CN103995074A - 原料乳中有机氯农药残留量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种快速检测原料乳中有机氯农药残留量的方法。该方法采用气相色谱法来测定样品中的有机氯农药，其中样品测定前须经过提取及净化等步骤。使用有机溶剂对原料乳中的有机氯农药进行提取，经净化、浓缩后气相色谱测定。经标准工作曲线计算出样品中各有机氯农药的残留量。本方法操作简单，对目标物干扰少，数据结果稳定，准确度高，系统重现性与适用性均达到要求。另外，本发明对气相色谱条件进行优化，能够同时检测多达19种有机氯农药的残留量，符合目前检测原料乳中有机氯农药残留量的要求。

Description

原料乳中有机氯农药残留量的检测方法

技术领域

本发明涉及农药残留量的检测方法，具体地说，涉及一种原料乳中有机氯农药残留量的检测方法。

背景技术

有机氯农药（OCPs）是一类广谱杀虫剂，由于其价格低廉且杀虫效率高，曾是世界各国用量最大的杀虫剂，我国上世纪50至80年代曾大量使用，但由于其化学性质稳定，半衰期长，并可通过生物链富集，可造成慢性中毒或致畸、致癌、致突变等。

目前，原料乳中有机氯农药的检测主要是依据GB/T5009.19-2008《食品中有机氯农药多组分残留量的测定》的规定来进行检测，然而实践发现，国标方法由于样品基质的不同，净化步骤复杂等各方面因素，在日常检测中仍存在诸多问题。国标中有机氯农药残留的检测方法除了操作繁琐外，采用层析柱净化方法并不适用于原料乳此类含大量蛋白、脂肪的样品，净化不当，多而大的杂质峰对检测结果干扰较明显。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作较简便，对检测目标物干扰少，数据结果稳定，检测精准度高的原料乳中有机氯农药残留量的检测方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种原料乳中有机氯农药残留量的检测方法，包括以下步骤：

1）样品前处理：称取10g原料乳样品（精确至0.001g），于50mL离心管中，加入有机溶剂20mL和2g氯化钠，混匀后超声提取；提取结束后，离心，收集上清有机相，净化有机相，然后浓缩定容即得样品待测溶液。所述有机溶剂为丙酮和正己烷按1:3体积比混合配制。

2）标准工作溶液的配制：分别准确量取19种有机氯农药标准储备液100μL于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀，再逐级稀释获得α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯的浓度分别为5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg、100μg/kg的混合标准工作溶液；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B的浓度分别为2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg的混合标准工作溶液；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹的浓度分别为1μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、10μg/kg、20μg/kg的混合标准工作溶液，备用。

3）基于外标法利用气相色谱仪检测样品待测溶液中的有机氯农药残留量：

a.将各浓度混合标准工作溶液在一定的气相色谱条件下进行检测，将得到的各有机氯农药的峰面积与相应的有机氯农药的浓度进行回归分析，得出各有机氯农药的标准工作曲线及其线性回归方程；

b.将样品待测溶液在上述气相色谱条件下进行检测，将得到的有机氯农药的峰面积与混合标准工作溶液的峰面积比较；

c.将得到的有机氯农药的峰面积代入相应种类的标准工作曲线的回归方程中，计算得到样品待测溶液中各有机氯农药的浓度，从而计算得出样品中各有机氯农药的残留量；

前述的检测方法，步骤1）中加入有机溶剂后，超声提取5min，超声频率为40KHz。

前述的检测方法，步骤1）中提取结束后，将提取液在8000r/min条件下离心5min。

前述的检测方法，步骤1）中向离心获得的上清有机相中加入200mg C18填料，涡轮振荡净化1min后，于4200r/min离心5min，收集上清液。

前述的检测方法，步骤1）中将净化后收集的上清液置于50℃下，氮气吹至近干，然后加入5mL色谱纯正己烷溶解，即得样品待测溶液。

前述的检测方法，配制五个浓度的混合标准工作液的具体方法如下：

A.移取0.1mL19种有机氯农药混合标准溶液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为1mg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为0.5mg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为0.2mg/L的混合标准储备液；

B.取10μL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为5μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为2.5μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为1μg/L的混合标准工作溶液；

C.取20μL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为10μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为5μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为2μg/L的混合标准工作溶液；

D.取40μL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为20μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为10μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为4μg/L的混合标准工作溶液；

E.取100μL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为50μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为25μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为10μg/L的混合标准工作溶液；

F.取200μL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为100μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为50μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为20μg/L的混合标准工作溶液。

前述的检测方法，步骤3）中采用的气相色谱条件为：色谱柱：DB-35MS UI石英毛细管柱，长30m，内径250μm，固定相：25%苯基-75%甲基聚硅氧烷，膜厚250μm；

（1）温度

进样口温度280℃，检测器温度350℃，程序升温如下：

初始温度：110℃；

初始时间：0.5min；

程序升温1：以15℃/min速率由110℃升至260℃；

程序升温2：以60℃/min速率由260℃升至300℃；

顶温时间：300℃保持3min；

总运行时间：14.167min；

（2）气流速率

载气：氮气，1mL/min；

尾吹气：氮气，29mL/min；

分流流量：60mL/min；

（3）进样模式：进样量1μL，不分流进样，进样后分流阀关闭0.75min；

（4）进样方式：采用手动进样。

本发明具有以下优点：

（一）本发明采用丙酮和正己烷提取原料乳中的有机氯农药，大大提高了有机氯农药的提取率，提高了检测的精准度。

（二）本发明的检测方法采用C18填料对原料乳提取液进行净化，操作简单，净化效果好。

（三）本发明的检测方法前处理时间短、成本低，符合大型乳制品加工厂的检测需求。

（四）本发明对气相色谱条件进行了优化，能够同时检测多达19种有机氯农药的残留量，符合目前国家对原料乳中有机氯农药残留的检测要求。

附图说明

图1为本发明实施例中原料乳中残留的有机氯农药的气相色谱图。

图2为本发明实施例50μg/L加标后，原料乳中残留的有机氯农药的气相色谱图。

图1和图2中：1-α-666、2-γ-666、3-β-666、4-七氯、5-δ-666、6-艾氏剂、7-氧氯丹、8-环氧七氯A、9-环氧七氯B、10-反-氯丹、11-顺-氯丹、12-α-硫丹、13-p,p'-DDE、14-狄试剂、15-o,p'-DDT、16-p,p'-DDD，17-β-硫丹、18-p,p'-DDT、19-硫丹硫酸酯。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例原料乳中有机氯农药残留量的检测方法

本实施例的检测方法涉及19种有机氯农药，分别为：α-666、γ-666、β-666、七氯、δ-666、艾氏剂、氧氯丹、环氧七氯A、环氧七氯B、反-氯丹、顺-氯丹、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯。

采用外标校准曲线法定量，具体包括如下步骤：

1、对照品混合标准工作溶液的配制：用正己烷作为稀释溶剂，配制含有待测19种有机氯农药的5个浓度的对照品混合标准工作溶液。

具体配制方法如下：

（1）混合标准储备液：移取0.1mL19种有机氯农药混合标准溶液于10mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度：α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为1mg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为0.5mg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹的浓度分别为0.2mg/L的混合标准储备液；

（2）混合标准工作溶液：

可参照上述配制方式，依次配制各农药标准品α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯浓度分别为5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B浓度分别为2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹的浓度分别为1μg/L、2μg/L、4μg/L、10μg/L、20μg/L的混合标准工作溶液。

2、样品提取：称取10g原料乳试样，精确至0.001g，于50mL离心管中，加入5mL丙酮和15mL正己烷的混合液作为提取溶剂，加入2g氯化钠，混合后超声提取5min。提取结束后，在8000r/min的条件下离心5min，取有机溶剂溶液15mL待净化。

3、样品的净化：将15mL待净化液置于装有200mg C18填料的50mL离心管中，涡轮震荡净化1min后，在4200r/min的条件下离心5min，取上清液10mL，置于40-60℃条件下吹氮气浓缩至近干，最后用5mL色谱纯正己烷溶解，制得样品待测溶液，用于气相色谱分析。

4、标准曲线的绘制：采用正己烷作为稀释溶剂，配制所使用的一系列混合标准工作溶液，绘制标准曲线，如检测器的相应呈线性，则可采用单一水平标准曲线。单一水平标准溶液的浓度应与待测农药浓度相近。

5、气相色谱分析：

气相色谱分析条件如下：

色谱柱：色谱柱：DB-35MS UI；

a）温度

进样口温度280℃，检测器温度350℃，程序升温如下：

——初始温度：110℃；

——初始时间：0.5min；

——程序升温1：以15℃/min速率由110℃升至260℃；

——程序升温2：以60℃/min速率由260℃升至300℃；

顶温时间：300℃保持3min；

总运行时间：14.167min。

b）气流速率

根据仪器操作手册及分析人员的经验设定气流速率，合适的气流速率如下：

——载气：氮气，1mL/min；

——尾吹气：氮气，29mL/min；

——分流流量：60mL/min；

c）进样模式：进样量1μL，不分流进样，进样后分流阀关闭0.75min；

d）进样方式：采用自动进样器或其它合适的进样装置进样。

采用外标法用气相色谱仪检测样品待测溶液中的有机氯农药残留量：

首先，将各浓度混合标准工作溶液在上述气相色谱条件下进行检测，将得到的有机氯农药的峰面积与相应有机氯农药的浓度进行回归分析，计算得出各种有机氯农药的标准工作曲线及其线性回归方程。（表1-表3）

表119种有机氯农药的气相色谱分析标准曲线方程

表219种有机氯农药的气相色谱分析标准曲线方程

表319种有机氯农药的气相色谱分析标准曲线方程

其次，将样品待测溶液在上述气相色谱条件下进行检测，将得到的有机氯农药的峰面积与混合标准工作溶液的峰面积进行比较，将得到的有机氯农药的峰面积代入相应种类的标准工作曲线的回归方程中，计算得到样品待测溶液中各种有机氯农药的浓度，从而计算得出样品中各有机氯农药的残留量。

以下对本发明检测方法的准确度进行考察：

三个加标水平α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯分别为10μg/L、20μg/L、50μg/L；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B分别为5μg/L、10μg/L、25μg/L；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹分别为2μg/L、4μg/L、10μg/L。每个水平的样品进行了6次测定，根据测定量和加标量计算各添加水平的回收率和精密度，结果见表4-表6。

表4检测方法的准确度考察结果

表5检测方法的准确度考察结果

表6检测方法的准确度考察结果

19种有机氯农药三个水平的回收率在80%-160%之间，变异系数为1%-10%，方法检出限为0.0155-0.0375μg/g，定量限范围为0.0465-0.1125μg/g，表明本方法的测定结果准确可靠。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.原料乳中有机氯农药残留量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）样品前处理：称取10g原料乳样品，于50mL离心管中，加入有机溶剂20mL和2g氯化钠，混匀后超声提取；提取结束后，离心，收集上清有机相，净化有机相，然后浓缩定容即得样品待测溶液；

2）标准工作溶液的配制：分别准确量取19种有机氯农药标准储备液100μL于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀，再逐级稀释获得α-666、γ-666、β-666、δ-666、艾氏剂、α-硫丹、p,p'-DDE、狄试剂、o,p'-DDT、p,p'-DDD、β-硫丹、p,p'-DDT和硫丹硫酸酯的浓度分别为5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg、100μg/kg的混合标准工作溶液；七氯、环氧七氯A和环氧七氯B的浓度分别为2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg的混合标准工作溶液；氧氯丹、反-氯丹和顺-氯丹的浓度分别为1μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、10μg/kg、20μg/kg的混合标准工作溶液，备用；

3）基于外标法利用气相色谱仪检测样品待测溶液中的有机氯农药残留量：

a.将各浓度混合标准工作溶液在一定的气相色谱条件下进行检测，将得到的各有机氯农药的峰面积与相应的有机氯农药的浓度进行回归分析，得出各有机氯农药的标准工作曲线及其线性回归方程；

b.将样品待测溶液在上述气相色谱条件下进行检测，将得到的有机氯农药的峰面积与混合标准工作溶液的峰面积比较；

c.将得到的有机氯农药的峰面积代入相应种类的标准工作曲线的回归方程中，计算得到样品待测溶液中各有机氯农药的浓度，从而计算得出样品中各有机氯农药的残留量；

步骤1）中所述有机溶剂为丙酮和正己烷按1:3体积比混合配制。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）中加入有机溶剂后，超声提取5min，超声频率为40KHz。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）中提取结束后，将提取液在8000r/min条件下离心5min。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）中向离心获得的上清有机相中加入200mg C18填料，涡轮振荡净化1min后，于4200r/min离心5min，收集上清液。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤1）中将净化后收集的上清液置于50℃下，氮气吹至近干，然后加入5mL色谱纯正己烷溶解，即得样品待测溶液。

6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤3）中采用的气相色谱条件为：色谱柱：DB-35MS UI石英毛细管柱，长30m，内径250μm，固定相：25%苯基-75%甲基聚硅氧烷，膜厚250μm；

（1）温度

进样口温度280℃，检测器温度350℃，程序升温如下：

初始温度：110℃；

初始时间：0.5min；

程序升温1：以15℃/min速率由110℃升至260℃；

程序升温2：以60℃/min速率由260℃升至300℃；

顶温时间：300℃保持3min；

总运行时间：14.167min；

（2）气流速率

载气：氮气，1mL/min；

尾吹气：氮气，29mL/min；

分流流量：60mL/min；

（3）进样模式：进样量1μL，不分流进样，进样后分流阀关闭0.75min；

（4）进样方式：采用手动进样。