CN110646529B - 一种基于uplc-qtof/ms检测芦根中化学成分的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种基于UPLC‑QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，包括如下步骤：(1)取芦根样品制成芦根粉末，精密称定，然后与溶剂混合，称定重量，超声破碎，摇匀，进行固液分离后得到待测样品；(2)用超高效液相色谱分离步骤(1)中的待测样品，然后用质谱检测，得成分物质峰，用分析软件对所述成分物质峰进行定性分析。本发明首次采用UPLC‑QTOF/MS技术对芦根中多种化学成分进行检测并定性，该方法具有高效、快速、准确的特点。本发明共鉴定出32种化学成分，为进一步研究芦根药效物质基础及全面质量控制提供了依据。

Description

一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法
技术领域
本发明涉及医药成分分析领域，具体涉及一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法。
背景技术
芦根为禾本科植物芦苇Phragmites communis Trin.新鲜或者干燥根茎，为一种常用中药，具有清热泻火、生津止渴、除烦、止呕、利尿之功效，常用于热病烦渴，肺热咳嗽，肺痈吐痰，胃热呕吐，热淋涩痛等症。目前报道从芦根中分离出多种类型化学成分，包括多糖类、黄酮类、蒽醌类、酚酸类、甾体类、生物碱、挥发性成分等(李洪,王麟,陈王莹,等.中药芦根化学成分、药理作用及临床应用研究[J].科技信息,2014,5:31-32.赵小霞,谭成玉,孟繁桐,等.芦苇化学成分及其生物活性研究进展[J].精细与专用化妆品,2013,21(1):20-22)，其中多糖类含量大，提取研究较多，药理研究表明芦根中多糖类成分具有很好的抗氧化及保肝作用(沈蔚,任晓婷,张建等.芦根多糖的提取及其抗氧化活性的研究[J].时珍国医国药,2010,21(5))。
芦根作为药典品种药材，目前研究多集中在多糖类成分，其他成分的研究尚处在初级阶段，其中的药效物质基础的研究还不够深入。由于有效成分不够明确，并且化学组分复杂，导致很难全面的评价芦根药材的内在质量。中国药典2015年版一部芦根药材项下，仅采用对照药材进行TLC鉴别。目前对于芦根药材的质量控制研究主要是以阿魏酸的高效液相含量测定和药材HPLC指纹图谱为主(如曾东等.高效液相色谱指纹图谱在中药芦根上的应用[J].分析化学,2004,32(8))。张国升等利用GC-TOF-MS技术鉴定了芦根中四种甾体的结构，其中有24-甲基胆甾醇、24-乙基胆甾醇、豆甾-1,23-二烯-3-醇、豆甾-1-烯-3-酮(张国升,李前荣,尹浩等.芦根中甾体的GC-TOFMS鉴定[J].安徽中医学院学报,2005,25(3))，但未对芦根主要含有的酚酸类及黄酮类成分进行研究。因此，对芦根的药效物质基础和质量控制开展进一步的研究显得尤为重要。
近年来，UPLC-QTOF/MS在天然产物化学成分的研究中已得到广泛应用，并且被逐渐应用于中药药效基础、药物质量控制，已经成为药理学研究中高效、可靠的分析方法(许玲玲,安睿,王新宏.液质联用技术在中药分析中的应用[J].中成药,2006,28(2):239-246)。例如陈永康等(陈永康,赵志刚,孙丽娟.液相色谱-飞行时间质谱法快速鉴定紫苏叶中的化学成分[J].医药导报,2013(3):371-374)采用了液相色谱-飞行时间质谱法快速鉴定中药紫苏叶中化学成分，为紫苏叶的开发与利用提供参考；另外，徐凤莲等人(徐凤莲,张启云,彭国梅,等.UHPLC-Q-TOF/MS分析黑顺片的化学成分[J].江西中医药,2015(2).)报道了采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对黑顺片中各成分进行分析和鉴定，初步鉴定出黑顺片中70种化学成分，较全面地解析了黑顺片的化学成分，丰富了对黑顺片中化学物质的认识，为黑顺片药效物质研究奠定基础；李晗芸等人利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术采集麻黄和其不同炮制品的复杂化学成分数据，通过对比分析，探究蜜炙、醋制、酒制、炒炭4种炮制过程中麻黄非挥发性化学成分的变化，该方法可为麻黄炮制的现代化研究提供物质基础，也可为临床区别用药提供借鉴(李晗芸,苏丹,部爱贤,等.UPLC-Q-TOF-MSE与镜像对比分析四种麻黄炮制过程的成分变化[J].质谱学报,2017,38(11):630-639)。
现有技术中，还没有针对UPLC-QTOF/MS技术对芦根中化学成分的检测方法的报道。由于芦根药效物质基础尚不明确，药材的质量控制手段主要有传统的生药学研究、以杨梅苷为对照的TLC法、HPLC指纹图谱、GC-MS法测定挥发油，含量测定方面多集中在几种黄酮类的测定(如期刊文献胥秀英,郑一敏,傅善权,等.高效液相色谱法测定芦根中金丝桃苷等3种有效成分的含量[J].时珍国医医药,2006,17(4):563-564和付庆荣,刘淑娟,王弘,等.RP-HPLC-UV法同时测定芦根中8个黄酮类化合物的含量[J].中国药学,2014,23(3):170-176)，这些技术手段和方法难以全面系统的表征化学成分轮廓特征和控制芦根药材的内在质量。经典的TLC法中存在大量的假阳性和假阴性问题，易导致实验结论的偏差；以HPLC为主的中药指纹图谱技术因中药材基原广泛、中药材受品种、产地、种植、采收、炮制等多种因素影响，难以控制，不同药材其指纹图谱有一定的差异，实验室条件、仪器设备的不同也会影响指纹图谱的重现性；GC-MS法更多的适用于含挥发性成分为主的中药材质量控制的应用。因此，建立一种能快速、高效、准确的测定芦根药材中主要化学成分的方法，实现对其物质群的全面控制，为芦根的质量评价提供科学试验依据，具有重要的意义。
发明内容
发明要解决的问题
为了解决现有技术中的上述问题，本发明的目的在于提供一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，所述方法具有快速、准确、批量检测的特点，所述方法将新的化学成分的研究和药效学实验相结合，进行中药谱效学研究，实现芦根药材质量与药效的统一，为芦根药材的全面质量控制提供依据。
用于解决问题的方案
在本发明的一个技术方案中，本发明提供了一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，包括如下步骤：
(1)取芦根样品制成芦根粉末，精密称定，然后与溶剂混合，称定重量，超声破碎，摇匀，进行固液分离后得到待测样品；
(2)用超高效液相色谱分离步骤(1)中的待测样品，然后用质谱检测，得成分物质峰，用分析软件对所述成分物质峰进行定性分析。
在一个实施方式中，步骤(1)中的溶剂为甲醇、乙醇、水、甲醇水溶液或乙醇水溶液，优选地，所述溶剂选自25％～75％甲醇水溶液、25％～75％乙醇水溶液或水，更优选地，所述溶剂为水。
在另一个实施方式中，步骤(1)中芦根粉末与溶剂的质量体积比为0.8-2g：10-70ml，优选地质量体积比为1g：20～30ml。
在另一个实施方式中，超声破碎的时间为15～60min，进一步优选20～40min；所述超声的功率为200～300W；所述超声的频率为30～50kHz。
在另一个实施方式中，所述固液分离步骤包括离心和过滤，所述离心的转速为11000～13000r/min，离心时间为5～20min，优选8～15min。
在另一个实施方式中，所述方法还包括以下步骤，将芦根超声破碎后，放冷，再称定重量，用步骤(1)中的溶剂补足减失的重量。
在另一个实施方式中，所述固液分离步骤包括过滤，所述过滤采用膜过滤，优选采用孔径为0.10～0.50μm的微孔滤膜。
在另一个实施方式中，步骤(2)中的超高效液相色谱的分离条件为，色谱柱选自Thermo Accucore C18、Waters ACQUITY UPLC HSS T3或Waters UPLC BEH色谱柱，优选色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3，柱温为20～40℃，洗脱系统流动相为：流动相A为体积浓度0.02～0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇溶液，流速为0.1～1ml/min，优选0.1～0.5ml/min。
在另一个实施方式中，洗脱程序为下表所述：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～5 98→91 2→9
5～8 91→84 9→16
8～9 84→82 16→18
9～14 82→75 18→25
14～18 75→55 25→45
18～20 55 45
。
在另一个实施方式中，步骤(2)中质谱检测的条件为：离子源为电喷雾离子源ESI、正、负离子模式检测，干燥气温度为200-400℃，流量为1-20L/min，雾化器压力为20-50psi。
在另一个实施方式中，所述步骤(2)的定性分析包括如下步骤：(a)从质谱总离子流图中提取出物质峰，得到精确的分子量；(b)根据化合物峰的一级质谱离子碎片信息搜索数据库，得到数据库中与筛选的物质相匹配的质谱碎片信息；(c)将加合离子类别、分子量误差、保留时间、相关文献和所述步骤(b)中得到的质谱碎裂信息结合分析，得到化合物的结构。
在另一个实施方式中，所述的分析软件为Agilent MassHunter QualitativeAnalysis software，如Agilent MassHunter Qualitative Analysis software B.07.00或Agilent MassHunter Qualitative Analysis software B.08.00。
在另一个技术方案中，本发明还提供了采用本发明前述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法用来鉴定芦根中32种化学成分的用途。
发明的效果
本发明提供了基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中多种化学成分的方法，针对芦根中多种化学成分的化学性质，筛选样品提取以及液相色谱、质谱的条件，实现了对芦根中多种化学成分进行快速分离与鉴定。本发明首次采用UPLC-QTOF/MS技术对芦根中多种化学成分进行检测并定性，该方法具有高效、快速、准确的特点。本发明共鉴定出32种化学成分，为进一步研究芦根药效物质基础及全面质量控制提供了依据。
附图说明
图1为实施例1中芦根药材的负离子模式下总离子流图。
图2为实施例1中m/z 163.0399提取离子流色谱图。
图3为实施例1中m/z 163.0399一级质谱图。
图4为实施例1中m/z 493.1574提取离子流色谱图。
图5为实施例1中m/z 493.1574一级质谱图。
具体实施方式
为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
除非另有定义，本发明所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域中的普通技术人员所通常理解的相同含义。
本说明书中，使用“数值A～数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
本说明书中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
应当理解，在本申请说明书和附加的权利要求书中用到的单数形式的冠词“一”(对应于英文“a”、“an”和“the”)包括复数的对象，除非文中另外明确地规定。
本说明书中，所提及的“一个或一些具体/优选的实施方式/方案”、“另一个或另一些具体/优选的实施方式/方案”、“一个或另一个实施方式/方案”、“一个或另一个技术方案”等是指所描述的与该实施方式有关的特定要素(例如，特征、结构、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方式中，并且可存在于其它实施方式中或者可不存在于其它实施方式中。另外，应理解，所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方式中。
本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“包括”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含一系列步骤或单元的过程、方法或系统、产品或设备没有限定于已列出的步骤或单元，而是可选地还包括没有列出的步骤或单元，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
本发明提供了一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，包括如下步骤：
(1)取芦根样品制成芦根粉末，精密称定，然后与溶剂混合，称定重量，超声破碎，摇匀，进行固液分离后得到待测样品；
(2)用超高效液相色谱分离步骤(1)中的待测样品，然后用质谱检测，得成分物质峰，用分析软件对所述成分物质峰进行定性分析。
在一个实施方式中，芦根样品可以为芦根药材、芦根饮片或芦根配方颗粒。优选地，将步骤(1)中的芦根样品制成粉末之前，先将其烘干，比如可以采用烘箱烘干，烘干的温度优选为50～70℃，更优选为50～60℃，最优选60℃；对烘干的时间没有特殊限制，优选烘干至恒重。
在一项或多项优选的实施方案中，烘干后的芦根样品用打粉机打成粉末。
在一项或多项优选的实施方案中，芦根粉末精密称定，置具塞锥形瓶中，然后与溶剂混合，所述溶剂为甲醇、水或甲醇水溶液，优选为选自25％～75％甲醇水溶液、25％～75％乙醇水溶液或水，更优选地，溶剂为30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、甲醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇或水，前述百分比为体积比，根据芦根的化学成分的溶解性，最优选地，所述溶剂为水，如蒸馏水、去离子水等。
在一项或多项优选的实施方案中，芦根粉末与溶剂的质量体积比为0.8-2g：10-70ml，优选地质量体积比为1g：20～30ml，更优选为1g：25ml以实现提取充分且满足检测的浓度要求。
在本发明中对超声的方法没有特别限制，采用本领域公知的超声手段即可。超声破碎的时间为15～60min，进一步优选20～40min，综合考虑检验周期和提取充分等因素，优选20min；所述超声的功率为200～300W；所述超声的频率为30～50kHz，更优选为40KHz。
在一项或多项优选的实施方案中，所述方法还包括以下步骤，将芦根超声破碎后，放冷，再称定重量，用步骤(1)中的溶剂补足减失的重量。比如用水进行补足。
本发明对固液分离的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的固液分离的技术方案即可。本发明中，所述固液分离优选采用离心和过滤的方法。所述离心的转速为11000～13000rpm，更优选为12000rpm。在本发明中，离心时间为5～20min，优选8～15min，更优选为10min。所述的过滤没有特定的限定，可以是本领域任何常规的过滤手段，优选为膜过滤，更有采用孔径为0.1～0.5μm的微孔滤膜，进一步优选为0.22μm的微孔滤膜。过滤之后取续滤液即为待测样品。
对于过滤得到的待测样品，本发明采用超高效液相色谱分离所述待测样品，将分离后的成分用质谱检测，得到成分物质峰。随后用软件对所述成分物质峰进行定性分析。本发明中所述物质峰或所述成分物质峰是质谱能够检测到的峰。
本发明考察了多种不同填料的色谱柱的分离效果，包括Thermo Accucore C18液相色谱柱的规格为2.1mm×100mm，2.2μm；Waters ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱的规格为2.1mm×100mm,1.8μm；Waters UPLC BEH液相色谱柱的规格为2.1mm×100mm,1.8μm等。本发明人发现Waters ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱(规格为2.1mm×100mm,1.8μm)对芦根化学成分的分离效果较好，保留时间适中，色谱柱对样品的测定结果影响较小，且具有良好的耐用性。超高液相色谱(UPLC)相对传统的HPLC分离效果更好，分析速度更快，非常适合多组分快速检测，本发明采用了UPLC法，检测周期相对HPLC缩短了三分之二左右，大大提高了研究检测的精度和效率。
在一项或多项优选的实施方案中，为了获得更好的分离效果，洗脱系统流动相为：流动相A为体积浓度0.02～0.1％甲酸水溶液，优选0.05％甲酸水溶液，流动相B为甲醇溶液。
在一项或多项优选的实施方案中洗脱程序为下表所述(流动相的百分数表示体积百分数)：
表1色谱洗脱梯度
Figure BDA0002202876950000081
Figure BDA0002202876950000091
本发明的流速为0.1～1ml/min，从色谱峰分离效果考虑，本发明优选的流速为0.25～0.45ml/min，更优选流速为0.25～0.35ml/min。柱温为20～40℃，更进一步地，考虑到色谱柱的耐用性和分析所需时间，流速优选为0.30ml/min，柱温优选为30℃。
在一项或多项优选的实施方案中，本发明的进样体积为0.5～2μL，优选为1μL。检测波长为210nm，采用的检测器为二极管阵列检测器(又称DAD检测器)。
在一项或多项更优选的实施方案中，本发明步骤(2)中质谱检测的条件为：离子源为电喷雾离子源ESI，干燥气温度为200-400℃，优选为300℃，流量为1-20L/min，优选为8L/min，雾化器压力为10-100psi，优选为35psi；正离子模式下毛细管电压4000V，负离子模式下毛细管电压3500V，毛细管出口电压175V，锥孔电压65V；采用高分辨模式进行数据采集，质荷比采集范围m/z 100～2000，采样速度1spectra/s，采样时间1000ms/spectra；负离子采用TFANH4(112.985587)和HP-0921(1033.988109)进行质量数实时校准，正离子采用嘌呤(121.050873)和HP-0921(922.009798)进行质量数实时校准，雾化压力5psi。
在一项或多项更优选的实施方案中，所述的分析软件为Agilent MassHunterQualitative Analysis software，如Agilent MassHunter Qualitative Analysissoftware B.07.00或Agilent MassHunter Qualitative Analysis software B.08.00。
在一项或多项更优选的实施方案中，所述定性分析包括如下步骤：(a)从质谱总离子流图中提取出物质峰，得到精确的分子量；(b)根据化合物峰的一级质谱离子碎片信息搜索数据库，得到数据库中与筛选的物质相匹配的质谱碎片信息；(c)将加合离子类别、分子量误差、保留时间、相关文献和所述步骤(b)中得到的质谱碎裂信息结合分析，得到化合物的结构。本发明中，所述的数据库包括TCM-database等数据库和自建数据库。所述加合离子类别包括M+H，M+NH4，M+Na，M+K等。所述分子量误差为绝对值小于10ppm。
采用本发明的方法可以高效、快速、准确鉴定出芦根样品中32种化学成分，为进一步研究芦根药效物质基础及全面质量控制提供了依据。
下面结合实施例对本发明提供的基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为本发明保护范围的限定。
实施例
实施例所用的仪器、材料和试药
仪器：Aglent1290超高效液相色谱仪(Agilent,Mississauga,Ontario,USA)和质谱Aglent UPLC-QTOF/MS(Agilent,Mississauga,Ontario,USA)。试药：甲醇(色谱纯，Thermo Fisher公司)；水为屈臣氏蒸馏水；甲酸(分析纯，SIGMA公司)。芦根药材由天江药业公司药材研究员从河北省保定市安新县大王镇采购而得。
实施例1
1、制备待测样品
取芦根药材于60℃烘箱中烘干至恒重。利用打粉机打成粉末，过二号筛，取芦根粉末约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水溶液25ml，密塞，称定重量。超声处理(功率250W，频率40kHz)20min，放冷。再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，置于离心管中12000rpm离心10min，过0.22μm滤膜后即得待测样品。
2、色谱条件
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱(100mm×2.1mm，1.8μm)；柱温为30℃；洗脱系统流动相流动相A为体积浓度0.05％甲酸水溶液，B为甲醇溶液；流速为0.3ml/min；进样体积为1μL；
梯度洗脱程序如表1所示。
3、质谱检测条件
离子源为双喷ESI离子源，干燥气温度300℃，流量8L/min，雾化器压力35psi；负离子模式下毛细管电压3500V，正离子模式下毛细管电压4000V，毛细管出口电压175V，锥孔电压65V；采用高分辨模式进行数据采集，质荷比采集范围m/z 100～2000，采样速度1spectra/s，采样时间1000ms/spectra；负离子采用TFANH4(112.985587)和HP-0921(1033.988109)进行质量数实时校准，正离子采用嘌呤(121.050873)和HP-0921(922.009798)进行质量数实时校准，雾化压力5psi。
4、芦根中多种化学成分的定性分析
采用Aglient MassHunter Qualitative Analysis B.07.00软件对芦根中多种化学成分物质进行定性。共分离鉴定出32种化学成分，包括酚酸类、黄酮类、木脂素苷类、环烯醚萜类、生物碱、氨基酸、核苷类等，具体结果如表2所示，其中确认化学成分的是30个，2个成分尚未确定化学成分。其中酚酸类成分是芦根主要成分之一，另外通过本发明检测到的黄酮类成分有野芝麻新苷、7-乙酰基野芝麻新苷、金吉苷、8-表金吉苷等。
本发明中以对香豆酸为代表的酚酸类成分主要在负离子模式下响应大，易形成[M-H]-的准分子离子峰，本发明中从总离子流图中(图1)提取m/z163.0399(图2)。在负离子模式下，一级质谱准分子离子峰为m/z 163.0399[M-H]-(图3)，且可以观察到119.0500[M-H-COO]+特征碎片峰。根据分子量、离子碎片信息及化合物数据库推测该化合物为对香豆酸，其分子式为C9H8O3。
再以7-乙酰基野芝麻新苷为例，从总离子流图中(图1)提取m/z 493.1574(图4)。在负离子模式下，一级质谱准分子离子峰为m/z 493.1574[M+COOH]-(图5)，还可以观察到447.1524[M-H]-的碎片离子峰。根据分子量、离子碎片信息及化合物数据库推测该化合物为7-乙酰基野芝麻新苷，其分子式为C19H28O12。
表2基于UPLC-QTOF/MS技术分析芦根药材中化学成分
Figure BDA0002202876950000121
Figure BDA0002202876950000131
Figure BDA0002202876950000141
Figure BDA0002202876950000151
以上所述仅是本发明的优选实施方法，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应该视为本发明的保护范围。

Claims (13)

1.一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)取芦根样品制成芦根粉末，精密称定，然后与溶剂混合，称定重量，超声破碎，摇匀，进行固液分离后得到待测样品；
(2)用超高效液相色谱分离步骤(1)中的待测样品，然后用质谱检测，得成分物质峰，用分析软件对所述成分物质峰进行定性分析；
步骤(1)中的溶剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；
步骤(2)中的超高效液相色谱的分离条件为，色谱柱选自Thermo Accucore C18、Waters ACQUITY UPLC HSS T3或Waters UPLC BEH色谱柱，柱温为20～40℃，洗脱系统流动相为：流动相A为体积浓度0.02～0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇溶液，流速为0.1～1ml/min；洗脱程序为下表所述：
时间/分钟 流动相A/％ 流动相B/％ 0～5 98→91 2→9 5～8 91→84 9→16 8～9 84→82 16→18 9～14 82→75 18→25 14～18 75→55 25→45 18～20 55 45
。
2.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，步骤(1)中的溶剂为25％～75％甲醇水溶液、25％～75％乙醇水溶液或水。
3.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，步骤(1)中芦根粉末与溶剂的质量体积比为0.8-2g：10-70ml。
4.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，步骤(1)中芦根粉末与溶剂的质量体积比为1g：20～30ml。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，超声破碎的时间为15～60min；所述超声的功率为200～300W；所述超声的频率为30～50kHz；所述固液分离步骤包括离心和过滤，所述离心的转速为11000～13000r/min，离心时间为5～20min。
6.根据权利要求5所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，超声破碎的时间为20～40min；所述离心时间为8～15min。
7.根据权利要求1-4任一项所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤，将芦根超声破碎后，放冷，再称定重量，用步骤(1)中的溶剂补足减失的重量。
8.根据权利要求5所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，所述过滤采用膜过滤。
9.根据权利要求5所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，所述过滤采用孔径为0.10～0.50μm的微孔滤膜。
10.根据权利要求1-4任一项所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，步骤(2)中的超高效液相色谱的分离条件为，色谱柱为Waters ACQUITYUPLC HSS T3，流速为0.1～0.5ml/min。
11.根据权利要求1-4任一项所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，步骤(2)中质谱检测的条件为：离子源为电喷雾离子源ESI、正、负离子模式检测，干燥气温度为200-400℃，流量为1-20L/min，雾化器压力为20-50psi。
12.根据权利要求1-4任一项所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法，其特征在于，所述步骤(2)的定性分析包括如下步骤：(a)从质谱总离子流图中提取出物质峰，得到精确的分子量；(b)根据化合物峰的一级质谱离子碎片信息搜索数据库，得到数据库中与筛选的物质相匹配的质谱碎片信息；(c)将加合离子类别、分子量误差、保留时间、相关文献和所述步骤(b)中得到的质谱碎裂信息结合分析，得到化合物的结构。
13.采用权利要求1-12任一项所述的一种基于UPLC-QTOF/MS检测芦根中化学成分的方法用来鉴定芦根中32种化学成分的用途。
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