CN111208216B - 奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法。具体地,本发明提供一种奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法,所述的方法包括:采用液相色谱法分离奈诺沙星或其盐的光学异构体,其中,所述液相色谱法的色谱条件包括流动相:所述的流动相包括流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L‑异亮氨酸、金属离子盐和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂。本发明所述的方法能够快速、简单的实现(3S,5S)型奈诺沙星或其盐与(3R,5R)型奈诺沙星或其盐的完全分离,无需使用手性色谱柱,节约色谱柱耗材费用,应用成本低。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域,具体地,涉及一种奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法。
背景技术
奈诺沙星和苹果酸奈诺沙星结构中均存在2个手性碳,可产生光学异构体,目前市场上销售的奈诺沙星或其盐(如苹果酸奈诺沙星)原料或制剂中奈诺沙星或其盐的光学异构体为(3S,5S)型,其他光学异构体(即(3R,5R)型、(3R,5S)型、(3S,5R)型)均为杂质,其中,(3S,5S)型与(3R,5R)型的奈诺沙星或其盐的分离最为困难,严重阻碍着奈诺沙星或其盐的质控分析,其中,典型地,(3S,5S)-奈诺沙星与(3R,5R)-奈诺沙星,以及(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的化学结构如下所示:
在药品质控过程中检测并控制光学异构体的含量非常有意义,现有技术中对于光学异构体的拆分,常使用手性色谱柱,但手性色谱柱价格较高而且使用寿命短,导致应用成本高,目前尚无(3S,5S)型奈诺沙星或其盐与(3R,5R)型奈诺沙星或其盐的分离测定的文献报道。
因此,本领域需要开发一种能够快速、简单和低成本的分离(3S,5S)型奈诺沙星或其盐与(3R,5R)型奈诺沙星或其盐的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够快速、简单和低成本的分离(3S,5S)型奈诺沙星或其盐与(3R,5R)型奈诺沙星或其盐的方法。
本发明的第一方面,提供一种奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法,所述的方法包括:
采用液相色谱法分离奈诺沙星或其盐的光学异构体,其中,所述液相色谱法的色谱条件包括流动相;
所述的流动相包括流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L-异亮氨酸、金属离子盐和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂。
在另一优选例中,所述的金属离子盐选自:二价金属离子盐、三价金属离子盐,或其组合。
在另一优选例中,所述的二价金属离子选自:二价铜离子、二价锌离子、二价镍离子、二价镉离子、二价汞离子、二价铁离子,或其组合。
在另一优选例中,所述的液相色谱法包括高效液相色谱法。
在另一优选例中,所述的奈诺沙星盐包括苹果酸奈诺沙星。
在另一优选例中,所述的金属离子盐选自下组:硫酸铜、硫酸锌、硫酸镍、硫酸镉、硫酸汞、硫酸亚铁、氯化铜、氯化锌、氯化镍、氯化镉、氯化汞、氯化亚铁,或其组合。
在另一优选例中,所述的水溶性有机溶剂选自下组:C1-C4醇类、C2-C4腈类,或其组合。
在另一优选例中,所述的C1-C4醇类选自下组:甲醇、乙醇、丙醇、丁醇,或其组合;和/或
所述的C2-C4腈类选自下组:乙腈、丙腈、丁腈,或其组合。
在另一优选例中,所述的丙醇包括正丙醇。
在另一优选例中,所述的流动相A和流动相B的体积比60-80:20-40。
在另一优选例中,所述的流动相A中,L-异亮氨酸的浓度为5-20mmol/L,金属离子盐的浓度为2-8mmol/L和醋酸铵的浓度为20-80mmol/L。
在另一优选例中,所述的色谱条件还包括固定相、流动相流速、色谱柱温、检测波长、洗脱程序和/或色谱柱规格。
在另一优选例中,所述的固定相为非极性键合固定相;
在另一优选例中,所述的流速为0.3-2mL/min。
在另一优选例中,所述的流速为0.5-1.5mL/min。
在另一优选例中,所述的流速为0.8-1.2mL/min。
在另一优选例中,所述的色谱柱温为30-60℃。
在另一优选例中,所述的色谱柱温为40-50℃。
在另一优选例中,所述的检测波长为300-340nm。
在另一优选例中,所述的检测波长为310-330nm。
在另一优选例中,所述的检测波长为318-322nm。
在另一优选例中,所述的洗脱程序为等度洗脱;
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;长30-300mm。
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;长50-200mm。
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;长80-120mm。
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;内径2-8mm。
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;内径3-6mm。
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;填料粒径1-10μm。
在另一优选例中,所述的色谱柱规格为;填料粒径2-5μm。
在另一优选例中,所述的非极性键合固定相选自:十八烷基硅烷键合硅胶、八烷基硅烷键合硅胶,或其组合。
在另一优选例中,所述的十八烷基硅烷键合硅胶选自下组:Poroshell EC-C18、Eclipse C18,或其组合。
在另一优选例中,所述的八烷基硅烷键合硅胶选自下组:Poroshell EC-C8、Eclipse C8,或其组合。
本发明第二方面,提供一种用于在液相色谱法中分离奈诺沙星或其盐的光学异构体拆分试剂,所述的拆分试剂包括:流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L-异亮氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂。
本发明第三方面,提供一种如本发明第二方面所述的拆分试剂的用途用于在液相色谱法中分离奈诺沙星或其盐的光学异构体。
应理解,在本发明范围内中,本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合,从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅,在此不再一一累述。
附图说明
图1为(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星分离度测定溶液的液相色谱图,配制(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品的混合溶液,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星的浓度约为1mg/mL,(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的浓度约为5μg/mL。
图2为(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星回归曲线和回归方程,该浓度范围线性良好,其中图2A为(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星回归曲线和回归方程,图2B为(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星回归曲线和回归方程。
图3为(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星原料药供试品溶液的液相色谱图,未检出(3R,5R)苹果酸奈诺沙星。
图4为(3S,5S)-奈诺沙星和(3R,5R)-奈诺沙星检测的分离度测定溶液的液相色谱图,配制(3S,5S)-奈诺沙星和(3R,5R)-奈诺沙星标准品的混合溶液,(3S,5S)-奈诺沙星的浓度约为1mg/mL,(3R,5R)-奈诺沙星的浓度约为5μg/mL。
图5为(3S,5S)-奈诺沙星原料药供试品溶液的液相色谱图,未检出(3R,5R)奈诺沙星。
图6为分离度测定溶液的液相色谱图(使用L-缬氨酸作为手性配基)。
图7为分离度测定溶液的液相色谱图(使用D-苯丙氨酸作为手性配基)。
图8为分离度测定溶液的液相色谱图(流动相A中醋酸铵的浓度为0mmol/L)。
图9为分离度测定溶液的液相色谱图(流动相A中醋酸铵的浓度为20mmol/L)。
图10为分离度测定溶液的液相色谱图(流动相A中醋酸铵的浓度为40mmol/L)。
图11为分离度测定溶液的液相色谱图(流动相A中醋酸铵的浓度为60mmol/L)。
图12为分离度测定溶液的液相色谱图(流动相A中醋酸铵的浓度为80mmol/L)。
具体实施方式
本申请的发明人经过广泛而深入地研究,首次研发出一种新的分离奈诺沙星或其盐(如苹果酸奈诺沙星)(3S,5S)型和(3R,5R)型光学异构体的方法,所述的方法包括采用高效液相色谱法分离奈诺沙星或其盐(如苹果酸奈诺沙星)的光学异构体,所述高效液相色谱法的色谱条件包括流动相,所述的流动相包括流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L-异亮氨酸、金属离子盐和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂,本发明所述的方法能够快速、简单的实现奈诺沙星或其盐(如苹果酸奈诺沙星)的(3S,5S)型和(3R,5R)型光学异构体的完全分离。在此基础上,发明人完成了本发明。
术语
除非另有定义,否则本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域普通技术人员普遍理解的含义相同。
如本文所用,术语“包含”、“包括”、“含有”可互换使用,不仅包括封闭式定义,还包括半封闭、和开放式的定义。换言之,所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
术语,“液相色谱法”是指采用输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱,对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品,由流动相带入色谱柱内,各组分在柱内分离,并进入检测器检测,由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。在本发明中,所述的液相色谱法包括高效液相色谱法。
奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法
本发明提供一种奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法,所述的方法包括:
采用液相色谱法分离奈诺沙星或其盐的光学异构体,其中,所述液相色谱法的色谱条件包括流动相:
所述的流动相包括流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L-异亮氨酸、金属离子盐和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂。
在本发明中,奈诺沙星盐指奈诺沙星与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。奈诺沙星盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是奈诺沙星与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于:盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸,苹果酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸,苯磺酸等有机酸;以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐。适合形成盐的碱包括但并不限于:氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸钠等无机碱,氨水、三乙胺、二乙胺等有机碱。代表性地,所述的奈诺沙星盐为奈诺沙星与有机酸形成的盐,如苹果酸奈诺沙星。
在本发明应当理解的是,奈诺沙星或其盐包括奈诺沙星、奈诺沙星盐或奈诺沙星和其盐的混合物等形式。
在一个优选例中,在所述的流动相A中,所述的金属离子盐包括(但不限于):二价金属离子盐、三价金属离子盐,或其组合。优选地,所述的二价金属离子包括(但不限于):二价铜离子、二价锌离子、二价镍离子、二价镉离子、二价汞离子、二价铁离子,或其组合。代表性地,所述的金属离子盐包括(但不限于):硫酸铜、硫酸锌、硫酸镍、硫酸镉、硫酸汞、硫酸亚铁、氯化铜、氯化锌、氯化镍、氯化镉、氯化汞、氯化亚铁,或其组合。
在另一优选例中,在所述的流动相A中,所述的水溶性有机溶剂包括(但不限于):C1-C4醇类、C2-C4腈类,或其组合。应当理解的是,如果C1-C4醇类或C2-C4腈类含有同分异构体,则所述的C1-C4醇类或C2-C4腈类包括其同分异构体或包括其同分异构体的混合物。
代表性地,所述的C1-C4醇类包括(但不限于):甲醇、乙醇、丙醇、丁醇,或其组合。
代表性地,所述的C2-C4腈类包括(但不限于):乙腈、丙腈、丁腈,或其组合。
在另一优选例中,所述的流动相A和流动相B的体积比60-80:20-40。
在另一优选例中,所述的流动相A中,L-异亮氨酸的浓度为5-20mmol/L,金属离子盐的浓度为2-8mmol/L和醋酸铵的浓度为20-80mmol/L。
在本发明的另一优选例中,所述的色谱条件还包括固定相、流动相流速、色谱柱温、检测波长、洗脱程序和/或色谱柱规格,其中,
所述的固定相为非极性键合固定相;
所述的流速为0.3-2mL/min,较佳地0.5-1.5mL/min,更佳地0.8-1.2mL/min;
所述的色谱柱温为30-60℃,较佳地40-50℃;
所述的检测波长为300-340nm,较佳地310-330nm,更佳地318-322nm;
所述的洗脱程序为等度洗脱;
所述的色谱柱规格为;长30-300mm,较佳地50-200mm,更佳地80-120mm,内径2-8mm,较佳地3-6mm,填料粒径1-10μm,较佳地2-5μm。
在另一优选例中,所述的非极性键合固定相包括(但不限于):十八烷基硅烷键合硅胶、八烷基硅烷键合硅胶,或其组合。
代表性地,所述的十八烷基硅烷键合硅胶选自下组:Poroshell EC-C18、EclipseC18,或其组合。
代表性地,所述的八烷基硅烷键合硅胶选自下组:Poroshell EC-C8、Eclipse C8,或其组合。
应当理解的是,本发明所述的方法适用于奈诺沙星或其盐原料药、奈诺沙星或其盐合成过程中的中间体以及任何含有(3S,5S)型和(3R,5R)型奈诺沙星或其盐的物质中的(3S,5S)型和(3R,5R)型奈诺沙星或其盐分离。
拆分试剂或其用途
本发明还提供一种用于在液相色谱法中分离奈诺沙星或其盐的光学异构体拆分试剂,所述的拆分试剂包括:流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L-异亮氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂。
在另一优选例中,对所述的拆分试剂中的流动相A和流动相B的进一步限定如上所述。
本发明还提供一种如上所述拆分试剂的用途,用于在液相色谱法中分离奈诺沙星或其盐的光学异构体。
本发明的主要优点包括:
本发明所述的奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法能够快速、简单的实现(3S,5S)型奈诺沙星或其盐与(3R,5R)型奈诺沙星或其盐的完全分离,无需使用手性色谱柱,节约色谱柱耗材费用,应用成本低。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则百分比和份数按重量计算。
具体实施方式
实施例1
苹果酸奈诺沙星光学异构体的测定
一、实验材料
Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦);
METTLER-TOLEDO XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多);
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm(安捷伦);
(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品及(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品为浙江医药股份有限公司新昌制药厂自制;甲醇为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。
二、试验方法和结果
1、溶液配制
分离度测定溶液:精密称取(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品25mg,加水溶解并稀释至100mL。精密称取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品50mg,置50mL量瓶中,精密量取上述异构体溶液1mL置于同一50mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液:精密称取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星原料药50mg,置50mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2、色谱条件
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm;
流动相A为含有L-异亮氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,L-异亮氨酸的浓度为10mmol/L,硫酸铜的浓度为5mmol/L,醋酸铵浓度为50mmol/L;流动相B为甲醇;流动相A和流动相B的体积比为70:30
洗脱程序:等度洗脱;
流速:1.0mL/min;
柱温:45℃;
检测波长:320nm。
进样体积:20μL。
3、分离度考察
精密量取分离度测定溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。色谱图见图1。结果在该色谱条件下(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星可较好分离。出峰顺序依次为(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星。两者之间的分离度为3.6,分离效果好。
4、线性关系考察
分别精密称取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品及(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品适量,加水溶解并稀释配制成每1mL含(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星分别为0.5μg,1.0μg,2.5μg,5μg,10μg的溶液,分别精密量取各线性溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。以峰面积对浓度作图,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星回归曲线和回归方程如图2所示。
(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星在0.01-0.2μg范围内线性良好。
5、灵敏度考察
精密称(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品适量,加水溶解并稀释至峰高约为基线噪音的3倍。(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的最低检出限均约为2.0×10-3μg,灵敏度高。
6、精密度考察
取分离度测定溶液,精密量取20μL注入液相色谱仪,连续进样6针,记录色谱图。(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星峰面积的RSD为0.6%,证明本发明提供的液相分析方法精密度良好。
7、加样回收率
精密称取同一批(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星原料药9份,每3份1组,每份约50mg,置于50mL量瓶中,精密加入不同体积的(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品溶液,使(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的加入量分别为125μg,250μg,500μg,再分别加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为回收率试验溶液进行分析,计算回收率。(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的平均回收率分别为106%(RSD=1%)、108%(RSD=1%)、110%(RSD=2%)。结果表明,本发明分析方法回收率良好。
8、溶液稳定性考察
取供试品溶液,分别于0、12、24、36h进样,记录色谱图。供试品溶液中(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星均未检出。结果表明,供试品溶液室温放置36h稳定。
9、(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星原料药中(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星含量测定
取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星原料药适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含1mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取0.5mL,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。另取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品各适量,用水溶解并定量稀释制成每1mL中约含(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星1mg和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星5μg的溶液,作为分离度测定溶液。分别精密量取分离度测定溶液、对照溶液及供试品溶液各20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星保留时间相同的杂质峰,按主成分自身稀释对照法计算(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的含量。分离度测定溶液色谱图见图1,供试品溶液色谱图见图3。3批样品中(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星均未检出。
实施例2-10
实施例2-10采用与实施例1相似的方法对苹果酸奈诺沙星(3S,5S)型和(3R,5R)型光学异构体进行分离,具体地,实施例2-10与实施例1的区别点在于,实施例2-10分别采用如下表1所示的流动相。
表1实施例2-10采用流动相色谱条件
实施例2-10对(3S,5S)型和(3R,5R)型苹果酸奈诺沙星的色谱分离结果表明,实施例2-10的流动相均能实现(3S,5S)型和(3R,5R)型苹果酸奈诺沙星的有效分离,分离度均大于1.5,符合分离度要求。
实施例11奈诺沙星光学异构体的测定
一、实验材料
Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦);
METTLER-TOLEDO XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多);
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm(安捷伦);
(3S,5S)-奈诺沙星标准品和(3R,5R)-奈诺沙星标准品为浙江医药股份有限公司新昌制药厂自制;甲醇为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。
二、试验方法和结果
1、溶液配制
分离度测定溶液:精密称取(3R,5R)-奈诺沙星标准品25mg,加水溶解并稀释至100mL。精密称(3S,5S)-奈诺沙星50mg标准品,置50mL量瓶中,精密量取上述(3R,5R)-奈诺沙星溶液1mL置于同一50mL量瓶中,加1mol/L盐酸溶液2mL使溶解,用水稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液:精密称取(3S,5S)-奈诺沙星原料药50mg,置50mL量瓶中,加1mol/L盐酸溶液2mL使溶解,用水稀释至刻度,摇匀,即得。
2、色谱条件
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm;
流动相A为含有L-异亮氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,L-异亮氨酸的浓度为10mmol/L,硫酸铜的浓度为5mmol/L,醋酸铵浓度为50mmol/L;流动相B为甲醇;流动相A和流动相B的体积比为60:40
洗脱程序:等度洗脱;
流速:1.0mL/min;
柱温:45℃;
检测波长:320nm。
进样体积:20μL。
3、分离度考察
精密量取分离度测定溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。色谱图见图4。结果在该色谱条件下(3S,5S)-奈诺沙星与(3R,5R)-奈诺沙星可较好分离。出峰顺序依次为(3S,5S)-奈诺沙星、(3R,5R)-奈诺沙星。两者之间的分离度为3.9,分离效果好。
4、(3S,5S)-奈诺沙星原料药中(3R,5R)-奈诺沙星含量测定
取(3S,5S)-奈诺沙星原料约50mg,精密称定,置50mL量瓶中,加1mol/L盐酸溶液2mL使溶解,用水稀释至刻度,作为供试品溶液;精密量取0.5mL,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。分别精密量取对照溶液及供试品溶液各20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与(3R,5R)-奈诺沙星保留时间相同的杂质峰,按主成分自身稀释对照法计算(3R,5R)-奈诺沙星的含量。供试品溶液色谱图见图5。样品中未检出(3R,5R)-奈诺沙星。
实施例12-20
实施例12-20采用与实施例11相似的方法对奈诺沙星(3S,5S)型和(3R,5R)型光学异构体进行分离,具体地,实施例12-20与实施例11的区别点在于,实施例12-20分别采用如下表2所示的流动相。
实施例12-20采用的流动相色谱条件
实施例12-20对(3S,5S)型和(3R,5R)型奈诺沙星的色谱分离结果表明,实施例12-20的流动相均能实现(3S,5S)型和(3R,5R)型奈诺沙星的有效分离,分离度均大于1.5,符合分离度要求。
对比例1
使用L-缬氨酸作为手性配基对苹果酸奈诺沙星光学异构体进行分离
一、实验材料
Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦);
METTLER-TOLEDO XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多);
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm(安捷伦);
(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品及(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品为浙江医药股份有限公司新昌制药厂自制;甲醇为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。
二、试验方法和结果
1、溶液配制
分离度测定溶液:精密称取(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品25mg,加水溶解并稀释至100mL。精密称取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品50mg,置50mL量瓶中,精密量取上述(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品溶液1mL置于同一50mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2、色谱条件
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm;
流动相A为含有L-缬氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,L-缬氨酸的浓度为10mmol/L,硫酸铜的浓度为5mmol/L,醋酸铵浓度为50mmol/L;流动相B为甲醇;流动相A和流动相B的体积比为70:30
洗脱程序:等度洗脱;
流速:1.0mL/min;
柱温:45℃;
检测波长:320nm。
进样体积:20μL。
3、分离度考察
精密量取分离度测定溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。色谱图见图6。结果在该色谱条件下(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星不能有效分离。
对比例2
使用D-苯丙氨酸作为手性配基对苹果酸奈诺沙星光学异构体进行分离
一、实验材料
Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦);
METTLER-TOLEDO XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多);
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm(安捷伦);
(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品及(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品为浙江医药股份有限公司新昌制药厂自制;甲醇为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。
二、试验方法和结果
1、溶液配制
分离度测定溶液:精密称取(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品25mg,加水溶解并稀释至100mL。精密称取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品50mg,置50mL量瓶中,精密量取上述(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品溶液1mL置于同一50mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2、色谱条件
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm;
流动相A为含有D-苯丙氨酸和硫酸铜的水,D-苯丙氨酸的浓度为8mmol/L,硫酸铜的浓度为5mmol/L;流动相B为甲醇;(由于醋酸铵的加入使pH值增大,而D-苯丙氨酸和硫酸铜在pH值增大的情况下会析出,所以流动相A中不加醋酸铵,D-苯丙氨酸的浓度为8mmol/L),流动相A和流动相B的体积比为70:30
洗脱程序:等度洗脱;
流速:1.0mL/min;
柱温:45℃;
检测波长:320nm。
进样体积:20μL。
3、分离度考察
精密量取分离度测定溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。色谱图见图7。结果在该色谱条件下(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星不能有效分离。
对比例3
流动相A中醋酸铵的浓度分别为0mmol/L、20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L时,对苹果酸奈诺沙星光学异构体进行分离
一、实验材料
Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦);
METTLER-TOLEDO XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多);
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm(安捷伦);
(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品及(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星标准品为浙江医药股份有限公司新昌制药厂自制;甲醇为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。
二、试验方法和结果
1、溶液配制
分离度测定溶液:精密称取(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星25mg,加水溶解并稀释至100mL。精密称取(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星标准品50mg,置50mL量瓶中,精密量取上述(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星溶液1mL置于同一50mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2、色谱条件
色谱柱:Agilent Poroshell EC-C18 2.7μm 4.6×100mm;
流动相A为含有L-异亮氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,L-异亮氨酸的浓度为10mmol/L,硫酸铜的浓度为5mmol/L,醋酸铵浓度分别为0mmol/L、20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L;流动相B为甲醇;流动相A和流动相B的体积比为70:30
洗脱程序:等度洗脱;
流速:1.0mL/min;
柱温:45℃;
检测波长:320nm。
进样体积:20μL。
3、分离度考察
精密量取分离度测定溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。醋酸铵浓度为0mmol/L的色谱图见图8,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星未分离。
醋酸铵浓度为20mmol/L的色谱图见图9,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的分离度为5.7。
醋酸铵浓度为40mmol/L的色谱图见图10,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的分离度为5.2。
醋酸铵浓度为60mmol/L的色谱图见图11,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的分离度为4.5。
醋酸铵浓度为80mmol/L的色谱图见图12,(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的分离度为4.4。
图8-12的结果显示醋酸铵的加入会使色谱峰的保留时间延长和改善色谱峰拖尾现象,从而提高分离度,可以看出醋酸铵浓度在20-80mmol/L范围内能够保证(3S,5S)-苹果酸奈诺沙星和(3R,5R)-苹果酸奈诺沙星的完全分离。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (7)
1.一种奈诺沙星或其盐的光学异构体的分离方法,其特征在于,所述的方法包括:
采用液相色谱法分离(3S,5S)型奈诺沙星与(3R,5R)型奈诺沙星,或(3S,5S)型苹果酸奈诺沙星与(3R,5R)型苹果酸奈诺沙星,其中,所述液相色谱法的色谱条件包括流动相、固定相、检测波长和洗脱程序;
所述的流动相包括流动相A和流动相B,所述的流动相A包括含有L-异亮氨酸、金属离子盐和醋酸铵的水溶液,所述的流动相B包括水溶性有机溶剂;
所述的金属离子盐选自硫酸铜、硫酸锌、硫酸镉、硫酸汞、硫酸亚铁、氯化镍、氯化亚铁的一种;
所述的水溶性有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、丁醇、乙腈、丙腈、丁腈的一种;
所述的流动相A中,L-异亮氨酸的浓度为5-20mmol/L,金属离子盐的浓度为2-8mmol/L和醋酸铵的浓度为20-80mmol/L;
所述的流动相A和流动相B的体积比60-80:20-40;
所述的固定相为非极性键合固定相,所述的非极性键合固定相选自十八烷基硅烷键合硅胶;所述的检测波长为300-340nm;所述的洗脱程序为等度洗脱。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的金属离子盐为硫酸铜。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相A为含有L-异亮氨酸、硫酸铜和醋酸铵的水溶液,L-异亮氨酸的浓度为10mmol/L,硫酸铜的浓度为5mmol/L,醋酸铵浓度为50mmol/L;所述流动相B为甲醇;流动相A和流动相B的体积比为70:30。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的色谱条件还包括:
流速为0.3-2mL/min;
色谱柱温为30-60℃;
色谱柱规格为:长30-300mm,内径2-8mm,填料粒径1-10μm。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的十八烷基硅烷键合硅胶选自下组:Poroshell EC-C18、Eclipse C18,或其组合。
6.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的流速为0.5-1.5mL/min;
所述的色谱柱温为40-50℃;
所述的检测波长为310-330nm;
所述的色谱柱规格为:长50-200mm,内径3-6mm,填料粒径2-5μm。
7.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的流速为0.8-1.2mL/min;
所述的检测波长为318-322nm;
所述的色谱柱规格为:长80-120mm,内径3-6mm,填料粒径2-5μm。
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