发明内容
本发明目的在于提供一种滑子菇菌株,该菌株子实体通体洁白,菇形美观,食时粘滑、细嫩、爽口。
本发明另一目的在于提供上述滑子菇菌株的栽培方法。
为实现上述目的,本发明的技术方案如下:
一种滑子菇(Pholiotanameko)菌株森滑1号,已于2013年1月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为:CGMCCNo.7110。
森滑1号的发现和培育过程
森滑1号是本发明人于2010年9月20日在河北省平泉县卧龙镇一个滑子菇早丰112(早丰112是目前在我国栽培面积较大的滑子菇品种)的出菇棚中发现一个子实体为白色的滑子菇,经本发明人对该白色滑子菇的子实体进行组织分离后获得菌丝体,然后选用多种培养基进行提纯、筛选及复壮后得到纯菌丝体,又经过约3年的反复试验栽培,最终获得人工栽培的白色的滑子菇,并将该菌株命名为森滑1号。
所述的森滑1号的分类鉴定:
(一)森滑1号菌株的形态特征分类鉴定:
森滑1号菌株子实体的基本形态特征为:子实体个体较小,丛生;菌盖半球形,直径3.0-8.0cm,初期扁半球形,后近扁平,表面平滑至有粘液物质,边缘平滑,初期内卷,而有粘的菌膜残片;菌褶直生、密、不等长,边缘常常波状;菌柄下部略粗、近圆柱状、中空、长2.5-8.0cm,直径0.3-1.3cm;菌环幼时粘、膜质,覆盖于菌盖下方,开伞后残留在菌柄上,或不明显;孢子椭圆形至卵形,光滑,(4-6um)×(2.5-3um)。森滑1号菌株子实体形态特征与《中国大型真菌》(卯晓岚主编.2000.河南科技出版社.郑州.)中251页第638图示所述的光滑环锈伞(Pholiotanameko)的形态特征基本相同,而光滑环锈伞即为滑子菇,因此,根据上述子实体的形态特征可以确定,森滑1号在分类上属于鳞伞属滑子菇(Pholiotanameko)。
现有滑子菇子实体的菌盖为淡黄色至黄褐色,但是本发明森滑1号子实体的菌盖为白色,即森滑1号和现有其他菌株的菌盖颜色完全不同,说明森滑1号是一个新菌株。
(二)森滑1号的IGS2分子鉴定:
利用植物基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司)提取森滑1号菌丝基因组DNA,然后以森滑1号菌丝基因组DNA为模板,以下述正向引物和反向引物为引物进行PCR扩增;其中所述的正向引物和反向引物为:
正向引物:5ˊ-ACTGGCAGAATCAACCAGGTA-3ˊ(SEQIDNo:1),
反向引物:5ˊ-ACCGCATCCCGTCTGAT-3ˊ(SEQIDNo:2);
其中IGS2扩增反应体系为:dNTP(2.5mM)2μL,正向引物和反向引物(10μmol)各1.5μL,ExTaqTMDNA聚合酶0.5U,10×ExTaqPCR缓冲液5μL,模板3μL,用ddH2O补齐至50μL。IGS2的PCR扩增反应条件:94℃5min;94℃1min,57℃1min,72℃3min,共35个循环;72℃10min。电泳检测将扩增产物4μL与6×上样缓冲液1μL混合均匀,点样于1%琼脂糖凝胶上电泳,检测扩增反应结果。然后将所得PCR产物送往华大基因测序公司进行双向测序(测序实验进行一次重复),测序得其IGS2序列片段为936bp(见SEQIDNo:3)。
将所得测序结果与Genbank数据库中的其它菌种比对分析。结果在IGS2序列片段上,森滑1号与其最近的早丰112的IGS2序列仅在一个位点上有区别,分子鉴定结果表明森滑1号在分类上属于鳞伞属滑子菇(Pholiotanameko),但是森滑1号的IGS2序列与任何其他菌种皆不相同,说明森滑1号是一个新菌株。
(三)森滑1号与早丰112的拮抗试验:
试验方法:(1)制作平皿培养基,培养基采用PDA培养基,培养皿采用直径90mm规格,每皿放入PDA培养基25ml,高压灭菌,121℃,保持30分钟;自然冷却后,备用。(2)取活化的森滑1号母种及早丰112母种,分三组进行接种,第一组森滑1号与早丰112;第二组为森滑1号和森滑1号;第三组为早丰112和早丰112,每组三个重复,分别进行对峙培养;(3)用直径5mm打孔器分别打取活化后菌的菌落边缘作接种块,放置在直径90mm的培养皿距中央15mm处,菌丝朝上,间隔30mm;接种完毕后,放入恒温培养箱中,在温度为23℃、通风、避光条件下培养8天,菌种块菌丝接触,再在自然光下,培养7天,记录下各组菌丝的拮抗反应。
结果(见图1)森滑1号与早丰112品种之间存在明显的拮抗,说明森滑1号与早丰112具有显著的差异,森滑1号是一个不同于早丰112的菌株。
上述滑子菇森滑1号的栽培方法,包括如下步骤:
(1)、母种繁殖:按照重量百分比为3~5%的比例将森滑1号菌种接种于母种培养基上,在温度为18~20℃,空气相对湿度为60~70%、黑暗条件下培养15~18天,得森滑1号母种;其中所述的母种培养基的原料组成及其重量比为:土豆200~300克,麸皮50~70克,柞木屑100~150克,葡萄糖20~25克,琼脂20~25克,水1000毫升;
(2)原种培养:按照重量百分比为3~5%的比例将步骤(1)中所得的森滑1号母种接种到原种培养基上,然后在温度为20~23℃、空气相对温度为60~70%、黑暗条件下培养25~30天,得森滑1号原种;其中所述的原种培养基的原料组成成分及其重量百分比为:高粱粒83~87%,阔叶细木屑15~17%石膏粉1~2%;料水比为:1:0.50~0.55;
(3)、栽培种培养:按照重量百分比为8~10%的比例将步骤(2)中所得的森滑1号原种接种到栽培种培养基上,在温度为20~23℃、空气相对温度为60~70%、黑暗条件下培养25~30天,得森滑1号栽培种;其中所述的栽培种培养基的原料组成及其重量百分比为:阔叶木屑45~50%,1%石灰水浸泡12~14小时的玉米芯颗粒40~45%,麸皮12~14%,石膏粉1~2%;料水比为1:0.55~0.60;
(4)、栽培:
(a)、接种和菌丝萌发培养:按照栽培料干重的15~20%的比例将步骤(3)所得的森滑1号栽培种接种到栽培料中,然后包好塑料膜,在温度为8~15℃、相对湿度为60~70%、黑暗条件下培养7~10天,菌丝开始萌发并向料面生长,形成直径1-2cm菌落;其中接种方法为用打孔器在栽培料面上打孔,孔的深度为1.5~2.0厘米,接种的栽培种的菌块直径为2.0~2.5厘米,所述的栽培料的原料组成成分及其重量百分比为:阔叶树木屑75~80%、麸皮21~25%、玉米粉2~3%、石膏1~2%,料水比为1:0.55~0.60;
(b)、菌丝扩展期:在温度为18~23℃,空气相对湿度为60~70%、避光条件下培养15~20天,其中栽培料内温度不超过25℃,通过增大通风或疏散培养盘的降温方式控制料温;每天通风1-2次,保持空间空气清新,菌丝长满全部培养基料;
(c)、菌丝后熟期:在室内温度为18~23℃,料内温度为20~25℃,空气相对湿度为60~70%条件下培养13~15天,其中每天早、中、晚各通风1次,每次通风20分钟;所得培养基料内的菌丝体洁白健壮,菌丝体连接成一个整体;
(d)开盘喷水:把步骤(c)所得的后熟期的菌盘均匀摆放在层架上,层间距为25厘米,打开塑料膜,培养8~10天,每天用喷头向料面均匀喷雾化水3~4次;
(e)出菇管理:菌盘含水量达65~70%时,控制昼夜温差在5~10℃,经3~5天,料面便形成白色米粒状原基,再在室内温度为8~15℃、空气相对湿度为85~90%,黑暗或少量的散射光条件下培养2~3天,白色原基破壳而出,形成白色幼蕾;经5~7天,菇蕾长至菌盖直径大小为2cm,此期喷水应减少至每天喷1-2次,每次为5-10毫升/盘,同时向空间喷雾化水,空间相对湿度在85~90%;
(f)、采收:在菌盖直径达1.5~2cm、且菌幕未开伞时采摘。
上述方法步骤(1)中所述的母种培养基,其制备方法为:其制备方法同常规PDA培养基,但不同点是,麸皮在500~600毫升沸水中煮20~30分钟,用四层纱布过滤,取汁;柞木屑在500~600毫升沸水中煮30~35分钟,用四层纱布过滤,取汁;以上两种煮汁与土豆煮汁合并后,煮沸定容至1000毫升,然后加入葡萄糖和琼脂,待完全溶解,用母种培养基分装器分装入试管中,塞好硅胶塞,高压灭菌,灭菌参数:121℃,保持30分钟,自然冷却至75~90℃时,取出摆成斜面,冷却凝固待用,得母种培养基。
上述方法步骤(2)中所述的原种培养基的制备方法:将高粱粒用20~25℃水浸泡2~3小时,放入锅中煮沸,至高粱粒无白心,但不能开花,捞出沥干;然后加入阔叶细木屑15~17%和石膏粉1~2%,搅拌均匀后,装入菌种瓶,高压灭菌,得原种培养基。
上述方法步骤(3)中所述的栽培种培养基的制备方法:将玉米芯颗粒在1%石灰水中浸泡8~12小时;然后按照重量百分比将阔叶木屑45~50%,用1%石灰水浸泡过的玉米芯颗粒40~45%,麸皮12~14%,石膏1~2%混合均匀,再加入水,至料水均匀,并使混合物含水量达水55~60%,得栽培种培养基,装袋,灭菌待用。
上述方法步骤(4)中栽培料的制备方法为:按照重量百分比将阔叶树木屑75~80%、麸皮21~25%、玉米粉2~3%、石膏1~2%的混合,搅拌均匀,然后加入水,再次搅拌均匀至含水量达55~60%,得栽培基料;将栽培基料先均匀散铺于蒸锅内的透汽的篦子上,栽培基料厚5~10cm,通入外源热蒸汽,待培养基料面上均匀上热汽后,再向锅内料表面撒栽培基料,每次栽培基料厚控制在5~10cm,以后依次是见汽撒料,渐次铺料,直至栽培基料装满锅,用塑料膜封严压实,持续送汽,在栽培基料温达100℃条件下保持2-2.5小时,停火,自然冷却,得栽培料。
上述方法步骤(4)中(b)、包盘接种:待料温冷却至70℃~90℃时,进行包盘操作,盘的规格为45×23×4cm,内衬塑料膜,趁热包好,用0.1~0.3%高锰酸钾水溶液进行封粘;自然冷却至15~20℃时进行接种,接种工具采用打孔器,采取混播和穴播有序分布结合的方法:接种人员配备好提前消毒好的工作服后,用手打开内衬塑料膜,用打孔器在料面上打孔,通常孔数量为九个/盘,深度为1~1.5厘米,把菌种掰成2~2.5厘米大小的种块,接入孔穴中,同时把掰成细屑的菌种均匀在撒在栽培料层表面,通常菌接种量为栽培料干重的15-20%,然后迅速按原样包好塑料膜。
与现有的滑子菇相比,本发明具有的优点和有益效果:(1)、本发明提供了一个其子实体为白色的新的滑子菇菌株,是一种新型的滑子菇,丰富了滑子菇的种类。(2)、本发明滑子菇子实体通体洁白、新鲜光亮,食时与黄色滑子菇同样粘滑、细嫩、爽口,营养丰富,风味独特,极具商业开发价值。(3)、本发明滑子菇加工品质好,子实体杀青后仍然保持白色。
实施例1森滑1号的栽培
按照如下方法进行“
(1)、母种繁殖:按照重量百分比为3%的比例将本发明滑子菇(Pholiotanameko)森滑1号(已于2013年1月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为:CGMCCNo.7110。)菌种接种于母种培养基(母种培养基的原料组成及其重量比为:土豆200克,麸皮50克,柞木屑100克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升)上,在20℃,空气相对湿度在60%、黑暗条件下培养时间18天,菌丝长满试管,得森滑1号母种;(母种培养基的制备方法:制作方法同常规PDA培养基,但不同点是,麸皮单独用500毫升水煮沸,保持20分钟,用四层纱布过滤取汁,柞木屑用500毫升水煮沸,保持30分钟,用四层纱布过滤取汁,以上两种煮汁与土豆煮汁合并后,煮沸定容至1000毫升后,加入其他物质,待完全溶解后,用母种分装器分装入试管中,塞好硅胶塞,高压灭菌,灭菌参数:121℃,保持30分钟,自然冷却至90℃左右时,取出摆成斜面,冷却凝固待用)。
(2)原种培养:按照重量百分比为5%的比例将森滑1号母种接种到原种培养基(原种培养基的原料组成成分及其重量比为:高粱粒83%、阔叶细木屑16%、石膏粉1%)上,然后在23℃、空气相对温度在60%、黑暗避光条件下培养28天;得森滑1号原种(其中原种培养基的制备方法:将高粱粒用25℃左右温水浸泡2小时,放入锅中煮沸,至高粱粒无白心,没开花,捞出略沥干,加入的16%阔叶细木屑和1%石膏粉,搅拌均匀后,装入菌种瓶,高压灭菌,灭菌条件:0.14Mpa~0.15MPa,2.5小时)。
(3)、栽培种培养:按照重量百分比为8%的比例将森滑1号原种接种到栽培种培养基(栽培种培养基的原料组成及其比例为:阔叶木屑45%,1%石灰水浸泡的玉米芯颗粒40%,麸皮14%,石膏1%,含水量水55%,PH6.5)上,在22℃、空气相对温度为60%、黑暗条件下培养28天,得森滑1号栽培种;(栽培种培养基的制备方法:玉米芯颗粒要提前10小时用1%石灰水浸泡,使其充分吸水至没有白色干心,将以上原料(除水外)按比例混合在一起,搅拌均匀,后加入水,至料水均匀,并使混合物含水量达55%,装袋,栽培种采取15×33cm的高密度聚乙烯袋,装好后灭菌,灭菌方法采用常压湿热灭菌方式,料温达100℃时,开始计时保持14小时,停火自然冷却)。
(4)、森滑1号的栽培:
(a)、栽培料的制备:按照重量比将阔叶树木屑75%,麸皮21%,玉米粉3%,石膏1%的比例混合,搅拌均匀,然后加入水,再次搅拌均匀至含水量达60%,将栽培料均匀散铺于蒸锅内的透汽的篦子上,料厚10cm,通入外源热蒸汽,待料面上均匀上热汽后,再向锅内料表面撒料,每次加料厚控制在8cm,以后依次是见汽撒料,渐次铺料,直至料装满锅,用塑料布封严压实,持续送汽,料温达100℃,保持2.5小时,停火,自然冷却,得栽培料;
(b)、包盘接种:待料温冷却至70℃时,进行包盘操作,盘的规格为45×23×4cm,内衬塑料膜,趁热包好,用0.3%高锰酸钾水溶液进行封粘;自然冷却至20℃以下,进行接种,接种工具采用打孔器,采取混播和穴播有序分布结合的方法:接种人员配备好提前消毒好的工作服后,用手打开内衬塑料膜,用打孔器在料面上打孔,通常孔数量为九个,深度为1.5cm,把菌种掰成2cm大小的种块,接入孔穴中,同时把掰成细屑的菌种均匀在撒在料层表面,通常菌种用量为培养基干料量的20%,然后迅速按原样包好塑料膜。
(c)、菌丝萌发期:接种后,把菌盘分层垛在发菌室(棚)内,在10℃、相对湿度为60%、黑暗条件下培养10天,菌丝开始萌发并向料面生长,形成直径1.5cm菌落。
(d)、菌丝扩展期:在室内温度为20℃,空气相对湿度为60%、避光条件下培养18天,其中料内温度为23℃,每天早、晚各通风1次,保持空间空气清新;(随着菌丝不断向料面及料内生长,菌丝基本上将整个料面覆盖至菌丝长透料层)
(e)、菌丝后熟期:在室内温度23℃,料内温度为25℃,空气相对湿度为60%、避光条件下培养15天;每天早、中、晚各通风1次,始终保持空气新鲜,培养环境有少量的散射光;(菌丝全部长满培养基后进入菌丝后熟期,其目的是让菌丝吸收更足的营养,同时使培养块连接更硬实)
(f)开盘喷水:采取层架出菇,把后熟好的菌盘均匀摆放在层架上,层架为六层,层间距为25厘米,每1000盘占地70平方米,打开地膜,用喷头向料面均匀喷雾化水,每天4次,使料面湿润并软化,逐渐吸水;
(g)出菇管理:经8天,培养块含水量达68%时,采取温差刺激,昼夜温差达5-10℃间,经4天,料面形成白色米粒状原基,呈堆簇状,且呈较均匀分布,此间室内温度控制在14℃,空气相对湿度为85%,少量的散射光,2天后白色原基破壳而出,形成白色幼蕾(见图2),经6天,菇蕾可长至菌盖直径2cm大小,此期喷水每天3次,每次30秒,以增加空气相对湿度为主;
(h)、采收加工:森滑1号多簇生少单生,子实体从白色的小米粒状原基至子实体长至成熟,始终是洁白色(见图3),在菌盖直径达1.5-2cm时,菌幕未开伞时及时采摘,采收时及手握菇丛下部,轻轻将菇丛掰下,尽量少带或不带培养基料。采收后的子实体可以鲜品上市;也可进行简单的初加工,进行盐渍,森滑1号的杀青后,菇体仍然保持白色。本发明滑子菇子实体通体洁白、新鲜光亮,食时与黄色滑子菇同样粘滑、细嫩、爽口,营养丰富,风味独特,极具商业开发价值,为滑子菇罐头加工提供了一个优良的独特原料。