CN103816152B

CN103816152B - 小檗碱类化合物的用途和制备方法

Info

Publication number: CN103816152B
Application number: CN201210468652.9A
Authority: CN
Inventors: 梁鑫淼; 王超然; 张秀莉; 张岩; 王志伟; 奥利维尔·希维利; 柯燕雄; 王藜恩
Original assignee: Dalian Institute of Chemical Physics of CAS; University of California Irvine
Current assignee: Dalian Institute of Chemical Physics of CAS; University of California Irvine
Priority date: 2012-11-19
Filing date: 2012-11-19
Publication date: 2016-08-10
Anticipated expiration: 2032-11-19
Also published as: CN103816152A

Abstract

本发明提供了具有通式(I)结构的化合物或其药用盐、水合物或溶剂化物在制备用于治疗与多巴胺受体相关的神经系统疾病药物中的用途，以及具有通式(I)结构的化合物或其药用盐、水合物或溶剂化物的制备方法。所述化合物具有一定的μ阿片受体激动，以及多巴胺D2受体阻断等多重药理作用，并且具有良好的理化性质和口服生物利用度，整体动物实验表明，该类化合物具有显著而长效的镇痛镇静活性，可用于疼痛及其他精神疾病的治疗。

Description

小檗碱类化合物的用途和制备方法

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，更具体而言，涉及一类季铵型小檗碱衍生物在制备用于治疗神经系统疾病药物中的用途和它们的制备方法。

背景技术

疼痛是许多疾病的症状，是机体受到不良刺激或损害的一种反应，可使机体免受损害。但剧烈的疼痛如心肌梗死、癌症晚期及外伤等，不仅使病人痛苦，还引起生理功能严重紊乱，甚至发生休克和死亡。故必须合理应用止疼药减少伤害，提高病人的生活质量。

目前临床上应用的镇痛药主要可分为麻醉性镇痛药(阿片类镇痛药)和非麻醉性镇痛药(解热类镇痛药)两类。前者作用较强但有成瘾性、耐药性，呼吸抑制，恶心，便秘等一系列不良反应，特别是可能的阿片滥用和药物依赖性的产生更限制了这类药物的使用。后者虽然副作用较少，但常常只表现出很有限的镇痛效果。从总体上看，目前这些已知镇痛药均还不够理想，因此，开发新一代具有良好镇痛活性而又无成瘾性的镇痛药物具有重要价值。

延胡索为罂粟科紫堇植物延胡索的干燥块茎，具有活血、利气、止痛的功效，常用于治疗胸胁，脘腹疼痛，经闭痛经，产后瘀阻，跌扑肿痛等症，是一味药用历史悠久的著名镇痛中药。上世纪五六十年代，金国章等人对延胡索的神经药理学进行了系统的研究，发现延胡索中具有镇痛活性的一系列叔胺型生物碱，包括延胡索甲素，乙素，丙素，丑素等。其中尤以左旋延胡索乙素(1-THP)镇痛作用最强，被认为是延胡索镇痛作用的主要有效成分，其镇痛活性较哌替啶弱，但较解热镇痛药强，特别对慢性持续性钝痛效果良好。此后，1-THP又被发现具有明显的镇静作用，具有治疗精神分裂等神经系统疾病的潜力。1-THP的镇痛作用与阿片受体及前列腺素系统无关，其作用机制与麻醉性镇痛药和解热镇痛药都有很大不同。1977年，1-THP作为镇痛助眠类新药进入中国药典，主要用于胃肠及肝胆系统等内科疾病引起的钝痛、头痛、月经痛和分娩痛等，其毒性低、安全性大、且无成瘾性，成为新中国成立以来，应用现代科学技术，研究成功的第一个神经系统药物，也是科学整理中药取得成功的一个范例。但直到上世纪八十年代末，金国章等人才证明了1-THP的镇痛镇静作用与其对多巴胺D2受体的阻滞活性相关，其阻滞作用有两个靶部位，在伏隔核(Nac)靶区阻滞突触后D2受体，抑制多巴胺转运体(DAT)的功效，而在下丘脑弓状核(Arc)靶区阻滞D2受体则则能增强中脑导水管周围灰质(PAG)的内阿片肽(END)功能。由于Nac的多巴胺受体是阿片类、可卡因类、苯丙胺三类毒品成瘾性的共同靶区，1-THP的多巴胺D2受体阻滞作用还可以用于毒品成瘾防戒断治疗，近年来，1-THP用于防治三类毒品的实践已在国内外基础和临床研究中取得了一些可喜的成果，显示出良好的潜力。

除了叔胺型小檗碱，延胡索中还含有众多季铵型的小檗碱类化合物，如去氢紫堇碱，巴马汀，小檗碱，药根碱等，这些化合物在抗胃溃疡，抗菌，降血糖，抗肿瘤等活性方面有众多报道，但截至目前，尚未有季铵类小檗碱具有镇痛活性的报道。

在我们对延胡索镇痛活性的多模型系统筛选中发现，某些季铵型小檗碱具有多巴胺受体D2阻滞活性，其中的去氢紫堇球碱(DHCB)还兼有较弱的阿片受体活性，动物实验表明，其镇痛镇静活性强于1-THP，且作用持续时间和耐药性优于吗啡，具有较好的镇痛应用前景。此外，由于其与1-THP类似的多巴胺受体活性，可以预见其在其他与多巴胺受体系统相关的神经系统疾病，如抑郁症，毒品成瘾等，也有较好的应用前景。

发明内容：

本发明提供了一种具有通式(I)结构的化合物或其药用盐、水合物或溶剂化物：

其中，R₁、R₂各自独立地为H、C₁-C₆直链或支链烷基、C₁-C₆卤代直链或支链烷基、C₁-C₆酰基、芳基，或R₁和R₂一起连接形成-CH₂-；

R₃、R₄各自独立地为H、C₁-C₆直链或支链烷基、C₁-C₆卤代直链或支链烷基、C₁-C₆酰基、芳基，或R₃和R₄一起连接形成-CH₂-；

R₅为H、C₁-C₆直链或支链烷基、C₁-C₆卤代直链或支链烷基、C₁-C₆酰基或芳基；

X^-是选自卤素离子和羧酸根的阴离子，

在制备用于治疗与多巴胺受体相关的神经系统疾病药物中的用途。

在本发明中，所述与多巴胺受体相关的神经系统疾病是疼痛或抑郁。

在本发明的一个优选实施方案中，R₁、R₂各自独立地为H、C₁-C₆直链或支链烷基或R₁和R₂一起连接形成-CH₂-；R₃、R₄各自独立地为H或C₁-C₆直链或支链烷基；R₅为H或C₁-C₆直链或支链烷基；X^-是选自氯离子和羧酸根的阴离子。

优选地，本发明的小檗碱衍生物为下表中1～20所示的化合物：

本发明还涉及一种制备具有通式(I)结构的化合物或其药用盐、水合物或溶剂化物的方法，

式I

包括将式II化合物中2、3位的一个羟基进行保护，引入保护基R₆或R₇，然后使另一羟基与卤代烃，磺酸酯，酰氯、酸酐或磺酰氯反应，引入R₁或R₂，脱保护后得到单羟基的化合物，使该羟基与卤代烃，磺酸酯，酰氯、酸酐或磺酰氯反应，引入另外的R₁或R₂，得到具有通式(I)结构的化合物，其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅和X^-如权利要求1所定义，R₆、R₇为酚羟基保护基团。

在本发明的方法中，R₆为甲氧基甲基(MOM)或苄氧基甲基(BnOCH2)。R₇为选自三甲基硅(TMS)，三乙基硅(TES)，叔丁基二苯基硅(TBDPS)，叔丁基二甲基硅(TBDMS)，二异丙基硅(DIPS)，二苯基硅(DPS)和1，1，3，3，-四异丙基二硅氧基(TIPDS)的硅烷保护基。

本发明的小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐既可从延胡索，黄莲，黄柏等富含小檗碱类化合物的植物中提取分离得到，也可以用廉价的天然或合成的小檗碱为原料，通过如下反应半合成得到：

其中，从原料1到关键中间体6的合成，在多种文献中已有类似报道，可以由多种反应路线实现，本发明为更好地说明相关技术，列举了如上图所示的一种较为简单的实现方式，但并不对此提出权利保护要求，也不限制其他方式在本专利中的应用。

在上述路线中，将盐酸或硫酸小檗碱溶于甲醇中，碱性环境下，经硼氢化钠或硼氢化钾还原得到二氢小檗碱；该化合物再与各种醛或卤代烃或酰氯，在酸性乙醇中加热反应生成对应的13位烷基或芳香基或酰基取代的小檗碱，即R₅分别为H、C₁-C₆直链或支链烷基、C₁-C₆卤代直链或支链烷基、C₁-C₆酰基或芳基的小檗碱衍生物；对该类化合物进行高温真空裂解，使9号位和10号位的甲氧基断裂形成羟基，在酸受体的存在下与酰氯、酸酐、磺酰氯或磺酰酐试剂反应，可得到R₃，R₄位为对应的烷基，酰基或芳香基的衍生物；进一步的，在60％硫酸中，经间苯三酚催化，对2，3位的半缩醛进行水解，形成双羟基的小檗碱衍生物，即为本发明中用到的关键中间体6。

本发明的目的之一即是提出一种由中间体6通过分别使用一定的保护基团，对化合物6上的双羟基进行选择性单保护，并将剩余羟基与卤代烃，磺酸酯，酰氯、酸酐、磺酰氯等试剂反应，经脱保护，得到相应R₁或R₂取代的化合物7或8，又可进一步与上述试剂反应得到9的制备方法。

有益效果：

本发明从植物中提取分离得到的具有镇痛活性的季铵型小檗碱类化合物出发，设计并合成了一系列小檗碱衍生物，能作用于阿片受体和多巴胺受体，整体动物实验表明，该类化合物具有显著且长效的镇痛作用，同时具有镇静作用。可用于治疗疼痛或其他与多巴胺受体活性相关的神经系统疾病。本发明化合物合成简单，易于制备，且合成原料丰富。

附图说明：

图1显示本发明化合物对μ阿片受体的激动作用；

图2显示本发明化合物对多巴胺D2受体的拮抗作用；

图3显示小檗碱衍生物12(即DHCB)对阿片受体及5种多巴胺受体的作用量效曲线；

图4显示小檗碱衍生物12(即DHCB)在小鼠热辐射甩尾实验中镇痛作用持续时间；

图5显示小檗碱衍生物12(即DHCB)在小鼠福尔马林测痛实验中的镇痛效果；

图6显示小檗碱衍生物12(即DHCB)在耐药性实验中的表现。

表1显示小檗碱衍生物12(即DHCB)和左旋延胡索乙素(1-THP)的体外活性比较。

表2显示小檗碱衍生物12(即DHCB)在小鼠热辐射甩尾实验中镇痛效果。

具体实施例

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不是对本发明的任何限制。下述制备例中，¹H-NMR用Varian Mercury AMX 600MHz型核磁共振仪测定；化学位移用δ(ppm)表示；分离所用反相制备柱为C18HCE(20×250mm，10um)，购自浙江华谱新创科技有限公司，所使用的流动相体系均为乙腈和0.1％的甲酸水。

制备实施例：

化合物2的制备：

盐酸小檗碱5g溶于400mL甲醇，加5g无水碳酸钾，滴加6ml 5％氢氧化钠溶液(含0.4g硼氢化钠)，室温下搅拌反应一小时后，过滤出沉淀，依次用30％乙醇，80％乙醇洗涤，置甲醇中重结晶得到二氢小檗碱(3.5g，76％)。将二氢小檗碱溶于100mL80％的乙醇和冰醋酸混合液，加甲醛水溶液40ml，85～95℃下回流反应4～5小时，旋蒸除去有机溶剂，残余物中加适量浓盐酸，室温下搅拌一小时，过滤出固体，并用少量水和甲醇洗涤，甲醇中重结晶得到化合物2(3.6g，90％)

化合物2，C₂₁H₂₀NO₄Cl，MW：385.5黄色晶体，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.92(1H，s，H-8)，8.21(1H，d，J＝9.6Hz，H-12)，8.17(1H，d，J＝9.6Hz，H-11)，7.47(1H，s，H-1)，7.15(1H，s，H-4)，6.18(2H，s，-OCH₂O-)，4.84(2H，t，H-6)，4.09(3H，s，-OCH3)，4.08(3H，s，-OCH3)，3.15(2H，t，H-5)，2.92(3H，s，-CH3)。

化合物3的制备：

盐酸小檗碱(1.50g，4.0mmol)，置100ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物3(0.92g，62％)

化合物3，C₁₉H₁₅NO₄COOH，MW：367.35，棕红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.06(1H，s，H-8)，8.60(1H，s，H-13)，8.18(1H，d，J＝9.6Hz，H-12)，8.10(1H，d，J＝9.6Hz，H-11)，7.47(1H，s，H-1)，6.87(1H，s，H-4)，6.10(2H，s，-OCH₂O-)，4.84(2H，t，H-6)，4.63(3H，s，OMe-10)，3.15(2H，t，H-5)。

化合物4的制备：

化合物2(1.50g，3.9mmol)置100ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物4(0.73g，68％)。

化合物4，C₂₀H₁₇NO₄COOH，MW：381.38，棕红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.26(1H，s，H-8)，8.14(1H，d，J＝9.6Hz，H-12)，8.06(1H，d，J＝9.6Hz，H-11)，7.40(1H，s，H-1)，6.82(1H，s，H-4)，6.07(2H，s，-OCH₂O-)，4.84(2H，t，H-6)，4.63(3H，s，OMe-10)，3.15(2H，t，H-5)，2.42(3H，s，-CH3)。

化合物5的制备：

100ml 60％硫酸(v/v)中，逐步加入5g间苯三酚，搅拌溶解成无色溶液，加入盐酸小檗碱(5.0g，13.4mmol)，90～95℃油浴下反应15～20min后，倒入100ml浓卤水中，搅拌下凉至室温，过滤出沉淀，用甲醇重结晶两次，得到化合物5(2.2g，45％)

化合物5，C₁₉H₁₈NO₄Cl，MW：359.8，黄色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.67(1H，s，H-8)，8.62(1H，s，H-13)，8.07(1H，d，J＝9Hz，H-12)，7.95(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.43(1H，s，H-1)，6.59(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.06(3H，s，-OCH3)，4.08(3H，s，-OCH3)，3.04(2H，t，H-5)。

化合物6的制备：

100ml 60％硫酸(v/v)中，逐步加入5g间苯三酚，搅拌溶解成无色溶液，加入化合物2(5.0g，13.0mmol)，90～95℃油浴下反应15～20min后，倒入100ml浓卤水中，搅拌下凉至室温，过滤出沉淀，用甲醇重结晶两次，得到化合物6(1.8g，37％)

化合物6，C₂₀H₂₀NO₄Cl，MW：373.5，黄色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.57(1H，s，H-8)，8.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-12)，7.92(1H，d，J＝9.0Hz，H-11)，6.91(1H，s，H-1)，6.24(1H，s，H-4)，4.65(2H，t，H-6)，4.01(3H，s，-OCH3)，4.00(3H，s，-OCH3)，2.83(2H，t，H-5)，2.80(3H，s，-CH3)。

化合物7的制备：

化合物5(100mg，0.28mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物7(52mg，54％)

化合物7，C₁₉H₁₅NO₄COOH，MW：367.35，棕红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.67(1H，s，H-8)，8.62(1H，s，H-13)，8.07(1H，d，J＝9Hz，H-12)，7.95(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.43(1H，s，H-1)，6.59(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.06(3H，s，-OCH3)，3.04(2H，t，H-5)。

化合物8的制备：

化合物6(100mg，0.27mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁8反相制备液相色谱纯化，得到化合物7(40mg，41％)

化合物8，C₂₀H₁₇NO₄COOH，MW：381.35，棕红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.57(1H，s，H-8)，8.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-12)，7.92(1H，d，J＝9.0Hz，H-11)，6.91(1H，s，H-1)，6.24(1H，s，H-4)，4.65(2H，t，H-6)，4.01(3H，s，-OCH3)，2.83(2H，t，H-5)，2.80(3H，s，-CH3)。

化合物9的制备：

化合物5(3g，8.3mmol)与3g无水碳酸钾混合，置500ml三口瓶中，加300ml干燥DMF搅拌溶解，置冰浴并通氮气保护，分批滴加2.7ml叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSC1，，2.85g，10.4mmol)，完毕后继续搅拌反应10min，加入对甲基苯磺酸甲酯(1.90g，10.2mmol)和80％NaH(0.3g)，40℃温水中反应2小时，反应液经反相制备色谱纯化后，减压浓缩，得到化合物11的甲酸盐(2.05g，64％)。

化合物9，C₂₀H₂₀NO₄COOH，MW：383.4，黄色晶体，易溶于甲醇

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.82(1H，s，H-8)，8.75(1H，s，H-13)，8.13(1H，d，J＝9Hz，H-12)，8.00(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.57(1H，s，H-1)，7.00(1H，s，H-4)，4.89(2H，t，H-6)，4.06(3H，s，-OCH3)，4.03(3H，s，-OCH3)，3.85(3H，s，-OCH3)，3.14(2H，t，H-5)。

化合物10的制备：

化合物6(3g，8.3mmol)与3g无水碳酸钾混合，置500ml三口瓶中，加300ml干燥DMF搅拌溶解，置冰浴并通氮气保护，分批滴加2.7ml叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSC1，，2.85g，10.4mmol)，完毕后继续搅拌反应10min，加入对甲基苯磺酸甲酯(1.90g，10.2mmol)和80％NaH(0.3g)，40℃温水中反应2小时，反应液经反相制备色谱纯化后，减压浓缩，得到化合物11(2.17g，68％)。

化合物10，C₂₁H₂₂NO₄COOH，MW：397.4，黄色晶体，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.86(1H，s，H-8)，8.20(1H，d，J＝9.2Hz，H-12)，8.16(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.36(1H，s，H-1)，6.92(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.，10(3H，s，-OCH3)，4.09(3H，s，-OCH3)，3.87(3H，s，-OCH3)，3.07(2H，t，H-5)，，2.98(3H，s，-CH3)。

化合物11的制备：

化合物5(3g，8.3mmol)与3g无水碳酸钾混合，置500ml三口瓶中，加300ml干燥DMF搅拌溶解，置冰浴并通氮气保护，分批滴加0.8ml氯甲醚(0.85g，10.5mmol)，完毕后继续搅拌反应30min，加入对甲基苯磺酸甲酯(1.90g，10.2mmol)和80％NaH(0.3g)，40℃温水中反应2小时，反应液经反相制备色谱纯化后，减压浓缩，得到化合物11(1.63g，51％)。

化合物11，C₂₀H₂₀NO₄COOH，MW：383.4，黄色晶体，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.84(1H，s，H-8)，8.77(1H，s，H-13)，8.15(1H，d，J＝9.0Hz，H-12)，8.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-11)，7.56(1H，s，H-1)，6.92(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.，10(3H，s，-OCH3)，4.09(3H，s，-OCH3)，3.87(3H，s，-OCH3)，3.07(2H，t，H-5)。

化合物12的制备：

化合物6(3g，8.0mmol)与3g无水碳酸钾混合，置500ml三口瓶中，加300ml干燥DMF搅拌溶解，置冰浴并通氮气保护，分批滴加0.8ml氯甲醚(0.85g，10.5mmol)，完毕后继续搅拌反应30min，加入对甲基苯磺酸甲酯(1.90g，10mmol)和80％NaH(0.3g)，40℃温水中反应2小时，反应液经反相制备色谱纯化后，减压浓缩，得到化合物12(1.75g，55％)。

化合物12，C₂₁H₂₂NO₄COOH，MW：397.4，黄色晶体，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.86(1H，s，H-8)，8.20(1H，d，J＝9.2Hz，H-12)，8.16(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.36(1H，s，H-1)，6.92(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.10(3H，s，-OCH3)，4.09(3H，s，-OCH3)，3.87(3H，s，-OCH3)，3.07(2H，t，H-5)，2.98(3H，s，-CH3)。

化合物13的制备：

化合物9(100mg，0.26mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物13(45mg，47％)

化合物13，C₁₉H₁₈NO₄COOH，MW：369.4，棕红色粉末，易溶于甲醇

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.82(1H，s，H-8)，8.75(1H，s，H-13)，8.13(1H，d，J＝9Hz，H-12)，8.00(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.57(1H，s，H-1)，7.00(1H，s，H-4)，4.89(2H，t，H-6)，4.06(3H，s，-OCH3)，3.85(3H，s，-OCH3)，3.14(2H，t，H-5)。

化合物14的制备：

化合物10(100mg，0.25mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物13(35mg，36％)

化合物14，C₂₀H₂₀NO₄COOH，MW：383.4，棕红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.86(1H，s，H-8)，8.20(1H，d，J＝9.2Hz，H-12)，8.16(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.36(1H，s，H-1)，6.92(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.，10(3H，s，-OCH3)，3.87(3H，s，-OCH3)，3.07(2H，t，H-5)，，2.98(3H，s，-CH3)。

化合物15的制备：

化合物11(100mg，0.26mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物13(55mg，57％)

化合物15，C₁₉H₁₈NO₄COOH，MW：369.4，红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.84(1H，s，H-8)，8.77(1H，s，H-13)，8.15(1H，d，J＝9.0Hz，H-12)，8.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-11)，7.56(1H，s，H-1)，6.92(1H，s，H-4)，4.82(2H，t，H-6)，4.，10(3H，s，-OCH3)，3.87(3H，s，-OCH3)，3.07(2H，t，H-5)。

化合物16的制备：

化合物12(100mg，0.26mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物13(53mg，55％)

化合物16，C₂₀H₂₀NO₄COOH，MW：383.4，红色粉末，易溶于甲醇。

化合物17的制备：

化合物5(1.0g，2.77mmol)，于100ml干燥DMF中搅拌溶解，加入无水碳酸钾(1g)和80％NaH(0.3g)，40℃温水中反应2小时，反应液经反相制备色谱纯化后，减压浓缩，得到化合物17的甲酸盐(0.8g，72％)。

化合物17，C₂₁H₂₂NO₄COOH，MW：397.4，黄色晶体，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.67(1H，s，H-8)，8.82(1H，s，H-13)，8.07(1H，d，J＝9Hz，H-12)，7.85(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.45(1H，s，H-1)，6.69(1H，s，H-4)，4.92(2H，t，H-6)，4.24(3H，s，-OCH3)，4.08(3H，s，-OCH3)，4.03(3H，s，-OCH3)，3.97(3H，s，-OCH3)，3.24(2H，t，H-5)。

化合物18的制备：

化合物6(1.0g，2.67mmol)，于100ml干燥DMF中搅拌溶解，加入无水碳酸钾(1g)和80％NaH(0.3g)，40℃温水中反应2小时，反应液经反相制备色谱纯化后，减压浓缩，得到化合物18的甲酸盐(0.7g，66％)。

化合物18，C₂₂H₂₄NO₄COOH，MW：411.4，黄色晶体，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.87(1H，s，H-8)，7.95(1H，d，J＝9Hz，H-12)，7.87(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.33(1H，s，H-1)，6.91(1H，s，H-4)，5.12(2H，t，H-6)，4.30(3H，s，-OCH3)，4.08(3H，s，-OCH3)，4.00(3H，s，-OCH3)，3.95(3H，s，-OCH3)，3.34(2H，t，H-5)。

化合物19的制备：

化合物17(100mg，0.25mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物13(43mg，44％)

化合物19，C₂₀H₂₀NO₄COOH，MW：383.4，红色粉末，易溶于甲醇。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.67(1H，s，H-8)，8.82(1H，s，H-13)，8.09(1H，d，J＝9Hz，H-12)，7.85(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.45(1H，s，H-1)，6.69(1H，s，H-4)，4.92(2H，t，H-6)，4.24(3H，s，-OCH3)，4.03(3H，s，-OCH3)，3.97(3H，s，-OCH3)，3.24(2H，t，H-5)。

化合物20的制备：

化合物18(100mg，0.25mmol)，置20ml圆底烧瓶中，以油泵保持反应体系真空度(20～30mmHg)，加热至200℃，反应20分钟，待温度下降至室温后，停止真空泵的运作。反应产物经C₁₈反相制备液相色谱纯化，得到化合物13(63mg，65％)

化合物20，C₂₁H₂₂NO₄COOH，MW：397.4，红色粉末，易溶于甲醇

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.87(1H，s，H-8)，7.95(1H，d，J＝9Hz，H-12)，7.87(1H，d，J＝9Hz，H-11)，7.33(1H，s，H-1)，6.91(1H，s，H-4)，5.12(2H，t，H-6)，4.30(3H，s，-OCH3)，4.00(3H，s，-OCH3)，3.95(3H，s，-OCH3)，3.34(2H，t，H-5)。

活性试验实施例：

活性实施例1：应用细胞受体模型，在体外初步评价本发明部分化合物对镇痛相关受体的作用。

实验方案：本研究所使用的表达μ阿片受体的细胞为稳定转染的人胚肾293T细胞(HEK293T)；所使用的多巴胺受体为瞬时转染的HEK293T。将本发明得到的部分小檗碱类衍生物加入到已表达对应受体的细胞中采用FLIPR(Fluorometric Imaging PlateReader；Molecular Devices Corp)进行功能筛选鉴定。具体为：以每孔80000个细胞接种于用poly-D-lysine涂层的96孔细胞培养板中，24小时后除去培养基并于每孔中加入100μl荧光染料溶液(2μM Fluo-4AM先溶解于pluronic acid，然后溶解于由1倍的Hank’s buffer与20mMHEPES组成的缓冲液中，pH 7.4)在37℃下恒温1小时，然后将细胞用缓冲液洗3次。将待测化合物用DMSO溶解后置于96孔板中，采用FLIPR进行自动加样与细胞培养板中孵育3分钟(激动剂检测，阿片受体)或10分钟(拮抗剂检测，多巴胺受体)后在520nm和488nm波长下进行荧光检测从而对细胞内的Ca²⁺浓度进行监测。如果测得的响应，比二甲基亚砜(DMSO)空白对照有提高(激动作用)或降低(拮抗作用)，并且两组数据在统计上存在显著性差异，则说明该化合物对相关受体有作用。

实验结果：图1，2分别显示了本发明的部分化合物在μ阿片受体和多巴胺受体模型上的作用效果，其中DMSO为空白对照，内吗啡肽(endomorphin-1)为μ阿片受体激动作用的阳性对照，延胡索乙素(THP)为多巴胺D2受体拮抗作用的阳性对照。从细胞水平上的筛选结果表明，本发明得到的部分化合物对μ阿片受体具有一定的激动作用(化合物12，16)，同时对多巴胺D2受体具有较好的拮抗作用(化合物7，8，10，12，14，16)。基于化合物12，即去氢紫堇球碱(DHCB)的体外活性较高(D2拮抗活性与延胡索乙素相当)，且是从延胡索中制备得到的首个具有该活性的化合物，我们选择了DHCB进行了进一步的活性评价和整体动物的药效学实验。

活性实施例2：去氢紫堇球碱(DHCB)对不同受体活性的量效曲线比较

实验方案同实施例1，只是在待测物添加时，先用缓冲液将待测物稀释到不同浓度，以检测不同剂量下的响应。以此方法检测了DHCB对μ-阿片受体和5种多巴胺受体的作用，结果如图3和表1所示。实验表明，DHCB不仅是μ-阿片受体的弱激动剂，同时还是多种巴胺受体(D1，D2，D3，D4，D5)的拮抗剂，该类受体不仅与疼痛相关，还与精神分裂，抑郁等多种精神疾病相关，提示该化合物在该方面同样具有一定的治疗应用价值。此外，μ-阿片受体的弱协同作用还能增强DHCB的镇痛作用。

表1.去氢紫堇球碱(DHCB)和左旋延胡索乙素(1-THP)的体外活性比较。

活性实施例3：

小鼠热辐射甩尾实验一(tail-flick assay)：评价本发明化合物在体内的镇痛效果。

采用CD-1小鼠(初始体重30-40g)，分成6组(溶剂组，吗啡组，延胡索乙素组，DHCB不同剂量组：5，10，20，40mg/kg)，每组9-11只。将鼠尾置于热辐射甩尾仪上，光束直射于鼠尾1/3处。首先测定各组小鼠的基础痛阈，其后分别给小鼠腹腔注射受试物，30min后再次测定小鼠痛阈。照射时间最长不超过22sec。测定结果统计于表2。实验结果表明DHCB在5，10，40mg/kg剂量下具有显著的剂量依赖的镇痛效果。在较低剂量(10mg/kg)下，DHCB的镇痛效果虽不如吗啡明显，但优于延胡索乙素。而在DHCB较高剂量(40mg/kg)下，其对热刺激的镇痛效果能接近低剂量吗啡。

表2：小鼠热辐射甩尾实验-镇痛效果

活性实施例4：

小鼠热辐射甩尾实验二(tail-flick assay)：评价本发明化合物在体内的镇痛作用持续时间。

采用CD-1小鼠(初始体重30-40g)，分成6组(溶剂组，吗啡组，DHCB不同剂量组：10，20，40mg)，每组9-11只。将鼠尾置于热辐射甩尾仪上，光束直射于鼠尾1/3处。首先测定各组小鼠的基础痛阈，其后分别给小鼠腹腔注射受试物，按时间点测定6小时内小鼠痛阈。照射时间最长不超过22sec。

实验结果，如图4所示，虽然开始时吗啡的作用效果较强，但两小时后，其镇痛效果迅速减弱，而DHCB在20和40mg/kg的剂量下直到4小时后才开始明显减弱，显示了更为持久的作用效果。

活性实施例5：小鼠福尔马林测痛实验评价本发明化合物在体内的镇痛效果。

采用CD-1小鼠(初始体重30-40g)，分成4组(溶剂组，吗啡组，DHCB不同剂量组：5，10mg/kg)，每组9-11只。将标记要注射福尔马林的小鼠后爪，放入笼中适应15-30min。给每只小鼠注射相应剂量的药物，15min后在标记爪足底侧皮下注射0.5％福尔马林溶液。小鼠很快出现舔咬注射足部的反应，连续观察50min，记录第I相(0-5min)和第II相(10-50min)内的小鼠舔足时间。如图5所示，实验结果表明，DHCB在5mg/kg和10mg/kg的剂量下在该镇痛模型的第I相具有显著的镇痛效果，DHCB在10mg/kg剂量下在第II相具有显著镇痛作用，说明DHCB对于急性和慢性炎性疼痛均有疗效。

活性实施例6：DHCB的耐药性实验

耐药性是很多常用镇痛类药物的缺陷，使其应用受到很大的局限性。本实验通过小鼠热辐射甩尾考察了DHCB的耐药性。本实验中连续7天给小鼠腹腔注射DHCB(10mg/kg)，隔天检测小鼠痛阈。如图6所示，结果表明，DHCB在7天中的镇痛效果没有发生改变，与之相比，吗啡的阵痛作用在第三天即开始明显降低。

Claims

1.一种具有下式结构的化合物：

X^-是选自卤素离子和羧酸根的阴离子，

在制备用于治疗疼痛的药物中的用途。

2.权利要求1所述的用途，其中疼痛的治疗是通过多巴胺D2受体的拮抗作用。