CN104558154A - 一种从组分iv-2沉淀中提取人血白蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明采用溶解组分IV-2沉淀、分离组分IV-1沉淀、分离组分IV-2沉淀、分离组分V沉淀、组分V沉淀溶解、过滤、超滤透析、浓缩、加温纯化、过滤、超滤透析、浓缩和配制的步骤用来制备人血白蛋白，各步骤前后紧密相连、层层相扣，所生产得到的人血白蛋白半成品，蛋白质含量在20.1％以上，纯度不低于蛋白质总量的98.0％，pH值为6.5～7.3，残余乙醇含量不高于0.025g/100ml。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域，尤其涉及一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法。
背景技术
白蛋白(albumin)是人血浆中含量最多的蛋白质，约45g/L，占血浆总蛋白的60％，是临床上常用的血容量扩张剂之一，血浆白蛋白主要有两方面生理功能：①维持血浆胶体渗透压，②与各种配体(ligands)结合，起运输功能。
人血白蛋白分离工艺是由美国哈佛大学cohn教授研究开发的一种低温乙醇血浆分级技术，该技术通过多步调节低温乙醇法的五大要素：pH值、温度、乙醇浓度、蛋白浓度、离子强度来实现逐级分离血浆中的各种蛋白质，分离人血白蛋白的步骤分别为：组分I沉淀分离；组分II+III(或组分I+II+III)沉淀分离；组分IV-1沉淀分离；组分IV-2沉淀分离；组分V沉淀分离；组分V沉淀经过进一步纯化得到最终产物人血白蛋白。上述步骤中分离出的组分IV-2沉淀，通常作为废料经高压灭菌后废弃，由于分离沉淀的过程中，影响的因素很多，有一定量的白蛋白共沉于组分IV-2沉淀中而被一起废弃，造成浪费，而目前白蛋白市场也存在长期供需紧张的局面。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种可节约成本、避免浪费的
从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法。
本发明提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将组分IV-2沉淀用含氯化钠和枸橼酸钠的水溶液完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用醋酸-醋酸钠缓冲液调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.00～6.30，将温度降至-1.0～0.0℃，用乙醇调节乙醇终浓度至39～41％，用醋酸-醋酸钠缓冲液或氢氧化钠溶液调整pH值至6.00～6.30，调节悬液温度至-6.0℃～-4.0℃，搅拌均匀，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-5.5～-3.5℃，悬液压完后清洗回收，回收液并入上清液罐，收集组分IV-1上清液，组分IV-1沉淀高压灭菌后废弃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用醋酸-醋酸钠缓冲液调节组分IV-1上清液pH值至5.70～5.90，用乙醇调节乙醇终浓度至41.5～42.5％，再用醋酸-醋酸钠缓冲液或氢氧化钠溶液调整pH值至5.70～5.90，调节反应温度至-7.0℃～-5.0℃，搅拌反应完全后按每1000kg制品加入硅藻土2.0～3.0kg和珍珠岩2.0～3.0kg，搅拌反应，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-6.0～-4.0℃，悬液压完后进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，收集组分IV-2上清液，组分IV-2沉淀高压灭菌废弃；
步骤四：分离组分V沉淀
用醋酸和乙醇混合液调节组分IV-2上清液的pH值至4.70～4.90，调节温度至-9.0～-8.0℃，搅拌使其反应，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-8.5～-6.5℃，待悬液全部压滤完后，收集组分V沉淀；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用沉淀重量5～7倍的0.0～4.0℃的注射用水溶解，搅拌至沉淀完全溶解，用醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至4.50～4.70；调节温度至0.0～4.0℃；继续搅拌使其反应得到溶解液，按每1000kg溶解液加入硅藻土1.0～2.0kg和珍珠岩1.0～2.0kg，搅拌，开始过滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为0.0～5.0℃，溶解液压完后进行清洗回收，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至6.50～7.30，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五得到的过滤液浓缩至蛋白质含量为8～12％，用4～6倍体积的2～8℃注射用水连续等体积透析，再用氢氧化钠溶液或醋酸-醋酸钠缓冲液调整制品pH值至6.60～6.90，用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为20.0～50.0g/L；
步骤七：加温纯化、过滤
将超滤后浓度为20.0～50.0g/L的蛋白溶液加温至50.0～55.0℃，恒温1～3小时，恒温结束降温至18～26℃，转移至白蛋白精制罐，用醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.50～4.70，继续降温至0.0～0.5℃，用乙醇调节乙醇终浓度至11～13％，调节最终温度至-3.5～-2.5℃，继续搅拌反应，反应完全后按每1000kg悬液加入珍珠岩1.0～2.0kg，搅拌，开始过滤，控制过滤压力为0～0.2MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为-3.4～-2.0℃，悬液压滤完进行清洗回收，用氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.60～6.90，调节最终温度至-3.0～-2.0℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七得到的pH调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为10～14％，然后依次进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.0～21.0％，按每克蛋白质加入0.15～0.18mmol辛酸钠的比例加入辛酸钠，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.50～7.30，再进行59.5～60.5℃恒温8～12小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
所述步骤一中是用8～10倍重量的0.0～4.0℃的含0.8～0.9％氯化钠和含0.6～0.8％枸橼酸钠的水溶液将组分IV-2沉淀溶解；其中含0.8～0.9％氯化钠和含0.6～0.8％枸橼酸钠的水溶液的配制方法为：称取8～9kg氯化钠和6～8kg枸橼酸钠，然后加入800～900kg注射用水中搅拌至完全溶解，再补加注射用水至1000kg。
所述步骤二中，是采用40％平衡液800～1000Kg对压滤机进行清洗回收，所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.80-7.00；用-15℃冷媒调节温度至-6.0～-5.0℃；
所述步骤三中，是采用42％平衡液800～1000Kg对压滤机进行清洗回收，所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.70-5.90；用-15℃冷媒调节温度至-7.0～-5.0℃；
所述步骤七中所用的乙醇为-4.0～-3.0℃的12％乙醇。
所述连续等量透析依次采用的溶剂为：2～8℃的4～6倍浓缩后制品重量的0.9％NaCl溶液和4～6倍浓缩后制品重量的0.5％NaCl溶液。
本发明采用溶解组分IV-2沉淀、分离组分IV-1沉淀、分离组分IV-2沉淀、分离组分V沉淀、组分V沉淀溶解、过滤、超滤透析、浓缩、加温纯化、过滤、超滤透析、浓缩和配制的步骤用来制备人血白蛋白，各步骤前后紧密相连、层层相扣，所生产得到的人血白蛋白半成品，蛋白质含量在20.1％以上，纯度不低于蛋白质总量的98.0％，pH值为6.5～7.3，残余乙醇含量应不高于0.025g/100ml。
附图说明
图1为本发明原料组分IV-2沉淀生产工艺流程图。
图2为本发明提取人血白蛋白的生产工艺流程图。
具体实施方式
原料取自人血白蛋白分离工艺中分离得到的组分IV-2沉淀，可以采用最常规的人血白蛋白分离工艺，例如图1所示的人血白蛋白分离工艺。
本发明提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，工艺流程如图2所示，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将组分IV-2沉淀用8～10倍重量的0.0～4.0℃的含0.8～0.9％氯化钠和含0.6～0.8％枸橼酸钠的水溶液搅拌6小时以上至完全溶解；
其中含0.8～0.9％氯化钠和含0.6～0.8％枸橼酸钠的水溶液的配制方法为：称取8～9kg氯化钠和6～8kg枸橼酸钠，然后加入800～900kg注射用水中搅拌至完全溶解，再补加注射用水至1000kg。
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液(醋酸-醋酸钠缓冲液配制方法为：称取1088.6g三水合醋酸钠，倒入10L大立瓶中，用适量注射用水溶解，摇溶后，量取2288ml冰醋酸，加入到溶液中，加注射用水至10L，混匀即得，下同)调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.00～6.30，用-15℃冷媒将温度降至-1.0～0.0℃，用-20℃以下95％(v/v)乙醇调节乙醇终浓度至39～41％(v/v)，用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液或0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.00～6.30，用-15℃冷媒调节悬液温度至-6.0℃～-4.0℃，在搅拌速度为50～100rpm下搅拌反应2～3小时，用40％平衡液800～1200Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20～40分钟，用-7.5～-3.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-5.5～-3.5℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-5.5～-3.5℃，悬液压完设定吹扫时间30～60分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液800～1000Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间30～150分钟，再使用-7.5～-3.5℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液，组分IV-1沉淀高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.80-7.00；用-15℃冷媒调节温度至-6.0～-5.0℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节组分IV-1上清液pH值至5.70～5.90，用-20℃以下95％(v/v)乙醇调节乙醇终浓度至41.5～42.5％(v/v)，加完乙醇后取样检测pH值并用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液或0.5mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至5.70～5.90，用-15℃冷媒调节反应温度至-7.0℃～-5.0℃，在搅拌速度为50～100rpm下搅拌反应2～3小时，反应完全后按每1000kg制品加入硅藻土2.0～3.0kg和珍珠岩2.0～3.0kg，以搅拌速度为50～100rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液800～1200Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20～40分钟，用-8.0～-4.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-5.5～-3.5℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-6.0～-4.0℃，悬液压完设定吹扫时间30～60分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液800～1000Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间30～150分钟，再使用-7.5～-3.5℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液，组分IV-2沉淀高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.70-5.90；用-15℃冷媒调节温度至-7.0～-5.0℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)调节组分IV-2上清液的pH值至4.70～4.90，用-15℃冷媒调节温度至-9.0～-8.0℃，在搅拌速度为50～100rpm下继续搅拌反应2～3小时，用-9.0～-8.0℃的42％(v/v)乙醇1000～2000kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-11.0～-7.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-8.5～-6.5℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-8.5～-6.5℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为30～150分钟，用-11.0～-7.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀；
所用的-9.0～-8.0℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-9.0～-8.0℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用沉淀重量5～7倍的0.0～4.0℃的注射用水溶解，在搅拌速率为50～100rpm下搅拌6小时以上至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至4.50～4.70；用-15℃冷媒调节温度至0.0～4.0℃；继续在搅拌速率为50～100rpm下搅拌反应2～3小时得到溶解液，按每1000kg溶解液加入硅藻土1.0～2.0kg和珍珠岩1.0～2.0kg，然后在搅拌速率为50～100rpm下搅拌30分钟，用0.0～4.0℃注射用水300～500kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间10～30分钟，用0.0～4.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到0.0～4.0℃，开始过滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为0.0～5.0℃，溶解液压完设定吹扫时间10～30分钟，用50～200kg 0.0～4.0℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用0.0～4.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为10～30分钟，用0.0～4.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，滤液用0.4mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至6.50～7.30，过滤沉淀高压灭菌废弃；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将过滤液浓缩至蛋白质含量为8～12％(m/v)，用4～6倍体积的2～8℃注射用水连续等体积透析，再用0.5mol/L氢氧化钠溶液或pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整制品pH值至6.60～6.90，用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为20.0～50.0g/L；
步骤七：加温纯化、过滤
将超滤后浓度为20.0～50.0g/L的蛋白溶液加温至50.0～55.0℃，恒温1～3小时，恒温结束降温至18～26℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.50～4.70，继续降温至0.0～0.5℃，用-20℃以下95％乙醇调节乙醇终浓度至11～13％(v/v)，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.5～-2.5℃，在搅拌速率为50～100rpm下继续搅拌反应2小时以上，反应完全后按每1000kg悬液加入珍珠岩1.0～2.0kg，在搅拌速率为50～100rpm下搅拌30分钟，用-4.0～-3.0℃的12％(v/v)乙醇300～500kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间10～30分钟，用-4.0～0.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-3.5～-2.5℃，开始过滤，控制过滤压力为0～0.2MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为-3.4～-2.0℃，悬液压滤完设定吹扫时间为10～30分钟，用50～200kg 12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-4.0～0.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(10～30分钟)，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.60～6.90，调节最终温度至-3.0～-2.0℃；
所用的-4.0～-3.0℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-4.0～-3.0℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将pH调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为10～14％(m/v)(进口压力≤4.0bar，回流压力≤2.0bar)，然后依次用2～8℃的4～6倍浓缩后制品重量的0.9％NaCl溶液和4～6倍浓缩后制品重量的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.0～21.0％(m/v)，按每克蛋白质加入0.168mmol(即27.92mg)辛酸钠的比例加入辛酸钠，用0.5mol/L盐酸溶液或0.5mol/L氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.50～7.30，再进行59.5～60.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
所生产的人血白蛋白半成品，其质量符合以下标准【2010年版《中国药典》(三部)】：
①蛋白质含量应≥20％；
②纯度应不低于蛋白质总量的96.0％；
③pH值应为6.5～7.3；
④残余乙醇含量应不高于0.025g/100ml；
实施例1
本实施例提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将105kg的组分IV-2沉淀用1.5℃的含8.03kg氯化钠和含6.62kg枸橼酸钠的水溶液945kg搅拌6小时以上至完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液(醋酸-醋酸钠缓冲液配制方法为：称取1088.6g三水合醋酸钠，倒入10L大立瓶中，用适量注射用水溶解，摇溶后，量取2288ml冰醋酸，加入到溶液中，加注射用水至10L，混匀即得，下同)1.6kg调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.10，用-15℃冷媒将温度降至-0.9℃，加入-21.8℃的95％(v/v)乙醇501.7kg，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.25，用-15℃冷媒调节悬液温度至-4.7℃，在搅拌速度为82rpm下搅拌反应3小时，用40％平衡液1039Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间32分钟，用-4.8℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.4℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为68kg/min，滤出液温度为-4.2℃，悬液压完设定吹扫时间42分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液879Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间95分钟，再使用-5.6℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液2357.7kg，组分IV-1沉淀89.3kg高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.95；用-15℃冷媒调节温度至-5.0℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液2.8kg调节组分IV-1上清液pH值至5.81，加入-20.7℃的95％(v/v)乙醇74.7kg，加完乙醇后用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至5.83，用-15℃冷媒调节反应温度至-6.5℃，在搅拌速度为71rpm下搅拌反应2小时，反应完全后加入硅藻土6.1kg和珍珠岩6.1kg，以搅拌速度为71rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液1011Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间31分钟，用-5.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.8℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0.2MPa，过滤速度为62kg/min，滤出液温度为-4.7℃，悬液压完设定吹扫时间46分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液871Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间80分钟，再使用-4.9℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液3289.2kg，组分IV-2沉淀29.2kg高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.77；用-15℃冷媒调节温度至-6.1℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共49.3kg调节组分IV-2上清液的pH值至4.81，用-15℃冷媒调节温度至-8.1℃，在搅拌速度为73rpm下继续搅拌反应2.3小时，用-8.3℃的42％(v/v)乙醇1435kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-9.6℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-7.2℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.21MPa，过滤速度为80kg/min，滤出液温度为-7.1℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为102分钟，用-8.2℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀31.7kg；
所用的-8.3℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-8.3℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用1.6℃的注射用水190.3kg溶解，在搅拌速率为75rpm下搅拌6.9小时至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液1.4kg调整pH值至4.60；用-15℃冷媒调节温度至1.0℃；继续在搅拌速率为70rpm下搅拌反应2.3小时得到溶解液，加入硅藻土0.3kg和珍珠岩0.3kg，然后在搅拌速率为80rpm下搅拌30分钟，用2.0℃注射用水364kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间24分钟，用1.8℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到2.5℃，开始过滤，控制过滤压力为0.16MPa，过滤速度为25kg/min，滤出液温度为2.6℃，溶解液压完设定吹扫时间20分钟，用123kg的1.7℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用2.4℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为24分钟，用2.3℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到滤液346.4kg，用0.4mol/L的氢氧化钠溶液38.1kg调节pH值至6.75，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液，过滤液中蛋白质含量为1.65％(m/v)(即6.34kg)；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五的过滤液浓缩至蛋白质含量为9.4％(m/v)，浓缩后重量为67.5kg，接着用337.5kg的4.5℃注射用水连续等体积透析，再用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整制品pH值至6.71，用注射用水稀释至最终蛋白质含量为3.2％(m/v)(即198.3kg)；
步骤七：加温纯化、过滤
将步骤六超滤后的蛋白溶液加温至52.9℃，恒温1.9小时，恒温结束降温至22℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.57，继续降温至0.2℃，用-21.0℃的95％乙醇24.2kg调节乙醇终浓度至12％(v/v)，加完乙醇后总重量为222.5kg，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.4℃，在搅拌速率为64rpm下继续搅拌反应2.8小时，反应完全后加入珍珠岩0.33kg，在搅拌速率为60rpm下搅拌30分钟，用-3.4℃的12％(v/v)乙醇413kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用-3.4℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-2.7℃，开始过滤，控制过滤压力为0.11MPa，过滤速度为30kg/min，滤出液温度为-3.2℃，悬液压滤完设定吹扫时间为20分钟，用150kg的12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-3.0℃预冷洁净压缩空气22分钟吹干滤板，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.77，沉淀为1.7kg，滤液为371.1kg，滤液中蛋白质含量为1.62％(m/v)，调节最终温度至-2.4℃；
所用-3.4℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-3.4℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七最后温度调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为12.3％(m/v)(即51.6kg)(进口压力为3.1bar，回流压力为1.0bar)，然后依次用4.4℃的258kg的0.9％NaCl溶液和3.4℃的258kg的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.3％(m/v)(即6.03kg)，加入辛酸钠168g，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.94，再进行60.0±0.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
产品检测：
所述人血白蛋白半成品的蛋白质含量为20.3％，其纯度为99.0％，PH值为6.88，其中残留的乙醇含量为小于0.025g/100ml。
实施例2
本实施例提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将102kg的组分IV-2沉淀用1.7℃的含7.80kg氯化钠和含6.43kg枸橼酸钠的水溶液918kg搅拌6小时以上至完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液1.6kg调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.08，用-15℃冷媒将温度降至-0.9℃，加入-20.5℃的95％(v/v)乙醇487.4kg，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.23，用-15℃冷媒调节悬液温度至-4.7℃，在搅拌速度为80rpm下搅拌反应2.2小时，用40％平衡液923Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间28分钟，用-4.9℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.0℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.24MPa，过滤速度为76kg/min，滤出液温度为-4.3℃，悬液压完设定吹扫时间50分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液933Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间97分钟，再使用-5.0℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液2369.4kg，组分IV-1沉淀86.7kg高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.89；用-15℃冷媒调节温度至-5.7℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液2.8kg调节组分IV-1上清液pH值至5.85，加入-22.0℃的95％(v/v)乙醇75.1kg，加完乙醇后用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至5.82，用-15℃冷媒调节反应温度至-6.4℃，在搅拌速度为80rpm下搅拌反应2.4小时，反应完全后加入硅藻土6.1kg和珍珠岩6.1kg，以搅拌速度为78rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液1075Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间34分钟，用-4.8℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.5℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为64kg/min，滤出液温度为-5.1℃，悬液压完设定吹扫时间47分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液942Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间99分钟，再使用-5.0℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液3372.2kg，组分IV-2沉淀29.4kg高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.83；用-15℃冷媒调节温度至-5.7℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共50.6kg调节组分IV-2上清液的pH值至4.85，用-15℃冷媒调节温度至-8.8℃，在搅拌速度为70rpm下继续搅拌反应2.1小时，用-8.1℃的42％(v/v)乙醇1495kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-8.7℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-7.2℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为60kg/min，滤出液温度为-7.0℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为113分钟，用-9.4℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀32.5kg；
所用的-8.1℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-8.1℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用1.8℃的注射用水195.1kg溶解，在搅拌速率为78rpm下搅拌6.3小时至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液1.4kg调整pH值至4.64；用-15℃冷媒调节温度至1.2℃；继续在搅拌速率为76rpm下搅拌反应3.0小时得到溶解液，加入硅藻土0.3kg和珍珠岩0.3kg，然后在搅拌速率为70rpm下搅拌30分钟，用1.9℃注射用水450kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间17分钟，用2.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到1.6℃，开始过滤，控制过滤压力为0.17MPa，过滤速度为27kg/min，滤出液温度为2.7℃，溶解液压完设定吹扫时间23分钟，用100kg的1.0℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用1.6℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为18分钟，用1.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到滤液329.1kg，用0.4mol/L的氢氧化钠溶液36.2kg调节pH值至6.75，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液，过滤液中蛋白质含量为1.55％(m/v)(即5.66kg)；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五的过滤液浓缩至蛋白质含量为9.5％(m/v)，浓缩后重量为59.6kg，接着用298.0kg的5.0℃注射用水连续等体积透析，再用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH值至6.81，用注射用水稀释至最终蛋白质含量为3.5％(m/v)(即161.8kg)；
步骤七：加温纯化、过滤
将步骤六超滤后的蛋白溶液加温至53.0℃，恒温1.9小时，恒温结束降温至25℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.61，继续降温至0.2℃，用-21.0℃的95％乙醇19.7kg调节乙醇终浓度至12％(v/v)，加完乙醇后总重量为181.5kg，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.2℃，在搅拌速率为64rpm下继续搅拌反应2.5小时，反应完全后加入珍珠岩0.27kg，在搅拌速率为63rpm下搅拌30分钟，用-3.4℃的12％(v/v)乙醇375kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间25分钟，用-3.7℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-3.1℃，开始过滤，控制过滤压力为0.10MPa，过滤速度为38kg/min，滤出液温度为-2.8℃，悬液压滤完设定吹扫时间为17分钟，用130kg的12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-2.6℃预冷洁净压缩空气24分钟吹干滤板，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.82，沉淀为1.4kg，滤液为310.4kg，滤液中蛋白质含量为1.73％(m/v)，调节最终温度至-2.3℃；
所用-3.4℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-3.4℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七最后温度调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为12.9％(m/v)(即43.9kg)(进口压力为3.0bar，回流压力为1.1bar)，然后依次用4.9℃的219kg的0.9％NaCl溶液和3.3℃的219kg的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.2％(m/v)(即5.38kg)，加入辛酸钠150g，用0.5mol/L盐酸溶液调整最终pH值至6.78，再进行60.0±0.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
产品检测：
所述人血白蛋白半成品的蛋白质含量为20.1％，其纯度为98.6％，PH值为6.90，其中残留的乙醇含量为小于0.025g/100ml。
实施例3
本实施例提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将106kg的组分IV-2沉淀用2.8℃的含8.11kg氯化钠和含6.68kg枸橼酸钠的水溶液954kg搅拌6小时以上至完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液1.6kg调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.01，用-15℃冷媒将温度降至-0.8℃，加入-21.7℃的95％(v/v)乙醇506.5kg，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.28，用-15℃冷媒调节悬液温度至-5.4℃，在搅拌速度为87rpm下搅拌反应2.9小时，用40％平衡液979Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间31分钟，用-5.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.4℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.23MPa，过滤速度为68kg/min，滤出液温度为-4.4℃，悬液压完设定吹扫时间42分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液865Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间83分钟，再使用-5.4℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液2357.8kg，组分IV-1沉淀90.1kg高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.93；用-15℃冷媒调节温度至-5.0℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液2.8kg调节组分IV-1上清液pH值至5.80，加入-21.0℃的95％(v/v)乙醇74.7kg，加完乙醇后用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至5.82，用-15℃冷媒调节反应温度至-6.2℃，在搅拌速度为71rpm下搅拌反应2.5小时，反应完全后加入硅藻土6.1kg和珍珠岩6.1kg，以搅拌速度为75rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液1001Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-5.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.7℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为76kg/min，滤出液温度为-4.8℃，悬液压完设定吹扫时间47分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液946Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间91分钟，再使用-5.6℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液3364.3kg，组分IV-2沉淀29.2kg高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.76；用-15℃冷媒调节温度至-5.8℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共50.5kg调节组分IV-2上清液的pH值至4.75，用-15℃冷媒调节温度至-9.0℃，在搅拌速度为80rpm下继续搅拌反应2.3小时，用-8.9℃的42％(v/v)乙醇1573kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-8.4℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-7.6℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.20MPa，过滤速度为73kg/min，滤出液温度为-7.7℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为103分钟，用-9.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀32.4kg；
所用的-8.9℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-8.9℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用2.0℃的注射用水194.6kg溶解，在搅拌速率为79rpm下搅拌6.7小时至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液1.4kg调整pH值至4.62；用-15℃冷媒调节温度至1.2℃；继续在搅拌速率为72rpm下搅拌反应2.7小时得到溶解液，加入硅藻土0.3kg和珍珠岩0.3kg，然后在搅拌速率为73rpm下搅拌30分钟，用1.5℃注射用水429kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20分钟，用1.7℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到2.0℃，开始过滤，控制过滤压力为0.19MPa，过滤速度为25kg/min，滤出液温度为2.1℃，溶解液压完设定吹扫时间19分钟，用109kg的1.3℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用1.9℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为16分钟，用1.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到滤液337.5kg，用0.4mol/L的氢氧化钠溶液37.1kg调节pH值至6.70，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液，过滤液中蛋白质含量为1.63％(m/v)(即6.11kg)；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五的过滤液浓缩至蛋白质含量为9.9％(m/v)，浓缩后重量为61.7kg，接着用308.4kg的5.2℃注射用水连续等体积透析，再用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH值至6.72，用注射用水稀释至最终蛋白质含量为4.0％(m/v)(即152.7kg)；
步骤七：加温纯化、过滤
将步骤六超滤后的蛋白溶液加温至52.4℃，恒温2.3小时，恒温结束降温至21℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.64，继续降温至0.3℃，用-20.0℃的95％乙醇18.6kg调节乙醇终浓度至12％(v/v)，加完乙醇后总重量为171.3kg，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.3℃，在搅拌速率为62rpm下继续搅拌反应2.3小时，反应完全后加入珍珠岩0.26kg，在搅拌速率为62rpm下搅拌30分钟，用-3.7℃的12％(v/v)乙醇360kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间17分钟，用-3.7℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-3.2℃，开始过滤，控制过滤压力为0.15MPa，过滤速度为31kg/min，滤出液温度为-3.1℃，悬液压滤完设定吹扫时间为15分钟，用123kg的12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-2.7℃预冷洁净压缩空气25分钟吹干滤板，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.78，沉淀为1.3kg，滤液为293.3kg，滤液中蛋白质含量为1.98％(m/v)，调节最终温度至-2.5℃；
所用-3.7℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-3.7℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七最后温度调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为12.6％(m/v)(即48.5kg)(进口压力为3.1bar，回流压力为1.2bar)，然后依次用4.7℃的242kg的0.9％NaCl溶液和4.7℃的242kg的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.1％(m/v)(即5.80kg)，加入辛酸钠162g，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.95，再进行60.0±0.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
产品检测：
所述人血白蛋白半成品的蛋白质含量为20.2％，其纯度为98.6％，PH值为6.86，其中残留的乙醇含量为小于0.025g/100ml。
实施例4
本实施例提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将109kg的组分IV-2沉淀用1.8℃的含8.34kg氯化钠和含6.87kg枸橼酸钠的水溶液981kg搅拌6小时以上至完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液1.7kg调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.07，用-15℃冷媒将温度降至-0.3℃，加入-20.4℃的95％(v/v)乙醇520.8kg，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.21，用-15℃冷媒调节悬液温度至-5.3℃，在搅拌速度为89rpm下搅拌反应2.6小时，用40％平衡液1014Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间27分钟，用-5.6℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.6℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为63kg/min，滤出液温度为-4.9℃，悬液压完设定吹扫时间49分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液929Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间88分钟，再使用-5.3℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液2464.0kg，组分IV-1沉淀92.7kg高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.91；用-15℃冷媒调节温度至-5.6℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液3.0kg调节组分IV-1上清液pH值至5.81，加入-20.8℃的95％(v/v)乙醇78.1kg，加完乙醇后用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至5.80，用-15℃冷媒调节反应温度至-5.9℃，在搅拌速度为77rpm下搅拌反应2.4小时，反应完全后加入硅藻土6.4kg和珍珠岩6.4kg，以搅拌速度为73rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液1087Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间26分钟，用-6.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.0℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0.23MPa，过滤速度为66kg/min，滤出液温度为-5.0℃，悬液压完设定吹扫时间45分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液874Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间84分钟，再使用-5.2℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液3401.2kg，组分IV-2沉淀30.5kg高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.80；用-15℃冷媒调节温度至-6.5℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共51.0kg调节组分IV-2上清液的pH值至4.83，用-15℃冷媒调节温度至-8.0℃，在搅拌速度为72rpm下继续搅拌反应2.7小时，用-8.3℃的42％(v/v)乙醇1565kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-9.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-7.3℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.25MPa，过滤速度为69kg/min，滤出液温度为-8.0℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为104分钟，用-8.3℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀32.8kg；
所用的-8.3℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-8.3℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用1.0℃的注射用水196.8kg溶解，在搅拌速率为75rpm下搅拌6.6小时至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液1.4kg调整pH值至4.64；用-15℃冷媒调节温度至1.4℃；继续在搅拌速率为78rpm下搅拌反应2.0小时得到溶解液，加入硅藻土0.3kg和珍珠岩0.3kg，然后在搅拌速率为72rpm下搅拌30分钟，用1.4℃注射用水404kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间17分钟，用2.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到2.0℃，开始过滤，控制过滤压力为0.19MPa，过滤速度为24kg/min，滤出液温度为2.5℃，溶解液压完设定吹扫时间23分钟，用107kg的1.3℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用1.7℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为19分钟，用1.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到滤液338.0kg，用0.4mol/L的氢氧化钠溶液37.2kg调节pH值至6.71，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液，过滤液中蛋白质含量为1.58％(m/v)(即5.93kg)；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五的过滤液浓缩至蛋白质含量为9.6％(m/v)，浓缩后重量为61.8kg，接着用308.8kg的4.5℃注射用水连续等体积透析，再用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH值至6.83，用注射用水稀释至最终蛋白质含量为3.2％(m/v)(即185.3kg)；
步骤七：加温纯化、过滤
将步骤六超滤后的蛋白溶液加温至52.8℃，恒温2.3小时，恒温结束降温至23℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.61，继续降温至0.4℃，用-21.7℃的95％乙醇22.6kg调节乙醇终浓度至12％(v/v)，加完乙醇后总重量为207.9kg，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.3℃，在搅拌速率为67rpm下继续搅拌反应2.6小时，反应完全后加入珍珠岩0.31kg，在搅拌速率为62rpm下搅拌30分钟，用-3.4℃的12％(v/v)乙醇393kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间23分钟，用-3.8℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-2.6℃，开始过滤，控制过滤压力为0.19MPa，过滤速度为35kg/min，滤出液温度为-3.2℃，悬液压滤完设定吹扫时间为25分钟，用132kg的12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-2.8℃预冷洁净压缩空气15分钟吹干滤板，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.75，沉淀为1.6kg，滤液为338.6kg，滤液中蛋白质含量为1.66％(m/v)，调节最终温度至-2.3℃；
所用-3.4℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-3.4℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七最后温度调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为12.0％(m/v)(即49.4kg)(进口压力为3.4bar，回流压力为1.7bar)，然后依次用4.9℃的247kg的0.9％NaCl溶液和3.8℃的247kg的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.0％(m/v)(即5.63kg)，加入辛酸钠157g，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.78，再进行60.0±0.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
产品检测：
所述人血白蛋白半成品的蛋白质含量为20.2％，其纯度为98.4％，PH值为6.84，其中残留的乙醇含量为小于0.025g/100ml。
实施例5
本实施例提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将103kg的组分IV-2沉淀用3.1℃的含7.88kg氯化钠和含6.49kg枸橼酸钠的水溶液927kg搅拌6小时以上至完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液1.6kg调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.10，用-15℃冷媒将温度降至-0.9℃，加入-20.7℃的95％(v/v)乙醇492.1kg，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.29，用-15℃冷媒调节悬液温度至-5.4℃，在搅拌速度为80rpm下搅拌反应2.8小时，用40％平衡液933Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-5.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.2℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为71kg/min，滤出液温度为-4.7℃，悬液压完设定吹扫时间41分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液904Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间90分钟，再使用-5.0℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液2354.5kg，组分IV-1沉淀87.6kg高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.88；用-15℃冷媒调节温度至-5.4℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液2.8kg调节组分IV-1上清液pH值至5.75，加入-20.8℃的95％(v/v)乙醇74.6kg，加完乙醇后用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至5.79，用-15℃冷媒调节反应温度至-6.3℃，在搅拌速度为71rpm下搅拌反应2小时，反应完全后加入硅藻土6.1kg和珍珠岩6.1kg，以搅拌速度为78rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液924Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间31分钟，用-5.4℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.2℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0.23MPa，过滤速度为72kg/min，滤出液温度为-4.5℃，悬液压完设定吹扫时间41分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液940Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间93分钟，再使用-5.3℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液3354.9kg，组分IV-2沉淀29.2kg高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.75；用-15℃冷媒调节温度至-6.3℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共50.3kg调节组分IV-2上清液的pH值至4.84，用-15℃冷媒调节温度至-8.8℃，在搅拌速度为80rpm下继续搅拌反应2.4小时，用-8.1℃的42％(v/v)乙醇1464kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-9.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-7.8℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.22MPa，过滤速度为64kg/min，滤出液温度为-8.0℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为109分钟，用-8.2℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀32.4kg；
所用的-8.1℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-8.1℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用1.2℃的注射用水194.1kg溶解，在搅拌速率为77rpm下搅拌6.4小时至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液1.4kg调整pH值至4.56；用-15℃冷媒调节温度至1.2℃；继续在搅拌速率为76rpm下搅拌反应2.7小时得到溶解液，加入硅藻土0.3kg和珍珠岩0.3kg，然后在搅拌速率为75rpm下搅拌30分钟，用1.6℃注射用水450kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间23分钟，用2.3℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到2.2℃，开始过滤，控制过滤压力为0.15MPa，过滤速度为20kg/min，滤出液温度为3.0℃，溶解液压完设定吹扫时间22分钟，用115kg的1.7℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用2.4℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为25分钟，用1.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到滤液342.9kg，用0.4mol/L的氢氧化钠溶液37.7kg调节pH值至6.81，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液，过滤液中蛋白质含量为1.55％(m/v)(即5.90kg)；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五的过滤液浓缩至蛋白质含量为9.6％(m/v)，浓缩后重量为61.4kg，接着用307.2kg的3.2℃注射用水连续等体积透析，再用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH值至6.84，用注射用水稀释至最终蛋白质含量为3.0％(m/v)(即196.6kg)；
步骤七：加温纯化、过滤
将步骤六超滤后的蛋白溶液加温至52.5℃，恒温2.2小时，恒温结束降温至22℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.58，继续降温至0.4℃，用-20.9℃的95％乙醇24.0kg调节乙醇终浓度至12％(v/v)，加完乙醇后总重量为220.6kg，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.3℃，在搅拌速率为63rpm下继续搅拌反应2.5小时，反应完全后加入珍珠岩0.33kg，在搅拌速率为64rpm下搅拌30分钟，用-3.7℃的12％(v/v)乙醇392kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用-3.8℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-3.1℃，开始过滤，控制过滤压力为0.17MPa，过滤速度为34kg/min，滤出液温度为-3.2℃，悬液压滤完设定吹扫时间为21分钟，用133kg的12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-2.2℃预冷洁净压缩空气17分钟吹干滤板，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.74，沉淀为1.7kg，滤液为352.3kg，滤液中蛋白质含量为1.59％(m/v)，调节最终温度至-2.3℃；
所用-3.7℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-3.7℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七最后温度调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为12.8％(m/v)(即46.1kg)(进口压力为3.4bar，回流压力为1.7bar)，然后依次用4.2℃的230kg的0.9％NaCl溶液和3.6℃的230kg的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.0％(m/v)(即5.60kg)，加入辛酸钠156g，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.95，再进行60.0±0.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
产品检测：
所述人血白蛋白半成品的蛋白质含量为20.1％，其纯度为98.3％，PH值为6.85，其中残留的乙醇含量为小于0.025g/100ml。
实施例6
本实施例提供了一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将104kg的组分IV-2沉淀用2.3℃的含7.96kg氯化钠和含6.55kg枸橼酸钠的水溶液936kg搅拌6小时以上至完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液1.6kg调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.10，用-15℃冷媒将温度降至-0.2℃，加入-21.5℃的95％(v/v)乙醇496.9kg，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.29，用-15℃冷媒调节悬液温度至-5.2℃，在搅拌速度为83rpm下搅拌反应2.5小时，用40％平衡液1038Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间28分钟，用-5.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.6℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.24MPa，过滤速度为75kg/min，滤出液温度为-4.4℃，悬液压完设定吹扫时间46分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用40％平衡液874Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入上清液罐，设定吹扫时间83分钟，再使用-5.3℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-1上清液2338.6kg，组分IV-1沉淀88.4kg高压灭菌后废弃；
所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％(v/v)乙醇563.3kg得到40％(v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40％(v/v)乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.91；用-15℃冷媒调节温度至-5.6℃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液2.8kg调节组分IV-1上清液pH值至5.81，加入-21.5℃的95％(v/v)乙醇74.1kg，加完乙醇后用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至5.81，用-15℃冷媒调节反应温度至-5.6℃，在搅拌速度为79rpm下搅拌反应2.5小时，反应完全后加入硅藻土6.0kg和珍珠岩6.0kg，以搅拌速度为71rpm搅拌反应30分钟，用42％平衡液935Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间31分钟，用-5.0℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-4.0℃，开始悬液压滤，控制过滤压力为0.21MPa，过滤速度为62kg/min，滤出液温度为-5.5℃，悬液压完设定吹扫时间44分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用42％平衡液947Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间93分钟，再使用-5.3℃预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分IV-2上清液3345.6kg，组分IV-2沉淀29.0kg高压灭菌废弃；
所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％(v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.78；用-15℃冷媒调节温度至-6.2℃；
步骤四：分离组分V沉淀
用4mol/L醋酸和95％乙醇混合液(每100kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共50.2kg调节组分IV-2上清液的pH值至4.82，用-15℃冷媒调节温度至-8.3℃，在搅拌速度为72rpm下继续搅拌反应2.9小时，用-8.6℃的42％(v/v)乙醇1552kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-8.6℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：PX50，规格680*779mm)，使排放温度达到-7.6℃。开始悬液压滤，控制过滤压力为0.24MPa，过滤速度为68kg/min，滤出液温度为-7.5℃，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分V悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路以最大限度回收反应罐及管路中的蛋白质，循环10min后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为100分钟，用-8.1℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分V沉淀32.3kg；
所用的-8.6℃的42％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，然后用-15℃冷媒调节温度至-8.6℃；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用1.4℃的注射用水193.6kg溶解，在搅拌速率为72rpm下搅拌7.0小时至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液1.4kg调整pH值至4.63；用-15℃冷媒调节温度至1.6℃；继续在搅拌速率为77rpm下搅拌反应2.6小时得到溶解液，加入硅藻土0.3kg和珍珠岩0.3kg，然后在搅拌速率为76rpm下搅拌30分钟，用1.9℃注射用水411kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间16分钟，用1.6℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到1.7℃，开始过滤，控制过滤压力为0.20MPa，过滤速度为28kg/min，滤出液温度为2.6℃，溶解液压完设定吹扫时间22分钟，用120kg的1.8℃注射用水对压滤机进行清洗回收，用2.3℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间为18分钟，用1.5℃预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到滤液347.2kg，用0.4mol/L的氢氧化钠溶液38.2kg调节pH值至6.85，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液，过滤液中蛋白质含量为1.64％(m/v)(即6.32kg)；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五的过滤液浓缩至蛋白质含量为9.5％(m/v)，浓缩后重量为66.5kg，接着用332.7kg的4.1℃注射用水连续等体积透析，再用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调整制品pH值至6.72，用注射用水稀释至最终蛋白质含量为3.1％(m/v)(即203.9kg)；
步骤七：加温纯化、过滤
将步骤六超滤后的蛋白溶液加温至53.0℃，恒温2.3小时，恒温结束降温至22℃，转移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.62，继续降温至0.4℃，用-20.1℃的95％乙醇24.9kg调节乙醇终浓度至12％(v/v)，加完乙醇后总重量为228.8kg，用-15℃冷媒调节最终温度至-3.2℃，在搅拌速率为68rpm下继续搅拌反应2.7小时，反应完全后加入珍珠岩0.34kg，在搅拌速率为64rpm下搅拌30分钟，用-3.3℃的12％(v/v)乙醇422kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用-3.8℃预冷洁净压缩空气吹干滤板(德国Begerow公司生产，型号：Steril S100，规格：349*384mm)，使排放温度达到-3.2℃，开始过滤，控制过滤压力为0.17MPa，过滤速度为39kg/min，滤出液温度为-2.9℃，悬液压滤完设定吹扫时间为17分钟，用143kg的12％乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-2.1℃预冷洁净压缩空气21分钟吹干滤板，用0.4mol/L氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.75，沉淀为1.7kg，滤液为370.4kg，滤液中蛋白质含量为1.62％(m/v)，调节最终温度至-2.6℃；
所用-3.3℃的12％乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇122.1kg，用-15℃冷媒调节温度至-3.3℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七最后温度调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为12.5％(m/v)(即50.6kg)(进口压力为3.3bar，回流压力为1.0bar)，然后依次用5.8℃的253kg的0.9％NaCl溶液和3.3℃的253kg的0.5％NaCl溶液进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.3％(m/v)(即6.01kg)，加入辛酸钠168g，用0.5mol/L盐酸溶液调整最终pH值至6.72，再进行60.0±0.5℃恒温10小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
产品检测：
所述人血白蛋白半成品的蛋白质含量为20.2％，其纯度为98.0％，PH值为6.81，其中残留的乙醇含量为小于0.025g/100ml。
Claims (6)
1.一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：溶解组分IV-2沉淀
将组分IV-2沉淀用含氯化钠和枸橼酸钠的水溶液完全溶解；
步骤二：分离组分IV-1沉淀
用醋酸-醋酸钠缓冲液调节步骤一的组分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.00～6.30，将温度降至-1.0～0.0℃，用乙醇调节乙醇终浓度至39～41％，用醋酸-醋酸钠缓冲液或氢氧化钠溶液调整pH值至6.00～6.30，调节悬液温度至-6.0℃～-4.0℃，搅拌均匀，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-5.5～-3.5℃，悬液压完后清洗回收，回收液并入上清液罐，收集组分IV-1上清液，组分IV-1沉淀高压灭菌后废弃；
步骤三：分离组分IV-2沉淀
用醋酸-醋酸钠缓冲液调节组分IV-1上清液pH值至5.70～5.90，用乙醇调节乙醇终浓度至41.5～42.5％，再用醋酸-醋酸钠缓冲液或氢氧化钠溶液调整pH值至5.70～5.90，调节反应温度至-7.0℃～-5.0℃，搅拌反应完全后按每1000kg制品加入硅藻土2.0～3.0kg和珍珠岩2.0～3.0kg，搅拌反应，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-6.0～-4.0℃，悬液压完后进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，收集组分IV-2 上清液，组分IV-2沉淀高压灭菌废弃；
步骤四：分离组分V沉淀
用醋酸和乙醇混合液调节组分IV-2上清液的pH值至4.70～4.90，调节温度至-9.0～-8.0℃，搅拌使其反应，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为-8.5～-6.5℃，待悬液全部压滤完后，收集组分V沉淀；
步骤五：组分V沉淀溶解、过滤
将收集的组分V沉淀用沉淀重量5～7倍的0.0～4.0℃的注射用水溶解，搅拌至沉淀完全溶解，用醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至4.50～4.70；调节温度至0.0～4.0℃；继续搅拌使其反应得到溶解液，按每1000kg溶解液加入硅藻土1.0～2.0kg和珍珠岩1.0～2.0kg，搅拌，开始过滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为0.0～5.0℃，溶解液压完后进行清洗回收，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至6.50～7.30，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液；
步骤六：超滤透析、浓缩
用膜规格为10KD超滤器将步骤五得到的过滤液浓缩至蛋白质含量为8～12％，用4～6倍体积的2～8℃注射用水连续等体积透析，再用氢氧化钠溶液或醋酸-醋酸钠缓冲液调整制品pH值至6.60～6.90，用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为20.0～50.0g/L；
步骤七：加温纯化、过滤
将超滤后浓度为20.0～50.0g/L的蛋白溶液加温至50.0～55.0℃， 恒温1～3小时，恒温结束降温至18～26℃，转移至白蛋白精制罐，用醋酸-醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.50～4.70，继续降温至0.0～0.5℃，用乙醇调节乙醇终浓度至11～13％，调节最终温度至-3.5～-2.5℃，继续搅拌反应，反应完全后按每1000kg悬液加入珍珠岩1.0～2.0kg，搅拌，开始过滤，控制过滤压力为0～0.2MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为-3.4～-2.0℃，悬液压滤完进行清洗回收，用氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.60～6.90，调节最终温度至-3.0～-2.0℃；
步骤八：超滤透析、浓缩、配制
将步骤七得到的pH调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为10～14％，然后依次进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.0～21.0％，按每克蛋白质加入0.15～0.18mmol辛酸钠的比例加入辛酸钠，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.50～7.30，再进行59.5～60.5℃恒温8～12小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品。
2.根据权利要求1所述的从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，其特征在于，所述步骤一中是用8～10倍重量的0.0～4.0℃的含0.8～0.9％氯化钠和含0.6～0.8％枸橼酸钠的水溶液将组分IV-2沉淀溶解；其中含0.8～0.9％氯化钠和含0.6～0.8％枸橼酸钠的水溶液的配制方法为：称取8～9kg氯化钠和6～8kg枸橼酸钠，然后加入800～900kg注射用水中搅拌至完全溶解，再补加注射用水至1000kg。
3.根据权利要求2所述的从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的 方法，其特征在于，所述步骤二中，是采用40％平衡液800～1000Kg对压滤机进行清洗回收，所用的40％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％的乙醇563.3kg得到40％的的乙醇；然后在每1000kg 40％的乙醇中加入枸橼酸钠3.66kg和氯化钠4.18kg；用pH4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6.80-7.00；用-15℃冷媒调节温度至-6.0～-5.0℃。
4.根据权利要求3所述的从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，其特征在于，所述步骤三中，是采用42％平衡液800～1000Kg对压滤机进行清洗回收，所用的42％平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入-20℃以下的95％乙醇607.9kg，得到42％的乙醇，然后在每1000kg 42％的乙醇中加入枸橼酸钠3.67kg和氯化钠3.14kg；用pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至5.70-5.90；用-15℃冷媒调节温度至-7.0～-5.0℃。
5.根据权利要求4所述的从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，其特征在于，步骤七中所用的乙醇为-4.0～-3.0℃的12％的乙醇。
6.根据权利要求5所述的从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，其特征在于，所述连续等量透析依次采用的溶剂为：2～8℃的4～6倍浓缩后制品重量的0.9％NaCl溶液和4～6倍浓缩后制品重量的0.5％NaCl溶液。
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