CN103998040A - 炔基取代的喹唑啉化合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供诸如式(I)化合物的被炔基取代的喹唑啉化合物，其为不可逆ErbB激酶抑制剂。所述化合物适用于治疗涉及ErbB激酶活性的疾病和病症，诸如过度增殖病症(例如癌症)。

Description

炔基取代的喹唑啉化合物及其使用方法

相关申请的交叉引用

本申请主张2011年3月4日申请的美国临时专利申请第61／449,088号及2012年3月2日申请的国际专利申请PCT／US2012／027614号的优先权，其公开内容以引用的方式全部并入本文中。

技术领域

本发明涉及作为I型受体蛋白激酶不可逆抑制剂的含有炔基部分的新型喹唑啉衍生物。该抑制剂适用于治疗哺乳动物与异常蛋白激酶活性相关的病症(诸如癌症和炎症)。本发明还涉及含有所述抑制剂的药物组合物和该抑制剂和其药学可接受盐的制备方法。

背景技术

I型受体酪氨酸激酶家族由四个紧密相关的受体组成：ErbB1(EFGR或HER1)、ErbB2(HER2)、ErbB3(HER)和ErbB4(HER4)。该受体为含有用于配体结合的胞外域和(除HER3外)胞内催化活性酪氨酸激酶域的跨膜糖蛋白。该受体通过信号转导级联经过细胞溶质传输细胞外信号至细胞核。细胞外信号通过配体结合于二聚受体(除高亲和力可溶配体仍有待确定的erbB2外)而传输。在配体结合之后，I型受体酪氨酸激酶与受体亚族的另一成员均二聚或异二聚(Lemmon MA，Experiment.Cell Res.(2009)，315：638-648)。ErbB2通过异二聚参与此过程且为异二聚优选搭配物(Brennan PJ等人，Oncogene(2000)，19：6093)。二聚导致ErbB受体因胞内域的自身磷酸化而活化。该自身磷酸化募集衔接蛋白且导致在细胞各处传输信号的磷酸化级联。I型受体酪氨酸激酶家族(ErbB家族)通过ras／raf／MEK／MAPK路径以及PI3K／Akt路径传导信号。该信号传导路径通过抑制细胞凋亡而导致细胞增殖和细胞存活。

ErbB家族受体在癌症中起重要作用(Burgess AW，GrowthFactors(2008)，26：263-74)。头颈部和肺部的鳞状癌表现高含量的EGFR。另外，已在神经胶质瘤、乳癌和肺癌中发现组成性活性EGFR(Salomon等人，Critical Rev.Oncol.Hematol.(1995)，19：183-232；Klapper等人，Adv.Cancer Res.(2000)，77：25-79；及Hynes和Stern，Biochimica BiophysicaActa(1994)，1198：165-184)。ErbB2过度表达存在于所有乳癌的约30％中(Milanezi等人，Expert Rev.Mo.Diagnosis.(2008)，8(4)，417-34)。ErbB2也与其他人类癌症(包括结肠、卵巢、膀胱、胃、食道、肺、子宫和前列腺)有关联。ErbB2过度表达与人类癌症的不良预后(包括转移和早期复发)有关(Baselga J和Swain SM，Nature Rev.Cancer(2009)，9：463-75)。

I型酪氨酸激酶受体家族已成为抗癌研究的一个活跃领域(O′Donovan和Crown，Anticancer Res.(2007)27(3A)：1285-94)。EGFR和ErbB2信号传导路径的数种抑制剂已在癌症治疗中展示临床功效。近来在美国抗ErbB2单克隆抗体的人类化型式赫赛汀(Herceptin)和两种抗EGFR单克隆抗体帕尼单抗(panitumumab)和西妥昔单抗(cetuximab)被批准用于乳癌、结肠直肠癌和头颈癌。吉非替尼(Gefitinib)()和埃罗替尼(erlotinib)()为推出用于治疗某些实体癌症(包括肺癌)的小分子EGFR抑制剂。此外，在2007年EGFR和ErbB2的双重抑制剂拉帕替尼(lapatinib)经FDA批准用于治疗转移性乳癌。靶向中断I型酪氨酸激酶受体信号传导路径的许多其他抗体和小分子处于临床和临床前开发阶段(Zhang等人，J.Clin.Investigation(2007)，117：2051-2058)，包括ErbB1、ErbB2的一些不可逆双重抑制剂(Minkovsky N，Berezov A.Curr.Opin.Investig.Drugs.(2008)；9：1336-46；Bose P，Ozer H.Expert Opin.Investig.Drugs.(2009)；18：1735-51)。

一个显著未满足的医学需求为原发性脑肿瘤，尤其多形性成胶质细胞瘤(GBM)的新型疗法。大多数GBM脑肿瘤具有促成疾病的EGFR突变EGFRvIII。然而，当前可用的EGFR小分子抑制剂(埃罗替尼和吉非替尼)和抗体(西妥昔单抗和帕尼单抗)因其穿过血脑屏障(blood-brain-barrier)(BBB)的效率低而在脑中具有有限暴露(Broniscer等人，Clin.Cancer Res.(2007)：1511；Lassman等人，Clin.Cancer Res.2005：7841)。因此，其不能用于治疗GBM。

在癌症患者中，尤其肺癌、乳癌和黑色素瘤，转移至脑的发生率渐增。脑被视为‘庇护处’，由于血液-肿瘤屏障限制药物进入并杀死肿瘤细胞的能力(Steeg，PS等人，Nat.Rev.Cancer(2011)11：352)。自肺癌发生的脑转移占所有脑转移的40-50％，且在该肺癌脑转移中将近一半具有EGFR突变(Eichler，AF等人，NeuroOncology(2010)，12：1193)。同样，虽然赫赛汀的使用已显著改良了HER2阳性乳癌患者的结果，但许多该乳癌患者在以赫赛汀治疗时显现脑转移(http：／／www.cityofhope.org／eHope，11(2)2012年2月21日；Heitz，F等人，Ann.Oncol.(2011)22：1571；Bendell，J.等人，Cancer(2003)97：2972)。

新型癌症疗法仍有持续的需要，特别是能够治疗脑肿瘤的化合物有显著医疗空白。

发明内容

本发明提供式(I)的被炔基取代的4-苯胺基喹唑啉或本文中详述的任何变体及其药学可接受盐和前药，其适用于治疗过度增殖疾病(诸如癌症)。具体地，本发明涉及式(I)化合物或本文中详述的任何变体，其充当EGFR和ErbB2抑制剂。还提供含有式(I)化合物的调配物和在治疗有需要的个体时使用所述化合物的方法。此外，描述制备抑制性式(I)化合物的方法。

在一个方面，提供式(I)化合物：

或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：

W为N或C-CN；

R^A为被取代的芳基或被取代的杂芳基；

R^B和R^C各自独立地为H、C₁-C₃烷基或C₃-C₆环烷基，其中该C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基各任选地被1至3个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代；或R^B和R^C与其所连接的氮原子一起形成4至7元杂环基，其任选地被至多3个独立地选自卤素、氧代、-OR¹、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；

R^D为含有1至3个选自“O”、“N”、“S”、“S(O)”或“S(O)₂”的杂环原子的杂环基，其中该杂环基任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；和

R¹、R²和R³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基。

在一些实施方案中，化合物为式(I)结构，或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中W为N，R^A为3-氯-4-氟苯基，R^B和R^C各自为甲基，且R^D为四氢呋喃基、3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基或3-氧杂二环[3.1.0]己-1-基。在具体变体中，R^D为3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基。

在另一方面，提供治疗有需要个体的过度增殖病症的方法，其包含给该个体施用有效量的式(I)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。在一些实施方案中，过度增殖病症为脑肿瘤，诸如原发性脑肿瘤(例如神经胶质瘤和GBM)或转移性脑肿瘤(例如乳癌或肺癌之脑转移)。

本发明还提供式(I)化合物或本文中所描述的任何变体的药学可接受盐、药学可接受前药和药学活性代谢物。还描述了制造式(I)化合物的方法。

还提供药物组合物，其包含诸如式(I)化合物的本文中详述的化合物或其药学可接受前药、药学活性代谢物或药学可接受盐，和药学可接受载体或赋形剂。还提供如本文中详述的化合物或其药学可接受盐用于制造供治疗癌症用的药物。提供包含本文中详述化合物的试剂盒，其任选地包括使用本文中详述方法(例如用于治疗过度增殖病症(包括脑肿瘤))的说明书。

应了解本文中所描述的各个实施方案中的一个、一些或全部特征可组合以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对本领域技术人员而言将变得显而易见。

附图说明

图1展示化合物KU113对Balb／c裸小鼠中NCI-N87异种移植物的抗癌效果。也称为“NT113”的化合物KU113之结构在实施例4中描述。

图2展示化合物KU113与埃罗替尼和阿法替尼(afatinib)相比较对裸小鼠中H1975异种移植物的抗癌效果。

图3展示化合物KU113采用脑浓度的大鼠药物动力学数据。

图4展示阿法替尼(KU041)的大鼠药物动力学数据。脑浓度低于检测极限。

具体实施方式

本发明提供作为EGFR和HER2激酶抑制剂且能够穿过血脑屏障的化合物。本文中所提供的化合物和组合物在脑中持久暴露可帮助罹患脑癌的患者，所述患者当前具有有限的有效疗法选项。

定义

除明确地另外定义以外，贯穿本说明书对术语使用以下定义。

本文中所用术语“烷基”是指具有一至十二个碳原子的饱和直链或支链烃，其中烷基可独立地被一或更多个如下所描述的取代基取代。烷基的实例包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、第二丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基等。优选的烷基具有1至8个碳原子(“C₁-C₈烷基”)。更优选的烷基具有1至4个碳原子(“C₁-C₄烷基”)。

术语“烯基”是指含有至少一个双键的具有二至十二个碳原子的直链或支链烃基，诸如乙烯基、丙烯基等，其中烯基可任选地独立地被一或更多个本文中所描述的取代基取代，且包括具有“顺式”和“反式”取向或者“E”和“Z”取向的基团。优选的烯基为具有2至6个碳原子的烯基(“C₂-C₆烯基”)。

术语“炔基”是指含有至少一个三键的具有二至十二个碳原子的直链或支链烃基。实例包括乙炔基、丙炔基等，其中炔基可任选地独立地被一或更多个本文中所描述的取代基取代。优选的炔基为具有2至6个碳原子的炔基(“C₂-C₆炔基”)。

术语“环烷基”是指具有三至十二个碳原子的饱和或部分不饱和环烃基，其中环烷基可任选地独立地被一或更多个本文中所描述的取代基取代。“环烷基”进一步包括螺环、双环和三环环烷基结构，其中双环和三环结构可包括与饱和或部分不饱和环烷基或杂环烷基环或芳基或杂芳基环稠合的饱和或部分不饱和环烷基。螺部分也包括在此定义的范畴之内。优选的环烷基为具有3至8个碳原子的环烷基(“C₃-C₈环烷基”)。更优选的环烷基为具有3至6个碳原子的环烷基(“C₃-C₆环烷基”)。环烷基的实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、降莰基等。

术语“杂烷基”是指具有一至十二个碳原子的饱和或部分不饱和直链或支链烃基，其中碳原子中的至少一个被选自N、O或S的杂原子置换，且其中该基团可为碳基团或杂原子基团(即杂原子可能出现于基团中间或末端)。杂原子可被氧化，诸如S(O)和S(O)₂。杂烷基可任选地独立地被一或更多个本文中所描述的取代基取代。术语“杂烷基”涵盖烷氧基和杂烷氧基。

术语“杂环基”是指具有3至14个环原子的饱和或部分不饱和环状基团，其中至少一个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，其余环原子为碳，其中一或更多个环原子可任选地独立地被一或更多个本文中所描述的取代基取代。该基团可为碳基团或杂原子基团。“杂环基”也包括杂环基团与芳环或杂芳环稠合的基团。“杂环基”可为单环、双环、多环。螺部分也包括在此定义之范畴之内。“杂环基”的实例包括(但不限于)吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢哌喃基、吗啉基、硫代吗啉基、同哌嗪基、邻苯二甲酰亚胺基、3-氧杂二环[3.1.0]己基(例如3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基和3-氧杂二环[3.1.0]己-1-基)及其衍生物。

术语“芳基”是指具有单个环(例如苯基)、多个环(例如联苯)或多个缩合环(其中至少一个为芳族者)(例如1，2，3，4四氢萘基、萘基)的芳族碳环基，其任选地被例如卤素、低碳烷基、低碳烷氧基、三氟甲基、芳基、杂芳基和羟基单取代、二取代或三取代。

“杂芳基”是指具有5至10个环原子的单环芳族基或多环芳族基，其含有一或更多个选自氮、氧或硫的环杂原子，其余环原子为碳。芳族基任选地独立地被一或更多个本文中所描述的取代基取代。实例包括(但不限于)呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基、咪唑基、吡嗪基、吲哚基、噻吩-2-基、喹啉基、苯并哌喃基、噻唑基及其衍生物。杂芳基的其他非限制性实例包括[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶基、咪唑并[1，2-a]吡啶基和吲唑基。

术语“卤基”表示氟基、氯基、溴基或碘基。同样地，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘取代基。

术语“被取代”是指一部分之一或更多个氢原子被单价或二价基团置换。“任选地被取代”表明该部分可被取代或未被取代。不具有术语“任选地被取代”和“被取代”的部分意指未被取代的部分(例如除非指定为被取代的苯基或任选地被取代的苯基，否则“苯基”意指未被取代的苯基)。

如本文中所用，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”为了表示至少缓解至少部分受一或更多种ErbB家族酪氨酸激酶和/或丝氨酸、苏氨酸激酶的活性影响的哺乳动物(诸如人类)的疾病病况，且包括(但不限于)防止哺乳动物中出现该疾病病况，尤其当发现哺乳动物倾向于具有该疾病病况但尚未诊断为患有其时；调节和/或抑制该疾病病况；和/或减轻该疾病病况。

如本文中所用，“延迟疾病的发生”意谓推迟(defer)、阻碍、减缓、阻滞(retard)、稳定和/或推迟(postpone)疾病(诸如癌症)的发生。此延迟可依疾病的病史和/或所治疗的个体而改变时间的长度。如对本领域技术人员显而易见的，充分或显著延迟实际上可涵盖预防，其中个体未发生疾病。例如，晚期癌症(诸如转移的发生)可能延迟。

“药学可接受载体”是指医药调配物中除活性成分外对个体无毒的成分。药学可接受载体包括(但不限于)缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。

如本文中所用，“连同”是指除另一治疗模式之外还实施一个治疗模式。因此，“连同”是指在对个体执行另一治疗模式之前、期间或之后实施一个治疗模式。

除非另外明确指定，否则本文中所用的术语“个体”是指哺乳动物，包括(但不限于)牛、马、猫、兔、犬、啮齿动物或灵长类动物(例如人类)。在一些实施方案中，个体为人类。在一些实施方案中，个体为非人类灵长类动物，诸如黑猩猩及其他猿和猴物种。在一些实施方案中，个体为家畜，诸如牛、马、绵羊、山羊和猪；宠物，诸如兔、狗和猫；实验动物，包括啮齿动物，诸如大鼠、小鼠和天竺鼠；及其类似动物。本发明可用于人类医学和兽医学中。

除非文中另外明确指定，否则如本文和随附权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“该(the)”包括复数涵义。

应了解本文中所描述的本发明的方面和变体包括“由方面和变体组成”和/或“基本上由方面和变体组成”。

化合物

在一方面，提供式(I)化合物：

或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：

W为N或C-CN；

R^A为被取代的芳基或被取代的杂芳基；

R^B和R^C各自独立地为H、C₁-C₃烷基或C₃-C₆环烷基，其中该C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基各任选地被1至3个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代；或R^B和R^C与其所连接之氮原子一起形成4至7元杂环基，其任选地被至多3个独立地选自卤素、氧代、-OR¹、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；

R^D为含有1至3个选自“O”、“N”、“S”、“S(O)”或“S(O)₂”的杂环原子的杂环基，其中该杂环基任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；且

R¹、R²和R³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基。

在式(I)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物中，R^A为被取代的单环、双环或三环芳基或被取代的单环、双环或三环杂芳基。在一些实施方案中，R^A为被取代的单环、双环或三环芳基。在一些实施方案中，R^A为被取代的苯基。在一个变体中，R^A为被1至3个独立地选自氟基、氯基、溴基、乙炔基、苯磺酰基、任选地被取代的C₁-C₃烷基(例如甲基)和-OR⁴之取代基取代之苯基；其中R⁴为任选地被取代的C₁-C₃烷基(例如被取代的甲基)或任选地被取代的杂芳基。在一个变体中，R^A为被1至3个独立地选自氟基、氯基、溴基、乙炔基和甲基的取代基取代的苯基。

在一个变体中，R^A为选自以下组的被取代的苯基：

在一个特定变体中，R^A为

在另一变体中，R^A为选自以下组的被取代的苯基：

在另一变体中，R^A为选自以下组的被取代的苯：

在另一变体中，R^A为选自以下组的被取代的苯基：

在另一变体中，R^A为选自以下组的被取代的苯基：

在一些实施方案中，R^A为被取代的单环、双环或三环杂芳基。在一个变体中，R^A为选自以下组的被取代的杂芳基：

应了解且在本文中明确传达，本文中所描述的R^A的每一个变体可与本文中所描述的其他变量(例如R^B、R^C、R^D和W)的每一个变体组合，在适当时，就如同每一个组合被独立地列出一般。

在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地为H、C₁-C₃烷基或C₃-C₆环烷基，其中该C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基各任选地被至多三个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代。在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地为H、C₁-C₃烷基或C₃-C₆环烷基。在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地为C₁-C₃烷基。在一个特定实施方案中，R^B和R^C各自为甲基。在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地为H或任选地被1至3个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代的C₁-C₃烷基。在这些实施方案的一些中，R¹为H。在这些实施方案的一些中，R¹为C₁-C₃烷基(例如甲基)。

在一些实施方案中，R^B和R^C与其所连接之氮原子一起形成4至7元杂环基，其任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OR¹、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代，其中R¹、R²和R³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基。

在一些实施方案中，W为N。在一些实施方案中，W为C-CN。

在一些实施方案中，R^D为含有1至3个选自“O”、“N”、“S”、“S(O)”或“S(O)₂”的杂环原子的4至10元杂环基，其中该杂环基任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代，其中R¹、R²和R³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^D为含有1个环杂原子(例如氧)的5或6元杂环基，其任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代。在一个变体中，R^D为单环杂环基，诸如四氢呋喃基(例如四氢呋喃-3-基)。在一个变体中，R^D为双环杂环基，诸如3-氧杂二环[3.1.0]己基(例如3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基和3-氧杂二环[3.1.0]己-1-基)。

应了解且在本文中明确传达，本文中所描述的R^D的每一个变体可与本文中所描述的其他变量(例如R^A、R^B、R^C和W)的每一个变体组合，在适当时，就如同每一个组合被独立地列出一般。例如，在一个变体中，提供式(I)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中W为N，R^A为3-氯-4-氟苯基，R^B和R^C各自为甲基，且R^D为四氢呋喃-3-基、3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基或3-氧杂二环[3.1.0]己-1-基。在具体变体中，R^D为3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基。

在一些实施方案中，化合物为式(I)结构或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中W为N或C-CN基团；R^A为被取代的单环、双环或三环芳基或杂芳基部分；R^B和R^C各自独立地选自H、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基，其中以上烷基和环烷基各任选地被至多三个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代；或R^B和R^C与其所连接之原子一起可形成4至7元杂环基环，其任选地被至多3个独立地选自卤素、氧代、-OR¹、-NR²R³、C_1-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；R^D为含有1至3个选自“O”、“N”、“S”、“S(O)”或“S(O)₂”的杂环原子的单环或双环或螺环4至10元杂环基，然而杂环任选地被至多3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；且R¹、R²和R³独立地选自H和C₁-C₃烷基。

在一个优选的实施方案中，W为N。

在另一优选的实施方案中，R^B和R^C独立地为CH₃。

式(I)中的R^A的优选实例包括(但不限于)：

在一些实施方案中，提供选自以下组的化合物：

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(四氢呋喃-3-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((S)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((R)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1R，5S，6s)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-6-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1R，5S)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺和

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1S，5R)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺；

及其盐、溶剂化物和生理学功能衍生物。

本文中所提供的化合物可具有一或更多个不对称中心，且这样的化合物可作为个别立体异构体(例如(R)对映异构体或(S)对映异构体或非对映异构体)或作为其混合物而制得。除非另外指明，否则本说明书和权利要求书中的特定化合物的描述或命名意欲包括个别对映异构体及其混合物(外消旋或其他形式)。因此，本发明还包括式(I)化合物或本文中详述的任何变体的外消旋体和拆分的对映异构体，和非对映异构体。测定立体化学和分离立体异构体的方法为本技术领域中所熟知的。参见“March′s Advanced Organic Chemistry”，第6版，M.B.Smith和J.March，John Wiley and Sons，New York，(2007)的第4章中的论述，该文献以引用的方式并入本文中。

本发明还包括经同位素标记的式(I)化合物或本文中详述的任何变体。同位素标记的化合物与本发明化合物除了一或更多个原子被相同元素的同位素置换的部分之外其他都相同。可并入本发明化合物中的例示性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氯的同位素，诸如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵O、¹⁷O、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl。某些同位素标记的化合物(例如³H和¹⁴C)适用于化合物或底物组织分布研究。某些较重同位素(例如²H)可提供某些由可能较大的代谢稳定性产生的治疗优势。

本发明还包含式(I)化合物或本文中详述的任何变体的溶剂化物、药学可接受前药、药学活性代谢物和药学可接受盐。

术语“溶剂化物”是指分子与一或更多个溶剂分子的聚集物，诸如水合物、醇化物(与醇的聚集物或加合物)及其类似物。

本文中所用的术语“生理学功能衍生物”是指本发明的式I化合物的任何生理学上可接受衍生物(例如酯)，其在施用给哺乳动物(例如人类)时能够形成(直接或间接)式I化合物或其活性代谢物。

生理学功能衍生物还包括本发明化合物的前药。该前药可活体内代谢为本发明化合物。该前药本身可能具活性或可能不具活性且也为本发明目标之一。

“药学可接受前药”为可在生理条件下或通过溶剂分解转化为指定化合物或转化为该化合物的药学可接受盐的化合物。

“药学活性代谢物”为通过指定化合物或其盐在体内代谢而产生的药理学活性产物。化合物的代谢物可使用本技术领域中已知的常规技术加以鉴别且其活性可使用诸如本文中所描述的试验进行测定。

化合物的前药和活性代谢物可使用本技术领域中已知的常规技术加以鉴别。前药的多种形式为本技术领域中已知的。关于该前药衍生物的实例，参见(例如)a)由H.Bundgaard编辑的Design of Prodrugs(Elsevier，1985)和由K.Widder等人编辑的Methods in Enzymology，第42卷，309-396页(Academic Press，1985)；b)由A.Wood编辑的“Recent Advances in Oral Prodrug Discovery”，A.Cho inAnnual Reports in Medicinal Chemistry，第27章(Academic Press，2006)，41：395；c)由V.J.Stella等人编辑的Prodrugs：Challenges and Rewards，第1部分和第2部分(Springer，2007)。

“药学可接受盐”为保留指定化合物的游离酸和碱的生物有效性且在生物学上或其他方面均无不合需要之处的盐。本发明化合物可具有足够的酸性官能团、足够的碱性官能团或两种官能团，且因此与许多无机或有机碱和无机和有机酸中任一反应而形成药学可接受盐。药学可接受盐的实例包括通过本发明化合物与无机或有机酸或无机碱反应而制备的盐，该盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、单氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、羟乙酸盐、酒石酸盐、甲烷磺酸盐、丙烷磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、乙酸盐和杏仁酸盐。

如果本发明化合物为碱，则期望的药学可接受盐可通过此项技术中可用的任何适合方法来制备，例如用无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其类似无机酸)或用有机酸(诸如乙酸、顺丁烯二酸、丁二酸、杏仁酸、反丁烯二酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、哌喃糖酸(诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙烷磺酸)等有机酸处理游离碱。

如果本发明化合物为酸，则期望的药学可接受盐可通过任何适合方法来制备，例如用无机或有机碱(诸如胺(一级、二级或三级)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物或其类似碱)处理游离酸。适合盐的说明性实例包括(但不限于)自氨基酸(诸如甘氨酸和精氨酸)、氨、(一级、二级和三级)胺和环胺(诸如哌啶、吗啉和哌嗪)衍生的有机盐；和自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂衍生的无机盐。

还提供本文中所涉及化合物的盐，诸如药学可接受盐。本发明还包括所述化合物的任何或所有立体化学形式，包括任何对映异构或非对映异构形式和任何互变异构体或其他形式。

本发明化合物也可以多种多形形式存在，例如呈非晶和结晶多形形式。本发明化合物的所有多形形式包括在本发明的范畴之内且为本发明的另一方面。

如本文中详述的化合物在一方面可呈纯化形式，并且在本文中详述了包含呈纯化形式的化合物的组合物。提供包含本文中详述的化合物或其盐的组合物，诸如基本上纯的化合物的组合物。在一些实施方案中，含有本文中详述的化合物或其盐的组合物呈基本上纯的形式。除非另作说明，否则“基本上纯”意指含有不超过35％杂质的组合物，其中杂质表示除了占组合物大部分的化合物或其盐的化合物。在一些实施方案中，提供基本上纯的化合物或其盐的组合物，其中组合物含有不超过25％、20％、15％、10％或5％的杂质。在一些实施方案中，提供基本上纯的化合物或其盐的组合物，其中所述组合物含有不超过3％、2％、1％或0.5％的杂质。

一般合成方法

本发明化合物可使用易于利用的起始物质采用本技术领域中可用的技术使用如本文中所描述的反应路径和合成方案来制备。例如，式(I)化合物或其药学可接受盐可通过任何已知适用于制备化学相关化合物的方法来制备。适合方法包括例如在以下文献中说明的方法：WO2007/054550；Cha，M.Y.；Lee，K.-O.等人，J.Med.Chem.(2009)，52：6880-6888；和Tsou，H.-R.，Overbeek-Klumpers，E.G.等人，J.Med.Chem.(2005)，48：1107-1131。提供该方法(当用于制备式(I)化合物时)作为本发明的另一特征。必需起始物质可通过合成有机化学的标准程序获得。连同以下代表性方法和在随附实施例内描述该起始物质的制备。或者，必需起始物质可通过与所说明类似的程序获得，其在有机化学家的一般技能范围之内。

以下合成方案仅为代表性实例且不以任何方式限制本发明。

方案1

如方案1中所示，式IIa化合物(参见Rewcastle，G.W.等人，J.Med.Chem.(1996)，39：918-928。)与胺R^ANH₂之间的芳族亲核取代提供式IIb化合物。式IIc苯胺可通过用铁粉和乙酸在乙醇水溶液中还原硝基来获得。或者，在酸中的氯化锡(II)或铂/碳可用于还原。随后在钯催化剂(诸如Pd(dppf)Cl₂或Pd(PPh₃)₄)、碘化铜(I)和烷基胺(诸如三乙胺或丁胺)存在下在无水非质子性溶剂(诸如THF或DMF)中进行式IId的炔与式IIc化合物之间的Sonagoshira反应，得到式IIe化合物。用常见酰胺形成方法进行二乙基亚磷羧基乙酸与式IIe化合物的偶联，诸如碳化二咪唑(CDI)与1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(EDC)。所得式IIf化合物可进一步与适当2-氨基乙醛反应，得到最终式I化合物。(Dppf为1，1′-双(二苯膦基)二茂铁，即钯的双膦配体。)

在另一种可能中，方案2说明一种制备式IId的炔的通用方法。

方案2

用氧化剂(诸如PDC或PCC)或斯文氧化(Swern Oxidation)将式IIIa的一级醇氧化为式IIIb的醛。醛IIIb至式IId的炔的进一步转化可通过与重氮化合物IIIc反应而实现(参见Ohira，S.Synth.Commun.(1989)，19：561-564；和S.Mueller，S.；Liepold，B.；Roth，G.J.；Bestmann，J.Synlett.(1996)，521-22)。

治疗方法

本文中所提供的化合物抑制ErbB家族受体酪氨酸激酶的活性。因此提供治疗由I型受体酪氨酸激酶所介导的疾病或医学病况的方法，其包含给有需要个体(例如哺乳动物)施用有效量的式(I)化合物或其药学可接受盐、溶剂化物或活体内可转化的前药。可根据本发明方法治疗的I型受体酪氨酸激酶介导的病况包括过度增殖病症，诸如头颈癌、肺癌、乳癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、血液癌(例如白血病和淋巴瘤)、食道癌、子宫癌或前列腺癌以及其他种类的过度增殖病症。在一些实施方案中，癌症为头颈癌、肺癌(例如NSCLC)、乳癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、食道癌、子宫癌或前列腺癌。在一些实施方案中，癌症为乳癌、胃癌或肺癌。在一些实施方案中，使用本发明化合物可治疗埃罗替尼抗药性癌症，诸如埃罗替尼抗药性肺癌(例如抗埃罗替尼性非小细胞肺癌)。在一些实施方案中，个体已诊断为患有过度增殖病症(诸如本文中详述的癌症)。

在一方面，本文中所提供的化合物穿透脑血屏障且具有脑生物利用度。因此提供治疗有需要个体的脑肿瘤的方法，其包含给所述个体施用有效量的式(I)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。脑肿瘤可为原发性脑肿瘤，诸如神经胶质瘤(例如复发性恶性神经胶质瘤)、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤(GBM)和其他起源于脑或中枢神经系统的癌症。更常见类型的脑肿瘤为源于其他器官的转移性脑肿瘤(也称为病变或脑转移)。当人在原发性癌症下幸存时间段较长时，转移性病变有增加。提供治疗或预防转移性脑肿瘤的方法，其包含给个体施用有效量的式(I)化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。所述方法包括预防或延迟癌症(诸如肺癌、乳癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、食道癌、子宫癌和前列腺癌)的脑转移发展。在一些实施方案中，个体已诊断为患有脑肿瘤(诸如原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤)。

治疗有效量的本发明化合物可用于治疗通过调节(modulation)或调控(regulation)ErbB家族激酶而介导的疾病。“有效量”意指当施用给需要该治疗的哺乳动物时足以实现对由一或更多种ErbB家族激酶的活性所介导疾病治疗的化合物的量。因此，例如式(I)化合物或其盐、活性代谢物或前药的治疗有效量为足以调节、调控或抑制一或更多种ErbB家族激酶的活性以使得由该活性所介导的疾病病况得以减轻或缓解的量。在癌症或肿瘤情况下，有效量的药物可具有减少癌细胞数目、减小肿瘤大小、抑制(即在一定程度上减缓且优选阻止)癌细胞渗透至周边器官中、抑制(即在一定程度上减缓且较佳阻止)肿瘤转移、在一定程度上抑制肿瘤生长和/或在一定程度上减轻一或更多个与病症相关的症状的作用。有效剂量可以一或更多次施用来用药。出于本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量为足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。

将对应于该量的给定药物的量将根据各种因素(诸如具体化合物、疾病病况及其严重程度、需要治疗的哺乳动物的特性(例如体重))而变化，但仍然可由本领域技术人员按常规确定。

为了使用式(I)化合物或其药学可接受盐或活体内可裂解的前药来治疗性治疗(包括预防性治疗)哺乳动物(包括人类)，通常根据标准药物实践将其调配为药物组合物。根据本发明的此方面，提供包含式(I)化合物或其药学可接受盐或活体内可裂解的前药的药物组合物，如上文中所定义与药学可接受稀释剂或载体缔合。

单独地或以组合形式向哺乳动物施用本发明化合物以治疗过度增殖疾病，诸如各种类型的癌症，例如结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肺癌、子宫癌和前列腺癌。化合物可通过任何可接受的途径(例如静脉内、经口、肌肉内、通过栓剂等)施用。化合物可调配为口服剂型(例如片剂、胶囊、液体悬浮液等)，调配为栓剂，或可制备为例如注射用液体。熟练从业者可选择适当途径和剂量来治疗待治疗的特定过度增殖疾病。

式(I)化合物或本文中详述的任何变体宜与其他已知治疗剂组合使用。具有脑穿透性的本发明化合物可连同用于治疗并非源于脑部的癌症的治疗剂使用以治疗或预防癌症的脑转移。例如，式(I)化合物或本文中详述的任何变体(诸如实施例1至7的化合物(例如化合物KU113))或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物可与赫赛汀组合使用来治疗或预防乳癌的脑转移。

调配物

本发明组合物可呈适用于经口使用的形式(例如呈片剂、锭剂、胶囊、悬浮液、乳液、可分散性粉末或颗粒、糖浆或酏剂)、适用于局部使用的形式(例如呈乳膏、软膏、凝胶或水性或油性溶液或悬浮液)、适用于吸入的形式(例如呈细粉状粉末或液体气溶胶)、适用于吹入施用的形式(例如呈细粉状粉末)或适用于非经肠施用的形式(例如呈用于静脉内、皮下或肌肉内施用的无菌水性或油性溶液或呈用于经直肠施用的栓剂)。例如，意欲用于经口使用的组合物可含有一或更多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。

适用于片剂调配物的药学可接受赋形剂包括例如惰性稀释剂(诸如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙)、成粒剂和崩解剂(诸如玉米淀粉或褐藻酸)、粘合剂(诸如淀粉)、润滑剂(诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石)、防腐剂(诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)和抗氧化剂(诸如抗坏血酸)。片剂调配物可未包衣或包衣以改变其崩解和随后活性成分在胃肠道内的吸收，或改良其稳定性和/或外观，在任一情况下，使用在本技术领域中熟知的常规包衣剂和程序。

经口使用的组合物可呈活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合的硬明胶胶囊形式，或呈活性成分与水或油(诸如花生油或橄榄油)混合的软明胶胶囊形式。

水性悬浮液通常含有细粉状的活性成分和一或更多种悬浮剂(诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、褐藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶)、分散剂或湿润剂(诸如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七乙撑基氧基十六醇)，或环氧乙烷与自脂肪酸与己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与白脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯))。水性悬浮液也可含有一或更多种防腐剂(诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)、抗氧化剂(诸如抗坏血酸)、着色剂、调味剂和／或甜味剂(诸如蔗糖、糖精或阿斯巴甜(aspartame))。

油性悬浮液可由活性成分悬浮于植物油(诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(诸如液体石蜡)中调配。油性悬浮液也可含有增稠剂，诸如蜂蜡、固体石蜡或十六醇。可添加甜味剂(诸如上文所列的甜味剂)和调味剂以提供可口的口服制剂。该组合物可通过添加抗氧化剂(诸如抗坏血酸1防腐。

适于通过添加水来制备水性悬浮液的可分散性粉末和颗粒通常含有活性成分和分散剂或润湿剂、悬浮剂和一或更多种防腐剂。适合分散剂或湿润剂和悬浮剂由以上已提及的试剂例示。也可存在其他赋形剂，诸如甜味剂、调味剂和着色剂。

本发明药物组合物也可呈水包油型乳液形式。油相可为植物油(诸如橄榄油或花生油)或矿物油(诸如液体石蜡)或任何其混合物。适合乳化剂可为例如天然存在的胶(诸如阿拉伯胶或黄蓍胶)、天然存在的磷脂(诸如大豆、卵磷脂)、自脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的酯或偏酯(例如脱水山梨糖醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物(诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。乳液也可含有甜味剂、调味剂和防腐剂。

糖浆和酏剂可用甜味剂(诸如，甘油、丙二醇、山梨糖醇、阿斯巴甜糖或蔗糖)调配，且也可含有缓和剂、防腐剂、调味剂和／或着色剂。

药物组合物也可呈无菌可注射水性或油性悬浮液的形式，其可根据已知程序使用上述适当分散剂或湿润剂和悬浮剂中之一或更多种来调配。无菌可注射制剂也可为于无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如于1，3-丁二醇中的溶液。

栓剂调配物可通过将活性成分与适当非刺激性赋形剂混合而制备，该赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体且因此将在直肠中融化以释放药物。适当赋形剂包括例如可可脂和聚乙二醇。

局部调配物(诸如乳膏、软膏、凝胶和水性或油性溶液或悬浮液)通常可通过使用本技术领域中熟知的常规程序将活性成分与常规局部可接受的载剂或稀释剂调配来获得。

用于吹入施用的组合物可呈含有平均直径为例如30μm或小得多的粒子的细粉状粉末形式，所述粉末自身仅包含活性成分或经一或更多种诸如乳糖的生理学上可接受载体稀释。随后宜将用于吹入的散剂保留于含有例如1至50mg活性成分的胶囊中，以涡轮吸入器装置使用该胶囊，该装置用于诸如已知药物色甘酸钠的吹入。

用于吸入施用的组合物可呈常规加压气溶胶形式，其经配置以分配活性成分为含有细粉状固体或液体小滴的气溶胶。可使用常规气溶胶推进剂(诸如挥发性氟化烃或烃)，且宜配置气溶胶装置以分配定量的活性成分。

与一或更多种赋形剂组合以产生单一剂型的本发明化合物的量将必须根据所治疗主体和特定施用途径而变化。例如，用于向人类经口施用的调配物可含有例如0.5mg至5g活性剂，其与可在总组合物的约5％至98％重量之间变化的适当且适宜量的赋形剂混配。剂量单位形式通常将含有约1mg至约500mg的活性成分。对于关于施用途径和施用方案的其他信息，请参见：Ansel′sPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Loyd V.Allen，HowardC.Ansel，Nicholas G.Popovich，Lippincott Williams&Wilkins，2004。

出于治疗性或预防性目的，式I化合物的剂量大小当然应根据已知的医学原理，视病况的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及施用途径而变。

实施例

实施例A

合成中间体A和中间体B

方案3

7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物A.1)：将2-氨基-4-溴苯甲酸(15.5g)溶解于100mL甲酰胺中且在190℃下加热溶液10小时。在冷却反应物至室温之后，通过过滤收集固体，以水冲洗且干燥，得到10.5g7-溴-4-喹唑啉酮，LCMS ESI(+)m／z：225／227(M+1)。

7-溴-6-硝基喹唑啉-4(3H)-酮(化合物A.2)：在100℃下加热7-溴-4-喹唑啉酮(2.6g)在5mL浓H₂SO₄和5mL发烟HNO₃中的溶液1小时。在冷却反应物至室温之后，将混合物倾入冰水中。通过过滤收集固体，且无需进一步纯化即可使用，7-溴-6-硝基-4-喹唑啉酮(与7-溴-8-硝基-4-喹唑啉酮混合，LCMS ESI(+)m／z：270／271(M+1))。

4-氯-7-溴-6-硝基喹唑啉(中间体A)：在100℃下加热7-溴-6-硝基-4-喹唑啉酮(2.8g)在50mL SOCl₂和1mL DMF中的悬浮液直至形成均质溶液。在减压下浓缩反应物，提供呈黄色固体状的中间体A4-氯-7-溴-6-硝基喹唑啉(3.0g，91％，与4-氯-7-溴-8-硝基喹唑啉混合)，LCMS ESI(+)m／z：270／271(M+1，在LCMS操作期间水解回化合物A.2)。

N-(3-氯-4-氟苯基)-7-溴-6-硝基喹唑啉-4-胺(化合物A.3)：在75℃下加热中间体A(2.88g，10mmol)和3-氯-4-氟苯胺(1.45g，10mmol)在50mL异丙醇中的混合物4小时。冷却混合物至室温且通过过滤收集固体，以冷乙醇冲洗。再结晶固体，提供纯N-(3-氯-4-氟苯基)-7-溴-6-硝基喹唑啉-4-胺(2.03g，52％)。LCMSESI(+)m／z：397／399／401(M+1，Br和Cl的同位素效应)。

7-溴-N4-(3-氯-4-氟苯基)喹唑啉-4，6-二胺(中间体B)：相继添加冰醋酸(3mL)和还原铁(328mg，5.87mmol)至A.3(588mg，1.47mmol)在EtOH：H₂O(90mL，2：1(v／v))中的搅拌溶液中。回流混合物1小时且冷却至室温。添加5M NaOH以调节pH值至7-8，以EtOAc(100mL)稀释，剧烈搅拌30分钟，且经硅藻土过滤。用温EtOAc(2×100mL)洗涤黑色滤饼且浓缩滤液。将残余物稀释于H₂O(100mL)中，用MeOH：DCM(2×100mL，1：9(v／v))萃取，用盐水(100mL)洗涤有机层，经MgSO₄干燥，且浓缩为黄绿色残余物，即中间体B(1.21g，高纯度)。LCMS ESI(+)m／z：367／369／371(M+1，Br和Cl的同位素效应)。

实施例1

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(四氢呋喃-3-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

方案1A

3-乙炔基-四氢呋喃(化合物1.1)：在室温下向四氢呋喃-3-甲醛(白市售50％水溶液萃取，2.5g，25mmol)、K₂CO₃(5g)和MeOH(30mL)的搅拌溶液中添加Ohira Bestmann试剂(5.0g，26mmoB(参考文献：Ohira，S.Synth.Commun.1989，19，561-4；和S.Muller，S.；Liepold，B.；Roth，G.J.；Bestmann，J.Synlett1996，521-22)。在2小时之后，以戊烷／乙醚(1：1，100mL)稀释溶液且用H₂O(50mL，两次)和饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤。保持浴温度在15℃以下，真空浓缩干燥萃取物(MgSO₄)至约5mL体积。化合物1.1的该粗产物溶液用于下一步骤。

N4-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-(四氢呋喃-3-基)乙炔基)喹唑啉-4，6-二胺(化合物1.2)：向化合物1.1的粗产物溶液添加CuI(0.38g，0.20mmol)、Pd(dppf)Cl₂(70mg，0.10mmol)、中间体B(367mg，1.0mmol)、DMF(3mL)和三乙胺(3mL)。密封反应物且在70℃下加热14小时。随后以乙酸乙酯(40mL)稀释反应物，通过二氧化硅塞(约25g)过滤，以乙酸乙酯(50mL)冲洗。用H₂O(50mL，2X)和饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤滤液，用MgSO₄干燥，过滤且浓缩。通过采用二氯甲烷中的0-5％的甲醇的柱层析来纯化残余物，得到呈淡黄色固体状的期望产物1.2(358mg，94％)。LCMS(ESI)m／z＝383(M+1)。

(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(四氢呋喃-3-基)乙炔基)喹唑啉-6-基氨甲酰基)甲基膦酸二乙酯(化合物1.3)：在40℃下搅拌在THF(5mL)中的1，1-羰基二咪唑(CDI，155mg，0.96mmol)和二乙基亚磷羧基乙酸(188mg，0.96mmol)30分钟。添加1.2(344mg，0.90mmol)在THF(3mL)中的溶液且在45℃下搅拌混合物整夜。将反应混合物稀释于EtOAc(100mL)中，用饱和NaHCO₃(50mL)、H₂O(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经MgSO₄干燥，且浓缩。在乙醚(20mL)中超声处理灰色固体，过滤且在真空中干燥。所得灰白色产物1.3无需进一步纯化即可使用。LCMS(ESI)m／z=561(M+1)。

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(四氢呋喃-3-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺(实施例1)：在室温下相继添加氯化锂单水合物(105mg，1.28mmol)和KOH(45％wt，0.5mL)至1.3(358mg，0.64mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中。在5分钟之后，添加二甲氨基乙醛-亚硫酸氢盐加合物(214mg，1.28mmol)在H₂O(2mL)中的溶液，搅拌2小时。添加水(5mL)至反应物中。在15分钟之后，通过过滤收集固体，并以水冲洗且干燥，提供呈白色固体状的实施例1(246mg，78％)。¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ9.16(s，1H)，8.66(s，1H)，8.25(s，1H)，7.98(dd，1H)，7.94(s，1H)，7.72(s，1H)，7.56(m，1H)，7.17(t，1H)，7.08(dt，1H)，6.24(d，1H)，4.10(m，2H)，3.97(m，2H)，3.41(m，1H)，3.21(d，2H)，2.44(m，1H)，2.35(s，6H)，2.23(m，1H)。MS(ESI)m／z=494(M+1)。

实施例2

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((S)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

方案2A

(S)-四氢呋哺-2-甲醛(化合物2.1)：在0℃下向((S)-四氢呋喃-2-基)甲醇(1.02g，10mmol)和分子筛4A活性粉末(5g)在DCM(40mL)中的溶液中添加PCC(2.58g，12mmol)。在0℃下搅拌反应物2小时。向搅拌的反应混合物中添加乙醚／戊烷(1：1，100mL)。随后经硅藻土(10g)过滤混合物，以乙醚冲洗。浓缩残余物(水浴温度<15℃)至约2mL体积。

(S)-2-乙炔基-四氢呋喃(化合物2.2)：用与制备化合物1.1相同的程序使用(S)-四氢呋喃-2-甲醛(化合物2.1)代替四氢呋喃-3-甲醛来制备粗化合物2.2。

N4-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-((S)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-4,6-二胺(化合物2.3)：用与制备化合物1.2相同的程序，使用(S)-2-乙炔基-四氢呋喃(化合物2.2)代替(S)-2-乙炔基-四氢呋哺(化合物1.1)来制备化合物2.3。MS(ESI)m／z=383(M+1)。

(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((S)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基氨甲酰基)甲基膦酸二乙酯(化合物2.4)：用与制备化合物1.3相同的程序使用化合物2.3代替化合物1.2来制备化合物2.4。MS(ESI)m／z=562(M+1)。

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((S)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺(实施例2)：用与制备实施例1相同的程序使用化合物2.4代替1.3来制备实施例2。¹HNMR(CD₃OD，300MHz)δ8.78(s，1H)，8.55(s，1H)，8.03(s，1H)，7.82(s，1H)，7.76(m，1H)，7.28(m，1H)，7.01(m，1H)，6.5(m，1H)，4.68(m，1H)，4.01(m，1H)，3.92(m，1H)，3.09(m，1H)，2.98(s，1H)，2.47(s，6H)，2.20(m，2H)，2.06(m，2H)。MS(ESI)m／z=494(M+1)。

实施例3

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((R)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

用与制备实施例2相同的程序在开始合成时使用(R)-四氢呋喃-2-甲醇代替(S)-四氢呋喃-2-甲醇来制备实施例3。¹HNMR(CD₃OD，300MHz)δ8.78(s，1H)，8.55(s，1H)，8.03(s，1H)，7.82(s，1H)，7.76(m，1H)，7.28(m，1H)，7.01(m，1H)，6.5(m，1H)，4.68(m，1H)，4.01(m，1H)，3.92(m，1H)，3.09(m，1H)，2.98(s，1H)，2.47(s，6H)，2.20(m，2H)，2.06(m，2H)。MS(ESI)m／z=494(M+1)。

实施例4

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1R,5S,6s)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-6-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

用与制备实施例2相同的程序在开始合成时使用(3-氧杂-二环[3.1.0]己-6-基)甲醇(制备的参考文献：US2008／249087)代替(S)-四氢呋喃-2-甲醇来制备实施例4。¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ9.10(s，1H)，8.69(s，1H)，8.24(s，1H)，8.00(m，1H)，7.91(s，1H)，7.87(s，1H)，7.56(m，1H)，7.15(m，3H)，6.23(d，1H)，4.05(d，1H)，3.81(d，1H)，3.23(d，1H)，2.36(s，4H)，2.19(d，1H)，1.65(s，6H)。MS(ESI)m／z=506(M+1)。

实施例5

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

方案5A

1-((苯甲氧基)甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-2-酮(化合物5.2)：以5等份向1-(羟甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-2-酮(化合物5.1，12.8g，100mmo1)(制备：Ostrowski，Tomasz等人，Bioorganic&Medicinal Chemistry，2006，14(10)，第3535-3542页)在THF(200mL)中的0℃溶液中添加氢化钠(60％于矿物油中，4.8g)。在10分钟之后，添加溴甲苯(20.5g，120mmol)。在环境温度下搅拌反应物12小时，随后冷却至0℃。添加饱和NH₄Cl水溶液(50mL)至反应物中，且将混合物分配于乙醚(300mL)与水(50mL)之间。用盐水(50mL)萃取有机层，经MgSO₄干燥，过滤且真空浓缩。通过柱层析以0-30％乙酸乙酯／己烷洗脱来纯化残余物，得到呈无色液体状的产物5.2(20.1g，92％)。MS(ESI)m／z=219(M+1)。

1-((苯甲氧基)甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己烷(化合物5.3)：该制备的参考文献：Sakai，N.等人，Synthesis，2008第3533-3536页。向化合物5.2(10.9g，50mmol)、溴化铟(InBr3，0.35g)在氯仿(200mL)中的溶液中添加三乙基硅烷(23.2g，200mmol)。在65℃下加热反应混合物16小时。冷却反应混合物至室温，且浓缩。随后通过柱层析以0-20％乙酸乙酯／己烷洗脱来纯化残余物，得到呈无色液体状的产物5.3(8.9g，87％)。MS(ESI)m／z=205(M+1)。

(3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)甲醇(化合物5.4)：以氢气冲洗化合物5.3(4.1g，20mmol)和Pd-C(5％，500mg)在甲醇中的混合物，然后在氢气球下搅拌4小时。经硅藻土过滤反应混合物，以乙醚冲洗，且小心地浓缩(挥发性产物)，得到期望产物5.4，其无需进一步纯化即可使用。

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺(实施例5)：用与制备实施例2相同的程序使用(3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)甲醇(化合物5.4)代替(S)-四氢呋哺-2-甲醇来制备实施例5。¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)δ9.96(s，1H)，9.86(s，1H)，8.68(s，1H)，8.57(s，1H)，8.13(dd，1H)，7.99(m，2H)，7.43(t，1H)，6.80(tt，1H)，6.41(d，1H)，3.89(d，1H)，3.76(s，2H)，3.70(d，1H)，3.09(d，1H)，2.19(s，6H)，1.21(m，4H)，0.95(m，1H)。MS(ESI)m／z=506(M+1)。

实施例6

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1R,5S)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

用与制备实施例5相同的程序使用(1R)-1-(羟甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-2-酮(制备：Moon，H.R.等人，Nucleosides，Nucleotides and Nucleic Acids(2007)，26：975-978)代替1-(羟甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-2-酮(化合物5.1)来制备实施例6。¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)δ9.96(s，1H)，9.86(s，1H)，8.68(s，1H)，8.57(s，1H)，8.13(dd，1H)，7.99(m，2H)，7.43(t，1H)，6.80(tt，1H)，6.41(d，1H)，3.89(d，1H)，3.76(s，2H)，3.70(d，1H)，3.09(d，1H)，2.19(s，6H)，1.21(m，4H)，0.95(m，1H)。MS(ESI)m/z=506(M+1)。

实施例7

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1S，5R)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺

用与制备实施例5相同的程序使用(1S)-1-(羟甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-2-酮(制备：Moon，H.R.等人，Nucleosides，Nucleotides and Nucleic Acids(2007)，26：975-978)代替1-(羟甲基)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-2-酮(化合物5.1)来制备实施例7。¹HNMR(CD₃OD，300MHz)δ8.85(s，1H)，8.53(s，1H)，8.05(s，1H)，7.80(s，1H)，7.75(m，1H)，7.25(m，1H)，7.0(m，2H)，6.60(d，1H)，6.40(d，1H)，3.95(d，1H)，3.86(m，1H)，3.58(m，2H)，3.21(m，2H)，2.34(s，6H)，1.20(m，1H)，1.1(m，1H)，0.95(m，1H)。LCMS(ESI)m/z=506(M+1)。

实施例8

EGFR的激酶分析

可使用时间分辨的Fret(TR-FRET)分析(激酶活性分析，来自InVitrogen)测定本发明化合物调节EGFR激酶活性的程度。分析采用EGFR激酶(PV3872，Invitrogen)、Tb-Py20抗体(PV3552，InVitrogen)和荧光素-聚GT(PV3610，InVitrogen)。

在黑色384孔板(可自Corning获得)中进行分析。将EGFR激酶以0.4μg/ml的浓度稀释于TR-FRET稀释缓冲液(PV3189，InVitrogen)中作为储备溶液，然后作2倍连续稀释。添加1mM ATP来启始反应，且在室温下培育反应物1小时。添加所制备的10μL Tb抗体(来自InVitrogen)+EDTA(来自InVitrogen)溶液至分析板的各孔且简单混合，并培育30分钟。通过使用M5微型板读取器来监测信号(Ex=332nm，Em=488nm和518nm)。在双重复孔中测试各化合物。使用无化合物的EGFR作为对照。使用星形孢菌素(Staurosporine)(可自Sigma获得)作为阳性对照化合物。以EGFR活性(无化合物的情况下)的百分比计算抑制率。实施例1至7中的各化合物在100nM下显示＞50％的抑制。

实施例9

ErbB2的激酶分析

类似于如上所述的ErbB2的激酶分析进行分析，除使用ErbB2激酶蛋白代替EGFR激酶蛋白以外。实施例1至7中的各化合物在100nM下显示＞50％的抑制。

实施例10

BT474的细胞增殖抑制分析

在含湿气的10％CO₂、90％空气培育箱中在37℃下在含有10％胎牛血清(FBS)的低葡萄糖DMEM(Life Technologies 12320-032)中培养人类乳癌BT474细胞。使用胰蛋白酶/EDTA收集细胞，使用血球计计数，且将细胞按10000个细胞/孔涂布于96孔清洁组织培养板中。在37℃下培育细胞24小时以使其粘着。培育96孔板中的一系列浓度的各化合物(范围介于30μM至0.16nM，5倍稀释)72小时。在三个重复孔中测试各浓度。在细胞增殖分析期间，在含有5％FBS、50μg/ml庆大霉素(gentamicin)和0.3％v/v DMSO的低葡萄糖DMEM中培养BT474细胞。通过抽吸移除培养基，并通过使用CCK-8细胞增殖试剂盒检测细胞活力。对实施例1至7中的各化合物所测得的IC₅₀值＜100nM。

实施例11

NCI-N87细胞的抗增殖分析

重复三次进行抗增殖分析。在96孔板中接种3000个细胞/孔的N87细胞，并在37℃下培育细胞24小时以使其粘着。在细胞增殖分析中，在含有0.3％v/vDMSO的全细胞培养基中培养N87细胞。添加一系列浓度的测试化合物(浓度范围：30μM至0.16nM，5倍稀释)至96孔板中。继续培育72小时。随后移除培养基，并通过如制造商提供的手册中所述使用CCK-8细胞增殖试剂盒来测量细胞活力。绘制分数生长抑制率的对数相对于药物浓度的对数的关系图，且根据所得线性回归曲线拟合内插IC₅₀值。对化合物NT113所测得的IC₅₀值为＜100nM。

实施例12

NCI-H1975细胞的抗增殖分析

重复三次进行抗增殖分析。在96孔板(培养基：RPMI1640，5％FBS，2mML-谷氨酰胺)中接种3000个细胞/孔的N1975细胞。在24小时之后，移除板中的培养基，接着添加于培养基中连续稀释的化合物至各孔。在3天之后，以CCK-8试剂盒处理细胞且在37℃下再培育4小时。在450nm下读取板。绘制分数生长抑制率的对数相对于药物浓度的对数的关系图，且根据所得线性回归曲线拟合内插IC₅₀值。对化合物NT113所测得的IC₅₀值为＜1000nM。

EGFR和ErbB2(HER2)激酶抑制和BT474、NCI-N87和NCI-H1975细胞增殖抑制的生物活性在表1中列出。

表1

符号：“++”表示在100nM下＞50％抑制，或IC₅₀值＜100nM；“+”表示在100nM下在20％至50％抑制之间，或IC₅₀值在100nM与1000nM之间。

实施例13

NCI-N87异种移植物小鼠模型的活体内功效

自ATCC(American Type Culture Collection)购得NCI-N87细胞系且在RPMI1640+10％FBS+1％P/S抗生素中培养。

6-8周大、18g±2g的雄性Balb/c裸小鼠(供货商：Shanghai SLAC LaboratoryAnimal Co.Ltd)用于实验。在使用之前使所购得的小鼠适应环境7天，且将其在40-70％湿度和12小时亮(8：00至20：00)、12小时暗的荧光灯光循环下在22-25℃下圈养。小鼠自由取用食物和水。以在0.1ml PBS中的5.0×10⁶个细胞将癌细胞(NCI-N87)皮下植入裸小鼠(右侧腹)中(50只小鼠)。当肿瘤大小达到200(150-200)mm³的体积时，将带有肿瘤的裸小鼠随机分组(10只小鼠/组)，一组充当载剂组，一组施用二甲苯磺酸拉帕替尼单水合物(80mg/kg，拉帕替尼的游离碱，非盐，p.o.bid)。另两组施用NT113(也称为KU113)(分别为15mg/kg和30mg/kg，p.o.q.d)。施用时间持续4周。

每日两次监测小鼠的外观和行为以及发病和/或死亡的迹象。每周两次测量肿瘤体积，并在整个研究期间紧靠在测量肿瘤体积之前测量体重。

在实验结束(施用化合物四周)时，通过在深度麻醉下颈椎脱臼来处死所有带有肿瘤的小鼠。切下肿瘤块，并称重。

每周两次使用卡尺在两个方向上测量肿瘤大小，且体积使用式：V=1/2×a×b²以mm³为单位表示，其中a和b分别为肿瘤的长和短直径。在实验结束时在收集之后称量肿瘤块。

V=1/2×a×b²(a、b分别为最大和最小直径)。

RTV(相对肿瘤体积)＝Vt/Vo

Vo为当最初施用测试物时的肿瘤体积

Vt为在施用测试物之后每测量日的肿瘤体积

T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％

TRTV：测试物处理组的RTV；CRTV：对照组的RTV

抑制率(％)=(对照组的平均肿瘤体积-测试物处理组的平均癌症体积)/对照组的平均肿瘤体积×100％

以不同剂量的KU113(15mg/kg，30mg/kg，po，qd)和拉帕替尼KUA-1(80mg/kg，p.o.，bid，7天/周)处理带有肿瘤的小鼠4周。在处理之后第7天时，RTVT/C KU113(15mg/kg，30mg/kg)组为＜30％，且肿瘤生长抑制率为＞70％，但在拉帕替尼组中RTV T/C为31％且肿瘤生长抑制率为69％。就肿瘤重量而论也观察到相同结果。在处理之后第28天时，处死所有带有肿瘤的小鼠，且收集所有肿瘤块以称重。

拉帕替尼(KUA-1，GlaxoSmithKline)，其为EGFR和ErbB2的小分子激酶抑制剂，在第28天(研究的最后一天)时导致92.9％的肿瘤抑制率。

30mg/kg、p.o.，qd、7天/周的KU113处理导致NCI-N87异种移植肿瘤模型的体重减轻。在KU113处理中，体重在以30mg/kg、p.o.，qd、7天/周施用之后第3天时开始降低，且继续降低直至在第11天时达到最大体重减轻。停止施用高剂量(30mg/kg)KU113且不再重新开始。体重在第28天时恢复正常。在无预定副作用的情况下继续15mg/kg、p.o.q.d施用组。参见图1。

如本文中所用，与术语“qd”或“q.d.”组合使用的术语“po”、“p.o.”或“PO”意谓口服施用、一天一次。

实施例14

NCI-H1975异种移植物小鼠模型的活体内功效

在RPMI1640+10％FBS+1％P/S抗生素中培养自ATCC购得的H1975细胞。自Shanghai Laboratory Animal Co.Ltd购得雌性6-8周大、18g±2g的Balb/c裸小鼠。在使用之前使所购得的小鼠适应环境7天，且将其在40-70％湿度和12小时亮(8：00至20：00)、12小时暗的荧光灯光循环下在22-25℃下圈养。

将调配物：埃罗替尼、阿法替尼(BIBW2992)和KU113溶解于2％DMA和98％(在去离子水中的40％HP-β-CD)中。

使癌细胞(H1975)扩增且以在1：1的PBS与基质胶(matrigel)中的5.0×10⁶个细胞(总体积为0.1ml/小鼠)植入裸小鼠(右侧腹)中。当肿瘤达到200(150-200)mm³的体积时，将源于H1975细胞的带有肿瘤的裸小鼠随机分配为数个组(10只小鼠/组)，组1充当载剂组；组2至5分别施用20mg/kg的阿法替尼(p.o.q.d.)、10mg/kg的化合物KU113(po，qd)、20mg/kg的化合物KU113(po，qd)和100mg/kg的埃罗替尼(游离碱，p.o.q.d.)。在4周之后处死动物。

每日两次监测小鼠的外观和行为以及发病和/或死亡的迹象。每周两次测量肿瘤体积，并在整个研究期间紧靠在测量肿瘤体积之前测量体重。

在实验结束(施用化合物四周)时，通过在深度麻醉下颈椎脱臼来处死所有带有肿瘤的小鼠。切下肿瘤块，并称重。

每周两次使用卡尺在两个方向上测量肿瘤大小，且体积使用式：V=1／2×a×b²以mm³为单位表示，其中a和b分别为肿瘤的长和短直径。在实验结束时在收集之后称量肿瘤块。

V=1／2×a×b²(a、b分别为最大和最小直径)。

RTV(相对肿瘤体积)＝Vt／Vo

Vo为当最初施用测试物时的肿瘤体积

Vt为在施用测试物之后每测量日的肿瘤体积

T／C(％)＝TRTV／CRTV×100％

TRTV：测试物处理组的RTV；CRTV：对照组的RTV

抑制率(％)=(对照组的平均肿瘤体积-测试物处理组的平均癌症体积)／对照组的平均肿瘤体积×100％

显著有效：T／C％<40％，P<0.05

非显著有效：T／C％>40％。

如图2中所示，此模型中的化合物KU113比埃罗替尼明显更有效；并且可比得上阿法替尼。

实施例15

颅内脑肿瘤异种移植研究

肿瘤细胞制备：

人类脑肿瘤异种移植的细胞源自在无胸腺小鼠中皮下生长繁殖的肿瘤或源自细胞培养物。为了自皮下肿瘤制备细胞以转移至颅内区室，将切下的侧边肿瘤置于培养皿中，其中将组织先用手术刀切碎，然后通过重复吸取来机械破坏以产生细胞聚集悬浮液。然后使细胞聚集悬浮液通过70μM尼龙筛孔过滤器以产生单细胞悬浮液。在4℃下以1000rpm离心细胞悬浮液10分钟，在适当体积的不含血清的培养基中再悬浮细胞团块之前吸出上清液以获得最终的工作浓度。为了制备确立细胞系以供颅内植入，通过胰蛋白酶化单层，或通过如上所指示收集神经球悬浮培养物、随后离心并再悬浮细胞来收集细胞。注入的细胞数目根据注射的神经解剖学位置变化。在幕上注射中，注射3μL不含血清的培养基(DMEM)中的3-5×10⁵个细胞，然而在脑干注射中，注射0.5μL中的5×10⁴个细胞。

肿瘤细胞植入：

通过用2％氯己定溶液喷洒全部表面来预备手术区域。在使用消毒剂之后，将以下用品置于手术区域中：

-维持小鼠体温的加热垫；

-两个小皮氏培养皿；一个含有3％过氧化氢，一个含有2％氯己定；

-无菌纱布和棉签；

-无菌一次性手术刀；和

-高压灭菌的吻合器。

在麻醉中：使用氯胺酮-甲苯噻嗪混合物。一旦使小鼠麻醉，则通过用一片浸入氯己定溶液中的无菌纱布擦拭若干次来预备头皮。在该程序期间应施用眼药膏以维持足够水分。使用无菌手术刀在顶枕骨上形成约1cm长的矢状切口。然后使用浸泡于3％过氧化氢溶液中的棉签清洁暴露的颅骨表面。前囟在此时应显而易见。在注射肿瘤细胞之前，使用无菌口径25的锋利针在前囟右边2mm和冠状缝前1mm处穿刺颅骨，从而产生供注射肿瘤细胞用的开口。用期望量的细胞悬浮液装载注射器，小心避免产生气泡。然后用酒精棉签清洁注射器外面以擦净外部，使其不含任何粘附细胞，着将帮助防止颅外肿瘤确立和生长。为了确保达到适当注射深度，使用手术刀切下P20微量分注器顶端的尖头3mm。这部分尖头可被套在注射器上并将有效限制注射深度，并且将另外确保注射器针的顶端距颅骨的底面3mm。垂直于颅骨并在先前产生的孔中放置注射器，并缓慢注射细胞悬浮液(应经1分钟时间注射3μL悬浮液)。当完成注射时，再保留针在原位一分钟，然后缓慢缩回：这些步骤将帮助减少肿瘤细胞回流。用3％过氧化氢清洁颅骨并使用无菌干燥棉签进行干燥。施用无菌骨蜡到孔。使用钳子，在颅骨上将头皮拉至一起并缝合封闭。为了最佳愈合，应用每侧头皮的真皮紧贴着彼此(底面紧贴着底面)缝合头皮。应使用氯己定溶液清洁缝合的头皮，然后通过皮下注射施用丁丙诺啡以减轻术后疼痛。术后监测全部小鼠直至其变得能走动并维持正常活动。一般而言，恢复时间为约30分钟。

药物施用和分析：

为了增加关于对疗法有肿瘤反应或无肿瘤反应的结论的统计可靠性，处理组包含至少8只动物。在基于文献的预定天数之后，通过口服管饲经口施用3剂测试化合物、一剂阿法替尼(20mg／kg)和一剂BCNU(20毫克／平方米)。也维持对照载剂组。对于存活分析，使用Kaplan-Meier估计器，由其得到存活曲线，并且测定中位存活值。使用对数秩检验比较存活曲线之间的差异。

实施例16

药物动力学研究

样品制备：将各测试物溶解于10％DMSO和90％(去离子水中的40％HP-β-CD)中，得到2mg／mL的浓度以用于静脉内和口服施用。

用LC-MS／MS由Analytical Sciences Division of the Testing Facility进行方法开发和血浆样品分析。对于分析内变异使用质量控制样品确认分析结果(在日变化之内)。>66％的质量控制样品的准确性在已知值的80-120％之间。

各组由3只雄性Sprauge Dawley大鼠(7-8周大，200-300g体重)组成。通过经侧部尾静脉单次快速静脉内注射或通过口服管饲来施用测试物。

麻醉之后在适当时间点使用混合气体(CO₂：O₂=7：3)通过后眼窝穿刺收集血液样品(约300μl)至含有EDTA-K3抗凝血剂的管中。10个时间点(组1-2)：施用前和施用后5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h和24h。

分析：在2-8℃下以约8000rpm离心PK血液样品6分钟，将所得血浆分离并冷冻储存在约-80℃下(分离之后，可在储存于-80℃冷冻机中之前先将血浆置于冰上)。用详细信息(诸如研究编号、动物编号、基质、收集时间点和收集日期)标记全部血浆样品。

将由研究负责人以FDA认证的药物动力学程序WinNonlinProfessional5.2版(Pharsight，USA)使用非区室模型分析模块计算包括曲线下面积(AUC_(0-t)和AUC_(0-∞))、消除半衰期(T_1／2)、最大血浆浓度(C_max)、达到最大血浆浓度的时间(T_max)、清除率(CL)和分布体积(V_z)的标准参数集。此外，将使用下式估算生物利用度：

$F=\frac{{\mathrm{AUC}}_{(0-\&infin;)\left(\mathrm{PO}\right)}\&times;{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{IV}}}{{\mathrm{AUC}}_{(0-\&infin;)\left(\mathrm{IV}\right)}\&times;{\mathrm{Dose}}_{\left(\mathrm{PO}\right)}}\&times;100\%$

缩写：

AUC_(0-t)    施用时至最后可测量浓度的曲线下面积

AUC_(0-∞)   基于最后观测的浓度，施用时外推至无限的曲线下面积

CL         总体清除率，CL=剂量／AUC

C_max       在T_max时出现的最大观测浓度

F          生物利用度

MRT(_0-∞)  自施用时至无限的平均滞留时间

T_max       最大观测浓度的时间

T_1／2       终点半衰期=ln(2)／λz

V_z         基于末期的分布体积

脑浓度：三只大鼠仅用于脑收集(2小时)。三只大鼠仅用于脑收集(4小时)。其余3只大鼠用于血浆收集(9个时间点)和脑收集(24小时)。

脑收集和组织处理：血液收集后，首先用约150mL pH7.4的冰冷0.1M磷酸盐缓冲盐水(PBS)对脑进行心内灌注。然后，在称量脑前移除硬膜。随后将脑剖为较小片，用约10mL PBS冲洗两次，然后在干冰上极速冷冻，且在分析之前在-80℃下储存。

在处理组织之前，解冻大鼠脑。为了制备分析标准物，将购得的冷冻大鼠脑(来自Pelfreez)类似地解冻，剖开，以PBS冲洗，并将100μL化合物A储备溶液(在乙腈中的500ng／mL和1、2、5、10和50μg／mL下)直接掺至组织中。化合物A施用和掺入的脑随后经历如下所述的相同处理程序。

简言之，在均质化前添加2mL水到各脑。均质化脑2至3次，各约15秒。在各样品之后，在水、70％乙醇和乙酸乙酯中清洗均质器的机械探针。然后用乙酸乙酯萃取所得脑匀浆三次(总计14mL)，并离心以在各萃取之后分离水相和有机相。在40℃下在氮气流下蒸发每脑集中的有机相并用4mL流动相B复原残余物。4mL溶液中掺有化合物A的脑样品具有12.5、25、50、125、250、1250ng／mL的最终浓度。在60℃下培育复原的样品约15分钟并涡旋10分钟以完全溶解分析物。离心样品，然后在LC／MS／MS分析之前以流动相B(展示如下)进一步稀释。用1.5mL流动相B稀释20μL的复原样品。转移并注射上清液至LC／MS／MS系统用于分析。

化合物KU113(实施例4)采用脑浓度的大鼠药物动力学(PK)展示于图3中。

对化合物KU113所测得的大鼠PK参数：

注意：口服生物利用度的估计可由于口服数据在最后三个可观测的数据点的平坦性质而含有较大不确定性。作为比较，如果使用AUC_(0-t)替代AUC_(0-∞)，则计算的口服生物利用度变为80.5％。

对化合物KU113所测得的脑浓度：

虽然化合物KU113在口服施用的情况下显示良好口服生物利用度和脑穿透性，但结构上相似的化合物阿法替尼(bibw-2992)在预定时间点显示不良PK(图4)和没有可检测的脑浓度。脑／血浆浓度比<0.05(脑浓度<1ng／g)。

尽管已出于使理解清晰的目的通过说明和实施例较详细地描述了前述发明，但对本领域技术人员而言根据上述教示实施某些微小变更和修改是显而易见的。因此，描述和实施例不应视为限制本发明的范畴。

本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容是以引用的方式全部明确地并入。

Claims (36)

1.一种式(I)化合物：

或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中：

W为N或C-CN；

R^A为被取代的芳基或被取代的杂芳基；

R^B和R^C各自独立地为H、C₁-C₃烷基或C₃-C₆环烷基，其中所述C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基各任选地被1至3个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代；或R^B和R^C与其所连接的氮原子一起形成4至7元杂环基，其任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OR¹、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；

R^D为含有1至3个选自“O”、“N”、“S”、“S(O)”或“S(O)₂”的杂环原子的杂环基，其中所述杂环基任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代；和

R¹、R²和R³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基。

2.权利要求1所述化合物，其中W为N。

3.权利要求1或2所述化合物，其中R^A为被取代的芳基。

4.权利要求3所述化合物，其中R^A为被取代的苯基。

5.权利要求4所述化合物，其中R^A为选自以下组的被取代的苯基：

6.权利要求4所述化合物，其中R^A为3-氯-4-氟苯基。

7.权利要求1或2所述化合物，其中R^A为被取代的杂芳基。

8.权利要求7所述化合物，其中R^A为选自以下组的被取代的杂芳基

9.权利要求1至8中任一所述化合物，其中R^B和R^C各自独立地为H、C₁-C₃烷基或C₃-C₆环烷基。

10.权利要求9所述化合物，其中各R^B和R^C独立地为C₁-C₃烷基。

11.权利要求10所述化合物，其中R^B和R^C各自为甲基。

12.权利要求1至8中任一所述化合物，其中R^B和R^C各自独立地为H或任选地被1至3个独立地选自氧代、卤素和-OR¹的基团取代的C₁-C₃烷基。

13.权利要求1至8中任一所述化合物，其中R^B和R^C与其所连接的氮原子一起形成4至7元杂环基，其任选地被多至3个独立地选自卤素、氧代、-OR¹、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代。

14.权利要求1至13中任一所述化合物，其中R^D为含有1至3个选自“O”、“N”、“S”、“S(O)”或“S(O)₂”的杂环原子的4至10元杂环基，所述杂环基任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、-OCF₃、-OR¹、-CF₃、-NR²R³、C₁-C₃烷基和C₃-C₆环烷基的基团取代。

15.权利要求14所述化合物，其中R^D为含有一个环杂原子的5或6元杂环基。

16.权利要求15所述化合物，其中该一个环杂原子为氧。

17.权利要求14所述化合物，其中R^D为四氢呋喃-3-基、3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基或3-氧杂二环[3.1.0]己-1-基。

18.权利要求17所述化合物，其中R^D为3-氧杂二环[3.1.0]己-6-基。

19.权利要求1所述化合物，或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中所述化合物选自：

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(四氢呋喃-3-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((S)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((R)-四氢呋喃-2-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1R，5S，6s)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-6-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-(3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺、

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1R，5S)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺，和

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-((1S，5R)-3-氧杂-二环[3.1.0]己-1-基)乙炔基)喹唑啉-6-基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺。

20.权利要求1所述化合物，或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物，其中所述化合物具有下式：

21.一种药物组合物，其包含权利要求1至20中任一所述化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物；和药学可接受的载体。

22.一种用于治疗有需要个体中过度增殖病症的方法，其包括给所述个施用体有效量的权利要求1至20中任一所述化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。

23.权利要求22所述方法，其中所述过度增殖病症为头颈癌、肺癌、乳癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、食道癌、子宫癌或前列腺癌。

24.权利要求23所述方法，其中所述过度增殖病症为乳癌、胃癌或肺癌。

25.权利要求22所述方法，其中所述过度增殖病症为埃罗替尼抗药性癌症。

26.权利要求25所述方法，其中所述埃罗替尼抗药性癌症为埃罗替尼抗药性非小细胞肺癌。

27.一种对有需要的个体病人治疗脑肿瘤的方法，其包括给所述个体病人施用有效量的权利要求1至20中任一所述化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。

28.权利要求27所述方法，其中所述脑肿瘤为原发性脑肿瘤。

29.权利要求28所述方法，其中所述脑肿瘤为神经胶质瘤。

30.权利要求28所述方法，其中所述脑肿瘤为多形性胶质细胞瘤。

31.权利要求27所述方法，其中所述脑肿瘤为转移性脑肿瘤。

32.一种预防或延迟有需要个体病人中癌症的脑转移发展的方法，其包括给所述个体施用有效量的权利要求1至20中任一所述化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。

33.一种权利要求1至20中任一所述化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物在制造用以治疗过度增殖病症的药物中的用途。

34.一种试剂盒，其包含权利要求1至20中任一所述化合物或其盐、溶剂化物或生理学功能衍生物。

35.权利要求34所述试剂盒，其进一步包含用于治疗过度增殖病症的说明书。

36.权利要求35所述试剂盒，其中所述过度增殖病症为脑肿瘤。