CN103394076A - 一种人血白蛋白的制备工艺 - Google Patents
一种人血白蛋白的制备工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103394076A CN103394076A CN2013103552729A CN201310355272A CN103394076A CN 103394076 A CN103394076 A CN 103394076A CN 2013103552729 A CN2013103552729 A CN 2013103552729A CN 201310355272 A CN201310355272 A CN 201310355272A CN 103394076 A CN103394076 A CN 103394076A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- component
- supernatant
- liter
- ethanol
- mins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开一种人血白蛋白的制备工艺，采用低温乙醇分离法，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；组分I制作；组分II+III制作；组分IV制作；组分V制作；组分V精制；超滤；稀配；巴氏灭活；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装；本发明采用压滤技术进行固液分离，显著提高白蛋白收率>29g/L血浆，纯度>98%和制品的稳定性。通过采用Zetaplus深层滤芯过滤结合延长巴氏灭活时间，有效地控制了制品的PKA水平至<20IU/ml，降低了制品中热源超标和病毒感染的风险。工艺过程中使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，不仅可以控制制品中的乙醇残留量至<0.025%，而且能够有效将铝残留量降到最低至<50μg/L。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，涉及蛋白质药物的分离及纯化工艺，特别是涉及一种人血白蛋白的制备工艺。
背景技术
人血白蛋白是血液制剂的主要产品，也是血浆蛋白生产工艺主干的最终产物。白蛋白在肝细胞合成速度极快，具有分子相对小(分子量66250)、表面积相对较大，分子构形比较对称，结构简单、牢固、富韧性等特点。白蛋白对失血性休克，严重烧伤，脑水肿，肝肾疾病的血症有重要作用。自从Cohn等人于40年代创立低温乙醇人血浆蛋白分离技术以来，血浆蛋白的工业化大生产取得了长足的进展。
目前采用低温乙醇分离法生产人血白蛋白的厂家，多数存在白蛋白得率低，产品稳定性差，纯度低，其他部分指标容易不达标，如PKA含量，铝残留量，多聚体含量等。出现以上不足的主要原因还是制备工艺的不合理。目前大多数制备工艺中分离组分多采用离心分离法，而组分在高速离心过程中，因离心机的升温作用容易造成部分应沉淀的杂蛋白溶解而无法除去，留下了不稳定因素。二者高速的离心过程，产生强大的离心剪切力，易破坏蛋白质的分子结构，势必降低白蛋白的得率，影响制品的纯度。
现有低温乙醇分离法中因原料血浆保存不当，白蛋白制备过程中反复溶解和制备组分沉淀引起部分蛋白变性，皆会引起激肽释放酶原激活剂（PKA）升高。当人体输注PKA含量超标的人血白蛋白时，将引起血管舒张、毛细血管通透性增加、血压下降等不良反应。
现有白蛋白制备工艺中，皆有超滤技术的应用，但主要使用单一溶液进行透析，仅能很好地将乙醇残留量控制在要求范围内，而不能有效将铝残留量降到最低，以确保制品在有效期内铝残留量不超标。铝可能具有引发低血色素性贫血、老年痴呆症、骨软化病和慢性肾功能损害等危险性。2010年版中国药典收入了人血白蛋白制品铝残留量的要求，质量标准与欧洲药典一致（≤200μg/L）。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种人血白蛋白的制备工艺，能提高白蛋白的得率和稳定性，保证产品的质量。
为解决现有技术中的问题，本发明主要从以下几个方面入手：
1、采用压滤技术替代传统的离心技术进行固液分离，控制进液压力最高不超过0.20Mpa。
2、采用Zetaplus深层滤芯过滤结合延长巴氏灭活时间，降低人血白蛋白制品中的激肽释放酶原激活剂（PKA）含量。
3、采用超滤技术，分别使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，提高制品质量。
本发明所采用的技术方案是：一种人血白蛋白的制备工艺，采用低温乙醇分离法，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；组分I制作；组分II+III制作；组分IV制作；组分V制作；组分V精制；超滤；稀配；巴氏灭活；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装；其特征在于： 所述组分II+III制作、组分IV制作、组分V制作和组分V精制中采用压滤技术替代传统的离心技术进行固液分离，控制进液压力最高不超过0.20Mpa；白蛋白收率>29g/L血浆，纯度>98%。
所述组分V精制中采用Zetaplus深层滤芯过滤，提高对内毒素和病毒的脱除能力，吸附制品中带负电的凝血因子XIIa，降低人血白蛋白制品中的激肽释放酶原激活剂（PKA）含量。
所述超滤中采用超滤技术将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，通过使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，控制制品中的乙醇残留量≤0.025%，铝残留量<50μg/L。
所述巴氏灭活中巴氏灭活的时间为12个小时，将制品中的PKA含量降到<20IU/ml。
优选：
所述组分II+III制作：取组分I 上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80—6.85，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－4—－6℃；加完乙醇后，pH为6.80—7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入17—19g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；组分Ⅱ+Ⅲ沉淀用于制备免疫球蛋白，组分Ⅱ+Ⅲ上清液进入下一步工序。
所述组分IV制作：取组分Ⅱ+Ⅲ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分Ⅱ+Ⅲ上清液的pH值为5.70—5.90，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－4—－6℃；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为40％，流速为1.0—1.2升/分钟；加完乙醇后，pH为5.90—6.10；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入14—16g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分IV沉淀和组分IV上清液；组分IV沉淀废弃，组分IV上清液进入下一步工序。
所述组分V制作：取组分IV上清液，加pH4.0缓冲液调节组分IV上清液的pH值为4.80—5.00，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－8℃以下，搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入3.5—4.5g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分V沉淀和组分V上清液；组分V上清液转移至酒精回收塔回收酒精，组分V沉淀进入下一步工序。
所述组分V精制：取组分V沉淀用4.8—5.2倍注射用水充分溶解，加pH4.0缓冲液调节组分V沉淀溶解液的pH值为4.50—4.60，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的25％乙醇至乙醇体积比浓度为10％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－2—－3℃；搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入18—22g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa；滤液用Zetaplus深层滤芯过滤，得到组分V纯化液，过滤过程中，进液压力最高不超过0.20Mpa。
所述超滤：超滤过程中控制进液压不大于0.45Mpa，回流压不大于0.30Mpa，进液压与回流压压差大于0.10Mpa；将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，浓缩结束后，依次用4倍体积的2—8℃的0.85%氯化钠溶液和5倍体积的2—8℃的0.5%氯化钠溶液进行等体积透析；透析结束后，将蛋白浓度浓缩至20%以上；使用1mol/L NaHCO3调节蛋白液的pH值至6.90—7.10。
所述巴氏灭活：稀配液搅拌均匀后，使用60.5℃的夹套循环水升温，当蛋白液温度升至59.5℃时，开始计时，进行59.5—60.5℃灭活12h；灭活完后，将蛋白液温度降至20—30℃。
本发明所述的组分概念为：组分I；组分II+III；组分IV为所属技术领域的通用分类方法；在本发明中是也是按通用分类方法分类后物质的名称，并不是指单纯的序号。
本发明的有益效果：
本发明有益效果：
一、创新的技术具有以下优点：
1、所述组分II+III制作、组分IV制作、组分V制作和组分V精制中皆采用压滤技术替代传统的离心技术进行固液分离，控制进液压力最高不超过0.20Mpa。采用压滤法，其进液速度不需随时调节，出液温度几乎不变，不易导致蛋白变性。而且，压滤过程中使用的助滤剂（如硅藻土等）可以吸附一定的杂质，压滤结束后，还可以通过冲洗滤饼降低沉淀中的杂质。因此，压滤法能显著增加白蛋白收率（>29g/L血浆）、纯度（>98%），提高制品外观质量，分离出来的白蛋白质量稳定，临床使用安全性高。
2、所述组分V精制中采用Zetaplus深层滤芯过滤，该滤芯由著名的滤芯生产商3M公司旗下CUNO公司生产，材质是由木质纤维加无机助滤剂以带正电位树脂固着而成，能够静电吸附带负电的物质于纤维表面。本发明中采用该滤芯对内毒素和病毒有一定的脱除能力，而且能够吸附制品中带负电的凝血因子XIIa，降低人血白蛋白制品中的激肽释放酶原激活剂（PKA）含量，为患者安全用药提供了可靠保证。
3、所述超滤中采用超滤技术将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，浓缩结束后，依次用4倍体积的2—8℃的0.85%氯化钠溶液和5倍体积的2—8℃的0.5%氯化钠溶液进行等体积透析。通过使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，不仅可以控制制品中的乙醇残留量（≤0.025%），而且能够有效将铝残留量降到最低（<50μg/L），确保制品在有效期内铝残留量不超标。
4、所述巴氏灭活中巴氏灭活的时间较现有技术延长了2个小时，由于一定的温度对PKA具有灭活作用，本发明在巴氏灭活过程中延长2个小时，对蛋白分子活性、各项理化指标及蛋白收率均影响较小，但对PKA的灭活效果较好，结合组分V精制中采用Zetaplus深层滤芯过滤，能够将制品中的PKA含量降到很低的水平（<20IU/ml）。
二、本发明与现有技术对比：
使用本发明制备的人血白蛋白与现有技术相比具有明显的优势，主要表现在白蛋白收率>29g/L血浆，高于行业内现有水平。其他主要技术指标，如纯度、多聚体含量、激肽释放酶原激活剂（PKA）含量等，也均超过国家标准。部分技术指标与《中国药典》2010版三部标准对比如下：
| 主要技术指标 | 《中国药典》2010版三部 | 本发明 |
| 纯度 | ≥96% | >98% |
| 多聚体含量 | ≤5.0% | <3.0% |
| 铝残留量 | ≤200μg/L | <50μg/L |
| 激肽释放酶原激活剂（PKA）含量 | ≤35IU/ml | <20IU/ml |
具体实施方式
实施例1：
一、 基本要求
1、 原料血浆的采集和质量应符合“血液制品生产用人血浆”
2、 生产设备管路期间应清洁消毒等。
二、主要试剂配制
1、 pH4.0缓冲液：取65.6g无水醋酸钠用适量注射用水充分溶解，加冰醋酸244.9ml，加注射用水至1L混匀。
2、 1mol/L碳酸氢钠溶液：取84g碳酸氢钠用适量注射用水充分溶解，加注射用水至1L混匀。
3、 50%乙醇溶液：接取95%乙醇0.474kg，加注射用水至1kg搅拌均匀。
4、 25%乙醇溶液：接取95%乙醇0.220kg，加注射用水至1kg搅拌均匀。
5、 0.85%氯化钠透析液：取8.5g氯化钠用适量注射用水充分溶解，加注射用水至1L搅拌均匀。
6、 0.5%氯化钠透析液：取5g氯化钠用适量注射用水充分溶解，加注射用水至1L搅拌均匀。
三、工艺流程
1、血浆溶解：将原料血浆，先用温度低于30℃的75％酒精喷淋，再用温度低于30℃注射用水冲洗尽酒精并吹干，然后将原料血浆破袋后输送到融浆罐，用30—35℃的水进行夹层循环融浆，血浆融化后，及时停止水循环，把血浆温度控制在0—4℃之间，离心分离沉淀，去除沉淀后的血浆输送至反应罐进行提取分离；
2、组分I制作：血浆进入反应罐后，计量、启动搅拌并控制血浆的温度在0—1℃之间，滴加pH4.0缓冲液，控制流速不超过1.0升/分钟，调节pH值为6.80—7.00。添加低于－15℃的50％乙醇至乙醇体积比浓度为 8％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在-1—-3℃。加完乙醇后进行离心，离心得组分I沉淀和组分I上清液，组分I沉淀用于制备人纤维蛋白原，组分I 上清液进入下一步工序。
3、 组分II+III制作：取组分I 上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80—6.85，控制流速不超过1.0升/分钟。添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－4—－6℃。加完乙醇后，pH为6.80—7.00。搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液。组分Ⅱ+Ⅲ沉淀用于制备免疫球蛋白，组分Ⅱ+Ⅲ上清液进入下一步工序。
4、组分IV制作：取组分Ⅱ+Ⅲ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分Ⅱ+Ⅲ上清液的pH值为5.70—5.90，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－4—－6℃。添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为40％，流速为1.0—1.2升/分钟。加完乙醇后，pH为5.90—6.10。搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入15g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分IV沉淀和组分IV上清液。组分IV沉淀废弃，组分IV上清液进入下一步工序。
5、组分V制作：取组分IV上清液，加pH4.0缓冲液调节组分IV上清液的pH值为4.80—5.00，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－8℃以下，搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入4g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分V沉淀和组分V上清液。组分V上清液转移至酒精回收塔回收酒精，组分V沉淀进入下一步工序。
6、组分V精制：取组分V沉淀用5倍注射用水充分溶解，加pH4.0缓冲液调节组分V沉淀溶解液的pH值为4.50—4.60，控制流速不超过1.0升/分钟。添加低于－15℃的25％乙醇至乙醇体积比浓度为10％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－2—－3℃。搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入20g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa。滤液用Zetaplus深层滤芯过滤，得到组分V纯化液，过滤过程中，进液压力最高不超过0.20Mpa。
7、超滤：超滤过程中控制进液压不大于0.45Mpa，回流压不大于0.30Mpa，进液压与回流压压差大于0.10Mpa。将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，浓缩结束后，依次用4倍体积的2—8℃的0.85%氯化钠溶液和5倍体积的2—8℃的0.5%氯化钠溶液进行等体积透析。透析结束后，将蛋白浓度浓缩至20%以上。使用1mol/L NaHCO3调节蛋白液的pH值至6.90—7.10。
8、稀配：按20%蛋白浓度进行稀配，分别加入保护剂辛酸钠至0.16mmol/g蛋白浓度和氯化钠至最终原液145mmol/L，补加注射用水至最终稀配量，搅拌均匀。
9、巴氏灭活：稀配液搅拌均匀后，使用60.5℃的夹套循环水升温，当蛋白液温度升至59.5℃时，开始计时，进行59.5—60.5℃灭活12h。灭活完后，将蛋白液温度降至20—30℃。
10、蛋白除菌分装：将灭活后的蛋白液用0.2μm的除菌滤芯进行除菌过滤，按要求灌装。
11、制品孵育：将灌装后制品移至30—32℃孵放间孵育14天，孵育完后，进行成品检定。
12、成品包装：将检定合格的产品进行包装。
Claims (10)
1.一种人血白蛋白的制备工艺，采用低温乙醇分离法，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；组分I制作；组分II+III制作；组分IV制作；组分V制作；组分V精制；超滤；稀配；巴氏灭活；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装；其特征在于： 所述组分II+III制作、组分IV制作、组分V制作和组分V精制中采用压滤技术替代传统的离心技术进行固液分离，控制进液压力最高不超过0.20Mpa；白蛋白收率>29g/L血浆，纯度>98%。
2. 根据权利要求1所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述组分V精制中采用Zetaplus深层滤芯过滤，提高对内毒素和病毒的脱除能力，吸附制品中带负电的凝血因子XIIa，降低人血白蛋白制品中的激肽释放酶原激活剂PKA含量。
3.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述超滤中采用超滤技术将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，通过使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，控制制品中的乙醇残留量≤0.025%，铝残留量<50μg/L。
4.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述组分II+III制作：取组分I 上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80—6.85，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－4—－6℃；加完乙醇后，pH为6.80—7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入17—19g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；组分Ⅱ+Ⅲ沉淀用于制备免疫球蛋白，组分Ⅱ+Ⅲ上清液进入下一步工序。
5.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述组分IV制作：取组分Ⅱ+Ⅲ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分Ⅱ+Ⅲ上清液的pH值为5.70—5.90，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－4—－6℃；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为40％，流速为1.0—1.2升/分钟；加完乙醇后，pH为5.90—6.10；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入14—16g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分IV沉淀和组分IV上清液；组分IV沉淀废弃，组分IV上清液进入下一步工序。
6.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述组分V制作：取组分IV上清液，加pH4.0缓冲液调节组分IV上清液的pH值为4.80—5.00，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－8℃以下，搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入3.5—4.5g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分V沉淀和组分V上清液；组分V上清液转移至酒精回收塔回收酒精，组分V沉淀进入下一步工序。
7.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述组分V精制：取组分V沉淀用4.8—5.2倍注射用水充分溶解，加pH4.0缓冲液调节组分V沉淀溶解液的pH值为4.50—4.60，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的25％乙醇至乙醇体积比浓度为10％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－2—－3℃；搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入18—22g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa；滤液用Zetaplus深层滤芯过滤，得到组分V纯化液，过滤过程中，进液压力最高不超过0.20Mpa。
8.根据权利要求3所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述超滤：超滤过程中控制进液压不大于0.45Mpa，回流压不大于0.30Mpa，进液压与回流压压差大于0.10Mpa；将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，浓缩结束后，依次用4倍体积的2—8℃的0.85%氯化钠溶液和5倍体积的2—8℃的0.5%氯化钠溶液进行等体积透析；透析结束后，将蛋白浓度浓缩至20%以上；使用1mol/L NaHCO3调节蛋白液的pH值至6.90—7.10。
9.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于：所述巴氏灭活：稀配液搅拌均匀后，使用60.5℃的夹套循环水升温，当蛋白液温度升至59.5℃时，开始计时，进行59.5—60.5℃灭活12h；灭活完后，将蛋白液温度降至20—30℃。
10.根据权利要求1或2所述的一种人血白蛋白的制备工艺，其特征在于制备工艺如下：
（1）、血浆溶解：将原料血浆，先用温度低于30℃的75％酒精喷淋，再用温度低于30℃注射用水冲洗尽酒精并吹干，然后将原料血浆破袋后输送到融浆罐，用30—35℃的水进行夹层循环融浆，血浆融化后，及时停止水循环，把血浆温度控制在0—4℃之间，离心分离沉淀，去除沉淀后的血浆输送至反应罐进行提取分离；
（2）、组分I制作：血浆进入反应罐后，计量、启动搅拌并控制血浆的温度在0—1℃之间，滴加pH4.0缓冲液，控制流速不超过1.0升/分钟，调节pH值为6.80—7.00；添加低于－15℃的50％乙醇至乙醇体积比浓度为 8％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在-1—-3℃；加完乙醇后进行离心，离心得组分I沉淀和组分I上清液，组分I沉淀用于制备人纤维蛋白原，组分I 上清液进入下一步工序；
（3）、 组分II+III制作：取组分I 上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80—6.85，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－4—－6℃；加完乙醇后，pH为6.80—7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；组分Ⅱ+Ⅲ沉淀用于制备免疫球蛋白，组分Ⅱ+Ⅲ上清液进入下一步工序；
（4）、组分IV制作：取组分Ⅱ+Ⅲ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分Ⅱ+Ⅲ上清液的pH值为5.70—5.90，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－4—－6℃；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为40％，流速为1.0—1.2升/分钟；加完乙醇后，pH为5.90—6.10；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入15g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分IV沉淀和组分IV上清液；组分IV沉淀废弃，组分IV上清液进入下一步工序；
（5）、组分V制作：取组分IV上清液，加pH4.0缓冲液调节组分IV上清液的pH值为4.80—5.00，控制流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－8℃以下，搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入4g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分V沉淀和组分V上清液；组分V上清液转移至酒精回收塔回收酒精，组分V沉淀进入下一步工序；
（6）、组分V精制：取组分V沉淀用5倍注射用水充分溶解，加pH4.0缓冲液调节组分V沉淀溶解液的pH值为4.50—4.60，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的25％乙醇至乙醇体积比浓度为10％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－2—－3℃；搅拌120分钟以上后，再按每升反应液加入20g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa；滤液用Zetaplus深层滤芯过滤，得到组分V纯化液，过滤过程中，进液压力最高不超过0.20Mpa；
（7）、超滤：超滤过程中控制进液压不大于0.45Mpa，回流压不大于0.30Mpa，进液压与回流压压差大于0.10Mpa；将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，浓缩结束后，依次用4倍体积的2—8℃的0.85%氯化钠溶液和5倍体积的2—8℃的0.5%氯化钠溶液进行等体积透析；透析结束后，将蛋白浓度浓缩至20%以上；使用1mol/L NaHCO3调节蛋白液的pH值至6.90—7.10；
（8）、稀配：按20%蛋白浓度进行稀配，分别加入保护剂辛酸钠至0.16mmol/g蛋白浓度和氯化钠至最终原液145mmol/L，补加注射用水至最终稀配量，搅拌均匀；
（9）、巴氏灭活：稀配液搅拌均匀后，使用60.5℃的夹套循环水升温，当蛋白液温度升至59.5℃时，开始计时，进行59.5—60.5℃灭活12h；灭活完后，将蛋白液温度降至20—30℃；
（10）、蛋白除菌分装：将灭活后的蛋白液用0.2μm的除菌滤芯进行除菌过滤，按要求灌装；
（11）、制品孵育：将灌装后制品移至30—32℃孵放间孵育14天，孵育完后，进行成品检定；
（12）、成品包装：将检定合格的产品进行包装。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310355272.9A CN103394076B (zh) | 2013-08-15 | 2013-08-15 | 一种人血白蛋白的制备工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310355272.9A CN103394076B (zh) | 2013-08-15 | 2013-08-15 | 一种人血白蛋白的制备工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103394076A true CN103394076A (zh) | 2013-11-20 |
| CN103394076B CN103394076B (zh) | 2015-01-21 |
Family
ID=49557928
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310355272.9A Active CN103394076B (zh) | 2013-08-15 | 2013-08-15 | 一种人血白蛋白的制备工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103394076B (zh) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103833844A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-06-04 | 贵州中泰生物科技有限公司 | 一种人血白蛋白的生产方法 |
| CN104004084A (zh) * | 2014-04-12 | 2014-08-27 | 浙江海康生物制品有限责任公司 | 一种人血白蛋白的生产方法 |
| CN104558154A (zh) * | 2015-01-05 | 2015-04-29 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 一种从组分iv-2沉淀中提取人血白蛋白的方法 |
| CN107216383A (zh) * | 2017-07-13 | 2017-09-29 | 同路生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法及该人血白蛋白 |
| CN107226859A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-10-03 | 博雅生物制药集团股份有限公司 | 一种人凝血因子ⅷ的制备方法 |
| CN107857811A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-03-30 | 广东丹霞生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备工艺 |
| CN108801754A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 一种提高人血白蛋白铝残留量重复性的方法 |
| CN109053876A (zh) * | 2018-09-14 | 2018-12-21 | 同路生物制药有限公司 | 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法 |
| CN110590935A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-20 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 人血白蛋白去除多聚体工艺 |
| CN112521487A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-03-19 | 博雅生物制药(广东)有限公司 | 一种改进的人血白蛋白生产工艺 |
| CN112521486A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-03-19 | 博雅生物制药(广东)有限公司 | 一种乙醇实时控制的低温乙醇分离人血白蛋白的生产方法 |
| CN116589559A (zh) * | 2023-06-05 | 2023-08-15 | 广东丹霞生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白制备工艺 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101333245A (zh) * | 2007-06-26 | 2008-12-31 | 湖南紫光古汉南岳制药有限公司 | 一种人血白蛋白的分离方法 |
| CN101972479A (zh) * | 2010-11-08 | 2011-02-16 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 |
| CN102161702A (zh) * | 2011-01-28 | 2011-08-24 | 哈尔滨派斯菲科生物制药股份有限公司 | 人血白蛋白的生产方法 |
| CN102532304A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-04 | 武汉中原瑞德生物制品有限责任公司 | 人血白蛋白的制备方法 |
| CN102584934A (zh) * | 2012-03-19 | 2012-07-18 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 |
| CN103087184A (zh) * | 2013-01-14 | 2013-05-08 | 山西康宝生物制品股份有限公司 | 人血白蛋白制品中激肽释放酶原激活剂的控制方法 |
-
2013
- 2013-08-15 CN CN201310355272.9A patent/CN103394076B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101333245A (zh) * | 2007-06-26 | 2008-12-31 | 湖南紫光古汉南岳制药有限公司 | 一种人血白蛋白的分离方法 |
| CN101972479A (zh) * | 2010-11-08 | 2011-02-16 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 |
| CN102161702A (zh) * | 2011-01-28 | 2011-08-24 | 哈尔滨派斯菲科生物制药股份有限公司 | 人血白蛋白的生产方法 |
| CN102532304A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-04 | 武汉中原瑞德生物制品有限责任公司 | 人血白蛋白的制备方法 |
| CN102584934A (zh) * | 2012-03-19 | 2012-07-18 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 |
| CN103087184A (zh) * | 2013-01-14 | 2013-05-08 | 山西康宝生物制品股份有限公司 | 人血白蛋白制品中激肽释放酶原激活剂的控制方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 浦奕奕: "低温乙醇法在人血白蛋白工业化生产中的应用", 《考试周刊》 * |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103833844A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-06-04 | 贵州中泰生物科技有限公司 | 一种人血白蛋白的生产方法 |
| CN104004084A (zh) * | 2014-04-12 | 2014-08-27 | 浙江海康生物制品有限责任公司 | 一种人血白蛋白的生产方法 |
| CN104004084B (zh) * | 2014-04-12 | 2016-10-26 | 浙江海康生物制品有限责任公司 | 一种人血白蛋白的生产方法 |
| CN104558154A (zh) * | 2015-01-05 | 2015-04-29 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 一种从组分iv-2沉淀中提取人血白蛋白的方法 |
| CN107216383A (zh) * | 2017-07-13 | 2017-09-29 | 同路生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法及该人血白蛋白 |
| CN107226859B (zh) * | 2017-08-10 | 2020-11-24 | 博雅生物制药集团股份有限公司 | 一种人凝血因子ⅷ的制备方法 |
| CN107226859A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-10-03 | 博雅生物制药集团股份有限公司 | 一种人凝血因子ⅷ的制备方法 |
| CN107857811A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-03-30 | 广东丹霞生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备工艺 |
| CN108801754A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 一种提高人血白蛋白铝残留量重复性的方法 |
| CN109053876A (zh) * | 2018-09-14 | 2018-12-21 | 同路生物制药有限公司 | 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法 |
| CN109053876B (zh) * | 2018-09-14 | 2021-07-27 | 同路生物制药有限公司 | 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法 |
| CN110590935A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-20 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 人血白蛋白去除多聚体工艺 |
| CN110590935B (zh) * | 2019-09-23 | 2024-01-30 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 人血白蛋白去除多聚体工艺 |
| CN112521487A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-03-19 | 博雅生物制药(广东)有限公司 | 一种改进的人血白蛋白生产工艺 |
| CN112521486A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-03-19 | 博雅生物制药(广东)有限公司 | 一种乙醇实时控制的低温乙醇分离人血白蛋白的生产方法 |
| CN116589559A (zh) * | 2023-06-05 | 2023-08-15 | 广东丹霞生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白制备工艺 |
| CN116589559B (zh) * | 2023-06-05 | 2024-02-27 | 广东丹霞生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白制备工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103394076B (zh) | 2015-01-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103394076B (zh) | 一种人血白蛋白的制备工艺 | |
| RU2742655C1 (ru) | Способ производства иммуноглобулина для внутривенного введения | |
| CN101972479B (zh) | 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 | |
| CN103627760B (zh) | 一种用核桃粕制备具有降尿酸功效的生物活性肽的方法 | |
| CN102161702B (zh) | 人血白蛋白的生产方法 | |
| NZ589297A (en) | Process for producing milk fractions rich in secretory immunoglobulins | |
| CN105037487A (zh) | 一种人血白蛋白的制备方法 | |
| CN103739735B (zh) | 一种从黑茶金花中提取茶多糖的方法 | |
| CN105330736A (zh) | 一种从去冷胶血浆中同时制备人凝血因子ix及vii的方法 | |
| CN102775466A (zh) | 富硒酵母中含硒蛋白的制备方法 | |
| CN102206273A (zh) | 一种从猪血中提取免疫球蛋白g的方法 | |
| CN105311075A (zh) | 一种刺五加提取物的制备方法 | |
| CN1562339A (zh) | 脑蛋白水解物制剂的制备方法 | |
| CN104497133A (zh) | 一种吸附柱层析纯化乌司他丁的方法及含有乌司他丁的药物组合物 | |
| CN112521487A (zh) | 一种改进的人血白蛋白生产工艺 | |
| CN103725665A (zh) | 一种从羊胰脏中提取糜蛋白酶的方法 | |
| CN114736294B (zh) | 一种破伤风免疫球蛋白的纯化方法及其亲和层析填料 | |
| CN101161232A (zh) | 静脉注射人乙型肝炎免疫球蛋白制备方法 | |
| CN103087184B (zh) | 人血白蛋白制品中激肽释放酶原激活剂的控制方法 | |
| CN102603891B (zh) | 一种双重病毒灭活制备破伤风人免疫球蛋白的方法 | |
| CN103864926B (zh) | 一种双重病毒灭活制备狂犬人免疫球蛋白的方法 | |
| CN112521486A (zh) | 一种乙醇实时控制的低温乙醇分离人血白蛋白的生产方法 | |
| CN105384813A (zh) | 一种吸附柱层析纯化乌司他丁的方法及提高乌司他丁稳定性的药物组合物 | |
| CN116589559B (zh) | 一种人血白蛋白制备工艺 | |
| CN104531635A (zh) | 一种玻璃酸酶粗品的提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 344000 Jiangxi city of Fuzhou province high tech Industrial Park Hui Road No. 333 Patentee after: BOYA BIO-PHARMACEUTICAL GROUP CO.,LTD. Address before: 344000 Jiangxi Province, Fuzhou City Economic Development Zone Hui kinest Road 333 Patentee before: JIANGXI BOYA BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO.,LTD. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 344000 No. 333, Huiquan Road, Fuzhou high tech Industrial Development Zone, Fuzhou City, Jiangxi Province Patentee after: China Resources Boya biopharmaceutical Group Co.,Ltd. Address before: 344000 No. 333 Huiquan Road, Fuzhou High-tech Industrial Park, Jiangxi Province Patentee before: BOYA BIO-PHARMACEUTICAL GROUP CO.,LTD. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |