CN103877081A - 一种含有4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药配制品技术领域，具体涉及一种含有4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺的药物组合物及其应用。本发明所提供的4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片药物组合物，在治疗血管性痴呆和老年性痴呆引起的神经运动功能障碍和受损记忆功能障碍时具有协同作用，其中冰片可以显著增加奥拉西坦的治疗效果，从而降低奥拉西坦起效剂量，减少用药量，长期应用降低不良反应的发生。故本发明药物组合物可以更有效的治疗痴呆症患者的智能障碍，可以在较小的剂量达到治疗效果，适合临床使用。

Description

一种含有4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺的药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药配制品技术领域，具体涉及一种含有4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺的药物组合物及其应用。

背景技术

痴呆是一种以认知功能缺损为核心症状的获得性智能损害综合征，认知损害可涉及记忆、学习、定向、理解、判断、计算、语言、视空间等功能，其智能损害的程度足以干扰日常生活能力或社会职业功能。痴呆病包括变性病和非变性病，前者包括阿尔茨海默症（Alzheimer，AD）、路易体痴呆，后者包括血管性痴呆（VD）。AD又称老年性痴呆，是一种以记忆认知功能障碍为首要临床表现并进行性加重的神经性疾病，是痴呆最常见的病因，目前仍属难治之症，近年来对AD的研究已扩展到神经病理学、遗传学、免疫学等方面，人们对此的认识已深入到分子水平和基因水平，但对该病的真正原因及发病机制还缺乏足够的认识。VD主要是指由缺血性卒中、出血性卒中和脑缺血缺氧均可造成血管性的严重认知功能障碍综合征。欧美国家的统计表明，60岁以上老年人6％～12％发生痴呆，85岁以上的老人则有20％～40％发生痴呆，其中半数以上为老年性痴呆。据相关报告，2010年全世界年龄大于60岁的老人达7.58亿，其中约3556万人患有不同程度的AD；全球老年痴呆症患者人数将在未来显著增长，到2030年，患者人数将由2013年的4400万上升到7600万，而到2050年，这一数值将达到惊人的1.35亿。老年痴呆症将成为未来几十年全球面临的最大健康挑战，因此痴呆的治疗受到极大关注，寻找安全有效、高效的痴呆治疗药物以延缓、控制AD和VD病情的发展具有重要意义。

4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，通用名奥拉西坦（Oxiracetam），分子式C6H10N2O3，结构式如式1所示：

4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺是一种脑代谢功能促进剂，可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺合成，提高大脑中ATP（三磷酸腺酐）/ADP（二磷酸腺酐）的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加，促进脑代谢，并透过血脑屏障对特异性中枢神经道路有刺激作用；可改善老年性痴呆和记忆障碍症患者的记忆和学习功能。本品口服剂量每次0.8g，每日2-3次，注射剂量每次4～6g，每日1次。文献报道其不良反应少见，偶见皮肤瘙痒、恶心、精神兴奋、头晕、头痛、睡眠紊乱，但症状较轻。痴呆症患者多数行动、饮食不便，且治疗周期长，因此，为了提高患者的用药依从性，有必要进一步提高4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺的治疗效果和安全性，如降低其起效剂量、减少其用药量、降低长期应用时不良反应的发生等。

冰片，又称龙脑，分子式C10H18O，分子量154.25，结构式如式2所示：

冰片是一味常用的中药。中华人民共和国《药典》2010年版一部中收录了天然冰片、艾片、合成冰片三种。天然冰片又称梅片，为樟科植物樟Cinnamomum camphora(L.)Presl新鲜枝、叶的提取加工品，主要成分为右旋龙脑(borneo1um)，其右旋龙脑含量不少于96%；艾片为菊科植物艾纳香Blumea balsamifera(L.)DC.新鲜叶提取物的结晶，主要为左旋龙脑(

)，其左旋龙脑含量以龙脑计不少于85%；合成冰片是以松节油为原料经化学方法合成的精制品(又称为机制冰片，borneo1um syntheticum)，为消旋体，含一定异龙脑(isoborneo1)，其龙脑含量不少于55%。

另外，右旋龙脑又称为(+)-2-莰醇，左旋龙脑又称为(-)-2-莰醇。

冰片味辛、苦，性微寒，归心、脾、肺经，具有开窍醒神、清热止痛的功能，用于热病神昏、痉厥、中风痰厥、喉痹齿痛、口疮痈疡、目赤等症。冰片具有“回苏开窍”、“芳香走帘”、“引药上行”之功，常作“引药”，以增加其他药物的治疗效果；《本草衍义》指出冰片“独行则势弱，佐使则有功”。

冰片中以天然冰片效果最佳，但由于资源限制，目前中成药中多使用合成冰片替代天然冰片。另外，由于天然冰片中右旋龙脑含量低限为96%，仍含有一定量杂质，可能对用药安全性产生影响，因此，人们又对天然冰片进行了提纯，目前市售有纯度≥98%的(+)-2-莰醇。

药典规定冰片的日服剂量为每天150-300mg，大剂量服用冰片可能引起烧心、恶心、腹痛、呕吐等胃肠道不良反应。

发明内容

本发明的目的是提供一种药物组合物，包括4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片，该药物组合物联合使用时具有协同作用，可以显著提高治疗效果和安全性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种药物组合物，包括4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片。

所述的药物组合物中，4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺选自其左旋体、右旋体、或左旋体与右旋体的混合物尤其是消旋体。

所述的药物组合物中，冰片含有任意含量的龙脑，优选为天然冰片、艾片、合成冰片、纯度≥98%的(+)-2-莰醇和(-)-2-莰醇，更优选为天然冰片和纯度≥98%的(+)-2-莰醇。

所述药物组合物中，4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片的重量比为2000：1～1：2000；优选重量比为1000：1～1：1000；再优选重量比为10～500∶1；更优选重量比为20～450∶1；进一步优选的重量比为350～450：1，85～95：1，最优选的重量比为400：1、80：1。

更进一步地，上述药物组合物还可以包含药学上可接受辅料，制备成口服制剂或注射剂；所述口服制剂包括但不限于胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液；所述注射剂包括但不限于注射用无菌粉末、水针注射液、氯化钠或葡萄糖静脉输液。注射用无菌粉末，也称粉针，系指药物制成的供临用前用适宜无菌溶液配制成溶液或混悬液的无菌粉末或无菌块状物，根据生产工艺的不同，可分为注射用冷冻干燥制品和注射用无菌分装产品。

所述的注射剂中，可以加入少量的有机溶剂，与水混合使用作为溶剂。所述有机溶剂选自乙醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇中的一种或两种或两种以上的混合物；优选地，有机溶剂为聚乙二醇。

所述的注射剂中，还可以包含吐温20-80、泊洛沙姆、苯甲酸、水杨酸钠、对氨基苯甲酸、乙酰胺中的任一种作为助溶剂或增溶剂。

所述的注射剂中，还可以包括其他附加剂，例如渗透压调节剂、PH值调节剂、抗氧剂、抑菌剂、螯合剂、填充剂、稳定剂等。

上述的药物组合物中，所述的口服制剂中包括添加剂，所述添加剂选自填充剂、稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、表面活性剂、溶剂，矫味剂、稳定剂、着色剂、防腐剂中的至少一种。

具体的，所述的胶囊剂包含的添加剂为稀释剂、助流剂、崩解剂、粘合剂等；所述的片剂包含的添加剂为填充剂、稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、表面活性剂等；所述的颗粒剂剂包含的添加剂为矫味剂、芳香剂、着色剂、分散剂、防腐剂等；所述的口服液包含的添加剂为防腐剂、分散剂、助悬剂、增稠剂、助溶剂、润湿剂、缓冲剂、乳化剂、稳定剂、矫味剂、色素等。

所述的填充剂或稀释剂，包括糖类如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、糊精；淀粉类如淀粉、玉米淀粉、预胶化淀粉、α-淀粉、糊精；纤维素类如微晶纤维素、阿拉伯树胶、右旋糖酐；无机盐类如硫酸钙、磷酸氢钙、药用碳酸钙、轻质无水硅酸、合成硅酸铝、硅酸钙、硅铝酸镁。

所述的润滑剂或助流剂或抗粘剂，包括硬脂酸；硬脂酸金属盐如硬脂酸钙或硬脂酸镁；滑石粉；胶态氧化硅；微粉硅胶、氢化植物油；蜡，如蜂蜡或鲸蜡；聚乙二醇、月桂基硫酸盐如月桂基硫酸钠或月桂基硫酸镁；硅酸盐如硅酸酐或硅酸盐水合物等。

所述的粘合剂，包括蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇以及类似于上述赋形剂的化合物。

所述的崩解剂，包括纤维素衍生物如低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙或交联羧甲基纤维素钠；交联聚乙烯吡咯烷酮；干淀粉；以及化学改性淀粉/纤维素，例如羧甲基淀粉或羧甲基淀粉钠。

所述的表面活性剂，包括吐温-80、溴化十六烷基三甲铵、十二烷基硫酸钠、硬脂酸磺酸钠等。

所述的抗氧剂，包括亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、干燥亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、甲硫氨酸（蛋氨酸）、硫脲、乙二胺四醋酸二钠（EDTA-Na2）、磷酸、枸橼酸等。

所述的防腐剂或抗菌剂，包括苯甲酸与苯甲酸钠、山梨酸、乙醇、对羟基苯甲酸酯类（尼泊金类）、苯扎溴铵、醋酸氯已定、邻苯基苯酚、苯甲醇、苯乙醇、丙酸钠、山梨酸、桉叶油、桂皮油和薄荷油等。

所述的矫味剂，包括甜味剂如糖精钠、阿司帕坦、糖浆、甜菊甙、甘露醇、山梨醇、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、果糖、葡萄糖、蔗糖等；酸味调味剂如柠檬酸、苹果酸或酒石酸；以及芳香剂如小茴香油、薄荷油、薄荷醇、薄荷水、桂皮油、柠檬香精、柠檬油及各种味道的香料等。

本发明的上述药物组合物可以按照药剂学领域公知的惯常使用的任何方法利用所适宜的辅料制成上述适于临床给药的各种剂型。

本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的应用，即所述药物组合物在制备用于治疗痴呆症药物中的应用。

进一步的，上述药物组合物的应用中所述的痴呆症为血管性痴呆和阿尔茨海默症。

动物实验显示：

在小鼠脑缺血再灌注损伤后，分别灌胃给予奥拉西坦、左旋奥拉西坦、天然冰片、艾片、合成冰片、奥拉西坦与各种冰片组合物或奥拉西坦与（+）-2-莰醇组合物后，其中三种单方冰片组对小鼠神经功能、学习记忆行为无改善作用；而单方奥拉西坦、左旋奥拉西坦、复方奥拉西坦冰片或（+）-2-莰醇组合物组均可通过延长棒上时间、降低跳台错误次数、延长跳台潜伏期，保护小鼠的神经功能和改善小鼠记忆功能；并且与单方相比，复方组合物组在相同剂量下对各项指标的改善效果更明显，显著增强脑缺血再灌注损伤小鼠的神经保护功能和记忆功能，治疗效果更优。

在东莨胆碱注射致小鼠痴呆后，分别注射给予单方奥拉西坦、左旋奥拉西坦、天然冰片；复方奥拉西坦/左旋奥拉西坦与冰片或（+）-2-莰醇组合物后，其中单方冰片组对小鼠学习记忆行为、脑内MDA含量及SOD活力无改善作用；而单方奥拉西坦或左旋奥拉西坦组、复方奥拉西坦/左旋奥拉西坦与冰片或（+）-2-莰醇组合物组均可通过降低跳台错误次数、延长跳台潜伏期，降低脑内MDA含量、升高SOD活力，从而改善痴呆小鼠受损的记忆功能障碍，减轻脑损伤；并且与单方相比，复方组合物组在相同剂量下对各项指标的改善更好，治疗效果明显增强。

安全性试验结果表明：本发明奥拉西坦冰片组合物对新西兰兔注射部位的刺激作用与两种成分的配方比例有关，在一定比例范围内该组合物对新西兰兔的血管刺激性小于奥拉西坦单方。

综上，本发明所提供的4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片药物组合物，在治疗血管性痴呆和老年性痴呆引起的神经运动功能障碍和受损记忆功能障碍时具有协同作用，其中冰片可以显著增加奥拉西坦的治疗效果，从而降低奥拉西坦起效剂量，减少用药量，长期应用降低不良反应的发生。故本发明药物组合物可以更有效的治疗痴呆症患者的智能障碍，可以在较小的剂量达到治疗效果，适合临床使用。

具体实施方式

下面通过实施例的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步说明，以使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，但这些实施例不对本发明构成任何限制。

实施例1

取奥拉西坦200g，天然冰片1g、分别粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例2

取奥拉西坦200g，艾片2g、分别粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例3

取奥拉西坦200g，合成冰片2.5g、分别粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例4

取奥拉西坦200g，天然冰片2.5g、分别粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例5

取奥拉西坦200g，艾片2.5g，分别粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例6

取天然冰片2g粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例7

取合成冰片2g粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例8

取艾片2g粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例9

取奥拉西坦200g粉碎过100目筛后与滑石粉15g、微粉硅胶3g混合均匀，装胶囊1000粒。

实施例10

取奥拉西坦200g，用适量注射用水溶解，继续加注射用水至1000ml，即得。

实施例11

取左旋奥拉西坦100g，用适量注射用水溶解，继续加注射用水至1000ml，即得。

实施例12

取天然冰片2g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例13

取奥拉西坦200g，天然冰片2.5g，用300g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例14

取奥拉西坦200g，天然冰片2g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例15

取奥拉西坦200g，天然冰片5g，用400g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例16

取奥拉西坦100g，天然冰片10g，用500g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至2000ml，搅拌均匀即得。

实施例17

取奥拉西坦500g，天然冰片0.5g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至2500ml，搅拌均匀即得。

实施例18

取奥拉西坦200g，天然冰片0.5g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例19

取奥拉西坦200g，天然冰片1g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例20

取左旋奥拉西坦100g，天然冰片0.5g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例21

取左旋奥拉西坦100g，天然冰片1g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例22

取左旋奥拉西坦100g，天然冰片1.25g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例23

取左旋奥拉西坦100g，天然冰5g，用400g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例24

取奥拉西坦200g，天然冰片0.57g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例25

取奥拉西坦200g，天然冰片0.44g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例26

取奥拉西坦200g，天然冰片2.35g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例27

取奥拉西坦200g，天然冰片2.1g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例28

取奥拉西坦200g，（+）-2-莰醇10g，用300g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例29

取奥拉西坦200g，（+）-2-莰醇80g，用500g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例30

取奥拉西坦200g，天然冰片0.4g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例31

取奥拉西坦200g，（+）-2-莰醇0.5g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例32

取奥拉西坦200g，（+）-2-莰醇2.5g，用200g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

实施例33

取奥拉西坦200g，（+）-2-莰醇1g，用100g PEG-400溶解，再缓缓加入注射用水至1000ml，搅拌均匀即得。

试验例1：脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能试验

1动物实验材料

1.1药品：受试药物为：实施例4的奥拉西坦（简称OXT）+天然冰片（80:1）胶囊，实施例3的OXT+合成冰片（80:1）胶囊，实施例5的OXT+艾片（80:1）胶囊，实施例6的天然冰片胶囊，实施例7的合成冰片胶囊，实施例8的艾片胶囊，实施例9的OXT胶囊；实施例16、17、30的OXT+天然冰片溶液（10：1、1000：1、500：1）；模型对照和假手术组为0.9%生理盐水。

1.2动物：SPF级KM小鼠，雄性，18-22克，由河北医科大学实验动物中心提供；实验动物生产许可证号为SCXK（冀）2008-1-003。实验动物使用许可证号：SYXK（冀）2011-0059。

1.3实验器材：ZB-200疲劳转棒仪

1.4数据处理：数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能试验

2.1小鼠脑缺血再灌注损伤模型的制作：小鼠ip（腹腔注射）4％水合氯醛0.4g·kg^-1麻醉，颈正中切开皮肤，钝性分离双侧颈总动脉，双侧颈总动脉下穿“4-0”手术丝线，悬吊至双侧颈总动脉血流完全阻断，1h后抽出丝线使其血流再灌注。假手术组亦下穿丝线但不悬吊阻断血流，1h后也抽出丝线。而后所有小鼠缝合皮肤，回笼饲养。

2.2动物分组及给药：上述模型小鼠110只，随机分为11组，即模型对照组（0.9%生理盐水）、OXT组（100mg·kg^-1）、天然冰片组（1.25mg·kg^-1）、合成冰片组（1.25mg·kg^-1）、艾片组（1.25mg·kg^-1）、OXT+天然冰片组（OXT100mg·kg^-1，天然冰片1.25、0.1、0.2、10mg·kg^-1），OXT+合成冰片组（OXT100mg·kg^-1，合成冰片1.25mg·kg^-1），OXT+艾片组（OXT100mg·kg^-1，艾片1.25mg·kg^-1），每组10只。分别灌胃给予小鼠（其中实施例3-9分别取药物内容物，用聚乙二醇-400溶解，配制成溶液），连续给药14天。假手术组同等条件下给予0.9%生理盐水。

2.2试验操作及指标观察：给药第12-13天，每天将小鼠置于疲劳转棒仪上适应5min（转速10rpm）。小鼠末次给药后1h（小时），再次将小鼠置于疲劳转棒仪上，测定小鼠5min内在棒上时间。

3试验结果

本试验通过观察药物对小鼠肌肉协调性的影响，考察药物对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经功能的保护作用。结果如表1所示：

表1对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经功能的影响(

±s，n=10)

^ΔΔp<0.01，与假手术比较；*p<0.05，**p<0.01，与模型组比较。

与假手术组比较，模型组小鼠在棒上时间显著缩短（p<0.01），说明模型成功。OXT单用能显著延长小鼠棒上时间，与模型组比较具有显著性差异（p<0.05）；天然冰片、合成冰片、艾片单独给药对小鼠肌肉协调性无增强作用；OXT联合天然冰片或合成冰片或艾片给药均可延长小鼠棒上时间，与模型组比较具有非常显著性差异（p<0.01、p<0.05），提示冰片与OXT联合给药具有协同作用，可以增强OXT对脑缺血再灌注损伤缺血小鼠的神经保护功能。

试验例2脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能试验

1动物实验材料

1.1药品受试药物：实施例10的OXT溶液、实施例11的左旋奥拉西坦（简称L-OXT）溶液、实施例12的天然冰片溶液、实施例13、19、26、27的OXT+天然冰片（80:1、200：1、85：1、95：1）溶液、实施例22的L-OXT+天然冰片（80:1）溶液、实施例28、32的OXT+（+）-2-莰醇（20:1、80：1）溶液，模型对照和假手术组为0.9%生理盐水。

1.2动物SPF级KM小鼠，雄性，18-22克，由河北医科大学实验动物中心提供；实验动物生产许可证号为SCXK（冀）2008-1-003。实验动物使用许可证号：SYXK（冀）2011-0059。

1.3实验器材ZB-200疲劳转棒仪：成都泰盟

1.4数据处理数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能试验

2.1小鼠脑缺血再灌注损伤模型的制作：小鼠ip（腹腔注射）4％水合氯醛0.4g·kg^-1麻醉，颈正中切开皮肤，钝性分离双侧颈总动脉，双侧颈总动脉下穿“4-0”手术丝线，悬吊至双侧颈总动脉血流完全阻断，1h后抽出丝线使其血流再灌注。假手术组亦下穿丝线但不悬吊阻断血流，1h后也抽出丝线。而后所有小鼠缝合皮肤，回笼饲养。

2.2动物分组及给药：上述脑缺血再灌注损伤小鼠110只，随机分为11组，即模型对照组（0.9%生理盐水）、OXT组（100mg·kg^-1）、L-OXT组（50mg·kg^-1）、天然冰片组（2mg·kg^-1）、OXT+天然冰片组（OXT100mg·kg^-1，天然冰片1.25、1.18、1.05、0.5mg·kg^-1）、L-OXT+天然冰片组（L-OXT50mg·kg^-1，天然冰片0.625mg·kg^-1），OXT+（+）-2-莰醇组（OXT100mg·kg^-1，（+）-2-莰醇1.25、5mg·kg^-1）每组10只。小鼠分别灌胃给予上述药物，连续给药14天。假手术组同等条件下给予0.9%生理盐水。

2.2试验操作及指标观察：给药第12-13天，每天将小鼠置于疲劳转棒仪上适应5min（转速10rpm）。小鼠末次给药后1h，再次将小鼠置于疲劳转棒仪上，测定小鼠5min内在棒上时间。

3试验结果

如表2所示，与假手术组比较，模型组小鼠在棒上时间显著缩短（p<0.01），说明模型成功。L-OXT组、OXT组、OXT联合天然冰片（200:1）组、OXT联合（+）-2-莰醇（20:1）组、能显著延长小鼠棒上时间，与模型组比较具有显著性差异（p<0.05）。天然冰片组对小鼠肌肉协调性无显著改善作用。L-OXT联合天然冰片（80:1）组、OXT联合天然冰片（80:1、85：1、95：1）组以及OXT联合（+）-2-莰醇（80:1）组均可延长小鼠棒上时间，与模型组和单方组比较具有非常显著性差异（p<0.01），提示奥拉西坦与冰片合用，当两者以重量比为85～95:1进行配比用于胃肠道给药时与同剂量单方相比，可以显著增强对脑缺血再灌注损伤缺血小鼠的神经保护功能，尤其两者以重量比为80:1联用时效果最好。

表2对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经功能的影响(

±s，n=10)

^ΔΔp<0.01，与假手术比较；*p<0.05，**p<0.01，与模型组比较。

试验例3对小鼠脑缺血再灌注后学习和记忆行为的影响

1动物实验材料

1.1药品受试药物：实施例10的OXT溶液、实施例11的L-OXT溶液、实施例12的天然冰片溶液、实施例22的L-OXT+天然冰片（80:1）溶液、实施例13、16、26、27、的OXT+天然冰片（80:1、10:1、85:1、95:1）溶液，实施例28、32的OXT+（+）-2-莰醇（20:1、80：1）溶液、模型对照和假手术组为0.9%生理盐水。

1.2动物SPF级KM小鼠，雄性，18-22克，由河北医科大学实验动物中心提供；实验动物生产许可证号为SCXK（冀）2008-1-003。实验动物使用许可证号：SYXK（冀）2011-0059。

1.3数据处理数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2对小鼠脑缺血再灌注后学习和记忆行为的影响

2.1小鼠脑缺血再灌注损伤模型的制作：小鼠ip（腹腔注射）4％水合氯醛0.4g·kg^-1麻醉，颈正中切开皮肤，钝性分离双侧颈总动脉，双侧颈总动脉下穿“4-0”手术丝线，悬吊至双侧颈总动脉血流完全阻断，1h后抽出丝线使其血流再灌注。假手术组亦下穿丝线但不悬吊阻断血流，1h后也抽出丝线。而后所有小鼠缝合皮肤，回笼饲养。

2.2分组及给药：上述脑缺血再灌注损伤小鼠110只，随机分为11组，即模型对照组（0.9%生理盐水）、L-OXT组（50mg·kg^-1）、L-OXT+天然冰片组（L-OXT50mg·kg^-1，天然冰片0.625mg·kg^-1）、OXT组（100mg·kg^-1）、OXT+天然冰片组（OXT100mg·kg^-1，天然冰片1.25、1.18、1.05、10mg·kg^-1）、OXT+（+）-2-莰醇组（OXT100mg·kg^-1，（+）-2-莰醇1.25、5mg·kg^-1）和天然冰片组（2mg·kg^-1），每组10只。小鼠分别灌胃给予上述药物，连续给药21天。假手术组同等条件下给予0.9%生理盐水。

2.3对小鼠跳台反应的影响：小鼠末次给药前2天，于给药后30min进行跳台反应训练。训练时，将待测小鼠放入跳台仪中，适应环境5min。然后向底部栅板通电，记录小鼠跳下高台的时间（潜伏时间）和5min内小鼠由高台跳下受到电击的次数（重测期错误次数）。以小鼠学会遇电刺激时可以正确逃避至平台上为指标。末次给药1h后进行正式测验，记录小鼠潜伏时间和5min内重测期错误次数。

3实验结果

结果显示，模型组小鼠的各项指标均与假手术组有极显著性差异(P<0.01)，说明此模型成功。L-OXT组、OXT组、OXT联合天然冰片（10:1）组、OXT联合（+）-2-莰醇（20:1）组小鼠跳台错误次数明显减少、潜伏期显著延长，与模型组比较具有显著性差异（p<0.05）。天然冰片组对小鼠记忆行为无明显改善作用。L-OXT联合天然冰片（80:1）组、OXT联合天然冰片（80:1、85：1、95：1）组以及OXT联合（+）-2-莰醇（80:1）组均可非常显著延长跳台潜伏期(P<0.01)、降低跳台错误次数(P<0.05)。，与模型组和同剂量单方组比较具有显著性差异，提示奥拉西坦与冰片合用，当两者以重量比为85～95:1进行配比用于胃肠道给药时与同剂量单方相比，可以显著增强小鼠脑缺血再灌注后学习和记忆功能，尤其是以重量比为80：1联用时效果最好。

表3对小鼠脑缺血再灌注后学习和记忆行为的影响(±s，n=10)

^Δp<0.05，^ΔΔp<0.01，与假手术比较；*p<0.05，**p<0.01，与模型组比较。

试验例4对东莨菪碱致痴呆小鼠学习和记忆行为的影响

1动物实验材料

1.1药品受试药物：实施例10的OXT溶液、实施例11的L-OXT溶液、实施12的天然冰片溶液、实施例21的L-OXT+天然冰片（100:1）溶液、实施例17、18、24、25的OXT+天然冰片（1000:1、400:1、350:1、450:1）溶液、实施例28、31的OXT+（+）-2-莰醇（20:1、400:1）溶液，模型对照和假手术组为0.9%生理盐水注射液。

1.2动物SPF级KM小鼠，雄性，18-22克，由河北医科大学实验动物中心提供；实验动物生产许可证号为SCXK（冀）2008-1-003。实验动物使用许可证号：SYXK（冀）2011-0059。

1.3数据处理数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2对东莨菪碱致痴呆小鼠学习和记忆行为的影响

2.1分组及给药：小鼠120只，随机分为12组，即空白对照组（0.9%生理盐水）、模型对照组（0.9%生理盐水）、L-OXT组（50mg·kg^-1）、L-OXT+天然冰片组（L-OXT50mg·kg^-1，天然冰片0.5mg·kg^-1）、OXT组（100、50mg·kg^-1）、OXT+天然冰片组（OXT50mg·kg^-1，天然冰片0.125、0.14、0.11和0.05mg·kg^-1）、OXT+（+）-2-莰醇组（OXT50mg·kg^-1，（+）-2-莰醇0.125和2.5mg·kg^-1）和天然冰片组（2.5mg·kg^-1），每组10只。小鼠分别静脉给予上述药物，连续给药14天。

2.2对小鼠跳台反应的影响：小鼠末次给药前2天每天1次进行跳台反应训练。训练时，将待测小鼠放入跳台仪中，适应环境5min。然后向底部栅板通电，记录小鼠跳下高台的时间（潜伏时间）和5min内小鼠由高台跳下受到电击的次数（重测期错误次数）。以小鼠学会遇电刺激时可以正确逃避至平台上为指标。末次给药30min后除空白对照组腹腔注射0.9%生理盐水注射液外，其余各组分别注射5mg·kg^-1的东莨菪碱注射液，30min后进行正式测验，记录小鼠潜伏时间和5min内重测期错误次数。

2.3对东莨菪碱致痴呆小鼠脑匀浆SOD活力、MDA含量的影响：上述小鼠完成跳台反应试验后处死，取脑，以10倍体积生理盐水制成匀浆，硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA的含量，黄嘌呤氧化法测定脑组织中SOD酶活力单位，考马斯亮蓝测定蛋白质含量。

3实验结果

3.1对东莨菪碱致痴呆小鼠学习和记忆行为的影响：结果显示，东莨菪碱模型组与空白对照组相比，小鼠逃避潜伏期明显缩短，错误次数明显增加(P<0.01)，说明小鼠记忆障碍模型成功建立。L-OXT50mg·kg^-1组和OXT100mg·kg^-1组跳台潜伏期显著延长，与模型组比较差异显著（(P<0.05)，提示L-OXT和OXT对小鼠的学习记忆能力有改善作用，并且左旋优于消旋。与模型组比较，冰片单独给药对东莨菪碱致痴呆小鼠学习和记忆行为无明显影响；OXT与天然冰片400:1、350:1、450:1、1000:1复方；OXT与（+）-2-莰醇400:1、20:1复方以及L-OXT与天然冰片100:1一系列复方可以不同程度的显著延长跳台潜伏期、降低跳台错误次数(P<0.01、P<0.05)；表明奥拉西坦和冰片联用，当两者以重量比为350～450:1进行配比用于静脉给药时，对东莨菪碱致痴呆小鼠学习和记忆功能的增强作用与单方同剂量相比更加显著，尤其是以重量比为400：1联用时作用达到最好。

表4对小鼠脑缺血再灌注后学习和记忆行为的影响(

±s，n=10)

^Δp<0.05，^ΔΔp<0.01，与空白对照比较；*p<0.05，**p<0.01，与模型组比较。

3.2对东莨菪碱致痴呆小鼠脑匀浆SOD活力、MDA含量的影响：结果显示，东莨菪碱模型组与空白对照组相比，脑内MDA含量明显升高及SOD活力明显降低(P<0.01)，说明小鼠记忆障碍模型成功建立。L-OXT50mg·kg^-1组和OXT100mg·kg^-1组可显著抑制东莨菪碱致痴呆小鼠SOD活力的降低和MAD含量的升高，与模型组比较差异显著（(P<0.05)，且左旋的作用优于消旋。与模型组比较，冰片单独给药对东莨菪碱致痴呆小鼠脑内MDA含量及SOD活力无明显影响；OXT与天然冰片400:1、350:1、450:1、1000:1复方；OXT与（+）-2-莰醇400:1、20:1复方以及L-OXT与天然冰片100:1一系列复方对脑组织MDA含量及SOD活力具有不同程度的显著改善作用(P<0.01、P<0.05)，表明奥拉西坦和冰片联合给药，当两者以重量比为350～450:1进行配比用于静脉给药时，与单方相比对脑组织MDA含量及SOD活力的改善作用更加显著，尤其是以重量比为400：1联用时，这种改善效果达到最好。

表5对东莨菪碱致痴呆小鼠脑匀浆SOD活力、MDA含量的影响(

±s，n=10)

^Δp<0.05，^ΔΔp<0.01，与空白对照比较；*p<0.05，**p<0.01，与模型组比较。

试验例5新西兰兔血管刺激性试验

1动物实验材料

1.1药品受试药物：实施例10的OXT溶液、实施例18、24、25的OXT+天然冰片（400:1、350:1、450：1）溶液，实施例28、29、31的OXT+（+）-2-莰醇（20：1、2.5:1、400:1），0.9%生理盐水、聚乙二醇400。上述实施例需按使用剂量进行稀释，制备成适合的浓度。

1.2动物新西兰兔，普通级，体重2.0～3.0kg。

1.3分组及给药：上述新西兰兔135只，随机分为9组，即溶剂组（0.9%生理盐水）、溶媒组（50%聚乙二醇400）、OXT组（8mg·ml^-1）、OXT+天然冰片组（OXT8mg·ml^-1，天然冰片0.02、0.023和0.018mg·ml^-1）、OXT+（+）-2-莰醇组（OXT8mg·ml^-1，（+）-2-莰醇3.2、0.4和0.02mg·ml^-1），每组15只。

2方法：

各组新西兰兔分别耳缘静脉注射给予上述药物，5ml/kg，连续给药7天。观察注射过程中动物反应情况、注射部位的刺激程度、进行注射部位病理组织学检查，综合比较奥拉西坦及各种奥拉西坦复方对兔子的毒性情况。

3试验结果

3.1动物反应及注射部位的刺激程度：

表6对注射部位的刺激反应（n=15）

3.2病理组织学检查情况：奥拉西坦（+）-2-莰醇2.5：1和20：1复方组对兔注射部位均出现不同程度的血管栓塞等刺激性变化；其他溶媒组、奥拉西坦单方和奥拉西坦冰片、（+）-2-莰醇复方组注射部位近端和远端组织表皮完整，未见皮下及皮内出血，无组织水肿；取材组织内的血管，内皮完整，无管壁增厚，血管内未见血栓形成。

以上试验结果表明：本发明奥拉西坦冰片复方组合物对新西兰兔注射部位的刺激作用与两种成分的配方比例有关，在本试验剂量条件下，奥拉西坦冰片重量比为350～450：1时对新西兰兔的血管刺激性小于奥拉西坦单方，尤其是重量比为400:1时未见任何血管刺激性反应。

以上实施例是本发明的优选实施方式，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种药物组合物，包括4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺选自其左旋体、右旋体、或左旋体与右旋体的混合物尤其是消旋体。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的冰片含有任意含量的龙脑，优选为天然冰片、艾片、合成冰片、纯度≥98%的(+)-2-莰醇和(-)-2-莰醇，更优选为天然冰片和纯度≥98%的(+)-2-莰醇。

4.根据权利要求1-3任一所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺和冰片的重量比为2000：1～1：2000；优选重量比为1000：1～1：1000；再优选重量比为10～500∶1；更优选重量比为20～450∶1；进一步优选的重量比为350～450：1，85～95：1，最优选的重量比为400：1、80：1。

5.根据权利要求1-3任一所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中还含有药学上可接受的辅料，制备成口服制剂或注射剂；所述的口服制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液；所述注射剂包括注射用无菌粉末、水针注射液、氯化钠或葡萄糖静脉输液。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的注射剂中可以加入有机溶剂，所述有机溶剂选自乙醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇中的一种或两种或两种以上的混合物；优选地，有机溶剂为聚乙二醇400。

7.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的注射剂中还可以包含吐温20-80、泊洛沙姆、苯甲酸、水杨酸钠、对氨基苯甲酸、乙酰胺中的任一种作为助溶剂或增溶剂。

8.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的口服制剂中包括添加剂，所述添加剂选自填充剂、稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、表面活性剂、溶剂，矫味剂、稳定剂、着色剂、防腐剂中的至少一种。

9.权利要求1-8任一所述的药物组合物在制备用于治疗痴呆症药物中的应用。

10.权利要求1-8任一所述的药物组合物在制备用于治疗血管性痴呆和阿尔茨海默症药物中的应用。