CN103709211B - 一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，该方法为：将原料洗净切碎后从投入提取罐组主机，固液两相物质在提取罐机组中逆向运动中充分接触，从而将药材中有效成分提取出来。药渣经出料传送器强制推动至出渣口而排出，专门的挤汁机对药渣进行挤压，将药渣中残留药液挤出药材组织，减少药渣中残留药液含量。提取效率更高、提取更完全。本发明同时选用大孔吸附树脂并结合硅胶柱层析法纯化，分离效果更佳。可得最高收率为1％，含量为95％以上的萝卜硫苷成品。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种萝卜硫苷的制备方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂耦合硅胶柱层析分离纯化萝卜硫苷的制备方法。
背景技术：
花椰菜(学名：Brassica oleracea L.var.botrytis L.)，又称花菜、菜花或椰菜花，是一种十字花科的蔬菜，为甘蓝的变种。
二年生草本，高60-90厘米，被粉霜。茎直立，粗壮，有分枝。基生叶及下部叶长圆形至椭圆形，长2-3.5厘米，灰绿色，顶端圆形，开展，不卷心，全缘或具细牙齿，有时叶片下延，具数个小裂片，并成翅状；叶柄长2-3厘米；茎中上部叶较小且无柄，长圆形至披针形，抱茎。茎顶端有1个由总花梗、花梗和未发育的花芽密集成的乳白色肉质头状体；总状花序顶生及腋生；花淡黄色，后变成白色。长角果圆柱形，长3-4厘米，有1中脉，喙下部粗上部细，长10-12毫米。种子宽椭圆形，长近2毫米，棕色。花期4月，果期5月。
萝卜硫苷为花椰菜球茎提取物，经科学研究及临床应用证明，萝卜硫苷可以造成癌细胞的细胞凋亡和细胞阻滞，同时可以诱导人体内的II相解毒酶，同时抑制I型酶的产生，最终通过多种酶体系排出致癌物和自由基等有害成分，同时，该成分不会在人体内残留，对机体无副作用，是一种新型的抗癌成分。萝卜硫苷可以有效地防止胃溃疡、萎缩性胃炎向胃癌转化。由于其原料花椰菜来源较广，从中提取萝卜硫苷已取得了可喜进展，名称为“从青花菜花椰菜提取萝卜硫苷化合物的方法”的专利申请中便公开了从青花菜花椰菜植物材料的选择与预处理，粗提，浓缩，色谱柱纯化萝卜硫苷的方法。上述专利文献中的萝卜硫苷制备工艺主要是经过热水提取、色谱柱分离等步骤提取而成，虽然最后的萝卜硫苷纯度很高，但其工艺在原料选择上要求过大不易于工业化生产，本身耗费大，实际应用效果远远不如大孔吸附树脂耦合硅胶柱层析分离纯化法分离的效果。
发明内容
本发明目的在于提供一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法；本发明目的还在于提供一种方便快捷、原料来源丰富、提取效率高、分离纯化效原料明显、提取纯度高的利用连续逆流提取与大孔吸附树脂富集纯化萝卜硫苷的制备工艺。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。
一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其步骤如下：
1)将花椰菜切碎后加入连续逆流提取罐用乙醇水溶液回流提取；
2)将经1)处理的提取液过滤，得萝卜硫苷粗提液：
3)将所得萝卜硫苷粗提液浓缩，得萝卜硫苷粗浓缩液；
4)将所得萝卜硫苷粗浓缩液加水稀释，并过滤，得滤液；
5)将所得滤液上广谱型大孔吸附树脂柱，吸附完毕用水洗杂质，再用低度数的乙醇水溶液洗杂质，然后用高度数的乙醇水溶液洗脱，得萝卜硫苷洗脱液；
6)将所得洗脱液浓缩成膏，得萝卜硫苷浓缩膏；
7)将萝卜硫苷浓缩膏拌硅胶，并将拌好的混合物置于硅胶柱上方，经乙酸乙酯和石油醚混合液洗脱，得洗脱液；
8)将洗脱液回收溶剂后冷冻干燥得萝卜硫苷成品；
所述步骤1)中，花椰菜切碎后经过清洗再进行乙醇水溶液回流提取，提取溶剂为50％～85％的乙醇水溶液。
所述步骤1)中，提取的设备为逆流提取生产线，包括提升机、进料传送、逆流提取罐组主机1、掏料器1、挤汁机1、逆流提取罐组主机2、掏料器2、挤汁机2、出料传送、中间泵、出液泵、暂存罐、换热器、进液阀门等。切碎清洗后原料由提升机加料口处匀速加入，提取液自流至暂储罐经由出液泵连续泵出。
所述步骤1)中，逆流生产线参数为，提升机频率15～30Hz，主机1频率18～20Hz，挤汁机1频率45～50Hz，主机2频率20～22Hz，挤汁机2频率40～45Hz，出液泵流量0.5～2T/h，进料100～400kg/h。
所述步骤4)中，稀释水量为浓缩液体积的3～5倍，过滤的杂质弃去。
所述步骤5)中，大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将滤液通过吸附柱，流速每分钟0.05ml/g树脂，树脂型号为HPD400、HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔吸附树脂。
所述步骤5)中，大孔吸附树脂柱高径比为10～5∶1，低度数的乙醇水溶液为5％～20％乙醇水溶液，高度数的乙醇水溶液为50％～80％乙醇水溶液，洗杂质水量为3～5BV，洗杂质低度数的乙醇水溶液量为1～2BV，洗脱高度数的乙醇水溶液量为4BV。
所述步骤7)中，硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将浓缩膏按重量1∶1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物置于硅胶柱上方，洗脱液为乙酸乙酯：石油醚体积比为50～85∶15的乙酸乙酯与石油醚混合物，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶，洗脱体积为5BV。硅胶活化条件为，110℃30min。
本发明公开一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，该方法为：将原料粉碎后从投料斗投入，提取罐组主机旋转，将物料从机组前端向后缓慢推进，同时提取溶剂从机组末端的进液管进入提取罐内，由罐后端穿过移动的物料向前端流动，固液两相物质在这种逆向运动中充分接触，从而将药材中有效成分提取出来。药渣经出料传送器强制推动至出渣口而排出，专门的挤汁机对药渣进行挤压，将药渣申残留药液挤出药材组织，减少药渣申残留药液含量。提取效率更高、提取更完全。
本发明同时选用大孔吸附树脂并结合硅胶柱层析法纯化，分离效果更佳。
具体实施方式：
实施例1：
称取花椰菜原料2T，清洗后切碎，由提升机加料口以400kg/h的速度匀速加入，75％乙醇水溶液用管道泵以2T/h的流量由进液管加入，提升机频率设定为30Hz，主机1频率设定为20Hz，挤汁机1频率设定为50Hz，主机2频率设定为22Hz，挤汁机2频率设定为45Hz，得萝卜硫苷粗提液10T,萝卜硫苷粗提液自流至暂储罐经由出液泵连续泵至浓缩罐浓缩，得萝卜硫苷粗浓缩液600L；将所得浓缩液加3T水稀释，过滤除去杂质；滤液过HPD400大孔吸附树脂，树脂柱高径比为5∶1，吸附饱和后6T水洗杂质，2T5％乙醇水溶液洗杂质，8T80％乙醇水溶液洗脱，得萝卜硫苷洗脱液7.8T；洗脱液浓缩得萝卜硫苷浓缩膏400kg；萝卜硫苷浓缩膏拌400kg活化硅胶，置于硅胶柱上方，洗脱液为乙酸乙酯：石油醚体积比为85∶15的乙酸乙酯与石油醚混合物，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶，得洗脱液2000kg；洗脱液回收溶剂后浓缩冷冻干燥得萝卜硫苷成品20kg，含量96.2％。
实施例2：
称取花椰菜原料800kg，清洗后切碎，由提升机加料口以200kg/h的速度匀速加入，65％乙醇水溶液用管道泵以1T/h的流量由进液管加入，提升机频率设定为25Hz，主机1频率设定为18Hz，挤汁机1频率设定为50Hz，主机2频率设定为22Hz，挤汁机2频率设定为45Hz，得萝卜硫苷粗提液4T；萝卜硫苷粗提液自流至暂储罐经由出液泵连续泵至浓缩罐浓缩，得萝卜硫苷粗浓缩液250L；将所得浓缩液加1.25T水稀释，过滤除去杂质；滤液过AB-8大孔吸附树脂，树脂柱高径比为5∶1，吸附饱和后6T水洗杂质，2T20％乙醇水溶液洗杂质，8T600％乙醇水溶液洗脱，得萝卜硫苷洗脱液7.8T,洗脱液浓缩得萝卜硫苷浓缩膏150kg；萝卜硫苷浓缩膏拌150kg活化硅胶，置于硅胶柱上方，洗脱液为乙酸乙酯：石油醚体积比为65∶15的乙酸乙酯与石油醚混合物，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶，得洗脱液750kg；洗脱液回收溶剂后浓缩冷冻干燥得萝卜硫苷成品7.5kg，含量95.8％。
实施例3：
称取花椰菜原料1.6T，清洗后切碎，由提升机加料口以100kg/h的速度匀速加入，75％乙醇水溶液用管道泵以500kg/h的流量由进液管加入，提升机频率设定为25Hz，主机1频率设定为18Hz，挤汁机1频率设定为50Hz，主机2频率设定为22Hz，挤汁机2频率设定为45Hz，得萝卜硫苷粗提液8T；萝卜硫苷粗提液自流至暂储罐经由出液泵连续泵至浓缩罐浓缩，得萝卜硫苷粗浓缩液500L；将所得浓缩液加2.5T水稀释，过滤除去杂质；滤液过DM-1308T70％乙醇水溶液洗脱，得萝卜硫苷洗脱液7.8T；洗脱液浓缩得萝卜硫苷浓缩膏310kg；萝卜硫苷浓缩膏拌310kg活化硅胶，置于硅胶柱上方，洗脱液为乙酸乙酯：石油醚体积比为75∶15的乙酸乙酯与石油醚混合物，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶，得洗脱液1.5T；洗脱液回收溶剂后浓缩冷冻干燥得萝卜硫苷成品15kg，含量97％。
Claims (8)
1.一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)将花椰菜切碎后加入连续逆流提取罐用乙醇水溶液回流提取；
2)将经1)处理的提取液过滤，得萝卜硫苷粗提液；
3)将所得萝卜硫苷粗提液浓缩，得萝卜硫苷粗浓缩液；
4)将所得萝卜硫苷粗浓缩液加水稀释，并过滤，得滤液；
5)将所得滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％乙醇水溶液洗杂质，然后用50％～80％乙醇水溶液洗脱，得萝卜硫苷洗脱液；
6)将所得洗脱液浓缩成膏，得萝卜硫苷浓缩膏；
7)将萝卜硫苷浓缩膏拌硅胶，并将拌好的混合物置于硅胶柱上方，经乙酸乙酯和石油醚混合液洗脱，得洗脱液；
8)将洗脱液回收溶剂后冷冻干燥得萝卜硫苷成品。
2.根据权利要求1所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，花椰菜切碎后经过清洗再进行乙醇水溶液回流提取，提取溶剂为50％～85％的乙醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，连续逆流提取罐为逆流提取生产线，包括提升机、进料传送、逆流提取罐组主机1、掏料器1、挤汁机1、逆流提取罐组主机2、掏料器2、挤汁机2、出料传送、中间泵、出液泵、暂存罐、换热器、进液阀门；切碎清洗后原料由提升机加料口处匀速加入，提取液自流至暂储罐经由出液泵连续泵出。
4.根据权利要求3所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，连续逆流提取罐参数为，提升机频率15～30Hz，主机1频率18～20Hz，挤汁机1频率45～50Hz，主机2频率20～22Hz，挤汁机2频率40～45Hz，出液泵流量0.5～2T/h，进料100～400kg/h。
5.根据权利要求1所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤4)中，稀释水量为浓缩液体积的3～5倍，过滤的杂质弃去。
6.根据权利要求1所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤5)中，大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将滤液通过吸附柱，流速每分钟0.05mL/g树脂，树脂型号为HPD400、HPD100、DM-130或AB-8型大孔吸附树脂。
7.根据权利要求1所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤5)中，大孔吸附树脂柱高径比为10～5∶1，洗杂质水量为3～5BV，5％～20％乙醇水溶液量为1～2BV，50％～80％乙醇水溶液量为4BV。
8.根据权利要求1所述的一种从花椰菜中制备萝卜硫苷的方法，其特征在于，所述的步骤7)中，硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将浓缩膏按重量1∶1拌活化硅胶，并将拌好的混合物置于硅胶柱上方，洗脱液为体积比为50～85∶15的乙酸乙酯与石油醚混合物，洗脱流速每分钟0.1mL/g硅胶，洗脱体积为5BV，硅胶活化条件为，110℃30min。
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