CN103689597B - 鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用 - Google Patents
鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103689597B CN103689597B CN201310719926.1A CN201310719926A CN103689597B CN 103689597 B CN103689597 B CN 103689597B CN 201310719926 A CN201310719926 A CN 201310719926A CN 103689597 B CN103689597 B CN 103689597B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rockfish
- group
- terrible
- lex
- immunity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 241000182351 Inimicus japonicus Species 0.000 title abstract description 8
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 title abstract 3
- 241001529596 Pontinus kuhlii Species 0.000 claims description 69
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 8
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 abstract description 13
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 abstract description 13
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 abstract description 12
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 abstract description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 6
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 40
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 34
- 208000033065 inborn errors of immunity Diseases 0.000 description 26
- 208000028529 primary immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 26
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 25
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 18
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 13
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 12
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 description 9
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 description 9
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 description 9
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 8
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 7
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 210000004493 neutrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000000006 pectoral fin Anatomy 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 description 1
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 1
- LAZPBGZRMVRFKY-HNCPQSOCSA-N Levamisole hydrochloride Chemical compound Cl.C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 LAZPBGZRMVRFKY-HNCPQSOCSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 240000008866 Ziziphus nummularia Species 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 235000019994 cava Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003653 coastal water Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960003734 levamisole hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000001662 opsonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 231100000004 severe toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L17/00—Food-from-the-sea products; Fish products; Fish meal; Fish-egg substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L17/20—Fish extracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Zoology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了鬼鲉或鬼鲉肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用，本发明以资源丰富的海洋资源鬼鲉为研究对象，通过大量药理实验筛选鬼鲉的药理活性，实验结果表明，鬼鲉及其肝脏提取物具有明显的提高免疫器官指数，减少免疫器官损伤，增加免疫细胞的数目，提高血液中 和细胞因子
Description
技术领域
本发明涉及鱼类鬼鲉的新用途，具体涉及鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的新用途。
背景技术
鬼鲉，亦称日本鬼鲉，别名老虎鱼，为毒鲉科鬼鲉Inimicus japonicas(Cuvier&volenciennes)的全体；其为近海小型底层鱼类，栖息于沿岸或海岛附近石砺底质的浅海中，肉食性，摄食甲壳类动物；分布于我国沿海，朝鲜、日本沿海。全年均可捕捉，捕后洗净，鲜用或晒干备用，日本鬼鲉的鱼肉常因肉质鲜美而被沿海居民所食用，其内部的肝脏等则作为废弃物而未被利用。鬼鲉鱼头上与头侧有凹陷和突起，颅骨均被皮膜所覆盖；头部、躯干部及各鳍条上到处有小触须存在。身体呈深褐色或紫红色，变异很大、各鳍有白点或白线，胸鳍内面有褐色斑点，胸鳍完全连于胸部，背鳍的棘有剧毒。现代研究表明日本鬼鲉的毒液对心肌、骨骼肌、平滑肌等均有直接的麻痹作用，而且毒腺提取液可使大鼠红细胞发生棘突样变，可明显降低血液单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞的活力；明显降低NK活性；并且降低巨噬细胞的吞噬能力。
现代医学研究表明，人类机体患病的原因大多是由于自身免疫力系统出现问题，机体免疫力降低导致，对于体质较差，年老体弱的疾病患者，提高机体免疫力具有重要作用，目前市场上提高免疫力的中药制剂较多，如：十全大补丸、补中益气丸、归脾胶囊等等，现有的中药制剂虽然具有一定的提高免疫力作用，但是均存在处方较大，在提高免疫力作用的同时，均在一定的副作用。
因此，很有必要在现有技术的基础之上，充分利用资源丰富的海洋资源，以鬼鲉为研究对象，研究开发其新的临床药理活性。
发明内容
发明目的：本发明的目的是在鬼鲉现有药理活性的基础上，开发其新的药理活性，提供一种具有很好提高免疫力作用、安全可靠的鬼鲉或其肝脏提取物制成的保健品或药品，
技术方案：为了实现以上目的，本发明所采取的技术方案为：
鬼鲉在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用。
鬼鲉肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用。
作为优选方案，以上所述的鬼鲉肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用，所述的鬼鲉肝脏提取物是通过以下方法制备得到：
取鬼鲉肝脏，剪碎，加入超纯水进行匀浆，然后在-20～-40℃冷冻12～24h，经4～6℃解冻融化12～24h，反复冻融3次，然后加入超纯水，在90℃～95℃下加热5～10min，冷却至室温，在4℃条件下8000～10000r/min离心20～30min，收集离心后上清液，上清液-66℃冷冻干燥，得鬼鲉肝脏提取物。
本发明提供的鬼鲉或其肝脏提取物可以用于制备提高免疫力的保健品或药品，如可以将鬼鲉或其肝脏提取物和食品上或药学上可接受的载体制备成口服液、片剂或胶囊剂等。
有益效果：本发明和现有技术相比具有以下优点：
本发明通过大量药理实验筛选鬼鲉的药理活性，实验结果表明，鬼鲉及其肝脏提取物具有明显的提高免疫器官指数，减少免疫器官损伤，增加免疫细胞的数目，提高血液中TNFα和一些细胞因子（IL-1β、IL-2、IL-6）含量以及促进脾淋巴细胞的分裂增殖的作用，显示出非常好的增强免疫力的作用，并且对非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫均具有很好的增强作用，且实验结果表明用药安全可靠。鬼鲉资源丰富，可开发成新的提高免疫力功效的保健品或药品，具有很好的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1
1、实验材料
1.1实验动物
ICR小鼠300只，雌雄各半，体重18-22g，扬州大学比较医学中心（SPF级）提供，动物质量合格证号：SCXK(苏)2012-0004。动物饲养于南京中医药大学动物中心SPF级小鼠实验室内，温度23℃±2℃，湿度55±5%，颗粒饲料（分别为汤山龙泉牌实验鼠颗粒饲料和兔颗粒饲料）喂养，自由饮水。
1.2药品与试剂
日本鬼鮋Inimicus japonicus(Cuvier e tValenciennes)由厦门大学丁少雄教授提供；注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H32020857）；盐酸左旋咪唑片（南京白敬宇制药有限责任公司）；黄芪多糖注射液（爱迪森（北京）生物科技有限公司，批准文号：兽药字（2011）010122712）；绵羊红细胞（广州蕊特生物科技有限公司提供）；豚鼠血清（广州蕊特生物科技有限公司提供）；TNFα、IL-1β、IL-2、IL-6ELISA试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；其它试剂均为国产分析纯。
1.3实验仪器
冷冻干燥机（美国LABCONCO公司），冷冻离心机（美国Beckman Coulter公司），JJ-2B型组织捣碎匀浆机（金坛市荣华仪器制造有限公司），RE-201D升降恒温水浴锅（南京金正教学仪器有限公司），实验室级超纯水器（南京易普易达科技发展有限公司），紫外分光光度计（北京莱伯泰科仪器有限公司），酶标仪（PerkinElmer股份有限公司），全自动血细胞分析仪（日本希森美康公司），电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司），海尔医用低温保存箱（青岛海尔特种电器有限公司）。
2、实验方法
2.1鬼鲉肝脏提取物的制备
取鬼鲉肝脏（-80℃冻存），而后在4℃下融化，去除血管与结缔组织后，将肝脏剪碎，加入两倍量的超纯水进行匀浆（低速10000r/min，30s/次，3次），然后再反复冻融3次（在-20℃冷冻12h，经4℃解冻融化12h左右）。加入两倍量的超纯水，并在95℃下加热5min。冷却至室温，在4℃条件下离心（8000r/min，20min），收集离心后上清液。上清液-66℃冷冻干燥，得鬼鲉肝脏粗多肽冻干粉，-20℃下保存。经考马斯亮蓝法测得鬼鲉上清液的蛋白浓度约为40.06μg/mg。给药前用0.2%的CMC-Na溶液配制成低浓度组（IJLL）0.025g/mL、中浓度组（IJLM）0.05g/mL、高浓度组（IJLH）0.1g/mL的溶液。
2.2免疫低下小鼠造模及给药
小鼠70只，雌雄各半，称重编号，随机分成7组，设空白组，模型组，阳性对照1（左旋咪唑，37.5mg/kg）组，阳性对照2（黄芪多糖）组，以上2.1制备得到的鬼鲉肝脏提取物低浓度组（IJLL）、中浓度组（IJLM）、高浓度组（IJLH）。第3d，空白组每天灌胃CMC-Na溶液0.4mL和腹腔注射生理盐水0.4mL，模型组每天灌胃CMC-Na溶液0.4mL和腹腔注射环磷酰胺（CTX）50mg/kg，阳性对照1组和CTX50mg/kg。各组每天给药2次，连续5d，模型组、阳性对照组、给药组均连续造模3d。鬼鲉肝脏提取物组每天分别灌胃给药，同时腹腔注射CTX50mg/kg，阳性对照2组每天皮下注射给药0.1mL/次，同时腹腔注射。
2.3体重和免疫器官指数观察
每天给小鼠称重并记录，按剂量灌胃、造模，眼眶采血后处死小鼠，解剖取出脾脏和胸腺，分别用生理盐水漂洗后滤纸吸干，称重并计算脏器指数。
脏器指数=脏器质量(mg)/体重(g)
实验数据以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2.4巨噬细胞吞噬功能的测定
采用碳粒廓清法，在末次给药30min后，经小鼠尾静脉注入3倍稀释的印度墨汁0.05mL/10g。分别于30s和360s从眼眶后取血20μL，并将其加入到0.1%Na2CO3溶液2mL中摇匀，在分光光度计680nm波长处测光密度值，OD1表示30s的光密度值，OD2表示360s的光密度值。根据公式计算廓清指数K，K值经体重及肝脾重量换算后，得吞噬指数α。
廓清指数K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)
吞噬指数α=体重/肝脾重×3K
实验数据以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2.5血清溶血素的含量测定
造模与给药方法同2.2。各组小鼠于给药第3d，腹腔注射2%SRBC0.2mL致敏。末次给药后24h，处死动物，小鼠眼眶取血，分离血清，用生理盐水将血清稀释200倍，各组样品管中分别加入1：200试验小鼠血清稀释液1mL、1:10补体血清稀释液1mL、以及10%SRBC0.5ml震荡混匀另取空白管，分别加入等量的补体、SRBC及1mL生理盐水。然后各管于37℃水浴锅中辉育10min，冰浴10min终止反应，2000rpm离心10min，取上清液，以空白管调零，在可见光分光光度计540nm处测定各管OD值，记录结果。实验数据以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2.6外周血常规观察
造模与给药方法同2.2。在末次给药30min后，眼眶采血20μL，EDTA抗凝后迅速用血细胞计数仪检测小鼠外周血常规，分别对白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞进行计数。实验数据以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2.7血清中TNFα、IL-1β、IL-2、IL-6的测定
造模与给药方法同2.2。在末次给药30min后，眼眶采血0.5mL，分离得到血清，血清中TNFα、IL-1β、IL-2、IL-6采用ELISA法测定。实验数据以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2.8小鼠脾细胞周期的检测
造模与给药方法同2.2。在末次给药30min后，小鼠脱颈处死后，取小鼠脾脏用载玻片碾磨，用生理盐水制成细胞取小鼠脾脏用载玻片碾磨，用生理盐水制成细胞悬液备用。取脾细胞悬液，200目筛网过滤，用PBS洗涤2次后70%冷乙醇固定，4℃保存。上机前PBS洗漆，制成细胞悬液，加入含RNA酶的碘化丙啶（PI）染液，4℃，30min，经300目尼龙网滤过后，上流式细胞仪测定各组细胞周期。每个样本获取30000个细胞。以MULTICYCLE软件分析细胞周期。实验数据以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2.9小鼠胸腺组织的形态观察
造模与给药方法同2.2。在末次给药30min后，小鼠脱颈处死后，剖取胸腺。胸腺经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片厚4～5μm，HE染色，病理专业人员阅片，根据各脏器病变由轻到重的程度，分别标记为轻度1分“+”，中度2分“++”，重度3分“+++”，极重度4分“++++”，无明显病变为阴性0分，轻微病变为0.5分“±”，累加所有分数，并计算出每组每只动物的均分，以表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
3、实验结果
3.1对免疫低下小鼠体重的影响
与空白组比较，模型组小鼠的体重在第3d显著性减少（P<0.05），在第4、5d明显减少（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照1组在第3d显著性减少（P<0.05），在第4、5d明显减少（P<0.01）；阳性对照2组和IJLM组在第4d显著性减少（P<0.05），在第6d明显减少（P<0.01）；IJLH组在第6d显著性减少（P<0.05）。结果提示，鬼鲉肝脏提取物可以减缓免疫低下小鼠体重的下降趋势。
3.2对免疫低下小鼠免疫器官指数的影响
实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠的脾脏指数和胸腺显著性减小（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照1组的脾脏指数和胸腺指数显著性增大（分别为P<0.05，P<0.01），阳性对照2组的脾脏指数和胸腺指数显著性增大（P<0.01），鬼鲉肝脏提取物低浓度组（IJLL）组的脾脏指数和胸腺指数显著性增大（分别为P<0.05，P<0.01），鬼鲉肝脏提取物中浓度组（IJLM）组的脾脏指数和胸腺指数显著性增大（分别为P<0.05，P<0.01），鬼鲉肝脏提取物高浓度组（IJLH）组的脾脏指数和胸腺指数显著性增大（P<0.01）。结果提示，鬼鲉肝脏提取物可以减少免疫低下小鼠脾脏和胸腺的损伤，显示出了很好的保护免疫器官损伤等功效。
3.3对免疫低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
由表1实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠的吞噬指数和吞噬系数显著性减小（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组（左旋咪唑、黄芪多糖）、鬼鲉肝脏提取物低、中、高浓度组（IJLL、IJLM、IJLH）的吞噬指数和吞噬系数显著性的增大（P<0.01）。结果表明，鬼鲉肝脏提取物可以增加免疫低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能。
表1各组对免疫低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，**P<0.01。
3.4对免疫低下小鼠血清溶血素含量的影响
由表2实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠的血清溶血素含量显著性降低（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组（左旋咪唑、黄芪多糖）、鲉肝脏提取物低、中、高浓度组（IJLL、IJLM、IJLH）小鼠的血清溶血素含量显著性增加（P<0.01）。结果提示，鬼鲉肝脏提取物可以增加免疫低下小鼠的血清溶血素含量。
表2各组对免疫低下小鼠血清溶血素的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，**P<0.01。
3.5对免疫低下小鼠外周血常规的影响
实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠的白细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数和单核细胞数显著性降低（P<0.01）；在白细胞方面，与模型组比较，阳性对照1组、阳性对照2组、鬼鲉肝脏提取物低、中、高浓度组（IJLL、IJLM、IJLH）小鼠的白细胞数显著性增加（P<0.01）；在中性粒细胞方面，与模型组比较，阳性对照2组、鬼鲉肝脏提取物低、高浓度组（IJLL、IJLH）小鼠的中性粒细胞显著性增加（P<0.05）；在淋巴细胞方面，与模型组比较，阳性对照1组小鼠的淋巴细胞显著性增加（P<0.05），阳性对照2组、鬼鲉肝脏提取物低、中浓度组（IJLL、IJLM）小鼠的淋巴细胞显著性增加（P<0.05）；在单核细胞方面，阳性对照1组小鼠的单核细胞显著性增加（P<0.05），阳性对照2组、鬼鲉肝脏提取物低浓度组（IJLL）的单核细胞显著性增加（P<0.01），鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLM、IJLH）的单核细胞显著性增加（P<0.05）。结果表明，鬼鲉肝脏提取物具有增加免疫低下小鼠白细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数和单核细胞数的作用。
3.6对免疫低下小鼠血清中TNFα、IL-1β、IL-2、IL-6含量的影响
由表3实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠血清中的TNFα含量显著性减小（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组（左旋咪唑、黄芪多糖）小鼠血清中的TNFα含量显著性增大（P<0.01），鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLL、IJLM）小鼠血清中的TNFα含量显著性增大（P<0.05），并且高浓度组（IJLH）小鼠血清中的TNFα含量显著性增大（P<0.01）。结果表明，本发明提供的鬼鲉肝脏提取物可以增加免疫低下小鼠血清中TNFα的含量。
表3各组对免疫低下小鼠血清中TNFα的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
由表4实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠血清中的IL-1β含量显著性减小（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组（左旋咪唑、黄芪多糖）小鼠血清中的IL-1β含量显著性增大（P<0.01），鬼鲉肝脏提取物低、中浓度给药组（IJLL、IJLM）小鼠血清中的IL-1β含量显著性增大（P<0.05），鬼鲉肝脏提取物高浓度组（IJLH）小鼠血清中的IL-1β含量显著性增大（P<0.01）。结果表明鬼鲉肝脏提取物可以增加免疫低下小鼠血清中IL-1β的含量。
表4各组对免疫低下小鼠血清中IL-1β的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
由表5实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠血清中的IL-2含量显著性减小（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组（左旋咪唑、黄芪多糖），鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLL、IJLM、IJLH）小鼠血清中的IL-2含量显著性增大（P<0.01）。结果提示，鬼鲉肝脏提取物可以增加免疫低下小鼠血清中IL-2的含量。
表5各组对免疫低下小鼠血清中IL-2的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，**P<0.01。
由表6实验结果表明，与空白组比较，模型组小鼠血清中的IL-6含量显著性减小（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组（左旋咪唑、黄芪多糖）小鼠血清中的IL-6含量显著性增大（P<0.01），鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLL）小鼠血清中的IL-6含量显著性增大（P<0.05），鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLM、IJLH）小鼠血清中的IL-6含量显著性增大（P<0.01）。结果表明鬼鲉肝脏提取物可以增加免疫低下小鼠血清中IL-6的含量。
表6各组对免疫低下小鼠血清中IL-6的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
3.7对免疫低下小鼠脾细胞周期的影响
由表7实验结果表明，与空白组比较，模型组的小鼠脾细胞数目在G0+G1期显著性增多（P<0.05），在S+G2+M期显著性减少（P<0.05）；阳性对照组（黄芪多糖）的小鼠脾细胞数目在G0+G1期显著性减少（P<0.05），在S+G2+M期显著性增多（P<0.05）；给药组（IJLL）的小鼠脾细胞数目在G0+G1期显著性减少（P<0.05），在S+G2+M期显著性增多（P<0.05）；给药组（IJLM）的小鼠脾细胞数目在G0+G1期显著性减少（P<0.05），在S+G2+M期显著性增多（P<0.05）；给药组（IJLH）的小鼠脾细胞数目在G0+G1期显著性减少（P<0.05），在S+G2+M期显著性增多（P<0.05）。结果显示，鬼鲉肝脏提取物可以促进免疫低下小鼠脾细胞的分裂和增殖。
表7鬼鲉肝脏提取物对免疫低下小鼠脾细胞周期的影响
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
3.8对免疫低下小鼠胸腺组织形态的影响
由表8实验结果表明，空白组小鼠的胸腺皮质、髓质结构清晰，皮质无变薄或增生，髓质无萎缩，无巨噬细胞增多现象；模型组小鼠的胸腺中度或重度萎缩，皮质明显，皮质、髓质分界欠清，皮质变薄，或表现为淋巴细胞不规则的减少，存留的淋巴细胞呈克隆样排列，髓质轻度萎缩，3只雌性小鼠有吞噬现象的巨噬细胞增多，病变评分与空白组比较显著性增大（P<0.01）；阳性对照组（左旋咪唑）小鼠的胸腺中度萎缩，皮质、髓质分界欠清，皮质变薄，形态学改变同模型组，髓质轻度萎缩，1只雌性小鼠有吞噬现象的巨噬细胞增多；阳性对照组（黄芪多糖）小鼠的胸腺中度或轻度萎缩，皮质、髓质分界欠清，皮质变薄，但较模型组好，髓质轻度萎缩，1只雌性小鼠出现有吞噬现象的巨噬细胞，病变评分与模型组比较显著性减小（P<0.05）鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLM）1只小鼠胸腺中度萎缩、3只小鼠轻度萎缩，轻度萎缩的胸腺皮质轻度变薄，皮质、髓质分界可见，病变评分与模型组比较显著性减小（P<0.05）；鬼鲉肝脏提取物给药组（IJLH）1只小鼠胸腺中度萎缩、1只小鼠重度萎缩，病变评分与模型组比较显著性减小（P<0.05）。该结果表明，鬼鲉肝脏提取物可以减少免疫低下小鼠胸腺的损伤，对免疫器官具有很好的保护功效。
表8各组小鼠胸腺病变评分
注：与空白组比较，##P<0.01，与模型组比较，*P<0.05。
通过以上实验结果表明，本发明提供的鬼鲉及其鬼鲉肝脏提取物对免疫系统具有明显的促进作用，可明显提高免疫器官指数，减少免疫器官损伤，增加免疫细胞的数目，提高血液中TNFα和一些细胞因子（IL-1β、IL-2、IL-6）含量以及促进脾淋巴细胞的分裂增殖。对非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫均具有增强的作用。因此，本发明提供的鬼鲉及其鬼鲉肝脏提取物能够辅助调理免疫缺陷性疾病和免疫功能低下，抵抗能力低等疾病。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.鬼鲉肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用，其特征在于，所述的鬼鲉肝脏提取物是通过以下方法制备得到：
取鬼鲉肝脏，剪碎，加入超纯水进行匀浆，然后在-20～-40℃冷冻12～24h，经4～6℃解冻融化12～24h，反复冻融3次，然后加入超纯水，在90℃～95℃下加热5～10min，然后冷却至室温，在4℃条件下8000～10000r/min离心20～30min，收集离心后上清液，上清液-66℃冷冻干燥，得鬼鲉肝脏提取物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310719926.1A CN103689597B (zh) | 2013-12-24 | 2013-12-24 | 鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310719926.1A CN103689597B (zh) | 2013-12-24 | 2013-12-24 | 鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103689597A CN103689597A (zh) | 2014-04-02 |
| CN103689597B true CN103689597B (zh) | 2015-04-22 |
Family
ID=50351385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310719926.1A Expired - Fee Related CN103689597B (zh) | 2013-12-24 | 2013-12-24 | 鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103689597B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103876152B (zh) * | 2014-04-15 | 2015-05-13 | 吉林农业大学 | 玉米活力素及其生产方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1391503A1 (en) * | 2002-08-12 | 2004-02-25 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | A method of cell re-programming by cytoplasmic transfer |
| JP2007254440A (ja) * | 2006-03-27 | 2007-10-04 | Ihara Suisan Kk | 脂質代謝調節剤及び脂質代謝調節食品 |
| JP2008067648A (ja) * | 2006-09-14 | 2008-03-27 | Fisheries Research Agency | 魚類の標識剤と標識方法 |
| CN101541335A (zh) * | 2006-11-29 | 2009-09-23 | 内维尔·特雷弗·维田贝克 | 营养补剂 |
| KR20110106172A (ko) * | 2010-03-22 | 2011-09-28 | 한국해양연구원 | 대한민국 남해 어류의 종 판별 방법과 이에 따른 어류의 종 판별용 폴리뉴클레오티드 프로브, ｄｎａ 칩 및 키트 |
-
2013
- 2013-12-24 CN CN201310719926.1A patent/CN103689597B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1391503A1 (en) * | 2002-08-12 | 2004-02-25 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | A method of cell re-programming by cytoplasmic transfer |
| JP2007254440A (ja) * | 2006-03-27 | 2007-10-04 | Ihara Suisan Kk | 脂質代謝調節剤及び脂質代謝調節食品 |
| JP2008067648A (ja) * | 2006-09-14 | 2008-03-27 | Fisheries Research Agency | 魚類の標識剤と標識方法 |
| CN101541335A (zh) * | 2006-11-29 | 2009-09-23 | 内维尔·特雷弗·维田贝克 | 营养补剂 |
| KR20110106172A (ko) * | 2010-03-22 | 2011-09-28 | 한국해양연구원 | 대한민국 남해 어류의 종 판별 방법과 이에 따른 어류의 종 판별용 폴리뉴클레오티드 프로브, ｄｎａ 칩 및 키트 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 日本鬼鲉不同组织的8种同工酶谱;董徐辉等;《海洋科学》;20101031;第34卷(第10期);第18-23页 * |
| 日本鬼鲉毒腺提取物对大鼠红细胞损伤及治疗的试验研究;袁文丹等;《中国微循环》;20051031;第9卷(第5期);第333-335页 * |
| 日本鬼鲉蜇伤与P物质和生长抑制素的关系及其粗毒对免疫细胞活性影响;张克凌等;《海洋与湖沼》;20000731;第31卷(第4期);第378-383页 * |
| 日本鬼鲉螫伤对大鼠红细胞结构和免疫细胞功能的影响;于业军等;《中国麻风皮肤病杂志》;20031231;第19卷(第6期);第560-562页 * |
| 肝净疗法-保护肝脏能增强免疫力;银小龙;《家庭医药》;20091231(第12期);第38页第5-7段 * |
| 陈醒泰等.鬼鲉.《鱼的药用与烹饪》.科学普及出版社广州分社,1984,第84页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103689597A (zh) | 2014-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103830577B (zh) | 一种治疗肝胆结石和肾结石的药物组合物及其用途 | |
| CN102688321A (zh) | 一种母源疗法改善哺乳母猪及其仔猪健康状况的中药制剂 | |
| CN102793741A (zh) | 一种牛大力提取物及其应用 | |
| CN104189099A (zh) | 肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应用 | |
| CN102526499A (zh) | 一种药物组合物及其制备方法和用途 | |
| CN103120726A (zh) | 一种提高断奶仔猪生长性能的中药组合物及其制备方法 | |
| CN111264862A (zh) | 一种抗疲劳组合物、其制备方法及抗疲劳药物或保健食品 | |
| CN101810686A (zh) | 一种用于治疗类风湿关节炎的配伍组合物及其制备方法 | |
| CN103689597B (zh) | 鬼鲉或其肝脏提取物在制备提高免疫力的保健品或药品中的应用 | |
| CN102357202A (zh) | 一种治疗肝癌的中药癌毒方及其在制药中的应用 | |
| CN102048902B (zh) | 一种治疗肝炎的中药组合物、提取物及制备方法、应用和剂型 | |
| CN101670075A (zh) | 一种用于治疗抑郁症的中药组合物 | |
| CN102688323A (zh) | 一种增强家禽免疫功能的中兽药颗粒剂及其制备方法 | |
| CN107334798A (zh) | 树参提取物及制法及在治疗类风湿性关节炎病药物中的应用 | |
| CN103417799B (zh) | 一种中药组合物在制备治疗贫血的药物中的应用 | |
| CN102652774B (zh) | 一种治疗放化疗引起的白细胞减少症、免疫功能低下药物组合物、制备方法与质量检测方法 | |
| CN1969942A (zh) | 提高禽类生产性能和免疫力的药物组合物及其制备方法 | |
| CN106620470A (zh) | 一种具有抗疲劳及延缓衰老的中药组合物 | |
| US10561695B2 (en) | Composition having functions of improving kidney yang, enhancing immunity and relieving fatigue, method for producing the same and use thereof | |
| CN106880784A (zh) | 一种具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物及其应用 | |
| CN101904500B (zh) | 一种增强免疫力的功能食品及其制备方法 | |
| CN105249465A (zh) | 一种提高免疫力的保健食品及其制备方法 | |
| CN107412649A (zh) | 一种益气补血提高免疫力的中药复方及其制备方法和应用 | |
| CN105535437A (zh) | 治疗上消化道恶性肿瘤的中药组合物及制备方法 | |
| CN108186990A (zh) | 一种用于治疗小儿肠系膜淋巴结肿大的药物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150422 Termination date: 20191224 |