CN101972479B - 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 - Google Patents

一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN101972479B
CN101972479B CN2010105348287A CN201010534828A CN101972479B CN 101972479 B CN101972479 B CN 101972479B CN 2010105348287 A CN2010105348287 A CN 2010105348287A CN 201010534828 A CN201010534828 A CN 201010534828A CN 101972479 B CN101972479 B CN 101972479B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ethanol
protein
add
reactant liquor
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2010105348287A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101972479A (zh
Inventor
徐建新
尧振
梁小明
姜国亮
何淑琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Resources Boya biopharmaceutical Group Co.,Ltd.
Original Assignee
JIANGXI BOYA BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by JIANGXI BOYA BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical JIANGXI BOYA BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN2010105348287A priority Critical patent/CN101972479B/zh
Publication of CN101972479A publication Critical patent/CN101972479A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101972479B publication Critical patent/CN101972479B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。本发明在传统的5%低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制备工艺的基础上，在提取过程中采用压滤法代替离心法；超滤时，将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175s/m～0.205s/m，调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋白纯度，并且能够提高产品得率；使用麦芽糖或甘氨酸为保护剂，有利于提高静注人免疫球蛋白稳定性，甘氨酸作保护剂可满足了糖尿病患者临床使用；本发明可得到5-11%蛋白浓度的静注人免疫球蛋白。

Description

一种静注人免疫球蛋白的制备工艺
技术领域
本发明涉及一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。
背景技术
静注人免疫球蛋白的活性成份为蛋白质，其中95%以上为免疫球蛋白。由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法（压滤分离法）分离纯化，去除抗补体活性并经病毒灭活处理制成。目前，静注人免疫球蛋白生产品种一般都为5%低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白，因此，现有静注人免疫球蛋白临床使用时，输注的剂量相对较大，相对高浓度制品输注时间相对较长；此外，达到血药浓度的时间相对较长。由于其生产方法为低温乙醇离心法，产品得率低，稳定性不好，同时使用糖作为保护剂，不利于临床忌糖患者使用。为了使静注人免疫球蛋白的产品得率进一步提高、稳定性增强、适应人群更广，开发出一种能制备出5-11%蛋白浓度的性能更好的静注人免疫球蛋白的制备工艺显得十分必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用低温乙醇压滤法与层析法相结合，同时针对临床使用需求选用麦芽糖或甘氨酸作为保护剂制备出5-11%蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制备工艺。
本发明的目的是这样实现的：在传统的5%低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制备工艺的基础上，在提取过程中采用压滤法代替离心法；超滤时，将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175 s / m～0.205s / m ，调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋白纯度，并且能够提高产品得率；同时使用麦芽糖或甘氨酸都为保护剂，
优选方案为：
（1）按《中国药典》2010年版三部要求采集，且经复检合格并通过检疫期检疫合格的原料血浆，在预融间，用75％乙醇消毒、再用低于35℃注射用水冲洗尽乙醇后，进行破袋；破袋后输送到融浆罐，用30～35℃的循环水进行夹层循环融浆；血浆融化后，及时停止热水循环，把血浆温度控制在0～4℃之间，取样送质检进行抗-HIV、HBsAg、抗-HCV、梅毒、ALT、抗-HBs等检测；经过滤或离心，离心速度不大于4L/min/台，出液温度控制在0～4℃，分离冷沉淀，冷沉淀用于Ⅷ因子生产；将去除冷沉淀的血浆取样进行蛋白含量、组分分析、细菌内毒素检测；将符合药典要求的去除冷沉淀的血浆输送至蛋白分离反应罐；控制该血浆的温度在1～3℃之间，按不超过1.0升/分钟的流速加入pH4.0缓冲液调节pH值至6.80～7.00；再加入低于－15℃的95％乙醇或50％乙醇，流速不超过1.5升/分，使乙醇体积比终浓度至8％，温度控制在－1～－3℃，加完乙醇后的pH值为6.80～7.20；搅拌30分钟以上，进行离心，离心过程中出液流速不超过4升∕分∕台，出液温度控制在－1～－3℃，离心得组分I沉淀和组分Ⅰ上清液； 
（2）取上述组分Ⅰ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80～6.85，控制流速不超过1.0升/分钟，添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，温度控制在－4～－6℃；加完乙醇后，pH为6.80～7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；
（3）取10～15倍上述组分Ⅱ+Ⅲ沉淀的重量的注射用水，用氯化钠调整注射用水的钠离子浓度为0.01mol/L；加入搅拌机中开启搅拌，降温至0℃～3℃时，将上述组分Ⅱ+Ⅲ沉淀倒入搅拌机中搅拌溶解；待沉淀完全溶解，在搅拌过程中以不大于0.5升/分钟的流量缓慢加入pH4.0缓冲液到反应液中，调整反应液的pH至5.20±0.1，控制反应液温度为0℃～-1℃，加完pH4.0缓冲液，继续搅拌至少10分钟；开启制冷循环，加低于-15℃的95%乙醇，控制流速不大于1.5升/分钟，使反应液最终的乙醇体积比浓度为17%；反应液最终温度控制在-4℃～-6℃，加完乙醇继续搅拌2小时，静置4小时以上进行压缩过滤；先用-4℃以下的压缩空气吹出滤器中的水，启动反应罐搅拌器，按每升反应液加入18g硅藻土，使硅藻土与反应液混合均匀10分钟以上边搅拌边过滤，在过滤过程中保持出液温度为-4～-6℃，过滤压力不超过0.2 Mpa，得压滤液上清；
（4）上述压滤液上清计量后，启动反应罐搅拌器和制冷循环，控制温度为-4～-6℃，进行深层过滤，过滤出液温度控制在-4～-6℃，过滤后用1mol/L的HCl调节pH为3.8～4.0，输入超滤透析罐中进行下道工序的脱醇、纯化；  
（5）开始对上述调节完毕pH值的过滤液进行超滤，浓缩至5%以上，用5倍体积的2～8℃的注射用水进行透析；将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175 s / m～0.205s / m ，调节好后用离子交换柱进行上柱层析纯化；层析完毕用1mol/L的HCl调节pH为3.8～4.0，开启超滤机浓缩至5%以上, 用5倍体积2～8℃注射用水进行透析，使乙醇含量≤0.025%，然后将蛋白液浓缩至6%以上，将麦芽糖或甘氨酸加入蛋白液内，用1mol/L的HCl调节pH值，使麦芽糖含量为10±1%或甘氨酸含量为2±0.2%，pH为3.8～4.4，蛋白含量为8±3％，得配制后的蛋白液；
（6）配制后的蛋白液经0.2μm除菌滤芯过滤，放置在孵放室，经24℃±1℃在孵放21天；孵放结束后用DV50滤芯除病毒过滤，并根据蛋白含量调整过滤液，过滤液蛋白含量符合生产要求；用0.2μm除菌滤芯过滤分装，分装后的制品送检、灯检，检验合格后包装、入库；
所述pH4.0缓冲液是由乙酸钠与冰乙酸组成的水溶液，每升水中添加244.9ml冰乙酸和65.6g乙酸钠；
所述磷酸－NaOH缓冲液为每升水中添加1.6ml磷酸和1.2gNaOH；
以上百分比除特别说明，其余均为重量百分比。
组分Ⅰ上清液，组分I沉淀，组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，组分Ⅱ+Ⅲ上清液为所属技术领域的通用分类方法，在本发明中是对特定物质的名称的命名；并不是指单纯的序号。
本发明具有积极的意义：
1、采用压滤法代替离心法，产品得率显著提高，得率提高15-20%；
2、超滤时，将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175 s / m～0.205s / m ，调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋白纯度，并且能够提高产品得率；
3、麦芽糖或甘氨酸都为保护剂，有利于提高静注人免疫球蛋白稳定性，甘氨酸作保护剂可满足了糖尿病患者临床使用；
4、本发明可得到5-11%蛋白浓度的静注人免疫球蛋白。
具体实施方式
本发明具体实施方式在发明内容中得以体现，发明内容可以直接用于实施例。

Claims (1)

1.一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，其特征是制备工艺如下：
（1）将符合药典要求的去除冷沉淀的血浆输送至蛋白分离反应罐；控制该血浆的温度在1～3℃之间，按不超过1.0升/分钟的流速加入pH4.0缓冲液调节pH值至6.80～7.00；再加入低于－15℃的95％乙醇或50％乙醇，流速不超过1.5升/分，使乙醇体积比终浓度至8％，温度控制在－1～－3℃，加完乙醇后的pH值为6.80～7.20；搅拌30分钟以上，进行离心，离心过程中出液流速不超过4升∕分∕台，出液温度控制在－1～－3℃，离心得组分I沉淀和组分Ⅰ上清液； 
（2）取上述组分Ⅰ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80～6.85，控制流速不超过1.0升/分钟，添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，温度控制在－4～－6℃；加完乙醇后，pH为6.80～7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；
（3）取10～15倍上述组分Ⅱ+Ⅲ沉淀的重量的注射用水，用氯化钠调整注射用水的钠离子浓度为0.01mol/L；加入搅拌机中开启搅拌，降温至0℃～3℃时，将上述组分Ⅱ+Ⅲ沉淀倒入搅拌机中搅拌溶解；待沉淀完全溶解，在搅拌过程中以不大于0.5升/分钟的流量缓慢加入pH4.0缓冲液到反应液中，调整反应液的pH至5.20±0.1，控制反应液温度为0℃～-1℃，加完pH4.0缓冲液，继续搅拌至少10分钟；开启制冷循环，加低于-15℃的95%乙醇，控制流速不大于1.5升/分钟，使反应液最终的乙醇体积比浓度为17%；反应液最终温度控制在-4℃～-6℃，加完乙醇继续搅拌2小时，静置4小时以上进行压缩过滤；先用-4℃以下的压缩空气吹出滤器中的水，启动反应罐搅拌器，按每升反应液加入18g硅藻土，使硅藻土与反应液混合均匀10分钟以上边搅拌边过滤，在过滤过程中保持出液温度为-4～-6℃，过滤压力不超过0.2 Mpa，得压滤液上清；
（4）上述压滤液上清计量后，启动反应罐搅拌器和制冷循环，控制温度为-4～-6℃，进行深层过滤，过滤出液温度控制在-4～-6℃，过滤后用1mol/L的HCl调节pH为3.8～4.0，输入超滤透析罐中进行下道工序的脱醇、纯化；  
（5）开始对上述调节完毕pH值的过滤液进行超滤，浓缩至5%以上，用5倍体积的2～8℃的注射用水进行透析；将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175 s / m～0.205s / m ，调节好后用离子交换柱进行上柱层析纯化；层析完毕用1mol/L的HCl调节pH为3.8～4.0，开启超滤机浓缩至5%以上, 用5倍体积2～8℃注射用水进行透析，使乙醇含量≤0.025%，然后将蛋白液浓缩至6%以上，将麦芽糖或甘氨酸加入蛋白液内，用1mol/L的HCl调节pH值，使麦芽糖含量为10±1%或甘氨酸含量为2±0.2%，pH为3.8～4.4，蛋白含量为8±3％，得配制后的蛋白液；
（6）配制后的蛋白液经0.2μm除菌滤芯过滤，放置在孵放室，经24℃±1℃在孵放21天；孵放结束后用DV50滤芯除病毒过滤，并根据蛋白含量调整过滤液，过滤液蛋白含量符合生产要求；用0.2μm除菌滤芯过滤分装，分装后的制品送检、灯检，检验合格后包装、入库；
所述pH4.0缓冲液是由乙酸钠与冰乙酸组成的水溶液，每升水中添加244.9ml冰乙酸和65.6g乙酸钠；
以上百分比除特别说明，其余均为重量百分比。
CN2010105348287A 2010-11-08 2010-11-08 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 Active CN101972479B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105348287A CN101972479B (zh) 2010-11-08 2010-11-08 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105348287A CN101972479B (zh) 2010-11-08 2010-11-08 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101972479A CN101972479A (zh) 2011-02-16
CN101972479B true CN101972479B (zh) 2012-06-27

Family

ID=43572411

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010105348287A Active CN101972479B (zh) 2010-11-08 2010-11-08 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101972479B (zh)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102250240B (zh) * 2011-06-27 2013-07-31 山东泰邦生物制品有限公司 一种从血浆分离组分ⅰ+ⅲ中纯化人免疫球蛋白的方法
CN102603891B (zh) * 2012-03-26 2014-01-29 新疆德源生物工程有限公司 一种双重病毒灭活制备破伤风人免疫球蛋白的方法
CN102816237A (zh) * 2012-06-27 2012-12-12 新疆德源生物工程有限公司 抗d人免疫球蛋白的制备方法
CN103394076B (zh) * 2013-08-15 2015-01-21 江西博雅生物制药股份有限公司 一种人血白蛋白的制备工艺
CN103554253B (zh) * 2013-11-15 2016-04-20 同路生物制药股份有限公司 一种静注人免疫球蛋白的制备方法
CN103665100A (zh) * 2014-01-03 2014-03-26 华兰生物工程重庆有限公司 低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法
CN104479011B (zh) * 2015-01-05 2016-04-06 深圳市卫光生物制品股份有限公司 一种静注人免疫球蛋白的制备方法
CN104729907B (zh) * 2015-01-26 2017-10-17 上虞市创烨生物有限公司 一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法
CN105315366A (zh) * 2015-11-17 2016-02-10 上海洲跃生物科技有限公司 一种静注人免疫球蛋白（ph4）的制备方法
CN105254754A (zh) * 2015-11-28 2016-01-20 上海洲跃生物科技有限公司 一种静注人免疫球蛋白（ph4）的制备方法
CN107090026B (zh) * 2017-03-27 2021-06-25 武汉中原瑞德生物制品有限责任公司 利用硅藻土从血液制品中分离血浆蛋白的方法和系统
CN110128532A (zh) * 2019-05-09 2019-08-16 上海莱士血液制品股份有限公司 一种利用人血浆组份ii+iii生产制备ivig的方法
CN112375141B (zh) * 2020-11-30 2022-07-19 广西冠峰生物制品有限公司 一种皮下注射人免疫球蛋白的制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1470529A (zh) * 2002-07-22 2004-01-28 华兰生物工程股份有限公司 一种人血白蛋白的生产方法
CN101333245B (zh) * 2007-06-26 2011-10-05 湖南紫光古汉南岳制药有限公司 一种人血白蛋白的分离方法
CN100546651C (zh) * 2007-11-20 2009-10-07 哈尔滨世亨生物工程药业股份有限公司 静脉注射人乙型肝炎免疫球蛋白制备方法
CN101249265B (zh) * 2008-04-11 2010-10-27 三九集团湛江开发区双林药业有限公司 静脉注射用人乙肝免疫球蛋白及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN101972479A (zh) 2011-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101972479B (zh) 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺
CN101455357B (zh) 用超滤结合喷雾干燥制备大豆渣水溶性膳食纤维的方法
CN103554253B (zh) 一种静注人免疫球蛋白的制备方法
CN102584934B (zh) 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺
CN101974589B (zh) 一种酶解和膜分离制备免疫活性大豆肽的方法
CN103772523B (zh) 一种膜分离纯化技术制备茯苓多糖提取物新工艺
CN103333240B (zh) 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法
CN102161702B (zh) 人血白蛋白的生产方法
CN103394076A (zh) 一种人血白蛋白的制备工艺
CN101863783A (zh) 从谷氨酰氨脱羧酶酶解液中分离纯化γ-氨基丁酸的方法
CN110028533A (zh) 一种从微生物发酵液中精制氨基葡萄糖盐酸盐的方法及应用
CN108624495A (zh) 一种制备降高尿酸的葵花盘功能活性肽的方法
CN102191306A (zh) 海蜇降压肽的酶法制备方法
CN102178952A (zh) 一种层析法提取破伤风人免疫球蛋白的方法
CN105348122B (zh) 一种l‑丙氨酸末道母液的纯化方法
CN102552906B (zh) 静注人免疫球蛋白的生产工艺
CN105017360A (zh) 一种维生素b12的制备方法
JP5908496B2 (ja) トランスジェニックイネの子実からヒト血清アルブミンを抽出する方法
CN112048024A (zh) 一种灵芝提取物及其制备方法和应用
CN105254754A (zh) 一种静注人免疫球蛋白（ph4）的制备方法
CN112521487A (zh) 一种改进的人血白蛋白生产工艺
CN108822164A (zh) 高质量单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备工艺
CN105601735B (zh) 一种静注巨细胞人免疫球蛋白及其制备方法
CN101392280B (zh) 一种制备多糖生物絮凝剂的酶学方法
CN104001172A (zh) 一种静脉注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制备工艺

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 344000 Jiangxi city of Fuzhou province high tech Industrial Park Hui Road No. 333

Patentee after: Boya biopharmaceutical group Limited by Share Ltd

Address before: 344000 No. 161 Gan Dong Avenue, Fuzhou, Jiangxi

Patentee before: Jiangxi Boya Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.

CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 344000 No. 333, Huiquan Road, Fuzhou high tech Industrial Development Zone, Fuzhou City, Jiangxi Province

Patentee after: China Resources Boya biopharmaceutical Group Co.,Ltd.

Address before: 344000 No. 333 Huiquan Road, Fuzhou High-tech Industrial Park, Jiangxi Province

Patentee before: BOYA BIO-PHARMACEUTICAL GROUP CO.,LTD.