CN104122361A

CN104122361A - 利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法

Info

Publication number: CN104122361A
Application number: CN201410379846.0A
Authority: CN
Inventors: 秦巨波; 蔡波涛; 郭云梅; 沈福星; 周军伟; 张群
Original assignee: Humanwell Puracap Pharamaceuticals Wuhan Co ltd
Current assignee: Humanwell Puracap Pharamaceuticals Wuhan Co ltd
Priority date: 2014-08-04
Filing date: 2014-08-04
Publication date: 2014-10-29
Anticipated expiration: 2034-08-04
Also published as: CN104122361B

Abstract

本发明公开了一种利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法，其中，氨美愈软胶囊含有对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚，高效液相色谱分析条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液作为流动相A；以及采用乙腈作为流动相B。该方法能够有效地同时检测氨美愈软胶囊中的四种有效成分，并且该方法操作简单、分析快捷、重复性好、具有较好的专属性，能够更有效、更全面的控制氨美愈软胶囊制剂的产品质量。

Description

利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体而言，本发明涉及一种利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法。

背景技术

感冒是一种最常见的呼吸系统疾病。用于治疗感冒的药物有许多种，由于西药的安全性比较透明，见效快，因此很受人们青睐。感冒药多为复方制剂，对于西药而言，感冒药的组成主要包括以下几类药物：解热镇痛药、肾上腺素受体激动剂、抗组胺药、镇咳祛痰药、抗病毒药等。氨美愈软胶囊(英文名为：Daytime Severe Cold and Flu Capsules)每粒是由对乙酰氨基酚(325mg)、盐酸去氧肾上腺素(5mg)、愈创木酚甘油醚(200mg)、氢溴酸右美沙芬(10mg)这四种药物组分组成的复方制剂，用于治疗感冒。但现有技术中尚无同时测定氨美愈软胶囊中对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、愈创木酚甘油醚、氢溴酸右美沙芬含量方法的公开报道。因此，建立一套科学有效的、能同时测定氨美愈软胶囊中四种药物组分的含量分析方法，对于更有效、更全面的控制氨美愈软胶囊制剂的产品质量，具有重要的应用价值。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法，该方法可以实现同时对氨美愈软胶囊中的对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚进行检测，并且检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法，所述氨美愈软胶囊含有对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚，其特征在于，所述高效液相色谱分析条件为：

色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；

采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液作为流动相A；以及

采用乙腈作为流动相B。

根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法可以实现同时对氨美愈软胶囊中的对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚进行检测，其检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性，并且加入辛烷磺酸钠离子对试剂后，可以增加盐酸去氧肾上腺素的保留，改善峰形，增加分离度，同时，流动相中加入0.1v％的三乙胺，可以有效改善氢溴酸右美沙芬的拖尾现象，避免了可能存在的愈创木酚甘油醚异构体对氢溴酸右美沙芬测定的干扰，并且对不同色谱柱均有很好的耐受性；另外，采用该方法各组分分离完全，峰形好，并且供试品测定各组分响应值均在适当的范围，溶剂没有危害。

另外，根据本发明上述实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法还可以具有如下附加的技术特征：

在本发明的一些实施例中，所述辛烷磺酸钠浓度为2～10毫摩尔/升，优选5毫摩尔/升。由此，可以显著提高氨美愈软胶囊中各组分的分离度。

在本发明的一些实施例中，采用磷酸或醋酸调节所述流动相A的pH为2.5～3.5，优选3.0。由此，可以进一步提高氨美愈软胶囊中各组分的分离度。

在本发明的一些实施例中，检测波长为270～280nm，优选278nm。由此，可以显著提高检测灵敏度。

在本发明的一些实施例中，所述色谱柱的柱温为30～40摄氏度，优选35摄氏度。由此，可以进一步提高氨美愈软胶囊中各组分的分离度。

在本发明的一些实施例中，所述色谱柱中填料的粒径为2～5μm。由此，可以进一步提高氨美愈软胶囊中各组分的分离度。

在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱分析采用4.6×150mm，5μm的AgilentSB-C18色谱柱，采用0.1v％三乙胺与pH为3.0的辛烷磺酸钠混合溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：

时间(min)	流动相A(V％)	流动相B(V％)
			0	90	10
1	90	10
			16	50	50
17	90	10
			21	90	10

其中，流动相A的pH为3.0，柱温为40摄氏度，检测波长278nm，流动相的流速为1.2毫升/分钟，进样体积为20μL。由此，可以实现同时对氨美愈软胶囊中各组分进行检测。

在本发明的一些实施例中，对照溶液为对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚的混合溶液，其中，所述对乙酰氨基酚浓度为13.0～26.0μg/mL，所述盐酸去氧肾上腺素浓度为10.0～20.0μg/mL，所述氢溴酸右美沙芬浓度为20.0～40.0μg/mL，所述愈创木酚甘油醚浓度为8.0～16.0μg/mL。由此，可以在尽量减少进样量的同时，使得响应值满足测定的需要，避免连续高浓度进样，延长色谱柱的使用寿命，并且在该浓度下，主要成分之间及主要成分与其他峰之间完全分离。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1是实施例1中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定对照溶液HPLC图谱示意图；

图2是实施例1中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测对乙酰氨基酚、愈创木酚甘油醚)；

图3是实施例1中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬)；

图4是实施例2中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定对照溶液HPLC图谱示意图；

图5是实施例2中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬)；

图6是实施例3中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定对照溶液HPLC图谱示意图；

图7是实施例3中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测对乙酰氨基酚、愈创木酚甘油醚)；

图8是实施例3中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬)；

图9是实施例4中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定对照溶液HPLC图谱示意图；

图10是实施例4中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测对乙酰氨基酚、愈创木酚甘油醚)；

图11是实施例4中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬)；

图12是对比例中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定对照溶液HPLC图谱示意图；

图13是对比例中利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法测定样品溶液HPLC图谱示意图(测盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬)。

具体实施方式

下面通过参考本发明的实施例对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。除非特殊说明，在实施例中所进行的操作均为按照《中华人民共和国药典》以及本领域中公知的方法进行的。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法。根据本发明的实施例，该氨美愈软胶囊含有对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚，根据本发明的具体实施例，氨美愈软胶囊中含有对乙酰氨基酚325mg、盐酸去氧肾上腺素5mg、氢溴酸右美沙芬10mg和愈创木酚甘油醚200mg。

根据本发明的实施例，对乙酰氨基酚(式1)中文别名为扑热息痛，为乙酰苯胺类解热镇痛药。通过抑制炎性介质前列腺素的合成，产生解热镇痛作用，其对中枢环氧酶的抑制效应与阿司匹林相似，但外周作用明显减弱，表现为解热镇痛作用强而持久，一般剂量较少引起不良反应；盐酸去氧肾上腺素(式2)为肾上腺素受体激动药，是直接作用于受体的拟交感胺类药，但有时也间接通过促进去甲肾上腺素自贮存部位释放而生效，目前在美国，去氧肾上腺素是OTC药中最常用的减充血剂，其可作为减充血剂是由于它能够收缩鼻腔中的血管，因而减少鼻窦血管中的血流，从而减少黏膜水肿；氢溴酸右美沙芬(式3)为左吗啡喃的右旋异构体，因其具有非麻醉性中枢性镇咳作用而广泛用于临床镇咳治疗；愈创木酚甘油醚(式4)具有祛痰平喘作用，配方中茶碱能松弛支气管平滑肌，起平喘作用，愈创木酚甘油醚系祛痰剂，且能增加茶碱的溶解度，促进茶碱的吸收，提高其生物利用度。

根据本发明的实施例，该高效液相色谱分析可以采用十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液作为流动相A；以及采用乙腈作为流动相B。

发明人惊奇地发现，通过采用该检测条件可以实现同时对氨美愈软胶囊中的对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚进行检测，其检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性，并且加入辛烷磺酸钠离子对试剂后，可以增加盐酸去氧肾上腺素的保留，改善峰形，增加分离度，同时，流动相中加入0.1v％的三乙胺，可以有效改善氢溴酸右美沙芬的拖尾现象，并且对不同色谱柱均有很好的耐受性，另外，采用该方法各组分分离完全，峰形好，并且供试品测定各组分响应值均在适当的范围，溶剂没有危害。

根据本发明的实施例，利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法采用的检测条件并不受特别限制，根据本发明的具体实施例，可以采用如下色谱条件：检测波长可以为278nm，色谱柱的柱温可以为30～40摄氏度，优选35摄氏度，并且色谱柱中填料的粒径可以为2～5μm，辛烷磺酸钠缓冲液中辛烷磺酸钠浓度可以为2～10毫摩尔/升，采用磷酸或醋酸调节流动相A的pH为2.5～3.5，优选3.0，流动相的流速可以为1.0～1.5毫升/分钟。

根据本发明的实施例，可以采用4.6×150mm，5μm的Agilent SB-C18色谱柱，采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液作为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：

其中，流动相A的pH为3.0，柱温为40摄氏度，检测波长278nm，流动相的流速为1.2毫升/分钟，进样体积为20μL。根据本发明的具体实施例，流动相A可以采用下列方法制备：称取0.47～2.3g辛烷磺酸钠至1L水中，溶解配制成2～10毫摩尔/升辛烷磺酸钠溶液，然后加入1mL三乙胺(占体积比例为0.1％，即0.1％三乙胺)，用磷酸或醋酸调节pH至2.5-3.5，脱气，过滤，得到为流动相A。由此，可以有效实现对四种组分的同时检测。

根据本发明的实施例，利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法包括：首先，分别制备对照溶液和样品溶液，接下来用高效液相色谱法测定氨美愈软胶囊中四种有效组分的含量，最后对数据进行处理，进行含量的计算。

根据本发明的实施例，对照样品是按照下列方法制备的：分别准确称量对乙酰氨基酚对照品，盐酸去氧肾上腺素对照品，愈创木酚甘油醚对照品，氢溴酸右美沙芬对照品适量，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取2.0mL至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，浓度分别为：对乙酰氨基酚10.0～26.0μg/mL，盐酸去氧肾上腺素10.0～20.0μg/mL，愈创木酚甘油醚8.0～16.0μg/mL，氢溴酸右美沙芬15.0～40.0μg/mL，备用。

根据本发明的实施例，对照溶液是按照下列方法制备的：分别准确称量对乙酰氨基酚对照品65mg，盐酸去氧肾上腺素对照品50mg，愈创木酚甘油醚对照品40mg，氢溴酸右美沙芬对对照品100mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取2.0mL混合溶液至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。根据本发明的实施例，对乙酰氨基酚浓度可以为10.0～26.0μg/mL，优选13.0μg/mL，盐酸去氧肾上腺素浓度可以为10.0～20.0μg/mL，优选10.0μg/mL，愈创木酚甘油醚浓度可以为8.0～16.0μg/mL，优选8.0μg/mL，氢溴酸右美沙芬浓度可以为15.0～40.0μg/mL，优选20.0μg/mL。

根据本发明的具体实施例，样品溶液可以按照如下方法制备：取氨美愈软胶囊5粒，置于250mL容量瓶中，50摄氏度水浴加热并振摇，使完全溶解，放置至室温，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取5mL置50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬样品溶液，然后精密移取该续滤液2mL，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，并摇匀，作为对乙酰氨基酚、愈创木酚甘油醚样品溶液。

根据本发明的实施例，在对各组分进行测定时，分别精密吸取对照溶液与样品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图峰面积，即得。对数据进行处理，计算各组分的含量。

Aspl＝供试品溶液中对各组分的峰面积；

Astd＝对照溶液中对照峰的峰面积；

Std.Wt＝对照品称样量，单位mg；

P＝对照品纯度；

D＝样品稀释体积；

Label claim＝各组分标示量，单位mg。

发明人发现氨美愈软胶囊制剂中各有效组分与相近峰分离完全，峰形好，且阴性无干扰。

如上所述，根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法可具有选自下列的优点至少之一：

根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法可以实现对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、愈创木酚甘油醚、氢溴酸右美沙芬的同时测定，并且该方法操作简单、分析快捷、重复性好、具有较好的专属性，且该分析方法具有较高的效率，从而节省了成本；

根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法在流动相体系中加入辛烷磺酸钠离子对试剂，增加了盐酸去氧肾上腺素的保留，改善了峰形，增加了分离度；

根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法在流动相中加入0.1v％三乙胺，有效改善了氢溴酸右美沙芬拖尾，并且对不同色谱柱均有很好的耐受性；

根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法使得各组分分离完全，峰形好，供试品测定各组分响应值均在适当的范围，溶剂没有危害；

根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法先进，测定准确性高，能够更有效、更全面的控制氨美愈软胶囊制剂的产品质量，具有重要的生产和应用价值。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实施例1

色谱条件：

高效液相色谱仪：Waters e2996，PDA检测器；色谱柱：Agilent SB-C18，4.6×150mm，5μm；采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液(称取1.1g辛烷磺酸钠至1L水中，加入1mL三乙胺，然后用磷酸调pH至3.0，脱气，过滤)作为流动相A，采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如表1；流速：1.2毫升/分钟；检测波长：278nm；柱温：35℃；进样体积：20μL；

表1

时间(min)	流动相A(V％)	流动相B(V％)
			0	90	10

1	90	10
			16	50	50
17	90	10
			21	90	10

实验步骤：

(1)对照溶液的制备：分别准确称量对乙酰氨基酚对照品65mg，盐酸去氧肾上腺素对照品50mg，愈创木酚甘油醚对照品40mg，氢溴酸右美沙芬对照品100mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，然后精密移取2.0mL至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得；

(2)样品溶液的制备：取氨美愈软胶囊5粒，置于250mL容量瓶中，50℃水浴加热并振摇，使完全溶解，放置至室温，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取5mL置50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬样品溶液，然后精密移取该续滤液2mL，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，并摇匀，作为对乙酰氨基酚、愈创木酚甘油醚样品溶液。

(3)分别取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算各药物组分的含量，其HPLC图谱如图1～3所示。

实施例2

色谱条件：

高效液相色谱仪：Waters e2996，PDA检测器；色谱柱：Agilent SB-C18，4.6×150mm，5μm；采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液(称取1.5g辛烷磺酸钠至1L水中，加入1mL三乙胺，然后用磷酸调pH至3.5，脱气，过滤)作为流动相A，采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如表2；流速：1.2毫升/分钟；检测波长：278nm；柱温：35℃；进样体积：20μL；

表2

时间(min)	流动相A(V％)	流动相B(V％)
			0	90	10
1	90	10
			16	45	55
17	90	10
			21	90	10

实验步骤：同实施例1。

其HPLC图谱如图4～5所示。

实施例3

色谱条件：

高效液相色谱仪：Waters e2996，PDA检测器；色谱柱：Agilent SB-C18，4.6×150mm，5μm；采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液(称取1.3g辛烷磺酸钠至1L水中，加入1mL三乙胺，然后用磷酸调pH至2.5，脱气，过滤)作为流动相A，采用乙腈作为流动相B,进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如表3；流速：1.2毫升/分钟；检测波长：278nm；柱温：35℃；进样体积：20μL；

表3

时间(min)	流动相A(V％)	流动相B(V％)
			0	90	10
1.5	90	10
			16	50	50
17	90	10
			21	90	10

实验步骤：同实施例1。

其HPLC图谱如图6～8所示。

实施例4

色谱条件：

高效液相色谱仪：Waters e2996，PDA检测器；色谱柱：Dikma C18，4.6×150mm，5μm；采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液(称取1.1g辛烷磺酸钠至1L水中，加入1mL三乙胺，然后用磷酸调pH至3.0，脱气，过滤)作为流动相A，采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如表1；流速：1.2毫升/分钟；检测波长：278nm；柱温：35℃；进样体积：20μL；

实验步骤：同实施例1。

其HPLC图谱如图9～11所示。

对比例

色谱条件：

高效液相色谱仪：Waters e2996，PDA检测器；色谱柱：依利特hypersil ODS2，4.6×150mm，5μm；采用辛烷磺酸钠溶液(称取1.1g辛烷磺酸钠至1L水中，然后用磷酸调pH至3.0，脱气，过滤)作为流动相A，采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件同表1；流速：1.2毫升/分钟；检测波长：278nm；柱温：35℃；进样体积：20μL。

实验步骤：同实施例1。

其HPLC如图12～13所示。

结论：参考图谱可知，图12中氢溴酸右美沙芬的峰形差且有拖尾现象，对照图1～11可以明显看出，实施例1～4的方法较对比例实现了更好的分离四种药物组分的实施效果，并且各组分分离完全，峰形好。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种利用高效液相色谱分析氨美愈软胶囊的方法，所述氨美愈软胶囊含有对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚，其特征在于，所述高效液相色谱分析条件为：

色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；

采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液作为流动相A；以及

采用乙腈作为流动相B。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辛烷磺酸钠浓度为2～10毫摩尔/升，优选5毫摩尔/升。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用磷酸或醋酸调节所述流动相A的pH为2.5～3.5，优选3.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为270～280nm，优选278nm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30～40摄氏度，优选35摄氏度。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱中填料的粒径为2～5μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析采用4.6×150mm，5μm的Agilent SB-C18色谱柱，采用含有0.1v％三乙胺的辛烷磺酸钠溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：

其中，流动相A的pH为3.0，柱温为40摄氏度，检测波长278nm，流动相的流速为1.2毫升/分钟，进样体积为20μL。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对照溶液为对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚的混合溶液，

其中，所述对乙酰氨基酚浓度为13.0～26.0μg/mL，所述盐酸去氧肾上腺素浓度为10.0～20.0μg/mL，所述氢溴酸右美沙芬浓度为20.0～40.0μg/mL，所述愈创木酚甘油醚浓度为8.0～16.0μg/mL。