CN112390876A - 一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，通过将透析用氯化钠溶液pH控制在7～9，使透析过程中白蛋白溶液的pH始终保持在略为碱性的条件下，促进枸橼酸根离子的去除；同时在略碱性pH条件下铝主要以带负电荷的Al(OH)4–形式存在，而白蛋白远离其等电点，因而也携带负电荷，二者因静电排斥作用，更多的铝离子随透析被去除，从根源上去除更多的铝离子；经酸洗处理后的硅藻土铝离子含量大幅度降低；本方法采用离心机进行固液相分离，并省略了FV沉淀和精制纯化，仅在FIV过滤步骤需要添加助滤剂和使用滤板，减少了铝离子的引入量，从源头上减少了铝离子。
Description
技术领域
本发明涉及人血白蛋白的制备方法技术领域，具体涉及一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法。
背景技术
非肠道用药避开了血肠屏障，长期输注含有高浓度铝离子的人血白蛋白制剂的病人可能面临严重风险，铝离子的摄入可能影响骨代谢，引起骨骼中矿物质代谢异常导致负重区骨疼痛、骨形成减少、骨软化、高钙血症、高钙尿症、血清甲状腺素浓度低于正常；铝离子能影响肝代谢可能导致胆汁淤积型肝病；铝离子可能影响中枢神经系统导致神经纤维损伤引起老年痴呆症、透析性脑病。铝离子的截留高度依赖于病人的肾功能，具有正常肾功能的病人铝离子很快被排泄，肾功能不全的病人铝离子被截留，存在巨大的铝中毒的风险。
人血白蛋白的制备过程中可能因多种原因引入铝离子，如分离过程添加的硅藻土助滤剂、使用含有助滤剂的滤板等。
人血白蛋白长期储存过程中内包材如玻璃瓶和胶塞中可能释放铝离子。铝是玻璃瓶的骨架成分，在长期存储过程中铝离子可能释放至溶液中，铝离子的释放速度与制剂配方、存储条件密切相关。在血浆采集过程中使用枸橼酸作为抗凝剂，枸橼酸根离子与白蛋白分子结合，枸橼酸离子是良好的金属离子螯合剂，如超滤透析过程不能有效去除枸橼酸离子，人血白蛋白制剂中残留的微量枸橼酸离子可能促进铝离子从玻璃容器中释放，使人血白蛋白货架期铝残留量升高。
转铁蛋白是重要的金属运载蛋白，铝离子与转铁蛋白的亲和力大于与白蛋白的亲和力。由于转铁蛋白与白蛋白具有相似的理化特性，在白蛋白分离纯化过程中难以将转铁蛋白完全去除，转铁蛋白成为白蛋白制剂中常见的杂蛋白之一，也是影响白蛋白产品铝离子含量的一个因素。
现有的技术通常是透析过程中利用一价金属离子如钠离子置换人血白蛋白分子上结合的多价金属离子的方法来去除铝离子，通常是使用氯化钠溶液进行透析。超滤透析过程中制品pH通常随透析的进行呈现逐渐降低的趋势，pH的变化不利于枸橼酸根离子的去除，残余的枸橼酸根促进玻璃瓶中铝离子的释放，即使初始铝离子含量很低，人血白蛋白在货架期因铝离子不断释放仍有超过200ug/L的风险。
有的方法通过改变内包材的形式如使用铝含量较低的钠钙玻璃瓶或使用塑料袋代替玻璃瓶来降低人血白蛋白货架期铝离子的释放。钠钙玻璃瓶硬度不如中硼玻璃，储存运输过程容易破碎，且121℃玻璃颗粒耐水性不如中硼玻璃，使用塑料袋存在有害物质溶出的风险。
有的方法是在透析介质中添加2~8碳原子脂肪酸盐如辛酸钠置换白蛋白分子上结合的枸橼酸离子，但该方法需要使用和排放大量辛酸钠，增加物料使用成本和环境处理成本。
为了降低货架期铝离子的释放，通常选择冷藏条件（2~8℃）储存和运输人血白蛋白，这样增加了储存和运输成本。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种工艺简单、在源头上控制铝离子的引入、降低制品枸橼酸根离子浓度的降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2,再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，同时将混合液温度降至-7～-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7～-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液；按5～15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-8～-6℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液；用0.45～0.55mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.152～0.156mol/L氯化钠溶液，用0.9～1.1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至7～9，温度调节至2～25℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.1～0.3Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量不低于所述浓缩液的8倍体积，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
进一步地，所述步骤（1）中在FI上清液或血浆中添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm。
进一步地，所述步骤（2）中经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按90～110g/L的比例加入9～11mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至5.8～6.2，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土。
进一步地，所述步骤（2）中在所述的离心分离的上清液中添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2, 再加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，同时将混合液温度降至-7～-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7～-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心机转速为15000rpm；按5～15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液。
进一步地，所述步骤（3）中将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液。
进一步地，所述步骤（4）中配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液。
进一步地，所述步骤（5）中用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液。
进一步地，所述步骤（6）中用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液。
进一步地，所述步骤（7）中所述的透析的浓缩液进行浓缩，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液。
本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，发明人研究得出白蛋白分子与枸橼酸根离子形成络合物，在碱性pH条件下枸橼根与白蛋白分子的络合作用减弱，成为游离的小分子量离子，可以自由通过超滤膜，随透析过程而被去除；现有工艺用于透析的介质通常是0.9%氯化钠溶液，经发明人不断研究发现，配制氯化钠的注射用水中容易溶入二氧化碳，导致配制的氯化钠pH呈现酸性，在透析过程中白蛋白溶液pH出现下降趋势，因此本发明通过将透析用氯化钠溶液pH控制在7～9，使透析过程中白蛋白溶液的pH始终保持在略为碱性的条件下，促进枸橼酸根离子的去除；同时在略碱性pH条件下铝主要以带负电荷的Al(OH)4–形式存在，而白蛋白远离其等电点，因而也携带负电荷，二者因静电排斥作用，更多的铝离子随透析被去除，从根源上去除更多的铝离子。
本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，人血白蛋白生产过程中外源性铝离子的主要来源是生产过程中添加的助滤剂和含有助滤剂的滤板，生产过程中常使用的助滤剂包括硅藻土和珍珠岩，两者皆含有大量的铝离子，而珍珠岩含有的铝离子远大于硅藻土，经酸洗处理后的硅藻土铝离子含量大幅度降低；进一步地本申请进一步优化了酸洗工艺，新增了用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至5.8～6.2的步骤，此时起到调节硅藻土的pH的作用，使得制备得到的经酸洗处理的硅藻土与待滤液的pH相同，使得待滤液的pH值更稳定，可避免pH值不稳定导致的过滤效果不佳的问题，过滤效果更好。
本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，为了提高过滤能力压滤工艺的每一个步骤需要添加大量的助滤剂和使用含助滤剂的滤板，因而引入了大量的外源性铝离子，本方法采用离心机进行固液相分离，并省略了FV沉淀和精制纯化，仅在FIV过滤步骤需要添加助滤剂和使用滤板，减少了铝离子的引入量，从源头上减少了铝离子；由于省略了FV沉淀和精制纯化的步骤，对于其他步骤的要求更高，经发明人不断研究发现，将制备步骤调整为：FII+III/FI+II+III分离-FIV分离-降温、滤芯过滤-10KD超滤膜浓缩-透析，此时不仅能省略FV沉淀和精制纯化的步骤，其还能极大降低助滤剂的使用量，从而从根源上降低制品中的铝离子含量。
本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，铝是玻璃瓶的重要骨架成分，作为人血白蛋白容器的中硼硅玻璃瓶较钠钙玻璃含有更高的铝，玻璃晶体的特点是宏观均匀、微观不均匀，整体连续，局部不连续，本身处于一种热力学不稳定状态，在不同温度下，或者在相同温度下不同储存时间都可以在不同程度上影响玻璃的结构状态，枸橼酸根离子是良好的金属螯合剂，在人血白蛋白储存过程中，枸橼酸根能促进玻璃瓶中的铝不断向外释放，这个促进作用随温度的升高而增强，本方法通过透析介质将超滤过程中的白蛋白溶液的pH稳定控制在略碱性pH环境中，大大降低了产品中残余的枸橼酸根含量，从而减缓了货架期玻璃瓶铝离子的释放速度，使人血白蛋白制剂中的铝离子持续维持在较低的安全水平。
本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，血浆中转铁蛋白含量约2～3.5g/L，分子量约77KD，等电点5.7，是重要的金属运载蛋白，铝离子与转铁蛋白的亲和力大于与白蛋白的亲和力，由于转铁蛋白与白蛋白具有相似的理化特性，在白蛋白分离纯化过程中难以将转铁蛋白完全去除，转铁蛋白成为白蛋白制剂中常见的伴随蛋白之一，本方法先将步骤（3）澄清过滤液降低至-8～-6℃，并静置6小时以上，此时可极大降低转铁蛋白溶解度而沉淀，再用滤芯过滤以去除转铁蛋白，可极大提升转铁蛋白的去除率，不仅能降低转铁蛋白的含量，还可以提高白蛋白纯度，同时达到降低残余铝离子含量的目的。
附图说明
图1为本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法的制备要求有：
1、配制醋酸盐缓冲液、氢氧化钠溶液、氯化钠溶液等主要试剂的用水都选用注射用水；
2、制成FI上清液所用的原料血浆的采集和质量要求必须符合《中华人民共和国药典》血液制品生产用人血浆的相关要求；
3、生产设备设施、环境必须符合GMP要求；
4、FI上清液是指：去除了纤维蛋白原的上清液
5、使用的离心设备是：大容量连续流离心机，型号为：GQ142
6、使用的主要化学试剂均为药用级，厂家信息如下
| 试剂名称 | 生产厂家 |
| 冰醋酸 | 台山市新宁制药有限公司 |
| 醋酸钠 | 台山市新宁制药有限公司 |
| 氯化钠 | 天津海光药业股份有限公司 |
| 氢氧化钠 | 湖南尔康制药股份有限公司 |
| 95%乙醇 | 湖南湘易康制药有限公司 |
| 辛酸钠 | 湖南九典制药有限责任公司 |
| 枸橼酸钠 | 湖南尔康制药股份有限公司 |
实施例1
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加pH4.0醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18%，同时将混合液温度降至-4℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按5g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按90g/L的比例加入9mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至5.8，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-6℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集上清液；用0.45mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.152mol/L氯化钠溶液，用0.9mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至7.5，温度调节至2℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.1Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的11倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
实施例2
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加pH4.0醋酸盐缓冲液，将pH调节至6.2；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的22%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-6℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6.2, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的42%，同时将混合液温度降至-7℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液；离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将经干烤的硅藻土按110g/L的比例加入11mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至6.2，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-8℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液，过滤压力不超过0.3Mpa；用0.55mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.156mol/L氯化钠溶液，用1.1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至9，温度调节至25℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.3Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的8倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
实施例3
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至6；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的20%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-5℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-6℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度在为500~1000ml/min；按10g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按100g/L的比例加入10mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至6，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液，过滤压力不超过0.3Mpa；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
实施例4
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至6；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的20%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-5℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-6℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按10g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按100g/L的比例加入10mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液，过滤压力不超过0.3Mpa；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
对比例1
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至6；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的20%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-5℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-6℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按10g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按100g/L的比例加入10mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2），即得所述的经酸洗处理的硅藻土。
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集上清液；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.154mol/L氯化钠溶液，将温度调节至5℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
对比例2
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至6；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的20%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-5℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-6℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按10g/L比例加入未经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集上清液；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
对比例3
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至6；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的20%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-5℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-6℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按10g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按100g/L的比例加入10mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至6，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土。
（3）用0.5mol/L的氢氧化钠调节澄清过滤液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
对比例4
一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中按150ml/min速度添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至6；再以65L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的20%，同时将混合液温度降至-5℃，搅拌反应2小时，沉淀静放老化6小时，得到第一静置液；在-5℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为1000~2000ml/min；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中按150ml/min速度添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至6, 再按80L/h速度加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，同时将混合液温度降至-6℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-6℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心工艺参数：离心机转速为15000rpm；上清液流出速度为500~1000ml/min；按10g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将干烤后的硅藻土按100g/L的比例加入10mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至6，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土。
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-5℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集上清液；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L以上，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
下表1给出不同助滤剂铝离子含量比较结果；
铝离子含量的检测方法为：石墨炉原子吸收分光光度法
表1
| 样品名称 | Al(ppb) |
| 珍珠岩 | 341 |
| 硅藻土 | 105 |
| 经酸洗硅藻土 | 79 |
表1数据表明不同助滤剂铝离子含量存在很大差别，本方法采用枸橼酸处理硅藻土，显著降低了铝离子含量，降低了铝离子的引入。
下表2给出超滤透析前铝离子含量比较结果，也即取样点为步骤（5）制得的浓缩液的铝离子含量的比较结果；
表2
| 序号 | 蛋白质含量（g/L） | 铝离子含量（ug/L） |
| 实施例1 | 15.3 | 356 |
| 实施例2 | 15.1 | 316 |
| 实施例3 | 15.6 | 339 |
| 对比例2 | 14.9 | 865 |
表2数据表明采用本发明方法能从源头控制铝离子的引入，降低了铝离子的起始含量。
下表3给出透析过程制品pH变化对铝离子和枸橼酸根去除的影响比较结果；
枸橼酸根含量的检测方法为：高效液相色谱法
表3
表3数据表明本发明方法在超滤过程中制品pH保持稳定，有效降低了铝离子和枸橼酸根离子含量，且有益于制品的长期稳定性。
下表4给出40±2℃加速稳定性考察铝离子含量比较结果；
表4
| 取样时间（月） | 实施例3制得的人血白蛋白制品的铝离子含量（ug/L） | 对比例1制得的人血白蛋白制品的铝离子含量（ug/L） |
| 0 | 13 | 58 |
| 1 | 18 | 101 |
| 2 | 25 | 117 |
| 3 | 43 | 157 |
| 6 | 55 | 187 |
表4数据表明本发明方法制备的产品加速稳定性过程铝离子始终保持在较低的水平，减缓了玻璃瓶中铝离子的释放，有利于货架期铝离子的稳定；
申请号为CN201811071508，申请日为2018.9.14，公开了一种降低人血白蛋白制品中铝残留量的方法，其检测结果显示，57℃高温加速测试实验中，取样时间0天时，铝离子含量达16-18 ug/L，取样时间21天时，铝离子含量达61-78 ug/L；
本申请方法制备的产品按照生物制品稳定性试验指导原则进行40度6个月加速稳定性研究，本申请方法制备的产品于40±2℃下放置1月时铝离子含量仅达18ug/L，放置6月时铝离子含量仅达55ug/L；按照生物制品稳定性试验指导原则，本申请方法制备的产品具有长期稳定性，且本申请方法制备的产品的长期稳定性很高，铝离子含量的上升幅度很小；
申请号为CN201811071508公开的制备方法制备得到的产品仅公开了57℃高温加速测试实验下21天中铝离子含量的变化情况，试验条件与生物制品稳定性试验指导原则不一致，无法反映制品的长期稳定性，因此本申请相较于申请号为CN201811071508公开的制备方法，本申请方法制备的产品的长期稳定性更高。
下表5给出转铁蛋白的去除作用比较结果，样品1是指从步骤（2）制备得到的澄清过滤液中取出的样品，样品2是指步骤（3）滤芯过滤后收集到的上清液中取出的样品；
表5
表5数据表明本发明方法改进生产工艺之后，可显著降低了转铁蛋白含量。
由上述表1-表5各项指标的测定结果可知，本发明一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，通过将透析用氯化钠pH控制在7～9，使透析过程中白蛋白溶液的pH始终保持在略为碱性的条件下，促进枸橼酸根离子的去除；同时在略碱性pH条件下铝主要以带负电荷的Al(OH)4–形式存在，而白蛋白远离其等电点，因而也携带负电荷，二者因静电排斥作用，更多的铝离子随透析被去除，从根源上去除更多的铝离子；本申请进一步优化了酸洗工艺，新增了用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至5.8～6.2的步骤，此时起到调节硅藻土的pH的作用，使得制备得到的经酸洗处理的硅藻土与待滤液的pH相同，使得待滤液的pH值更稳定，可避免pH值不稳定导致的过滤效果不佳的问题，过滤效果更好；省略了FV沉淀和精制纯化的步骤，将制备步骤调整为：FII+III/FI+II+III分离-FIV分离-降温-滤芯过滤-10KD超滤膜浓缩-透析，此时不仅能省略FV沉淀和精制纯化的步骤，其还能极大降低助滤剂的使用量，从而从根源上降低制品中的铝离子含量；本方法通过透析介质将超滤过程中的白蛋白溶液的pH稳定控制在略碱性pH环境中，大大降低了产品中残余的枸橼酸根含量，从而减缓了货架期玻璃瓶铝离子的释放速度，使人血白蛋白制剂中的铝离子持续维持在较低的安全水平；本方法先将步骤（3）澄清过滤液降低至-8～-6℃，并静置6小时以上，此时可极大降低转铁蛋白溶解度而沉淀，再用滤芯过滤以去除转铁蛋白，可极大提升转铁蛋白的去除率，不仅能降低转铁蛋白的含量，还可以提高白蛋白纯度，同时达到降低残余铝离子含量的目的。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；
（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2,再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，同时将混合液温度降至-7～-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7～-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液；按5～15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；
（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-8～-6℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液；用0.45～0.55mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；
（4）透析缓冲液配制：配制0.152～0.156mol/L氯化钠溶液，用0.9～1.1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至7～9，温度调节至2～25℃，即得透析缓冲液；
（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.1～0.3Mpa，得到浓缩液；
（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量不低于所述浓缩液的8倍体积，得到透析的浓缩液；
（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；
（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；
（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。
2.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（1）中在FI上清液或血浆中添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm。
3.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（2）中经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将经干烤的硅藻土按90～110g/L的比例加入9～11mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至5.8～6.2，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土。
4.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（2）中在所述的离心分离的上清液中添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2, 再加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，同时将混合液温度降至-7～-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7～-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心机转速为15000rpm；按5～15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液。
5.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（3）中将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液。
6.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（4）中配制0.154mol/L氯化钠溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至8，温度调节至5℃，即得透析缓冲液。
7.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（5）中用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.2Mpa，得到浓缩液。
8.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（6）中用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量是所述浓缩液体积的10倍，得到透析的浓缩液。
9.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（7）中所述的透析的浓缩液进行浓缩，浓缩至蛋白含量在250g/L以上或150g/L，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液。
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