CN103665188A - 碱-酶解法提取硫酸软骨素钠 - Google Patents

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Abstract

一种新的硫酸软骨素钠的提取方法，碱-酶解提取硫酸软骨素钠。主要解决目前同列产品生产工艺流程复杂、碱酸或盐用量较大、生产成本较高、提取周期较长、产品质量不稳定、收率较低等问题。该产品主要以动物软骨为原料，经碱解后一步酶解即可把硫酸软骨素钠从动物软骨中提取出，产品色泽洁白、粉末疏松，收率可高达30％以上，且纯度高，符合口服质量标准。具有生产工序简单，周期短、成本低、操作简便易行，同时有助于减轻对环境的污染，有利于环保等特点。

Description

碱-酶解法提取硫酸软骨素钠
技术领域
本发明涉及生化制药领域，特别是直接从动物软骨中提取的对心脑血管病等有良好的效果的硫酸软骨素钠的生产工艺。
背景技术
硫酸软骨素钠，英文名Chondroit in sulfate sodium，是动物软骨中提取的酸性粘多糖，多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨(41％)、牛、马中膈和气管中，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β1→3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。
硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物，还具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。在国外，对硫酸软骨素钠药理的研究已经达到分子水平。
目前国内提取硫酸软骨素钠的方法主要有三种：盐解法、碱解法和酶解法。主要采用的分离纯化技术有：乙醇沉淀法、离子交换色谱法、纤维素分离法、季铵盐配合法、吸附法、区带电泳分离法等。在以上的集中提取方法中，收率虽然可以达到很高的水平，但生产方法都存在很大问题，如盐解法工艺中存在除酸性蛋白调节PH值1-2在产品量大时耗时很长，硫酸软骨素钠中的氨基易被解离下来，从而影响了收率和质量。
发明内容
本发明的目的是：提供一种硫酸软骨素钠的提取方法，采用该提取方法不仅能克服上述现有技术的不足，而且可以降低成本，提高产品质量，缩短生产周期，提高生产效率。
本发明的技术解决方案是该制备方法包括下列步骤：
1、浸泡：将经预处理洁白干净的动物软骨块置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡5-6小时。
2、碱解：将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1：1加水，并按软骨重量的4-6％加入碱片，搅拌3-5小时。
3、酶解：将上述碱解液调PH8.0-8.5，加热至45-50℃，按软骨重量的12-15％加入猪胰脏，并加入氯化钠，于45-50℃保温3-4小时。
4、还原：将上述酶解液，调PH6.5-7.0，加热至65℃，加入软骨重量的1％的连二亚硫酸钠，搅拌15分钟，静置20分钟后过滤。
5、沉淀：将上步所得的滤液降温30℃以下，加入乙醇，在20℃下使沉淀度数达到60度，沉淀6-8小时。
6、复沉：将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置10-12小时。
7、脱水干燥：合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
本方法的有点及效果：本方法通过对目前工艺的改进创新，采用碱解结合酶解的方法生产硫酸软骨素钠，优化生产工艺条件：碱解时间为4小时，碱解温度为48℃，猪胰脏用量为动物软骨重量的14％，酶解时间为4小时，酶解温度为48℃，五种因素中对碱解影响程度主要为碱解温度，对酶解影响最主要的为猪胰脏用量。整个反应过程PH值在8.0-8.5之间。此最佳水平组合可使硫酸软骨素钠收率达到35以上或更高。采用新工艺后，大大缩短生产周期，提高了生产效率，节约生产成本，提高了生产质量。
具体实施方式
实施例1
(1)浸泡：将经预处理洁白干净的动物软骨块100kg置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡5小时；
(2)碱解：将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1：1加水，并按软骨重量的4％加入碱片，搅拌3小时；
(3)酶解：将上述碱解液调PH8.0，加热至45℃，按软骨重量的12％加入猪胰脏，并加入氯化钠，于45℃保温3小时；
(4)还原：将上述酶解液，调PH6.5，加热至65℃，加入软骨重量的1％的连二亚硫酸钠，搅拌15分钟，静置20分钟后过滤；
(5)沉淀：将上步所得的滤液降温30℃以下，加入乙醇，在20℃下使沉淀度数达到60度，沉淀6小时；
(6)复沉：将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置10小时；
(7)脱水干燥：合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
实施例2
(1)浸泡：将经预处理洁白干净的动物软骨100kg块置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡6小时；
(2)碱解：将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1：1加水，并按软骨重量的5％加入碱片，搅拌4小时；
(3)酶解：将上述碱解液调PH8.5，加热至50℃，按软骨重量的15％加入猪胰脏，并加入氯化钠，于50℃保温4小时；
(4)还原：将上述酶解液，调PH7.0，加热至65℃，加入软骨重量的1％的连二亚硫酸钠，搅拌15分钟，静置20分钟后过滤；
(5)沉淀：将上步所得的滤液降温30℃以下，加入乙醇，在20℃下使沉淀度数达到60度，沉淀7小时；
(6)复沉：将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置11小时；
(7)脱水干燥：合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
实施例3
(1)浸泡：将经预处理洁白干净的动物软骨100kg块置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡6小时；
(2)碱解：将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1：1加水，并按软骨重量的6％加入碱片，搅拌4小时；
(3)酶解：将上述碱解液调PH8.5，加热至48℃，按软骨重量的14％加入猪胰脏，并加入氯化钠，于50℃保温4小时；
(4)还原：将上述酶解液，调PH7.0，加热至65℃，加入软骨重量的1％的连二亚硫酸钠，搅拌15分钟，静置20分钟后过滤；
(5)沉淀：将上步所得的滤液降温30℃以下，加入乙醇，在20℃下使沉淀度数达到60度，沉淀8小时；
(6)复沉：将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置12小时
(7)脱水干燥：合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
将上述3次实施实例生产的硫酸软骨素钠进行分析，结果如下：
项目 实例1结果 实例2结果 实例3结果
比旋度 -25.4□ -26.2□ -27.1□
420nm吸光度 0.21 0.185 0.155
酸度 6.76 6.55 6.25
总氮量 3.2％ 2.8％ 2.6％
干燥失重 9.6％ 8.5％ 7.9％
炽灼残渣 28.5％ 27.6％ 23.4％
有机残留 4210ppm 3514ppm 2010ppm
CPC含量 93.1％ 94.2％ 95.8％
HPLC含量 92.8％ 94.0％ 96.3％

Claims (6)

1.一种提取硫酸软骨素钠的方法，其特征在于：是从动物软骨中提取的能完全溶解，旋光度为-25°至-35°，且其HPLC及CPC含量均大于95％的白色粉末。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该方法依次包括：
(1)将经预处理洁白干净的动物软骨块置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡5-6小时；
(2)将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1：1加水，并加入软骨重量的4-6％的碱片，搅拌3-5小时；
(3)将上述碱解液调PH8.0-8.5，加热至45-50℃，加入软骨重量的12-15％的猪胰脏后，加入氯化钠，于45-50℃保温3-4小时；
(4)将上述酶解液，调PH6.5-7.0，加热至65℃，加入软骨重量的1％的连二亚硫酸钠，搅拌15分钟，静置20分钟后过滤；
(5)将上步所得的滤液降温30℃以下，加入乙醇，在20℃下使沉淀度数达到60度，沉淀6-8小时；
(6)将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置10-12小时；
(7)合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是在(2)步中加入重量为4-6％的碱片，以增强硫酸软骨素钠的碱解效果。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是在(4)步中加入重量1％连二亚硫酸钠盐析，已增强硫酸软骨素钠的沉淀效果。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于最佳的碱解温度为48℃。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于最佳猪胰脏用量为12-15％干软骨重。
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