CN109406646B - 盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法 - Google Patents

盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1‑氯甲基‑3,4‑二甲氧基苯的含量检测方法，包括以下步骤(1)将待检测样品用含有胺类衍生剂的溶剂溶解，进行胺类物质衍生；(2)胺类物质衍生后的样品用含有三重四级杆及电喷雾离子源的高效液相色谱‑质谱联用仪进行检测，胺类物质衍生物定量离子为150.9，高效液相色谱的固定相为C18色谱柱，流动相为缓冲盐与有机溶剂的混合液，缓冲盐的体积百分数为50％～90％，有机溶剂的体积百分数为10％～50％，缓冲盐为铵盐，有机溶剂为乙腈。该方法灵敏度高，提高了检测精度，为盐酸伊伐布雷定原料药的分析提供了便利，从而使得盐酸伊伐布雷定的质量可控，为盐酸伊伐布雷定实现工业化生产提供了条件。

Description

盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯 的含量检测方法
技术领域
本发明涉及盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法。
背景技术
盐酸伊伐布雷定为一种抗心绞痛药，具有良好的抗心绞痛和抗心肌缺血作用，其分子式为C27H36N2O5·HCl，化学名为3-(3-{[((7S)-3,4-二甲氧基耳环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-7-基)甲基)]-甲基氨基}丙基)-7,8-二甲氧基-1,3,4,5-四氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮盐酸盐，其结构式为
Figure BDA0001795139970000011
基因毒性杂质(或遗传毒性杂质，Genotoxic lmpurity)是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。基因毒性物质的特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁，近年来也越来越多的出现因为在已上市药品中发现痕量的基因毒性杂质残留而发生大范围的医疗事故，因此，测定基因毒性杂质的含量对于最终产品的质量控制是非常重要的。根据现有的指导原则ICHM7，使用两个相互补充的(Q)SAR预测方法对盐酸伊伐布雷定中可能存在的杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯进行评估，其为第3类基因毒性杂质，其限度较低，测定及控制极为困难，检测不灵敏，难以进行准确检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种通过对1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯进行衍生后再检测从而提高检测精度的盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：包括以下步骤
(1)将待检测样品用含有胺类衍生剂的溶剂溶解，进行胺类物质衍生；
(2)胺类物质衍生后的样品用含有三重四级杆及电喷雾离子源的高效液相色谱-质谱联用仪进行检测，其中，胺类物质衍生物定量离子为150.9，高效液相色谱的固定相为C18色谱柱，流动相为缓冲盐与有机溶剂的混合液，所述缓冲盐的体积百分数为50％～90％，所述有机溶剂的体积百分数为10％～50％，所述缓冲盐为铵盐，所述有机溶剂为乙腈。
优选地，所述铵盐为甲酸铵或乙酸铵。
优选地，所述缓冲盐的pH值范围为7～8。
优选地，步骤(1)中采用二乙胺作为胺类衍生剂。
优选地，步骤(1)中二乙胺的体积浓度为0.2％～1％，衍生温度为40～60℃，衍生时间为3～5h。
优选地，步骤(2)中所述流动相中缓冲盐与有机溶剂的初始比例为体积比90:10。
优选地，步骤(2)中所述流动相的流速为0.3mL/min。
优选地，步骤(2)中所述C18色谱柱的柱温为25～35℃。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明先利用胺类衍生剂对1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯进行衍生，再采用高效液相色谱-质谱联用仪对其进行检测，灵敏度高，定量限18.8ppm，检测限9.3ppm；同时提高了检测精度，方法重现性好，连续进样相对标准偏差1.89％，为盐酸伊伐布雷定原料药的分析提供了便利，从而使得盐酸伊伐布雷定的质量可控，为盐酸伊伐布雷定实现工业化生产提供了条件。
附图说明
图1为本发明实施例的空白溶剂质谱图；
图2为本发明实施例的1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯衍生物质谱图；
图3为本发明实施例的盐酸伊伐布雷定中1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯检测质谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：
本实施例盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法为：
色谱柱：Poroshell 120EC C18(50×3.0mm,2.7μm)色谱柱，柱温30℃；
缓冲盐：10mM pH7.5甲酸铵溶液；
流速：0.3ml/min；
梯度：
时间 缓冲盐 乙腈
0～5 90 10
5～10 90～50 10～50
10～12 50 50
12～12.1 50～90 50～10
12.1～20 90 10
离子源:电喷雾离子源；
气体温度：350℃；
气体流速：11L/min；
扫描模式：MRM；
极性：正；
母离子：224.2；
子离子：150.9,106.9；
取盐酸伊伐布雷定适量，用二乙胺乙腈溶液溶解并稀释成每1ml中约含有1mg的溶液，作为供试品溶液；取1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯适量，用二乙胺乙腈溶液稀释成每1ml约含有0.93μg的溶液，作为对照品储备液。取适量对照品储备液稀释成每1ml约含有0.0093～0.186μg的溶液，作为校准溶液。校准溶液及供试品溶液放置于60℃下衍生3小时，冷却至室温。精密量取上述二乙胺乙腈溶液、供试品溶液、校正溶液各5μL，注入液质联用仪，记录质谱图，如图1～3。空白溶液二乙胺乙腈溶液无干扰，1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯衍生物母离子与子离子均符合要求，采用校准溶液曲线计算杂质含量。样品中未检出1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯，加标限度杂质溶液93.41ppm，回收率为110.4％，结果准确可靠。
实施例2：
本实施例盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法为：
色谱柱：Poroshell 120EC C18(50×3.0mm,2.7μm)色谱柱，柱温30℃；
缓冲盐：10mM pH7.5甲酸铵溶液；
流速：0.3ml/min；
梯度：
Figure BDA0001795139970000031
Figure BDA0001795139970000041
离子源:电喷雾离子源；
气体温度：345℃；
气体流速：11L/min；
扫描模式：MRM；
极性：正；
母离子：224.2；
子离子：150.9,106.9；
取盐酸伊伐布雷定适量，用二乙胺乙腈溶液溶解并稀释成每1ml中约含有1mg的溶液，作为供试品溶液；取1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯适量，用二乙胺乙腈溶液稀释成每1ml约含有0.93μg的溶液，作为对照品储备液。取适量对照品储备液稀释成每1ml约含有0.0093～0.186μg的溶液，作为校准溶液。校准溶液及供试品溶液放置于60℃下衍生3小时，冷却至室温。精密量取上述二乙胺乙腈溶液、供试品溶液、校正溶液各5μL，注入液质联用仪，记录质谱图，如图1～3所述。空白溶液二乙胺乙腈溶液无干扰，1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯衍生物母离子与子离子均符合，采用校准溶液曲线计算杂质含量。样品中未检出1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯，加标限度杂质溶液93.20ppm，回收率为107.0％，结果准确可靠。
实施例3：
本实施例盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法为：
色谱柱：Poroshell 120EC C18(50×3.0mm,2.7μm)色谱柱，柱温30℃；
缓冲盐：10mM pH7.5甲酸铵溶液；
流速：0.3ml/min；
梯度：
时间 缓冲盐 乙腈
0～5 90 10
5～10 90～50 10～50
10～12 50 50
12～12.1 50～90 50～10
12.1～20 90 10
离子源:电喷雾离子源；
气体温度：350℃；
气体流速：10L/min；
扫描模式：MRM；
极性：正；
母离子：224.2；
子离子：150.9,106.9；
取盐算伊伐布雷定适量，用二乙胺乙腈溶液溶解并稀释成每1ml中约含有1mg的溶液，作为供试品溶液；取1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯适量，用二乙胺乙腈溶液稀释成每1ml约含有0.93μg的溶液，作为对照品储备液。取适量对照品储备液稀释成每1ml约含有0.0093～0.186μg的溶液，作为校准溶液。校准溶液及供试品溶液放置于60℃下衍生3小时，冷却至室温。精密量取上述二乙胺乙腈溶液、供试品溶液、校正溶液各5μL，注入液质联用仪，记录质谱图，如图1～3所述。空白溶液二乙胺乙腈溶液无干扰，1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯衍生物母离子与子离子均符合，采用校准溶液曲线计算杂质含量。样品中未检出1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯，加标限度杂质溶液93.20ppm，回收率为111.8％，结果准确可靠。

Claims (6)

1.一种盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：包括以下步骤
（1）将待检测样品用含有胺类衍生剂的溶剂溶解，进行胺类物质衍生；采用二乙胺作为胺类衍生剂；
（2）胺类物质衍生后的样品用含有三重四级杆及电喷雾离子源的高效液相色谱-质谱联用仪进行检测，其中，胺类物质衍生物定量离子为150.9，高效液相色谱的固定相为C18色谱柱，流动相为缓冲盐与有机溶剂的混合液，所述缓冲盐的体积百分数为50%~90%，所述有机溶剂的体积百分数为10%~50%，所述缓冲盐为铵盐，所述有机溶剂为乙腈；
梯度：
时间 缓冲盐 乙腈 0~5 90 10 5~10 90~50 10~50 10~12 50 50 12~12.1 50~90 50~10 12.1~20 90 10
。
2.根据权利要求1所述的盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：所述铵盐为甲酸铵或乙酸铵。
3.根据权利要求1所述的盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：所述缓冲盐的pH值范围为7~8。
4.根据权利要求1所述的盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：步骤（1）中二乙胺的体积浓度为0.2%~1%，衍生温度为40~60℃，衍生时间为3~5h。
5.根据权利要求1所述的盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：步骤（2）中所述流动相的流速为0.3mL/min。
6.根据权利要求1所述的盐酸伊伐布雷定中基因毒性杂质1-氯甲基-3,4-二甲氧基苯的含量检测方法，其特征在于：步骤（2）中所述C18色谱柱的柱温为25~35℃。
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