CN103833844A - 一种人血白蛋白的生产方法 - Google Patents

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孔维权
张庭喜
王连群
石正国
朱瑞芳
张帆
侯彩霞
吕绍玉
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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Abstract

本发明提供了一种人血白蛋白的生产方法，其特点在于包括以下步骤：1、四步法蛋白质分离工艺，即第一步分离Cohn组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ。第二步分离Cohn组分Ⅳ-1，第三步分离Cohn组分Ⅳ-4，第四步分离Cohn组分V，组分V沉淀经纯化过滤即得人血白蛋白；2超滤生产；3、配制与巴氏病毒灭活；4、灌装与后加温；5、包装检验。

Description

一种人血白蛋白的生产方法
技术领域
本发明涉及一种血液制品生产的工艺，具体是一种人血白蛋白的生产方法。
背景技术
国内血液制品生产的主要工艺是Cohn低温乙醇分步分离工艺。该工艺自初创以来，已经有70多年的历史了。70多年间，在生产和研究中有着不同的改进，虽然都是通过控制乙醇浓度、分离的温度、pH、蛋白质浓度、离子强度等五大要素进行血浆蛋白质的分离，但现有专利技术存在白蛋白得率低、原料利用率较低的局限。
发明内容
为克服上述缺陷，本发明提出一种4步法分离生产人血白蛋白的方法，增加了Cohn组分Ⅳ-1、Cohn组分Ⅳ-4的分离，为提高原料的利用率提供了工业化生产的条件。
该方法的基本原理为血浆蛋白Cohn低温乙醇分步分离。本发明所述的人血白蛋白的生产包括一下步骤：
1、四步法蛋白质分离工艺：
本步骤为以下4步，分别为：第一步分离Cohn组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ；第二步分离Cohn组分Ⅳ-1；第三步分离Cohn组分Ⅳ-4；第四步分离Cohn组分V,组分V沉淀经纯化过滤即得人血白蛋白。
2、超滤生产：
超滤的目的在于浓缩制品，通过超滤透析去除小分子物质，也包括组分分离过程中高达40%以上的乙醇，超滤选择的超滤膜的截留量为大于10KD，超滤的工艺为：等体积的无菌生理盐水透析2至6次，等体积的注射用水透析2至5次，超滤透析的温度为0至10℃。
3、配制与巴氏病毒灭活：
按照既定的白蛋白成分配方配制完成后，进行58℃至62℃恒温10小时（600分钟）的巴氏病毒灭活。
4、灌装与后加温：
在产品灌装-轧盖操作完成后，对所有产品进行55至62℃，90至300分钟的后加温处理。
5、包装检验：
经包装检验即为人血白蛋白成品，检验标准为中国药典最新的人血白蛋白标准，也可以参考欧洲药典、美国药典等进行成品检验。
所述的四步法蛋白质分离工艺的特点在于。
（1）、第一步分离（分离Cohn组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ）的工艺参数为：pH为6.5至7.8、乙醇含量为15%至24%、温度控制为-6.0℃至-2.5℃，蛋白质浓度范围为：4.0%至7.8%。
（2）、第二步分离（分离Cohn组分Ⅳ-1）的工艺参数为：pH为3.5至6.8、乙醇含量为12%至24%、温度控制为-5.0℃至-2.5℃，蛋白质浓度范围为：2.0%至5.8%。
（3）、第三步分离（分离Cohn组分Ⅳ-4）的工艺参数为：pH为4.5至6.8、乙醇含量为35%至54%、温度控制为-6.0℃至-2.5℃，蛋白质浓度范围为：1.0%至4.8%。
（4）、第四步分离（分离Cohn组分V）的工艺参数为：pH为3.5至5.8、乙醇含量为35%至54%、温度控制为-10.0℃至-4.5℃，蛋白质浓度范围为：0.6%至4.8%。
所述的超滤生产的特点在于：人血白蛋白生产工艺中采用超滤工序来浓缩人血白蛋白，超滤膜的截留量为大于10KD，超滤的工艺为：等体积的无菌生理盐水透析3至6次，等体积的注射用水透析3至6次，超滤透析的温度为0至10℃。
所述的配制与巴氏病毒灭活的特点在于：采用两步病毒处理措施，其中第一步为配制完成后采用10小时（600分钟）的巴氏病毒灭活处理，第二步灭活为在灌装轧盖后进行55至62℃，90至300分钟后加温处理。
该法生产的人血白蛋白产品符合中国药典的质量要求。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明作进一步描述。通过实施实例1说明本发明的技术方案及操作过程。
实施实例1：
1、四步法蛋白质分离工艺：
步骤为以下4步，分别为：第一步分离Cohn组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ；第二步分离Cohn组分Ⅳ-1；第三步分离Cohn组分Ⅳ-4；第四步分离Cohn组分V,组分V沉淀经纯化过滤即得人血白蛋白。
（1A）、分离Cohn组分I+Ⅱ+Ⅲ：
工艺参数为：pH为7.0、乙醇含量为23%、温度控制为-2.5℃，蛋白质浓度范围为6.8%。
组分沉淀制作完毕，按照5克/L加入硅藻土，压滤分离组分沉淀。压滤液用于分离Cohn组分Ⅵ-1。
（1B）、分离Cohn组分Ⅵ-1： 
工艺参数为：pH为5.8、乙醇含量为18%、温度控制为-3.2℃，蛋白质浓度范围为：3.8%，
组分沉淀制作完毕，按照6克/L加入硅藻土，压滤分离组分沉淀。压滤液用于分离Cohn组分Ⅵ-4。
(1C)、分离Cohn组分Ⅵ-4：
工艺参数为：pH为5.5、乙醇含量为48%、温度控制为-4.0℃，蛋白质浓度范围为：2.8%，组分沉淀制作完毕，按照4克/L加入硅藻土，压滤分离组分沉淀。压滤液用于分离Cohn组分V。
(1D)、分离Cohn组分V：
工艺参数为：pH为4.2、乙醇含量为44%、温度控制为-9.8℃，蛋白质浓度范围为：1.6%。
组分沉淀制作完毕，按照6克/L加入硅藻土，压滤分离组分沉淀。压滤所得的沉淀即为组分V，纯化过滤后用于生产人血白蛋白。
2、超滤生产：
超滤的目的在于浓缩制品，通过超滤透析去除小分子物质，也包括组分分离过程中高达40%以上的乙醇，超滤选择的超滤膜的截留量为大于10KD，超滤的工艺为：等体积的无菌生理盐水透析6次，等体积的注射用水透析5次，超滤透析的温度为9℃。
3、配制与巴氏病毒灭活：
按照既定的白蛋白成分配方配制完成后，进行58℃至62℃恒温10小时的巴氏病毒灭活。
4、灌装与后加温：
在产品灌装-轧盖操作完成后，对所有产品进行55至62℃， 300分钟的后加温处理。
5、包装检验：
经包装检验即为人血白蛋白成品，检验标准为中国药典最新的人血白蛋白标准，也可以参考欧洲药典、美国药典等进行成品检验。

Claims (8)

1.一种人血白蛋白生产方法，该生产方法的原理是血浆蛋白Cohn低温乙醇分步分离，其特点在于包含以下几个步骤：1、四步法蛋白质分离工艺；2、超滤生产；3、配制与巴氏病毒灭活；4、灌装与后加温；5、包装检验。
2.根据权利要求1 ，所述的人血白蛋白生产方法的特征在于蛋白质分离的步骤为4步，即第一步分离Cohn组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ；第二步分离Cohn组分Ⅳ-1，第三步分离Cohn组分Ⅳ-4，第四步分离Cohn组分V,组分V沉淀经纯化过滤即得人血白蛋白。
3.根据权利要求1， 所述的人血白蛋白生产方法的特征在于超滤生产步骤中，超滤膜的截留量为大于10KD，超滤的工艺为：等体积的无菌生理盐水透析3至6次，等体积的注射用水透析3至6次，超滤透析的温度为0至10℃。
4.根据权利要求1， 所述的人血白蛋白生产方法的特征在于配制与巴氏病毒灭活步骤中采用两步病毒处理措施，其中第一步为配制完成后采用600分钟的巴氏病毒灭活处理，第二步灭活为在灌装轧盖后进行55至62℃，90至300分钟后加温处理。
5.根据权利要求1 、2，所述的人血白蛋白生产方法的特征在于在蛋白质的分离中，第一步分离（分离Cohn组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ）的工艺参数为：pH为6.5至7.8、乙醇含量为15%至24%、温度控制为-6.0℃至-2.5℃，蛋白质浓度范围为：4.0%至7.8%。
6.根据权利要求1 、2，所述的人血白蛋白生产方法的特征在于在蛋白质的分离中，第二步分离（分离Cohn组分Ⅳ-1）的工艺参数为：pH为3.5至6.8、乙醇含量为12%至24%、温度控制为-5.0℃至-2.5℃，蛋白质浓度范围为：2.0%至5.8%。
7.根据权利要求1 、2，所述的人血白蛋白生产方法的特征在于在蛋白质的分离中，第三步分离（分离Cohn组分Ⅳ-4）的工艺参数为：pH为4.5至6.8、乙醇含量为35%至54%、温度控制为-6.0℃至-2.5℃，蛋白质浓度范围为：1.0%至4.8%。
8.根据权利要求1 、2，所述的人血白蛋白生产方法的特征在于在蛋白质的分离中，第四步分离（分离Cohn组分V）的工艺参数为：pH为3.5至5.8、乙醇含量为35%至54%、温度控制为-10.0℃至-4.5℃，蛋白质浓度范围为：0.6%至4.8%。
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