CN103908666A - 一种疫苗组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明关于一种疫苗组合物,其包含灭活的鸭疫里默氏杆菌抗原和活的鸭肝炎病毒抗原。本发明还提供该疫苗组合物在制备可同时预防或治疗种鸭和/或雏鸭的鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的产品中的应用以及所述疫苗组合物在制备提高雏鸭的生长性能的产品中的应用。本发明通过一次免疫,可减少疫苗的注射次数,减少对雏鸭的应激反应,减轻对雏鸭生长的影响,同时,本发明通过采用灭活的鸭疫里默氏杆菌抗原和活的鸭肝炎病毒抗原联用,缩短了鸭肝炎病毒抗原的免疫产生期,因而更加适合用于雏鸭的免疫。
Description
技术领域
本发明关于一种用于预防或治疗鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的疫苗组合物及其应用。
背景技术
鸭病毒性肝炎、鸭传染性浆膜炎分别为雏鸭的两种主要传染病之一。该两种病都是主要侵害8周龄以内,尤其2~3周龄的雏鸭,在个别情况下,成鸭和种鸭也会发生。在实际生产中,对于家禽疫病的预防通常都需要注射疫苗,然而,疫苗的每次注射免疫都会对家禽产生应激,从而影响家禽的生长繁殖性能。例如,家禽在产蛋期间注射疫苗,应激反应可能会使家禽的产蛋量下降;再如,幼禽感染慢性呼吸道疾病时,若采用点眼、滴鼻接种,应激反应可能会导致幼禽爆发慢性呼吸道疾病而造成大批幼禽死亡。
因此,为了减少对家禽的应激,应在做好疫病防控的条件下,尽量减少对家禽的注射次数。
但是人们至今还没有采取合适的方法将这两种疫苗联合起来使用应用于雏鸭。虽然有公开的文献显示,鸭传染性浆膜炎和鸭病毒性肝炎二联灭活疫苗应用于2周龄雏鸭时,可在免疫后3周产生对鸭病毒性肝炎的保护(陶淑珍,邵华斌,杨峻等,鸭浆膜炎、鸭病毒性肝炎二联灭活疫苗研究[J].湖北畜牧兽医,2004(3):28-30、35)。但是考虑到雏鸭对鸭病毒性肝炎的易感日龄是2周龄以内,因此,合适于雏鸭的疫苗的免疫产生期应较短,然而,这种联合疫苗诱导产生的抗体需在3周才达到高峰,因此该二联灭活疫苗并不适用于雏鸭的免疫。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供一种可用于同时预防或治疗鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的疫苗组合物,该疫苗既可用于种鸭,也可应用于雏鸭。当用于成年母鸭时,疫苗通过合适的次数免疫临开产种母鸭,以使母鸭所孵雏鸭具有较高水平的母源抗体;当疫苗应用于雏鸭时,则在雏鸭孵出后,于1周内进行疫苗接种。本发明通过一次免疫,可减少疫苗的注射次数,减少对雏鸭的应激反应,减轻对雏鸭生长的影响,同时,本发明通过采用灭活的鸭疫里默氏杆菌抗原和活的鸭肝炎病毒抗原联用,缩短了鸭肝炎病毒抗原的免疫产生期,因而更加适合用于雏鸭的免疫。
本发明提供一种疫苗组合物,其包含灭活的鸭疫里默氏杆菌抗原和活的鸭肝炎病毒抗原。
优选地,所述鸭疫里默氏杆菌抗原为血清1型的鸭疫里默氏杆菌抗原。
优选地,所述鸭肝炎病毒抗原为血清Ⅰ型的鸭肝炎病毒抗原。血清Ⅰ型鸭肝炎病毒抗原对雏鸭具有良好的安全性,通过易感途径接种雏鸭不引起雏鸭产生临床症状。
优选地,所述鸭疫里默氏杆菌抗原在灭活前的含量为107.0~1012.0CFU/ml,更优选的,所述鸭疫里默氏杆菌抗原在灭活前的含量为108.0~1010.5CFU/ml。
优选地,所述鸭肝炎病毒抗原的含量为102.5~108.5ELD50/0.1ml,更优选的,所述鸭肝炎病毒抗原的含量为103.0~105.0ELD50/0.1ml。
本发明还提供所述疫苗组合物在制备预防或治疗种鸭或雏鸭的鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的产品中的应用。通过注射免疫量的疫苗组合物于种鸭时,种鸭产生的抗体经卵传给子代雏鸭,使雏鸭对抗鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的感染。当应用于雏鸭时,可使雏鸭在易感日龄对抗鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的感染。
本发明还提供所述疫苗组合物在制备提高雏鸭的生长性能的产品中的应用。当用于雏鸭时,对雏鸭的增重不产生影响。
本发明利用灭活的鸭疫里默氏杆菌抗原和活的鸭肝炎病毒抗原制备了疫苗组合物,该组合物通过合适的免疫程序接种母鸭,可保护所孵化的雏鸭在2周龄内对鸭疫里默氏杆菌和鸭病毒性肝炎的感染均产生理想的保护。当该疫苗组合物应用于刚孵化的雏鸭时,可确保雏鸭在3周龄内对鸭病毒性肝炎感染产生4/5以上的保护,在2周龄后对鸭疫里默氏杆菌的感染产生4/5以上的保护,并且对雏鸭的增重无明显影响。
具体实施方式
鸭疫里默氏杆菌抗原是指:包含至少一种对鸭给药后能诱导、刺激或增强抗鸭疫里默氏杆菌感染的免疫应答的抗原的任何组合物。优选地,所述鸭疫里默氏杆菌抗原是鸭疫里默氏杆菌全细胞菌体,优选灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的鸭疫里默氏杆菌,含有至少鸭疫里默氏杆菌的免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒,任何其它含至少鸭疫里默氏杆菌的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分。优选鸭疫里默氏杆菌抗原是灭活的鸭疫里默氏杆菌菌苗。
鸭肝炎病毒抗原是指:包含至少一种对鸭给药后能诱导、刺激或增强抗鸭肝炎病毒感染的免疫应答的抗原的任何组合物。优选地,所述鸭肝炎病毒抗原是鸭肝炎病毒全病毒,优选灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的鸭肝炎病毒,含有至少鸭肝炎病毒的免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒,任何其它含至少鸭肝炎病毒的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分。优选鸭肝炎病毒抗原是减毒形式的鸭肝炎病毒弱毒疫苗。
疫苗组合物”或“疫苗”(两个术语同义使用)系指含有鸭疫里默氏杆菌抗原和鸭肝炎病毒抗原之任何医药组合物,此组合物可用于预防或治疗个体中鸭疫里默氏杆菌感染和鸭病毒性肝炎有关之疾病或病状。
为使本发明更加容易理解,下面将结合实施例来详细说明本发明,这些实施例仅起说明性作用,并不局限于本发明的应用范围,下列实施例中未提及的具体实验方法,通常按照常规实验方法进行。
实施例
以下配合本发明的优选实施例,进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段。
实施例1.抗原的制备
1.血清Ⅰ型鸭肝炎病毒抗原的制备
取血清Ⅰ型的鸭肝炎病毒弱毒株A66株,使用已经公开的方法(张小飞,鸭病毒性肝炎弱毒疫苗(A66株)的研制[D].南京:南京农业大学,2010),接种SPF鸡胚进行繁殖,收获感染鸡胚液。测定感染鸡胚液的病毒含量为108.5ELD50/0.1ml,取部分病毒液用灭菌生理盐水分别稀释至104.0ELD50/0.1ml和102.5ELD50/0.1ml,然后取3种病毒含量不同的病毒液分别加入5%蔗糖脱脂乳进行真空冻干,制成不同病毒含量的血清Ⅰ型鸭肝炎病毒抗原,批号分别为D1201、D1202和D1203。
2.血清1型鸭疫里默氏杆菌抗原的制备
取血清1型鸭疫里默氏杆菌武汉分离株,使用已公开的方法制备菌液(陈洁,金尔光,陈橙等,鸭疫里默氏杆菌油乳剂灭活苗的研制[J].现代农业科技,2008(23):265-266)。测定菌液中鸭疫里默氏杆菌的含量为1012.0CFU/ml,取部分菌液用灭菌生理盐水分别稀释至109.0CFU/ml和107.0CFU/ml。在配苗时,按照卡波姆佐剂的使用方法分别对3种不同菌体含量的菌液进行混合乳化,制备3种不同菌体含量的血清1型鸭疫里默氏杆菌抗原,批号分别为R1201、R1202和R1203。
实施例2.疫苗的制备
将制备的3批血清Ⅰ型鸭肝炎病毒抗原与3批血清1型鸭疫里默氏杆菌抗原分别混合作为疫苗组合物(以下简称“疫苗组合物”),制备3批不同抗原含量的疫苗组合物,批号分别为1201、1202和1203,并使混合后疫苗组合物的每个使用剂量(0.3ml)均包含1个使用剂量(抗原的含量分别为102.5ELD50/0.1ml、104.0ELD50/0.1ml和108.5ELD50/0.1ml)的血清Ⅰ型鸭肝炎病毒抗原和1个使用剂量(抗原在灭活前的含量分别为107.0CFU/ml、109.0CFU/ml和1012.0CFU/ml)的血清1型鸭疫里默氏杆菌抗原。疫苗组合物的具体数据见表1。
表13批疫苗组合物所使用抗原的批号及抗原含量
试验中所使用的对照疫苗包括灭菌生理盐水稀释的血清Ⅰ型鸭肝炎病毒抗原(A66株)(以下简称“A66疫苗”);依据公开文献所制备的鸭浆膜炎、鸭病毒性肝炎二联灭活疫苗(以下简称“二联灭活苗”)(陶淑珍,邵华斌,杨峻等,鸭浆膜炎、鸭病毒性肝炎二联灭活疫苗研究[J].湖北畜牧兽医,2004(3):28-30、35)和商品化的鸭传染性浆膜炎灭活疫苗(成都天邦生物制品有限公司,批号:201110)(以下简称“商品苗”)。
实施例3.种鸭中的应用
取本实施例2所制得的3批疫苗组合物和对照疫苗,于麻鸭(购自洛阳富民禽业养殖有限公司)110日龄和130日龄分别以一个使用剂量(0.3ml)进行一次注射免疫,收集第二次注射后20~30天所孵种蛋,孵化雏鸭。分别于雏鸭1周龄、2周龄和3周龄时,取部分雏鸭进行血清Ⅰ型鸭肝炎病毒的效力检验和血清1型鸭疫里默氏杆菌的效力检验。作为对照,不经过任何免疫的麻鸭所孵的雏鸭作为对照动物。结果见表2。
表2成年母鸭免疫后所孵雏鸭的被动免疫力持续时间
注:1分子表示存活鸭数量,分母表示攻毒鸭总数。2—表示未进行此项效力检验。
表2的试验结果表明,不管是本发明提供的疫苗组合物,还是公开技术所使用的疫苗,通过合适的免疫程序免疫种鸭后,所孵化的雏鸭均可在2周龄内对相应的疾病产生部分或者完全的抵抗。与本发明采用相似方法制备的二联灭活苗免疫种鸭所孵化的雏鸭对鸭病毒性肝炎仅能产生部分保护,这主要是由于鸭病毒性肝炎的灭活疫苗的免疫效力普遍低于弱毒活疫苗,如果没有弱毒活疫苗做基础免疫,灭活疫苗很难达到理想的效果。说明,本发明所提供的疫苗组合物可应用于种鸭,从而保护种鸭所孵雏鸭在2周龄内充分抵抗鸭病毒性肝炎和鸭疫里默氏杆菌的感染。
实施例4.雏鸭中的应用
使用没有经过鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎疫苗免疫的种鸭,取种鸭所孵化的雏鸭,1日龄时,使用本发明所提供的3批疫苗组合物和3种对照疫苗分别使用一个使用剂量进行皮下接种免疫,然后在雏鸭1周龄、2周龄、3周龄、4周龄和8周龄时进行血清Ⅰ型鸭肝炎病毒的效力检验和血清1型鸭疫里默氏杆菌的效力检验。结果见表3。
表3雏鸭免疫疫苗后的免疫产生期试验结果
注:1分子表示存活鸭数量,分母表示攻毒鸭总数。2—表示未进行此项效力检验。
表3的试验结果表明,本发明提供的疫苗组合物应用于雏鸭时,可保护雏鸭在对鸭病毒性肝炎高度易感的2周龄内对鸭病毒性肝炎产生理想的保护,同时,保护雏鸭在对鸭传染性浆膜炎高度易感的2~3周龄对鸭传染性浆膜炎产生4/5以上的保护。
实施例5.对雏鸭生产性能的影响
使用没有经过鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎疫苗免疫的北京鸭种鸭(购自洛阳富民禽业养殖有限公司),取种鸭所孵化的雏鸭,1日龄时,使用本发明所提供的3批疫苗组合物、对照疫苗A66疫苗和二联灭活苗分别使用一个使用剂量进行皮下接种免疫,每组免疫50羽。在雏鸭3日龄时,对对照疫苗,A66疫苗免疫的雏鸭使用商品苗进行一次免疫,然后在雏鸭7日龄、14日龄、28日龄、42日龄时进行称重。作为对照,50羽不经过任何处理的雏鸭同时称重。结果见表4。
表4使用不同的免疫方法对雏鸭生产性能的影响
表4的结果表明,如果以常规的免疫方法两次免疫,即在雏鸭1日龄时免疫鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗,在3日龄时免疫鸭传染性浆膜炎灭活疫苗,会对雏鸭的生长产生不利的影响,会严重抑制雏鸭的增重,雏鸭在7日龄、14日龄、28日龄和42日龄时的体重均极显著低于对照组体重,而使用本发明提供的疫苗组合物和公开文献提供的二联灭活苗进行一次免疫,雏鸭的体重与对照组无显著差异。说明,减少注射次数可有效抑制注射对雏鸭增重的影响。
以上所述仅是本发明的优选实施例而已,并非对本发明做任何形式上的限制,虽然本发明已以优选实施例揭露如上,然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案的范围内,当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种疫苗组合物,其特征在于,包含灭活的鸭疫里默氏杆菌抗原和活的鸭肝炎病毒抗原。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述鸭疫里默氏杆菌抗原为血清1型的鸭疫里默氏杆菌抗原。
3.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物,其特征在于,所述鸭肝炎病毒抗原为血清Ⅰ型的鸭肝炎病毒抗原。
4.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述鸭疫里默氏杆菌抗原在灭活前的含量为107.0~1012.0CFU/ml。
5.根据权利要求4所述的疫苗组合物,其特征在于,所述鸭疫里默氏杆菌抗原在灭活前的含量为108.0~1010.5CFU/ml。
6.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述鸭肝炎病毒抗原的含量为102.5~108.5ELD50/0.1ml。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物,其特征在于,所述鸭肝炎病毒抗原的含量为103.0~105.0ELD50/0.1ml。
8.权利要求1-7中任一项所述的疫苗组合物在制备预防或治疗种鸭的鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的产品中的应用。
9.权利要求1-7中任一项所述的疫苗组合物在制备预防或治疗雏鸭的鸭病毒性肝炎和鸭传染性浆膜炎的产品中的应用。
10.权利要求1-7中任一项所述的疫苗组合物在制备提高雏鸭的生长性能的产品中的应用。
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