CN109053876A - 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法 - Google Patents

一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109053876A
CN109053876A CN201811071508.5A CN201811071508A CN109053876A CN 109053876 A CN109053876 A CN 109053876A CN 201811071508 A CN201811071508 A CN 201811071508A CN 109053876 A CN109053876 A CN 109053876A
Authority
CN
China
Prior art keywords
concentration
temperature
liquid
filtration
alcohol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811071508.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109053876B (zh
Inventor
徐河
胡辉恒
邓坤
王贺
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TONROL BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
TONROL BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TONROL BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical TONROL BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN201811071508.5A priority Critical patent/CN109053876B/zh
Publication of CN109053876A publication Critical patent/CN109053876A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109053876B publication Critical patent/CN109053876B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，包括以下步骤：(a)血浆合并融化；(b)混合血浆冷沉淀离心；(c)FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及过滤分离；(d)FⅣ乙醇沉淀及过滤分离；(e)FⅤ乙醇沉淀及过滤分离；(f)精制纯化：在步骤(e)中所述FⅤ沉淀中加入注射用水、乙醇和硅藻土，得到纯化过滤液；(g)超滤透析：将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，通过使用高低两种梯度浓度的NaCl溶液超滤透析；(h)配液；(i)巴氏灭活；(j)分装；(k)孵育。本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，成本低，操作简便，铝离子去除效果显著，可将铝离子含量控制在20μg/L以下。

Description

一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，特别是涉及一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法。
背景技术
铝并非人体需要的微量元素，摄入的铝超过国家标准会对人体造成危害，铝对人体细胞的正常代谢会产生影响，导致人记忆力衰退，引发老年人痴呆的问题，铝盐一旦进入人体，首先沉积在大脑内，可能导致脑损伤，造成严重的记忆力丧失，这是老年性痴呆症特有的症状，铝能直接损害成骨细胞的活性，从而抑制骨的基质合成。对于儿童，正在成长和智力发育过程中，铝超标就会严重影响儿童的智力发育过程。
《欧洲药典》及《中国药典》2015版均规定了人血白蛋白制品中铝残留量不高于200μg/L。因生产工艺的不同，市场上人血白蛋白铝离子含量存在较大差异，平均含量在100μg/L以上，且人血白蛋白铝离子含量在储存过程中呈升高趋势，经研究表明，市场上部分人血白蛋白铝离子含量在有效期内就已经超过200μg/L的标准。
发明内容
针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，操作简易，能够降低人血白蛋白制品中铝离子残留量，提高人血白蛋白的安全性。
本发明采用的技术方案是：
一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，包括以下步骤：
(a)血浆合并融化：采用水浴融化法，得到混合血浆；
(b)混合血浆冷沉淀离心；
(c)FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及过滤分离：从离心后的血浆中过滤分离得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液；
(d)FⅣ乙醇沉淀及过滤分离：从步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液中过滤分离得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液；
(e)FⅤ乙醇沉淀及过滤分离：从步骤(d)中所述FⅣ上清液中过滤分离得到FⅤ沉淀；
(f)精制纯化：在步骤(e)中所述FⅤ沉淀中加入注射用水、乙醇和硅藻土，得到纯化过滤液；
(g)超滤透析：将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，通过使用高低两种梯度浓度的NaCl溶液超滤透析；
(h)配液；
(i)巴氏灭活；
(j)分装；
(k)孵育。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及分离具体为：用0.1倍血浆体积的0.9wt％NaCl溶液稀释离心后血浆，调pH值为6.2～6.8，乙醇浓度控制在19～21wt％，最终温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置3～20h后过滤，得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，步骤(d)中所述FⅣ乙醇沉淀及过滤分离具体为：将步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液pH调至5.9～6.5，加入-15℃以下95wt％乙醇，至最终乙醇浓度为39～41wt％，反应液温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置4～20h后过滤，得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，步骤(e)中所述FⅤ乙醇沉淀及过滤分离具体为：将步骤(d)中所述FⅣ上清液降温至-10～-8℃后，按0.3％(W/V)加入硅藻土，搅拌30min后过滤；将过滤后的滤液pH调至4.7～4.9，乙醇浓度最终为39～41wt％，反应液温度控制在-10～-9℃，继续搅拌3h，静置2～24h后过滤，得到FⅤ沉淀，出液澄清透明。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，步骤(f)中所述精制纯化具体为：在纯化罐中加入不超过3.5倍所述FⅤ沉淀重的注射用水，添加95wt％乙醇，至乙醇浓度不超过8.5wt％，并搅拌混匀，降温至0℃；然后将FⅤ沉淀转移到纯化罐中，按最终每公斤沉淀30/95(L)补加95wt％乙醇，再补加0℃注射用水至FⅤ沉淀重量的5倍体积，使最终乙醇浓度为12wt％；补加硅藻土，使最终硅藻土含量不低于0.5％(W/V)；充分溶解2h以上，溶解液温度不超过3℃，pH值调至4.5～4.7，开启冷媒，将最终温度控制在-3～-2℃；继续搅拌溶解3～15h后过滤，得到纯化过滤液。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，步骤(g)中所述超滤透析具体为：用1mol/LNaHCO3将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，浓缩至蛋白浓度为14-16wt％，先用3wt％NaCl溶液将制品等重量透析5次，再用0.7wt％NaCl溶液将制品等重量透析4次；将蛋白液浓缩至所需浓度的1.1倍以上收集。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，步骤(c)和(d)中过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；步骤(e)中过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-5℃以下。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其中，包括以下步骤：
(a)血浆合并融化：采用水浴融化法，水温控制在37℃以下，融化后血浆温度不高于10℃；
(b)混合血浆冷沉淀离心：冷沉淀离心时，混合血浆进液温度为0～4℃，进液速度为5±1L/台/分钟；
(c)FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及过滤分离：用0.1倍血浆体积的0.9wt％NaCl溶液稀释离心后血浆，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值为6.2～6.8，乙醇浓度控制在19～21wt％，最终温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置3～20h后过滤，得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液，过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；
(d)FⅣ乙醇沉淀及过滤分离：将步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液pH调至5.9～6.5，加入-15℃以下95wt％乙醇，至最终乙醇浓度为39～41wt％，反应液温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置4～20h后过滤，得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液，过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；
(e)FⅤ乙醇沉淀及过滤分离：将步骤(d)中所述FⅣ上清液降温至-10～-8℃后，按0.3％(W/V)加入硅藻土，搅拌30min后过滤；将过滤后的滤液pH调至4.7～4.9，乙醇浓度最终为39～41wt％，反应液温度控制在-10～-9℃，继续搅拌3h，静置2～24h后过滤，得到FⅤ沉淀；过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-5℃以下，出液澄清透明；
(f)精制纯化：在纯化罐中加入不超过3.5倍所述FⅤ沉淀重的注射用水，添加95wt％乙醇，至乙醇浓度不超过8.5wt％，并搅拌混匀，降温至0℃；然后将FⅤ沉淀转移到纯化罐中，按最终每公斤沉淀30/95(L)补加95wt％乙醇，再补加0℃注射用水至FⅤ沉淀重量的5倍体积，使最终乙醇浓度为12wt％；补加硅藻土，使最终硅藻土含量不低于0.5％(W/V)；充分溶解2h以上，溶解液温度不超过3℃，取FⅤ溶解液样测pH值，以200ml/min以下的速度加入pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液将FⅤ溶解液pH值调至4.5～4.7，开启冷媒，将最终温度控制在-3～-2℃；继续搅拌溶解3～15h后过滤，得到纯化过滤液；
(g)超滤透析：用1mol/LNaHCO3将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，浓缩至蛋白浓度为14-16wt％，先用3wt％NaCl溶液将制品等重量透析5次，再用0.7wt％NaCl溶液将制品等重量透析4次；将蛋白液浓缩至所需浓度的1.1倍以上收集；
(h)配液：将步骤(g)中浓缩后的蛋白液的浓度稀释至所需浓度，加入辛酸钠，使溶液中辛酸钠的浓度为0.14～0.18mmol/g蛋白质，加入NaCl使Na+浓度不高于150mmol/L，用1mol/LNaOH调节pH在6.8～7.0；
(i)巴氏灭活：将稀释配液后的蛋白液在59.5～60.5℃进行连续10h恒温巴氏灭活；巴氏灭活结束后，在3h内将蛋白液降温至30℃以下，24h内进行分装；
(j)分装：产品分装规格为：20％(50ml：10g)，每瓶分装制品净重为：53.4±0.3g；
(k)孵育：将分装好的产品转移到30-32℃库孵育14天，检测合格后既得人血白蛋白成品。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法与现有技术相比具有如下有益效果：
1.成本低
人血白蛋白制品中铝离子来源于血浆、血浆包装用血浆袋、生产过程中的原辅料及与制品接触的器材等，血液制品低温乙醇工艺中目前多采用压滤法，压滤过程添加的助滤剂如硅藻土含铝较多，另外滤板也会引入铝，而硅藻土一般采用食品级，相对铝含量较高，在整个产品生产周期中，制品中铝离子含量是一个波动的过程，现常采用的降低人血白蛋白中铝离子的方法有采用低铝配方材料、低盐溶液超滤透析及离子交换层析等方法。在整个产品生产中均采用低铝配方的材料，固然可以降低产品中铝离子含量，但成本较高；采用阴离子交换层析的方法成本也高于本发明方法，且制得的人血白蛋白的收得率较低。
2.操作简便
人血白蛋白经超滤可以将铝含量降低，本发明所述方法中对制品进行超滤透析，在蛋白浓度为15wt％左右，先用3wt％的高浓度NaCl溶液将制品等重量透析5次，再经0.7wt％的低浓度NaCl溶液将制品等重量透析4次，能够使铝含量达到相对较低水平，操作简便，且不会引入新杂质。
3.铝离子去除效果显著
现有技术中，经研究，采用阴离子交换层析尤其是强阴离子交换层析的方法可将人血白蛋白中铝离子含量控制在50μg/L左右；或使用低浓度NaCl溶液(NaCl浓度1wt％和0.7wt％)对人血白蛋白制品超滤透析，可将铝离子含量控制在50μg/L至70μg/L的水平，市售人血白蛋白铝离子含量平均水平在100μg/L以上；而本发明所述的方法，通过使用高低两种梯度浓度的NaCl溶液超滤透析对制品，可将铝离子含量控制在20μg/L以下。
4.本发明通过高盐去置换人血白蛋白制品中的铝离子；枸橼酸离子和铝离子螯合形成螯合物，人血白蛋白制品中存在枸橼酸离子，在药品的存放过程中能从玻璃瓶中释放出部分铝离子，从而使人血白蛋白中铝离子含量升高。现有的人血白蛋白生产工艺采用浓度1wt％的氯化钠去透析组分FⅤ纯化过滤液，以降低铝离子和枸橼酸离子，但是效果不理想，加大1wt％的氯化钠透析倍数及次数多，虽然能有效降低铝离子，但对枸橼酸离子效果不是很明显。而采用3wt％的氯化钠去透析组分FⅤ纯化过滤液，不仅能将制品中的铝离子降到极低值，而且可以很大程度上降低枸橼酸离子含量，枸橼酸离子含量极低，低于0.014mmol/L，从而达到控制最终制品中铝离子的含量。
5.成品铝离子含量升高趋势缓慢
经57℃高温加速稳定性试验模拟成品36个月效期内铝离子含量变化趋势，结果表明，本发明方法制得的人血白蛋白成品铝离子含量升高趋势明显较老工艺所得成品的缓慢。
6.本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝离子的方法，制得人血白蛋白制品中激肽释放酶原激活物(PKA)小于10IU/ml，远低于市场同品种水平。
本发明所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，步骤(f)中所述精制纯化中分两次加入乙醇，是充分考虑到组分FⅤ沉淀中本身是含8wt％的乙醇残留，第一步中在溶解液加入8wt％乙醇，就是考虑到平衡内外乙醇浓度，不会导致溶解过程中的白蛋白变性。第二次加到12wt％的乙醇是起到纯化的作用，沉淀杂质微量蛋白，能提升白蛋白的外观、纯度及降低PKA含量。
下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例1
一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，包括以下步骤：
(a)血浆合并融化：采用水浴融化法，水温控制在37℃以下，融化后血浆温度不高于10℃；
(b)混合血浆冷沉淀离心：冷沉淀离心时，混合血浆进液温度为0～4℃，进液速度为5±1L/台/分钟；以保障在固液分离时，蛋白不变性；
(c)FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及分离：用0.1倍血浆体积的0.9wt％NaCl溶液稀释离心后血浆，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值为6.5±0.3，乙醇浓度控制在(20±1)wt％，最终温度控制在-5.0±0.5℃，搅拌3h，静置3～20h后过滤，得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液，过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；
(d)FⅣ乙醇沉淀及过滤分离：将步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液pH调至6.20±0.3，加入-15℃以下95wt％乙醇，至最终乙醇浓度为(40±1)wt％，反应液温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置4～20h后过滤，得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液，过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；
(e)FⅤ乙醇沉淀及过滤分离：将步骤(d)中所述FⅣ上清液降温至-10～-8℃后，按0.3％(W/V)加入硅藻土，搅拌30min后过滤；将过滤后的滤液pH调至4.80±0.1，乙醇浓度最终为(40±1)wt％，反应液温度控制在-10～-9℃，继续搅拌3h，静置2～24h后过滤，得到FⅤ沉淀；过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-5℃以下，出液澄清透明；
(f)精制纯化：将步骤(e)中所述FⅤ沉淀称重，在纯化罐中加入不超过3.5倍FⅤ沉淀重的注射用水，添加95wt％乙醇，至乙醇浓度不超过8.5wt％，并搅拌混匀，降温至0℃；然后将FⅤ沉淀转移到所述纯化罐中，按最终每公斤沉淀30/95(L)补加95wt％乙醇，再补加0℃注射用水至FⅤ沉淀重量的5倍体积，使最终乙醇浓度为12wt％；补加硅藻土，使最终硅藻土含量不低于0.5％(W/V)；充分溶解2h以上，溶解液温度不超过3℃，取FⅤ溶解液样测pH值，以200ml/min以下的速度加入pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液将FⅤ溶解液pH值调至4.5～4.7，开启冷媒，将最终温度控制在-3～-2℃；继续搅拌溶解3～15h后过滤，得到纯化过滤液；
(g)超滤透析：用1mol/LNaHCO3将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，浓缩至蛋白浓度为15wt％左右，先用3wt％NaCl溶液将制品等重量透析5次，再用0.7wt％NaCl溶液将制品等重量透析4次；将蛋白液浓缩至所需浓度(中国药典规定的四种蛋白浓度20wt％、25wt％、10wt％和5wt％)的1.1倍以上收集；
(h)配液：将步骤(g)中浓缩后的蛋白液的浓度稀释至所需浓度，加入辛酸钠，使溶液中辛酸钠的浓度为0.14～0.18mmol/g蛋白质，加入NaCl使Na+浓度不高于150mmol/L，用1mol/LNaOH调节pH在6.8～7.0；
(i)巴氏灭活：将稀释配液后的蛋白液在60±0.5℃进行连续10h恒温巴氏灭活；巴氏灭活结束后，在3h内将蛋白液降温至30℃以下，24h内进行分装；
(j)分装：产品分装规格为：20％(50ml：10g)，每瓶分装制品净重为：53.4±0.3g；
(k)孵育：将分装好的产品转移到30-32℃库孵育14天，检测合格后既得人血白蛋白成品。
采用《中国药典》2015年版三部对本实施例得到的三批(每批31瓶)人血白蛋白成品进行检测，部分技术指标的检测结果如表1所示，结果符合规定。
表1本实施例不同批次人血白蛋白成品的检测结果
本发明经多次试验，分别采用现有技术(即使用低浓度NaCl溶液(1wt％和0.7wt％)对人血白蛋白制品超滤透析)和本实施例方法来制备人血白蛋白，铝残留量和枸橼酸离子含量测定结果如表2所示；并对这两种方法制备的人血白蛋白进行了加速稳定性试验(57℃高温)，铝残留量和枸橼酸离子含量的试验结果分别如表3和4所示。本发明制备的5个批次的人血白蛋白与市售的两个厂家的产品A和B的铝残留量对比结果如表5所示。
表2本实施例和现有技术中成品的铝残留量和枸橼酸离子含量比对表
由表2可知，本实施例制得的人血白蛋白产品中枸橼酸离子含量极低，低于0.014mmol/L，铝残留量为16-18μg/L，可将铝离子含量控制在20μg/L以下。
表3本实施例和现有技术中成品在57℃高温加速试验的铝残留量比对表
表4本实施例和现有技术中成品在57℃高温加速试验的枸橼酸离子含量比对表
由表3和4可知，本实施例制得的人血白蛋白成品铝离子含量升高趋势明显较现有技术所得成品的铝离子含量升高缓慢；枸橼酸离子含量变化趋势较现有技术所得成品的枸橼酸离子含量变化趋稳。表3和表4提供的数据间接证明本发明的应用极大的降低人血白蛋白成品中枸橼酸离子含量，枸橼酸离子含量的降低和稳定同时也保障人血白蛋白成品在有效期内铝离子的析出变缓。
表5本发明制得的人血白蛋白与市售的人血白蛋白的对比结果表
由表5可知：采用本实施例制备的人血白蛋白成品的铝离子含量远远低于市售产品的铝离子含量，证明采用3wt％NaCl溶液对精制纯化后的半成品进行超滤透析，能有效降低终端人血白蛋白成品的铝离子含量。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (8)

1.一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(a)血浆合并融化：采用水浴融化法，得到混合血浆；
(b)混合血浆冷沉淀离心；
(c)FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及过滤分离：从离心后的血浆中过滤分离得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液；
(d)FⅣ乙醇沉淀及过滤分离：从步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液中过滤分离得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液；
(e)FⅤ乙醇沉淀及过滤分离：从步骤(d)中所述FⅣ上清液中过滤分离得到FⅤ沉淀；
(f)精制纯化：在步骤(e)中所述FⅤ沉淀中加入注射用水、乙醇和硅藻土，得到纯化过滤液；
(g)超滤透析：将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，通过使用高低两种梯度浓度的NaCl溶液超滤透析；
(h)配液；
(i)巴氏灭活；
(j)分装；
(k)孵育。
2.根据权利要求1所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及分离具体为：用0.1倍血浆体积的0.9wt％NaCl溶液稀释离心后血浆，调pH值为6.2～6.8，乙醇浓度控制在19～21wt％，最终温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置3～20h后过滤，得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液。
3.根据权利要求1所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：步骤(d)中所述FⅣ乙醇沉淀及过滤分离具体为：将步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液pH调至5.9～6.5，加入-15℃以下95wt％乙醇，至最终乙醇浓度为39～41wt％，反应液温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置4～20h后过滤，得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液。
4.根据权利要求1所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：步骤(e)中所述FⅤ乙醇沉淀及过滤分离具体为：将步骤(d)中所述FⅣ上清液降温至-10～-8℃后，按0.3％(W/V)加入硅藻土，搅拌30min后过滤；将过滤后的滤液pH调至4.7～4.9，乙醇浓度最终为39～41wt％，反应液温度控制在-10～-9℃，继续搅拌3h，静置2～24h后过滤，得到FⅤ沉淀，出液澄清透明。
5.根据权利要求1所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：步骤(f)中所述精制纯化具体为：在纯化罐中加入不超过3.5倍所述FⅤ沉淀重的注射用水，添加95wt％乙醇，至乙醇浓度不超过8.5wt％，并搅拌混匀，降温至0℃；然后将FⅤ沉淀转移到纯化罐中，按最终每公斤沉淀30/95(L)补加95wt％乙醇，再补加0℃注射用水至FⅤ沉淀重量的5倍体积，使最终乙醇浓度为12wt％；补加硅藻土，使最终硅藻土含量不低于0.5％(W/V)；充分溶解2h以上，溶解液温度不超过3℃，pH值调至4.5～4.7，开启冷媒，将最终温度控制在-3～-2℃；继续搅拌溶解3～15h后过滤，得到纯化过滤液。
6.根据权利要求1所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：步骤(g)中所述超滤透析具体为：用1mol/LNaHCO3将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，浓缩至蛋白浓度为14-16wt％，先用3wt％NaCl溶液将制品等重量透析5次，再用0.7wt％NaCl溶液将制品等重量透析4次；将蛋白液浓缩至所需浓度的1.1倍以上收集。
7.根据权利要求1所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：步骤(c)和(d)中过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；步骤(e)中过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-5℃以下。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(a)血浆合并融化：采用水浴融化法，水温控制在37℃以下，融化后血浆温度不高于10℃；
(b)混合血浆冷沉淀离心：冷沉淀离心时，混合血浆进液温度为0～4℃，进液速度为5±1L/台/分钟；
(c)FI+Ⅱ+Ⅲ乙醇沉淀及过滤分离：用0.1倍血浆体积的0.9wt％NaCl溶液稀释离心后血浆，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值为6.2～6.8，乙醇浓度控制在19～21wt％，最终温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置3～20h后过滤，得到FI+Ⅱ+Ⅲ沉淀和FI+Ⅱ+Ⅲ上清液，过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；
(d)FⅣ乙醇沉淀及过滤分离：将步骤(c)中所述FI+Ⅱ+Ⅲ上清液pH调至5.9～6.5，加入-15℃以下95wt％乙醇，至最终乙醇浓度为39～41wt％，反应液温度控制在-5.5～-4.5℃，搅拌3h，静置4～20h后过滤，得到FⅣ沉淀和FⅣ上清液，过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-3℃以下；
(e)FⅤ乙醇沉淀及过滤分离：将步骤(d)中所述FⅣ上清液降温至-10～-8℃后，按0.3％(W/V)加入硅藻土，搅拌30min后过滤；将过滤后的滤液pH调至4.7～4.9，乙醇浓度最终为39～41wt％，反应液温度控制在-10～-9℃，继续搅拌3h，静置2～24h后过滤，得到FⅤ沉淀；过滤时压力不超过0.2MPa，温度控制在6～10℃，出液温度控制在-5℃以下，出液澄清透明；
(f)精制纯化：在纯化罐中加入不超过3.5倍所述FⅤ沉淀重的注射用水，添加95wt％乙醇，至乙醇浓度不超过8.5wt％，并搅拌混匀，降温至0℃；然后将FⅤ沉淀转移到纯化罐中，按最终每公斤沉淀30/95(L)补加95wt％乙醇，再补加0℃注射用水至FⅤ沉淀重量的5倍体积，使最终乙醇浓度为12wt％；补加硅藻土，使最终硅藻土含量不低于0.5％(W/V)；充分溶解2h以上，溶解液温度不超过3℃，取FⅤ溶解液样测pH值，以200ml/min以下的速度加入pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液将FⅤ溶解液pH值调至4.5～4.7，开启冷媒，将最终温度控制在-3～-2℃；继续搅拌溶解3～15h后过滤，得到纯化过滤液；
(g)超滤透析：用1mol/LNaHCO3将步骤(f)中所述纯化过滤液pH值调至6.7～7.0，浓缩至蛋白浓度为14-16wt％，先用3wt％NaCl溶液将制品等重量透析5次，再用0.7wt％NaCl溶液将制品等重量透析4次；将蛋白液浓缩至所需浓度的1.1倍以上收集；
(h)配液：将步骤(g)中浓缩后的蛋白液的浓度稀释至所需浓度，加入辛酸钠，使溶液中辛酸钠的浓度为0.14～0.18mmol/g蛋白质，加入NaCl使Na+浓度不高于150mmol/L，用1mol/LNaOH调节pH在6.8～7.0；
(i)巴氏灭活：将稀释配液后的蛋白液在59.5～60.5℃进行连续10h恒温巴氏灭活；巴氏灭活结束后，在3h内将蛋白液降温至30℃以下，24h内进行分装；
(j)分装：产品分装规格为：20％(50ml：10g)，每瓶分装制品净重为：53.4±0.3g；
(k)孵育：将分装好的产品转移到30-32℃库孵育14天，检测合格后既得人血白蛋白成品。
CN201811071508.5A 2018-09-14 2018-09-14 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法 Active CN109053876B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811071508.5A CN109053876B (zh) 2018-09-14 2018-09-14 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811071508.5A CN109053876B (zh) 2018-09-14 2018-09-14 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109053876A true CN109053876A (zh) 2018-12-21
CN109053876B CN109053876B (zh) 2021-07-27

Family

ID=64760558

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811071508.5A Active CN109053876B (zh) 2018-09-14 2018-09-14 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109053876B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109867720A (zh) * 2019-04-26 2019-06-11 兰州兰生血液制品有限公司 一种低铝残留量人血白蛋白的超滤方法
CN112375137A (zh) * 2020-11-30 2021-02-19 广西冠峰生物制品有限公司 一种有效降低pka含量的人血白蛋白的制备方法
CN112390876A (zh) * 2020-11-30 2021-02-23 广西冠峰生物制品有限公司 一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法
CN112521486A (zh) * 2020-12-22 2021-03-19 博雅生物制药(广东)有限公司 一种乙醇实时控制的低温乙醇分离人血白蛋白的生产方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103394076A (zh) * 2013-08-15 2013-11-20 江西博雅生物制药股份有限公司 一种人血白蛋白的制备工艺
CN104004084A (zh) * 2014-04-12 2014-08-27 浙江海康生物制品有限责任公司 一种人血白蛋白的生产方法
CN107176999A (zh) * 2017-05-05 2017-09-19 武汉中原瑞德生物制品有限责任公司 一种人血白蛋白的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103394076A (zh) * 2013-08-15 2013-11-20 江西博雅生物制药股份有限公司 一种人血白蛋白的制备工艺
CN104004084A (zh) * 2014-04-12 2014-08-27 浙江海康生物制品有限责任公司 一种人血白蛋白的生产方法
CN107176999A (zh) * 2017-05-05 2017-09-19 武汉中原瑞德生物制品有限责任公司 一种人血白蛋白的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘芳等: "人血白蛋白分离工艺的历史沿革及发展", 《中国输血杂志》 *
王敏力等: "人血白蛋白中枸橼酸离子测定与铝离子含量影响因素分析", 《中国药学杂志》 *
肖林: "人血白蛋白制品铝残留量的追踪研究", 《药物分析杂质》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109867720A (zh) * 2019-04-26 2019-06-11 兰州兰生血液制品有限公司 一种低铝残留量人血白蛋白的超滤方法
CN112375137A (zh) * 2020-11-30 2021-02-19 广西冠峰生物制品有限公司 一种有效降低pka含量的人血白蛋白的制备方法
CN112390876A (zh) * 2020-11-30 2021-02-23 广西冠峰生物制品有限公司 一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法
CN112521486A (zh) * 2020-12-22 2021-03-19 博雅生物制药(广东)有限公司 一种乙醇实时控制的低温乙醇分离人血白蛋白的生产方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109053876B (zh) 2021-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109053876A (zh) 一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法
US4156681A (en) Process for isolating albumin from blood
US3451996A (en) Method for the preparation of heparin
JPS6248701A (ja) 腹膜透析用組成物
MX2011001984A (es) Produccion de proteina canola aislada sin tratamiento termico.
CN104672328A (zh) 一种人抗凝血酶ⅲ的生产方法
SU1590031A3 (ru) Способ получени альбумина и гемоглобина
AU606772B2 (en) Improved vancomycin precipitation process
US4652555A (en) Heparin compositions freed of mineral salts, particularly oxalates, and process for obtaining same
CN101792490A (zh) 回收Cohn氏组分Ⅳ沉淀中白蛋白的方法
CN103613658A (zh) 一种人第viii凝血因子的制备方法
CN116731162B (zh) 人免疫球蛋白生产工艺
US3657116A (en) Process for the separation of blood components
CN102311496B (zh) 一种从低温乙醇法组份ⅰ+ⅱ+ⅲ沉淀中回收白蛋白的方法
US3003918A (en) Production of ceruloplasmin in a purified state from blood plasma fractions
CN110680802A (zh) 汉防己甲素注射液及其制备方法
CN110922471A (zh) 一种提高猪胰岛素纯度的色谱分离方法
JP2613163B2 (ja) 茶飲料及びその製造方法
US2950227A (en) Ferments of the papain type and process of making same
AU2013324626A1 (en) Clarification method
CN107779371A (zh) 特异性去除黄酒中二聚α‑淀粉酶抑制剂和类燕麦蛋白的方法
Vogelaar et al. Contributions to the optimal use of human blood
CN110590936B (zh) 一种犬血清中白蛋白的提纯方法
CN114605519B (zh) 提取h因子的方法
LU506812B1 (en) Cynomorii Herba Functional Beverage and Preparation Method Thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Xu He

Inventor after: Yang Jingpeng

Inventor after: Xu Xiaonan

Inventor after: Hu Huiheng

Inventor after: Deng Kun

Inventor after: Wang He

Inventor before: Xu He

Inventor before: Hu Huiheng

Inventor before: Deng Kun

Inventor before: Wang He

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant