CN106177938A - 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法 - Google Patents
鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106177938A CN106177938A CN201610781512.5A CN201610781512A CN106177938A CN 106177938 A CN106177938 A CN 106177938A CN 201610781512 A CN201610781512 A CN 201610781512A CN 106177938 A CN106177938 A CN 106177938A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- inactivated vaccine
- dhv
- duck
- viral hepatitis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32461—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2770/32463—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法,属于鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备领域。本发明首先公开了一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,包括:鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗和鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗。本发明所述鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的安全性好,免疫后诱导的中和抗体效价高于单价疫苗,而且雏鸭的被动保护期长,对种鸭的免疫持续期长达5个月,能够有针对性的防治1型和3型鸭甲肝病毒引起的鸭病毒性肝炎。本发明进一步公开了一种所述鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法,包括:将鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗和鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗混合均匀,即得。本发明鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法简单,能够规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及鸭病毒性肝炎灭活疫苗,尤其涉及鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,本发明还涉及所述鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法,属于鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备领域。
背景技术
鸭病毒性肝炎(DVH),是由鸭甲肝病毒(DHAV)引起雏鸭的一种急性接触传染病。鸭甲肝病毒,属小RNA病毒科,禽肝炎病毒属。目前DHAV分为3个血清型,即:血清I型,血清Ⅱ型和血清Ⅲ型。其中血清I型为传统鸭肝炎病毒,血清Ⅱ型和血清Ⅲ型为近几年发现的新型病毒株,分别对应台湾新型和韩国新型。3个血清型之间无交叉反应。
鸭病毒性肝炎主要危害3周龄以内的雏鸭,死亡率高达90%。近几年随着养鸭业的迅猛发展,鸭病毒性肝炎的危害日趋严重,给养鸭生产造成了很大的经济损失。随着DHAV I型鸡胚化弱毒疫苗、高免卵黄抗体的研制成功及临床应用,使本病在很大程度上得到很好的控制。但近几年,在中国多地区免疫接种过DHAV I型弱毒疫苗或注射过DHAV I型高免卵黄抗体的鸭群中仍发生鸭肝炎,死亡率为20%-80%,经病毒分离鉴定为血清Ⅲ型。
因此,目前亟待需要研制一种能够同时有效预防鸭甲肝病毒I型和Ⅲ型的鸭病毒性肝炎二价疫苗,有针对性的防治鸭病毒性肝炎的感染与爆发。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,该二价灭活疫苗由鸭肝炎病毒强毒株SD株(血清1型)灭活疫苗和JS株(血清3型)灭活疫苗混合制成,不仅诱导的中和抗体效价高,免疫持续期长,而且安全性好。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法,工艺简单。
为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案是:
本发明首先公开了一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,包括:预防上有效量的鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗和鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗。其中,鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗与鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗的体积比为1-5:1-5,优选为1:1。
本发明所述鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗中,所述鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗的制备包括:(1)培养鸭肝炎病毒SD株,收获病毒液,浓缩;(2)将浓缩后的病毒液灭活,制备水相;(3)制备油相;(4)将水相与油相混合,乳化,即得。所述鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗的制备包括:(1)培养鸭肝炎病毒JS株,收获病毒液,浓缩;(2)将浓缩后的病毒液灭活,制备水相;(3)制备油相;(4)将水相与油相混合,乳化,即得。
其中,步骤(1)所述培养鸭肝炎病毒SD株,包括:将鸭肝炎病毒SD株接种鸡胚,优选为11日龄鸡胚,选择在24-96小时内死亡的鸡胚,收取胚体和胚液,匀浆、冻融、然后离心,取上清夜,即得。所述培养鸭肝炎病毒JS株,包括:将鸭肝炎病毒JS株接种鸭胚,优选为10日龄鸭胚,选择在24-96小时内死亡的鸭胚,收取胚体和胚液,匀浆、冻融、然后离心,取上清液,即得。步骤(1)所述浓缩为浓缩10倍,即浓缩至终体积为病毒液体积的1/10;优选的,每0.2ml浓缩后的病毒液的病毒含量≥106.0ELD50。
按照体积比计,步骤(2)所述灭活是向浓缩后的病毒液中加入终浓度为0.2%甲醛溶液,37℃作用48小时;优选的,每6-8小时振摇1次。步骤(2)所述水相的制备包括:向灭活后的病毒液中加入吐温-80,振摇使吐温-80溶解,即得;其中,按照体积比计,每96份灭活后的病毒液加入4份吐温-80。步骤(3)所述油相的制备包括:将白油、司本-80和硬脂酸铝混合,加热熔解,灭菌,即得;其中,按照体积比计,白油94份、司本-80 6份、硬脂酸铝1.5份;所述灭菌为115℃灭菌40分钟。步骤(4)所述水相与油相按照体积比1-5:1-5混合;优选的,水相与油相按照体积比1:1.5混合。
本发明进一步公开了一种所述鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法,包括:将鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗和鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗混合均匀,即得。
安全性检验结果表明,本发明鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗单次使用剂量、单次超剂量或单剂量重复免疫不同日龄鸭,均无局部及全身反应,安全性好。效力比较结果表明,单次免疫不同日龄鸭21天后,本发明鸭病毒性肝炎二价苗产生的抗体对鸭肝炎病毒SD株的中和抗体效价均不低于1:78,对鸭肝炎病毒JS株的中和抗体效价均不低于1:78;而单价SD株灭活苗和JS株灭活苗对鸭肝炎病毒SD株和JS株的中和抗体效价均不高于1:42。第二次免疫14天后检测血清中和抗体效价,本发明鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗对鸭肝炎病毒SD株的中和抗体效价均不低于1:700,对鸭肝炎病毒JS株的中和抗体效价均不低于1:790。而单价SD株或JS株灭活苗对鸭肝炎病毒SD株或JS株的中和抗体效价均不高于1:350。
攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果表明,本发明鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗免疫种鸭,雏鸭的被动保护期为21天,雏鸭出壳第4-21天的攻毒保护率均为90%以上;而单价苗对雏鸭的被动保护期为14天。种鸭免疫持续期试验结果表明,疫苗第二次免疫种鸭后1-5个月,免疫组鸭血清中鸭肝炎病毒SD株和JS株的中和抗体效价均不低于1:700。
本发明比较了SD株分别与JS株或另一株鸭肝炎病毒血清3型分离株JT株所制备的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的效力,对不同月龄鸭进行单次免疫21天后检测血清中和抗体效价,结果以鸭肝炎病毒SD株为检测毒株,二价苗(SD株+JS株)和二价苗(SD株+JT株)的中和抗体效价均不低于1:78;以鸭肝炎病毒JS株为检测毒株,二价苗(SD株+JS株)的中和抗体效价不低于1:78;二价苗(SD株+JT株)的中和抗体效价不低于1:51。第二次免疫14天后检测血清中和抗体效价,以鸭肝炎病毒SD株为检测毒株,二价苗(SD株+JS株)和二价苗(SD株+JT株)诱导的中和抗体效价均不低于1:790;以鸭肝炎病毒JS株为检测病毒,二价苗(SD株+JS株)诱导的中和抗体效价不低于1:790;二价苗(SD株+JT株)诱导的中和抗体效价不低于1:613。攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果表明,二价苗(SD株+JS株)免疫种鸭,雏鸭的被动保护期为21天,雏鸭出壳第4-14天的攻毒保护率为100%,雏鸭出壳第4-21天的攻毒保护率为90%以上;而二价苗(SD株+JT株)对雏鸭的被动保护期为14天,雏鸭出壳第4-14天的攻毒保护率仅为70%。证明,与SD株和JT株制备的二价苗相比,鸭肝炎病毒SD株和JS株制备的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗诱导的中和抗体效价更高,而且雏鸭的被动保护期更长,雏鸭的攻毒保护率更高。
本发明技术方案与现有技术相比,具有以下有益效果:
本发明利用具有优良免疫原性的鸭肝炎病毒强毒株SD株(血清1型)和JS株(血清3型),制备得到一种安全、有效、可控的1型和3型鸭病毒性肝炎灭活疫苗。本发明鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗免疫不同日龄鸭后,诱导的中和抗体效价均明显高于单价苗,而且雏鸭的被动保护期长、攻毒保护率高,种鸭免疫持续期长达5个月。本发明鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗有利于鸭病毒性肝炎的防控,可以有针对性的防治鸭病毒性肝炎的感染与爆发,同时简化了生产工艺,可规模化生产并应用于临床。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的,不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
1、生产用毒株
1型鸭肝炎病毒SD株的微生物保藏编号为:CGMCC No.8560,3型鸭肝炎病毒JS株的微生物保藏编号为:CGMCC No.6852;均由哈药集团生物疫苗有限公司分离、鉴定、保管和供应。
实施例1鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JS株)的制备及效力检验
1、实验方法
1.1病毒原液的制备
1.1.1 1型鸭甲型肝炎病毒SD株原液的制备
取1型鸭肝炎病毒SD株,用灭菌生理盐水稀释1000倍,经尿囊腔接种11日龄鸡胚,每胚0.2ml,置37℃继续孵育。鸡胚接种后,将24小时前死亡的鸡胚弃去。在24~96小时内死亡的鸡胚随时取出,气室向上直立于2~8℃冷却12小时后,无菌收取绒毛尿囊、胎儿、胚液及羊水,匀浆后、冻融3次,4000r/min离心30min,取上清混合于无菌容器中,置2~8℃保存。
1.1.2 3型鸭肝炎病毒JS株原液的制备
取3型鸭肝炎病毒JS株,用灭菌生理盐水稀释1000倍,经尿囊腔接种10日龄鸭胚,每胚0.2ml,置37℃继续孵育。鸭胚接种后,将24小时前死亡的鸭胚弃去。在24~96小时内死亡的鸭胚随时取出,气室向上直立于2~8℃冷却12小时后,无菌收取绒毛尿囊、胎儿、胚液及羊水,匀浆后、冻融3次,4000r/min离心30min,取上清混合于无菌容器中,置2~8℃保存。
1.2病毒原液的浓缩
将鸭肝炎病毒SD株鸭胚液和JS株鸭胚液分别倒入透析袋,扎紧透析袋两端,放入400g/L的PEG20000中进行浓缩,当浓缩到原体积的1/20时取出,加适量pH7.2PBS冲洗袋壁,使最终体积为原液的1/10,并按现行《中国兽药典》规定进行无菌检验,应无菌生长,并测定毒价。每0.2ml病毒含量均应不低于106.0ELD50。
1.3浓缩液的灭活
浓缩后的病毒液分别加入终浓度为0.2%甲醛溶液(体积百分比)密封置37℃作用48小时(期间6~8小时振摇1次)。
1.4油乳剂灭活疫苗的制备
1.4.1水相制备
取浓缩并检验合格的JS株和SD株病毒液,分别按每96ml病毒液加入4ml吐温-80,各自于灭菌容器内充分振摇使吐温-80完全溶解为止。
1.4.2油相制备
按注射用白油94份,司本-80 6份,硬脂酸铝1.5份的比例(体积份)配制油相,混合加热完全熔解后,在115℃灭菌40分钟,冷至室温备用。
1.4.3乳化
按水相和油相1:1.5的体积比例,将油相分别注入预混罐中,低温搅拌的同时,分别缓慢加入水相,再注入乳化罐乳化5分钟。即成为鸭肝炎病毒SD株和JS株灭活疫苗。
1.5二价疫苗的配制
将两种单价灭活疫苗按1:1的体积比例等量混合,搅拌均匀。
1.6分装
定量分装,加盖密封,2~8℃保存。
1.7成品检验
1.7.1性状
1.7.1.1外观
为乳白色乳剂,久置后上层有少量油质,摇匀后呈均匀乳状液。
1.7.1.2剂型
呈油包水(W/O)型。
1.7.1.3稳定性
吸取疫苗10ml加入离心管中,以3000r/min离心15分钟,管底析出水相应不多于0.5ml。
1.7.1.4黏度
按现行《中国兽药典》附录进行检验,应符合规定。
1.7.2装量检查
按现行《中国兽药典》附录进行检验,应符合规定。
1.7.3无菌检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验,应无菌生长。
1.7.4支原体检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验,应无支原体生长。
1.7.5安全性检验
1.7.5.1单次使用剂量注射
取3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,分别对3月龄、6月龄和12月龄的麻鸭进行单次使用剂量注射,每只注射0.3ml。
1.7.5.2单次超剂量注射
取3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,分别对3月龄、6月龄和12月龄的麻鸭进行单次超剂量注射,每只注射0.6ml。
1.7.5.3单剂量重复注射
取3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,分别对3月龄、6月龄和12月龄的麻鸭进行单剂量重复注射,第一次注射21天后进行第二次注射,每次每只注射0.3ml。
1.7.6二价灭活疫苗与单价疫苗效力比较
1.7.6.1抗体效价
取3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JS株)和同批次1型鸭病毒性肝炎灭活疫苗(SD株)及3型鸭病毒性肝炎灭活疫苗(JS株),每批次疫苗对5只3、6、12月龄绍兴麻鸭进行免疫(免疫21天后进行第二次免疫,二价苗每次每只注射0.3ml,单价苗每次每只注射0.15ml),分别于第一次免疫后21天和第二次免疫14天后检测血清中对鸭肝炎病毒SD株(含100LD50/0.2ml)的中和抗体效价及对鸭肝炎病毒JS株(病毒滴度为100LD50/0.2ml)的中和抗体效价。
1.7.6.2攻毒试验(后代雏鸭被动保护)
3批制备的鸭肝炎二价灭活疫苗,每批取4月龄绍兴麻鸭(产蛋种)160只,分为4组,每组40只。第1组每只鸭肌肉注射鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.3ml;第二组每只鸭肌肉注射鸭病毒性肝炎单价灭活疫苗(SD株),第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.15ml;第三组每只鸭肌肉注射鸭病毒性肝炎单价灭活疫苗(JS株),第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.15ml;第四组作为对照组,每只鸭肌肉注射生理盐水,第一次注射21天后进行第二次注射,每次每只注射0.3ml。第二次免疫后21~28天收集各组鸭所产鸭蛋,每组随机选取150个,进行孵育。分别于雏鸭出壳4日、7日、14日、21日和28日各随机取20只雏鸭,其中10只肌肉注射1型鸭肝炎强毒SD株0.2ml(含100LD50),另10只注射3型鸭肝炎强毒JS株0.2ml(含100LD50)。观察14日,统计攻毒保护率。
1.7.6.3种鸭免疫持续期试验
3批制备的鸭肝炎二价灭活疫苗,每批取4月龄绍兴麻鸭(产蛋种)分为2组,每组120只,第1组每只鸭肌肉注射病毒性肝炎二价灭活疫苗,第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.3ml;第二组每只肌肉注射生理盐水,第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.3ml作为对照组。分别于第二次免疫后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月和6个月,随机取第一组的10只鸭、第二组的5只鸭,采血、分离血清并分别测定血清中的1型和3型鸭肝炎病毒中和抗体效价。
1.7.7不同毒株二价灭活疫苗的效力比较
1.7.7.1抗体效价
3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JS株)和鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JT株)(鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JT株)的制备方法同鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JS株),以JT株替换JS株)(JT株是一株血清3型中国国内分离株,GenBank登录号:JF835025(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/JF835025))对5只3、6、12月龄绍兴麻鸭进行免疫(免疫21天后进行第二次免疫,二价苗每次每只注射0.3ml,单价苗每次每只注射0.15ml),分别于第一次免疫后21天和第二次免疫14天后检测血清中对鸭肝炎病毒SD株(含200ELD50/0.2ml)的中和抗体效价及对鸭肝炎病毒JS株(含200ELD50/0.2ml)的中和抗体效价。
1.7.7.2攻毒试验(后代雏鸭被动保护)
制备的3批鸭肝炎二价灭活疫苗(SD株+JS株)和3批鸭肝炎二价灭活疫苗(SD株+JT株),每批取4月龄绍兴麻鸭(产蛋种)120只,分为3组,每组40只。第1组每只鸭肌肉注射鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JS株),第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.3ml;第二组每只鸭肌肉注射鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(SD株+JT株),第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.3ml;第三组作为对照组,每只鸭肌肉注射生理盐水,第一次注射21天后进行第二次注射,每次每只注射0.3ml。第二次免疫后21~28天收集各组鸭所产鸭蛋,每组随机选取150个,进行孵育。分别于雏鸭出壳4日、7日、14日、21日和28日各随机取20只雏鸭,其中10只肌肉注射1型鸭肝炎强毒SD株0.2ml(含100LD50),另10只注射3型鸭肝炎强毒JS株0.2ml(含100LD50)。观察14日,统计攻毒保护率。
2、实验结果
2.1鸭病毒性肝炎单价/二价灭活疫苗制备结果
鸭病毒性肝炎单价灭活疫苗制备结果见表1。
表1鸭病毒性肝炎单价灭活疫苗制备结果
鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗制备结果见表2。
表2鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗制备结果
2.2鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的安全性结果
鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的安全性结果见表3。
表3鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的安全性结果
从表3结果可以看出,201501、201502、201503批鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗单次使用剂量、单次超剂量和单次使用剂量重复免疫10日龄、3月龄、6月龄和12月龄鸭均无局部及全身反应。
2.3鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的效力检验结果
2.3.1鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗效价结果
鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗效价结果见表4、表5。
表4鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗与单苗一次免疫的血清学效力检验结果(21天)
从表4结果可以看出,3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗和单价灭活苗,对5只3、6和12月龄绍兴麻鸭进行单次免疫,21天后检测血清中和抗体效价,二价苗产生的抗体对鸭肝炎病毒SD株(含200ELD50/0.2ml)的中和抗体效价均不低于1:78,对鸭肝炎病毒JS株(含200ELD50/0.2ml)的中和抗体效价均不低于1:78;单价SD株灭活苗和JS株灭活苗对鸭肝炎病毒SD株和JS株的中和抗体效价均不高于1:42。
表5鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗二次免疫的血清学效力检验结果(14天)
从表5结果可以看出,3个批次的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,每一批次疫苗对5只3、6和12月龄绍兴麻鸭进行免疫(第一次免疫21天后进行第二次免疫,每次每只注射0.3ml),第二次免疫14天后检测血清中和抗体效价,对鸭肝炎病毒SD株(病毒滴度为200DELD50/0.2ml)的中和抗体效价均不低于1:700,对鸭肝炎病毒JS株(病毒滴度为200DELD50/0.2ml)的中和抗体效价均不低于1:790。单价SD株灭活苗和JS株灭活苗对鸭肝炎病毒SD株和JS株的中和抗体效价均不高于1:350。
2.3.2鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果
鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果见表6。
表6鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果
注:攻毒剂量为100LD50。
从表6结果可以看出,二价苗免疫种鸭,雏鸭的被动保护期为21天,雏鸭出壳第4至21天的攻毒保护率均为90%以上;单价苗对雏鸭的被动保护期为14天;用生理盐水免疫种鸭后,雏鸭在各个时期的攻毒保护率均为0%。
2.3.3鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗种鸭免疫持续期试验结果
鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗种鸭免疫持续期试验结果见表7。
表7种鸭免疫持续期试验结果
从表7结果可以看出,疫苗第二次免疫种鸭后1-5个月,免疫组鸭血清中鸭肝炎病毒SD株和JS株的中和抗体效价均不低于1:700;对照组鸭血清中对鸭肝炎病毒SD株和JS株的中和抗体效价均不高于1:4。
2.3.4不同毒株鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗免疫鸭血清效价比较结果
不同毒株鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗免疫鸭血清效价比较结果见表8、表9。
表8不同鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗免疫鸭血清效价比较结果(21天)
从表8结果可以看出,3个批次不同毒株的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,对5只3、6和12月龄绍兴麻鸭进行单次免疫,21天后检测血清中和抗体效价,以鸭肝炎病毒SD株(含200ELD50/0.2ml)为检测毒株,二价苗(SD株+JS株)和二价苗(SD株+JT株)的中和抗体效价均不低于1:78;以鸭肝炎病毒JS株(含200ELD50/0.2ml)为检测毒株,二价苗(SD株+JS株)的中和抗体效价不低于1:78;二价苗(SD株+JT株)的中和抗体效价不低于1:51。
表9鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗二次免疫的血清学效力检验结果(14天)
从表9果可以看出,3个批次不同毒株鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗第二次免疫14天后检测血清中和抗体效价,以鸭肝炎病毒SD株(含200ELD50/0.2ml)为检测毒株,二价苗(SD株+JS株)和二价苗(SD株+JT株)诱导的中和抗体效价均不低于1:790;以鸭肝炎病毒JS株(含200ELD50/0.2ml)为检测病毒,二价苗(SD株+JS株)诱导的中和抗体效价不低于1:790;二价苗(SD株+JT株)诱导的中和抗体效价不低于1:613。
2.3.5不同毒株鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果
不同毒株鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果见表10。
表10不同毒株鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗攻毒试验(后代雏鸭被动保护)结果
注:攻毒剂量为100LD50。
从表10结果可以看出,二价苗(SD株+JS株)免疫种鸭,雏鸭的被动保护期为21天,雏鸭出壳第4至14天的攻毒保护率均为100%,雏鸭出壳第4至21天的攻毒保护率均为90%以上;二价苗(SD株+JT株)对雏鸭的被动保护期为14天,雏鸭出壳第4至14天的攻毒保护率仅为70%;用生理盐水免疫种鸭后,雏鸭在各个时期的攻毒保护率均为0%。
Claims (10)
1.一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,包括:预防上有效量的鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗和鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗。
2.按照权利要求1所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,所述鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗与鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗的体积比为1-5:1-5,优选为1:1。
3.按照权利要求1所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,所述鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗的制备方法包括:(1)培养鸭肝炎病毒SD株,收获病毒液,浓缩;(2)将浓缩后的病毒液灭活,制备水相;(3)制备油相;(4)将水相与油相混合,乳化,即得。
4.按照权利要求1所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,所述鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗的制备方法包括:(1)培养鸭肝炎病毒JS株,收获病毒液,浓缩;(2)将浓缩后的病毒液灭活,制备水相;(3)制备油相;(4)将水相与油相混合,乳化,即得。
5.按照权利要求3或4所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于:步骤(1)所述浓缩为浓缩10倍;优选的,每0.2ml浓缩后的病毒液的病毒含量≥106.0ELD50;
按照体积比计,步骤(2)所述灭活是向浓缩后的病毒液中加入终浓度为0.2%甲醛溶液,37℃作用48小时;优选的,每6-8小时振摇1次。
6.按照权利要求3或4所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,步骤(2)所述水相的制备方法包括:向灭活后的病毒液中加入吐温-80,振摇使吐温-80溶解,即得;其中,按照体积比计,每96份灭活后的病毒液加入4份吐温-80;
步骤(3)所述油相的制备方法包括:将白油、司本-80和硬脂酸铝混合,加热熔解,灭菌,即得;其中,按照体积比计,白油94份、司本-80 6份、硬脂酸铝1.5份。
7.按照权利要求3或4所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,步骤(4)所述水相与油相按照体积比1-5:1-5混合;优选的,水相与油相按照体积比1:1.5混合。
8.按照权利要求3所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,步骤(1)所述培养鸭肝炎病毒SD株,包括:将鸭肝炎病毒SD株接种鸡胚,选择在24-96小时内死亡的鸡胚,收取胚体和胚液,匀浆、冻融、然后离心,取上清夜,即得。
9.按照权利要求4所述的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗,其特征在于,步骤(1)所述培养鸭肝炎病毒JS株,包括:将鸭肝炎病毒JS株接种鸭胚,选择在24-96小时内死亡的鸭胚,收取胚体和胚液,匀浆、冻融、然后离心,取上清液,即得。
10.一种权利要求1至9任何一项所述鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法,其特征在于,包括:将鸭肝炎病毒SD株灭活疫苗和鸭肝炎病毒JS株灭活疫苗混合均匀,即得。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610781512.5A CN106177938A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610781512.5A CN106177938A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106177938A true CN106177938A (zh) | 2016-12-07 |
Family
ID=58086488
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610781512.5A Pending CN106177938A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106177938A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109692329A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-04-30 | 广东渔跃生物技术有限公司 | 一种鸭星状病毒疫苗及其制备方法 |
CN111000993A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-04-14 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 一种鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 |
CN113491767A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-10-12 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠弧病毒病、鸭病毒性肝炎三联灭活疫苗及其制备方法 |
Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101948809A (zh) * | 2010-08-06 | 2011-01-19 | 中国科学院微生物研究所 | 预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法 |
CN102174476A (zh) * | 2010-12-29 | 2011-09-07 | 中国科学院微生物研究所 | 预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法 |
CN102827275A (zh) * | 2012-09-12 | 2012-12-19 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 鸭病毒性肝炎二价精制卵黄抗体的制备方法 |
CN102895660A (zh) * | 2012-10-25 | 2013-01-30 | 中国兽医药品监察所 | 一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗 |
CN102908618A (zh) * | 2012-09-12 | 2013-02-06 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法 |
CN103013931A (zh) * | 2012-12-21 | 2013-04-03 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 一种鸭甲肝病毒js株及其在鸭病毒性肝炎防治中的应用 |
CN103525772A (zh) * | 2013-10-18 | 2014-01-22 | 江苏省农业科学院 | 一株鸭病毒性肝炎病毒及其应用 |
CN103908666A (zh) * | 2013-01-07 | 2014-07-09 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其应用 |
CN104498441A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-04-08 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 鸭甲肝病毒iii型弱毒株及由其制备的活疫苗和应用 |
CN104531625A (zh) * | 2014-12-26 | 2015-04-22 | 中国科学院微生物研究所 | 一种鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法与应用 |
CN104726414A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-06-24 | 南京天邦生物科技有限公司 | 血清3型鸭甲型肝炎病毒活疫苗及其制备方法 |
CN105233296A (zh) * | 2015-11-24 | 2016-01-13 | 江苏省农业科学院 | 用于鸭病毒性肝炎活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法和应用 |
CN105754959A (zh) * | 2016-03-13 | 2016-07-13 | 山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心) | 表达dhav-1和dhav-3型vp1基因的ndv重组病毒及其应用 |
-
2016
- 2016-08-30 CN CN201610781512.5A patent/CN106177938A/zh active Pending
Patent Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101948809A (zh) * | 2010-08-06 | 2011-01-19 | 中国科学院微生物研究所 | 预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法 |
CN102174476A (zh) * | 2010-12-29 | 2011-09-07 | 中国科学院微生物研究所 | 预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法 |
CN102827275A (zh) * | 2012-09-12 | 2012-12-19 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 鸭病毒性肝炎二价精制卵黄抗体的制备方法 |
CN102908618A (zh) * | 2012-09-12 | 2013-02-06 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法 |
CN102895660A (zh) * | 2012-10-25 | 2013-01-30 | 中国兽医药品监察所 | 一种鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗 |
CN103013931A (zh) * | 2012-12-21 | 2013-04-03 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 一种鸭甲肝病毒js株及其在鸭病毒性肝炎防治中的应用 |
CN103908666A (zh) * | 2013-01-07 | 2014-07-09 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其应用 |
CN103525772A (zh) * | 2013-10-18 | 2014-01-22 | 江苏省农业科学院 | 一株鸭病毒性肝炎病毒及其应用 |
CN104498441A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-04-08 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 鸭甲肝病毒iii型弱毒株及由其制备的活疫苗和应用 |
CN104531625A (zh) * | 2014-12-26 | 2015-04-22 | 中国科学院微生物研究所 | 一种鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法与应用 |
CN104726414A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-06-24 | 南京天邦生物科技有限公司 | 血清3型鸭甲型肝炎病毒活疫苗及其制备方法 |
CN105233296A (zh) * | 2015-11-24 | 2016-01-13 | 江苏省农业科学院 | 用于鸭病毒性肝炎活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法和应用 |
CN105754959A (zh) * | 2016-03-13 | 2016-07-13 | 山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心) | 表达dhav-1和dhav-3型vp1基因的ndv重组病毒及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
银凤桂等: "《鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(DHAV-SH和DHAV-FS株)的制备和评价》", 《生物工程学报》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109692329A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-04-30 | 广东渔跃生物技术有限公司 | 一种鸭星状病毒疫苗及其制备方法 |
CN111000993A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-04-14 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 一种鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 |
CN111000993B (zh) * | 2020-01-07 | 2022-08-23 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 一种鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 |
CN113491767A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-10-12 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠弧病毒病、鸭病毒性肝炎三联灭活疫苗及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102174476B (zh) | 预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法 | |
CN101612397B (zh) | 一种鸭病毒性肝炎灭活疫苗及其制备方法 | |
CN103820397B (zh) | 一种番鸭细小病毒及其应用 | |
CN104922663A (zh) | 一种鸡新城疫和h9亚型禽流感二联疫苗 | |
CN104530232A (zh) | 鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体的制备方法 | |
CN102827275A (zh) | 鸭病毒性肝炎二价精制卵黄抗体的制备方法 | |
CN106729690A (zh) | 鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法 | |
CN106177938A (zh) | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗及其制备方法 | |
CN105031638A (zh) | 一种鸡新城疫、禽流感和传染性法氏囊三联灭活疫苗 | |
CN104587460A (zh) | 水貂病毒性肠炎、犬瘟热二联活疫苗及其制备方法和应用 | |
CN105664150A (zh) | 一种鸡新城疫病毒、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗 | |
CN105582533A (zh) | 一种禽流感病毒、禽腺病毒二联灭活疫苗 | |
CN102038949A (zh) | 鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感(h9亚型)四联灭活疫苗的生产方法 | |
CN103013931B (zh) | 一种鸭甲肝病毒js株及其在鸭病毒性肝炎防治中的应用 | |
CN103833848A (zh) | 一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体 | |
CN105535958B (zh) | 一种鸡新城疫病毒、传染性支气管炎、禽腺病毒三联灭活疫苗 | |
CN102908618B (zh) | 鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗的制备方法 | |
CN105154410B (zh) | 一种鸭细小病毒毒株及其活疫苗 | |
CN109207436A (zh) | 一株i群4型禽腺病毒毒株及其应用 | |
CN104274829B (zh) | 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
CN106190991A (zh) | 一种禽脑脊髓炎病毒、灭活疫苗及其制备方法 | |
CN103396999B (zh) | H9n2亚型病毒、h9n2亚型病疫苗及其制备方法 | |
CN104984337A (zh) | 一种鸡新城疫、禽流感抗原抗体复合物灭活疫苗及其制备方法 | |
CN104195114A (zh) | 一种禽肺病毒及其应用 | |
CN107748255A (zh) | 小鹅瘟抗体检验标准物质及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20161207 |