CN103848922A - 牡蛎多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种操作简单、高效且可分别得到分子量大于100kDa、20-50kDa以及2-10kDa的牡蛎多糖组分的牡蛎多糖的制备方法，依次按照如下步骤进行：将水加入到牡蛎肉中，匀浆；水与牡蛎肉的比例为1~5L：100~500g；将匀浆在50~100℃条件下加热10~60min，在1000~10000rpm条件下离心10~30min，取上清液；将上清液加入到疏水树脂柱中进行层析，分别以水、5%乙醇及15%乙醇洗脱，每次洗脱至洗脱液中不含糖；分别得到水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分；分别向水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分中加入80%乙醇至饱和浓度，得三种沉淀。

Description

牡蛎多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及一种牡蛎多糖制备方法，尤其是一种操作简单、高效且可分别得到分子量大于100 kDa、20-50 kDa以及2-10 kDa的牡蛎多糖组分的牡蛎多糖的制备方法。

技术背景

牡蛎多糖具有降血压、抗凝血、提高免疫功能和抗白细胞下降等作用，因此，目前已公开多种牡蛎多糖的制备方法，一般都是利用热水浸提法进行粗提，然后再以酸、碱、乙醇等作为溶剂进行后续处理等。如陈骞等作者在2005年第26卷第6期《食品科学》上的第99-101页登载的《牡蛎糖原的研究（I）—牡蛎糖原的分离提取和化学组成》中论述了牡蛎糖原的提取方法，系采用热水浸提、醇沉及除蛋白等步骤制备了牡蛎糖原，分子量分布范围为1.0×10⁴~4.0×10⁷Da。中国发明专利号为ZL200710010460.2的发明专利就公开了一种“牡蛎多糖和制备方法及其在制备化妆品中的应用”，其制备方法是其特征在于有如下步骤：取大连湾牡蛎或太平洋牡蛎，用0~10℃的水清洗牡蛎；用0.3~0.5MPa 压力，70~80℃温度煮牡蛎20~45分钟，过滤、收集上清液；离心去沉淀，将上清液用浓度60~70%的乙酸调至pH5-6，酸解1~3 h，用膜分离器截留分子量为30000 Da以下的物质；用NaOH调解30000 Da以上滤液的pH至6-8，离心去沉淀，取上清液在蒸馏水中透析除盐；通过Sephadex G-100分子筛层析柱，收集OD_280nm吸收峰，透析除盐后冷冻干燥；可得到分子量为4000~6500 Da的牡蛎多糖。现有制备方法不但繁琐，而且只能得到一种产物，即不同分子量分布的牡蛎多糖混合物。由于多糖的生物活性与其分子量具有相关性，因此，现有制备方法影响了牡蛎多糖活性的进一步研究及充分利用。

疏水树脂柱目前已广泛应用于化合物的提取，一般的分离原则是以疏水树脂吸附疏水化合物。因牡蛎多糖是亲水化合物，迄今为止，还没有利用疏水树脂柱提取牡蛎多糖的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述问题，提供一种操作简单、高效且可分别得到分子量大于100 kDa、20-50 kDa以及2-10 kDa的牡蛎多糖组分的牡蛎多糖的制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种牡蛎多糖的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

    a. 将水加入到牡蛎肉中，匀浆；水与牡蛎肉的比例为1~5 L：100~500g；

    b. 将匀浆在50~100℃条件下加热10~60min，在1000~10000rpm条件下离心10~30min，取上清液；

    c. 将上清液加入到疏水树脂柱中进行层析，分别以水、5%乙醇及15%乙醇洗脱，每次洗脱至洗脱液中不含糖；分别得到水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分；

d. 分别向水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分中加入80%乙醇至饱和浓度，分别得沉淀，即分别得到分子量大于100 kDa、20~50 kDa以及2~10 kDa的牡蛎多糖组分。

本发明是发现了亲水的牡蛎多糖具有吸附于疏水树脂表面孔径的能力，进而利用疏水树脂提取牡蛎多糖，分别以水、5%乙醇及15%乙醇为洗脱液，可分别得到分子量大于100 kDa、20~50 kDa以及2~10 kDa的牡蛎多糖组分，不仅操作简单，而且提取率高，可进一步开发利用牡蛎多糖的生物活性。

附图说明

图1是牡蛎多糖通过TSK-gel G4000PW_XL柱（7.8 mm×30 cm）测定的分子量标准曲线图。

图2是本发明实施例1的水洗脱组分所得产物通过TSK-gel G4000PW_XL柱（7.8 mm×30 cm）测定曲线图。

图3是本发明实施例1的5%乙醇洗脱组分所得产物通过TSK-gel G4000PW_XL柱（7.8 mm×30 cm）测定曲线图。

图4是本发明实施例1的15%乙醇洗脱组分所得产物通过TSK-gel G4000PW_XL柱（7.8 mm×30 cm）测定曲线图。

具体实施方式

实施例1：

    a. 将5 L水加入到100g牡蛎肉中，匀浆；

    b. 在70℃条件下加热60 min，在5000rpm条件下离心30min，取上清液；  

    c. 将上清液加入到疏水树脂ME-1柱中进行层析，分别以水、质量百分比5%乙醇及质量百分比15%乙醇洗脱，至洗脱液中不含糖（苯酚-硫酸法检测），得到水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分；

d. 分别向水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分中加入80%乙醇至饱和浓度，分别得沉淀，三种沉淀的质量分别为4g、5g及11 g。

将得到的三种沉淀物分别通过TSK-gel G4000PW_XL柱（7.8 mm×30 cm），测定曲线图如图2、3、4所示。根据曲线中含糖峰对应的洗脱体积与图1所示的标准曲线对比，可以看出，所得三种沉淀分别为分子量大于100 kDa、20~50 kDa以及2~10 kDa的牡蛎多糖组分。

实施例2：

    a. 将2 L水加入到300g牡蛎肉中，匀浆；

    b. 在80℃条件下加热50 min，在10000rpm条件下离心10min，取上清液；  

    c. 将上清液加入到疏水树脂ME-1柱中进行层析，分别以水、质量百分比5%乙醇及质量百分比15%乙醇洗脱，至洗脱液中不含糖（苯酚-硫酸法检测），得到水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分；

d. 分别向水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分中加入80%乙醇至饱和浓度，分别得沉淀，三种沉淀的质量分别为11g、15g及30 g。

与实施例1相同，将得到的三种沉淀物分别通过TSK-gel G4000PW_XL柱（7.8 mm×30 cm），测定曲线。根据曲线中含糖峰对应的洗脱体积与图1所示的标准曲线对比，可以看出，所得三种沉淀分别为分子量大于100 kDa、20~50 kDa以及2~10 kDa的牡蛎多糖组分的结论。

Claims (1)

1.一种牡蛎多糖的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

    a. 将水加入到牡蛎肉中，匀浆；水与牡蛎肉的比例为1~5 L：100~500g；

    b. 将匀浆在50~100℃条件下加热10~60min，在1000~10000rpm条件下离心10~30min，取上清液；

    c. 将上清液加入到疏水树脂柱中进行层析，分别以水、5%乙醇及15%乙醇洗脱，每次洗脱至洗脱液中不含糖；分别得到水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分；

    d. 分别向水洗脱组分、5%乙醇洗脱组分及15%乙醇洗脱组分中加入80%乙醇至饱和浓度，分别得沉淀，即分别得到分子量大于100 kDa、20~50 kDa以及2~10 kDa的牡蛎多糖组分。

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