法下，对不同溶剂进行提取之后所检测的GC指纹图谱的峰数情况进行比较；

不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法以丙酮为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析。

步骤二、按照样品前处理的方法以工业酒精为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行提取，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析。

步骤三、按照样品前处理的方法以乙酸乙酯为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析。

步骤四、按照样品前处理的方法以石油醚为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，将所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析。

进一步、普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法对普洱茶进行提取，并将所得提取液于GC上检测分析。

步骤二、以匀浆法为提取方法，用乙酸乙酯直接提取与用水提取之后用乙酸乙酯萃取对普洱茶进行考察，并于GC上检测，对所得GC指纹图谱比较分析。

步骤三、以索氏为提取方法，用石油醚直接提取和用水提取后用石油醚萃取所得样品与GC上检测，并对所得指纹图谱进行比较分析。

进一步、普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法中的方法对普通茶叶和普洱茶进行考察，所得的各提取液与GC上检测，并对所得的GC指纹图谱进行分析比较。步骤二、在普通茶叶与普洱茶的索氏法丙酮提取的GC指纹图谱比较中，普通茶叶的GC指纹图谱在保留时间为8.670min-32.308min范围内具有较多较大的峰，而普洱茶的GC指纹图谱则在保留时间为38.455min和59.249min上具有普通茶叶所没有的两个特征峰；

步骤三、在普通茶叶与普洱茶的匀浆法乙酸乙酯提取的气相指纹图谱比较中，整体上看普通茶叶所具有的特征峰相对较多；

进一步，不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

以丙酮为溶剂，用索氏提取法对普洱茶进行提取，将所提取到的样品采用ECD和FID检测器的GC上进行检测，并对检测所得的指纹图谱进行比较分析。

进一步，GC检测条件为：

进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；不分流进样；进样量：1μl；柱流量：1.52ml/min；总流量：50.0ml/min；吹扫流量：3.0ml/min；载气：高纯氮；毛细管柱：ZB-multiResidue-2，30.0m×0.25μm×0.2mm；配制ECD和FID，助燃气(H2)：35ml/min；空气：160ml/min；载气(N2)：35ml/min；

程序升温：柱起始温度50℃，保持1分钟；以3℃/min升到80℃，保持2分钟；再以5℃/min升到130℃，保持3分钟；再以3℃/min升到150℃，保持3分钟；然后再以3℃/min升到180℃，保持2分钟；最后以8℃/min升到250℃，保持12分钟；总运行时间：75分钟。

效果汇总

本发明采用气相色谱法对不同提取方法和不同溶剂提取的普洱茶提取液进行检测，对所得的气相指纹图谱进行整体性比较，最终建立一种得到方法简捷、整体性强、灵敏度高、分析时间短的普洱茶GC色谱指纹图谱方法，为普洱茶GC指纹图谱技术研究提供参考。

附图说明

图1是本发明实施例提供的用不同提取溶剂以索氏提取为提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、索氏法乙酸乙酯提取；2、索氏法石油醚提取；3、索氏法乙醇提取；4、索氏法丙酮提取；

图2是本发明实施例提供的用不同提取溶剂以超声提取为提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、超声乙酸乙酯；2、超声石油醚；3、超声乙醇；4、超声丙酮；

图3是本发明实施例提供的用不同提取溶剂以微波提取为提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、微波乙酸乙酯；2、微波石油醚；3、微波乙醇；4、微波丙酮；

图4是本发明实施例提供的用不同提取溶剂以匀浆提取为提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、匀浆乙酸乙酯；2、匀浆石油醚；3、匀浆乙醇；4、匀浆丙酮；

图5是本发明实施例提供的以丙酮为提取溶剂用不同提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、微波法丙酮提取；2、超声法丙酮提取；3、匀浆法丙酮提取；4、索氏法丙酮提取；

图6是本发明实施例提供的以工业酒精为提取溶剂用不同提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、微波乙醇；2、超声乙醇；3、匀浆乙醇；4、索氏乙醇；

图7是本发明实施例提供的以乙酸乙酯为提取溶剂用不同提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、微波法乙酸乙酯提取；2、超声法乙酸乙酯提取；3、匀浆法乙酸乙酯提取；4、索氏法乙酸乙酯提取；

图8是本发明实施例提供的以石油醚为提取溶剂用不同提取方法的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、微波石油醚；2、超声石油醚；3、匀浆石油醚；4、索氏石油醚；

图9是本发明实施例提供的以匀浆提取法乙酸乙酯提取液与乙酸乙酯萃取液的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、匀浆法乙酸乙酯提取；2、匀浆法水提取、乙酸乙酯萃取；

图10是本发明实施例提供的以索氏提取法石油醚提取液与石油醚萃取液的GC指纹图谱的对比图；

图中：1、索氏法石油醚提取；2、索氏法水提—石油醚萃取；

图11是本发明实施例提供的普通茶叶与普洱茶索氏法丙酮提取的GC指纹图谱比较图；

图中：1、普洱茶索氏法丙酮提取；2、普通茶叶索氏法丙酮提取；

图12是本发明实施例提供的普通茶叶与普洱茶匀浆法乙酸乙酯提取的GC指纹图谱对比图；

图中：1、普洱茶匀浆法乙酸乙酯提取；2、普通茶叶匀浆法乙酸乙酯提取；

图13是本发明实施例提供的索氏法丙酮提取用ECD和FID检测的GC指纹图谱的对比图；注：1-索氏法丙酮提取EDC检测2-索氏法丙酮提取FID检测。

图14是本发明实施例提供的不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合具体实施例对本发明的工作原理做进一步详细说明：

1仪器与试剂

1.1主要仪器

可调高速匀浆器(FSH-2，江苏大地自动化仪器厂)，超声波清洗器(HS-3120，环保仪器厂)，循环水式多用真空泵(SHZ-D(Ⅲ)，天津华鑫仪器厂)，微波合成萃取仪(MAS-Ⅱ，新仪微波化学科技有限公司)，磁力搅拌器(CL-2，巩义市予华仪器有限责任公司)，便携式微型玻璃实验仪器(扬州市邗江公道玻璃仪器厂)，数显电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，旋转蒸发仪(EYELAOSB-2100)，岛津GC-2010气相色谱仪。

1.2主要试剂

石油醚(AR，天津市风船化学试剂科技有限公司)、无水乙醇(AR，天津市风船化学试剂科技有限公司)、丙酮(AR，天津市风船化学试剂科技有限公司)、乙酸乙酯(AR，广东光华科技股份有限公司)、正己烷(AR，天津市风船化学试剂科技有限公司)、工业酒精。

1.3材料

普通茶叶(蒙自五里冲茶厂)、普洱茶(大益牌7542系列)、2.5ml一次性针筒、抽滤瓶、化学分析滤纸、0.45μm有机相滤膜、0.45μm水相滤膜、2ml进样瓶、研钵。

2仪器条件

2.1GC检测条件

进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；不分流进样；进样量：1μl；柱流量：1.52ml/min；总流量：50.0ml/min；吹扫流量：3.0ml/min；载气：高纯氮；毛细管柱：ZB-multiResidue-2，30.0m×0.25μm×0.2mm；配制ECD和FID，助燃气(H2)：35ml/min；空气：160ml/min；载气(N2)：35ml/min。

程序升温：柱起始温度50℃，保持1分钟；以3℃/min升到80℃，保持2分钟；再以5℃/min升到130℃，保持3分钟；再以3℃/min升到150℃，保持3分钟；然后再以3℃/min升到180℃，保持2分钟；最后以8℃/min升到250℃，保持12分钟；总运行时间：75分钟。

2.2微波提取条件

提取温度(T)：50℃；搅拌转速(r)：800转/min；功率(W)：3KW；提取时间(t)：30min。

2.3匀浆提取条件

转速(r)：1万转/min；提取时间(t)：5min。

本发明是这样实现的，一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法包括：

S101：样品准备，将市场上所购买的普通茶叶和大益牌7542系列普洱茶分别在研钵中研细，分别储存在2个密封性好的广口瓶中；

S102：样品前处理；

S103：不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较；

S104：普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较；

S105：普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较；

S106：不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较。

进一步，样品前处理包括普通茶叶样品的制备和大益普洱茶样品的制备，具体方法为：

普通茶叶样品的制备过程为：

步骤一、准确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用索氏提取法回流提取30min；

步骤二、准确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取20ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用超声提取法提取30min；

步骤三、确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取30ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用新仪微波在提取温度(T)：50℃；搅拌转速(r)：800转/min；功率(W)：3KW；提取时间(t)：30min条件下提取；

步骤四、确称取四份茶叶，每份1.000g，分别取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用可调高速匀浆机在转速(r)：1万转/min；提取时间(t)：5min条件下提取；

将丙酮、乙酸乙酯、石油醚经不同提取方法得到的提取液常压滤后，用有机相滤膜过滤至进样瓶；用工业酒精提取的提取液经常压过滤后用旋转蒸发仪浓缩干，用2ml无水乙醇定容后用滤膜过滤至进样瓶；水提取液经常压过滤后，分别用乙酸乙酯、石油醚、正己烷萃取，萃取液用有机相滤膜过滤至进样瓶于GC上检测；

大益普洱茶样品的制备：准确称取普洱茶，每份1.000g，分别采用与普通茶叶样品制备过程一样的提取方法与条件进行提取、制备样品，并与GC上检测。

进一步，不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较包括不同提取溶剂的普洱茶GC指纹图谱整体性比较和不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较具体方法为：

不同提取溶剂的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、以普洱茶为原料，采用索氏提取法，按照样品前处理步骤中的步骤一的方法进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在索氏提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析(见图1)。由此可知，索氏法丙酮提取在保留时间为4.557min、5.178min、8.710min、11.064min、38.478min、39.102min、66.781min上具有特征峰，而其它没有。索氏法乙醇提取的在26.113min上具有一个比其它方法要较高较大的峰。所以，在采用索氏法不同溶剂提取中，丙酮的提取效果更佳。

步骤二、以普洱茶为原料，采用超声提取法，按照样品前处理步骤二进行样品的制备，将各提取液样品一定条件下于GC中进样检测，得到在超声提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析(见图2)。

在保留时间为8.656min、11.310min、38.473min上具有另外三种所没有的特征峰。所以在超声提取条件下，以丙酮为提取溶剂的效果要更好。

步骤三、以普洱茶为原料，采用微波提取法，按照样品前处理步骤三进行样品的制备，将各提取液样品一定条件下于GC中进样检测，得到在微波提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析(见图3)。

在保留时间：8.776min、9.256min、11.291min、15.103min、38.537min、63.580min、66.841min上，具有区别于其他的特征峰，所以在微波提取条件下，以丙酮提取的效果要好。

步骤四、以普洱茶为原料，采用匀浆提取法，按照样品前处理步骤四进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在匀浆提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析(见图4)。

在保留时间为：6.776min、8.732min、11.077min、38.527min、41.379min上具有另外方法所没有的特征峰。因此，在以匀浆提取法的条件下，以丙酮提取的效果佳。

步骤五、通过在同种提取方法下，以不同溶剂进行提取之后所检测的GC指纹图谱的峰数情况(见表1)。通过对表1中四种提取方法和与之对应的四种提取溶剂的检测结果进行分析可以看出，溶剂相同时各提取方法中指纹图谱峰数最多的是索氏提取法，其次是匀浆提取法。当提取方法一定时，索氏提取法、超声提取法、微波提取法均以乙醇为提取溶剂是峰的数率最多，而在匀浆提取法中以丙酮为提取溶剂时峰的数量最多。在提取方法相同时对提取溶剂而言，样品的指纹图谱峰的多少与提取溶剂的性质有着密切的关系。随着溶剂的极性的减小，对应的图谱中所含的峰数有所减少。相对于提取溶剂相同而提取方法不同时，样品指纹图谱中的峰数多少与提取方法的选择同样有所关联。

表1普洱茶各提取方法与溶剂相对应的GC指纹图谱的峰数(保留时间t＞3min)

经过对实验所得的数据进行分析后得出：在提取方法相同时，所用的提取溶剂中以丙酮提取的气相指纹图谱的整体性要更强。

不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法以丙酮为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析(见图5)，其中索氏提取法与其它三种提取方法相比在保留时间为：3.450min、11.456min、43.437min上具有其它方法所没有的特征峰，而且在保留时间为7.020min和38.450min上的峰比其它的三种方法的峰要更高，峰面积更大。因此，在以丙酮为提取溶剂采用不同提取方法时，索氏法丙酮提取的整体性要更强。

步骤二、按照样品前处理的方法以工业酒精为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行提取，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析(见图6)，索氏法的GC指纹图谱在保留时间为：5.501min、15.078min、17.647min、19.315min、25.534min上具有特征峰，因此，在以工业酒精提取时，四种提取方法中索氏提取要更好。

步骤三、按照样品前处理的方法以乙酸乙酯为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析(见图7)，可以得出以索氏法乙酸乙酯提取的气相指纹图谱与另外三个相比，保留时间在：11.112min、13.750min、15.253min、22.652min、25.531min、39.013min、49.165min时具有其它三个多没有的特征峰，因此可以得出在以乙酸乙酯为溶剂时索氏法提取的整体性要比其它三种方法好。

步骤四、按照样品前处理的方法以石油醚为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，将所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析(见图8)，索氏提取法在保留时间为：5.905min上有一个其他方法所没有的特征峰，因此，在四种方法中索氏提取法要更佳。

进一步、普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法对普洱茶进行提取，并将所得提取液于GC上检测分析，得到表2中的数据。由表可知：在用溶剂直接提取与用溶剂萃的峰数变化上，如：用索氏法乙酸乙酯提取的GC指纹图谱有77分峰，而用索氏法水提后用乙酸乙酯萃取的GC指纹图谱的峰数只有54个；用微波法乙酸乙酯提取的GC指纹图谱只有25个峰，而用微波法水提之后用乙酸乙酯萃取的峰数则多达52个；用超声法石油醚提取的GC指纹图谱中有48个峰，而用超声法水提之后用石油醚萃取的GC指纹图谱中却只有26个峰。因此，在提取液与萃取液的GC指纹图谱的峰数变化上，客观的反应出了直接提取与萃取的物质成分的变化。

表2用溶剂直接提取与用水提取后用溶剂萃取的GC指纹图谱的峰数(保留时间t＞3min)

步骤二、以匀浆法为提取方法，用乙酸乙酯直接提取与用水提取之后用乙酸乙酯萃取对普洱茶进行考察，并于GC上检测，对所得GC指纹图谱比较分析(见图9)可知在保留时间为27.165min、38.677min用乙酸乙酯萃取的峰面积为3370193、2214055而乙酸乙酯提取在相同保留时间上的峰面积为：20755.5、28990.8；在保留时间为59.248min上萃取的峰面积为379395提取的为1325814；而保留时间在60min以后萃取的没有峰，提取的还有6个峰。

步骤三、以索氏为提取方法，用石油醚直接提取和用水提取后用石油醚萃取所得样品与GC上检测，并对所得指纹图谱进行比较分析(见图10)得出在保留时间为6.715min和39.867min上用石油醚萃取的有峰，而用石油醚提取的则没有。在保留时间10-30min、50.291min和59.243min上石油醚萃取的峰基本上比石油醚提取的要高。因此，在用同一溶剂在提取与萃取的比较中，可以看出萃取可以使提取的物质成分进行除杂，有利于成分含量的提高。

进一步、普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法中的方法多普通茶叶和普洱茶进行考察，所得的各提取液与GC上检测，并对所得的GC指纹图谱进行分析比较，得到表3中的各提取方式有关气相色谱的峰数、对比图11和图12。从表3中可以发现：在相同条件下，普通茶叶的峰数要比普洱茶的峰数要多。如：索氏法丙酮提取的GC指纹图谱中，普通茶叶具有244个峰，而普洱茶的只有159个；微波法乙酸乙酯提取的GC指纹图谱中，普通茶叶有212个，而普洱茶只有25个。

表3-3粗茶与普洱茶各提取方法与溶剂对应的GC指纹图谱的峰数(保留时间t＞3min)

步骤二、在普通茶叶与普洱茶的索氏法丙酮提取的GC指纹图谱比较中(图11)，普通茶叶的GC指纹图谱在保留时间为8.670min-32.308min范围内具有较多较大的峰，而普洱茶的GC指纹图谱则在保留时间为38.455min和59.249min上具有普通茶叶所没有的两个特征峰。

步骤三、在普通茶叶与普洱茶的匀浆法乙酸乙酯提取的气相指纹图谱比较(图12)中，整体上看普通茶叶所具有的特征峰相对较多，如：在5.336min、18.164min、26.296min、31.48min。而在保留时间为55.315min上普洱茶的峰面积要比普通茶叶的要大。

通过对实验结果进行分析表明：在采用同种提取方法与提取溶剂对两种茶叶进行提取的样品进样分析后，两种样品的气相指纹图谱中的峰数有着巨大的差别。无论是采用何种提取方式提取，在所得的样品气相图谱中，粗茶的图谱峰数都比普洱茶的峰数要多。对于指纹图谱来说，每一个峰的后面都代表着一种或一类成分。峰数与峰面积的变化，实质的反应出物质成分和成分含量的变化。因此，从粗茶与普洱茶的图谱峰数的变化上，可以反应出的是粗茶与普洱茶之间的物质成分与含量的变化。而产生这一系列的变化可能是由于源茶叶的不同或加工工艺的不同，而导致茶叶在加工和贮藏过程中的一些化学成分的转变、挥发性成分的变化等。

进一步，不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

以丙酮为溶剂，用索氏提取法对普洱茶进行提取，将所提取到的样品采用ECD和FID检测器的GC上进行检测，并对检测所得的指纹图谱进行比较分析(见图13)。经分析可知：两种检测器的出峰情况大致相同，但是在保留时间为：10.415min、14.209min、38.455min上用ECD检测器所得的GC指纹图谱的峰面积要比FID检测器的GC指纹图谱要大，而在保留时间为50min之后FID检测的GC指纹图谱的峰面积要更大。从整体来看FID检测器的检测灵敏度要比ECD的较高。因此，在气相色谱法的研究中，由于物质的成分不同和检测器的检测范围的不同，所检测分析出的结果也会不同。所以在采用气相色谱法研究时，就针对的分析对象要选择物质成分相对应、检测灵敏度等的检测器，才会更有利于检测分析。

进一步，GC检测条件为：

进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；不分流进样；进样量：1μl；柱流量：1.52ml/min；总流量：50.0ml/min；吹扫流量：3.0ml/min；载气：高纯氮；毛细管柱：ZB-multiResidue-2，30.0m×0.25μm×0.2mm；配制ECD和FID，助燃气(H2)：35ml/min；空气：160ml/min；载气(N2)：35ml/min；

程序升温：柱起始温度50℃，保持1分钟；以3℃/min升到80℃，保持2分钟；再以5℃/min升到130℃，保持3分钟；再以3℃/min升到150℃，保持3分钟；然后再以3℃/min升到180℃，保持2分钟；最后以8℃/min升到250℃，保持12分钟；总运行时间：75分钟。

本发明通过以水、丙酮、乙醇、乙酸乙酯、石油醚为提取溶剂，以索氏提取、超声提取、微波提取、匀浆提取为提取方法，对普通茶叶和普洱茶的挥发性成分进行提取，采用GC进行检测，并对不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较进行初步研究，实验结果为：

1、通过对不同提取溶剂得到的普洱茶GC指纹图谱进行整体性的比较分析，得出以丙酮为提取溶剂的效果最佳；

2、通过对不同提取方法得到的普洱茶GC指纹图谱进行整体性的比较分析，得出以索氏提取为提取方法的效果佳；

3、通过对普洱茶的乙酸乙酯和石油醚直接提取液与用水提取后乙酸乙酯和石油醚萃取液的GC指纹图谱整体性的考察，发现萃取有利于物质成分的除杂、成分的含量的提高；

4、通过对普通茶叶和普洱茶的GC指纹图谱进行分析，从普通茶叶与普洱茶的图谱峰数的变化上，可以反应出普通茶叶与普洱茶之间的差异性；

5、实验最终建立一种得到方法简捷、整体性强、灵敏度高、分析时间短的普洱茶气相色谱指纹图谱方法。

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性的劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法，其特征在于，该不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法包括：

步骤一、样品准备，将普通茶叶和大益牌7542系列普洱茶分别在研钵中研细，分别储存在2个密封性好的广口瓶中；

步骤二、样品前处理；

步骤三、不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较；

步骤四、普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较；

步骤五、普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较；

步骤六、不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较；

样品前处理包括普通茶叶样品的制备和大益普洱茶样品的制备，具体方法为：

普通茶叶样品的制备过程为：

步骤一、称取四份茶叶，每份1.000g，分别取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用索氏提取法回流提取30min；

步骤二、称取四份茶叶，每份1.000g，分别取20ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用超声提取法提取30min；

步骤三、取四份茶叶，每份1.000g，分别取30ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用新仪微波化学科技有限公司生产的MAS-II微波合成萃取仪在提取温度T：50℃；搅拌转速r：800转/min；功率W：3KW；提取时间t：30min条件下提取；步骤四、称取四份茶叶，每份1.000g，分别取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工业酒精、蒸馏水，用可调高速匀浆机在转速r：1万转/min；提取时间t：5min条件下提取；

将不同提取方法得到的丙酮、乙酸乙酯、石油醚提取液经常压过滤后，用有机相滤膜过滤至进样瓶；用工业酒精提取的提取液经常压过滤后用旋转蒸发仪浓缩干，用2ml无水乙醇定容后用滤膜过滤至进样瓶；水提取液经常压过滤后，分别用乙酸乙酯、石油醚、正己烷萃取，萃取液用有机相滤膜过滤至进样瓶于GC上检测；

大益普洱茶样品的制备：称取普洱茶，每份1.000g，分别采用与普通茶叶样品制备过程一样的提取方法与条件进行提取、制备样品，并与GC上检测；

不同提取溶剂与提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较包括不同提取溶剂的普洱茶GC指纹图谱整体性比较和不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较；

不同提取溶剂的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、以普洱茶为原料，采用索氏提取法，按照样品前处理步骤中的方法进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在索氏提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析；

步骤二、以普洱茶为原料，采用超声提取法，按照样品前处理步骤进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在超声提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析；

步骤三、以普洱茶为原料，采用微波提取法，按照样品前处理步骤进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在微波提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析；

步骤四、以普洱茶为原料，采用匀浆提取法，按照样品前处理步骤进行样品的制备，将各提取液样品在一定条件下于GC中进样检测，得到在匀浆提取法下各溶剂的GC指纹图谱，并对所得GC指纹图谱进行比较分析；

步骤五、通过在同种提取方法下，对不同溶剂进行提取之后所检测的GC指纹图谱的峰数情况进行比较；

不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法以丙酮为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析；

步骤二、按照样品前处理的方法以工业酒精为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行提取，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析；

步骤三、按照样品前处理的方法以乙酸乙酯为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析；

步骤四、按照样品前处理的方法以石油醚为提取溶剂，采用不同的提取方法对普洱茶进行考察，将所得提取液经处理后于GC中检测，建立GC指纹图谱并进行比较分析；

普洱茶的提取液与萃取液的GC指纹图谱整体性比较的方法为：

步骤一、按照样品前处理的方法对普洱茶进行提取，并将所得提取液于GC上检测分析；

步骤二、以匀浆法为提取方法，用乙酸乙酯直接提取与用水提取之后用乙酸乙酯萃取对普洱茶进行考察，并于GC上检测，对所得GC指纹图谱比较分析；

步骤三、以索氏为提取方法，用石油醚直接提取和用水提取后用石油醚萃取所得样品与GC上检测，并对所得指纹图谱进行比较分析；

普通茶叶和大益普洱茶的GC指纹图谱比较的方法为：步骤一、按照样品前处理的方法中的方法对普通茶叶和普洱茶进行考察，所得的各提取液与GC上检测，并对所得的GC指纹图谱进行分析比较；

步骤二、在普通茶叶与普洱茶的索氏法丙酮提取的GC指纹图谱比较中，普通茶叶的GC指纹图谱在保留时间为8.670min～32.308min范围内具有较多较大的峰，而普洱茶的GC指纹图谱则在保留时间为38.455min和59.249min上具有普通茶叶所没有的两个特征峰；

步骤三、在普通茶叶与普洱茶的匀浆法乙酸乙酯提取的气相指纹图谱比较中，整体上看普通茶叶所具有的特征峰相对较多；

不同检测器建立的普洱茶GC指纹图谱整体性比较的方法为：

以丙酮为溶剂，用索氏提取法对普洱茶进行提取，将所提取到的样品采用ECD和FID检测器的GC上进行检测，并对检测所得的指纹图谱进行比较分析。

2.如权利要求1所述的不同提取方法的普洱茶GC指纹图谱试验方法，其特征在于，GC检测条件为：

进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；不分流进样；进样量：1μl；柱流量：1.52ml/min；总流量：50.0ml/min；吹扫流量：3.0ml/min；载气：高纯氮；毛细管柱：ZB-multiResidue-2，30.0m×0.25μm×0.2mm；配制ECD和FID，助燃气H2：35ml/min；空气：160ml/min；载气N2：35ml/min；

程序升温：柱起始温度50℃，保持1分钟；以3℃/min升到80℃，保持2分钟；再以5℃/min升到130℃，保持3分钟；再以3℃/min升到150℃，保持3分钟；然后再以3℃/min升到180℃，保持2分钟；最后以8℃/min升到250℃，保持12分钟；总运行时间：75分钟。