CN103884783B - 一种伊伐布雷定中间体的分析检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种伊伐布雷定中间体的分析检测方法，用于伊伐布雷定中间体的质量控制，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱（C18，4.6×250mm，5μm），以乙腈和辛烷磺酸钠-磷酸溶液体系为流动相，以检测波长为215～225nm，进行高效液相色谱法分析检测。本发明的分析检测方法具有分离度高，操作简便，重复性及耐用性好，结果稳定可靠的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种伊伐布雷定中间体的分析检测方法。
背景技术
伊伐布雷定是全新机制的治疗心绞痛的药物，对心电传导、心肌收缩力和心室复极化无影响，其单纯减缓心率的作用是近年来稳定型心绞痛治疗药物最重要的进步。
3-{3-[((7S)-3,4-二甲氧基-8-双环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯)甲基-甲氨基]丙基}-7,8-二甲氧基-1,3,4,5–四氢-2H-3-苯并氮杂卓-4-烯-2-酮是合成伊伐布雷定的重要中间体，其分子式为C27H34N2O5，分子量466.58，结构式如下：
到目前为止，USP、EP、BP、JP以及中国药典和文献中均没有记载伊伐布雷定中间体的分析检测方法，但伊伐布雷定中间体的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品的质量，所以建立一种稳定有效的分析检测方法对伊伐布雷定中间体进行质量控制是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种伊伐布雷定中间体的分析检测方法，用于伊伐布雷定中间体的质量控制。该方法具有分离度高，操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠的优点。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：
一种伊伐布雷定中间体的分析检测方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱（C18，4.6×250mm，5μm），以乙腈和辛烷磺酸钠-磷酸溶液体系为流动相，以检测波长为215～225nm，进行高效液相色谱法分析检测。
所述的乙腈和辛烷磺酸钠-磷酸溶液体系是由乙腈和0.01～0.03mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比30～50:70～50形成流动相。
进一步地，乙腈和辛烷磺酸钠-磷酸溶液体系优选为乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比40:60形成流动相。
本发明所述的分析检测方法，可通过以下步骤实现：
A、取伊伐布雷定中间体样品适量，采用流动相溶解，配制成每1mL含伊伐布雷定中间体0.4～1.1mg的样品溶液；
B、设置流动相流速为0.7～1.2mL/min，检测波长215～225nm，柱温为20～30℃；
C、取A的样品溶液5μL注入液相色谱仪，完成伊伐布雷定中间体的分析检测；
其中：
高效液相色谱仪：Waterse2695液相色谱系统；
色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；
流动相：乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比40:60形成流动相；
检测波长：220nm；
柱温：25℃；
流速：1.0mL/min。
本发明涉及的分析检测方法，可以有效的将伊伐布雷定中间体及其杂质分开，分离度均高于1.5，对称因子适宜，且选择流动相溶解样品，确保了溶液的稳定性。该方法操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，从而可用于伊伐布雷定中间体的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
图1实施例1的伊伐布雷定中间体HPLC图谱。
图2实施例2的伊伐布雷定中间体HPLC图谱。
图3实施例3的伊伐布雷定中间体HPLC图谱。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1
仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；检测波长：220nm；柱温为25℃；流速1.0mL/min；乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比40:60作为流动相。
实验步骤：将伊伐布雷定中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含伊伐布雷定中间体1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液5μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。
附图1表明，在该色谱条件下，伊伐布雷定中间体主峰及其杂质峰可以完全分离，且伊伐布雷定中间体主峰保留时间在6.46min左右。
实施例2
仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；检测波长：220nm；柱温为25℃；流速0.7mL/min；乙腈和0.02mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比30:70作为流动相。
实验步骤：将伊伐布雷定中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含伊伐布雷定中间体1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液5μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。
附图2表明，在该色谱条件下，伊伐布雷定中间体主峰及其杂质峰可以完全分离，且伊伐布雷定中间体主峰保留时间在7.15min左右。
实施例3
仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；检测波长：220nm；柱温为25℃；流速1.2mL/min；乙腈和0.03mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比50:50作为流动相。
实验步骤：将伊伐布雷定中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含伊伐布雷定中间体1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液5μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。
附图3表明，在该色谱条件下，伊伐布雷定中间体主峰及其杂质峰可以完全分离，且伊伐布雷定中间体主峰保留时间在5.90min左右。
实施例4
系统适应性实验
仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；检测波长：220nm；柱温为25℃；流速1.0mL/min；乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比40:60作为流动相。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，分别计算伊伐布雷定中间体主峰峰面积以及保留时间的相对标准偏差，实验结果见表1。
表1伊伐布雷定中间体系统适用性实验结果
由表1可知，伊伐布雷定中间体主峰与相邻杂质峰的分离度均大于1.5，主峰的对称因子适宜，理论塔板数较高，主峰峰面积的相对标准偏差为0.88%，主峰保留时间的相对标准偏差为0.05%。可见，该色谱条件下，伊伐布雷定中间体及其杂质可以完全分离，而且相对标准偏差较小，所得结果稳定可靠。
实施例5
重复性实验
仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；检测波长：220nm；柱温为25℃；流速1.0mL/min；乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比40:60作为流动相。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，同法配制6份供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，按面积归一化法计算伊伐布雷定中间体含量，并计算其相对标准偏差，实验结果见表2。
表2伊伐布雷定中间体重复性实验结果
由表2可知，各供试品溶液中伊伐布雷定中间体的含量没有明显差异，相对标准偏差为0.01％，可见本分析检测方法的重复性良好。
实施例6
耐用性实验
仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：WelchUltimateXB-C18（4.6×250mm，5μm）；检测波长：220nm；乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液（1L溶液中加入磷酸1mL）按体积比40:60作为流动相。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。分别通过改变柱温、流速和检测波长，记录伊伐布雷定中间体主成分含量的变化情况（按面积归一化法计算），实验结果见表3。
表3伊伐布雷定中间体耐用性实验结果
由表3可知，改变柱温（±5℃）、流速（±0.1mL/min）和检测波长（±5nm）后，伊伐布雷定中间体含量的测定结果没有明显差异，可见本发明分析检测方法的耐用性良好。
Claims (1)
1.一种伊伐布雷定中间体的分析检测方法，所述中间体为3-{3-[((7S)-3,4-二甲氧基-8-双环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯)甲基-甲氨基]丙基}-7,8-二甲氧基-1,3,4,5–四氢-2H-3-苯并氮杂卓-4-烯-2-酮，采用高效液相色谱法进行分析检测，其特征在于包括以下步骤：
A、取伊伐布雷定中间体样品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含伊伐布雷定中间体1.0mg的样品溶液；
B、设置流动相流速为1mL/min，检测波长220nm，柱温为25℃；
C、取A的样品溶液5μL注入液相色谱仪，完成伊伐布雷定中间体的分析检测；
其中，色谱柱：C18，4.6×250mm，5μm；
流动相：乙腈和0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液，按体积比40:60作为流动相，其中1L辛烷磺酸钠溶液中加入磷酸1mL。
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