CN101852699A

CN101852699A - 中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法

Info

Publication number: CN101852699A
Application number: CN200910068336A
Authority: CN
Inventors: 郭永泽; 刘磊; 张玉婷; 邵辉; 李辉; 宋淑荣; 程奕
Original assignee: Central Laboratory of Tianjin Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Central Laboratory of Tianjin Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2009-04-02
Filing date: 2009-04-02
Publication date: 2010-10-06

Abstract

本发明公开了一种中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法。它是准确称取处理过的中药材样品与硅藻土混合均匀，在萃取池底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部装入2-5g弗罗里硅土，混合好的样品进行加速溶剂萃取，在温度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力1500-2000psi条件下静态萃取5min，萃取2个循环，用相当于萃取池60-70％的溶剂冲洗萃取池，收集提取物浓缩至近干，吹氮至干，加有机溶剂溶解，定容待测。本发明检验流程短，操作方便，萃取效率高，重复性好，用的溶剂少，对操作人员和环境的污染少。回收率80-110％，方法灵敏度高，可以同时检测中药材中的18种农药残留量，具有很好的应用前景。

Description

中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法

技术领域

本发明属于中药材测定技术领域，涉及中药材样品中农药残留快速检测的方法。更具体的说，是利用加速溶剂萃取方法对中药材中的18种农药多残留的样品前处理的方法。

背景技术

中药材是人们用以防病、治病的特殊商品，首先应对人体无毒害作用。但是在中药材的种植过程中，往往会使用一些农药。中药产业是天津市优势产业之一。随着国际“回归自然热”的升温，中草药被很多国家和地区看好，中药在国际市场的影响逐渐增大。随之而来，很多中药进口国家的检测机构对于中药在种植、生产加工过程中产生的农药残留等有害物质控制也越来越严格。我国2005年修订颁布的新版《中华人民共和国药典》，对国内中药产品的无公害标准作出强制性规定，要求中药产品中农药残量等有毒有害物质不得超标。这一强制规定将有力促进我国中药出口水平的提高，促使更多的中药生产企业向国际市场进军。从近年来海关统计来看，出口中药材因有害残留物超标频遭扣留和退运，已经成为我国中药出口和中药发展的一只“拦路虎”，对中药的国际声誉产生了极大的负面影响，是制约中药走向世界的“瓶颈”之一。

目前，我国中药中农药残留的检测方法落后，发达国家经常采用先进的农药残留检测技术加强农药残留监测工作，所用检测技术如气相色谱与质谱联用技术，液相色谱与质谱联用技术，毛细管电泳与质谱联用，以及气相、液相色谱与多级质谱联用技术等，这些技术的应用大大提高了农药残留检测的定性能力和检测的灵敏度、检测限和检测覆盖范围。我国当前的中药农残分析方法研究仍以气相或液相色谱配不同的检测器为主，较少采用各种色质联用技术，研究仍然集中在个别品种中药中的某类农药的检测方法研究。这严重影响了检验工作的准确程度，在一定程度上也降低了我国检验机构的公正性与权威性。

在样品前处理方面，现代仪器分析样品制备技术的发展趋势就是使处理样品的过程要简单、处理速度快、使用装置要小、引进的误差要小、对欲测定组分的选择性和回收率要高。目前，国际上较多使用固相萃取(SPE)技术，其他微波提取技术、凝胶层析(GPC)、基质分散固相萃取(MSPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术等也用于多残留分析。而我国目前多数分析单位仍采用传统的溶剂萃取，液液分配，柱层析净化，前处理方法自动化程度低、提取净化的效率不高，速度慢，环境污染严重。

三.发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种自动化程度高，提取净化简便、速度快、无环境污染的处理方法。为达到上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法，包括如下的步骤：

(1)将待测中药材样品粉碎，过60-100目筛，60-80℃烘干，放于干燥器内存放；

(2)准确称取2.0g样品，加0.5-2g硅藻土混合均匀，在萃取池底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部装入2-5g弗罗里硅土，混合好的样品进行加速溶剂萃取；

(3)在温度80-100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力1500psi-2000psi条件下静态萃取5-10min，萃取2-4个循环；

(4)用相当于萃取池60％-70％的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s，收集提取物，浓缩至近干，吹氮至干，加有机溶剂溶解待净化；例如乙腈、正己烷或正己烷与丙酮混合液。优选为正己烷2ml，定容待测。

本发明所述的中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法，其步骤(1)中的将待测中药材样品粉碎，优选过60目筛，60℃烘干2-4小时备用。

本发明所述的中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法，其步骤(2)中所述硅藻土的加入量优选为0.5-1.5g。

本发明所述的中药材农药残留样品测定前处理方法，其步骤(3)中所述的萃取温度优选为100℃，萃取压力优选为1500psi，静态萃取时间优选为5min，优选萃取2个循环。

本发明所述的处理方法，其中步骤(4)中所述的有机溶剂为为乙腈、正己烷、丙酮的一种或两种的混合液。优选的有机溶剂为正己烷。

下面是本发明中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法在检测中药材农药残留方面的应用。特别是在检测中药材有机氯类18种农药残留样品完整的测定方法：

1.仪器与试剂

仪器：ASE200加速溶剂萃取仪(Dionex公司)；

VarianGC/MS/MS气质质联用仪，VF-5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；RE-47旋转蒸发器；SHB-111循环水式多用真空泵。

试剂：弗罗里硅土(分析纯)、乙腈(分析纯)、丙酮(分析纯和色谱纯)、正己烷(分析纯和色谱纯)。标准品：18种农药混合标准品，10mg/l

2.样品制备

1)前处理条件：

样品处理：中药材样品粉碎，过60目筛，60℃烘干，放于干燥器内存放。

加速溶剂萃取：准确称取2.0g样品，加1g硅藻土混合均匀，22ml萃取池在底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部装入4g弗罗里硅土，混合好的样品。然后进行加速溶剂萃取，在温度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力1500psi条件下静态萃取5min，萃取2个循环，用相当于萃取池60％的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加2ml正己烷定容待测。

2)仪器分析条件：

VarianGC/MS/MS仪器条件如下：

色谱条件：进样口温度：250℃；柱温：80℃，每分钟15℃升至150℃，再以每分钟3℃升至200℃，保持3分钟，每分钟15℃升至250℃，保持4分钟。载气：He；柱流量：1ml/min；进样方式：不分流；进样体积：1μL；

质谱条件：NCI：电子能量70ev；反应气：甲烷；离子源温度：200℃；传输线温度：250℃；Scan：20-350；SIM：35，37，71，215，217，245，249，251，278，281，282，283。

3)农药保留时间和特征离子

农药	保留时间(min)	NCI特征离子
农药	保留时间(min)	NCI特征离子	四氯硝基苯	9.609	215，217
六氯苯	12.227	35，282	四氯硝基苯	9.609	215，217
六氯苯	12.227	35，282	七氯	23.052	35，37
艾氏剂	27.703	35，37	七氯	23.052	35，37
艾氏剂	27.703	35，37	环氧七氯	28.140	35，37
狄氏剂	30.136	35，37	环氧七氯	28.140	35，37
狄氏剂	30.136	35，37	异狄氏剂	29.316	35，37
α-六六六	11.919	35，71	异狄氏剂	29.316	35，37
α-六六六	11.919	35，71	β-六六六	13.621	35，71
γ-六六六	13.327	35，71	β-六六六	13.621	35，71
γ-六六六	13.327	35，71	δ-六六六	17.884	35，71
五氯硝基苯	15.032	249，251	δ-六六六	17.884	35，71
五氯硝基苯	15.032	249，251	PCA	20.110	35，37，245
PCTA	25.683	279，281，283	PCA	20.110	35，37，245
PCTA	25.683	279，281，283	o，p’-DDT	30.155	35，37
p，p’-DDD	31.477	35，37	o，p’-DDT	30.155	35，37
p，p’-DDD	31.477	35，37	p，p’-DDT	34.432	35，37
p，p’-DDE	37.371	35，37	p，p’-DDT	34.432	35，37

本发明公开的中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法与现有技术公开的内容相比所具有的优点和特点在于：

现有的中药材中农药的提取方法通常有索氏提取、振荡提取和超声波提取等，他们共同的缺点是要消耗溶剂量大、时间长、效率低、不能全自动进行，并且对实验员身体有损伤、污染环境。本发明采用加速溶剂萃取在线净化技术测定有机氯类农药残留，使萃取和净化一步完成，检验流程短，操作方便，萃取效率高，重复性好，用的溶剂少，对操作人员和环境的污染少。回收率80-110％，方法灵敏度高，可以同时检测中药材中的18种农药残留量。

附图说明：

图1为标样总离子流图：

图2为添加总离子流图：

图3为空白总离子流图。

具体实施方式：

为了简单和清楚的目的，下文恰当的省略了公知技术的描述，以免那些不必要的细节影响对本技术方案的描述。以下结合检测实例对本发明做进一步的说明。其中的纤维素滤膜由仪器厂商提供的，PSA，C18均可以购买。

实施例1

(1)将甘草样品粉碎，过60目筛，60℃烘干，放于干燥器内存放；

(2)准确称取3份2.0g薏苡仁样品，其中一份添加18种农药混合标准品0.1ml，放置10分钟，然后将样品与1g硅藻土混合均匀，22ml萃取池在底部加入一片纤维素滤膜，然后从依次底部装入4g弗罗里硅土，混合好的样品进行加速溶剂萃取；

(3)在温度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力1500psi条件下静态萃取5min，萃取2个循环；

(4)用相当于萃取池60％的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加正己烷2ml，定容待测。

实施例2

(1)将金银花样品粉碎，过100目筛，80℃烘干，放于干燥器内存放；

(2)准确称取3份2.0g苍术样品，其中一份添加18种农药混合标准品0.1ml，放置10分钟，然后将样品与1g硅藻土混合均匀，22ml萃取池在底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部依次装入2g弗罗里硅土，混合好的样品进行加速溶剂萃取；

(3)在温度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力2000psi条件下静态萃取10min，萃取4个循环；

(4)用相当于萃取池70％的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加丙酮∶正己烷(1∶1，v/v)的混合液2ml，溶解待净化。

实施例3

1.加速溶剂萃取：准确称取3份2.0g人参样品，其中一份添加18种农药混合标准品0.1ml，放置10分钟，然后将样品与1.5g硅藻土混合均匀，11ml萃取池在底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部依次装入5g弗罗里硅土，混合好的样品。然后进行加速溶剂萃取，在温度80℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力2000psi静态萃取8min，萃取3个循环，用相当于萃取池70％的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加2ml乙腈定容待测。

将实施例1所得到的定容待测溶液经下述方法完成进一步的测定：

仪器分析条件：

VarianGC/MS/MS仪器条件如下：

质谱条件：NCI：电子能量70ev；反应气：甲烷；离子源温度：200℃；传输线温度：250℃；Scan：20-350；SIM：35，37，71，215，217，245，249，251，278，281，282，283

采用本发明实施例1方法获得的上清液经定容后测定的结果如下：

在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式。

Claims

1.中药材有机氯类农药残留样品测定前的处理方法，按如下的步骤进行：

(4)用相当于萃取池60％-70％的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s，收集提取物，浓缩至近干，吹氮至干，加有机溶剂定容待测。

2.如权利要求1所述的处理方法，其中步骤(3)中所述的萃取温度为100℃，萃取压力为1500psi，静态萃取时间为5min，萃取2个循环。

3.如权利要求1所述的处理方法，其中步骤(4)中所述的有机溶剂为乙腈、正己烷或正己烷与丙酮混合液。

4.权利要求1所述的处理方法在检测中药材有机氯类农药残留方面的应用。

5.权利要求1所述的处理方法在检测中药材有机氯类18种农药残留方面的应用。