CN103599101A

CN103599101A - 左旋奥拉西坦在制备治疗记忆与智能障碍药物中的应用

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Publication number: CN103599101A
Application number: CN201310554728.4A
Authority: CN
Inventors: 张峰; 陈敏; 闵涛; 车晓明; 李上; 薛峪泉
Original assignee: NANJING YOKO BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd; NANJING YOKO PHARMACEUTICAL CO Ltd; NANJING YOKO BIO-MEDICAL RESEARCH Co Ltd
Current assignee: NANJING YOKO BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd; NANJING YOKO PHARMACEUTICAL CO Ltd; NANJING YOKO BIO-MEDICAL RESEARCH Co Ltd
Priority date: 2013-11-08
Filing date: 2013-11-08
Publication date: 2014-02-26

Abstract

本发明涉及左旋奥拉西坦在制药领域的新用途，具体涉及左旋奥拉西坦在制备治疗记忆与智能障碍药物中的应用。实验结果表明，左旋奥拉西坦是奥拉西坦体内发挥药效的主要活性成分，单独使用可大幅降低临床使用剂量，降低潜在的毒副反应。本发明使用的左旋奥拉西坦为单一活性成分，原料纯度大于99.5%，能有效避免药物中其他杂质带来的毒性风险，使得用药更加安全，药品质量更加可控，药品疗效更加确切。

Description

左旋奥拉西坦在制备治疗记忆与智能障碍药物中的应用

技术领域

本发明涉及左旋奥拉西坦的新的医药用途，具体涉及左旋奥拉西坦在制备治疗脑外伤引起的记忆与智能障碍药物中的应用。

背景技术

奥拉西坦（Oxiracetam）是一种促进学习、增强记忆力的新型中枢神经系统药物。活性成分是一种合成的羟基氨基丁酸（BABOB）环状衍生物，仅作用于中枢神经系统，主要分布在大脑皮层、海马，具有激活、保护或促进神经细胞的功能恢复，改善智能障碍患者的记忆和学习功能，而药物本身没有直接的血管活性，也没有中枢兴奋作用，对学习记忆能力的影响是一种持久的促进作用。机理研究结果显示，奥拉西坦可促进磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的合成，促进脑代谢，提高血脑屏障对特异中枢神经通路的刺激作用，提高大脑中ATP/ADP的比值，使得大脑中蛋白质和核酸的合成增加。

奥拉西坦于1987年在意大利上市，上市剂型为片剂（800mg）以及胶囊（800mg），注射剂（1g/5mL）。目前国内只有奥拉西坦胶囊和注射剂上市，且所用活性成分均为外消旋体。奥拉西坦临床上用于轻中度血管性痴呆、老年性痴呆以及脑外伤等症引起的记忆与智能障碍。目前临床使用的都是外消旋体奥拉西坦，目前国内外尚无单一立体异构体的奥拉西坦制剂上市销售。

研究发现，与外消旋体比较，左旋奥拉西坦（即S-奥拉西坦）具有更好的疗效和更低的毒副作用。

左旋奥拉西坦的化学名称为：S-(-)-4-羟基-2-氧代吡咯烷-N-乙酰胺，为白色微晶状粉末，熔点135～136℃，旋光度-36度（C=1.00 in water），左旋奥拉西坦的溶解性明显优于消旋体。化学结构式如下所示：

左旋奥拉西坦的药理作用为：通过血脑屏障发挥药效，对液压冲击或自由落体引起的急性脑损伤大鼠具有显著的提高学习记忆功能；对反复结扎再灌注引起的血管性痴呆小鼠、东莨菪碱所致的学习记忆障碍小鼠，具有显著性的增强和改善记忆作用。

左旋奥拉西坦的作用机制为：促进大脑长时程增强（LTP）的产生，增加突触后电位的时限和波幅；具有乙酰胆碱激动作用，阻止或逆转东莨菪碱所致的学习记忆降低，并能促进原代培养的隔区胆碱能神经元分泌乙酰胆碱；能提高大脑对氧的利用能力，增加损伤区皮层及海马内ATP的含量，促进海马新生神经元的再生，减少脑损伤引起的细胞凋亡。

现有技术中公开了一种左旋奥拉西坦的制备方法，例如CN101367757A，它采用（S）-4-卤-3-羟基丁酸酯为原料为特定反应条件下制得左旋奥拉西坦，粗品在经过阳离子交换树脂和重结晶精制，得到左旋奥拉西坦成品。但是到目前为止，尚无将左旋奥拉西坦单独应用在治疗脑外伤引起的记忆与智能障碍药物中的报道，也从未有现有技术披露了对左旋奥拉西坦和右旋奥拉西坦进行药理、药效以及药代动力学等的对比研究，未公开奥拉西坦左旋体和右旋体在药学特性上的区别和联系。

发明内容

本发明目的是提供左旋奥拉西坦在制药领域的新用途，具体是指左旋奥拉西坦在制备治疗脑外伤引起的记忆和智能障碍药物中的应用。本发明首次披露了左旋奥拉西坦、右旋奥拉西坦以及消旋奥拉西坦在治疗脑外伤引起的记忆和智能障碍方面的药代动力学、药效学、一般药理学及毒理学等发明的实验研究结果，明确了它们之间在药学特性上的区别和联系，为该医药用途的确立奠定坚实的基础。

本发明所述的左旋奥拉西坦在制备治疗脑外伤引起的记忆和智能障碍药物中的应用，具体来说，可以制备成活性成分为左旋奥拉西坦的药物组合物，使用的剂型可以是口服制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂等；注射剂如小容量注射液、大容量注射液、注射用冻干粉等。以上剂型均按照常规方法制得。其中冻干粉的使用方法优选为：静脉滴注，每次2.0g，每日一次，可酌情增减用量，用前加入到100～250ml 5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液中，摇匀，治疗疗程通常为2～3周。

本发明制备的治疗脑外伤引起的记忆和智能障碍药物中所使用的左旋奥拉西坦原料的纯度为99.5%以上，以重量百分数计。

在治疗脑外伤引起的认知障碍等方面，吡拉西坦（商品名脑复康）是第一个上市和使用的促智药物，而奥拉西坦是在吡拉西坦的4位上引入一个羟基，具有一个手性中心，其效力比吡拉西坦强2～3倍。国内大量临床研究表明，奥拉西坦可明显改善脑外伤等引起的记忆与智能障碍，且效果明显强于吡拉西坦。临床表明，奥拉西坦具有很好的治疗和改善老年性痴呆和记忆障碍症患者的记忆和学习功能的作用。但是，每日一次且每次4～6g的使用剂量偏大，病人顺应性差，并且还存在着焦虑不安、皮肤瘙痒、皮疹、恶心、胃痛等毒副作用，在如此大剂量应用情况下就难以规避潜在的毒副反应风险。

本发明人通过对奥拉西坦的左旋体（S-奥拉西坦）进行了药代动力学、药效学、毒理学和一般药理学等试验研究，发现左旋奥拉西坦对液压及自由落体所致创伤性脑损伤大鼠学习记忆认知功能障碍均有明显的改善作用，其药效远高于右旋奥拉西坦，且200mg/kg左旋奥拉西坦与400mg/kg奥拉西坦的作用相当。药代动力学研究结果显示：左旋奥拉西坦和右旋奥拉西坦在比格犬体内无明显手性转化。比格犬单次静脉注射给予左旋和2倍剂量的消旋奥拉西坦后血浆中左旋奥拉西坦的主要药动学参数均无明显差异。安全药理、急毒、长毒等试验结果表明，在同等剂量水平下，左旋奥拉西坦与奥拉西坦对受试动物或细胞的毒性无明显差异。上述临床前的研究结果表明，左旋奥拉西坦是奥拉西坦体内发挥药效的主要活性成分，单独使用本品可降低临床使用剂量，降低潜在的毒副反应。

具体的实验方法和实验结果如下

一、药效学实验

1.1 左旋奥拉西坦对幼鼠脑片LTP的影响

海马长时程增强（LTP）是目前认为记忆形成的主要机制，本发明人运用电生理技术在海马脑片上给予左旋及右旋奥拉西坦诱导LTP，比较左旋及右旋奥拉西坦药效强弱。试验结果表明左旋奥拉西在 10^-6M浓度下可诱导LTP幅度增加72.8%，明显高于右旋奥拉西坦28.7%，且两者的差异在浓度为10^-7M 时表现的更加明显，可诱导LTP幅度分别增加48.9%和5.8%。

1.2. 左旋奥拉西坦对成年大鼠脑片LTP的影响

体外大鼠脑切片研究结果表明，S-奥拉西坦在10^-7M浓度下便能显著增加LTP，而R-奥拉西坦达到类似的效果则需10^-5M，即S-奥拉西坦比R-奥拉西坦的效果强100倍。

1.3. 左旋奥拉西坦对突触后膜Ca²⁺内流的影响

谷氨酸与突触后受体结合诱发Ca²⁺内流在LTP的产生中发挥重要作用。在谷氨酸存在的条件下加入药物检测细胞摄入Ca²⁺的多少能够间接反映药物对LTP的影响。研究结果表明，在5μM谷氨酸存在的前提下，加入1～100μM S-奥拉西坦可剂量依赖性的增加原代培养的小脑颗粒细胞内Ca²⁺的含量，而1-100μM R-奥拉西坦加入后细胞内Ca²⁺的含量无显著改变。

1.4 左旋奥拉西坦对脑损伤提取液致神经元损伤的保护作用

方法：从鼠胚脑皮质中分离神经干细胞(neural stem cells, NSCs)并进行扩增，将传至第4代的亚细胞系NSCs贴壁分化培养，分为空白对照组(contr)，生理盐水组(ns)，右旋-奥拉西坦组(R)，左旋-奥拉西坦低(Sl)、中(Sm)、高(Sh)剂量组，奥拉西坦组(R/S)。第11d换培养液时，contr组加入含有20 μl/ml 正常脑皮质提取液的DMEM/F12无血清培养基；ns组加入含有20μl/ml脑损伤皮质提取液、10μl/ml生理盐水的DMEM/F12无血清培养基；其它组加入含有20μl/ml脑损伤皮质提取液及相应浓度药物 (R 2mg/ml、Sl 0.5mg/ml、Sm 1mg/ml、 Sh 2mg/ml、R/S 4mg/ml)的DMEM/F12无血清培养基，再培养4d，然后行MAP-2免疫荧光检测和TUNEL凋亡细胞检测。

结果：MAP-2免疫荧光标记结果显示，contr、Sh、R/S组分化的MAP-2阳性神经元数量多于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，分化的MAP-2阳性神经元数量也相应增多。TUNEL凋亡细胞检测结果显示，contr、Sh、R/S组TUNEL阳性凋亡细胞数量少于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，TUNEL阳性凋亡细胞数量也相应减少。

1.5 左旋奥拉西坦对胆碱能神经元分泌乙酰胆碱的影响

方法：取鼠胚基底前脑原基制备单细胞悬液，接种于2块置有包被多聚赖氨酸盖玻片的24孔培养板内，共分7组，每组6孔，各孔加培养基1.5ml。contr组加DMEM/F12无血清培养基；ns组加入含有10μl/ml生理盐水的DMEM/F12无血清培养基；其它组加入含有上述相应浓度药物的DMEM/F12无血清培养基，培养14d。收集各组培养液用ELISA法检测乙酰胆碱(ACh)含量，培养细胞行ChAT免疫荧光检测。

结果：各组ChAT荧光标记结果显示，基底前脑原基原代胆碱能神经元培养可见较多的ChAT阳性胆碱能神经元，各组间胆碱能神经元数量差异无统计学意义，Sh、R/S组ChAT免疫荧光强度明显高于contr、ns、R组。培养液中ACh含量检测结果显示， Sh、R/S组培养液中乙酰胆碱含量高于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，培养液中ACh含量也相应增高。

1.6 左旋奥拉西坦对液压冲击所致创伤性脑损伤大鼠学习记忆功能的药效评价及机制研究

方法：经水迷宫训练筛选出达标大鼠，制备可控液压脑损伤模型，随机分为空白对照组(contr)，生理盐水组(ns)，右旋-奥拉西坦组(R)，左旋-奥拉西坦低(Sl)、中(Sm)、高(Sh)剂量组，奥拉西坦组(R/S)。空白对照组(contr)不作处理；生理盐水组(ns)大鼠伤后连续14d定时尾静脉注射无菌生理盐水1ml；其它给药组大鼠伤后连续14d定时尾静脉注射含有相应药物浓度(R 200mg/kg、Sl 50mg/kg、Sm 100mg/kg、Sh 200mg/kg、R/S 400mg/kg)的无菌生理盐水1ml。伤后15d进行第一次空间探索试验，伤后16d进行4d的定位巡航试验，伤后20d进行第二次空间探索试验。然后脑损伤模型部分大鼠灌注取材、冰冻切片，行ChAT、DCX免疫荧光检测，其它可控液压脑损伤模型大鼠取损伤侧皮质和海马行ATP含量检测。

结果：空间探索试验结果显示，contr、Sh、R/S组大鼠平台跨越次数高于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，大鼠的平台跨越次数也明显增多。定位巡航试验结果显示，contr、Sh、R/S组大鼠逃避潜伏期少于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，大鼠的逃避潜伏期也明显减少。隔区ChAT免疫荧光标记结果显示，contr、Sh、R/S组损伤侧隔区ChAT阳性胆碱能神经元多于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，损伤侧隔区ChAT阳性胆碱能神经元数量也相应增多。Meynert基底核ChAT免疫荧光标记结果显示，contr、Sh、R/S组损伤侧ChAT阳性胆碱能神经元多于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，损伤侧Meynert基底核ChAT阳性胆碱能神经元数量也相应增多。海马DCX免疫荧光结果显示，Sh、R/S组损伤侧海马齿状回DCX阳性新生神经元多于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异均有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，损伤侧海马齿状回DCX阳性新生神经元数量也相应增多。皮质及海马ATP含量检测结果显示，contr、Sh、R/S组损伤侧皮质、海马ATP含量高于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，皮质、海马ATP含量也相应增高。

1.7 左旋奥拉西坦对自由落体所致创伤性脑损伤大鼠学习记忆功能的药效评价

方法：经水迷宫训练筛选出达标大鼠，制备自由落体脑损伤模型，随机分为空白对照组(contr)，生理盐水组(ns)，右旋-奥拉西坦组(R)，左旋-奥拉西坦低(Sl)、中(Sm)、高(Sh)剂量组，奥拉西坦组(R/S)。空白对照组(contr)不作处理；生理盐水组(ns)大鼠伤后连续14d定时尾静脉注射无菌生理盐水1ml；其它给药组大鼠伤后连续14d定时尾静脉注射含有相应药物浓度(R 200mg/kg、Sl 50mg/kg、Sm 100mg/kg、Sh 200mg/kg、R/S 400mg/kg)的无菌生理盐水1ml。伤后15d进行第一次空间探索试验，伤后16d进行4d的定位巡航试验，伤后20d进行第二次空间探索试验。

结果：空间探索试验结果显示，contr、Sh、R/S组大鼠平台跨越次数高于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，大鼠的平台跨越次数也明显增多。定位巡航试验结果显示，contr、Sh、R/S组大鼠逃避潜伏期少于其它各组，Sh、R/S组与ns、R组比较差异有统计学意义，且随着S-奥拉西坦剂量增加，大鼠的逃避潜伏期也明显减少。

1.8 左旋奥拉西坦对东莨菪碱所致学习记忆障碍大鼠的药效评价

避暗实验是最为常用的动物学习记忆实验方法，避暗箱是利用鼠类嗜暗习性而设计，这个箱体有明暗两间隔间，用一个手动操作门插入隔开。当大鼠进入黑暗隔间时，地板格将产生电流，大鼠受到电击后立即逃避到安全的明部位，并形成记忆。试验时，先将每只大鼠放入明室，记录大鼠在明室停留的时间（第一次潜伏期）；30分钟后再次将大鼠放入明室，记录大鼠在明室停留的时间（第二次潜伏期）。第二次潜伏期增加说明大鼠对电击的记忆功能增强。

研究结果表明，东莨菪碱可造成大鼠记忆功能障碍，且其作用是特异性的，因为东莨菪碱仅降低大鼠的第二次潜伏期，而对第一次潜伏期没有影响。皮下注射东莨菪碱（0.66 mg/kg）前30分钟腹腔注射25～100mg/kg S-奥拉西坦，可显著增加大鼠第二次潜伏期，提高大鼠的学习记忆功能，而R-奥拉西坦上述剂量下则对大鼠的学习记忆障碍没有改善作用。

1.9 左旋奥拉西坦对东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍的改善作用

避暗实验结果表明：S-奥拉西坦大剂量组可明显延长模型小鼠的记忆潜伏期；中(150 mg/kg)、大(300 mg/kg)剂量组可明显减少错误次数 (P<0.05)。Y型电迷宫实验表明：S-奥拉西坦大剂量组可减少缩短模型小鼠逃入正确端的训练次数；中、大剂量组显著增加主动逃避次数、提高正确率 (P<0.05，P<0.01)。以上实验，大剂量组疗效与奥拉西坦组相当，优于R-奥拉西坦组但未见显著差异（P>0.05）。

跳台实验结果表明：S-奥拉西坦三个剂量组均可以减少模型小鼠的记忆错误次数；S-奥拉西坦大剂量组可以延长模型小鼠的记忆潜伏期 (P<0.05) Morris水迷宫实验结果表明：S-奥拉西坦中、大剂量组明显缩短定位航行试验的潜伏期（P＜0.05）；三个剂量组均可明显提高空间探索实验的原平台穿越次数，与模型组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)。以上实验中，大剂量组疗效与奥拉西坦组相当，且优于R-奥拉西坦组（P<0.05）。

1.10 左旋奥拉西坦对血管性痴呆小鼠学习记忆障碍的改善作用

S-奥拉西坦中(150 mg/kg)、大(300 mg/kg)剂量组可以减少模型小鼠的跳台实验学习错误次数；S-奥拉西坦大剂量组可以延长模型小鼠的跳台实验（被动回避）记忆潜伏期；三个剂量组均可减少模型小鼠跳台实验3分钟内的记忆错误次数，与模型组比较差异显著(P<0.05) ，其中大剂量组疗效与奥拉西坦(600 mg/kg)组相当，优于R-奥拉西坦(300 mg/kg)组但未见显著差异（P>0.05）。

S-奥拉西坦中、大剂量组可明显延长模型小鼠的避暗实验（被动回避）记忆潜伏期；三个剂量组可明显减少避暗实验错误次数，与模型组比较差异显著(P<0.05)。S-奥拉西坦三个剂量组可减少缩短模型小鼠Y型电迷宫实验（主动回避）逃入正确端的训练次数；增加主动逃避次数；中、大剂量组显著提高正确率，与模型组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)。S-奥拉西坦中、大剂量组明显缩短Morris水迷宫（空间学习记忆能力）实验定位航行试验的潜伏期（P＜0.05）；三个剂量组均可明显提高空间探索实验的原平台穿越次数，与模型组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)。以上实验中，大剂量组疗效与奥拉西坦组相当，且优于R-奥拉西坦组（P<0.05）。

二、药代动力学实验

1、经确证的生物样品分析方法

非手性及手性LC-MS/MS定量分析方法

2、受试物的剂型和溶媒

受试物为左旋奥拉西坦原料药，溶媒为0.9%氯化钠注射液

3、给药方案

静脉注射

4、比格犬体内药动学研究

比格犬分别单次静脉注射给予低（60 mg/kg）、中（120 mg/kg）和高（240 mg/kg）剂量(S)-奥拉西坦，以及60 mg/kg (R)-奥拉西坦和120 mg/kg (R,S)-奥拉西坦。每组6只，雌雄各半。药动学结果如下表和附图1所示：

（1）(S)-奥拉西坦单次给药后在比格犬体内的药动学研究

比格犬单次静脉注射给予低（60 mg/kg）、中（120 mg/kg）和高（240 mg/kg）剂量(S)-奥拉西坦后，(S)-奥拉西坦的AUC_0-∞值分别为309、725和1637 μg·h/mL，与剂量增加成正比；(S)-奥拉西坦的CL为147~198 mL/h/kg，估算的t_1/2约为5.42~7.64小时，V_ss为489~624 mL/kg。各剂量组的主要药动学参数均无明显性别差异。

（2）(R)-奥拉西坦单次给药后在比格犬体内的药动学研究

比格犬单次静脉注射给予(R)-奥拉西坦后，(R)-奥拉西坦的AUC_0-∞值为343 μg·h/mL，CL为180 mL/h/kg，估算的t_1/2约为5.46小时，V_ss为545 mL/kg。

（3）(S)-奥拉西坦和(R)-奥拉西坦在比格犬体内的手性转化研究

分别将(S)-奥拉西坦低剂量（60 mg/kg）组比格犬血浆和(R)-奥拉西坦（60 mg/kg）组比格犬血浆按时间点和性别混合，采用手性LC-MS/MS定量方法进行分析。结果显示，所有血浆中均未检测到其对映体，说明(S)-奥拉西坦和(R)-奥拉西坦在比格犬体内无明显手性转化。

（4）给予(S)-奥拉西坦和给予(R,S)-奥拉西坦后比格犬体内(S)-奥拉西坦的药动学比较

比格犬单次静脉注射给予(R,S)-奥拉西坦后，测定(S)-奥拉西坦在血浆中的浓度，计算出(S)-奥拉西坦的AUC_0-∞为335 μg·h/mL，CL为182 mL/h/kg，估算的t_1/2约为5.56小时，V_ss为539 mL/kg。结果显示，比格犬单次静脉注射给予60 mg/kg (S)-奥拉西坦和120 mg/kg (R,S)-奥拉西坦后血浆中(S)-奥拉西坦的主要药动学参数无明显差异。给予(S)-奥拉西坦相对于给予(R,S)-奥拉西坦后比格犬体内(S)-奥拉西坦的生物利用度为92.10%。

三、注射用左旋奥拉西坦的急性毒性试验资料

（1）小鼠急性毒性试验

小鼠单次尾静脉给药预实验结果显示：以供试品浓度200mg/mL，按给药体积0.5mL/20g单次给药，动物未出现与供试品相关的毒性反应。因此本次小鼠单次尾静脉给药毒性试验在合理给药容量的前提下，按0.5mL/20g给药体积给予供试品，浓度为200mg/mL，单次给药，给药剂量为5g/kg，同时设阴性对照组，按给药组给予同等体积的氯化钠注射液，给药后连续观察14天，每天至少观察1次，未发现小鼠出现明显中毒症状并未见死亡。试验结束时各组存活小鼠经解剖，各主要脏器肉眼未见明显的异常变化，故供试品注射用左旋奥拉西坦小鼠尾静脉单次给药最小致死量（MLD）＞ 5g/kg。

（2）比格犬急性毒性试验

受试动物采用静脉滴注方式给药，给药速度3～5ml/min，给药体积10ml/kg体重，给药2次，给药间隔≥4小时。

实验结果显示：比格犬单次静脉滴注给予供试品注射用左旋奥拉西坦，在5000mg/kg剂量水平下，供试品注射用左旋奥拉西坦对受试犬仅有轻微的毒性作用，其主要临床症状表现为轻度过敏症状和胃肠道反应，其症状表现为流泪、皮肤或粘膜潮红、头面部皮肤松弛下垂以及大便不成形。以上症状在停止给药后次日即可消失。体重、摄食量、体温及心电图等各项指标均未出现与供试品给药相关的异常变化。动物各项临床病理学指标未发现与供试品给药相关的异常变化。解剖病理学观察结果未发现与供试品给药明显明显相关的病理学变化。

综上所述，比格犬对供试品注射用左旋奥拉西坦具有较好的耐受性，比格犬静脉单次滴注给予供试品注射用左旋奥拉西坦的最大耐受量（MTD）≥5000mg/kg。

四、注射用左旋奥拉西坦的长期毒性试验资料

（1）大鼠三个月长毒试验

受试SD大鼠对供试品注射用左旋奥拉西坦具有较好的耐受性，在800 mg/kg及以下剂量时未观察到明显毒性作用，在1600mg/kg剂量时雌性大鼠的血小板总数(PLT)、血小板比积(PCT)出现一过性的降低。在同等剂量水平下，供试品注射用左旋奥拉西坦与对照品注射用奥拉西坦对受试大鼠毒性无明显差异。

停止给药后2周，供试品各剂量组及阳性对照组受试动物均未见明显迟发型毒性作用。

（2）比格犬三个月长毒试验

受试比格犬对供试品注射用左旋奥拉西坦具有较好的耐受性，在300 mg/kg剂量时未观察到明显毒性作用，在600mg/kg剂量时有轻微不良反应，主要表现为可引起雌性受试犬体重增加减缓，在1200mg/kg剂量时有较重的不良反应，除了引起雌性受试犬体重增加减缓外，还可引起受试犬出现较明显的胃肠道不良反应，主要表示为摄食减少。与阳性对照品注射用奥拉西坦相比，供试品注射用左旋奥拉西坦在动物呕吐或干呕、大便不成形方面的胃肠道不良反应明显减轻。注射用左旋奥拉西坦各剂量组及注射用奥拉西坦阳性对照组各脏器组织均未出现与给药相关的病理变化。在同等剂量水平下，供试品注射用左旋奥拉西坦与对照品注射用奥拉西坦对受试犬毒性无明显差异。

停止给药后4周，供试品各剂量组及阳性对照组受试动物均未见明显迟发型毒性作用。

五、注射用左旋奥拉西坦的一般药理学试验

（1）对神经系统影响试验

静脉注射给予ICR小鼠注射用左旋奥拉西坦，剂量从低至高依次为300、600和1200 mg/kg（分别为拟临床人用等效剂量的1、2和4倍），并与消旋体对照品注射用奥拉西坦（1200 mg/kg）比较，结果表明：在本试验条件下，注射用左旋奥拉西坦及注射用奥拉西坦对ICR小鼠的行为表现、自发活动及运动协调能力均无明显影响，与镇静催眠药物戊巴比妥钠同时使用亦无明显的协同或拮抗作用。

（2）对心血管和呼吸系统影响试验

静脉注射给予Beagle犬注射用左旋奥拉西坦，剂量从低至高依次为150、300和600mg/kg（分别为拟临床人用等效剂量的2.5、5和10倍），并与消旋体对照品注射用奥拉西坦（600 mg/kg）比较，结果发现，在本试验条件下，注射用左旋奥拉西坦及注射用奥拉西坦对Beagle犬心电图、血压和呼吸参数等指标均无明显影响。

附图说明

图1 比格犬静脉注射不同剂量(S)-奥拉西坦、(R)-奥拉西坦和(R,S)-奥拉西坦后的平均血浆浓度-时间曲线。

具体实施方式

下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1

处方组成为

（a）左旋奥拉西坦（纯度为99.6%） 250mg/片

（b）预胶化淀粉 30mg/片

（c）微晶纤维素 55mg/片

（d）硬脂酸镁 5mg/片

（e）羧甲基淀粉钠 5mg/片

以制成1000片左旋奥拉西坦片剂为例，具体制备方法是：先将原辅料过100目筛，称取处方量的左旋奥拉西坦、预胶化淀粉和微晶纤维素混合均匀，加8%淀粉浆制软材，制粒，烘干，整粒，向颗粒中加入处方量的硬脂酸镁和羧甲基淀粉钠，压片，用8%欧巴代95%乙醇溶液包衣。

实施例2

处方组成为

（a）左旋奥拉西坦（纯度为99.5%） 250mg/粒

（b）乳糖 70mg/粒

（c）羧甲基淀粉钠 65mg/粒

（d）滑石粉 6mg/粒

（e）10%聚乙烯吡咯烷酮适量

以制成1000粒左旋奥拉西坦胶囊剂为例，具体制备方法是：先将原辅料过100目筛，称取处方量的左旋奥拉西坦、乳糖、羧甲基淀粉钠混合均匀，加10%聚乙烯吡咯烷酮溶液制成软材，制粒，烘干，整粒，向颗粒中加入处方量的滑石粉，混合均匀，充填胶囊。

实施例 3

处方组成为

（a）左旋奥拉西坦（纯度为99.6%） 250mg/袋

（b）甘露醇 150mg/袋

（c）蔗糖 100mg/袋

（d）羧甲基淀粉钠 20mg/袋

以制备1000袋左旋奥拉西坦颗粒剂为例，具体制备方法是先将原辅料过100目筛，称取处方量的左旋奥拉西坦、甘露醇、蔗糖和羧甲基淀粉钠混合均匀，加8%淀粉浆制软材，制粒，烘干，整粒，包装。

实施例5

处方组成为：

左旋奥拉西坦（纯度为99.5%） 1000g

乙二胺四乙酸钠钙 1g

氯化钠 40g

注射用水加至10000mL，共制成1000瓶

以制成左旋奥拉西坦注射液为例，制备方法：取80%处方量注射用水，加入处方量的主要和其他辅料搅拌时溶解，用1M盐酸溶液或1M氢氧化钠溶液调pH值，使得在用注射用水稀释至活性成分浓度为1g/20mL时的pH值为5.2，按照配制量加0.1%针用活性炭，将药液加热至约60℃，搅拌0.5h，过滤脱碳后，加注射用水至总量，检测合格后，用0.22μm微孔滤膜精滤，灌装于安瓿瓶中，每瓶10mL，封口，旋转湿热灭菌（121℃，15min）即可。

实施例6

处方组成为

左旋奥拉西坦（纯度为99.6%） 1000g

山梨醇 800g

枸橼酸钠 60g

0.1mol/l枸橼酸钠溶液适量

注射用水加至 5000mL

制成 1000支

制备方法：称取处方量的山梨醇和枸橼酸钠，加入约处方量70%的注射用水，控制水温55～60℃，搅拌使完全溶解，再加入处方量的左旋奥拉西坦，继续保温搅拌至完全溶解，并用0.1mol/L枸橼酸钠溶液调节pH至5.0～5.2，再补加注射用水至全量，加入0.1%（g/mL）的活性炭搅拌20min，钛棒滤过脱炭，经0.45μm和0.22μm微孔滤膜除菌滤过后取中间体测pH值、含量。中间体检测合格后，按每支5mL分装于15ml西林瓶中，半压胶塞。放入冷冻干燥机中，冷冻干燥，即得。

Claims

1.左旋奥拉西坦在制备治疗记忆与智能障碍药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的“记忆与智能障碍”是由脑外伤引起的，即：左旋奥拉西坦在制备治疗脑外伤引起的记忆与智能障碍药物中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述左旋奥拉西坦的药物为口服制剂或注射剂。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的口服制剂为片剂，或者胶囊剂，或者颗粒剂；所述的注射剂为小容量注射液，或者大容量注射液，或者注射用冻干粉。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述注射用冻干粉的使用方法是：静脉滴注，每次2.0g，每日一次，可酌情增减用量，用前加入到100～250mL 5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液中，摇匀；治疗疗程通常为2～3周。

6.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，使用的左旋奥拉西坦原料纯度为99.5%以上，以重量百分数计。