CN101333245A - 一种人血白蛋白的分离方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种生物制品技术中蛋白质的分离、提纯工艺方法，特别是一种人血白蛋白的分离方法，它包括有蛋白质的分离、提纯工艺，其特征在于：用人血浆为原料，首先将组分I、组分II+III分别沉淀，然后将组分I+II+III一并分离，最后将组分IV－1、IV－4分别沉淀，一并分离，固液分离采用压滤技术，其进液压力不超过0.2MPa。本发明方法由于在分离过程中采用压滤法过滤，同时调控白蛋白分离的乙醇浓度、温度、pH值等参数，克服了现有低温乙醇分离法生产人血白蛋白技术中存在的蛋白成分收率偏低，白蛋白组份中的不稳定物质(如脂蛋白)去除不彻底等不足，与传统的低温乙醇法相比，具有白蛋白收率高(不低于2.9g/100ml)，产品质量好等优点。

Description

一种人血白蛋白的分离方法
技术领域
本发明涉及一种生物制品技术中蛋白质的分离、提纯工艺方法，特别是一种人血白蛋白的分离方法。
背景技术
人血白蛋白是人体血液中含量最多的一种大分子蛋白质，自40年代Cohn等人创立低温乙醇人血浆蛋白质分离技术以来，血浆蛋白质的工业化大生产取得了长足的进步。
目前的低温乙醇分离法生产人血白蛋白，存在着蛋白成分收率偏低、白蛋白组份中的不稳定物质(如脂蛋白)去除不彻底等不足。导致上述缺陷的原因主要有两个方面，一是乙醇浓度、温度、pH值等工艺参数的选择不合理，二是分离方法不科学，目前大多采用离心法，这种离心分离法由于在高速旋转时的升温作用使杂蛋白被溶解而未被除去，不能准确地除去白蛋白组份中的不稳定物质。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的上述不足而提供一种人血白蛋白的分离方法，其是在分离过程中采用压滤法过滤，同时调控白蛋白分离的乙醇浓度、温度、蛋白浓度、离子强度、pH值等五个参数，以提高白蛋白收率，保证白蛋白的产品质量。
本发明的技术方案是：一种人血白蛋白的分离方法，其是用人血浆为原料，首先将组分I、组分II+II1分别沉淀，然后将组分I+II+III一并分离，最后将组分IV-1、IV-4分别沉淀，一并分离。
本发明进一步的技术方案是：固液分离采用压滤法过滤，其进液压力不超过0.2Mpa。
本发明更进一步的技术方案是：压滤机内残余的组分IV-1和IV-4可用洗液清洗后再回收组分IV-1和IV-4。
本发明由于在分离过程中采用压滤法过滤，同时调控白蛋白分离的乙醇浓度、温度、pH值等参数，克服了现有低温乙醇分离法生产人血白蛋白技术中存在的蛋白成分收率偏低，白蛋白组份中的不稳定物质(如脂蛋白)去除不彻底等不足，具有白蛋白收率高(不低于2.9g/100ml)，产品质量好等优点。
以下结合具体实施方式对本发明的详细内容作进一步描述。
具体实施方式
一种人血白蛋白的分离方法，其具体工艺为：
(1)、先分离组分I：
将血浆输入反应罐，计量，启动搅拌和循环制冷乙醇机，在血浆中缓慢加入95％的乙醇至乙醇体积浓度为8％，用pH4.0醋酸缓冲液调节反应液pH7.1～7.3，反应后得组分I固液混合物；
(2)、再分离组分II+III：
在组分I固液混合物中加入95％乙醇至乙醇体积浓度为20％，用pH4.0醋酸缓冲液调节反应液pH6.8～7.0，温度-4～-6℃，反应后得组分I+II+III固液混合物；
(3)、压滤分离出组分I+II+III：
将上述组分I+II+III固液混合物在压滤设备中进行压滤，进液压力不超过0.2Mpa，压滤完后将沉淀吹干，得组分I+II+III固体物；
(4)、进一步分离组分IV-1：
在滤去组分I+II+III的滤液中加冷注射用水至乙醇体积浓度为18％，用pH4.0醋酸缓冲液调节反应液pH5.1～5.2，温度-4～-6℃，反应后得组分IV-1固液混合物；
(5)、再进一步分离组分IV-4：
在组分IV-1固液混合物中加入95％乙醇至乙醇体积浓度为40％，用1mol/L NaHCO3溶液调节pH5.8～6.1，温度-4～-6℃，反应后得组分IV-1和IV-4固液混合物；
(6)、压滤分离出组分IV-1和IV-4：
将上述组分IV-1和IV-4固液混合物在压滤设备中进行压滤，进液压力不超过0.2Mpa，压滤完后将沉淀吹干得组分IV-1和IV-4；压滤机内残余的组分IV-1和IV-4可用洗液清洗后再回收组分IV-1和IV-4；
(7)、最后分离组分V：
将压滤分离出组分IV-1和IV-4的滤液用pH4.0醋酸缓冲液调节反应液pH4.7～4.9，温度-10℃以下，反应后得组分V固液混合物；
(8)、压滤分离出组分V：
将组分V固液混合物在压滤设备中进行压滤，压滤设备进口压力不超过0.2Mpa，压滤完后将沉淀吹干后得组分V，于-30℃冷库储藏备用；
(9)、超滤、灭菌、检定合格：
按每g组分V沉淀量加4.5～5.5ml注射用水溶解组分V，得组分V溶解液，将组分V溶解液浓缩到蛋白浓度20.0％，用注射用水调整蛋白浓度至20.5～21.0％，加入保护剂辛酸钠0.14-0.18mmol/g，在60℃±0.5℃条件下巴氏灭活10小时，除菌过滤得人血白蛋白，检定合格后分装即可。

Claims (5)

1、一种人血白蛋白的分离方法，其特征是用人血浆为原料，首先将组分I、组分II+III分别沉淀，然后将组分I+II+III一并分离，最后将组分IV-1、IV-4分别沉淀，一并分离。
2、根据权利要求1所述的分离方法，其特征是固液分离采用压滤法过滤，其进液压力不超过0.2Mpa。
3、根据权利要求1或2所述的分离方法，其特征是先分离组分I，再分离组分II+III，压滤分离出组分I+II+III后，进一步分离组分IV-1，再进一步分离组分IV-4，压滤分离出组分IV-1和IV-4后，最后分离组分V，压滤组分V后再超滤，加入保护剂辛酸钠0.14-0.18mmol/g，在60℃±0.5℃条件下巴氏灭活10小时，除菌过滤得人血白蛋白，检定合格后分装即可。
4、根据权利要求1或2所述的分离方法，其特征是压滤机内残余的组分IV-1和IV-4可用洗液清洗后再回收组分IV-1和IV-4。
5、根据权利要求3所述的分离方法，其特征是压滤机内残余的组分IV-1和IV-4可用洗液清洗后再回收组分IV-1和IV-4。
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