CN103717214A

CN103717214A - 用于稳定低氧诱导因子-2α作为治疗癌症的方法的化合物和组合物

Info

Publication number: CN103717214A
Application number: CN201280038162.3A
Authority: CN
Inventors: R·塞尔维茨; J·H·加德纳; J·M·扎努兹
Original assignee: Akebia Therapeutics Inc
Current assignee: Akebia Therapeutics Inc
Priority date: 2011-06-06
Filing date: 2012-06-05
Publication date: 2014-04-09
Also published as: WO2012170439A1; AU2012268400B2; CA2837560C; NZ619241A; US20120329836A1; US20170105981A1; EP2717870B1; EP2717870A1; EP2717870A4; AU2012268400A1; WO2012170442A1; CA2837560A1; US8865748B2; IL229827A; JP2017061464A; KR20140019025A; JP2014522410A; RU2013156980A; EP3251671A1; US20120316204A1

Abstract

本发明公开了{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸及其酯和酰胺前药，其可稳定低氧诱导因子-2α(HIF-2α)，从而提供了治疗癌症的方法。本发明还公开了可用于治疗癌症的包含{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸和/或其前药的组合物。

Description

用于稳定低氧诱导因子-2α作为治疗癌症的方法的化合物和组合物

优先权

本申请要求享有2011年6月6日提交的美国临时申请系列号61/493,534的权益，该临时申请以引用的方式全文纳入本文。

技术领域

本文公开了{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸及其酯和酰胺前药，其可稳定低氧诱导因子-2α(HIF-2α)，从而提供治疗癌症的方法。本文还公开了可用于治疗癌症的包含{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸和/或其前药的组合物。

背景技术

诺贝尔奖得主Judah Folkman博士于1971年首次提出所有的癌肿瘤都是血管发生依赖性的，因此靶向血管发生是一种潜在的治疗癌症的手段。血管发生是从先在的(pre-existent)微血管生长出新的毛细血管。许多病理学病症，从动脉粥样硬化到癌症，都与血管发生过量或不足有关。

现在普遍接受的是，在没有诱导新的维管联结(vascular supply)的情况下，不能发生超过几立方毫米的肿瘤生长。因此，通过拒绝向肿瘤提供肿瘤生长所必需的营养供应，抑制新血管(抗血管发生(antiangiognesis))可提供治疗癌症的非化学疗法或非放射疗法途径。虽然内皮细胞通常是静止的，但是其负责响应各种刺激形成新血管。这些刺激可具有多种形式的起源。

肿瘤中形成新血管网络的内皮细胞响应由肿瘤自身产生的血管发生刺激。这些刺激中最为熟知的是血管内皮生长因子(VEGF)。发现在人类肿瘤中普遍存在的是，VEGF水平增加与肿瘤生长的速率增加有关。因此，抑制VEGF代表了控制肿瘤(原发的和转移的)生长速率的方法并提供使现存的肿瘤缩小的可能手段。

因此，存在对用于抑制肿瘤细胞VEGF表达的化合物、组合物和方法的长期需求。

附图说明

图1A示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，相对于低氧条件(1％O₂)下的细胞，常氧(21％O₂)下野生型鼠胚胎成纤维细胞中VEGF的mRNA表达减少。相对于对照，在1、10和100μM浓度下测试所述公开的HIF-2α稳定剂。数据指明了VEGF mRNA的相对量，如下从左到右为常氧对照(实心黑色)、HIF-2α稳定剂常氧、低氧对照和HIF-2α稳定剂低氧。在低氧条件下，在HIF-2α稳定剂所有浓度下，VEGF mRNA的存在量显著减少(最右是每个浓度的数据)。

图1B示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，相对于低氧条件(1％O₂)下的细胞，常氧(21％O₂)下具有HIF1-α缺失的鼠胚胎成纤维细胞，即，HIF-1α^-/-成纤维细胞中VEGF的mRNA表达减少。相对于对照，在1、10和100μM浓度下测试所述公开的HIF-2α稳定剂。数据指明了VEGFmRNA的相对量，如下从左到右为常氧对照(实心黑色)、HIF-2α稳定剂常氧、低氧对照和HIF-2α稳定剂低氧。在低氧条件下，在HIF-2α稳定剂所有浓度下，VEGF mRNA的存在量显著减少，甚至是在具有HIF1-α缺失的小鼠中也显著减少(最右是每个浓度的数据)。

图2A示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，相对于低氧条件(1％O₂)下的细胞，常氧(21％O₂)下野生型鼠胚胎成纤维细胞中磷酸甘油酸酯激酶(PGK)的mRNA表达减少。相对于对照，在1、10和100μM浓度下测试所述公开的HIF-2α稳定剂。数据指明了PGK的相对存在量，如下从左到右为常氧对照(实心黑色)、HIF-2α稳定剂常氧、低氧对照和HIF-2α稳定剂低氧。在低氧条件下，在HIF-2α稳定剂所有浓度下，磷酸甘油酸酯激酶(PGK)mRNA的存在量显著减少。

图2B示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，相对于低氧条件(1％O₂)下的细胞，常氧(21％O₂)下具有HIF1-α缺失的鼠胚胎成纤维细胞，即，HIF-1α^-/-成纤维细胞中磷酸甘油酸酯激酶(PGK)的mRNA表达减少。相对于对照，在1、10和100μM浓度下测试所述公开的HIF-2α稳定剂。数据指明了PGK的相对存在量，如下从左到右为常氧对照(实心黑色)、HIF-2α稳定剂常氧、低氧对照和HIF-2α稳定剂低氧(棒D，最浅的灰色)。在低氧条件下，在HIF-2α稳定剂所有浓度下，磷酸甘油酸酯激酶(PGK)mRNA的存在量显著减少，甚至是在具有HIF1-α缺失的小鼠中也显著减少(最右是每个浓度的数据)。

图3示出了与用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)进行处理相比，荷B16F10黑色素瘤肿瘤的C57BL/6小鼠中的肿瘤生长减少。图3表明，所述公开的HIF-2α稳定剂单独地减少了肿瘤生长(△)，其与单独使用GM-CSF(■)相当，并且相对于磷酸盐缓冲盐水(PBS)(对照)(◆)，当所公开的HIF-2α稳定剂与GM-CSF联合使用(X)时，肿瘤生长的抑制是加和的。

图4示出了在评估递送方式在减少肿瘤体积方面的有效性中，对经腹膜内(I.P.)和瘤内(I.T.)的GM-CSF递送进行的比较。在所有情况中均腹膜内递送所述公开的HIF-2α稳定剂。用(△)描绘的数据代表所述公开的HIF-2α稳定剂联合GM-CSF，都经腹膜内递送，用(◆)描绘的数据代表GM-CSF加载体，都经腹膜内递送，用(■)描绘的数据代表瘤内递送的GM-CSF加腹膜内递送的载体，用(x)描绘的数据代表腹膜内递送的所述公开的HIF-2α稳定剂联合瘤内递送的GM-CSF。

图5示出了对于图3中描述的其中腹膜内给予所述公开的HIF-2α稳定剂和瘤内给予GM-CSF的注射方法，使用Pmel17mRNA表达确定到肺的相对转移的量。组A是所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF的载体对照。组B代表GM-CSF加5％葡聚糖中的20％PEG(用于给予所述公开的HIF-2α稳定剂的载体)。组C代表所述公开的HIF-2α稳定剂加PBS(用于给予GM-CSF的载体)。组D代表所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF。将所述公开的HIF-2α稳定剂在其载体(20％PEG在5％葡聚糖中)中递送并腹膜内给予，将GM-CSF在其载体(PBS)中递送并瘤内给予。注意，只有具有所述公开的HIF-2α稳定剂的组显示出通过Pmel17mRNA表达测量的转移减少。

图6示出了用来自MMTV-PyMT转基因小鼠的细胞同位注射至单个乳腺中的C57BL/6小鼠的肿瘤体积减少。动物用载体(◆)、12mg/kg所述公开的HIF-2α稳定剂(■)或17.5g/kg所述公开的HIF-2α稳定剂(●)每周处理3次。

图7示出了在其中如本文所公开的用约10⁷个A2780/CP肿瘤细胞接种小鼠的研究的过程中存活动物的数目。用(◆)标示的线代表对照组，用(▲)标示的线代表接受18mg/kg所述公开的HIF-2α稳定剂的组，用(■)标示的线代表接受36mg/kg所述公开的HIF-2α稳定剂的组。

图8示出了在所述公开的研究的过程中，经A2780/CP处理的小鼠的肿瘤质量的变化。(◆)代表对照组，(▲)代表接受18mg/kg公开的HIF-2α稳定剂的组，(■)代表接受36mg/kg公开的HIF-2α稳定剂的组。

图9示出了在所述公开的研究的过程中，经A2780/CP处理的小鼠的体重百分比的变化。(◆)代表对照组，(▲)代表接受18mg/kg公开的HIF-2α稳定剂的组，(■)代表接受36mg/kg公开的HIF-2α稳定剂的组。

图10示出了相对于对照(载体)，在10μM下人外周血单核细胞中s-VEGFR-1的诱导。

图11A-用公开的HIF-2α稳定剂处理的细胞中的HIF-2α蛋白增加(p=0.001)，而HIF-1α没有相应增加(p=0.105)。

图11B-当还用公开的HIF-2α稳定剂处理经GM-CSF处理的单核细胞时，无论在蛋白质水平还是转录物水平上，由经GM-CSF处理的单核细胞产生sVEGFR-1都显著增加(分别为p=0.007和p=0.033)。

图11C-通过实时PCR进行的对VEGF转录物水平的评估表明，虽然GM-CSF增加了VEGF产生，但是在单独用GM-CSF刺激的单核细胞或用GM-CSF和公开的HIF-2α稳定剂刺激的单核细胞之间的VEGF产生，无论在蛋白质水平还是转录物水平上，都没有差异(分别为p=0.133和0.556)。

图11D-在单独用GM-CSF刺激的单核细胞或用公开的HIF-2α稳定剂共刺激的单核细胞的VEGFR-1产生，无论在蛋白质水平还是转录物水平上，都没有差异(分别为p=0.306和p=0.566)。

图11E-公开的HIF-2α稳定剂增加了VEGF蛋白和mRNA的单核细胞产生(分别为p=0.011和p=0.007)。

图11F-公开的HIF-2α稳定剂诱导来自对照巨噬细胞的sVEGFR-1转录(p=0.036)，而不诱导来自HIF-2α缺失的巨噬细胞的sVEGFR-1转录(p=0.881)。

图12A-用GM-CSF和公开的HIF-2α稳定剂公开的HIF-2α稳定剂的联合治疗与上述任一单独治疗相比进一步减少了肿瘤生长(p＜0.001)。

图12B-在用公开的HIF-2α稳定剂处理的小鼠中生存中值(定义为肿瘤直径为20mm³的时间)增加3天(p=0.023)。

图13A-在用GM-CSF和公开的HIF-2α稳定剂两者处理的小鼠的肿瘤内检测到sVEGFR-1水平增加(p=0.031)。

图13B-相对于在经载体对照处理的小鼠中观察到的瘤内VEGF水平，GM-CSF(单独地或与公开的HIF-2α稳定剂结合)没有增加瘤内VEGF水平(p=0.490)。

图13C-用GM-CSF和公开的HIF-2α稳定剂的联合治疗显著地减少了荷黑色素瘤小鼠中的肿瘤血管分布，这可能通过诱导sVEGFR-1而进行(p＜0.001)。

图14A-公开的HIF-2α稳定剂在用同种型对照抗体处理的小鼠中减少了肿瘤生长(p＜0.001)，但是在还用抗-sVEGFR-1的中和抗体处理的小鼠中对肿瘤生长没有影响(p=0.245)。

图14B-公开的HIF-2α稳定剂在用所述对照抗体处理的小鼠中减少了肿瘤血管分布(p=0.022)，但是在用所述sVEGFR-1中和Ab处理的小鼠中没有减少肿瘤血管分布。

图15-公开的HIF-2α稳定剂在LysMcre对照小鼠(其含有LysM驱动的cre重组酶而不含floxed等位基因)中抑制了肿瘤生长。

发明内容

本文所述的物质、化合物、组合物、制品和方法可参考以下对所公开主题具体方面的详细描述和包括在其中的实施例而更容易理解。在本发明的物质、化合物、组合物、制品、设备和方法被公开和描述之前，应理解，以下所述的各方面不限于具体合成方法或具体试剂，因为这些当然可变化。还应理解，本文中所使用的术语仅用于描述具体方面的目的，而不意欲进行限制。

另外，在本说明书中，引用了多篇出版物。这些出版物的公开内容全文通过引用的方式纳入本申请中，以便更加全面地描述所公开主题所属技术领域的现有技术。所公开的参考文献还独立地且具体地通过引用的方式纳入本文，用于在依赖参考文献的句子中所讨论的包含在参考文献内的物质。

一般性定义

在本说明书和随附的权利要求中，将提及许多术语，所述术语将定义为具有以下含义：

除非另有明确说明，本文中的所有百分比、比率和比例都以重量计。除非另有明确说明，所有温度时都以摄氏度(℃)计。

“可药用”意指不是生物学不需要的或原本不需要的物质，即所述物质可与相关的活性化合物一起给予个体，而不造成临床上不可接受的生物学效应或以有害的方式与包含其在内的药学组合物的任何其他组分相互作用。

除非明确描述与此相反，组分的重量百分比是基于包括所述组分在内的制剂或组合物的总重量计。

本文所使用的“有效量”意指“一种或多种所述公开的化合物在实现所需结果或治疗结果所需要的剂量和时间周期下有效的量”。有效量可根据本领域中已知的因素而变化，例如正在治疗的人或动物的疾病状况、年龄、性别和重量。虽然具体的剂量方案可能在本文的实施例中描述，但本领域技术人员应了解，所述剂量方案可改变以提供最佳的治疗反应。例如，可每日给予数个分开的剂量或可按治疗情形紧迫程度所指示的成比例减少剂量。此外，本公开内容的组合物可按实现治疗量所需的频率给予。

本文中通常使用的“混合物”或“掺合物”意指两种以上不同组分的物理结合物。

本文所使用的“赋形剂”包括一种或多种所公开的抑制剂中可包含的或可结合的为非治疗活性化合物或非生物学活性化合物的任何其他化合物。因此，赋形剂应该是药学上或生物学上可接受的或相关的(例如，赋形剂通常应该对受试者是无毒的)。“赋形剂”包括单一的这类化合物，也意欲包括多种赋形剂。

本文所使用的“受试者”意指个体。因此，所述“受试者”可包括家养动物(例如，猫、狗等)、家畜(例如，牛、马、猪、绵羊、山羊等)、实验动物(例如，小鼠、兔子、大鼠、豚鼠等)，和禽类。“受试者”还可包括哺乳动物，例如灵长类或人。

“减少(reduce)”或该词的其他形式如“减少(reducing)”或“减少(reduction)”意指事件或特征(如，血管渗漏)的降低。应理解，这通常相对于一些标准值或预计值，换句话说它是相对的，但待参照的标准值或相对值不总是必需的。

本文使用的“治疗(treat)”或该词的其他形式如“治疗(treated)”或“治疗(treatment)”意指给予本发明的化合物减轻了宿主中的疾病或病症，和/或减少、抑制或消除与病症(例如，血管渗漏)相关的具体特征或事件。因此，术语“治疗”包括：预防宿主中病症的发生，尤其是当所述宿主易患所述疾病但仍未诊断为患有该疾病时；抑制所述病症；和/或减轻或逆转所述病症。在本发明的方法涉及预防病症的范围内，应理解，术语“预防”不需要完全阻挠疾病状态。更确切地，本文使用的术语预防是指技术人员鉴别易患病症的人群的能力，使得可在发病前给予本发明的化合物。所述术语没有暗指疾病状态被完全避免。

在本申请的整个说明书和权利要求书中，词语“包含(comprise)”和该词的其他形式如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”意指包括但不局限于且不意欲排除，例如，其他添加剂、组分、整数或步骤。

如本说明书和所附的权利要求书中所使用的，除非上下文明确另有指示，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种组合物”包括两种以上此种组合物的混合物，提及“一种化疗剂”包括两种以上此种化疗剂的混合物，提及“所述化合物”包括两种以上此种化合物(例如其盐等)的混合物。

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的实例和不发生的实例。

本文中范围可表示为从“约”一个具体值和/或至“约”另一个具体值。当表示这样的范围时，另一方面包括从一个具体值和/或至另一个具体值。类似地，当通过使用前缀“约”将数值表示为近似值时，应理解为是所述具体值形成另一方面。还应理解，每个范围的端点既明显与另一端点相关，又独立于另一端点。还应理解，本文公开了很多数值，并且每个数值在本文中也公开为除了所述数值本身之外的“约”该具体数值。例如，如果公开了数值“10”，那么也就公开了“约10”。还应理解，当一个数值被公开时，也就公开了“小于或等于”所述数值，“大于或等于所述数值”，并且还公开了数值之间的可能范围，如本领域技术人员所适当理解的。例如，如果公开了数值“10”，那么也就公开了“小于或等于10”和“大于或等于10”。还应理解，在整个申请中，数据以多种不同形式提供，并且该数据代表终点和起点以及所述数据点的任意结合的范围。例如，如果公开了具体的数据点“10”和具体的数据点“15”，应理解，认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于、等于10和15以及10和15之间的数值。还应理解，还公开了两个具体单位之间的每个单位。例如，如果公开了10和15，那么也公开了11、12、13和14。

“VEGF-依赖性癌症”、“VEGF依赖的癌症”、“VEGF-依赖性肿瘤”或“VEGF依赖的肿瘤”是指依赖VEGF增殖的癌症。

为了本公开的目的，术语“C₁-C₄直链、C₃-C₄支链或C₃-C₄环烷基”包括以下单元：甲基(C₁)、乙基(C₂)、正丙基(C₃)、异丙基(C₃)、环丙基(C₃)、正丁基(C₄)、仲丁基(C₄)、异丁基(C₄)、叔丁基(C₄)和环丁基(C₄)。

本文公开了具有下式的化合物：

其中R选自：

i)-OR¹；

ii)-NR²R³；或

iii)-OM¹；

R¹是：

i)氢；或

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；

R²和R³独立地是：

i)氢；

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；或

iii)R²和R³可一起形成具有2-7个碳原子和1-3个选自氮、氧、硫的杂原子的环，所述杂原子包括与R²和R³连接的氮原子。

M¹代表如下文所进一步描述的阳离子。

R⁴选自：

i)-OH；或

ii)-OM²；

其中M²是如下文所进一步描述的阳离子。

所述公开的具有下式的化合物{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸：

已被发现可稳定低氧诱导因子2-α(HIF-2α)，并且如本文所进一步公开的，其通过诱导产生内源性血管内皮生长因子抑制剂s-VEGF-1而表现出抗血管生成行为。

还公开了具有下式的所述公开的稳定剂的可药用盐：

其中M¹和M²各自独立地是一价、二价或三价阳离子，即，M⁺、M²⁺或M³⁺。

所述公开的盐的一方面涉及具有下式的单价盐形式的稳定剂：

该方面的一个实施方案涉及所述公开的稳定剂，其中M¹是无机阳离子。一个重复方案涉及选自钠离子、锂离子、钾离子、铵离子和银离子的无机阳离子。非限制性实例包括：

i){[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠；

ii){[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钾；和

iii){[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸铵。

该方面的另一个实施方案涉及所述公开的稳定剂，其中M¹是有机阳离子。一个实施方案涉及为胺的有机阳离子，例如具有下式的盐：

R^a、R^b和R^c各自独立地是：

i)氢；

ii)取代的或未取代的C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷基；

iii)取代的或未取代的苄基；

其中R^a、R^b和R^c中的一个或多个可独立地被一个或多个选自以下的单元取代：

i)C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷氧基；

ii)C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状卤代烷氧基；

iii)卤素；

iv)羟基；

v)硫代；或

vi)R^a、R^b和R^c中的一个或多个可含有一个或多个能够形成

阳离子、阴离子或两性离子的单元。

该实施方案的一个重复方案涉及其中R^a、R^b和R^c各自是氢或C₁-C₁₂直链烷基的阳离子。非限制性实例包括甲铵[HN⁺H₂(CH₃)]、二甲铵[HN⁺H(CH₃)₂]、三甲铵[HN⁺(CH₃)₃]、乙铵[HN⁺H₂(CH₂CH₃)]、二乙铵[HN⁺H(CH₂CH₃)₂]、三乙铵[HN⁺(CH₂CH₃)₃]、二甲基乙基铵[HN⁺(CH₃)₂(CH₂CH₃)]和甲基二乙基铵[HN⁺(CH₃)(CH₂CH₃)₂]。

该实施方案的另一个重复方案涉及其中R^a、R^b和R^c中的一个或多个选自氢，未取代的C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷基，或取代的C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷基的阳离子。一个实施方案涉及具有一个或多个被羟基取代的C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷基链的有机阳离子。非限制性实例包括2-羟基乙基铵(单乙醇胺、胆碱盐的阳离子)[HN⁺H₂(CH₂CH₂OH)]、甲基-2-羟基乙基铵[H₂N⁺(CH₃)(CH₂CH₂OH)]、二-(2-羟基乙基)铵[H₂N⁺(CH₂CH₂OH)₂]、三(2-羟基乙基)铵[HN⁺(CH₂CH₂OH)₃]和三(羟基甲基)甲基铵(三(羟基甲基)氨基甲烷的阳离子)[H₃N⁺C[(CH₂OH)]₃]。还包括由氨基糖形成的阳离子，所述氨基糖例如具有式H₂N⁺(CH₃)CH₂[(CHOH)_nCH₂OH](其中n是1-7)的氨基糖，。适于形成有机阳离子的氨基糖的非限制性实例是葡甲胺(1-脱氧-1-甲基氨基-山梨糖醇)。

该实施方案的另一重复方案涉及由氨基酸形成的阳离子。非限制性实例包括赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、谷氨酰胺等。

适于形成所述公开的稳定剂的盐的有机胺的另一个方面包括其中R^a、R^b和R^c中的一个或多个一起形成可包含3-20个原子和任选地一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子的杂环的胺。非限制性实例包括哌嗪、哌啶、吗啉、硫代吗啉等。

适合用作形成阳离子的化合物的另一种有机胺包括苄星青霉素。苄星青霉素可以是一价或二价阳离子，例如，具有下式的N-苄基-2-(苄基氨基)乙铵的盐：

所述公开的盐的另一个方面涉及具有下式的二价盐形式的稳定剂：

该方面的一个实施方案涉及所述公开的稳定剂，其中M¹是无机阳离子。一个重复方案涉及选自钙离子、镁离子、钡离子等的无机阳离子。非限制性实例包括：

i)双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钙；

ii)双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸镁；和

iii)双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钡。

所述可药用盐的另一个方面涉及其中R是OM¹且R⁴是OM²的盐，例如，具有下式的盐：

第一个实施方案涉及包含多个一价无机阳离子的盐。例如：

i){[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二钠；

ii){[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二钾；

iii){[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二铵；

iv){[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠钾；

v){[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠铵；和

vi){[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钾铵。

在另一实施方案中，能够形成二价阳离子类型的有机胺，例如本文公开的苄星青霉素，可用于形成所述公开的稳定剂的合适的可药用盐。

另外，本文公开了可在体内转化成活性化合物{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸的前药。所述公开的前药具有式：

其中R选自：

i)-OR¹；或

ii)-NR²R³；

R¹是C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；并且

R²和R³独立地是：

i)氢；

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；或者

iii)R¹和R²可一起形成具有2-7个碳原子和1-3个选自氮、氧、硫的杂原子的环，所述杂原子包括与R¹和R²连接的氮原子。

所述公开的前药的一个方面涉及为酯的化合物，即，R¹是C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基。在一个实施方案中，R¹是甲基(C₁)，从而提供前药{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸甲酯。在另一个实施方案中，R¹是乙基(C₂)，从而提供前药{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸乙酯。

在另一个实施方案中，R¹选自C₃-C₄直链、支链或环状烷基，例如，正丙基(C₃)、异丙基(C₃)、环丙基(C₃)、正丁基(C₄)、仲丁基(C₄)、异丁基(C₄)、叔丁基(C₄)和环丁基(C₄)。

所述公开的前药的另一方面涉及为酰胺的化合物，即，R为-NR²R³。在该方面的一个实施方案中，R²和R³都是氢，其中R是-NH₂，从而提供前药5-(3-氟苯基)-N-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺。在另一个实施方案中，R¹是甲基(C₁)且R²是氢，从而提供前药5-(3-氟苯基)-N-(2-甲基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺。在另一个实施方案中，R¹和R²都是甲基(C₁)，从而提供前药5-(3-氟苯基)-N-(2-二甲基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺。

在该方面的另一个实施方案中，R²和R³各自独立地是氢、乙基、正丙基(C₃)、异丙基(C₃)、环丙基(C₃)、正丁基(C₄)、仲丁基(C₄)、异丁基(C₄)、叔丁基(C₄)或环丁基(C₄)。该方面的前药的非限制性实例包括5-(3-氟苯基)-N-(2-二乙基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；5-(3-氟苯基)-N-(2-丙基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；5-(3-氟苯基)-N-(N-乙基-N-异丙基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；5-(3-氟苯基)-N-(2-二异丙基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；5-(3-氟苯基)-N-(2-环丙基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；和5-(3-氟苯基)-N-(2-丁基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺。

在该方面的另一个实施方案中，R¹和R²可一起形成具有2-7个碳原子和1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的环，所述杂原子包括与R¹和R²连接的氮原子。在该实施方案的第一个重复方案中，R¹和R²与它们连接的氮原子一起形成选自吖丙啶基(C₂)、氮杂环丁基(C₃)，、吡咯烷基(C₄)和哌啶基(C₄)的环。

在该实施方案的另一个重复方案中，R¹和R²与它们连接的氮原子一起形成包含选自氮、氧和硫的第二个杂原子的环。这些环的非限制性实例包括噻唑基(C₃)、异噻唑基(C₃)、噁唑基(C₃)、异噁唑基(C₃)、咪唑基(C₃)、吗啉基(C₄)和哌嗪基(C₅)。

所述公开的HIF-2α稳定剂6和酯前药，例如化合物5，可通过在方案I中概述的且在下文实施例1中进一步描述的方法来制备。

方案I

试剂和条件：(a)H₂：Pd/C，EtOH，rt，16小时。

试剂和条件：(b)(CF₃O₂S)₂O，Et₃N，CH₂Cl₂；rt，16小时。

试剂和条件：(c)Et₃N，Na₂CO₃，EtOH，rt，16小时。

试剂和条件：(d)Pd(dPPf)Cl₂，K₃PO₄，H₂O，二噁烷；85℃，16小时。

试剂和条件：(e)(i)NaOH，THF；30分钟。(ii)HCl，THF，H₂O；85℃，16小时。

实施例1

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸(6)

除非另有说明，在下文描述的反应中，温度以摄氏度(℃)给出；操作在室温或环境温度下进行，“室温”、“rt”或“RT”(通常为约18℃-约25℃；溶剂的蒸发使用旋转蒸发仪在减压(通常，4.5-30mmHg)和最高达60℃的浴温度(bath temperature)下进行；反应过程之后通常接着进行薄层色谱(TLC)；产品呈现出令人满意的¹H NMR、HPLC和/或LC-MS(GC-MS)数据；还使用了如下的常规缩写：L(升)、mL(毫升)、mmol(毫摩尔)、g(克)和mg(毫克)。除非另有说明，所有的溶剂和试剂均购自供应商并且不经进一步纯化而使用。除非另有说明，反应在氮气层下进行。在UV灯(254nm)下使化合物可见。在300MHz NMR上记录¹H NMR谱。

[(3，5-二羟基吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸乙酯(2)的制备：向20L圆底烧瓶装入氮气和碳负载的钯(10％Pd/C)(100g，60％湿糊)和乙醇(12L)，然后加入[(3，5-二-苯甲氧基吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸乙酯，1，(1000g，2.378mol)。将所得的混合物进行三次真空-氮气吹扫循环和三次真空-氢气吹扫循环。引入氢气气氛，在1-25℃下搅拌所述反应混合物直至通过TLC分析反应完成。所述反应通常持续2-3小时，剧烈搅拌对于完成所述反应是重要的。然后，将所述反应体系进行真空-氮气吹扫循环以从体系中除去氢气。过滤所述反应混合物，滤饼用乙醇(2L)洗涤。合并的滤液在旋转蒸发仪上在最高达45℃的浴温度下浓缩至恒重以提供558g(97.7％产率)为灰白色固体的所需要的产物。

MP：138-140℃；MS(ESI+)：m/z241(M+1)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.28(s，1H)，10.79(s，1H)，9.09-9.05(t，J=6Hz，1H)，7.76-7.71(d，J=2.4Hz，1H)，6.68-6.67(d，J=2.1Hz，1H)，4.15-4.08(q，J=6.9Hz，2H)，4.02-4.00(d，J=6.3Hz，2H)，1.22-1.17(t，J=6.9Hz，2H).

N-苯基二(三氟甲烷-亚磺酰亚胺)(3)的制备：向10L圆底烧瓶中装入苯胺(232.5g，2.5mol)、三乙胺(505g，5mol)和二氯甲烷(5L)。冰浴冷却所得的混合物。滴加溶于二氯甲烷(1L)中的三氟甲磺酸酐(1410g，5mol)。使所述反应混合物升温至室温并搅拌过夜。然后边搅拌边将所述反应加至碎冰(4kg)中。分离所得的双相混合物。有机层用盐水(2L×2)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以形成粗固体产物。所述粗固体用乙醇洗涤以产生767g(86％产率)为白色固体的所需要的产物。

MP：96-98℃；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ7.64-7.51(m，3H)，7.44-7.42(m，2H).

[(3-羟基-5-三氟甲烷磺酰氧基吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸乙酯钠盐(4)的制备：向20L圆底烧瓶中装入[(3，5-二羟基-吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸乙酯，2，(860g，3.58mol)和乙醇(11L)。在10-20℃下搅拌所述混合物以形成溶液。加入三乙胺(602mL，4.3mol)。将所得的混合物冷却至0-5℃，加入N-苯基双(三氟甲烷-亚磺酰亚胺)，3，(1406g，3.94mol)。加入之后，将所述反应混合物升温至35-40℃并搅拌过夜。TLC分析指示所述反应已完成。然后将所述反应混合物通过旋转蒸发在最高达40℃的浴温度下浓缩。残余物(油性固体)用甲苯(4.5L)处理并浓缩至约4.5L。重复所述甲苯溶剂交换直至通过¹H NMR分析残余乙醇水平低于0.5％。所述甲苯溶液用10％w/w的Na₂CO₃水溶液(5.5L，1.3当量)处理。过滤所得的浆液，滤饼用水(2×2L)洗涤然后用甲苯/TBME的混合物(1：2)洗涤(2×2L)。干燥固体产物以提供1156g(82％产率)为白色固体的所需的产物。

MS(ESI+)：m/z373(M+1)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.13(1H，s)，7.43-7.42(d，J=2.1Hz，1H)，6.72-6.71(d，J=2.1Hz，2H)，4.12-4.05(m，4H)，1.21-1.15(t，J=6.9Hz，3).

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸乙酯(5)的制备：向5L圆底烧瓶中装入[(3-羟基-5-三氟甲烷磺酰氧基吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸乙酯钠盐，4，(310g，0.78mol)、1，4-二噁烷(3L)和水(150mL)。将所述溶液进行真空-氮气吹扫循环，然后加入磷酸钾(50g，0.234mol)和3-氟苯基硼酸(163g，1.17mol)。加入之后，重复真空-氮气吹扫循环一次。然后加入1，1-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)CH₂Cl₂络合物(72g，0.088mol，0.11当量)。再一次真空-氮气吹扫循环之后，随后加热所述反应混合物至75-85℃。反应进程通过TLC监测。反应在14-16小时之后完成。将反应冷却至15-25℃并通过旋转蒸发在最高达45℃的浴温度下浓缩直至溶剂收集停止。残余物用HCl水溶液(1M，1.5L)和乙酸乙酯(1.5L)处理并在室温下搅拌30分钟。然后分离各层。有机层用水(1.5L)、盐水(1.5L)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯/乙酸：3∶1∶0.01(体积比))纯化以提供226g(90％产率)所需要的产物。

MS(ESI+)：m/z319(M+1)；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ11.88(s，1H)，8.44(s，1H)，8.32-.31(d，J=1.5Hz，1H)，7.51-7.44(m，2H)，7.40-7.37(m，1H)，7.32-7.27(m，1H)，7.17-7.13(t，J=6.6Hz，1H)，4.33-4.25(m，4H)，1.36-1.31(t，J=7.2Hz，3H).

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸(6)的制备：在室温下向在THF(1L)中的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸乙酯，5，(226g，0.71mol)浆液中加入氢氧化钠水溶液(1M，2L)，同时保持内部反应温度低于25℃。反应进程通过TLC监测。20-30分钟之后反应完成。所述反应溶液的pH用浓HCl调至5-5.5，同时保持内部温度低于25℃。过滤所述反应混合物以除去不溶性物质，滤液通过旋转蒸发在最高达40℃的浴温度下浓缩直至THF全部除去。所得的固体通过真空过滤收集并用水(1L)洗涤。然后将所述固体在室温下溶于水(1.5L)和THF(1.5L)的混合物中。pH值用浓HCl从约5调至约2-2.25。搅拌所得的混合物30分钟，30分钟后确认pH在2-2.5范围内。所述双相混合物通过旋转蒸发在最高达40℃的浴温度下浓缩直至停止除去THF。过滤所得的固体，用水(2×1L)洗涤，干燥，以提供115g(55.8％产率)为白色固体的所需的产物。

MP：182-184℃；MS(ESI-)：m/z289(M-1)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.90(s，1H)，12.38(s，1H)，9.39-9.37(t，J=6.3Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.80-7.67(m，2H)，7.59-7.52(m，1H)，7.34-7.27(m，1H)，4.02-3.99(m，2H)，3.51(s，1H).

所述公开的HIF-2α稳定剂的酰胺前药可通过在方案II中概述的且在下文实施例2中进一步描述的方法制备。

方案II

试剂和条件：(a)CH₃NH₂HCl，EDCI，HOBt，DIPEA，DMF；0℃至rt，2天

实施例2

5-(3-氟苯基)-N-(2-甲基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺(7)

5-(3-氟苯基)-N-(2-甲基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺(7)的制备：在室温下在N₂下，向{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸，6，(2.9g，10mmol)的DMF(50mL)溶液中加入1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)(2.33g，14.4mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(1.35g，10mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA)(15.65mL，30mmol)。将所述反应搅拌5分钟，然后加入盐酸甲胺(0.9g，130mmol)。搅拌2天后，在减压下除去溶剂，残余物在CH₂Cl₂和H₂O之间分配。分离有机层，将其用饱和NaCl洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。粗产物用二氧化硅(MeOH：CH₂Cl₂1：99)纯化以提供所需要的化合物。

下文描述了制备所述公开的HIF-2α稳定剂和其前药的另一种方法。制备酯前药的一个实例的方法在方案III中概述且描述于实施例3中。

方案III

试剂和条件：(a)K₂CO₃，PdCl₂(dPPf)，DMF，H₂O；45℃，18小时。

试剂和条件：(b)NaOCH₃，CH₃OH；回流，20小时。

试剂和条件：(c)48％HBr；回流，20小时。

试剂和条件：(d)CDI，DIPEA，DMSO；rt，2.5小时。

实施例3

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸甲酯(11)

5-(3-氟苯基)-3-氯-2-氰基吡啶(8)的制备：向适于磁力搅拌且配备有氮气入口的100mL圆底烧瓶中装入(3-氟苯基)硼酸(4.48g，32mmol)、3，5-二氯-2-氰基吡啶(5.8g，34mmol)、K₂CO₃(5.5g，40mmol)、[1，1’-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)[PdCl₂(dppf)](0.1g，0.13mmol)、二甲基甲酰胺(50mL)和水(5mL)。搅动所述反应溶液并加热至45℃，保持该温度持续18小时，然后通过经TLC检测不到原料3，5-二氯-2-氰基吡啶的存在而确定所述反应结束，所述TLC使用乙酸乙酯/甲醇(4：1)作为流动相，用UV435nm使任何剩余的原料可见。然后，冷却所述反应溶液至室温，使内容物在乙酸乙酯(250mL)和饱和的NaCl水溶液(100mL)之间分配。分离出有机相并将其用饱和的NaCl水溶液(100mL)再洗涤一次。有机相用MgSO₄干燥4小时，过滤除去所述MgSO₄，在减压下除去溶剂。然后在室温下将剩余的残余物在甲醇(50mL)中制浆，持续20小时。过滤收集所得到的固体，将其用冷甲醇(50mL)洗涤，然后用己烷(60mL)洗涤，干燥，以提供需要的产物。

5-(3-氟苯基)-3-甲氧基-2-氰基吡啶(9)的制备：向适于磁力搅拌且配有回流冷凝器和氮气入口的500mL圆底烧瓶中装入5-(3-氟苯基)-3-氯-2-氰基吡啶，8，(9.28g，40mmol)，甲醇钠(13.8mL，60mmol)和甲醇(200mL)。在搅拌下，将所述反应溶液加热至回流持续20小时。可通过TLC分析测量到5-(3-氟苯基)-3-氯-2-氰基吡啶消失而确定所述反应结束，所述TLC分析使用己烷/乙酸乙酯(6：3)作为流动相，用UV435nm使所述反应组分可见。冷却所述反应混合物至室温，与水(500mL)合并。冷却所述混合物至0℃至5℃并搅拌3小时。过滤收集所得的固体，将其用水洗涤，然后用己烷洗涤。然后所得的滤饼在40℃下真空干燥以提供所需要的产物。

5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羧酸(10)的制备：向适于磁力搅拌且装有回流冷凝器的50mL圆底烧瓶装入5-(3-氟苯基)-3-甲氧基-2-氰基吡啶，9，(0.912g，4mmol)和48％的HBr水溶液(10mL)。在搅拌的同时，将所述反应溶液加热至回流持续20小时。可通过TLC分析测量到5-(3-氟苯基)-3-甲氧基-2-氰基吡啶消失而确定所述反应结束，所述TLC分析使用己烷/乙酸乙酯(6：3)作为流动相，用UV435nm使所述反应组分可见。然后将所述反应在搅拌下冷却至0℃-5℃并通过缓慢加入50％的NaOH水溶液而将pH调至约2。然后在0℃-5℃下继续搅拌3小时。过滤收集所得的固体，将其用水洗涤，然后用己烷洗涤。所得的滤饼在40℃下真空干燥以提供所需要的产物。

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}-乙酸甲酯(11)的制备：向适于磁力搅拌且装有氮气入口管的50mL圆底烧瓶中装入5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羧酸，10，(0.932gm，4mmol)、N，N’-羰基二咪唑(CDI)(0.97g，6mmol)和二甲基亚砜(5mL)。在45℃下搅拌所述反应混合物约1小时，然后冷却至室温。加入甘氨酸甲酯盐酸盐(1.15g，12mmol)，然后滴加二异丙基乙胺(3.2mL，19mmol)。然后在室温下搅拌所述混合物2.5小时，之后加水(70mL)。将所述反应烧瓶的内容物冷却至0℃-5℃，加入1N HCl直至溶液pH为约2。用二氯甲烷(100mL)萃取所述溶液，有机层用MgSO₄干燥16小时。加入硅胶(3g)，将所述溶液制浆2小时，然后过滤除去所述固体。在减压下将滤液浓缩至干燥，所得的残余物在甲醇(10mL)中制浆，持续2小时。过滤收集所得的固体，将其用冷甲醇(20mL)洗涤，然后用己烷洗涤，干燥所得的滤饼以提供所需要的产物。

酯前药{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-基]氨基}乙酸甲酯，11，可通过在方案I步骤(e)中概述的且描述于实施例1中的操作转化成所述公开的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸，6。

下文方案IV概述了且实施例4描述了用于制备所述公开的HIF-2α稳定剂的酰胺前药的操作的另一个非限制性实例。

方案IV

试剂和条件：(a)EDCI，HOBt，DIPEA，DMF；rt。

实施例4

5-(3-氟苯基)-N-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺(12)

5-(3-氟苯基)-N-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺(6)的制备：在室温下在N₂下，向5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羧酸，10，(699mg，3mmol)的DMF(20mL)溶液中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)(0.925g，5.97mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.806g，5.97mmol)。将所得的溶液搅拌15分钟，然后加入2-氨基乙酰胺盐酸盐(0.66g，5.97mmol)和二异丙基乙胺(1.56ml，8.96mmol)。所述反应通过TLC监测，当反应结束时，所述反应混合物在减压下浓缩并加入H₂O。所需要的产物可通过正常的后处理来分离。

本公开内容还包括所述公开的稳定剂的可药用盐。下文是制备可药用盐的非限制性实例，如方案V所述。

方案V

实施例5

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸钠(13)

向含有NaHCO₃(41.09mg)的小瓶中加入{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸(6)的丙酮溶液(0.64mL的400mg样品在5.12mL丙酮中)。搅拌所述溶液，通过真空浓缩分离所需要的产物。

方法

熟知的是，癌生长和转移并不仅仅受控于癌细胞中转移促进基因或转移抑制基因的异常调节。癌细胞和基质细胞之间的相互作用已经显示出促进癌生长和转移。在肿瘤内发现的巨噬细胞称为肿瘤相关巨噬细胞(TAM)，其是基质细胞的关键成员(参见，Leek RD，HarrisAL，“Tumour associated macrophages in breast cancer，”J MammGland Biol Neoplasia7：177-189，2002和Lewis CE，Murdoch C.，“Macrophage responses to hypoxia：implications for tumorprogression and anti-cancer therapies.”Am J Pathol167：627-635，2005)。TAM衍生自被募集到肿瘤中的外周血单核细胞。一旦被癌细胞激活，TAM可释放多种因子，尤其是，生长因子、蛋白水解酶、细胞因子和炎症介质。这些因子中的许多是促进癌细胞转移中的关键试剂；事实上，广泛的TAM浸润已经显示出与多种人类癌症中的癌症转移和预后不良有关。TAM通过若干种机制促进癌症转移，包括肿瘤血管发生、肿瘤生长以及肿瘤细胞迁移和浸润。因此，控制由TAM释放和/或刺激的多种因子，即VEGF是减少、停止或预防肿瘤生长和癌细胞转移的重要方法。

熟知的是，通过肿瘤浸润性巨噬细胞在响应低氧肿瘤微环境而分泌血管内皮生长因子(VEGF)可诱导血管形成(血管发生)，这导致肿瘤生长和转移增加。之前已经证明，除了产生VEGF，低氧条件下用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激的单核吞噬细胞还分泌高水平的可溶形式的VEGF受体(sVEGFR-1)，所述VEGF受体可中和VEGF并抑制生物学活性(Eubank TD，et al.，“GM-CSF inducesexpression of soluble VEGF receptor-1from human monocytes andinhibits angiogenesis in mice，”Immunity，2004；21(6)：8331-842)。另外，发现低氧诱导因子-1α(HIF-1α)控制巨噬细胞产生VEGF，而低氧诱导因子-2α(HIF-2α)控制巨噬细胞产生sVEGFR-1，从而证明HIF在调节血管发生中的相反作用。此外，HIF-1α通过其对VEGF的作用而显示出促血管生成行为，HIF-2α通过诱导产生内源性VEGF抑制剂sVEGFR-1而显示出抗血管生成行为(Eubank TD，et al.，“Opposingroles for HIF-1{alpha}and HIF-2{alpha}in the regulation ofangiogenesis by mononuclear phagocytes，”Blood，2011；117(1)：323-332)。因此，HIF-1α和HIF-2α在血管发生和肿瘤生长的调节中起特定的且独立的作用。

低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α是组成型转录的；然而，两者都通过起始于关键的HIF脯氨酸氨基酸的羟基化的过程而快速降解。脯氨酰羟化酶域(PHD)蛋白(即4-脯氨酰羟化酶)有三种已知的亚型，各亚型起到降解不同HIF的作用。例如，PHD2使HIF-1α羟基化，而PHD3使HIF-2α羟基化。因为稳定HIF-1α增加了VEGF，因此抑制PHD2增加了血管发生。相反地，稳定HIF-2α通过巨噬细胞产生sVEGFR-1而减少了VEGF，抑制PHD3抑制了血管发生并提供用于治疗癌症的方法。(脯氨酰羟基化产生泛素连接酶复合体——含有von Hippel-Lindau(VHL)肿瘤抑制蛋白——的结合位点，这导致HIFα破坏。另外，HIFα转录激活作用还受到通过FIH(抑制因子HIF)进行的天冬酰胺羟基化的调节，其影响共激活因子p300和CBP的募集。因此，PHD羟基化HIF开启了耗尽细胞水平的HIF的不可逆过程。)

本文公开了通过稳定HIF-2α而影响肿瘤生长的方法。不希望囿于理论，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸通过抑制PHD3而稳定HIF-2α，从而使得巨噬细胞(和肿瘤中可能的其他细胞，包括癌细胞和其他间质细胞)分泌更高量的VEGF抑制剂sVEGFR-1。

除了已知的sVEGFR-1的调节，HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸——出人意料地下调了低氧胚胎成纤维细胞中的VEGF(参见，图1)。该作用在缺少HIF-1α的胚胎成纤维细胞中仍然存在。

本文公开了通过稳定HIF-2α而影响肿瘤生长的方法。不希望囿于理论，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸通过抑制PHD3而稳定HIF-2α，从而出人意料地抑制肿瘤细胞(包括癌细胞和间质细胞)中的VEGF产生。

在最近几年中，Warburg假说再次获得了关注，这归因于将受损的线粒体功能以及受损的呼吸作用与肿瘤细胞的生长、分裂和扩张联系在一起的多个发现。身体常常通过细胞凋亡——一种涉及线粒体的自毁机制——来杀死损伤的细胞，但是该机制在其中线粒体被关闭的癌细胞中可能不起作用。癌细胞中线粒体的重新激活可重新启动它们的细胞凋亡程序。除了简单地是对受损的呼吸作用的响应以外，增强肿瘤细胞中的糖酵解还可提供细胞复制所需的含碳构件(buildingblock)。

除了下调VEGF以外，HIF-2α稳定剂{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸出人意料地下调了PGK——低氧胚胎成纤维细胞中的一种关键的糖酵解酶(参见，图2)。该作用在缺少HIF-1α的胚胎成纤维细胞中仍然存在。

本文公开了通过稳定HIF-2α而影响肿瘤生长的方法。不希望囿于理论，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸通过抑制PHD3而稳定HIF-2α，从而出人意料地抑制肿瘤细胞中的PGK产生。

所述公开的HIF-2α稳定剂及其前药可用于预防、减弱(abate)、最小化、控制和/或减少(lessen)人和动物中的肿瘤生长和/或肿瘤转移。所述公开的HIF-2α稳定剂及其前药还可用于使原发性肿瘤生长的速率变慢。当被给予给需要治疗的受试者时，所述公开的HIF-2α稳定剂及其前药可用于终止癌细胞的扩散。因此，可将本文公开的HIF-2α稳定剂及其前药作为联合治疗的一部分与一种或多种药物或其他药剂一起给予。当用作联合治疗的一部分时，由所述公开的HIF-2α稳定剂及其前药提供的转移降低和原发性肿瘤生长减少使得使用任何正在用于治疗患者的药剂或药物治疗变得更有效和高效率。另外，通过所述公开的HIF-2α稳定剂及其前药控制转移可向受试者提供更强的将疾病限制在一个位置的能力。

所述公开的化合物，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸，其盐、酯和酰胺前药具有抗肿瘤发生特性是因为所述化合物：

1.使细胞在低氧条件下使存在的血管内皮生长因子(VEGF)的量显著减少，从而除去在肿瘤微环境中刺激血管发生的一个因素，并因此降低了肿瘤细胞使用血管发生作为提供生长用营养素的手段的能力。这一事实在图1A和1B中得到证明；

2.使细胞在低氧条件下展现出细胞中存在的磷酸甘油酸酯激酶的量的显著减少，其中肿瘤细胞已经显示出不会使用氧化磷酸化作为能量来源，而是使用糖酵解作为能量来源。因此，这除去或降低了肿瘤细胞产生生长用能量的能力。这一事实在图2A和2B中得到证明；和

3.引发对VEGF的竞争受体s-VEGFR1(可溶性VEGF)的刺激，从而减少可刺激血管发生的VEGF的量。这一事实在图10中得到证明。

因此，所述公开的化合物提供了对肿瘤细胞的三方面攻击；克服PGK从而消除能量的原始来源，减少VEGF从而提供肿瘤细胞通过血管发生获取营养素和血供的能力下降，以及通过增加s-VEGF进一步降低肿瘤诱导血管发生的能力。

本文公开了防止恶性肿瘤或其他癌细胞的转移以及降低肿瘤生长的速率的方法。所述方法包括给予被诊断患有恶性肿瘤或癌细胞的受试者或具有肿瘤或癌细胞的受试者有效量的一种或多种所述公开的化合物。例如，治疗被诊断患有恶性肿瘤或癌细胞的受试者的方法，包括给予所述受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。在另一实例中，治疗具有恶性肿瘤或癌细胞的受试者的方法，包括给予所述受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

本文公开了稳定低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的方法，包括给予受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。例如，稳定低氧诱导因子2α(HIF-2α)的方法，包括给予受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

本文还公开了治疗癌症的方法，包括给予受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。例如，治疗癌症的方法，包括给予受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

本文还公开了减少患有癌症的受试者中的肿瘤血管发生的方法，包括给予受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。例如，减少患有癌症的受试者中肿瘤血管发生的方法，包括给予受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

本文还又公开了减少被诊断患有癌症的受试者中的肿瘤血管发生的方法，包括给予受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。例如，减少被诊断患有癌症的受试者中的肿瘤血管发生的方法，包括给予受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

本文还又公开了通过抑制VEGF与VEGFR结合而在体外、体内或间接体内(ex vivo)减少细胞中的血管内皮生长因子(VEGF)的方法，包括给予所述细胞有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。在一个实施方案中，所述细胞是癌细胞。在另一个实施方案中，所述细胞是人细胞。在又一实施方案中，所述细胞是人癌细胞。例如，在体外、体内或间接体内减少细胞中的血管内皮生长因子(VEGF)的方法，包括给予所述细胞有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

本文还公开了在体外、体内或间接体内增加细胞的可溶性血管内皮生长因子受体-1(sVEGF-1)的分泌的方法，包括给予所述细胞有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。在一个实施方案中，所述细胞是肿瘤相关细胞。在另一个实施方案中，所述细胞是人肿瘤相关细胞。在又一实施方案中，所述细胞是人癌细胞。例如，在体外、体内或间接体内增加细胞的可溶性血管内皮生长因子受体-1(sVEGF-1)的分泌的方法，包括给予所述细胞有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸。

还又公开了控制受试者中肿瘤生长的方法，包括给予所述受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药。

本文公开了所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药用于制备用于治疗癌症的药剂的用途。例如，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸用于制备用于治疗癌症的药剂的用途。

本文还公开了所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药用于制备用于防止恶性肿瘤或其他癌细胞转移和用于使肿瘤生长变慢的的药剂的用途。例如，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸用于制备用于防止恶性肿瘤或其他癌细胞转移和用于使肿瘤生长变慢的药剂的用途。

本文公开了所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药用于治疗癌症的用途。例如，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸用于治疗癌症的用途。

本文还公开了所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药用于防止恶性肿瘤或其他癌细胞转移和用于使肿瘤生长变慢的用途。例如，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸用于防止恶性肿瘤或其他癌细胞转移和用于使肿瘤生长变慢的用途。

本文还又公开了所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药用于减少肿瘤血管发生的用途。例如，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸用于治疗减少肿瘤血管发生的用途。

本文还又公开了所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药用于制备用于减少肿瘤血管发生的药剂的用途。例如，{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸用于制备用于治疗减少肿瘤血管发生的药剂的用途。

本文还又公开了治疗癌症的方法，包括给予受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药以及有效量的一种或多种化疗剂，其中所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药与所述一种或多种化疗剂以任意顺序给予。例如，治疗癌症的方法，包括给予受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸以及有效量的一种或多种化疗剂。化疗剂的非限制性实例包括泰素(taxol)、IL-2、吉西他滨(gemcitabine)、厄洛替尼(erlotinib)、盐酸多柔比星脂质体(doxil)、伊立替康(irinortecan)和贝伐单抗(bevacizumab)。

本文还又公开了防止癌细胞转移的方法，包括给予患有癌症的受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药以及有效量的一种或多种化疗剂，其中所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药与所述一种或多种化疗剂以任意顺序给予。例如，防止癌细胞转移的方法，包括给予患有癌症的受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸以及有效量的一种或多种化疗剂。化疗剂的非限制性实例包括泰素、IL-2、吉西他滨、厄洛替尼、盐酸多柔比星脂质体、伊立替康和贝伐单抗。

本文还又公开了治疗被诊断患有癌症的受试者的方法，包括给予被诊断患有癌症的受试者有效量的所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药以及有效量的一种或多种化疗剂，其中所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药与所述一种或多种化疗剂以任意顺序给予。例如，治疗被诊断患有癌症的受试者的方法，包括给予被诊断患有癌症的受试者有效量的{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸以及有效量的一种或多种化疗剂。化疗剂的非限制性实例包括泰素、IL-2、吉西他滨、厄洛替尼、盐酸多柔比星脂质体、伊立替康和贝伐单抗。可通过所述公开的方法和组合物治疗的癌症的非限制性实例如下：急性成淋巴细胞瘤(Acute Lymphoblastic)；急性髓性白血病(Acute MyeloidLeukemia)；肾上腺皮质癌(Adrenocortical Carcinoma)；儿童肾上腺皮质癌(Adrenocortical Carcinoma.Childhood)；附件癌(AppendixCancer)；基底细胞癌(Basal Cell Carcinoma)；肝外胆管癌(Bile DuctCancer，Extrahepatic)；膀胱癌(Bladder Cancer)；骨癌(Bone Cancer)；骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤(Osteosarcoma and Malignant FibrousHistiocytoma)；儿童脑干胶质瘤(Brain Stemglioma，Childhood)、成人脑瘤(Brain Tumor，Adult)；儿童脑干胶质瘤脑瘤(Brain Tumor，BrainStem Glioma，Childhood)；非典型畸胎样中枢神经系统脑瘤/儿童杆状肿瘤(Brain Tumor，Central Nervous System AtypicalTeratoid/Rhabdoid Tumor，Childhood)；中枢神经系胚组织瘤(CentralNervous System Embryonal Tumors)；小脑星形细胞瘤(CerebellarAstrocytoma)；大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤(CerebralAstrocytoma/Malignantglioma)；颅咽管瘤(Craniopharyngioma)；成室管膜细胞瘤(Ependymoblastoma)；室管膜细胞瘤(Ependymoma)；成神经管细胞瘤(Medulloblastoma)；髓上皮瘤(Medulloepithelioma)；中度分化的松果体实质瘤(Pineal Parenchymal Tumors of IntermediateDifferentiation)；幕上原始神经外胚层肿瘤和成松果体细胞瘤(Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors andPineoblastoma)；视通路和下丘脑神经胶质瘤(Visual Pathway andHypothalamic Glioma)；大脑和脊髓瘤(Brain and Spinal CordTumors)；乳癌(Breast C ancer)；支气管瘤(Bronchial Tumors)；伯基特淋巴瘤(Burkitt Lymphoma)；良性肿瘤(Carcinoid Tumor)；胃肠良性肿瘤(Carcinoid Tumor，Gastrointestinal)；中枢神经系统非典型畸胎瘤样/横纹肌样瘤(Central Nervous System Atypical Teratoid/RhabdoidTumor)；中枢神经细胞胚胎性瘤(Central Nervous System EmbryonalTumors)；中枢神经系统淋巴瘤(Central Nervous System Lymphoma)；小脑星形细胞瘤(Cerebellar Astrocytoma)；儿童大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤(Cerebral Astrocytoma/Malignant Glioma，Childhood)；宫颈癌(Cervical Cancer)；儿童脊索瘤(Chordoma，Childhood)；慢性淋巴细胞性白血病(Chronic Lymphocytic)；慢性髓细胞性白血病(Chronic Myelogenous Leukemia)；慢性骨髓增生病(ChronicMyeloproliferative Disorders)；结肠癌(Colon Cancer)；结肠直肠癌(Colorectal Cancer)；颅咽管瘤(Craniopharyngioma)；皮肤T细胞淋巴瘤(Cutaneous T-CeIl Lymphoma)；食道癌(Esophageal Cancer)；尤因瘤(Ewing Family of Tumors)；性腺外恶性生殖细胞肿瘤(Extragonadal Germ Cell Tumor)；肝外胆管癌(Extrahepatic Bile DuctCancer)；眼癌，眼内黑素瘤(Eye Cancer，Intraocular Melanoma)；眼癌，视网膜母细胞瘤(Eye Cancer，Retinoblastoma)；胆囊癌(Gallbladder Cancer)；胃癌(Gastric(Stomach)Cancer)；胃肠良性肿瘤(Gastrointestinal Carcinoid Tumor)；胃肠间质瘤(GastrointestinalStromal Tumor(GIST))；颅外生殖细胞瘤(Germ Cell Tumor，Extracranial)；性腺外生殖细胞瘤(Germ Cell Tumor.Extragonadal)；卵巢生殖细胞瘤(Germ Cell Tumor，Ovarian)；妊娠滋养层瘤(Gestational Trophoblastic Tumor)；神经胶质瘤(Glioma)；儿童脑干神经胶质瘤(Glioma，Childhood Brain Stem)；神经胶质瘤，儿童大脑星形细胞瘤(Glioma，Childhood Cerebral Astrocytoma)；儿童视通路和下丘脑神经胶质瘤(Glioma，Childhood Visual Pathway andHypothalamic)；毛细胞白血病(Hairy Cell Leukemia)；头颈癌(Headand Neck Cancer)；肝细胞(肝)癌(Hepatocellular(Liver)Cancer)；朗格汉斯细胞组织细胞增多病(Histiocytosis，Langerhans Cell)；何杰金淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma)；下咽癌(Hypopharyngeal Cancer)；下丘脑和视通路神经胶质瘤(Hypothalamic and Visual Pathway Glioma)；眼内黑素瘤(Intraocular Melanoma)；胰岛细胞瘤(Islet Cell Tumor)；肾(肾细胞)癌(Kidney(Renal Cell)Cancer)；朗格汉斯细胞组织细胞增多病(Langerhans Cell Histiocytosis)；喉癌(Laryngeal Cancer)；急性成淋巴细胞性白血病(Leukemia，Acute Lymphoblastic)；急性髓性白血病(Leukemia，Acute Myeloid)；慢性淋巴细胞性白血病(Leukemia，Chronic Lymphocytic)；慢性髓细胞性白血病(Leukemia，ChronicMyelogenous)；毛细胞性白血病(Leukemia，Hairy Cell)；唇和口腔癌(Lip and Oral Cavity Cancer)；肝癌；非小细胞肺癌(Lung Cancer，Non-Small Cell)；小细胞肺癌(Lung Cancer，Small Cell)；艾滋病相关的淋巴瘤(Lymphoma，AIDS-Related)；伯基特淋巴瘤(Lymphoma，Burkitt)；皮肤T细胞淋巴瘤(Lymphoma，Cutaneous T-CeIl)；何杰金淋巴瘤(Lymphoma，Hodgkin)；非何杰金淋巴瘤(Lymphoma，Non-Hodgkin)；原发性中枢神经系统淋巴瘤(Lymphoma，PrimaryCentral Nervous System)；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Macroglobulinemia，

)；骨恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤(Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone and Osteosarcoma)；成神经管细胞瘤(Medulloblastoma)；黑素瘤(Melanoma)；眼内(眼)黑素瘤(Melanoma，Intraocular(Eye))；梅克尔细胞癌(Merkel CellCarcinoma)；间皮瘤(Mesothelioma)；潜伏的原发性转移性鳞片状颈癌(Metastatic Squamous Neck Cancer with Occult Primary)；口腔癌(Mouth Cancer)；儿童多发性内分泌腺瘤综合征(Multiple EndocrineNeoplasia Syndrome，(Childhood))；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤(MultipleMyeloma/Plasma cell Neoplasm)；蕈样真菌病(Mycosis Fungoides)；骨髓异常增生综合征(Myelodysplastic Syndromes)；骨髓异常增生/骨髓增生病(Myelodysplastic/Myeloproliferative Diseases)；慢性髓细胞性白血病(Myelogenous Leukemia，Chronic)；成人急性髓性白血病(MyeloidLeukemia，Adult Acute)；儿童急性髓性白血病(Myeloid Leukemia，Childhood Acute)；多发性骨髓瘤(Myeloma，Multiple)；慢性骨髓增生病(Myeloproliferative Disorders，Chronic)；鼻腔和鼻旁窦癌(NasalCavity and Paranasal Sinus Cancer)；鼻咽癌(NasopharyngealCancer)；神经母细胞瘤(Neuroblastoma)；非小细胞肺癌(Non-SmallCell Lung Cancer)；口腔癌(Oral Cancer)；口腔癌(Oral CavityCancer)；口咽癌(Oropharyngeal Cancer)；骨肉瘤和骨的恶性纤维组织细胞瘤(Osteosarcoma and Malignant Fibrous Histiocytoma ofBone)；卵巢癌(Ovarian Cancer)；卵巢上皮癌(Ovarian EpithelialCancer)；卵巢生殖细胞癌(Ovarian Germ Cell Tumor)；卵巢低度恶性癌(Ovarian Low Malignant Potential Tumor)；胰腺癌(PancreaticCancer)；胰腺癌，胰岛细胞癌(Pancreatic Cancer，Islet Cell Tumors)；乳头状瘤病(Papillomatosis)；甲状旁腺癌(Parathyroid C ancer)；阴茎癌(Penile Cancer)；咽癌(Pharyngeal Cancer)；嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma)；中度分化的松果体实质瘤(Pineal ParenchymalTumors of Intermediate Differentiation)；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤(Pineoblastoma and Supratentorial PrimitiveNeuroectodermal Tumors)；垂体瘤(Pituitary Tumor)；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤(Plasma Cell Neoplasm/Multiple Myeloma)；胸膜肺母细胞瘤(Pleuropulmonary Blastoma)；原发性中枢神经系统淋巴瘤(PrimaryCentral Nervous System Lymphoma)；前列腺癌(Prostate Cancer)；直肠癌(Rectal Cancer)；肾细胞(肾脏)癌(Renal Cell(Kidney)Cancer)；肾盂和输尿管移行细胞癌(Renal Pelvis and Ureter，Transitional CellCancer)；涉及染色体15上的NUT基因的呼吸道癌(Respiratory TractCarcinoma Involving the NUT gene on Chromosome15)；视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma)；横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma)；唾腺癌(Salivary gland Cancer)；尤因瘤肉瘤(Sarcoma，Ewing Family ofTumors)；卡波西肉瘤(Sarcoma，Kaposi)；软组织肉瘤(Sarcoma，SoftTissue)；子宫肉瘤(Sarcoma，Uterine)；塞扎里综合征(SézarySyndrome)；皮肤癌(非黑素瘤)(Skin Cancer(Nonmelanoma))；皮肤癌(黑素瘤)(Skin Cancer(Melanoma))；梅克尔细胞皮肤癌(SkinCarcinoma.Merkel Cell)；小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer)；小肠癌(Small Intestine Cancer)；软组织肉瘤(Soft Tissue Sarcoma)；鳞状细胞癌，潜伏的原发性转移性鳞片状颈癌(Squamous Cell Carcinoma，Squamous Neck C ancer with Occult Primary，Metastatic)；胃癌(Stomach(Gastric)Cancer)；幕上原始神经外胚层瘤(SupratentorialPrimitive Neuroectodermal Tumors)；皮肤T细胞淋巴瘤(T-CeIlLymphoma.Cutaneous)；睾丸癌(Testicular Cancer)；喉癌(ThroatCancer)；胸腺癌(Thymoma and Thymic Carcinoma)；甲状腺癌(Thyroid Cancer)；肾盂和尿管的移行细胞癌(Transitional Cell Cancerof the Renal Pelvis and Ureter)；妊娠滋养层癌(Trophoblastic Tumor，Gestational)；尿道癌(Urethral Cancer)；子宫内膜子宫癌(UterineCancer，Endometrial)；子宫肉瘤(Uterine Sarcoma)；阴道癌(VaginalCancer)；外阴癌(Vulvar Cancer)；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(

Macroglobulinemia)和肾母细胞瘤(Wilms Tumor)。

本文还公开了治疗癌症的方法，包括给予受试者有效量的下式的化合物：

或其可药用盐。

所述癌症可以是本文描述的任何癌症，包括VEGF依赖的癌症。因为氧扩散距离为约150μm，所以包括生长超过2mm³的实体瘤的细胞在不接近附近血管以交换氧和废物的情况下不能增殖。在该情况中，低氧稳定了所述肿瘤细胞中的HIF-1α并产生血管内皮生长因子(VEGF)，所述血管内皮生长因子是其中包括血管的内皮细胞的增殖因子。因为VEGF是血管发生的关键调节因子，所以通过可溶形式的VEGF受体-1(sVEGFR-1)隔离VEGF可调节血管发生。通过一种或多种本文公开的化合物抑制脯氨酰羟化酶(PHD3)可稳定HIF-2α。虽然肿瘤细胞自身不产生sVEGFR-1，但是本文公开的化合物可以增加来自单核细胞和巨噬细胞的sVEGFR-1的产生，所述单核细胞和巨噬细胞响应炎症信号到达所述肿瘤。因此，任何依赖VEGF以增殖的肿瘤都是本文公开的化合物的潜在靶标，因为它们的活性可部分地增加sVEGFR-1产生。

组合物

本文公开了可用于治疗受试者中的癌症，治疗被诊断患有癌症的受试者中的癌症，用于防止受试者中的肿瘤生长，用于防止受试者中的癌细胞转移的组合物，所述组合物包含有效量的一种或多种本文公开的化合物。本文还公开了可用于治疗人或其他哺乳动物中的肿瘤的组合物。

一个方面涉及一种组合物，其包含：

a)有效量的一种或多种所述公开的HIF-2α稳定剂和/或其前药；和

b)一种或多种可药用成分。

另一个方面涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的一种或多种另外的化疗剂；

其中，所述公开的化合物和所述一种或多种另外的化疗剂可一起给予或以任意顺序给予。

一个实施方案涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的泰素；

其中，所述公开的化合物和泰素可一起给予或以任意顺序给予。

另一个实施方案涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的吉他西滨；

其中，所述公开的化合物和吉他西滨可一起给予或以任意顺序给予。

另一个实施方案涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的厄洛替尼；

其中，所述公开的化合物和厄洛替尼可一起给予或以任意顺序给予。

又一个实施方案涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的盐酸多柔比星脂质体；

其中，所述公开的化合物和盐酸多柔比星脂质体可一起给予或以任意顺序给予。

又一个实施方案涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的伊立替康；

其中，所述公开的化合物和伊立替康可一起给予或以任意顺序给予。

又一个实施方案涉及一种组合物，其包含：

b)有效量的贝伐单抗；

其中，所述公开的化合物和贝伐单抗可一起给予或以任意顺序给予。

“化疗剂”或“化疗化合物”是可用于治疗癌症的化学化合物。可与本文公开的化合物结合使用的化疗抗癌剂(chemotherapeuticcancer agent)包括但不局限于有丝分裂抑制剂(长春花生物碱)。这些化疗抗癌剂包括长春新碱、长春碱(vinblastine)、脱乙酰长春花碱(vindesine)和Navelbine^TM(长春瑞滨-5′-去甲脱氢长春碱(noranhydroblastine))。在其他实施方案中，化疗抗癌剂包括拓扑异构酶I抑制剂，例如喜树碱化合物。本文使用的“喜树碱化合物”包括Camptosar^TM(盐酸伊立替康)、Hycamtin^TM(盐酸拓扑替康(topotecan))和从喜树碱及其类似物衍生的其他化合物。可用于本内容的方法和组合物中的另一类化疗抗癌剂是鬼臼毒素(podophyllotoxin)衍生物，例如表鬼臼毒素吡喃葡糖苷(etoposide)、表鬼臼毒素噻吩糖苷(teniposide)和米托鬼臼肼(mitopodozide)。本公开内容还包括其他已知为烷化剂的化疗抗癌剂，其使肿瘤细胞中的遗传物质烷基化。这些化疗抗癌剂包括但不局限于顺铂(cisplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、氮芥(nitrogen mustard)、三亚甲基硫磷酰胺(trimethylene thiophosphoramide)、卡莫司汀(carmustine)、白消安(busulfan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、belustine、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、chlomaphazin和达卡巴嗪(dacarbazine)。本公开内容包括作为化疗剂的抗代谢物。这些类型的试剂的实例包括胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氨甲喋呤(methotrexate)、巯嘌呤(mercaptopurine)、硫唑嘌呤(azathioprime)和丙卡巴肼(procarbazine)。可用于本公开内容的方法和组合物的另一类化疗抗癌剂包括抗生素。非限制性实例包括阿霉素(doxorubicin)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、红比霉素(daunorubicin)、光神霉素(mithramycin)、丝裂霉素(mitomycin)、丝裂霉素C和道诺霉素(daunomycin)。这些化合物有市售的各种脂质体制剂。本发明还包括其他化疗抗癌剂，其包括但不局限于抗肿瘤抗体、达卡巴嗪(dacarbazine)、5-氮杂胞苷(azacytidine)、氨吖啶(amsacrine)、美法仑(melphalan)、异环磷酰胺(ifosfamide)和米托蒽醌(mitoxantrone)。

本文公开的化合物可单独给予或与其他抗肿瘤剂结合给予，所述其他抗肿瘤剂包括细胞毒性剂/抗肿瘤剂和抗血管生成剂。细胞毒性剂/抗肿瘤剂被定义为攻击并杀死癌细胞的试剂。一些细胞毒性剂/抗肿瘤剂是烷化剂，其使肿瘤细胞中的遗传物质烷基化，例如，顺铂、环磷酰胺、氮芥、三亚甲基硫磷酰胺、卡莫司汀、白消安、苯丁酸氮芥、belustine、尿嘧啶氮芥、chlomaphazin和达卡巴嗪。其他细胞毒性剂/抗肿瘤试剂是肿瘤细胞的抗代谢物，例如胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿嘧啶、氨甲喋呤、巯嘌呤、硫唑嘌呤和丙卡巴肼。其他细胞毒性剂/抗肿瘤剂是抗生素，例如，阿霉素、博来霉素、放线菌素D、红比霉素、光神霉素、丝裂霉素、丝裂霉素C和道诺霉素。这些化合物有多种市售脂质体制剂。其他细胞毒性剂/抗肿瘤剂是有丝分裂抑制剂(长春花生物碱)。这些包括长春新碱、长春碱和表鬼臼毒素吡喃葡糖苷。多种细胞毒性剂/抗肿瘤剂包括泰素及其衍生物、L-天冬酰胺酶、抗肿瘤抗体、达卡巴嗪、5-氮杂胞苷、氨吖啶、美法仑、VM-26、异环磷酰胺、米托蒽醌和脱乙酰长春花碱。

本领域技术人员熟知抗血管生成剂。适用于本公开内容的方法和组合物的抗血管生成剂包括抗VEGF抗体(包括人化的和嵌合的抗体)、抗VEGF适体和反义寡核苷酸。其他已知的血管生成抑制剂包括血管抑制素、内皮抑制素、干扰素、白细胞介素1(包括α和β)、白细胞介素12、视黄酸和金属蛋白酶1和2的组织抑制剂(TIMP-1和-2)。还可使用小分子，包括拓扑异构酶，例如雷佐生(razoxane)——具有抗血管生成活性的拓扑异构酶II抑制剂。

可与所述公开的化合物结合使用的其他抗癌剂包括但不局限于：阿西维辛(acivicin)；阿柔比星(aclarubicin)；盐酸阿考达唑(acodazolehydrochloride)；阿克罗宁(acronine)；阿多来新(adozelesin)；阿地白介素(aldesleukin)；六甲蜜胺(altretamine)；安波霉素(ambomycin)；醋酸阿美蒽醌(ametantrone acetate)；氨基苯乙哌酮(aminoglutethimide)；氨吖啶(amsacrine)；阿那曲唑(anastrozole)；安曲霉素(anthramycin)；天冬酰胺酶(asparaginase)；曲林菌素(asperlin)；阿扎胞苷(azacitidine)；氮替派(azetepa)；固氮霉素(azotomycin)；巴马司他(batimastat)；苄替派(benzodepa)；比卡鲁胺(bicalutamide)；盐酸双蒽生(bisantrene hydrochloride)；bisnafidedimesylate；比折来新(bizelesin)；硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)；brequinar sodium；溴匹立明(bropirimine)；白消安；放线菌素C(cactinomycin)；二甲睾酮(calusterone)；卡醋胺(caracemide)；卡贝替姆(carbetimer)；卡铂(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine)；盐酸卡柔比星(carubicin hydrochloride)；卡折来新(carzelesin)；西地芬戈(cedefingol)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；西罗霉素(cirolemycin)；顺铂；克拉屈滨(cladribine)；甲磺酸克立那托(crisnatolmesylate)；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸红比霉素；地西他滨(decitabine)；右奥马铂(dexormaplatin)；地扎胍宁(dezaguanine)；甲磺酸地扎胍宁(dezaguanine mesylate)；地吖醌(diaziquone)；多西他赛(docetaxel)；阿霉素；盐酸阿霉素；屈洛昔芬(droloxifene)；柠檬酸屈洛昔芬柠(droloxifene citrate)；丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)；达佐霉素(duazomycin)；依达曲沙(edatrexate)；盐酸依氟鸟氨酸(eflornithine hydrochloride)；依沙芦星(elsamitrucin)；恩洛铂(enloplatin)；恩普氨酯(enpromate)；依匹哌啶(epipropidine)；盐酸表柔比星(epirubicin hydrochloride)；厄布洛唑(erbulozole)；盐酸伊索比星(esorubicin hydrochloride)；雌莫斯汀(estramustine)；雌莫司汀磷酸酯钠(estramustine phosphate sodium)；依他硝唑(etanidazole)；表鬼臼毒素吡喃葡糖苷(etoposide)；磷酸表鬼臼毒素吡喃葡糖苷；氯苯乙嘧胺(etoprine)；盐酸法倔唑(fadrozolehydrochloride)；法扎拉宾(fazarabine)；芬维A胺(fenretinide)；氟尿苷(floxuridine)；磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；氟西他滨(flurocitabine)；磷喹酮(fosquidone)；福司曲星钠(fostriecin sodium)；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨；羟基脲(hydroxyurea)；盐酸伊达比星(idarubicin hydrochloride)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊莫福新(ilmofosine)；白细胞介素II(包括重组白细胞介素II，或rIL2)；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素y-Ib；异丙铂(iproplatin)；盐酸伊立替康(irinotecan hydrochloride)；醋酸兰瑞肽(lanreotide acetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙立德(leuprolide acetate)；盐酸立阿唑(liarozole hydrochloride)；洛美曲索钠(lometrexol sodium)；洛莫司汀(lomustine)；盐酸洛索蒽醌(losoxantrone hydrochloride)；马索罗酚(masoprocol)；美登素(maytansine)；盐酸氮芥(mechlorethaminehydrochloride)；醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)；醋酸美仑孕酮(melengestrol acetate)；美法仑；美诺立尔(menogaril)；巯嘌呤；氨甲喋呤；氨甲喋呤钠；氯苯氨啶(metoprine)；美妥替哌(meturedepa)；米度胺(mitindomide)；米托卡星(mitocarcin)；丝裂红素(mitocromin)；米托洁林(mitogillin)；米托马星(mitomalcin)；丝裂霉素；米托司培(mitosper)；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌(mitoxantronehydrochloride)；麦考酚酸(mycophenolic acid)；诺考达唑(nocodazole)；诺拉霉素(nogalamycin)；奥马铂(ormaplatin)；奥昔舒仑(oxisuran)；紫杉醇(paclitaxel)；培门冬酶(pegaspargase)；培利霉素(peliomycin)；萘莫司汀(pentamustine)；硫酸培洛霉素(peplomycin sulfate)；培磷酰胺(perfosfamide)；哌泊溴烷(pipobroman)；哌泊舒凡(piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(piroxantrone hydrochloride)；普卡霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；卟吩姆钠(porfimer sodium)；泊非霉素(porfiromycin)；泼尼莫司汀(prednimustine)；盐酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride)；嘌呤霉素(puromycin)；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋林(pyrazofurin)；利波腺苷(riboprine)；罗谷亚胺(rogletimide)；沙芬戈(safingol)；盐酸沙芬戈(safingol hydrochloride)；司莫司汀(semustine)；辛曲秦(simtrazene)；磷乙酰天冬氨酸钠(sparfosatesodium)；司帕霉素(sparsomycin)；盐酸锗螺胺(spirogermaniumhydrochloride)；螺莫司汀(spiromustine)；螺铂(spiroplatin)；链黑霉素(streptonigrin)；链佐星(streptozocin)；磺氯苯脲(sulofenur)；他利霉素(talisomycin)；替可加兰纳(tecogalan sodium)；替加氟(tegafur)；盐酸替洛蒽醌(teloxantrone hydrochloride)；替莫泊芬(temoporfin)；表鬼臼毒素噻吩糖苷；替罗昔隆(teroxirone)；睾内酯(testolactone)；硫咪嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；塞替派(thiotepa)；噻唑呋林(tiazofurin)；替拉扎明(tirapazamine)；柠檬酸托瑞米芬(toremifene citrate)；醋酸曲托龙(trestolone acetate)；磷酸曲西立滨(triciribine phosphate)；三甲曲沙(trimetrexate)；三甲曲沙普糖醛酸(trimetrexate glucuronate)；曲普瑞林(triptorelin)；盐酸妥布氯唑(tubulozole hydrochloride)；尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；乌瑞替派(uredepa)；伐普肽(vapreotide)；维替泊芬(verteporfin)；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；脱乙酰长春花碱；硫酸脱乙酰长春花碱；硫酸长春匹啶(vinepidine sulfate)；硫酸长春苷酯(vinglycinate sulfate)；硫酸长春罗辛(vinleurosine sulfate)；酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate)；硫酸长春罗定(vinrosidine sulfate)；硫酸长春利定(vinzolidine sulfate)；伏氯唑(vorozole)；折尼泊(zeniplatin)；净司他丁(zinostatin)；盐酸佐柔比星(zorubicin hydrochloride)。其他抗癌药物包括但不局限于：20-表-1，25二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙(abiraterone)；阿柔比星；酰基富烯(acylfulvene)；adecypenol；阿多来新(adozelesin)；阿地白介素(aldesleukin)；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺(altretamine)；氨莫司汀(ambamustine)；amidox；氨磷汀(amifostine)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；氨柔比星(amrubicin)；氨吖啶；阿那格雷(anagrelide)；阿那曲唑(anastrozole)；穿心莲内酯(andrographolide)；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯(antarelix)；抗背侧形态发生蛋白1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)；抗雄激素(antiandrogen)，前列腺癌物质(prostatic carcinoma)；抗雌激素物质(antiestrogen)；抗恶性肿瘤物质(antineoplaston)；反义寡核苷酸；蚜肠菌素甘氨酸(aphidicolin glycinate)；细胞凋亡基因调节剂(apoptosisgene modulator)；细胞凋亡调节剂(apoptosis regulator)；脱嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨基酶；asulacrine；阿他美坦(atamestane)；阿莫司汀(atrimustine)；axinastatin1；axinastatin2；axinastatin3；阿扎司琼(azasetron)；阿扎毒素(azatoxin)；重氮酪氨酸(azatyrosine)；baccatin III衍生物；balanol；巴马司他(batimastat)；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢卟吩(benzochlorins)；苯酰星孢素(benzoylstaurosporine)；β-内酰胺衍生物(beta lactam derivatives)；β-alethine；β-克莱霉素(clamycin)B；桦木酸(betulinic acid)；bFGF抑制剂；比卡鲁胺(bicalutamide)；比生群(bisantrene)；二吖丙啶精胺(bisaziridinylspermine)；双奈法德(bisnafide)；bistratene A；比折来新(bizelesin)；breflate；溴匹立明(bropirimine)；布度钛(budotitane)；丁胱亚磺酰亚胺(buthionine sulfoximine)；卡泊三醇(calcipotriol)；calphostin C；喜树碱衍生物；canarypox IL-2；卡培他滨(capecitabine)；酰胺-氨基-三唑(carboxamide-amino-triazole)；羧基酰胺三唑(carboxyamidotriazole)；CaRest M3；CARN700；软骨衍生的抑制剂(cartilage derived inhibitor)；卡折来新(carzelesin)；酪蛋白激酶抑制剂(casein kinase inhibitor(ICOS))；粟精胺(castanospermine)；杀菌肽B(cecropin B)；西曲瑞克(cetrorelix)；二氢卟酚(chlorlns)；磺胺氯喹(chloroq uinoxaline sulfonamide)；西卡前列素(cicaprost)；顺式-卟啉(cis-porphyrin)；克拉屈滨(cladribine)；氯米芬类似物(clomifene analogue)；克霉唑(clotrimazole)；collismycinA；collismycin B；考布他汀A4(combretastatin A4)；考布他汀类似物；conagenin；crambescidin816；克立那托(crisnatol)；自念珠藻环肽(cryptophycin)8；自念珠藻环肽(cryptophycin)A衍生物；curacinA；环戊蒽醌(cyclopentanthraquinone)；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐(cytarabine ocfosfate)；细胞溶解因子(cytolytic factor)；cytostatin；达昔单抗(dacliximab)；地西他滨(decitabine)；脱氢膜海鞘素(dehydrodidemnin)B；地洛瑞林(deslorelin)；地塞米松(dexamethasone)；右异环磷酰胺(dexifosfamide)；右雷佐生(dexrazoxane)；右维拉帕米(dexverapamil)；地吖醌(diaziquone)；膜海鞘素(didemnin)B；3，4-二羟基苯并氧肟酸(didox)；二乙基降精胺(diethylnorspermine)；二氢-5-氮杂胞苷；9-二氢紫杉醇(dihydrotaxol，9-)；dioxamycin；联苯螺莫司汀(diphenylspiromustine)；多西他赛(docetaxel)；二十二醇(docosanol)；多拉司琼(dolasetron)；去氧氟尿苷(doxifluridine)；屈洛昔芬(droloxifene)；屈大麻酚(dronabinol)；倍癌霉素(duocarmycin)SA；依布硒(ebselen)；依考莫司汀(ecomustine)；依地福新(edelfosine)；依决可单抗(edrecolomab)；依氟鸟氨酸(eflornithine)；榄香烯(elemene)；乙嘧替氟(emitefur)；表柔比星；依立雄胺(epristeride)；雌氮芥类似物；雌激素激动剂(estrogen agonist)；雌激素拮抗剂(estrogen antagonist)；依他硝唑(etanidazole)；磷酸表鬼臼毒素吡喃葡糖苷；依西美坦(exemestane)；法倔唑(fadrozole)；法扎拉宾(fazarabine)；芬维A胺(fenretinide)；非格司亭(filgrastim)；非那雄胺(finasteride)；夫拉平度(flavopiridol)；氟卓司汀(flezelastine)；fluasterone；氟达拉滨(fludarabine)；盐酸fluorodaunorunicin；福酚美克(forfenimex)；福美坦(formestane)；福司曲星(fostriecin)；福莫司汀(fotemustine)；钆替沙林(gadolinium texaphyrin)；硝酸镓；加洛他滨(galocitabine)；加尼瑞克(ganirelix)；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；调蛋白(heregulin)；六亚甲基二乙酰胺(hexamethylenebisacetamide)；金丝桃素(hypericin)；依班膦酸盐(ibandronic acid)；伊达比星(idarubicin)；艾多昔芬(idoxifene)；伊决孟酮(idramantone)；伊莫福新(ilmofosine)；伊洛马司他(ilomastat)；咪唑并吖啶酮(imidazoacridone)；咪喹莫特(imiquimod)；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白细胞介素；碘苄胍(iobenguane)；碘阿霉素(iododoxorubicin)；依波米醇，4-(ipomeanol，4-)；伊罗普拉(iroplact)；伊索拉定(irsogladine)；isobengazole；异高软海绵素(isohomohalicondrin)B；依他司琼(itasetron)；j asplakinolide；kahalalide F；片螺素-N三乙酸盐(lamellarin-Ntriacetate)；兰瑞肽(lanreotide)；leinamycin；来格斯汀(lenograstim)；硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)；leptolstatin；来曲唑(letrozole)；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+雌激素+孕酮；亮丙瑞林(leuprorelin)；左旋咪唑(levamisole)；利阿唑(liarozole)；直链多胺类似物(linear polyamine analogue)；亲脂二糖肽；亲脂铂化合物；噻唑啉海洋环肽(lissoclinamide)7；洛铂(lobaplatin)；蚯蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索(lometrexol)；氯尼达明(lonidamine)；洛索蒽醌(losoxantrone)；洛伐他汀(lovastatin)；洛索立滨(loxoribine)；勒托替康(lurtotecan)；lutetium texaphyrin；lysofylline；裂解肽(lyticpeptide)；美坦辛(maitansine)；制甘糖霉素(mannostatin)A；马立马司他(marimastat)；马索罗芬(masoprocol)；乳腺丝抑蛋白(maspin)；溶基质蛋白抑制剂(matrilysin inhibitor)；基质金属蛋白酶抑制剂(matrix metalloproteinase inhibitor)；美诺立尔(menogaril)；麦尔巴隆(merbarone)；美替瑞林(meterelin)；蛋氨酸酶(methioninase)；甲氧氯普胺(metoclopramide)；MIF抑制剂；米非司酮(mifepristone)；米替福新(miltefosine)；米立司亭(mirimostim)；错配双链RNA；米托胍腙(mitoguazone)；二溴卫矛醇(mitolactol)；丝裂霉素类似物；米托萘胺(mitonafide)；有丝分裂毒素成纤维细胞生长因子-月巴皂草毒蛋白(mitotoxin fibroblast growth factor-saporin)；米托蒽醌；莫法罗汀(mofarotene)；莫拉司亭(molgramostim)；人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体；单磷酰脂质A+分枝杆菌细胞壁sk；莫哌达醇(mopidamol)；多重抗药性基因抑制剂；基于多重肿瘤抑制剂-1的疗法(multiple tumorsuppressor1-based therapy)；芥抗癌试剂(mustard anticancer agent)；印度洋海绵(mycaperoxide)B；分枝杆菌细胞壁提取物(mycobacterialcell wall extract)；myriaporone；N-乙酰地那林(N-acetyldinaline)；N-取代苯酰胺；那法瑞林(nafarelin)；nagrestip；纳洛酮+喷他佐新(naloxone+pentazocine)；napavin；naphterpin；那托司亭(nartograstim)；奈达铂(nedaplatin)；奈莫柔比星(nemorubicin)；奈立膦酸(neridronic acid)；中性内肽酶(neutral endopeptidase)；尼鲁米特(nilutamide)；nisamycin；一氧化氮调节剂；氧化氮抗氧化剂(nitroxideantioxidant)；nitrullyn；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽(octreotide)；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮(onapristone)；昂丹司琼(ondansetron)；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导剂(oral cytokine inducer)；奥马铂；奥沙特隆(osaterone)；奥沙利铂(oxaliplatin)；oxaunomycin；紫杉醇(paclitaxel)；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；棕榈酰根霉素(palmitoyl rhizoxin)；帕米膦酸(pamidronic acid)；人参三醇(panaxytriol)；帕诺米芬(panomifene)；副球菌素(parabactin)；帕折普汀(pazelliptine)；培门冬酶(pegaspargase)；培得星(peldesine)；戊聚硫钠(pentosan polysulfate sodium)；喷司他丁(pentostatin)；pentrozole；全氟溴烷(perflubron)；培磷酰胺(perfosfamide)；紫苏子醇(perillylalcohol)；phenazinomycin；苯乙酸；磷酸酶抑制剂；溶血性链球菌制剂(picibanil)；盐酸毛果芸香碱(pilocarpine hydrochloride)；吡柔比星(pirarubicin)；吡曲克辛(piritrexim)；placetin A；placetin B；血纤蛋白溶酶原激活物抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂-三胺复合物；卟吩姆钠(porfimer sodium)；泊非霉素(porfiromycin)；泼尼松(prednisone)；丙基双吖啶酮(propyl bis-acridone)；前列腺素J2(prostaglandin J2)；蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitor)；基于蛋白A的免疫调节剂(protein A-based immune modulator)；蛋白激酶C抑制剂(proteinkinase C inhibitor)；微藻蛋白激酶C抑制剂(protein kinase Cinhibitors，microalgal)；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂(protein tyrosinephosphatase inhibitor)；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂(purine nucleosidephosphorylase inhibitor)；羟基茜草素(purpurin)；吡唑啉吖啶(pyrazoloacridine)；吡哆酸化血红蛋白聚氧乙烯偶联物(pyridoxylatedhemoglobin polyoxyethylene conjugate)；raf拮抗剂；雷替曲塞(raltitrexed)；雷莫司琼(ramosetron)；ras法尼基转移酶抑制剂(rasfarnesyl protein transferase inhibitor)；ras抑制剂(ras inhibitor)；ras-GAP抑制剂；脱甲基瑞提普汀(retelliptine demethylated)；铼Re186依替膦酸(rhenium Re186etidronate)；根霉素(rhizoxin)；核酶(ribozyme)；RII视黄酰胺(RII retinamide)；罗谷亚胺(rogletimide)；rohitukine；罗莫肽(romurtide)；罗喹美克(roquinimex)；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈(safmgol)；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭(sargramostim)；Sdi1模拟物(Sdi1mimetic)；司莫司汀(semustine)；衰老衍生抑制剂1(senescence derived inhibitor1)；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号传导调节剂；单链抗原结合蛋白；西佐喃(sizoffran)；索布佐生(sobuzoxane)；硼卡钠(sodiumborocaptate)；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索钠明(sonermin)；膦门冬酸(sparfosic acid)；spicamycin D；螺莫司汀(spiromustine)；splenopentin；海绵抑制素1(spongistatin1)；角鲨胺(squalamine)；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；stipiamide；溶基质素抑制剂(stromelysin inhibitor)；sulfmosine；超活性血管活性肠肽拮抗剂(superactive vasoactive intestinal peptide antagonist)；suradista；苏拉明(suramin)；八氢吲嗪三醇(swainsonine)；合成糖胺聚糖；他莫司汀(tallimustine)；甲碘他莫昔芬(tamoxifen methiodide)；牛磺莫司汀(tauromustine)；他扎罗汀(tazarotene)；替可加兰钠(tecogalan sodium)；替加氟(tegafur)；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬(temoporfin)；替莫唑胺(temozolomide)；表鬼臼毒素噻吩糖苷；四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)；四唑胺(tetrazomine)；thaliblastine；噻可拉林(thiocoraline)；血小板生成素(thrombopoietin)；血小板生成素模拟物(thrombopoietin mimetic)；胸腺法新(thymalfasin)；胸腺生成素受体激动剂(thymopoietin receptor agonist)；胸腺曲南(thymotrinan)；促甲状腺素；乙基锡初紫红素(tin ethyletiopurpurin)；替拉扎明(tirapazamine)；二氯化二茂钛(titanocenebichloride)；托普西汀(topsentin)；托瑞米芬(toremifene)；全能干细胞因子；转录抑制剂；维生素A酸(tretinoin)；三乙酰胆碱(triacetyluridine)；曲西立滨(triciribine)；三甲曲沙(trimetrexate)；曲普瑞林(triptorelin)；托烷司琼(tropisetron)；妥罗雄脲(turosteride)；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)；UBC抑制剂；乌苯美司(ubenimex)；源自泌尿生殖窦的生长抑制因子(urogenitalsinus-derived growth inhibitory factor)；尿激酶受体拮抗剂(urokinasereceptor antagonist)；伐普肽(vapreotide)；variolin B；载体系统，红细胞基因治疗(vector system，erythrocytegene therapy)；维拉雷琐(velaresol)；藜芦明(veramine)；verdins；维替泊芬(verteporfin)；长春瑞滨(vinorelbine)；vinxaltine；vitaxin；伏氯唑(vorozole)；扎诺特隆(zanoterone)；折尼铂(zeniplatin)；亚苄维C(zilascorb)和净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)。在一个实施方案中，所述抗癌药是5-氟尿嘧啶、泰素或甲酰四氢叶酸(leucovorin)。

过程

Otto Warburg(Warburg O."On the origin of cancer cells，″Science123(3191)：309-14(1956))首次观察到大多数癌细胞通过使用无氧糖酵解产生能量，而不是正常细胞的能量产生效率更高的有氧条件。Xu报道了(Xu R-Het al.，“Inhibition of Glycolysis in Cancer Cells：A Novel Strategy to Overcome Drug Resistance Associated withMitochondrial Respiratory Defect and Hypoxia.”Cancer Res.65：(2)，613-621(2005))低氧是促成“Warburg效应”使得癌细胞能够生长和形成超过新血管正常产生速度的肿瘤块的重要因素。

肿瘤的这种快速扩张使得癌细胞处于血供有限的微环境中，因此，利用有氧条件生长的能力受限。为了维持充足的能量来源，肿瘤细胞在其微环境中维持低氧条件从而利用形成的增强的糖酵解活性作为产生能量的手段，以及刺激血管发生的方法。Vander Heiden(Van Heiden，M.G.，etal.，“Evidence for an Alternative Glycolytic Pathway inRapidly Proliferating Cells，”Science，329，1492-1499(2010))报道了增殖细胞，包括癌细胞，“主要通过糖酵解代谢葡萄糖，而正常细胞完全通过氧化磷酸化分解代谢葡萄糖。”

磷酸甘油酸酯激酶是转移酶，其在糖酵解的最终步骤之一中起到将磷酸酯基转移至ADP从而形成ATP的作用，ATP是代谢能量的普遍来源。不希望囿于理论，降低含氧量低的细胞中磷酸甘油酸酯激酶的浓度提供了使增殖细胞，即癌细胞，不能利用无氧糖酵解途径作为能量来源的方法。仍不希望囿于理论，通过抑制或减少肿瘤细胞所存在的低氧环境，响应低氧微环境而产生的血管内皮生长因子(VEGF)的量减少从而具有减少会辅助癌细胞增殖的新血管形成的作用。

不希望囿于理论，间变是癌细胞的特征。因为癌细胞维持在高能量代谢的微环境，即低氧环境中，所以癌细胞缺少进入较沉默阶段的能力从而所述细胞变成熟，例如，开始以正常细胞的方式分化。此外，抑制在肿瘤块微环境中的PGK浓度可作为减少或消除在癌细胞诱导的低氧环境中存在的条件，使肿瘤生长变慢或停止的方法。

可溶性VEGF受体-1(sVEGFR1)是180-kDa跨膜VEGFR1的截短的约110-kDa的剪接变体。如Wu(Wu F.T.Het al.，“A systemsbiology perspective on sVEGFR1：its biological function，pathogenicrole&therapeutic use，”J.Cell Mol Med.2010March14(3)：528-552)所报道的，所述抗血管生成作用尚未被很好地阐述，但是其被认为包括：(1)隔离VEGF配体，就像VEGFR1所做的那样，并有效地减少VEGF介导的促血管生成受体的激活；和(2)与全长VEGFR单体异源二聚体化以使所述受体二聚体无活性，因为sVEGFR1缺少使其全长配偶体(partner)磷酸基转移所需的胞内酪氨酸激酶结构域。通过sVEGFR1对VEGF依赖的信号传导发挥抑制作用的精确分子机制是不清楚的。然而，已经提出了两种机制：(1)直接配体捕获VEGF家族成员(包括VEGF-A和PlGF)，即，降低受体激活可用的游离VEGF的有效浓度；和(2)与表面VEGFR异源二聚体化以形成显性失活(dominant-negative)复合体，即，降低可用于配体激活的未占用的VEGFR的有效密度。

在不囿于理论的情况下，通过所述公开的稳定剂稳定HIF-2α导致可溶性血管内皮生长因子(sVEGFR-1)的浓度增加，这导致VEGF的浓度降低。图1A示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，常氧(21％O₂)下野生型鼠胚胎成纤维细胞[棒A，黑色]和在低氧(1％O₂)条件下野生型鼠胚胎成纤维细胞[棒C，浅灰色]中的VEGF的mRNA表达都减少。在低氧条件下，在1、10和100μM浓度下VEGF mRNA与低氧对照[棒C]相比显著减少[棒D，最浅的灰色]。

图1B示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，常氧(21％O₂)下已经缺失HIF1-α的成纤维细胞，即，HIF-1α^-/-成纤维细胞[棒A，黑色]和低氧条件(1％O₂)下已经缺失HIF1-α的成纤维细胞，即，HIF-1α^-/-成纤维细胞[棒C，浅灰色]中的VEGF的mRNA表达都减少。在低氧条件下，在1、10和100μM浓度下VEGF mRNA与低氧对照[棒C]相比显著减少[棒D，最浅的灰色]。

图2A示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，常氧(21％O₂)下野生型鼠胚胎成纤维细胞[棒A，黑色]和在低氧条件(1％O₂)下野生型鼠胚胎成纤维细胞[棒C，浅灰色]中磷酸甘油酸酯激酶的mRNA表达都减少。在低氧条件下，在1、10和100μM浓度下PGK mRNA与低氧对照[棒C]相比显著减少[棒D，最浅的灰色]。

图2B示出了在各种浓度的HIF-2α稳定剂——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸下，常氧(21％O₂)下已经缺失HIF1-α的成纤维细胞，即，HIF-1α^-/-成纤维细胞[棒A，黑色]和低氧条件(1％O₂)下已经缺失HIF1-α的成纤维细胞，即，HIF-1α^-/-成纤维细胞[棒C，浅灰色]中磷酸甘油酸酯激酶(PGK)的mRNA表达都减少。在低氧条件下，在1、10和100μM浓度下PGK mRNA与低氧对照[棒C]相比显著减少[棒D，最浅的灰色]。

研究了所述公开的HIF-2α稳定剂作为黑色素瘤的疗法的有效性。

基因表达的定量PCR分析

使用TRIzol^TM试剂(Invitrogen)和RNeasy试剂盒(Qiagen)，分别从组织和细胞中分离总RNA。使用SuperScript II First-Strand合成体系(Invitrogen)用1μg RNA进行反转录。在SYR Green或TaqMan Universal Master Mix(Applied Biosystems)中扩增cDNA。在ABI Prism7700序列检测体系上进行定量PCR(qPCR)。PCR条件为：95℃10分钟，40个循环的95℃15秒和60℃1分钟。归一化至β肌动蛋白之后，计算mRNA的相对量。

细胞培养，成纤维细胞的永生化

将细胞培养在补充有10％胎牛血清(Invitrogen)、100U/mL青霉素和100mg/mL链霉素的DMEM(#11965-092，Invitrogen)中。对于葡萄糖剥夺，使用了不含葡萄糖的DMEM(#11966-025，Invitrogen)。

将小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)从E12.5胚胎中分离并通过用SV40大T抗原稳定转染而永生化。

鼠黑色素瘤模型。

用1×10⁵个B16F10鼠黑色素瘤细胞在左侧皮下注射小鼠。一旦肿瘤变为可摸得到的(约5天)，将小鼠随机分配以接受如下任意一种的处理：5％葡聚糖中20％聚乙二醇(PEG)(所述公开的HIF-2α稳定剂的载体对照)和PBS(GM-CSF的载体对照)，20％PEG和GM-CSF(每只小鼠100ng，体积为50μL)，所述公开的HIF-2α稳定剂(17.5mg/kg，体积为100μL)和PBS，或者所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF(相同的剂量)。PBS和GM-CSF瘤内给予，而20％PEG和所述公开的HIF-2α稳定剂腹膜内给予。每周处理小鼠3次，直至肿瘤在任何维度达到20mm的大小(约2.5周)，在此时根据机构方针处死小鼠。每周用测径器测量肿瘤直径3次，如下计算肿瘤体积：肿瘤体积=0.5×[(大直径)×(小直径)²]。

肺部转移的评估

肺部转移通过检测荷瘤小鼠肺内黑色素细胞特有的蛋白的mRNA来评估。用GM-CSF和/或所述公开的HIF-2α稳定剂处理B16F10荷瘤小鼠，如图3中所示。处死时，将肺切除并在液氮中急骤冻结。将冷冻的肺在液氮中均质化，并将磨成粉的物质溶解在TRIzol^TM试剂(Invitrogen)。RNA在氯仿中提取并使用RNeasy Minikit(Qiagen)纯化。cDNA使用Superscript First Strand合成体系(Invitrogen)从1μg的RNA产生，并根据制造商的说明使用SYBR Green PCRMasterMix(Applied Biosciences)用于实时PCR。黑色素细胞特有的Pmel17通过巢式PCR使用Tsukamoto等人描述的方案的改进方案来检测。对于最初的反应，在含2μL cDNA的20μL反应体积中进行30个循环的PCR(95℃持续1分钟，58℃持续1分钟，72℃持续1分钟)。对于用嵌套引物进行再扩增，将1μL的第一反应产物在20μL的反应体积中再扩增30个循环。根据比较阈值法分析数据，并用GAPDH内参转录物进行归一化。结果是半定量的并且代表与用所述公开的HIF-2α稳定剂和/或GM-CSF处理的小鼠中的水平相比，载体处理的对照小鼠中转录物水平的倍数差异。

鼠乳腺癌模型

之前已经描述了PyMT转基因小鼠，在该小鼠中多瘤中T抗原从鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子开始表达(Lin EY，Am J Pathol，2003通过参引的方式全文纳入本文)。这些小鼠在总计10个乳腺中自发地形成乳腺上皮的癌症。使用了源自C57BL/6PyMT转基因小鼠晚期肿瘤的永生化细胞系。将5×10⁵个C57BL/6PyMT肿瘤细胞同位注射至野生型C57BL/6小鼠的#4乳房脂肪垫中。一旦肿瘤变为可摸得到的(约3周)，小鼠随机接受载体对照(5％葡聚糖中20％PEG)或12或17.5mg/kg所述公开的HIF-2α稳定剂的处理。每周处理小鼠3次，肿瘤体积按本文上文所述来计算。

图3示出了该研究中高剂量(17mg/kg)的所述HIF-2α稳定剂的结果。这些数据表明，所述公开的HIF-2α稳定剂可单独地减少肿瘤生长(△)并且与用GM-CSF单独处理动物时所观察到的肿瘤体积的减少相当(■)。另外，当所述公开的HIF-2α稳定剂与GM-CSF联合使用时，肿瘤生长的减少是加和的(X)。这些结果与仅接受给药载体磷酸盐缓冲盐水(PBS)的对照动物(◆)相比较。

重复该研究比较给药方案，即，给药是经腹膜内(I.P.)注射还是经瘤内(I.T.)注射完成的。该重复研究没有使用对照组。图4示出了该研究中高剂量(17mg/kg)的所述HIF-2α稳定剂的结果。这些数据表明，瘤内注射使得肿瘤体积比腹膜内注射减少更多。例如，当瘤内给予GM-CSF时(◆)，肿瘤体积比腹膜内给药(△)减少更多。对于所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF组成的治疗，当经瘤内给予(X)时，与腹膜内给药相比(■)，这些结果得到了证实。

图5示出了对于图3中描述的腹膜内给予所述公开的HIF-2α稳定剂和瘤内给予GM-CSF的注射方法，使用Pmel17mRNA表达确定到肺的相对转移的量。组A是所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF的载体对照。组B代表GM-CSF加上在5％葡聚糖中的20％PEG(用于给予所述公开的HIF-2α稳定剂的载体)。组C代表所述公开的HIF-2α稳定剂加PBS(用于给予GM-CSF的载体)。组D代表所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF。将所述公开的HIF-2α稳定剂在其载体(5％葡聚糖中20％PEG)中递送并腹膜内给予，将GM-CSF在其载体(PBS)中递送并瘤内给予。注意，只有具有所述公开的HIF-2α稳定剂的组显示出通过Pmel17mRNA表达测量的转移减少。

图6示出了用来自MMTV-PyMT转基因小鼠的细胞同位注射至单个乳腺中的C57BL/6小鼠的肿瘤体积减少。动物每周用载体(◆)、12mg/kg所述公开的HIF-2α稳定剂(■)或17.5g/kg所述公开的HIF-2α稳定剂(●)处理3次。

人卵巢异种移植研究

试剂和测试化合物

将所测试的化合物——{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸，在0.25％羟丙基甲基纤维素/0.1％Tween^TM80的反渗透去离子水溶液中配制。按照指示在每个小瓶上将所测试的化合物以1.8和3.6mg/ml的浓度复原，以10mg/kg的剂量体积分别递送18和36mg/kg的剂量。一周一次制备所测试的化合物的溶液并于4℃避光保存。从冰箱拿出所有的制剂，并将其在给药前搅拌30分钟，在给药的过程中继续搅拌。

载体对照通过制造0.25％羟丙基甲基纤维素/0.1％Tween^TM80的反渗透去离子水溶液来配制。

细胞培养

A2780/CP卵巢肿瘤细胞系获自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)。将培养物维持在补充有10％胎牛血清的RPMI1640(Hyclone，Logan，UT)中，并置于5％CO₂气氛中。将所述培养物以1：3的分流比在组织培养皿中扩大直至实现足够的细胞产量。

动物

雌性无胸腺裸鼠由Harlan(Indianapolis，IN)供应。小鼠在四至五周龄，体重12-15克时接收，并使其适应七天然后再进行处理。将所述小鼠置于微小隔离饲育笼(microisolator cage)中，并维持在无特定病原体的条件下。向所述小鼠喂食Tekland Global Diet^TM2920x经辐射的实验动物饲料(Harlan，Indianapolis，IN)，并且它们可自由获取高压灭菌水。

A2780/CP卵巢肿瘤异种移植模型

将六十只雌性小鼠右侧皮下接种0.1ml含50％RPMI/50％Matrigel^TM(BD Biosciences，Bedford，MA)混合物的A2780/CP肿瘤细胞悬浮液(约1.0×10⁷个细胞/小鼠)。

接种后三天，使用测径器测量肿瘤并使用动物研究管理软件计算肿瘤重量。通过随机平衡法(random equilibration)将肿瘤大小为80.4-170.6mg的三十只小鼠随机分为三组(组1-3)，每组十只小鼠。随机分配所述小鼠时记录体重，并在此后与肿瘤测量一起每周采集体重两次。

处理动物直至研究终点。组I仅接受载体(对照)。组II给予1.8mg/mL{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸的剂量，而组III给予3.6mg/mL{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸的剂量。所有的剂量通过口服给药(PO)给予。每个剂量的给药体积为约1mL/100g动物体重。

肿瘤质量(mg)使用下式确定：

其中，“a”是最大直径，“b”是最小直径。使用测径器得到测量结果。当研究开始时，平均肿瘤大小是100-125mg。在所述研究的第一天，将动物随机分配为上述的三组。

当单独的肿瘤达到≥2000mg的肿瘤重量时，通过使用上述操作从主要研究的组1-3中收集肿瘤。每周两次采集肿瘤大小测量结果和动物体重。下表I和图7-9概述了该研究的结果。

表I

图7示出了在所述研究中每个评估点的存活动物的数目。用(◆)标示的线代表对照组，用(▲)标示的线代表接受18mg/kg化合物的组，用(■)标示的线代表接受36mg/kg化合物的组。

图8示出了在所述研究的过程中，对照组(◆)、接受18mg/kg化合物的组(▲)和接受36mg/kg化合物的组(■)的肿瘤质量的变化。

图9示出了对照组(◆)、接受18mg/kg化合物的组(▲)和接受36mg/kg化合物的组(■)的体重百分比的变化。

从图7-9以及表I中的上述数据可以看出，肿瘤质量增长的速率与对照组相比显著降低，到第16天时所有对照组的肿瘤质量都超过了2,000mg(研究终点)。

外周血单核细胞的纯化和衍生自单核细胞的巨噬细胞的产生。

在淋巴细胞分离培养基(Lymphocyte Separation Medium，Cellgro)上通过密度梯度离心从新鲜的外周血白细胞来源包(sourcepack)(American Red Cross，Columbus OH)分离人外周血单核细胞(PBMC)。通过在FBS上分层从总PBMC中纯化单核细胞。将单核细胞在补充有1％胎牛血清(FBS)、0.1％人血清白蛋白(HSA)和10μg/mL内毒素抑制剂多粘菌素B的无内毒素的RPMI-1640中培养。在一些实验中，通过将刚分离的单核细胞在含10％FBS、1％PSA(青霉素G钠，硫酸链霉素和两性霉素B)和20ng/mL M-CSF的培养基中培养三天而分化成巨噬细胞。将巨噬细胞血清饥饿2小时，然后进行刺激。将单核细胞或衍生自单核细胞的巨噬细胞用10ng/mLGM-CSF、10μM公开的HIF-2α稳定剂或等体积的载体对照(分别为PBS或DMSO)处理24小时。收集无细胞的培养上清液并通过ELISA(R&D Systems)分析VEGF或sVEGFR。

HIF-2α ^flox/flox /LysMcre小鼠的产生和衍生自骨髓的巨噬细胞的培养。

使HIF-2α^flox/flox小鼠(最初由Dr.Celeste Simon，University ofPennsylvania开发)与LysMcre重组酶小鼠(最初由IrmgardFoerster，University of Duesseldorf开发)(两者均购自The Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)杂交以产生LysMcre和floxed HIF-2α等位基因均纯合的小鼠。不表达floxed等位基因的LysMcre重组酶小鼠用作对照。通过实时PCR在转录水平上确认了在HIF-2α^flox/flox/LysMcre巨噬细胞中HIF-2α缺失，而在LysMcre对照巨噬细胞中HIF-2α未缺失。

为了产生衍生自骨髓的巨噬细胞(BDM)，分离股骨骨髓并将祖细胞铺板在补充有10％FBS、1％PSA、10μg/mL多粘菌素B和20ng/mL重组鼠M-CSF的RPMI-1640中。将细胞培养5天，每隔一天加入新鲜的M-CSF。将分化的BDM血清饥饿2小时，然后用含1％FBS和10μg/mL多粘菌素B的RPMI-1640中100ng/mL的鼠GM-CSF和/或25μM所述公开的HIF-2α稳定剂处理。72小时后收集培养上清液，并通过ELISA(R&D Systems)测定VEGF和sVEGFR-1含量。

实时PCR。

不处理人单核细胞，或者在常氧或0.5％O₂下将其用100ng/mLGM-CSF刺激。在不同的时间点，将细胞收集在Trizol试剂(Invitrogen)中并且在氯仿中提取RNA，然后使用Rneasy Minikit(Qiagen)纯化。在鼠科研究中，将安乐死时收集的器官在液氮中急骤冻结，在液氮中磨成粉，然后溶于Trizol。使用Superscript FirstStrand合成体系(Invitrogen)从1μg的RNA产生cDNA，并根据制造商的说明书，使用之前描述的引物和SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosciences)将cDNA用于实时PCR。数据根据比较阈值法分析，并用β肌动蛋白内参转录物进行归一化。结果是半定量的并且代表与来自同一供体的未处理细胞中的水平相比，特定样品中转录物水平的倍数差异。

鼠黑色素瘤肿瘤模型。

将6-8周龄的C57BL/6小鼠在左侧皮下注射1×10⁵个B16F10鼠黑色素瘤细胞。一旦肿瘤变为可摸得到的(约5天)，将小鼠随机分配以接受如下任意一种的处理：5％蔗糖中20％PEG-400(所述公开的HIF-2α稳定剂的载体)和PBS(GM-CSF的载体)，20％PEG-400和GM-CSF(每只小鼠100ng，体积为50μL)，所公开的HIF-2α稳定剂(17.5mg/kg小鼠体重，体积为100μL)和PBS，或者所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF(浓度相同)。将所述公开的HIF-2α稳定剂(或载体对照)腹膜内给予，而GM-CSF(或载体对照)瘤内给予。每周瘤内处理小鼠3次，直至肿瘤在任意维度达到20mm的大小(约2.5周)，此时根据机构方针处死小鼠。每周用测径器测量肿瘤直径3次，如下计算肿瘤体积：肿瘤体积=0.5×[(大直径)×(小直径)²]。对于联合所公开的HIF-2α稳定剂处理分析中和sVEGFR-1的效应的实验，每周3次用所公开的HIF-2α稳定剂或载体对照经腹膜内处理小鼠，或者用50μL体积中的4μg抗-VEGFR-1中和抗体(R&D Systems)或4μg多克隆山羊IgG同种型对照(Santa Cruz Biotechnology)经瘤内处理小鼠。所有方案都经Ohio State University Animal Care and UseCommittee批准，并且依照动物护理的机构方针处理小鼠。

肺部转移的评估。

肺部转移通过检测荷瘤小鼠肺内黑色素细胞特有的蛋白的mRNA来评估。如上所述，用瘤内的GM-CSF和/或所述公开的HIF-2α稳定剂处理B16F10荷瘤小鼠。处死时，将肺切除并在液氮中急骤冻结。将冷冻的肺在液氮中均质化，并将磨成粉的物质溶解在TRizol试剂(Invitrogen)中。RNA在氯仿中提取并使用RNeasy Minikit(Qiagen)纯化。cDNA使用Superscript First Strand合成体系(Invitrogen)从1μg的RNA产生，并根据制造商的说明书使用SYBR Green PCRMasterMix(Applied Biosciences)用于实时PCR。黑色素细胞特有的mRNA TRP2和Pmel17通过巢式PCR使用Tsukamoto等人描述的方案的改进方案来检测。对于最初的反应，在含2μL cDNA的20μL反应体积中进行30个循环的PCR(95℃持续1分钟，58℃持续1分钟，72℃持续1分钟)。对于用嵌套引物进行再扩增，将1μL的第一反应产物在20μL反应体积中再扩增30个循环。数据根据比较阈值法进行分析，并用β肌动蛋白内参转录物进行归一化。结果是半定量的并且代表与载体对照小鼠中的水平相比，用所述公开的HIF-2α稳定剂和/或GM-CSF处理的小鼠中转录物水平的倍数差异。

统计分析。

使用ANOVA测试比较多个处理组之间独立的测量结果。将数据进行对数转换以归一化组间的方差。使用Holm’s方法调整P值以保持因多重比较而产生的I型误差为0.05。对于肿瘤生长数据，肿瘤体积随时间的变化通过纵向模型来估计。肿瘤值是对数转换的，用95％的置信区间计算估计的斜率(肿瘤体积随时间的变化)。估计的肿瘤体积的差异通过纵向数据的随机效应回归而计算。对于所有的分析，p≤0.05被认为是统计学显著的。

用所述公开的HIF-2α稳定剂抑制PHD3可增强单核细胞和巨噬细胞产生sVEGFR-1而不是VEGF。

单核细胞响应GM-CSF和低氧产生sVEGFR-1，是依赖于HIF-2α，而在相同的条件下HIF-1α控制单核细胞产生VEGF。虽然不希望囿于理论，但是发明人在本文中现认为选择性地稳定HIF-2α会增强来自GM-CSF刺激的单核细胞的sVEGFR-1产生，而不影响VEGF产生。

为了确认所述公开的HIF-2α稳定剂选择性地上调HIF-2α，用所述公开的HIF-2α稳定剂处理衍生自鼠骨髓的巨噬细胞持续18小时，然后将细胞裂解并针对HIF-1α和HIF-2α进行免疫印迹。发明人观察到，在用所述公开的HIF-2α稳定剂处理的细胞中HIF-2α蛋白增加，而HIF-1α没有相应的增加(图11A)。

为了确定稳定HIF-2α是否增加sVEGFR-1产生，在存在或不存在10μM所述公开的HIF-2α稳定剂的情况下，用100ng/mL GM-CSF刺激人外周血单核细胞。当还用所述公开的HIF-2α稳定剂处理单核细胞时，由GM-CSF处理的单核细胞产生的sVEGFR-1，无论在蛋白质水平还是转录物水平上，都显著增加(分别为p=0.007和p=0.033)(图11B)。

使用检测游离(生物可用的)VEGF而不检测与sVEGFR-1结合的VEGF的ELISA测量同一上清液中的VEGF水平。用所述公开的HIF-2α稳定剂处理细胞不会显著地增加VEGF的产生(p=0.133)。由于sVEGFR-1中和VEGF，在GM-CSF刺激的单核细胞的上清液中检测不到VEGF蛋白(图11C)。

通过实时PCR评估VEGF转录物水平显示虽然GM-CSF增加VEGF产生，但是仅用GM-CSF刺激的单核细胞或用GM-CSF及所述公开的HIF-2α稳定剂刺激的单核细胞之间的VEGF产生没有差异(p=0.556)(图11C)。

这些结果证明选择性地稳定HIF-2α增强单核细胞产生sVEGFR-1而不是VEGF。

因为单核细胞产生VEGF是依赖于HIF-1α，所以发明人在本文中确定了通过抑制PHD2而选择性地稳定HIF-1α是否会增加单核细胞产生VEGF，而不是sVEGFR-1。为了完成这一测定，在PHD2的选择性抑制剂的存在下，用GM-CSF刺激人外周血单核细胞，所述PHD2的选择性抑制剂的存在会使HIF-1α稳定。

GM-CSF诱导单核细胞产生sVEGFR-1。然而，仅用GM-CSF刺激的单核细胞或用PHD2的选择性抑制剂共刺激的单核细胞的VEGFR-1产生无论在蛋白质水平还是转录物水平上(分别为p=0.306和p=0.566)都没有差异(图11D)。

然而，PHD3的选择性抑制剂增加单核细胞产生VEGF蛋白和mRNA(分别为p=0.011和p=0.007)(图11E)。

为了确认sVEGFR-1产生是由稳定HIF-2α诱导的，使用了来自骨髓特异性缺失HIF-2α的小鼠(HIF-2α^flox/flox/LysMcre)的衍生自骨髓的巨噬细胞。

所述公开的HIF-2α稳定剂诱导对照巨噬细胞的sVEGFR-1转录(p=0.036)，而不诱导HIF-2α缺失的巨噬细胞的sVEGFR-1转录(p=0.881)(图11F)。

这些结果表明sVEGFR-1产生是HIF-2α依赖效应。此外，这些结果证明用所述公开的HIF-2α稳定剂抑制PHD3可稳定HIF-2α并选择性地诱导GM-CSF刺激的单核细胞产生sVEGFR-1，而不是VEGF。

稳定HIF-2α增加了GM-CSF的抗肿瘤作用并提高了鼠黑色素瘤模型的存活率

在鼠黑色素瘤模型中，GM-CSF的抗肿瘤作用依赖于HIF-2α介导的来自肿瘤相关巨噬细胞的sVEGFR-1产生(Roda et al.，J.Immunol，“Hypoxia-Inducible Factor-2αRegulates GM-CSF-Derived SolubleVascular Endothelial Growth Factor Receptor1Production fromMacrophages and Inhibits Tumor Growth and Angiogenesis”，印刷前在线公开于2011年7月15日，doi：10.4049/jimmunol.1100841)。

然后确定化学稳定HIF-2α是否可能增加来自肿瘤相关巨噬细胞的sVEGFR-1产生从而增强GM-CSF的抗肿瘤作用。

将带有皮下B16F10黑色素瘤的小鼠用GM-CSF(100ng/小鼠，瘤内)，所述公开的HIF-2α稳定剂(17.5mg/kg，腹膜内)，或其结合物(或合适的载体对照)每周处理3次。基于使用对数转换值的纵向模型，未发现在基线处四个组之间肿瘤体积的显著差异。然而，在处理的第16天，接受GM-CSF或所述公开的HIF-2α稳定剂的小鼠的平均肿瘤体积明显小于用载体对照处理的小鼠(每组p＜0.001)。此外，用GM-CSF和所述公开的HIF-2α稳定剂的联合治疗与上述任一单独治疗相比进一步减少了肿瘤生长(图12A)(p＜0.001)。这些数据证明，在黑色素瘤模型中所述公开的HIF-2α稳定剂可增强GM-CSF的抗肿瘤作用。所述公开的HIF-2α稳定剂还单独地提高荷B16F10黑色素瘤小鼠的存活率。图12B示出在用所述公开的HIF-2α稳定剂处理的小鼠中生存中值(定义为达到20mm³肿瘤直径的时间)增加3天(p=0.023)。

所述公开的HIF-2α稳定剂增强响应GM-CSF的VEGFR-1产生并减少肿瘤血管发生。

同样地，虽然不希望囿于理论，但是发明人在本文中现认为用所述公开的HIF-2α稳定剂化学稳定HIF-2α会增加响应GM-CSF的sVEGFR-1产生，从而减少肿瘤生长和血管发生。使用实时PCR评估用GM-CSF、所述公开的HIF-2α稳定剂或其结合物处理的小鼠的肿瘤内的sVEGFR-1和VEGF mRNA水平。

在用GM-CSF和所述公开的HIF-2α稳定剂处理的小鼠的肿瘤内检测到sVEGFR-1水平增加(图13A)(p=0.031)。相反地，相对于在载体对照处理的小鼠中观察到的瘤内VEGF水平，GM-CSF(单独地或与所述公开的HIF-2α稳定剂结合)不能增加瘤内VEGF水平(图13B)(p=0.490)。为了确认sVEGFR-1产生的增加导致肿瘤血管发生减少，将来自各小鼠的肿瘤通过针对内皮细胞标记物CD31的免疫组织化学进行染色。如图13C所示，GM-CSF和所述公开的HIF-2α稳定剂的联合治疗，可能通过诱导sVEGFR-1而显著地减少荷黑色素瘤小鼠中的肿瘤血管分布(p＜0.001)。

因为血管发生增加与转移风险增加有关，所以发明人在本文中评估了用GM-CSF、所述公开的HIF-2α稳定剂或其结合物处理的小鼠的肺部转移。与载体对照处理的小鼠相比，在用GM-CSF和所述公开的HIF-2α稳定剂处理的小鼠的肺内检测到黑色素瘤特有基因Pmel17的水平显著降低(图13D)。

这些结果证明，所述公开的HIF-2α稳定剂通过增加来自肿瘤相关巨噬细胞的sVEGFR-1产生而增强GM-CSF的抗血管发生作用。

所述公开的HIF-2α稳定剂的抗肿瘤作用依赖于sVEGFR-1产生。

用GM-CSF和所述公开的HIF-2α稳定剂处理的小鼠的肿瘤中sVEGFR-1水平增加与肿瘤生长和血管发生减少有关。为了确认对肿瘤生长和血管发生的调节是归因于响应所述公开的HIF-2α稳定剂的sVEGFR-1产生，在存在或不存在sVEGFR-1中和Ab的情况下用所述公开的HIF-2α稳定剂处理小鼠。

所述公开的HIF-2α稳定剂在用同种型对照抗体处理的小鼠中减少肿瘤生长(p＜0.001)，但是在还用抗-sVEGFR-1中和抗体处理的小鼠中对肿瘤生长没有影响(p=0.245)(图14A)。

为了证实sVEGFR-1产生在肿瘤血管发生中的作用，发明人在本文中对所述肿瘤进行了针对内皮细胞标记物CD31的免疫染色。如图14B所示，所述公开的HIF-2α稳定剂在用所述对照抗体处理的小鼠中减少肿瘤血管分布(p=0.022)，但是在用所述sVEGFR-1中和Ab处理的小鼠中未减少肿瘤血管分布。

这些结果证明，所述公开的HIF-2α稳定剂通过诱导sVEGFR-1而减少肿瘤血管发生。

响应所述公开的HIF-2α稳定剂的sVEGFR-1产生依赖于巨噬细胞产生HIF-2α。

所述公开的HIF-2α稳定剂不特异性靶向巨噬细胞，并且会稳定所有组织中的HIF-2α，而不仅仅是肿瘤相关巨噬细胞中的HIF-2α。为了确认巨噬细胞在响应所述公开的HIF-2α稳定剂的抗肿瘤反应中的作用，使用了骨髓特异性缺失HIF-2α的小鼠(HIF-2α^flox/flox/LysMcre小鼠)。

所述公开的HIF-2α稳定剂在LysMcre对照小鼠(其含有LysM驱动的cre重组酶而不合floxed等位基因)中抑制肿瘤生长。虽然所述公开的HIF-2α稳定剂在具有HIF-2α缺陷型巨噬细胞的小鼠中减少肿瘤生长，但是抗肿瘤反应的强度(magnitude)远远小于对照小鼠(图15)。

这些结果证明，所述公开的HIF-2α稳定剂通过稳定肿瘤相关巨噬细胞中的HIF-2α和诱导sVEGFR-1产生，至少部分地抑制肿瘤生长和血管发生。

人黑色素瘤细胞系(A375)

如发明人对B16F10鼠黑色素瘤模型所做的那样，用GM-CSF、所述公开的HIF-2α稳定剂或其结合物处理带有人黑色素瘤细胞系(A375)的免疫缺陷小鼠。GM-CSF和所述公开的HIF-2α稳定剂的结合物在该模型中显著地减少肿瘤生长(p=0.05)。该数据确认了本发明的发现——GM和所述公开的HIF-2α稳定剂在另外的鼠模型中的效力，并且在生物学上与人类癌症高度相关，至少某种程度上是因为测试了在小鼠中生长的人类癌细胞系。参见图15。

鼠黑色素瘤肿瘤模型。

将6-8周龄的C57BL/6小鼠或SCID小鼠分别在左侧皮下注射1×10⁵个B16F10鼠黑色素瘤细胞或1×10⁶个A375人黑色素瘤细胞。一旦肿瘤变为可摸得到的(约5天)，将小鼠随机分配以接受如下任意一种的处理：5％蔗糖中20％PEG-400(所述公开的HIF-2α稳定剂的载体)和PBS(GM-CSF的载体)，20％PEG-400和GM-CSF(每只小鼠100ng，体积为50μL)，所公开的HIF-2α稳定剂(17.5mg/kg小鼠体重，体积为100μL)和PBS，或者所述公开的HIF-2α稳定剂和GM-CSF(浓度相同)。所述公开的HIF-2α稳定剂(或载体对照)腹膜内给予，而GM-CSF(或载体对照)瘤内给予。每周瘤内处理小鼠3次，直至肿瘤在任何维度达到20mm的大小(约2.5周)，此时根据机构方针处死小鼠。每周用测径器测量肿瘤直径3次，如下计算肿瘤体积：肿瘤体积=0.5×[(大直径)×(小直径)²]。

在本研究中，用A375人黑色素瘤肿瘤皮下接种免疫缓和的SCID小鼠。当肿瘤变为可摸得到的(注射后7天)时开始用细胞毒性化学疗法多西他赛(docetaxel)或用所述公开的HIF-2α稳定剂处理小鼠。所述公开的HIF-2α稳定剂以17mg/kg的剂量给予，所述多西他赛以1mg/kg的剂量给予。两种药物都是每周腹膜内给予3次。多西他赛和所述公开的HIF-2α稳定剂的结合物与单独使用两者之一的药物相比显著地抑制肿瘤生长。处死时，仅接受所述公开的HIF-2α稳定剂的小鼠的肿瘤大小是对照肿瘤的约78％，仅接受化学疗法的小鼠的肿瘤大小为对照肿瘤的约50％，接受两种药物的小鼠的肿瘤大小为对照肿瘤的约16％。

尽管本公开内容举例说明并描述了具体的实施方案，但是对于本领域技术人员来说明显地是，可在不脱离本公开内容的精神和范围的情况下做出各种其他变化和修改。因此，所附的权利要求书意欲涵盖在本公开内容范围内的所有这些变化和修改。

Claims

1.具有下式的化合物：

其中R选自：

i)-OR¹；

ii)-NR²R³；或

iii)-OM¹；

R¹是：

i)氢；或

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；

R²和R³独立地是：

i)氢；

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；或

iii)R²和R³可一起形成具有2-7个碳原子和1-3个选自氮、氧、硫的杂原子的环，所述杂原子包括与R²和R³连接的氮原子；并且

M¹是阳离子；并且

R⁴是：

i)-OH；或

ii)-OM²；并且

M²是阳离子。

2.权利要求1的化合物，其中R是-OR¹。

3.权利要求2的化合物，其中R¹是氢。

4.权利要求2的化合物，其中R¹是甲基。

5.权利要求1的化合物，其中R⁴是-OH。

6.权利要求1的化合物，其中R是M¹。

7.权利要求1的化合物，其具有式：

8.权利要求7的化合物，其中M¹选自钠离子、锂离子、钾离子、铵离子和银离子，且M²是氢或选自钠离子、锂离子、钾离子、铵离子和银离子的阳离子。

9.权利要求1的化合物，其具有式：

其中M¹是钠离子或铵离子。

10.权利要求1的化合物，其中M¹是具有下式的阳离子：

其中R^a、R^b和R^c各自独立地是：

i)氢；

iii)取代的或未取代的苄基；

其中R^a、R^b和R^c中的一个或多个可独立地被一个或多个选自如下的单元取代：

i)C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷氧基；

iii)卤素；

iv)羟基；

v)硫代；或

vi)R^a、R^b和R^c中的一个或多个可含有一个或多个能够形成阳离子、阴离子或两性离子的单元。

11.权利要求10的化合物，其中所述阳离子M¹选自

i)2-羟基乙基铵[HN⁺H₂(CH₂CH₂OH)]；

ii)甲基-2-羟基乙基铵[H₂N⁺(CH₃)(CH₂CH₂OH)]；

iii)二-(2-羟基乙基)铵[H₂N⁺(CH₂CH₂OH)₂]；

iv)三-(2-羟基乙基)铵[HN⁺(CH₂CH₂OH)₃]；和

v)三-(羟基甲基)甲铵[H₃N⁺C[(CH₂OH)]₃]。

12.权利要求1的化合物，其中所述化合物是选自赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸和谷氨酰胺的氨基酸的盐。

13.权利要求1的化合物，其具有式：

14.权利要求1的化合物，其选自：

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二钠；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钾；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二钾；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠钾；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钾铵；

双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钙；

双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸镁；

双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钡；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸甲铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钙；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸镁；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钡；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二甲铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二乙铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸三乙铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二甲基乙基铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸甲基二乙基铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸2-羟基乙基铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸甲基-2-羟基乙基铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二-(2-羟基乙基)铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸三-(2-羟基乙基)铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸三-(羟基甲基)甲铵；和

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸N-苄基-2-(苄基氨基)乙铵。

15.权利要求1的化合物，其中R是-NR²R³。

16.权利要求1的化合物，其中R²和R³各自独立地是氢或甲基。

17.权利要求1的化合物，其中R是-NH₂。

18.一种化合物，选自：

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸甲酯；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸乙酯；

5-(3-氟苯基)-N-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；

5-(3-氟苯基)-N-(2-甲基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；和

5-(3-氟苯基)-N-(2-二甲基氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺。

19.一种组合物，其包含有效量的一种或多种权利要求1的化合物。

20.用于稳定低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的组合物，其包含：

A)有效量的具有下式的化合物：

其中R选自：

i)-OR¹；

ii)-NR²R³；或

iii)-OM¹；

R¹是：

i)氢；或

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；

R²和R³独立地是：

i)氢；

ii)C₁-C₆直链、C₃-C₆支链或C₃-C₆环状烷基；或

M¹是阳离子；并且

R⁴是：

i)-OH；或

ii)-OM²；

M²是阳离子；和

B)一种或多种可药用成分。

21.权利要求20的组合物，其中R是-OR¹。

22.权利要求20的组合物，其中R¹是氢。

23.权利要求20的组合物，其中R¹是甲基。

24.权利要求20的组合物，其中R⁴是-OH。

25.权利要求20的组合物，其中R是M¹。

26.权利要求20的组合物，其具有式：

27.权利要求26的组合物，其中M¹选自钠离子、锂离子、钾离子、铵离子和银离子，并且M²是氢或选自钠离子、锂离子、钾离子、铵离子和银离子的阳离子。

28.权利要求26的组合物，其具有式：

其中M¹是钠离子或铵离子。

29.权利要求20的组合物，其中M¹是具有下式的阳离子：

其中R^a、R^b和R^c各自独立地是：

i)氢；

iii)取代的或未取代的苄基；

i)C₁-C₁₂直链、C₃-C₁₂支链或C₃-C₁₂环状烷氧基；

iii)卤素；

iv)羟基；

v)硫代；或

30.权利要求29的组合物，其中所述阳离子M¹选自

i)2-羟基乙基铵[HN⁺H₂(CH₂CH₂OH)]；

ii)甲基-2-羟基乙基铵[H₂N⁺(CH₃)(CH₂CH₂OH)]；

iii)二-(2-羟基乙基)铵[H₂N⁺(CH₂CH₂OH)₂]；

iv)三-(2-羟基乙基)铵[HN⁺(CH₂CH₂OH)₃]；和

v)三-(羟基甲基)甲铵[H₃N⁺C[(CH₂OH)]₃]。

31.权利要求20的组合物，其中所述组合物是选自赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸和谷氨酰胺的氨基酸的盐。

32.权利要求20的组合物，其具有式：

33.权利要求20的组合物，其中所述化合物选自：

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二钠；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钾；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二钾；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠钾；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钠铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钾铵；

双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钙；

双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸镁；

双{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钡；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸甲铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钙；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸镁；

{[5-(3-氟苯基)-3-氧化吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸钡；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二甲铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二乙铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸三乙铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸二甲基乙基铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸甲基二乙基铵；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]-氨基}乙酸2-羟基乙基铵；

34.权利要求20的组合物，其中R是-NR²R³。

35.权利要求20的组合物，其中R²和R³各自独立地是氢或甲基。

36.权利要求20的组合物，其中R是-NH₂。

37.权利要求20的组合物，包含选自以下的化合物：

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸甲酯；

{[5-(3-氟苯基)-3-羟基吡啶-2-羰基]氨基}乙酸乙酯；

5-(3-氟苯基)-N-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2-基酰胺；