CN104292226B

CN104292226B - 帕利哌酮氨基酸类衍生物及其应用

Info

Publication number: CN104292226B
Application number: CN201310296582.8A
Authority: CN
Inventors: 张桂森; 陈寅; 孙家权; 徐祥清; 于民权; 刘欣; 刘笔锋
Original assignee: WUHAN JIAYU TECHNOLOGY Co Ltd; Nhwa Pharmaceutical Corp
Current assignee: WUHAN JIAYU TECHNOLOGY Co Ltd; Nhwa Pharmaceutical Corp
Priority date: 2013-07-16
Filing date: 2013-07-16
Publication date: 2016-12-28
Anticipated expiration: 2033-07-16
Also published as: WO2015007191A1; CN104292226A

Abstract

本发明属于药物化学领域，公开了帕利哌酮氨基酸类衍生物及其应用。经实验发现，该类化合物可应用于制备治疗神经精神类疾病药物方面。

Description

帕利哌酮氨基酸类衍生物及其应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及帕利哌酮氨基酸类衍生物及其应用。

背景技术

精神分裂症是所有精神疾病中最严重，危害最大的一种疾病，全球发病率约为1‐2%。精神分裂症患者终生患病率为0.7‐0.8%，与性别，种族，或社会界限没有明显相关性，同时死亡率比一般人群高出2‐3倍。最新研究显示，精神疾病的社会负担在中国疾病中排名居首，超过了心脑血管、呼吸系统及恶性肿瘤等疾患。

现有精神分裂药物主要有两大类：典型抗精神分裂药物和非典型抗精神分裂药物。典型抗精神分裂药物（如氯丙嗪和氟哌啶醇）阻断多巴胺D₂受体，对精神分裂症阳性症状具有良好疗效。但由于强烈阻断多巴胺受体，导致了锥体外系反应（EPS）、迟发性运动障碍以及泌乳素增加等不良反应^]，而且对精神分裂症阴性症状无效。

非典型抗精神分裂药物，是以氯氮平和利培酮为代表，不仅对多巴胺（D₂）受体有较强作用，同时对5‐羟色胺（5‐HT_2A）受体也有较强作用。与典型抗精神分裂药物相比这类药物有很大的优势：对精神分裂症阳性症状有良好疗效；锥体外系反应和迟发性运动障碍等副作用显著降低；部分非典型抗精神分裂药物对阴性症状和认知障碍有一定改善作用。然而，目前临床应用的非典型抗精神分裂药物都有不同程度的QT间期延长和高泌乳素等不良反应。因此，寻找新的既能有效地治愈精神分裂症而且副作用小的药物是非常重要。

γ‐氨基丁酸（GABA）是脑内最主要的抑制性神经递质,由脑内最主要的兴奋性神经递质谷氨酸在谷氨酸脱羧酶的催化下脱羧而成,生成的GABA与突触后膜的GABA受体结合,发挥生物学效应。1972年，Robert首先提出精神分裂症存在γ‐氨基丁酸系统的缺损。近年来的研究表明，精神分裂症患者前额皮质和海马中GABA能神经传递异常。研究认为，精神分裂症的多巴胺能神经元通路上，GABA的抑制作用减弱，可造成抑制性神经冲动不足，使多巴胺功能亢进，从而引起行为异常。而且，直接用低剂量GABA激动剂会抑制僵住症的行为，高剂量会加剧氟哌啶醇诱导的僵住症。还有研究表明GABA激动剂能抗惊厥和改善认知的作用。

这些研究结果可以看出γ‐氨基丁酸系统与精神分裂症间接相关。因为GABA 激动剂有亲水性基团（如羧酸和氨基），不容易通过血脑屏障，使用受到限制。然而，发现通过化学方法与脂肪氨基酸或缩氨酸结合，能使这些化合物大量通过血脑屏障。改善药物的副作用，扩大治疗范围。如在二期临床药物BL‐1020（奋乃静和GABA的结合化合物，WO03026563和J.Med.Chem.2008,51,2858‐2862）与原药奋乃静相比，不仅能降低EPS的发生率，而且因为GABA通过血脑屏障，起到改善认知障碍的作用。

帕利哌酮作为非典型抗精神分裂药物，对5‐HT₂受体具有高度亲和力，且大于对脑中多巴胺D₁和多巴胺D₂受体的亲和力。临床试验显示，帕利哌酮对治疗精神分裂症的阳性和阴性症状均有效。但是，同时帕利哌酮对组织胺受体H₁和肾上腺素能α₁受体同样有高亲和力，所以在应用中易导致体重增加、高泌乳素和体位性低血压的副作用。同时在治疗精神分裂的长期服药过程中，研究表明体重增加的副作用与组胺H₁受体密切相关。

因此，仍然需要有一种以改善治疗活性和减少副作用为特征的精神分裂症药物。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种新的具有活性的帕利哌酮氨基酸类衍生物。

本发明的另一目的是提供一种上述帕利哌酮氨基酸类衍生物在制备治疗神经精神类疾病药物方面的应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一方面，本发明涉及一种通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：，

其中：

R₁和R₂分别独立地选自氢、取代或未取代的C_1‐5烷基；R₃为氢，或者R₃与R₂相连，构成取代或未取代的C_4‐6环烷基。

其中，所述的R₁优选氢或甲基。

所述的未取代的C_1‐5烷基优选自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或异戊基，取代的C_1‐5烷基优选自C_1‐5卤代烷基或C_1‐5羟烷基。

所述的未取代的C_4‐6环烷基优选自环丁基、环戊基或环己基，进一步优选环戊基或环己基。

所述的R₂进一步优选氢，甲基，异丁基，异戊基，或者R₃与R₂相连，构成环戊基、环己基或环丁基，更进一步优选R₃与R₂相连，构成环戊基或环己基。

本发明所述的通式（I）的化合物或其药学上可接受的盐最优选自以下任意一种化合物或药学上可接受的盐：

（1）3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐4‐氨基丁酸酯；

（2）3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐3‐（胺甲基）‐5‐甲基己酸酯；

（3）3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐4‐氨基‐2‐甲基丁酸酯；

（4）3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐ 吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐2‐（1‐（胺甲基）环己基）‐乙酸酯。

本发明化合物的药学上可接受的盐包括但不限于：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、葡糖酸盐、糖二酸盐、苯甲酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。优选地，本发明化合物的药学上可接受的盐是盐酸盐。

另一方面，本发明涉及一种药物组合物，包含治疗有效量的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐，以及药物学可接受的载体和/或赋形剂。

再一方面，本发明涉及本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐或本发明所述的以式（I）所示化合物和/或其药学上可接受的盐为主要有效成分的组合物在制备用于预防或治疗神经精神类疾病的药物中的应用。

又一方面，本发明涉及治疗预防或治疗神经精神类疾病的方法，其包括对患有神经精神类疾病的对象施用治疗有效量的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐。

除非另有指明，否则在整个此说明书中以下术语将具有以下含义。

本文使用的术语“C_1‐5烷基”是指具有1、2、3、4或5个碳原子的直链或支链的、饱和的一价烃基。C_1‐5烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2‐甲基丁基、1‐甲基丁基、1‐乙基丙基、1,2‐二甲基丙基、新戊基或1,1‐二甲基丙基。优选地，C_1‐5烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或异戊基。

进一步地，本发明通式(I)的化合物中的C_1‐5烷基可选地被一个或多个选自卤素和羟基的基团相同或不同地取代，例如C_1‐5卤代烷基和C_1‐5羟烷基。优选地，C_1‐5卤代烷基是三氟甲基，且C_1‐5羟烷基是羟甲基。

进一步地，本发明通式(I)的化合物中的C_4‐6环烷基为环戊基、环己基或环丁基

本文使用的术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物的相对无毒的、无机酸或有机酸加成盐。例如，参见S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts,”J.Pharm.Sci.1977,66,1‐19。

本类化合物的通用合成方法是先合成氨基丁酸的(BOC)₂O保护，然后与帕利哌酮的羟基相连，最后脱掉BOC保护得到产物。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可在全身和/或局部起作用。根据需要，本发明的化合物或其药学上可接受的盐可通过适合的方法施用，其包括但不限于口服、注射、胃肠外施用等。

根据不用施用途径，可将本发明的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体和/或赋形剂一起配制为所需的施用形式，包括但不限于片剂、散剂、胶囊剂、溶液、混悬液、栓剂、贴剂、颗粒剂、膏剂、洗液等。这可以通过现有技术的方法完成。例如，可以通过将本发明的化合物或其药学上可接受的盐与药学上适合的辅料混合来完成。可用于本发明的药学上适合的辅料的实例包括但不限于溶剂、乳化剂、分散剂、润湿剂、粘结剂、稳定剂、着色剂和气味和/或味道掩蔽剂。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐还可与其它已知的治疗神经精神类疾病的药物组合使用。本领域已知的治疗神经精神类疾病的药物包括例如利培酮、阿立哌唑、氨磺必利、氟西汀、阿普唑仑、咪达唑仑、西酞普兰,、地西泮等。

因此，另一方面，本发明还涉及一种药物组合物，其包括治疗有效量的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐、和可选地其它已知的治疗神经精神类疾病的药物、以及药学上适合的辅料。

在一个实施方式中，本发明的药物组合物包括治疗有效量的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐以及药学上适合的辅料。

本发明的药物组合物每单位剂量可包含约0.01到1000mg，优选1.0到300mg，更优选10到150mg，最优选100mg的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐。或者，基于本发明的药物组合物的总重量，本发明的药物组合物应包含至少0.5wt%，优选4wt%至70wt%，更优选10wt%到50wt%，最优选30wt%的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐。

本发明药物组合物中所含的本发明的化合物或其药学上可接受的盐的剂量取决于疾病或病症的类型和严重性，以及对象的特征，例如一般健康、年龄、性别、体重和药物耐受性。本领域技术人员能够根据这些或其它因素来确定适当的本发明的活性化合物剂量。通常所用的中枢神经系统药物的有效剂量是技术人员熟知的，其每日总剂量通常在约0.05mg到2000mg之间。

本发明的又一方面是提供一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗神经精神类疾病的药物中的应用。

本文使用的术语“治疗”包括克服、缓解、减轻、解除或改善疾病或病症。在某些情况下，术语“治疗”也包括“预防”。

本文使用的术语“神经精神类疾病”是指神经类疾病与精神类疾病的总称。示例性的神经精神类疾病包括但不限于精神障碍、焦虑症、人格障碍、抑郁症。优选地，本发明中的神经精神类疾病是精神分裂症。

本发明的再一方面是提供一种使用有效量的本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐来预防或治疗神经精神类疾病的方法，其包括对患有神经精神类疾病的对象施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

本文使用的术语“对象”包括哺乳动物，优选人。

有益效果：

体外受体结合试验表明，本发明所涉及的衍生物对三种受体的亲和力（D₂,5‐HT_1A,和5‐HT_2A）与帕利哌酮相当，而对H₁和a₁的亲和力低，产生体重增加的副作用可能性较小。

动物试验结果显示，这类化合物既能明显改善MK‐801诱导的高活动性，又能有效改善阿扑吗啡诱导的攀爬症状，并且在有效剂量下不引起EPS。由于这些体外作用靶点和体内药理模型与多巴胺功能紊乱导致的神经系统疾病，特别是精神分裂症密切相关，因此本发明涉及的化合物具有治疗神经精神类疾病的作用，尤其对精神分裂症有治疗作用。

因此，将帕利哌酮与氨基酸相连形成酯类前药，具有潜在的与帕利哌酮类似的抗精神分裂症活性，且能降低帕利哌酮体重增加、泌乳素增高或体位性低血压等副作用，同时能改善认知障碍的症状。同时，帕利哌酮氨基酸衍生物与帕利哌酮相比，具有低的急性毒性和高的治疗指数。

附图说明

图1、化合物4，帕利哌酮在小鼠（每组10只）中连续给药28天的体重变化情况，其中P<0.05表示差异有统计学意义。

图2、化合物4，帕利哌酮在小鼠（每组10只）中连续给药28天的泌乳素的变化情况，其中P<0.05表示差异有统计学意义

具体实施方式

下面的实施例只是以说明为目的而不作为本发明的限制。

A、合成方面的实施例

实施例1、3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐4‐氨基丁酸酯盐酸盐

（1）取4‐氨基丁酸（10.3g，100mmol），加入到反应瓶中，加入50ml水，以及100ml丙酮，加入三乙胺（110mmol），在室温下搅拌至全部溶解，分批加入Boc酸酐(26.2g，120mmol),在室温下反应4h。停止反应，减压蒸去丙酮，用乙醚50ml×2萃取，弃掉有几层，将水层用10%稀盐酸调pH至4‐5，用乙酸乙酯200ml×3萃取，合并有几层，用无水硫酸镁干燥，过滤，将滤液旋干得无色油状物18.5g，收率91.1%。MS(ESI)m/z204.2([M+H]⁺).

（2）取第一步产物2.0g（10mmol），加入50ml二氯甲烷，在室温下加入帕利哌酮3.4g（9mmol），加入4‐二甲氨基吡啶（DMAP）0.3g，分批加入1,3‐二环己基碳二亚胺.DCC2.1g（11mmol），在室温下搅拌反应24h，停止搅拌，放置4h，过滤，将滤液旋干，加入50ml乙酸乙酯，静置1h，过滤，滤液用10%柠檬酸洗涤2次，再用饱和碳酸氢钠洗涤，有几层用无水硫酸镁干燥，过滤，旋干溶剂得淡黄色油状物4.9g，收率86.3%。MS(ESI)m/z612..3([M+H]⁺).

（3）取第二步产物2g，加入30ml乙酸乙酯溶解，加入10ml饱和乙酸乙酯盐酸气，在室温下搅拌反应4h，有白色固体析出，停止反应，旋干溶剂，加入乙醚，过滤得白色固体3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐4‐氨基丁酸酯盐酸盐1.8g，收率88.6%，结构式见表1，熔点：166‐167℃。¹HNMR(DMSO)δ11.19(s,1H),8.20‐8.25(m,1H),7.71‐7.76(m,1H),7.32‐7.35(m,1H),5.72(t,J=8Hz,2H),3.91‐3.95(m,1H),3.72‐3.75(m,3H),3.45‐3.49(m,4H),3.14‐3.18(m,4H),2.95‐3.01(m,1H),2.51‐2.58(m,4H),2.38‐2.41(m,2H),2.31(s,3H),2.23‐2.27(m,3H),1.89‐1.99(m,5H)。MS(ESI)m/z512.2([M+H]⁺).

实施例2、3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐3‐（胺甲基）‐5‐甲基‐己酸酯盐酸盐

用3‐氨甲基‐5‐甲基己酸代替4‐氨基丁酸，按实施例1的方法制备目标化合物2。

目标化合物2结构式见表1，熔点：185‐187℃。¹H NMR(DMSO)δ11.15(s,1H),8.19‐8.23(m,1H),7.69‐7.73(m,1H),7.30‐7.35(m,1H),5.68(t,J=8Hz,2H),3.95‐3.98(m,1H),3.71‐3.76(m,3H),3.45‐3.51(m,4H),3.11‐3.18(m,4H),2.92‐2.96(m,1H),2.51‐2.56(m,4H),2.51(s,2H),2.38‐2.40(m,2H),2.31(s,3H),2.23‐2.27(m,2H),1.72‐1.99(m,7H),1.02(d,J=6.6Hz,6H)。MS(ESI)m/z568.3([M+H]⁺).

实施例3、3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐4‐氨基‐2‐甲基丁酸酯盐酸盐

用4‐氨基‐2‐甲基丁酸代替4‐氨基丁酸，按实施例1的方法制备目标化合物3。

目标化合物3结构式见表1，熔点：188‐189℃。¹H NMR(DMSO)δ11.20(s,1H),8.17‐8.20(m,1H),7.70‐7.76(m,1H),7.29‐7.33(m,1H),5.70(t,J=8Hz,2H),3.89‐3.92(m,1H),3.72‐3.77(m,3H),3.45‐3.51(m,4H),3.14‐3.18(m,4H),2.95‐2.99(m,1H),2.51‐2.57(m,4H),2.38‐2.41(m,2H),2.99(s,3H),2.23‐2.27(m,3H),1.92‐1.99(m,5H),1.43(d,J=6Hz,2H)。MS(ESI)m/z526.3([M+H]⁺).

实施例4、3‐(2‐(4‐(6‐氟‐苯并异恶唑)‐3‐哌啶基)‐乙基)‐2‐甲基‐4‐氧‐6,7,8,9‐四氢‐4H‐ 吡啶并[1,2‐a]9‐嘧啶基‐2‐（1‐（胺甲基）环己基）‐乙酸酯盐酸盐

用1‐(氨甲基)环己烷乙酸代替4‐氨基丁酸，按实施例1的方法制备目标化合物4。

目标化合物4结构式见表1，熔点：196‐198℃。¹H NMR(DMSO)δ11.15(s,1H),8.21‐8.25(m,1H),7.73‐7.78(m,1H),7.33‐7.38(m,1H),5.75(t,J=8Hz,2H),3.90‐3.95(m,1H),3.72‐3.77(m,3H),3.45‐3.51(m,4H),3.14‐3.22(m,4H),2.95‐2.99(m,1H),2.56‐2.58(m,2H),2.51(s,2H),2.38‐2.41(m,2H),2.31(s,3H),2.23‐2.27(m,2H),1.92‐1.99(m,3H),1.38‐1.52(m,10H)。MS(ESI)m/z580.3([M+H]⁺).

表1实施例制备的优选化合物编号及其结构式

B、药理方面的实施例

实施例5

5‐HT_1A膜的制备

大鼠断头，冰上操作，迅速取脑皮层，加入3ml匀浆液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液，含0.1%的抗坏血酸、10um优降宁和4mM CaCl₂），匀浆，然后加入5ml缓冲液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液，含0.1%的抗坏血酸、10um优降宁和4mMCaCl₂），于37℃孵化10min，孵化完后试管用天平调整重量，在12000r，4℃离心20min，弃上清液，加入3ml B液，用旋涡混合器混匀，再加入5ml缓冲液，离心，重复三次离心，离心完毕，弃上清液，将沉淀于‐80℃储存备用。

受体结合实验材料：

同位素配基³H‐8‐OH‐DPAT（67.0Ci/mmol），购自PerkinElmer公司；5‐HT，购自RBI公司；GF/C玻璃纤维滤纸，购自Whatman公司；Tris进口分装2,5‐二苯基噁唑(PPO)、1,4‐双(5‐苯基‐2‐恶唑基)苯(POPOP)购自上海试剂一厂。Beckman LS‐6500型多功能液体闪烁计数仪。

实验方法：

（1）取5‐HT_1A受体膜，加入适量的匀浆液，用匀浆机分散均匀，呈50ml膜的混悬液，备用。

（2）各反应管分别加入膜制备物100μL，缓冲液100μL。

（3）总结合管（TB）加入100μL缓冲液，非特异性结合管（NB）加入5‐HT100μL（终浓度10^‐5M），各受试化合物特异性结合管（SB）加入100μL受试化合物（终浓度10^‐5M）；

（4）各反应管分别加入放射性配体³H‐8‐OH‐DPAT10μL（各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上）。

（5）将各反应管37℃温孵10min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的试验缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液（PPO2.5g，POPOP0.05g溶于500mL甲苯）并混匀；

（6）将闪烁瓶放入液闪计数仪计数

抑制率(I%)=(总结合管cpm—化合物cpm)/(总结合管cpm—非特异结合管cpm)×100%

化合物每次实验做两复管，进行两次单独实验。实验结果见表2

实施例6

5‐HT_2A膜的制备

大鼠断头，冰上操作，迅速取脑皮层，加入3ml缓冲液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液：取6.05gTris溶于1000ml双蒸水中，用浓HCl调PH为7.5）于4档3‐4s匀浆，匀浆4次，然后加入5ml缓冲液，于37℃孵化10min，孵化完后试管用天平调整重量，在12000r，4℃离心20min，弃上清液，加入3ml缓冲液，用旋涡混合器混匀，再加入5ml缓冲液，离心，（重复三次离心），离心完毕，弃上清液，将沉淀于‐80℃储存备用。

受体结合实验材料：

同位素配基[³H]‐Ketanserin（67.0Ci/mmol），购自PerkinElmer公司；Methysergide，购自RBI公司；GF/C玻璃纤维滤纸，购自Whatman公司；Tris进口分装；PPO、POPOP购自上海试剂一厂；脂溶性闪烁液。Beckman LS‐6500型多功能液体闪烁计数仪。

实验方法：

（1）先将制备好的5‐HT_2A膜用适量的缓冲液，用匀浆机分散均匀，将15只试管混入到100ml的容器中，加入适量的缓冲液呈50ml膜的混悬液，备用。

（2）各反应管分别加入膜制备物100μL，缓冲液100μL。

（3）总结合管（TB）加入100μL缓冲液，非特异性结合管（NB）加入Methysergide100μL（终浓度10^‐5M），各受试化合物特异性结合管（SB）加入100μL受试化合物（终浓度10^‐5M）；

（4）各反应管分别加入放射性配体³H‐Ketanserin10μL（各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上）。

（5）将各反应管37℃温孵15min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的试验缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液并混匀；

（6）将闪烁瓶放入液闪计数仪计数

实施例7

D₂膜的制备

大鼠断头，冰上操作，迅速取脑纹状体，加入3ml缓冲液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液,含NaCl120mM、KCl5mM、MgCl21mM、CaCl21mM）,于4档3‐4s匀浆，匀浆4次，然后加入5ml缓冲液，将匀浆完的试管用天平调整重量，在12000r，4℃离心20min，弃上清液，加入3mlB液，用旋涡混合器混匀，再加入5ml缓冲液，离心，重复三次离心，离心完毕，弃上清液，将沉淀于‐80℃储存备用。

受体结合实验材料：

同位素配基³H‐Spiperone（67.0Ci/mmol），购自PerkinElmer公司；Butaclamol，购自RBI公司；GF/C玻璃纤维滤纸，购自Whatman公司；Tris进口分装；PPO、POPOP购自上海试剂一厂；脂溶性闪烁液。Beckman LS‐6500型多功能液体闪烁计数仪。

实验方法：

（1）先将制备好的D₂膜用适量的缓冲液，用匀浆机分散均匀，将15只试管混入到100ml的容器中，加入适量的缓冲液呈50ml膜的混悬液，备用。

（2）各反应管分别加入膜制备物100μL，缓冲液100μL。

（3）总结合管（TB）加入100μL缓冲液，非特异性结合管（NB）加入100μLButaclamol（终浓度10^‐5M），各受试化合物特异性结合管（SB）加入100μL受试化合物（终浓度10^‐5M）；

（4）各反应管分别加入放射性配体³H‐Spiperone10μL（各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上）。

（5）将各反应管37℃温孵20min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的试验缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液并混匀；

（6）将闪烁瓶放入液闪计数仪计数

化合物每次实验做两复管，进行两次单独实验。实验结果见表2。

实施例8

α₁去甲肾上腺素受体膜的制备

大鼠断头，冰上操作，迅速取脑皮层，加入0.05MTris-HCl缓冲液（PH7.7）用旋涡混合器混匀，在48000g，4℃离心15min，弃上清液，取沉淀，再加入0.05M的Tris-HCl缓冲液（PH7.7）洗涤，重复三次离心，离心完毕，弃上清液，将沉淀于-80℃储存备用。

实验方法:

第一步：先将制备好的膜用适量的缓冲液0.05MTris‐HCl（PH7.7），用匀浆机分散均匀，将15只试管混入到100ml的容器中，加入适量的匀浆液呈50ml膜的混悬液，备用。

第二步：各反应管分别加入膜制备物100μL，缓冲液100μL。

第三步：总结合管（TB）加入100μL匀浆液，非特异性结合管（NB）加入prazosin100μL（终浓度10^‐5M），各受试化合物特异性结合管（SB）加入100μL受试化合物（终浓度10^‐5M）；

第四步：各反应管分别加入放射性配体³H‐prazosin10μL（各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上）。

第五步：将各反应管25℃温孵60min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的试验缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液并混匀；

第六步：将闪烁瓶放入液闪计数仪计数

实施例9

组胺H₁受体膜的制备

大鼠断头，冰上操作，迅速取滕鼠小脑，加入缓冲液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液，含5nM EDTA，PH7.7），用旋涡混合器混匀，在48000g，4℃离心10min，弃上清液，取沉淀，再加入缓冲液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液，含5nM EDTA，PH7.7）洗涤，重复三次离心，离心完毕，弃上清液，将沉淀于‐80℃储存备用。

实验方法:

第一步：先将制备好的膜用适量的缓冲液（0.05M的Tris‐HCl缓冲液，含5nM EDTA，PH7.7）。，用匀浆机分散均匀，将15只试管混入到100ml的容器中，加入适量的缓冲液呈50ml膜的混悬液，备用。

第二步：各反应管分别加入膜制备物100μL。

第三步：总结合管（TB）加入100μL缓冲液，非特异性结合管（NB）加入100μLpromethazine（终浓度10^‐5M），各受试化合物特异性结合管（SB）加入100μL受试化合物（终浓度10^‐5M）；

第四步：各反应管分别加入放射性配体³H‐pyrilamine10μL（各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上）。

第五步：将各反应管30℃温孵60min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的试验缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液并混匀；

第六步：将闪烁瓶放入液闪计数仪计数

表2化合物对各受体的亲和力

体外实验结果表明化合物4对三种受体（D₂,5‐HT_1A,和5‐HT_2A）与帕利哌酮相当，而对H₁和a₁的亲和力低，产生体重增加的副作用可能性较小。

实施例10、MK‐801诱导的高活动性化合物体内抗精神分裂活性

实验动物及试剂

健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重(20±2)g，由南京青龙山动物养殖中心提供。

抗坏血酸，国药集团化学试剂有限公司；

MK‐801，由美国Sigma公司生产，配制方法：用0.1%的维生素C配成1mg/ml的溶液；

受试阳性药物：氟哌啶醇、氯氮平、利培酮、奥氮平、阿立哌唑、齐拉西酮、奎硫平；

吐温80，浓度10%。

实验方法

选择体重合格的小鼠，随机分为空白组、模型组、阳性对照组（利培酮组）、药物组。空白组、模型组灌胃10%吐温0.1ml/10g，阳性对照组灌胃给利培酮0.1mg/kg，药物组分别灌胃给与相应剂量药物。给药后1h空白组腹腔注射0.1%抗坏血酸0.1ml/10g，模型组、阳性对照组(30min)、药物组腹腔注射MK‐801溶液0.1mg/kg。其后测定各组小鼠90分钟内自发活动。结果见表3。

实施例11、阿扑吗啡诱导小鼠攀爬实验

实验动物

健康KM小鼠，雄性，体重18～22g，由南京青龙山动物养殖中心提供。

主要试剂

奎硫平；

阿扑吗啡，Sigma公司提供，临用前0.9%NaCl（含0.1%维生素C）溶解，现配现用；

维生素C，F20061113，国药集团化学试剂有限公司；

氯化钠注射液，H32026305，徐州市第五制药厂有限公司。

仪器:自制攀爬笼，秒表。

实验方法:阿扑吗啡诱导小鼠攀爬实验

KM小鼠，雄性，体重18～22g，随机分为阴性对照组、模型组、奎硫平阳性药物各剂量组以及化合物各剂量组（具体给药剂量见下表），每组10只。阴性对照组和模型组灌胃给予相应溶剂双蒸水，阳性药物组灌胃给予相应阳性药物（溶解时先加微量乙酸，再加双蒸水），化合物各剂量组灌胃给予相应剂量化合物，灌胃体积为0.1ml/10g。灌胃给药1小时后皮下注射阿扑吗啡（1mg/kg），体积为0.1ml/10g。注射阿扑吗啡后，立即放入攀爬笼中，适应5分钟，观察注射阿扑吗啡后第10‐11，20‐21，30‐31分钟的行为并进行评分，评分标准：四足在地板上得分为0；两前足在网笼上得分为1；四只足在网笼上得分为2。结果见表3。

实施例12、僵住症实验方法

实验动物

健康昆明种小鼠，雌雄各半，(22±2)g，由南京青龙山动物养殖中心提供。

主要试剂：

受试药、帕利哌酮

仪器：

自制抓棒器材：小鼠盒内放置直径0.3cm,高于工作台5cm的不锈钢棒。

实验方法：

KM小鼠，雌雄各半，体重20～24g，随机分为阴性对照组、模型组、奎硫平各剂量组以及化合物各剂量组，每组10只。阴性对照组和模型组灌胃给予相应溶剂双蒸水，阳性药物组灌胃给予相应阳性药物（溶解时先加微量乙酸，再加双蒸水），化合物各剂量组灌胃给予相应剂量化合物，灌胃体积为0.1ml/10g。灌胃给药30min、60min、90min时，将小鼠两只前爪轻柔地放在长20cm,直径0.3cm,高于工作台5.5cm的小棒上,再将动物后肢轻放于盒底面,记录小鼠两只前爪在棒上保持姿势的持续时间，以30s僵直不动为阳性反应。如果小鼠前爪一直没有放下,60s时终止观察。统计每个化合物剂量组阳性反应动物数。结果见表3。

表3.优选化合物体内动物模型试验结果

本实验结果表明：与模型组相比，帕利哌酮和化合物4既能明显改善MK‐801诱导的高活动性，又能有效的改善阿扑吗啡诱导的攀爬症状，并且在有效剂量下不引起EPS，而且化合物4的治疗指数明显高于帕利哌酮。

实施例13、急性毒性研究

序贯法之限度实验取KM小鼠，雌雄各半，随机分为若干组，每组2‐5只，分别为各化合物2000mg/kg组和溶剂组，按0.2ml/10g灌胃给药。观察动物3日内的死亡情况。（如果动物在三日内有3只或3只以上存活，生命状态无明显异常时，继续观察，直至7日后实验结束。如果动物在三日内死亡3只或3只以上时，采用半数致死量法测定其LD50。）

半数致死量法预试验取KM小鼠，雌雄各半，随机分若干组，每组4只，分别为各化合物1500mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg组和溶剂组，按0.2ml/10g灌胃给药，观察动物1‐3日内的死亡情况。

结果：小鼠单次灌服的LD₅₀大于2000mg/kg，远远高于帕利哌酮（800mg/kg），具有较小的急性毒性。

实施例14、小鼠肥胖及泌乳素的研究

雄性ICR小鼠100只，随机分为阴性对照组、化合物4低、中、高三个剂量组，帕利哌酮低、中、高三个剂量组。每天给药一次，连续给药28天，每天监测体重。给药结束后，摘眼球取血，血液室温静置30min后，用低温高速离心机4℃，3000r/min离心10分钟。采集血清储存在‐20℃中，待测泌乳素含量。血清泌乳素采用小鼠PRL Elisa试剂盒测定，结果显示化合物4与帕利哌酮相比，可以显著降低小鼠泌乳素水平和体重增加。结果见图1和图2。

C、组合物实施例

实施例15、片剂

原辅料过80目筛备用，称取处方量活性成分、微晶纤维素、乳糖、聚维酮K30，加入到高速混合制剂机中，低速搅拌混合均匀，加入适量纯化水，低速搅拌，高速切割制粒，湿颗粒60℃干燥3h，24目筛整粒，加入处方量羧甲淀粉钠、二氧化硅和硬脂酸镁，总混，旋转压片机压片。

实施例16、胶囊剂（230mg）

原辅料过80目筛备用，称取处方量活性成分、乳糖、淀粉、聚维酮K30，加入到高速混合制剂机中，低速搅拌混合均匀，加入适量纯化水，低速搅拌，高速切割制粒，湿颗粒60℃干燥3h，24目筛整粒，加入处方量二氧化硅和硬脂酸镁，总混，胶囊灌装机填充胶囊。

Claims

1.通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂分别独立地选自氢、取代或未取代的C_1‐5烷基；R₃为氢，或者R₃与R₂相连，构成取代或未取代的C_4‐6环烷基；所述的取代的C_1‐5烷基选自C_1‐5卤代烷基、C_1‐5羟烷基；所述的取代的C_4‐6环烷基为被一个或多个选自C1‐3烷基或卤素的基团相同或不同地取代。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的未取代的C_1‐5烷基选自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或异戊基。

3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述R₁为氢或甲基。

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述的未取代的C_4‐6环烷基为环戊基或环己基。

5.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述R₂为氢，甲基，丁基或异戊基；或R₃与R₂相连，构成环戊基、环己基或环丁基。

6.根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述的R₃与R₂相连，构成环戊基或环己基。

7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐选自以下任意一种化合物或其药学上可接受的盐：

8.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的药学上可接受的盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、葡糖酸盐、糖二酸盐、苯甲酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

9.一种药物组合物，其特征在于包括治疗有效量的权利要求1所述的化合物和/或其药学上可接受的盐。

10.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗神经精神类疾病的药物中的应用。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于所述的神经精神类疾病是精神分裂症。

12.权利要求9所述的组合物在制备用于预防或治疗神经精神类疾病的药物中的应用。

13.如权利要求12所述的应用，其特征在于所述的神经精神类疾病是精神分裂症。